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Culture Documents
4.- temperatura
5.- pH
Crecimiento
del individuo
Ciclo celular
6.- oxgeno
Crecimiento
poblacional
Cuantificacin
de totales
1
aw
material
ejemplo de microorganismo
1.000
agua pura
Caulobacter sp,
Spirillum sp
0.995
sangre humana
0.980
agua marina
Pseudomonas sp,
Vibrio sp
0.950
pan
0.900
jarabe de arce
jamn
0.850
chorizo
Levaduras
0.800
pasteles de frutas
mermeladas
Hongos filamentosos
0.750
pescado salado
0.700
Hongos xerfilos
4
Osmotolerancia
Sales en particular
Osmfilo
Halotolerante
Halfilo
Halotolerante
Staphylococcus
aureus
La presin osmtica
afecta funcin de
membrana, actividad de
enzimas y funcionalidad
de protenas.
Halfilo
Vibrio
cholerae
Halfilo
extremo
Halobacterium
salanarium
Crecimiento
No halfilo ni
halotolerante
Escherichia coli
Concentracin de soluto
6
Temperaturas de desarrollo en oC
Mnimo
ptimo
Mximo
25-30
40
Staphyloccoccus aureus
6.5
30-37
46
Acidiothiobacillus thiooxidans
10
28-30
37
Micrococcus luteus
10
30
45
Lactobacillus plantarum
15
30-35
45
Corynebacterium diphteriae
15
37
40
Streptococcus thermophilus
20
40-45
50
Thermoactinomyces vulgaris
27-30
60
65-70
Neisseria gonorrhoeae
30
35-36
38.5
Thermus aquaticus
40
70-72
79
Pseudomonas fluorescens
Termfilo
Geobacillus
stearotermophilus
Hipertermfilo
Thermococcus
celer
Mesfilo
Escherichia
coli
Velocidad de
Crecimiento
Hipertermfilo
Pyrodictium
brockii
Psicrfilo
Flavobacterium
sp
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
Temperatura (oC)
Temperatura en 0C
70
60
50
40
Termfilos
extremos
o hipertermfilos
30
20
Mesfilos
10
Termfilos
facultativos
(Termfilos)
0
-10
Psicrfilos
Grupos fisiolgicos
9
ptimo
Velocidad de
crecimiento
Mnimo
Mximo
Temperatura (oC)
La membrana se gelifica, el
transporte a travs de ella es tan
lento que no hay crecimiento
Desnaturalizacin protica,
colapso de la membrana, lisis
trmica
10
Lmite
inferior
ptimo
Lmite
superior
0.5
2.0-3.5
6.0
4.0-4.5
5.4-6.3
7.0-8.0
Staphyloccoccus aureus
4.2
7.0-7.5
9.3
Azotobacter sp
5.5
7.0-7.5
8.5
Chlorobium limicola
6.0
6.8
7.8
Thermus aquaticus
6.0
7.5-7.8
9.5
Acidiothiobacillus thiooxidans
Acetobacter aceti
11
acidfilos
pH
citoplasmtico
alcalfilos
aumenta
acidez
neutro
H+
OH-
10-14
Fludos gstricos,
jugo de limn
10-1
10-13
10-2
10-12
Ruibarbo
Melocotn
10-3
10-11
Suelo,
Tomates
10-4
10-10
Queso americano,
col
10-5
10-9
Guisantes,
Maz, salmn, gambas
10-6
10-8
agua pura
10-7
10-7
agua de mar
10-8
10-6
10-9
10-5
solucin de jabn
10-10
10-4
11
amoniaco casero
10-11
10-3
12
10-12
10-2
13
10-13
10-1
14
10-14
121
aumenta 10
alcalinidad
Req.
de O2
Metabolismo
Ejemplo
Aerobios
Obligados
Facultativos
Microaerfilos
Si
aerbico
SI/NO facultativo (oxid/ferm)
Si, bajo aerbico
M. luteus
E. coli
S. volutans
Anaerobios
Aerotolerantes
Estrictos
Estrictos
No
Letal
Letal
Streptococcus pyogenes
Methanobacterium formicicum
Thermococcus acuaticus
fermentacin
fermentacin
anaerbico (S0 aceptor)
13
CRECIMIENTO POBLACIONAL:
Para
facilitar el estudio de los microorganismos,
muchas veces se estudian como poblaciones.
