2 Congreso Nacional de Qumica Mdica

Rivera-Huerta y col.

TOXICIDAD AGUDA EN RATA Y RATN DE LA

CASIOPENA II(gli).
1

1,2

Marisol Rivera Huerta , Luca Macias Rosales , Mabel Tinoco Mndez , Isabel Gracia Mora , Lena
2 1
Ruiz Azuara . Unidad de Experimentacin Animal, Conjunto E, Facultad de Qumica UNAM
2
Departamento de Qumica Inorgnica y Nuclear, Facultad de Qumica UNAM

RESUMEN
Los estudios de toxicidad constituyen hoy da una parte muy importante dentro del
desarrollo de un nuevo frmaco y se extienden prcticamente a lo largo de todo el mismo.
El impacto del programa toxicolgico en el desarrollo de un nuevo frmaco inicia con los
primeros estudios toxicolgicos empiezan al mismo tiempo que la caracterizacin fsicoqumica y la evaluacin farmacolgica y se extienden hasta la fase II e incluso la fase III
de estudios clnicos. La deteccin de una seria reaccin biolgica adversa (por ejemplo, la
hepatotoxicidad o la embriotoxidad) puede hacer que se cancele el proyecto o que se
vuelva a la fase inicial de diseo.
Los ensayos de toxicidad aguda implican la administracin de la sustancia a evaluar en
una sola ocasin para la determinacin de la DL50, tambin conocida como dosis-nica y
consisten en administrar el compuesto slo una vez en animales de una especie en
particular, cepa, edad y peso que son mantenidos bajo condiciones controladas de dieta,
jaulas, temperaturas, humedad relativa y tiempo de dosificacin, el concepto fue
introducido por Trevan en 1917 y representa la muerte de la mitad (50%) de la poblacin
estudiada. Por razones prcticas y econmicas la especie convencional para este estudio
son los roedores y por razones ticas se recomienda trabajar con un pequeo nmero de
animales para cada dosis.
Se emplearon ratones y ratas hembras y machos de la cepa ICR y Wistar
respectivamente de 7 y 8 semanas de edad. Los animales se mantuvieron durante 15
das en observacin para evaluar su signologa, la determinacin de la Dosis Letal 50
(DL50) se determin tanto por va intravenosa como intraperitoneal, considerando slo a
aquellos animales que murieron durante las 24 hrs. post-administracin de la Casiopena
II(gli) los resultados fueron evaluados mediante el programa Log Probit Analysis.
Palabras clave: Toxicidad, DL50, casiopena

INTRODUCCIN.
Los estudios de toxicidad constituyen hoy da una parte muy importante dentro del
desarrollo de un nuevo frmaco (figura 1) y se extienden prcticamente a lo largo de todo
el mismo.

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Figura 1. Impacto del programa toxicolgico en el desarrollo de un nuevo frmaco. Los primeros estudios
toxicolgicos empiezan al mismo tiempo que la caracterizacin fsico-qumica y la evaluacin farmacolgica y
se extienden hasta la fase II e incluso la fase III de estudios clnicos. La deteccin de una seria reaccin
biolgica adversa (por ejemplo, la hepatotoxicidad o la embriotoxidad) puede hacer que se cancele el proyecto
o que se vuelva a la fase inicial de diseo.

El objetivo de los mismos es evaluar el riesgo o peligro potencial que un agente

qumico o fsico puede ocasionar sobre la salud humana cuando es objeto de
exposiciones agudas o crnicas.
La toxicidad se podra definir como el estudio cualitativo y cuantitativo de los
efectos deletreos ocasionados por agentes qumicos o fsicos sobre la estructura y
funcin de los sistemas vivos y la aplicacin de estos estudios para la evaluacin de la
seguridad y la prevencin de daos al hombre y a las formas de vida tiles (Hayes, 1975)
El trmino cualitativo se refiere al tipo de rgano diana afectado, en comparacin
con otras sustancias conocidas, mientras que el trmino cuantitativo se refiere a la
relacin dosis-respuesta. En este sentido, muchas veces es difcil separar efecto txico de
efecto farmacolgico. Ya en el siglo XVI, Paracelso afirmaba que todas las sustancias
son txicas y ninguna sustancia es txica. Slo la dosis determina la toxicidad (2, 5).
Toxicidad aguda. Los ensayos de toxicidad aguda implican la administracin de la
sustancia a evaluar en una sola ocasin para la determinacin de la DL50 (ensayo de 24
hrs. y control de sobrevivientes durante 7-15 das), dos especies (normalmente ratas y
ratones), dos vas de administracin (una es la va de uso previsto);Como ya se
mencion, los estudios de toxicidad aguda, tambin conocida como dosis-nica o Dosis
Letal 50 (DL50) consisten en administrar el compuesto slo una vez en animales de una
especie en particular, cepa, edad y peso que son mantenidos bajo condiciones
controladas de dieta, jaulas, temperaturas, humedad relativa y tiempo de dosificacin (Ver
Cuadro 1).

