Evaluacin de diferentes concentraciones de Bacillus subtilis cepa QST 713 en el

control de Rhizoctonia solani Kuhn (Tel. Thanatephorus cucumeris D), agente

causal de la rhizoctoniasis en tubrculos de papa bajo condiciones in vitro.

Mauricio Guancha
Silvana Riascos
Santiago Pineda

Universidad de Nario
Facultad de Ciencias Agricolas
Investigacion Control Biologico
Pasto, Nario
2016

Evaluacin de diferentes concentraciones de Bacillus subtilis cepa QST 713 en el

control de Rhizoctonia solani Kuhn (Tel. Thanatephorus cucumeris D), agente
causal de la rhizoctoniasis en tubrculos de papa bajo condiciones in vitro.

Mauricio Guancha
Silvana Riascos
Santiago Pineda

Trabajo de Investigacin, asignatura, Control Biolgico

Docente
Ing. Mara Pineda

Universidad de Nario
Facultad de Ciencias Agricolas
Investigacion Control Biologico
Pasto, Nario
2016

INTRODUCCIN
La papa es originaria de la cordillera de los Andes, de donde se dispers a todos
los continentes y es hoy la base de la alimentacin humana. En Colombia se cultiva
en las zonas altas de las tres cordilleras, siendo los departamentos de
Cundinamarca, Boyac y Nario los mayores cultivadores, con el 80% del rea
sembrada y de la produccin nacional. De acuerdo con los registros de Agronet
(2012), el rea sembrada promedio en los ltimos cinco aos fue de 160.000 ha y
la produccin nacional para el mismo perodo fue de 2.800.000 ton, con un promedio
de produccin de 18 ton/ha.
Las condiciones climticas prevalecientes en nuestro pas, la propagacin
vegetativa del cultivo, la movilizacin de material de siembra y de tubrculos para
consumo humano e industrial y su empaque, la corta rotacin en las grandes reas
sembradas, entre otros factores, han contribuido a la diseminacin y
establecimiento de plagas y enfermedades, situacin que se agrava debido a la
poca informacin tcnica que tienen muchos productores, para el oportuno
reconocimiento y adecuado manejo de estos problemas fitosanitarios. Por otra
parte, es uno de los cultivos que presenta la mayor demanda de fungicidas e
insecticidas para el control de sus afecciones, razn por la cual puede presentarse
ineficacia en el control del complejo de patgenos del suelo al no existir fungicidas
especficos para estos, lo anterior es un problema evidente, que ha contribuido al
incremento de microorganismos perjudiciales para el cultivo de papa, lo que afecta
directamente al rendimiento, calidad fsica y sanitaria de los tubrculos, adems que
permite crear resistencia hacia el control qumico. (ICA, 2011).
R. solani es probablemente el hongo ms comn y daino en los suelos paperos de
Colombia y Ecuador, su tolerancia a la acidez le permite sobrevivir mejor. Ataques
moderados de este hongo pueden inducir prdidas de hasta 20% en la produccin
(Pumisacho y Sherwood, 2002).
Por medio de esta investigacin se pretende generar una nueva alternativa de
manejo en la produccin de este cultivo, integrando mtodos y formas conocidas
que permitan dar soluciones reales, para de esta manera aplicarlas en forma
oportuna en el control de patgenos (no se genere resistencia), por medio del
control biolgico y en este caso con B. subtilis, conservando as el recurso suelo
como principal factor bitico.

ESTADO ACTUAL DEL PROBLEMA

La mayora de reas productoras de papa presentan problemas con enfermedades
de suelo causadas por: costra negra (Rhizoctonia solani Kuhn), roa (Spongospora
subterrnea), pudricin seca (Fusarium spp), sarna (Streptomyce sscabies), entre
otras; estas enfermedades a ms de causar prdidas, deterioran la calidad del
producto y contaminan los suelos de cultivo. (Agrios y Hooker, 2004).
En Colombia el incremento de enfermedades en plantas, causadas por un gran
nmero de hongos fitopatgenos ha obligado a los agricultores a la aplicacin de
grandes cantidades de fungicidas e insecticidas qumicos durante dcadas, lo cual
genera costos mayores para el productor. Este uso plantea una grave amenaza
para la salud humana y el medio ambiente, provocando la aparicin de organismos
resistentes a estos productos (Tovar, 2008).
Debido a que las condiciones climticas en la actualidad son cambiantes en nuestro
pas, el cultivo de papa se ve afectado por la presencia de enfermedades de suelo,
entre las que esta la rhizoctoniasis o costra negra (Rhizoctonia solani Kuhn), que a
nivel de campo presenta sntomas como: cncer del tallo, tubrculos con presencia
de esclerocios, lo cual es motivo de rechazo para ser exportado y comercializado
como papa-semilla en el pas (Villareal, 2013). La enfermedad es reconocida como
un problema significativo para los productores, por las prdidas econmicas que
ocasiona (Castro y Contreras, 2011).