MICROORGANISMOS
UNICELULARES:
Para las bacterias, levaduras, protozoarios y
algas unicelulares se puede determinar su
crecimiento individual y crecimiento como
poblaciones al tomar referencia datos como
la biomasa obtenida (la masa celular
producida
por
el
crecimiento
del
microorganismo)
MICROORGANISMOS PLURICELULARES:
En el caso de hongos filamentosos o mohos
slo es posible determinar su crecimiento
poblacionalmente,
debido
a
que
las
estructuras celulares se mezclan y es
imposible decir en que punto termina un
individuo y donde comienza otro.
15
4.3
CURVA
DE
CRECIMIENTO
MICROBIANA:
FASES
Y
CARACTERSTICAS. CINTICA DE CRECIMIENTO. TIPOS DE CULTIVOS
IN VITRO.
La representacin grfica del crecimiento microbiano se denomina curva de
crecimiento. En ella se representa el desarrollo celular por etapas de las clulas
viables, puede representarse tambin las clulas totales.
Se estudian en cultivos estticos, en lote o batch (cultivos en los que no se
reponen los nutrientes ni se elimina el exceso de clulas formadas). Se
establecen cuatro etapas en las curvas de crecimiento:
a) fase lag, b) fase log, c) fase estacionaria, d) fase de muerte
En cultivos contnuos no se presentan las cuatro etapas.
Cultivos sincrnicos
16
CULTIVO ESTTICO
algodn para paso
de aire estril
Medio de cultivo
Cultivo
microorganismos
Nutrientes
(disminuyen por
consumo)
y desechos
(aumentan por
metabolismo)
QUIMISTATO
Medio fresco
Aire estril
Vlvula de control
17
Log10 m.o.
viables
lag o
adaptacin
logartmica
estacionaria
muerte o lisis
1.0
9.0
8.0
Densidad
ptica
Viables
Turbidez
(densidad ptica)
0.75
0.50
7.0
0.25
6.0
5.0
Tiempo
0.1
18
Log10 m.o.
viables
lag
1
log 1
es
t
1
lag
2
log 2
estacionaria
2
Densidad
ptica
muerto o lisis
1.0
9.0
Viables
8.0
Turbidez
(densidad ptica)
0.75
0.50
7.0
0.25
6.0
5.0
Tiempo
0.1
19
Log10 m.o.
viables
lag o
adaptacin
logartmica
estacionaria
muerto o lisis
1.0
9.0
8.0
Densidad
ptica
Viables
Turbidez
(densidad ptica)
0.75
0.50
7.0
0.25
6.0
5.0
0.1
Tiempo
20
con
21
Turbidimetra
Cmara de Petroff-Hauser
Mtodo de Breed
Contadores electrnicos
22
Turbidimetra
Luz
Monocromtica
Fuente de luz
A
Filtro
Tubo con agua
destilada o medio no
inoculado
Instrumento ajustado
para leer 100% de
transmitancia
luminosa
Fotocelda
Luz
Monocromtica
Fuente de luz
B
Filtro
Fotocelda
Las lecturas en el
instrumento sern
menores que el 100%.
Cuanto ms turbia sea
la solucin, ms baja
ser la lectura
Suspensin de bacterias en
agua o cultivo de bacterias en
caldo, en lugar del tubo que
se ilustra en A
23
Escala de McFarlan
10
9
Unidades McFarlan
8
7
6
5
4
3
2
1
0
300
600
900
2100
2400
2700
3000
24
Determinacin de
protena producida
El
aparato
hace
la
determinacin y reporta
el resultado. En funcin
de la cantidad de protena
de la muestra se calcula el
total de microorganismos.