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Por razones prcticas y econmicas la especie convencional para este estudio son
los roedores y por razones ticas se recomienda trabajar con un pequeo nmero de
animales para cada dosis. Los estudios con dosis-nicas generan datos sobre la dosis no
efectiva, la dosis mxima a la cual un efecto txico no es visto, la dosis mnima letal, la
dosis ms pequea requerida para matar a un animal y la dosis letal media (DL50),
concepto introducido por Trevan en 1917 y que representa la muerte de la mitad (50%) de
la poblacin estudiada (1, 7, 8).

Factor a considerar
Especies
Cepas
Sexo
Edad/Peso
Medio ambiente
Dieta
Modo de administracin
Formulacin

Descripcin
Diferencias metablicas
Deficiencias enzimticos
Nivel hormonal/preacin
Hgado/funcin renal: actividad microsomal enzimtica
Alojamiento, manejo de humedad relativa, temperatura,
actividad.
Protena: grasa, proporcin
Ruta/velocidad de administracin
Vehculo, volumen, pH, osmolaridad

Cuadro 1. Factores que influyen en los ensayos de DL50

Animales. Se emplearon 50 ratones hembras y 50 ratones machos de la cepa ICR

de 7 semanas de edad y 50 ratas hembras y 50 ratas machos de la cepa Wistar de 8
semanas de edad que fueron alojados bajo condiciones ambientales controladas que
incluyen extraccin e inyeccin de aire con 18 recambios por hora; ste se realiza
mediante filtros HEPA filtrndose partculas hasta de 3 m en el aire de inyeccin. La
temperatura se mantuvo a 23 C 1 C y la humedad relativa en 55%, los ciclos de luzoscuridad fueron de 12/12 hrs. Se les proporcion alimento esterilizable para ratn / rata
Harlan Teklad y agua ad libitum, la cual se acidific hasta alcanzar un pH de 2.5, las
jaulas para su alojamiento eran de acrlico cristal transparente con las dimensiones
siguientes para ratn: 19 x 10.5 x 8 cm (10 ratones/caja) y para ratas: 32 x 47 x 20 cm (5
ratas/caja), la cama era de viruta esterilizada y el cambio de jaulas se realiz cada tercer
da, los bebederos se lavaron un da a la semana y se esterilizaron (3,4,6).
Administracin de la Casiopena II(gli). Una vez establecidas las dosis individuales,
se realiz la sujecin de cada animal para la administracin de la Casiopena II(gli), en el
caso de la va intraperitoneal se realiz en la regin caudal izquierda del abdomen. Para
realizar la tcnica fue necesario colocar al animal decbito dorsal y administrar con una
torunda de algodn un poco de alcohol al 70% en el sitio de inyeccin.
Para la va intravenosa fue necesario ejercer presin en la vena caudal para que
fuera ms evidente, tambin se puede aplicar con una torunda xilol, o, colocar fomentos
de agua caliente para que haya vasodilatacin aplicar con una torunda de algodn alcohol
al 70% en el sitio de inyeccin, es importante dirigir la aguja con el bisel hacia arriba y una
vez adentro del rea hacer los movimientos necesarios y con precaucin para encontrar el
vaso sanguneo, se recomienda usar agujas calibre 23 - 25 mm (8).
Determinacin de la Dosis Letal 50 (DL50).Los animales se mantuvieron durante 15
das en observacin para evaluar su signologa, la determinacin de la Dosis Letal 50

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(DL50) se llev a cabo considerando slo a aquellos animales que murieron durante las 48
hrs. post-administracin de la Casiopena II(gli) los resultados fueron evaluados mediante
el programa Log Probit Analysis.

RESULTADOS
Ratas
DL50
Lmite superior
Lmite inferior
DL90
Lmite superior
Lmite inferior
Ratones
DL50
Lmite superior
Lmite inferior
DL90
Lmite superior
Lmite inferior

Wistar
I.P
IV
mg/Kg mg/Kg
6.66
7.74
5.53
9.81
14.26
8.2
ICR
I.P
IV
mg/Kg mg/Kg
15.59 15.5
17.43 16.82
13.53 13.51
19.79 17.95
26.64 22.61
17.44 16.46

Wistar
I.P
IV
mg/Kg mg/Kg
8.83
9.8
7.94
10.69
14.13
9.55
ICR
I.P
IV
mg/Kg mg/Kg
15.67
17.29
14.13
17.71
24.07
16.16

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