JUSTIFICACION DEL PROBLEMA

El cultivo de la papa se destaca en la actividad agropecuaria nacional por los
aspectos directamente relacionados con su explotacin y por la variada cantidad de
actividades que se generan en torno a este producto (Corpoica, 2000).
El incremento en cantidad y frecuencia de las precipitaciones en los ltimos aos,
ha tenido consecuencias negativas en la sanidad y productividad de la mayora de
los cultivos, debido al incremento de la humedad en los suelos, al aumento de la
humedad relativa, a la reduccin del brillo solar y a la disminucin de la temperatura
en algunas zonas, lo cual proporciona condiciones muy favorables para muchas
plagas y para la mayora de los patgenos, como est ocurriendo en el caso del
cultivo de papa (ICA, 2011).
La rhizoctoniasis es una enfermedad que afecta los tubrculos de papa la cual se
mantiene latente en el suelo a partir de esclerocios del hongo Rhizoctonia solani
que se forman adheridos a su superficie. Un esclerocio es una estructura de
supervivencia del patgeno que adems de afectar la calidad de la cosecha, facilita
la diseminacin de la enfermedad. A partir de esas costras, el hongo se desarrolla
afectando los brotes del tubrculo, causando lesiones y chancros de color cafrojizo, a consecuencia de los cuales mueren los puntos de crecimiento. En

consecuencia, los tubrculos semilla afectados por costra negra tienen pobre
brotacin o producen tallos dbiles y faltos de uniformidad. El ataque severo de
Rhizoctonia solani en papa, ocasiona la formacin de tubrculos areos, causa
lesiones y estrangulamiento de los tallos y reduce la cantidad y calidad de los
tubrculos, debido a la deformacin de estos, conocidos como muecos (ICA,
2011).
Los agricultores tienen que efectuar prcticas de desinfeccin de semillas que
resultan costosas, con limitados fungicidas qumicos en el control de esta
enfermedad y de cierta manera se contribuye a la contaminacin, y afeccin de la
microbiota benfica presente en el suelo, sin embargo existen alternativas de
manera que se disminuyan estos impactos, entre ellos est el uso del control
biolgico, en el cual se pueden encontrar mltiples agentes como la bacteria
Bacillus subtillis, la cual a partir de productos comerciales recientes puede ser
asequible para agricultores. Por otra parte es importante promover tcnicas de
control biolgico en el cultivo de papa ya que es uno de los que ms demanda de
agroqumicos posee, adems de ser un alimento de consumo diario. De esta
manera se busca tambin crear conciencia dentro de la comunidad de agricultores
con el fin de disminuir el uso de fungicidas, y as obtener productos ms limpios sin
afectar la salud de sus consumidores.

OBJETIVOS
Objetivo general

Evaluar diferentes concentraciones de Bacillus subtilis cepa QST 713 en el

control de Rhizoctonia solani Kuhn, (Tel. Thanatephorus cucumeris D),
agente causal de la rhizoctoniasis en tubrculos de papa bajo condiciones
in vitro.

Objetivos especficos

Conocer el potencial biocontrolador de B. subtilis cepa qst 713 sobre R.

solani.
Determinar la concentracin ptima (5cm3, 2,5 cm3, 1,25 cm3 y 7,5 cm3) de
la cepa en el control de R. solani.