Este puede indicarse para
que sea por mL, dL u otra
medida.
25
Cmara de Petroff-Hauser
26
Mtodo de Breed
extendido de la
muestra a partir de un
volumen conocido
(ejemplo 10mL)
Contar
varios
campos
y
promediar:
Campo
mo
1
20
2
22
3
18
4
20 Prom = 20 mo
Contar varios campos y sumar:
Suma de 4 campos = 80 mo
27
Contadores electrnicos
El aparato se ajusta y
programa para el conteo. El
resultado tambin puede
programarse.
1,258,976
Flujo
28
Nmero ms probable
29
10-3
10-4
10-5
10-6
650
60
800
550
680
1345
146
15
2600
248
26
30
En el ejemplo tenemos 19UFC por 0.1 mL, por lo tanto tendramos 190 UFC/mL. Si se hace a partir
de una dilucin se deber tomar en cuenta para reportar el valor final.
31
Se ve cmo la gota se
esparce al chocar con el
medio
Incubar
Despus de incubar
se determina el
nmero de colonias que crecieron y se hace
el clculo para reportar las UFC por mL
Tomando el ejemplo tenemos que:
0.02 mL 3 UFC
1 mL
- X
X = (3 *1) /0.02
= 150 UFC/mL = 1.5x102 UFC/mL
S la muestra fue de una dilucin 1/100
tendramos:
150 UFC*100 UFC/mL
1.5x104 UFC/mL
32
Por filtro de
membrana
En este caso se contabilizan
las UFC y se reportan
directamente por el volumen
filtrado. Ejemplos:
Frasco de
muestra
Si se filtr 200 mL de
muestra y crecieron 15 UFC
se reporta:
Filtro de
membrana
15 UFC/200mL
Si se filtr 100 mL de
muestra y crecieron 8 UFC se
reporta:
8 UFC/100mL
tapa
Filtrado
estril
Trampa de
algodn en la
lnea de vaco
lnea de vacio
33
a) Nuceloporo
a) Membrana estril
b) Celulosa regenerada
b) Uso en embudo
c) Retencin
c) Acetato de celulosa
d) Membrana incubada
34
Nmero ms probable
Es importante verificar la tabla
y metodologa que se siguen, ya
que cada tabla est calculada y
ajustada a un determinado
proceso.
Combinacin de
positivos
ndice de NMP/100
mL
Bajo
Alto
5-2-0
5-2-1
5-2-2
5-3-0
5-3-1
5-3-2
50
70
90
80
110
140
20
30
40
30
40
60
170
210
250
250
300
360
35
Incubar a 37C y
ver decoloracin
a) Excelente :
b) Buena :
c) Regular :
d) Pobre :
e) Psima :
37
38
AGENTES FSICOS
Efecto General
Acta sobre
Desnaturalizacin
de protenas
(calor, pH)
Precipitacin y
desnaturalizacin
por concentracin
de solutos
Radiaciones
Ultravioleta
Radiaciones
ionizantes
(rayos X y gamma)
Uso recomendado
Limitaciones
Autoclave
Esterilizacin
de
instrumentos,
lienzos,
utensilios y bandejas de
tratamiento,
medios
y
otros
lquidos
termorresistentes
Sin
efecto
contra
organismos
dentro
de
materiales impermeables al
vapor, no se puede utilizar
en materiales sensibles al
calor
Destruccin de patgenos No
hay
garanta
de
no formadores de espora, esterilizacin en una sola
ropa, vajillas
exposicin
Horno
Incineracin
Objetos
contaminados El incinerador debe poder
desechables
quemar cargas grandes de
manera rpida y efectiva
40
Uso recomendado
Limitaciones
Luz ultravioleta
Control
de
infecciones Debe ser absorbida para
transmitidas por el aire, ser efectiva
desinfeccin de superficies
Radiaciones
ionizantes
Filtros de
membrana
Esterilizar
sensibles al calor
Filtros de fibra
de vidrio
Lavado
41
42
AGENTES QUMICOS
Efecto General
Acta sobre
ANTIBITICOS
