Histologia&Embriologia Padres Citoqumicos

Padres
Citoquimicos
Corantes: substncias com a propriedade de associar selectivamente uma
cor a elementos celulares

Padres citoqumicos: modelos nos quais a um corante se faz

corresponder a colorao de determinados elementos celulares.

Hemalmen-Eosina
A hematoxilina um corante indirecto, de aco progressiva,
associado a um mordente, o almen de potassio. Desta associao
resulta uma laca, o hemalmen:
Cora estruturas carregadas negativamente (cidas) de
azul-arroxeado (ex.: DNA, RNA)
Comporta-se como um corante bsico, corando o ncleo, o
retculo endoplasmtico rugoso e ribossomas (devido elevada
concentrao em DNA e RNA, respectivamente) coram organelos
que apresentam basofilia

A eosina:
um corante directo mas de aco igualmente progressiva.
Comporta-se como um corante cido
Cora estruturas carregadas positivamente (bsicas) de
vermelho ou rosa (ex.: maioria das protenas citoplasmticas e
algumas fibras da matriz extracelular)

Em termos gerais, a aplicao do hemalmen-eosina em clulas

animais cora os ncleos de azul e o citoplasma de rosa ou vermelho.

Azul de Toluidina

Corante bsico,
Em alguns casos produz uma colorao distinta da sua prpria cor
(metacromasia)
Cora molculas carregadas negativamente como os
glicosaminoglicanos de vermelho-prpura.
Destacam-se metacromasias ao nvel das granulaes dos mastcitos
existentes no tecido conjuntivo do eixo das vilosidades intestinais e nos
grnulos de secreo das clulas caliciformes.
Os ncleos so corados duma forma ortocromtica, ou seja, num azul
transmitido pelo prprio grupo cromforo do corante.

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Azul ciano

um corante da mucina.
Certos tipos de mucina, mas no todos, so corados de azul por este
mtodo (ex:cartilagem).
Pode ser usado em conjugao com outros mtodos de colorao como
H&E ou van Gieson. Qd esta tcnica combinada com a de van Gieson,
a cor deste corante torna-se verde.

cido Peridico-Schiff (PAS)

O cido peridico um agente oxidante que quebra as ligaes C-C dos

grupos 1,2glicol, transformando-os em di-aldedos.
Os aldedos resultantes podem assim combinar-se com o reagente de
Schiff.
Todas as substncias que contm estes grupos 1,2glicol, so PAS-
positivas:
Polissacridos (glicognio, amido, celulose)
Glicoconjugados (glicolpidos, glicoprotenas e glcidos
fosforilados).
Estruturas PAS-positivas:
Prato estriado com o seu glicoclix
Clulas caliciformes devido existncia de mucina
Membrana basal pela presena da laminina

Feulgen

uma tcnica especfica para o DNA que cora de roxo mais ou menos
intenso, consoante o estado de condensao da cromatina.
A colorao pelo reagente de Schiff requer uma hidrlise moderada do
DNA com cido clordrico (expondo grupos aldedo livres nas molculas
de desoxiribose).
Os grupos aldedo dos cidos nucleicos, combinam-se ento com o
reagente de Schiff (composto por fucsina e cido sulfuroso), originando-
se uma cr prpura arroxeada nos locais onde existe DNA.

Verde de Metilo-Pironina

Par de corantes de aco directa e progressiva, que apresentam uma

grande afinidade para os cidos nucleicos.
O verde de metilo um corante bsico, que apresenta especifidade
para o DNA.
A pironina tambm um corante bsico, mas que cora o RNA de
vermelho.
Assim, os ncleos das clulas coram de roxo (verde + vermelho),
enquanto o citoplasma cora de vermelho.
Clulas com um grande contedo citoplasmtico em RNA, como os
plasmocitos situados no eixo conjuntivo das vilosidades e as clulas

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epiteliais das criptas de Lieberkuhn, so intensamente coradas pela

pironina

Tricrmios

Mistura de 3 corantes.
Esta tcnica uma das chamadas tcnicas para o tecido conjuntivo, j
que usada para demonstrar elementos do tecido de susteno,
principalmente colagneo.
P.ex., na cirrose heptica aumenta a quantidade de tecido conjuntivo
fibroso, o que facilmente observvel com esta tcnica.
H dois grupos:
Van Gieson: cora colagneo de vermelho
Masson/Mallony/Cajal: coram colagneo de verde/azul

Tricrmio de masson
Azul: ncleos e outras estruturas basfilas
Verde/azul (dependendo de qual das variantes da tcnica for utilizada):
colagneo
Vermelho brilhante: citoplasma, msculo, eritrcitos, ceratina.

Van Gieson
colagneo corado de vermelho
ncleos corados de azul
eritrcitos e citoplasma de amarelo

Quando usado em combinao com um corante para fibras elsticas

(Weigert), a elastina cora de azul/preto, para alm dos resultados acima
decritos. Essa tcnica de colorao particularmente til para vasos
sanguneos e pele.

Colorao para reticulina

Demonstra as fibras de reticulina do tecido de sustentao que se

coram de azul/preto.
Os nucleos podem ser contracorados em azul pela hematoxilina ou de
vermelho, pelo corante vermelho neutro.