MARCO TEORICO
El control biolgico de enfermedades en plantas o insectos con agentes microbianos
es una posibilidad atractiva, si se tiene en cuenta que los costos respecto al uso de
otras prcticas de control tradicionales pueden resultar menores y de mayor
eficiencia, pues, aunque los antagonistas pueden actuar en forma ms lenta y en
menor escala, su accin puede ser ms estable y duradera que el control qumico
(Papavizas., et al. 1984).
La bsqueda de microorganismos antagonistas para el control biolgico de
patgenos en cultivos de importancia econmica ha despertado especial inters
debido a sus potencialidades y a la gravedad de los impactos ecolgicos causados
por la constante y creciente aplicacin de agroqumicos en los agroecosistemas
(Villamil., et al. 2015).
Mediante el uso de bacterias y hongos antagonistas se han podido conocer
estrategias con mayor potencial para el control de enfermedades ocasionadas por
patgenos del suelo (Cook y Baker, 1983). Las bacterias ofrecen una alternativa
ecolgica para controlar el ataque de patgenos y/o mejorar el rendimiento de los
cultivos, por lo que actualmente se utilizan las tcnicas de avanzada para entender
sus mecanismos de accin, adems Pueden promover el crecimiento por vas
directas o indirectas, cuyos elementos especficos no han sido debidamente
caracterizados. Los efectos directos pueden evidenciarse en ausencia de otros
microorganismos, es decir, la planta slo interacta con el microorganismo en
estudio, mientras que los mecanismos indirectos se pueden observar en la
interaccin del microorganismo de inters con un fitopatgeno, mediante la cual se
reducen los efectos dainos en el vegetal (Hernndez., et al. 2006).
En la actualidad, existe un inters creciente por la bsqueda de alternativas al
control qumico para la supresin de agentes patgenos vegetales y, en este
sentido, una de las opciones ms interesantes es el uso de agentes microbianos de
control biolgico (AMCB). La comercializacin de estos agentes mediante biofrmulas es, en general, escasa debido a varias causas, como podra ser la falta de
un espectro de actividad amplio, la baja eficacia del producto en campo, la actividad
dbil frente al patgeno en comparacin con lo observado por parte de algunas
frmulas de naturaleza qumica o bien, el proceso de registro y patente tan lento al
que deben someterse tales productos. No obstante, a pesar de las dificultades
encontradas frente al desarrollo de estos bio-productos, existen muchas razones
para ser optimistas ya que la aplicacin de estos AMCB puede jugar un papel muy
importante en los sistemas de control integrado de plagas y enfermedades (Suarez
y Moreno 2010).
Uno de los productos a base de agentes microbianos que se ha venido estudiando
actualmente y que ha demostrado una gran eficacia en campo es Rhapsody a base
del genero bacillus, especficamente Bacillus subtillis cepa QST 713, Distribuido por
Bayer Cropscience, con registro ICA en control de mildeo polvoso en rosas y

Phytophthora infestans en tomate, segn Cropscience (2016) presenta mltiples

modos de accin para invadir y atacar hongos fitopatgenos. Trabaja primero
creando una zona de inhibicin en la hoja, previniendo el ataque de
patgenos, tambin detiene el crecimiento de los patgenos por competencia por
los nutrientes y espacio en la superficie, destruye el tubo germinativo y el micelio
del patgeno, estos diferentes modos de accin resultan en un efectivo control de
las enfermedades, con muy poca posibilidad de que se desarrolle resistencia.
En cuanto al gnero bacillus, segn Murcia y Salamanca (2006), sus especies
sobreviven en un rango de pH de 2 a 8 y temperaturas -5 y 75C. Algunas especies
de Bacillus presentan gran habilidad para degradar compuestos qumicos orgnicos
como los plaguicidas. No obstante existe una gran diversidad en la forma y las
funciones bacterianas en el ambiente y menos de un 10% de las bacterias de un
ambiente son realmente cultivables.
Las cepas pertenecientes a este gnero en especial B. subtillis, forman endosporas
que les permiten estar latentes en el suelo hasta encontrar condiciones adecuadas
y de esta manera retornar su actividad normal entre las que segn estudios se
encuentra el incremento hasta de un 500 % de la productividad de un cultivo
formando asociaciones con las races de las plantas, adems de la produccin de
carbonatos de calcio sustancias fortalecedoras del suelo, mejorando la capacidad
de aireacin e infiltracin de agua y nutrientes, reduce la presencia de aluminio y
contribuye a procesos de control y antagonismo en contra de patgenos del suelo,
los cuales se fundamentan sobre la activacin de mltiples mecanismos entre los
que se encuentran: la inactivacin de las enzimas del patgeno, la competencia por
el espacio y nutrientes, la secrecin de metabolitos secundarios con efecto
antibitico y el ataque directo a hongos fitopatogenos (Bentez., et al. 2004).

Bacillus subtillis
El gnero Bacillus pertenece a la familia Bacilliaceae, hoy en da incluye ms de
100 especies de bacilos. Este gnero est formado por microorganismos bacilares
Gram positivos, formadores de endosporas, quimiheterotrofos que normalmente
son mviles y rodeados de flagelos periticos. Son anaerobios o aerobios facultativos
son catalasa positivos. Las clulas bacterianas de este gnero tienen un amplio
tamao que vara 0,5 a 2,5 m x 1,2-10 m. Este gnero se encuentra comnmente
en suelos y plantas donde tienen un papel importante en el ciclo del carbono y el
nitrgeno. Son habitantes comunes de aguas frescas y estancadas, son
particularmente activos en sedimentos. (Koneman et al., 2008).