Agente Qumico
Uso
Limitaciones
Desinfeccin general
02) Alcoholes
Antispticos
Solo antispticos
03) Yodo
04) Cloro
Tratamiento de Quemaduras
Posible irritacin
Asepsia de mucosas
No mata esporas
Conservacin de alimentos
Materia inanimada
09) Glutaraldehdo
Estabilidad limitada
10) Formaldehdos
10) b-propionolactona
Inflamable y potencialmente
44
explosivo
Obtenido de
Espectro primario
Modo de accin
Ampicilina
Penicillium sp
G(+) y (-)
Anfotericina B
Streptomyces sp
Micosis
Bacitracina
Bacillus sp
Gram (+)
Cloramfenicol
S venezuelae
Amplio espectro
Inhibe sntesis de
protenas
Clorotetraciclina
S. aureifaciens
Amplio espectro
Inhibe sntesis de
protenas
Kanamicina
S kanomyceticus
Mycobacterium
Induce sntesis de
protenas anormales
Novobiocina
S griseus
Gram (+)
Inhibe polimerizacin de
ADN
Polimixina B
B. polymixina
Gram (-)
Deterioro de pared
celular
Nistatina
S. noursei
Candida intestinal,
hongos
Dao a la membrana
celular
45
Sntesis de
cidos nucleicos:
5-Fluorocitosina
Sntesis de
ergosterol:
Azoles
Alilaminas
Formacin de
microtbulos:
Griseofulvina
Polienos
46
Pared celular
Cicloserina
Vancomicina
Bacitracina
Penicilinas
Cefalosporinas
Monobactamas
Carbapenemas
ADN
THF
ARNm
DHF
Metabolismo del
cido flico
Trimetroprima
Sulfonamida
Ribosomas
50
50
50
30
30
30
PABA
Estructura y funcin de la
membrana citoplasmtica
Polimixinas
Daptomicina
Biosntesis de lpidos
Plantesimicina
Sntesis de protenas
(inhibidores de la subunidad 30s)
Tetraciclinas
Espectinomicina
Estreptomicina
Gentamicina
Kanamcina
Amikacina
Nitrofuranos
47
Bacterias
Micobacterias
Bacterias
Gram (-)
Tobramicina
Azoles
Alilaminas
Ciclohexi-mida
Polienos
Polioxinas
Anlogos de
cidos nucleicos
Equinocandinas
Bacterias
Gram (+)
Clamidias
Virus
ARN
ADN
Inhibidores de la
transcriptasa
reversa no
nucleosdicos
Inhibidores de
proteasas
Inhibidores de la
fusin
Estreptomicina
Tetraciclina
Polimixinas
los
Penicilinas
Sulfonamidas
Cefalosporinas
Quinolonas
Isoniacida
Rikettsias
sobre
Anlogos de
nuclesidos
Interferon
Vancomicina
Daptomicina
Plantensimina
48
Cloranfenicol
Estreptomicina
Penicilina
Ampicilina (Trihidratada)
Tetraciclina
Demeclociclina
Cefalosporina C
Cefalexina
49
Ejemplo de
antibitico
Base gentica
de la
resistencia
Presente en :
Permeabilidad reducida
Penicilinas
Cromosmica
Pseudomonas aeruginosa,
Bacterias entricas
Inactivacin del
antibitico
Penicilina
Plasmdica,
cromosmica
Cloranfenicol
Plasmdica,
cromosmica
Staphylococcus aureus,
Bacterias entricas, Neisseria
gonorrhoeae
Aminoglicsidos
Plasmdica
Alteracin de la diana
Eritromicina,
Rifampicina,
Estreptomicina,
Norfloxacina
Cromosmica
Staphylococcus aureus
Bacterias entricas
Bacterias entricas
Bacterias entricas,
Staphylococcus aureus
Desarrollo de una va
bioqumica resistente
Sulfonamidas
Cromosmica
Bacterias entricas,
Staphylococcus aureus
Bombas de expulsin
(eflujo)
Tetraciclinas
Cloranfenicol
Plasmdica,
cromosmica
Bacterias entricas,
Staphylococcus aureus, Bacillus
subtilis
Staphylococcus aureus,
Bacterias entricas
Staphylococcus aureus
50
51
52
53
54
55
56
Desionizacin.