Alcian Blue

Cora certos tipos de mucina de azul

Azan
Mtodo para tecido conjuntivo, mas excelente para demonstrao de
detalhes citolgicos finos, especialmente no epitlio:
Nucleos vermelho brihante
Colagnio e membranas azul
Musculos e eritrcitos laranja a vermelho.

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Giemsa
Mtodo padro para corar clulas sanguineas e outros esfregaos de
clulas
Nucleos azul escuro a violeta
Citoplasma azul palido
Eritrcitos rosa palido

Hematoxilina frrica

a principal substncia utilizada no mtodo de Bharadway-Love.

um corante indirecto, que recorre ao almen de ferro amoniacal em
soluo aquosa como mordente.
De aco regressiva, tem grande afinidade para protenas, corando
com maior intensidade as mitocndrias de cor negra.
Num procedimento de elevada diferenciao, destaca sobretudo
lipoprotenas.

Metodo de Nissl e do azul de metileno

Utilizam a substncia de Nissl para corar o reticulo endoplasmtico

rugoso encontrado nos neurnios.

Preto do Sudo e Tetrxido de smio

Evidenciam estruturas contendo lipidos, com a mielina, numa cor

preto acastanhado.

Sais de prata

Cora o colagneo tipo III Reticulina

Este mtodo demonstra as fibras de reticulina do tecido de sustentao,
que se coram de azul/preto por esta tcnica.
Os ncleos podem ser contracorados em azul pela hematoxilina ou em
vermelho pelo corante vermelho neutro.

Mtodos da prata e do ouro

Hoje em dia so ocasionalmente usados para demonstrar

estruturas finas como prolongamentos celulares, p.ex. em
neurnios, placas motoras terminais e junes intercelulares.

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Dependendo do mtodo utilizado, o produto final preto,

marrom ou dourado.
Tcnicas imuno-histoquimicas

Permite identificar qualquer substncia (antigenio), desde que haja

anticorpos disponiveis contra a mesma.
Os anticorpos so produzidos atravs da injeco da substncia humana
que se pretende distinguir noutro animal. Esse animal reconhece-a
como estranha e comea a produzir anticorpos contra o antignio.
Desse modo pode ser criada uma fonte inextinguivel, usando-se a
tecnologia monoclonal.
Coloca-se um corte de tecido numa lmina de vidro e uma soluo de
anticorpos colocada sobre a preparao.
O anticorpo fixa-se ao antignio e o excesso de anticorpos lavado, de
modo que apenas as clulas que tm o antignio tm o anticorpo fixado
a si.
Para demonstrar a posio do anticorpo na clula existem vrios
mtodos:
Metodo imunofluorescncia: os anticorpos so previamente
marcados com uma substncia fluorescente (fluorescena) sendo
indentificado posteriormente com um microscopio de
fluorescncia.
Mtodo imunoperoxidase: os anticorpos so marcados com
uma enzima, com a peroxidase) que converte um substrato incolor
num produto colorido.

Citoqumica de Enzimas

Caracteriza-se por uma identificao enzimtica selectiva, recorrendo-

se habitualmente a cortes por congelao num cristato para evitar a
desnaturao proteica.

Fosfatase alcalina
A actividade fosfatase alcalina apresenta-se associada a protenas
secretadas, sendo ancorada no exterior da clula pelo glicoclix.
No existe, portanto, em lisossomas.
A sua concentrao aumenta ao longo da vilosidade intestinal desde a
sua poro basal at poro apical onde a colorao
castanho/cinzento-escuro, mais intensa, denota um papel na absoro
intestinal.
Simultaneamente, demonstra a progressiva diferenciao que os
enterocitos sofrem no seu trajecto de migrao da base para o topo das
vilosidades.

Fosfatase cida
A actividade fosfatase cida apresenta-se predominantemente
associada a enzimas de degradao intracelular, embora possa
encontrar-se associada ao glicoclix e, neste caso, com marcao do
prato estriado.

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Tal como acontece para a fosfatase alcalina, observa-se um progressivo

aumento da actividade fosfatase alcalina no prato estriado da base para
o topo das vilosidades.
Como esperado, o mtodo determina a colorao dos lisossomas de
castanho/laranja-escuro.
Autoradiografia

Permite identificar o percurso e o destino de substncias radioactivas

introduzidas na clula, por impresso de emulses fotogrficas pela
radiao emitida.
Utilizam-se para o efeito istopos radioactivos previamente
incorporados em precursores de molculas biolgicas.
Aplica-se habitualmente a tcnica de pulso-caa, na qual aps um
perodo de administrao do istopo radioactivo (pulso - neste caso,
timidina tritiada) este substitudo pela forma no radioactiva (caa -
na qual se segue o trajecto do istopo incorporado).
As imagens referem-se a material recolhido em epitlio intestinal de
ratinho, ao fim dum perodo de 2 horas, 6 horas, 1 dia e 3 dias, onde
visvel a migrao centrpeta de gros de autoradiografia da zona basal
para a extremidade apical das vilosidades.
O facto observado deve-se incorporao da timidina em clulas com
actividade mittica que, no caso das vilosidades intestinais, se
encontram exclusivamente nas criptas de Lieberkuhn da sua
extremidade basal.
A migrao posterior dos gros de autoradiografia resulta da deslocao
de clulas j diferenciadas, por presso de clulas recm-diferenciadas
a partir das clulas estaminais da base da vilosidade.

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