La clasificacin taxonmica de Bacillus subtillis es la siguiente:

Dominio: procariota
Reino: Bacteria
Filum: Firmicutes (Gram+, bajo GC)
Clase: Bacillio Firmibacteria
Orden: Bacillales
Familia: Bacillaceae
Gnero: Bacillus
Especie: Bacillus subtilis (Ehrenberg 1835) Cohn 1872.
B. subtilis es una bacteria Gram positiva, produce endosporas las que son
termorresistentes y tambin resiste factores fsicos perjudiciales como la
desecacin la radiacin los cidos y los desinfectantes qumicos, produce enzimas
hidrofilicas extracelulares que descomponen polisacridos, cidos nucleicos
permitiendo que el organismo emplee estos productos como fuente de carbono y
electrones, producen antibiticos como la bacitricina, polimixina, gramicidina y
circulina, fermentan la casena y el almidn, vive dentro de los lmites de 55 a 70C.
Es un gran controlador biolgico, B. subtilis promueve el desarrollo de las plantas y
previene las enfermedades del suelo causadas por Sclerotium rolfsii, Fusarium spp.,
Verticillium spp, Sclerotinia sclerotiorum, Phytophthora capsici, Pythium spp, y el
nematodo nodulador de races (Meloidogyne spp) y Rhizoctonia solani, agente
causal de la enfermedad denominada rhizoctoniasis. (Cuervo, 2010).
B. subtilis no es patognico o toxicognico para humanos, animales o plantas, y
produce molculas bioactivas que tienen una fuerte capacidad antibitica y
antifngica. Segn las condiciones de cultivo, algunos miembros de este gnero
bacteriano producen biopelculas, las cuales representan una comunidad
interdependiente y pueden estar conformadas por una sola especie o una
comunidad derivada de mltiples especies, que pueden adherirse sobre una gran
variedad de superficies biticas y abiticas. Adems de la masa microbiana, la
biopelcula est constituida por una matriz de exopolisacridos, protenas y cidos
nucleicos. Esta biopelcula interviene en la induccin y la acumulacin de
lipopptidos que cumplen funciones diversas; algunos poseen actividad
antibacteriana y antifngica (Hernndez, et al., 2008).
Dentro de esta especie pueden encontrarse muchos tipos de cepas, las cuales
pueden definirse como poblaciones de clulas de una sola especie, descendientes
de una nica clula, propagada clonalmente, en una forma ms simple puede
definirse como un conjunto de especies bacterianas que comparten, al menos una
caracterstica; algunas de estas son utilizadas en la produccin de alimentos, otras
en la produccin de polmeros o detergentes, pero la que interesa en el mbito
agrcola es la cepa QST 713, patentada en el ao 2012, dentro de la descripcin en

la patente y de algunos de los productos que la contienen, junto con otras especies
del mismo gnero se dice que tienen efectos antifugicos como:
ANTIBIOSIS: la antibiosis ocurre durante la interaccin de los compuestos
difusibles de bajo peso molecular o antibiticos producidos en este caso por la cepa
de B. subtilis, que inhiben el crecimiento de otros microorganismos, en sntesis es
la inhibicin o destruccin de un organismo por la produccin metablica de otro, de
este modo se incluyen pequeas molculas toxicas, voltiles y enzimas hidroliticas.
De los pptidos antifngicos producidos por B. subtilis podemos citar a
micobacilinas, iturinas, bacilomicinas, surfactinas, micosubtilinas, fungistatinas y
subporinas, como agentes antibioticos. Estos pptidos generalmente tienen un PM
< 2000 Da (Ochoa, 2002).
Competencia: Este mecanismo consiste en el uso de un requerimiento en comn
por dos especies, con la diferencia que uno de ellos hace mayor uso de este que el
otro, limitando la cantidad de requerimiento disponible y generando un evento
desigual.
Competencia por nutrimentos: La competencia ms comn es por nutrimentos
esenciales para el desarrollo de las funciones microbianas vitales; reproduccin,
nutricin, respiracin y/o metabolismo, de esta manera se delimita la colonizacin
de otras especies patgenas.
Competencia por espacio: El desarrollo de un microorganismo sobre determinada
rea, inhibe de cierto modo la invasin de otros.
Competencia por el Hierro y produccin de Sideroforos: Tericamente todos
los microorganismos excepto Lactobacillus sp. Requieren de hierro para satisfacer
sus necesidades vitales, pues ste participa en procesos biolgicos importantes
como transporte de oxgeno, sntesis de DNA, fijacin de nitrgeno, fotosntesis y
respiracin. Sin embargo, este elemento no siempre est disponible para ser
aprovechado por las bacterias, debido a que en el medio ambiente el oxgeno
atmosfrico produce la oxidacin del Fe2+ a Fe3+, precipitando este ltimo como
hidrxido frrico que no es biolgicamente accesible para los microorganismos
debido a su constante de solubilidad (10-17 a pH 7). Los siderforos (palabra griega
que significa portador de hierro), Son sustancias con una naturaleza qumica
variada y que pueden contener un pequeo pptido. Tales compuestos
desempean un papel rector en el control de hongos fitopatgenos que provocan
enfermedades en diferentes cultivos de importancia econmica. En condiciones de
escasez de hierro, las bacterias producen y excretan los siderforos al medio. Una
vez secuestrado el hierro por los siderforos, el complejo es reconocido por
receptores de membrana especficos, atravesando la misma por un sistema de
transportadores activos. El modo en que la produccin de siderforos por estas
rizobacterias contribuye al control de fitopatgenos ha sido muy investigado y se ha
explicado mediante la hiptesis de los siderforos, que plantea que las rizobacterias
convierten al hierro III en un factor limitante mediante el secuestro del Fe3+,
inhibiendo de este modo el crecimiento de patgenos en la rizsfera, Cuando el

