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CULTIVO
ING. LORENA OA, M.BIO.MOL.
INGENIERA FORESTAL
ANTES DE EMPEZAR
Agua destilada: agua desmineralizada, dureza reducida
Distribucin del
medio en
recipientes
Esterilizacin en
autoclave
Adicin de
reguladores de
crecimiento
Adicin y
disolucin del
agar
Cuarentena
Incorporacin de
otros compuestos
Ajuste pH (5.8)
Adicin de sustancias
termolbiles al medio
autoclavado (30-40C)
Adicin de
reguladores de
crecimiento
Filtracin de
sustancias
termolbiles en
cmara de flujo
Cuarentena
Incorporacin de otros
compuestos
Esterilizacin en
autoclave del medio y
de los recipientes a
usar
Ajuste pH (5.8)
Adicin y disolucin
del agar
Esterilizacin en
autoclave
Cuarentena
Adicin de
reguladores de
crecimiento
Distribucin del
medio en
recipientes
Incorporacin de
otros compuestos
Ajuste pH (5.8)
Cuarentena
Adicin de
reguladores de
crecimiento
Adicin de sustancias
termolbiles al medio
de cultivo (30-40C)
Incorporacin de otros
compuestos
Filtracin de
sustancias
termolbiles en
cmara de flujo
Ajuste pH (5.8)
Esterilizacin en
autoclave del medio y
de los recipientes
PREPARACIN DE UN MEDIO MS
Tabla 01. Componentes de las soluciones stock de medio MS.
Stock
Sales
Volumen a usar
(ml)
NH4NO3
KNO3
Concentracin
Final
(mg/L)
1650
1900
I
II
MgSO4.7H2O
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
CuSO4.5H2O
370
16.9
8.6
0.025
10
III
CaCl2.2H2O
KI
CoCl2.2H2O
440
0.83
0.025
10
IV
KH2PO4
H3BO3
NaMoO4.2H2O
170
6.2
0.25
10
FeSO4.7H2O
NaEDTA
27.84
37.24
10
Vitaminas
Glicina
Tiamina
Piridoxina
Ac. Nicotnico
*Mioinositol*
2
0.1
0.5
0.5
100
20
C1 = ?
C1 = ?
V1 = 20mL
V1 = 20mL
C2 = 1650mg/L
C2 = 1900mg/L
V2 = 1L
V2 = 1L
1 1 = 2 2
1 1 = 2 2
2 2
1 =
1
(1650/)(1)
1 =
0.02
2 2
1 =
1
1 = 82500/ = 82.5/
1 = 95000/ = 95/
(1900/)(1)
1 =
0.02
Sales
Masa para
preparar 1L
NH4NO3
KNO3
82.5g
95g
II
MgSO4.7H2O
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
CuSO4.5H2O
37g
1.69g
0.86g
2.5mg
III
CaCl2.2H2O
KI
CoCl2.2H2O
44g
83mg
2.5mg
IV
KH2PO4
H3BO3
NaMoO4.2H2O
17g
0.62g
25mg
FeSO4.7H2O
NaEDTA
2.78g
3.72g
Vitaminas
Glicina
Tiamina
Piridoxina
Ac. Nicotnico
200mg
10mg
50mg
50mg
ADICIN DE SACAROSA
Las concentraciones de sacarosa (azcar comercial) se especifican en porcentajes peso-peso
Ejemplo: medio MS enriquecido con 3%.
1 =
1 = 0.5
C1 = 2mg/mL
C1 = 1.5mg/mL
V1 = ?
V1 = ?
C2 = 1mg/L
C2 = 5mg/L
V2 = 1L
V2 = 0.5L
1 1 = 2 2
1 1 = 2 2
2 2
1 =
1
(1/)(1)
1 =
2/
2 2
1 =
1
(5/)(0.5)
1 =
1.5/
1 = 0.5
1 = 1.67
DEBER
Se desea preparar 500ml de un medio MS enriquecido con 2.5mg/L de BAP y 0.25mg/L de AIA; si las soluciones madre
de estas hormonas tienen 1.5mg/ml de BAP y 1.5mg/ml de AIA. Indique el volumen de solucin madre que debe usar
para la preparacin. (incluya unidades en los clculos)
Se cuenta con Piridoxina de 1mg/ml, Mioinositol de 0.15g/ml, Tiamina de 0.5mg/ml, cido nicotnico de 2mg/ml y Glicina
de 1.5mg/ml para preparar 750ml de un medio que contenga 2.5mg/L de piridoxina, 200mg/L de mioinositol, 2.5mg/L
de tiamina, 1.5mg/L de cido nicotnico y 1mg/L de glicina. (incluya unidades en los clculos)
Si la receta de un medio de cultivo indica 1.5% de azcar, indique la cantidad de azcar que se tiene que pesar para
preparar medio litro de dicho medio.
El medio Knudson (orquideas) posee la siguiente concentracin de sales: 1g/L de Ca(NO3)24H2O, 0.25g/L de K3PO4,
0.25g/L de MgSO47H2O, 0.025g/L de FeSO47H2O, 0.0075g/L de MnSO4H2O y 0.5g/L de (NH4)2SO4. Se desea
preparar 1L de solucin stock 10X (es decir 10 veces ms concentradas que el medio normal) para facilitar la
preparacin del medio. Indique las cantidades de reactivo deben pesarse para preparar el litro de solucin stock.