Usando
columnas
de
polmeros se eliminan las iones presentes en
el agua, y posteriormente seguir un proceso
de esterilizacin.
Esterilizacin. Muchas veces aunque el agua
puede esterilizarse en autoclave, puede
obtenerse estril mediante filtros, despus
de pasar por varios procesos para disminuir
la cantidad de materia que puede obstruir
los filtros.
57
Por procedimiento los hospitales deben contar con dos aparatos, uno para
preparar material estril y otro para esterilizar el material contaminado que
se genera en los procedimientos mdicos.
59
60
61
RADIACIONES GAMA
Esterilizacin que requiere de instalaciones especiales por el blindaje de
concreto, acero y plomo que debe tener la cmara de esterilizacin. Se utiliza
Cobalto 60 como elemento radiactivo.
Los
materiales
se
colocan en recipientes y
contenedores que los
llevarn a la cmara de
irradiacin. El proceso
de
transporte
de
material
puede
ser
automtico
o
semiautomtico,
pero
slo el material entra a
la cmara por un sistema
sin fin introduce los
contenedores por un
lado y saca el material
ya estril por otro.
62
FERMENTADORES
Los fermentadores son contenedores en donde un microorganismo se utiliza
para la produccin de metabolitos (biosntesis)
Fermentadores pequeos (1L, 5L, 10L) utilizados para investigacin pueden
desmontarse y esterilizarse en autoclave, pero en el caso de fermentadores
de 500L y hasta 400,000L son unidades fijas, por lo que se esterilizan
mediante la inyeccin de vapor para dejar el sistema estril.
Tamaos del
fermentador
(litros)
Producto
1, 000 a 20,000
Enzimas para
diagnstico,
sustancias para
biologa molecular.
40,000 a 80,000
Algunas enzimas,
antibiticos
100,000 a
150,000
Penicilina,
antibiticos
aminoglicsidos,
proteasas, amilasas,
transformacin de
esteroides,
aminocidos.
200,000 a
500,000
Aminocidos (ac.
glutmico).
64
Microbiota normal
Son el conjunto de
microorganismos
presentes en un
ambiente y que
normalmente se
desarrollan en l.
65
66
67
AREA
TIERRA Y SUELOS
LQUIDOS
POR ORGANISMOS
68
69
Contaminacin en Hospitales
De insumos
Del proceso
Del producto
Durante el almacenamiento
Material no estril
Contaminacin cruzada por fomites
Contaminacin area
73
Mtodos convencionales
Tiempo para el
resultado
Observaciones
de 24 horas
Nmero ms probable
18 a 24 horas
Filtracin
18-24 horas
18 a 24 horas
Muestreo
(cualitativo)
con
medios
74
Mtodos rpidos
Bsicamente tienen el mismo principio que muchos mtodos convencionales,
logran una ventaja la mayora porque son miniaturizados y no se requiere
mucho tiempo para tener resultados, algunos de ello pueden leerse a 8 horas
de realizada la prueba.
Tcnica
Tiempo para el
resultado
Petrifilm
Sistemas
similares)
API
(o
Observaciones
8 a 16 horas
12 a 18 horas
34 a 48 horas desde
el aislamiento.
2 a 4 horas