siderforo se acopla con el hierro, ste ltimo se hace inaccesible para los
microorganismos patgenos que no posean los receptores proteicos especficos
para reconocer al complejo y que adems no tengan mecanismos propios tan
efectivos de adquisicin de hierro, Las plantas colonizadas por rizobacterias no son
afectadas por la formacin de estos complejos, de hecho se ha planteado que las
mismas pueden incorporar a su nutricin el hierro solubilizado por siderforos.
Proteccin cruzada e Induccin de resistencia:
Los seres vivos incluidas las plantas han desarrollado mecanismos de defensa
contra los patgenos invasores en el transcurso del tiempo y el proceso evolutivo.
Por tal motivo las plantas presentan mecanismos bioqumicos, fsicos y
estructurales de resistencia los cuales estn muy relacionados con la capacidad de
stas para inhibir el desarrollo de una enfermedad por fitopatgenos con los que no
han estado en contacto mediadas por los mecanismos preexistentes
desencadenados por otro patgeno similar conocido como el fenmeno de la
proteccin cruzada.
La resistencia inducida es un tipo particular de este fenmeno, en la cual los
mecanismos de defensa reconocen y responden a amenazas similares y estn
preparados antes de la amenaza real dada por la llegada del patgeno, esta
proteccin cruzada puede por tanto estar dada por la induccin de resistencia u
otros mecanismos antagnicos (Layton, et al., 2011).
Segn Tejara et.al (2011), esta bacteria no solo proporciona un control efectivo
sobre patgenos (tanto hongos como bacterias), tambin tiene un efecto positivo en
la nutricin de las plantas, muchos estudios afirman que B. subtilis, influye
directamente sobre el metabolismo de las plantas, promoviendo el aumento de la
toma de agua y nutrientes, el desarrollo del sistema radical y la estimulacin del
funcionamiento de otros microorganismos benficos, presentes en la rizosfera;
sntesis de fitohormonas como la produccin de cido indolacetico en plantas de
arroz y manzana, solubilizacion de fosfatos, una gran cantidad de fosfatos
inorgnicos aplicados al suelo son inmovilizados o fijados por coloides del suelo,
permaneciendo de forma inaccesible para las plantas, para la solucin de este
problema B. subtilis excreta al medio cidos orgnicos como principal mecanismo
de solubilizacion, aunque tambin pueden actuar enzimas como las fitasa; tambin
se destacan la produccin de sideroforos (transportadores de hierro, compuestos
quelatantes, que consisten en pptidos no ribosomales, los cuales permiten la
asimilacin del hierro por transporte activo), fijacin del nitrgeno a travs de la
enzima nitrogenasa presente en estos organismos por lo cual se dice que poseen
la capacidad de promover el crecimiento tanto directa como indirectamente; en
cuanto al control de fitopatogenos, a parte de la produccin de antibiticos como la
zwitermicina que suprime el crecimiento de hongos, y la produccin de enzimas
lticas, se ha comprobado que , la interaccin entre la bacteria mencionada y las
plantas aumenta la resistencia sistmica adquirida (SAR), que segn Gutirrez y
Almaraz (2007) se define como las distintas vas de transduccin de seales que

juegan un rol importante en la habilidad de la planta para defenderse contra

patgenos. De esta forma se puede considerar el rol tan determinante que B.subtilis
puede ejercer en la fitosanidad y crecimiento de los cultivos.

Rhizoctonia solani
Es uno de los hongos ms importantes reconocido como patgeno de plantas. Por
lo general causa enfermedades en una amplia gama de hospederos, afectando
tanto partes areas como subterrneas. Usualmente se le conoce como hongo
estril, debido a que durante muchos aos se pens que era incapaz de producir
algn tipo de espora, ya fuera su fase sexual o asexual. Actualmente se sabe que
el estado sexual (telomorfo) de R. solani, Thanatephorus cucumeris, produce
basidiosporas lo que hace que esta especie se un basidiomycota (Agrios, 2004). Un
considerable nmero de aislamientos de Rhizoctonia son saprofitos, aunque otros
son micorrizales sobre orqudeas u otras plantas.
Clasificacion de R. solani y su telomorfo T. cucumeris.

Caractersticas
Posee hifas de color marrn oscuro, con clulas multinucleadas, sus hifas pueden
anastomosarse (capacidad de unir sus hifas y producir plasmogamia (unin de
contenido citoplasmtico)), se han identificado 12 grupos de anastomosis a nivel
mundial de los cuales segn Cedeo, et al. (2001) el AG2 y AG3 son los principales
causantes de la rhizoctoniasis en el cultivo de papa, principalmente las cepas
pertenecientes al AG3 debido a su amplia diseminacin y alta virulencia, el micelio
de la fase asexual es estril, poseen ramificaciones que parten en ngulo recto, en
el punto de unin de las hifa se forma una constriccin caracterstica, al inicio las

hifas son hialinas y se tornan a un color pardo oscuro, la enfermedad en cultivos se

presenta en condiciones de 18 C, con un periodo de incubacin de 3 das, M.O.S
> 10 %, suelos con Da. < 1,4, alta humedad en el suelo con capacidad de campo >
50%, ph ideal de 5,8, el hongo se encuentra atrado por los estimulantes qumicos
liberados por las clulas de las plantas en crecimiento activo, en condiciones
desfavorables produce estructuras de resistencia llamadas esclerocios.
Algunos de los sntomas que presentan las plantas afectadas por esta enfermedad
son: lesiones necrticas de color marrn, crecimiento lento; en el cultivo de papa las
lesiones impiden el normal movimiento de los nutrientes dando lugar a tubrculos
areos, estrangulamiento de estolones y encajurramiento de las hojas superiores
por afecciones en races.
R. solani ocasiona prdidas importantes, en la mayora de plantas perennes y
anuales, incluyendo casi todos los cultivos hortcolas que se desarrollan dentro o
sobre el suelo. Entre las enfermedades ms comunes causadas por este
fitopatogeno est el llamdo damping off o cada de las plntulas, como
consecuencia del estrangulamiento y necrosis del tallo a nivel de cuello en plntulas
recin emergidas. Produce una reduccin significativa del vigor de las plantas y de
la produccin de tubrculos en cultivos de papa (Cedeo, et al., 2001).
El cultivo de papa es uno de los ms afectados por el patgeno; en las zonas
paperas de Colombia, ha representado un problema en las producciones, llevando
a prdidas de ms del 50% de las cosechas de los cultivos, en el departamento de
Nario, el aun desconocimiento por parte de los agricultores provoca que la
enfermedad se propague con mayor facilidad, obteniendo como consecuencias
afecciones en cuanto a la calidad de tubrculos, disminucin de plantas en el rea
sembrada, perdida de la calidad de semilla, adems que la infeccin sirve como
puerta para otros patgenos; el servicio de extensin por parte de Ingenieros
agrnomos ha promovido el uso de algunas medidas como la desinfeccin de
semilla para as lograr reducir el inoculo del patgeno, esto ha minimizado de cierta
forma en algunas reas del sur de Nario los graves efectos de la rhizoctoniasis y
otras enfermedades, aun as el limitado nmero de productos disponibles para el
control de esta enfermedad y su gran costo retardan estas tcnicas, por lo cual se
hace necesario las bsqueda de otros mtodos de control como el biolgico.
Biocontrol ejercido por B. subtilis sobre R. solani
A pesar de que la mayora de productos a base de B. subtilis no tengan un registro
ICA para el control de R. solani, muchas investigaciones han corroborado el control
efectivo por diferentes medios de la bacteria sobre el hongo fitopatogeno; as Arcos
y Zuiga (2015), afirman que B. subtilis proporciona ms de 30 lipopeptidos
agrupados en tres grupos que trabajan sinrgicamente para destruir los patgenos,
causantes de las enfermedades de las plantas, sus diferentes mecanismos de
accin evitan que los patgenos logren el desarrollo de resistencia, lo anterior se ha
evidenciado en muchos ensayos de campo que han resultado en un control efectivo

sobre diversos patgenos entre los que se encuentra R. solani, adems los autores
mencionados, en sus investigaciones sobre el efecto de rizobacterias en el control
de R. solani, en el cultivo de papa, lograron determinar que cepas de B.
subtilis (Bac17M8 y Bac17M9) y B. amyloliquefaciens nativas de la regin altiplnica
del Per y Bolivia, inoculadas a plntulas de dos variedades de papa (Ccompis y
Andina), tienen la capacidad de inhibir la infeccin por R. solani, posiblemente a
travs de algn mecanismo de accin antagnico o por resistencia inducida.
Existen otras investigaciones que corroboran lo anterior como Jimnez et al. (2001)
cuyos resultados sobre la evaluacin del efecto de rizobacterias sobre R. solani
identificaron en el cultivo de papa, que la bacteria B. subtilis inhiba prcticamente
todos los grupos de anastomosis de R. solani, adems de reportar algunos casos
exitosos en el control de algunas cepas de Fusarium sp. y de Phytophthora
infestans. Tambin demostraron que B. subtilis es una Promotora de Crecimiento
de Plantas (PGPR), ya que aumenta la cantidad y calidad de tubrculos.
Layton, et al. (2011) En su investigacin sobre el efecto biocontrolador de Bacillus
spp, mediante antibiosis en cultivos, encontraron que Bacillus spp y sus especies
ms representativas B. brevis y B. subtilis, corresponden a dos agentes bacterianos
con amplias y excepcionales acciones antagnicas contra microorganismos de
diversas etiologas, lo que sugiere la explotacin de su metabolismo y perfil gentico
en el biocontrol de agentes fitopatgenos. Adems que los pptidos antimicrobianos
Iturin A, Fengycin y Gramicidina S son el producto de la interaccin de varios locus
genticos existentes en el genoma bacteriano de estas especies y su produccin
est dada no solo por las caractersticas intrnsecas que poseen por naturaleza si
no en la misma medida por el estmulo directo de otro microorganismo como es que
posea una relacin de antagonismo a travs de la activacin del sistema de
comunicacin y sealizacin bacteriano.
El uso a mediano plazo de cepas que demuestren efectos antagnicos en
programas de biocontrol es una de las herramientas ms prximas y efectivas para
contribuir en la disminucin de las actuales problemticas fitosanitarias.
Reinoso, et al. (2011) en investigaciones sobre la seleccin de cepas de Bacillus en
el control de hongos fitopatogenos encontraron que 20% de las cepas bacterianas
inhibieron el pleno desarrollo de R. solani, estableciendose B. subtilis como
promisoria para el control de hongos fitopatogenos.
En cuanto a los productos comerciales que contienen a B. subtilis en microcapsulas,
Hernandez, et al. (2010) demostraron que las microcpsulas conteniendo cepas
bacterianas pueden ser un eficaz agente de biocontrol contra patgenos del suelo,
y pueden tener actividad biofertilizadora.
Castillo, et al. (2015) cocluyeron que B. subtilis es promotor de crecimiento y
antagnico a una gran variedad de fitopatgenos como Phytophthora
cactorum,
Sclerotium
cepivorum,
Fusarium
oxysporum,
Rhizoctonia

solani, Alternaria carthami, Phytophthora capsici, Fusarium solani, entre otros, en

distintos cultivos y evaluados in vitro, en invernadero y campo. Por lo que puede
establecerse como una alternativa en el control biolgico de R. solani con
resistencia a fungicidas, mediante la aplicacin individual o en mezcla de cepas para
eficientar su control.
Tejera, et al. (2011) concluyen en su investigacin sobre Potencialidades del gnero
Bacillus en la promocin del crecimiento vegetal y el control biolgico de hongos
fitopatgenos, que Las especies del gnero Bacillus presentan ventajas para su
utilizacin en la Biotecnologa Agrcola como son la presencia de endosporas, la
motilidad que le facilita la colonizacin de la planta, la capacidad de producir
sustancias promotoras del crecimiento vegetal, siderforos, solubilizacin de
fosfatos y de sustancias responsables de su actividad antagnica e inhibidora, todo
lo cual abre las perspectivas de su utilizacin en la agricultura sostenible con la
consecuente preservacin del medio ambiente.
En cuanto al efecto controlador de la bacteria en mencin sobre otros hongos
fitopatogenos, Corrales, et al. (2012) En pruebas in vitro establecieron que Bacillus
subtilis es el microorganismo ms efectivo frente a Fusarium sp., a travs de la
liberacin de compuestos con propiedades antifngicas como la subtilina y otros
antibiticos de la familia de las Iturinas, polipptidos que actan sobre la pared
celular de los hongos.
Lo anterior permite predecir que B. subtilis de acuerdo con las investigaciones
realizadas en el control de fitopatogenos en especial de R. solani se puede definir
como un organismo eficaz a la hora de establecer un programa de control biolgico.
DISEO METODOLOGICO
El aislamiento de R. solani se har a partir de tejido infectado por el patgeno y
esclerocios recolectados en el municipio de Guachucal - Nario. Los esclerocios
sern sumergidos por 3 min en solucin 0,5% de hipoclorito de sodio,
posteriormente sern lavados tres veces en agua destilada estril y sembrados
aspticamente junto a partes de tejido infectado, debidamente tratado (lavados
durante 1 minuto con hipoclorito de sodio al 1%, posteriormente sumergidos en
etanol al 70% durante 30 segundos, realizando en seguida cortes de tejido enfermo
que sern lavados con agua destilada 3 veces) en una caja Petri con PDA (papa
agar dextrosa), la cual se incubara a 25C por 4 das, posteriormente, se prepararan
las cajas Petri con PDA, que servirn de unidades experimentales, en donde se
depositaran discos de 5 cm de dimetro en el centro de cada caja procedentes del
primer aislamiento de R. solani (para de esta manera lograr eliminar
contaminaciones por parte de otros agentes procedentes del material inicial) al
mismo tiempo a una distancia de 3 cm en los cuatro puntos cardinales se adicionara
la dosis correspondiente de producto comercial con B. subtilis, las cajas Petri con
cada tratamiento se incubaran por 5 das a una temperatura de 25C, cabe resaltar

que existir una caja Petri en donde no se adicionara el controlador biolgico, la

cual servir como testigo.
Es importante aclarar que antes de los procesos en el laboratorio se debern
autoclavar los instrumentos a utilizar para evitar contaminaciones.
El bioensayo se establecer mediante un diseo completamente al azar con seis
tratamientos y tres repeticiones, el efecto de control se determinara mediante el
porcentaje de inhibicin, cuya frmula se presenta a continuacin:

El dimetro de la colonia control hace referencia a cada uno de los tratamientos que
cuentan con la presencia del patgeno y el controlador, mientras que el dimetro de
la colonia tratada, hacer referencia al testigo.
La caja Petri corresponder a la unidad experimental, se evaluaran diferentes dosis
de Rhapsody (producto comercial que contiene a la bacteria controladora Bacillus
subtilis cepa QST 713) de 5cm3; 2,5 cm3; 1,25 cm3 y 7,5 cm3 por tratamiento,
distribuidas en proporciones iguales a 3 cm del patgeno en los cuatro puntos
cardinales.
El diseo estadstico a utilizar constara de 5 tratamientos y 3 repeticiones, el cual
se muestra a continuacin:

T0
T4
T3

T3
T2
T4

TRATAMIENTOS
T0: testigo
T1: dosis de 1,25 cm3
T2: dosis de 2,5 cm3
T3: dosis de 5cm3
T4: dosis de 7,5 cm3

T1
T0
T2

T4
T3
T1

T2
T1
T0

El anlisis estadstico se realizara bajo el modelo de Bloques Completos al Azar,

(BCA) el cual se representa con la siguiente ecuacin.

Yij = +Ti + Bj+ Eij i=1,2,...,t

j=1,2,...,r
= Parmetro, efecto medio
Ti = Parmetro, efecto del tratamiento I B
Bj = Parmetro, efecto del bloque j
Eij = valor aleatorio, error experimental de la u.e. i,j
Yij= Observacin en la unidad experimental
En el caso de que las dosis difieran entre s en el efecto de control sobre el
patgeno, se utilizar la prueba de comparacin de medias de Tukey para lograr
definir el mejor tratamiento.

PRESUPUESTO
No.
ITEM
1
TRANSPORTE
Bacillus subtilis (Producto comercial
2
Rhapsody)
3
PDA (Papa agar dextrosa)
4
OTROS
TOTAL

VALOR
$ 20.000
$ 40.000
$ 500.000
$ 30.000
$ 590.000

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