3.

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO ESPECFICOS

OBJETIVOS

Preparar medios de cultivo slidos y lquidos.

Reconocer algunos ambientes que permiten evidenciar la existencia de
microorganismos.

MARCO TERICO
Los ambientes capaces de albergar vida microbiana reflejan el amplio espectro de la
evolucin de estos organismos. Se han encontrado especies que viven a temperaturas
comprendidas entre el punto de congelacin y el punto de ebullicin del agua, en agua
salada y en agua dulce, en presencia y en ausencia de aire. Los microorganismos se hallan
capacitados para acometer una extensa gama de reacciones metablicas y adaptarse a
muchos ambientes diferentes. Por su poco peso pueden ser transportados por las corrientes
de aire y estar en todas partes, pero las caractersticas del ambiente determinan cules
especies pueden multiplicarse. Existen varias clases de microorganismos: Hongos,
levaduras, bacterias, actinomicetos, protozoos, algas, virus.
El suelo es uno de los ambientes donde un conjunto ingobernable de microorganismos
compiten entre s para obtener lo que todos ellos necesitan: nutrientes y energa. Al mismo
tiempo, los productos de su metabolismo alteran la composicin qumica del suelo donde
habitan. Ms an, los propios microorganismos evolucionan en respuesta a la presin del
ambiente. Numerosas especies bacterianas y algunas veces incluso algas microscpicas o
protozoos, proliferan en las superficies expuestas a la humedad formando una biopelcula
de microorganismos contenidos en una matriz de polisacridos, cuyo espesor puede oscilar
entre algunos micrmetros y pocos milmetros, que se adhiere fuertemente a la base. Las
biopelculas se forman en todas las superficies sumergidas, tanto en agua dulce como de
mar, o bien sobre soportes constantemente hmedos tales como paredes de la caera de

agua, pisos o dientes. El 99% de toda la actividad microbiana en un ecosistema abierto

ocurre sobre las superficies (Carrillo, 2003).
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el desarrollo de
microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe
sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van
a crecer y multiplicarse para dar colonias.
Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una amplia
diversidad de nichos ecolgicos. Entre los requerimientos ms importantes para su
desarrollo estn el carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno. Muchas
bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento especficos en
forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros. Los medios de cultivo se pueden
clasificar segn la origen, consistencia y composicin (Lpez & Torres. 2006).
Los medios de cultivo pueden ser:
Lquidos: Se preparan todos los constituyentes en una disolucin acuosa (agua destilada).
Una vez disueltos, se reparten en matraces o tubos de ensayo que tapamos y esterilizamos
con calor.
Slidos: Hacemos lo mismo que para los medios lquidos, pero, al disolver en agua
destilada, aadimos de 15 a 20 g/l de agar. Lo esterilizamos y lo depositamos en placas
petri cuando est a unos 60. Cuando alcance los 50, ya ser slido.
Semislidos: Su apariencia es de gel. Slo llevan 5 g/l de agar.
En funcin de su composicin, distinguimos dos grupos de medios de cultivo:
Medios sintticos o definidos: Son aquellos que contienen cantidades precisas de
sustancias orgnicas e inorgnicas puras disueltas en agua destilada.
Medios complejos o indefinidos: Contienen sustancias altamente nutritivas, pero de
composicin indefinida. Suelen llevar sustancias como extractos de carne, peptona,
extractos de levadura... La ventaja de este medio de cultivo es que contiene muchos
factores de crecimiento, por lo que podemos cultivar en l gran nmero de
microorganismos. El inconveniente es que no conocemos lo que el microorganismo est
consumiendo.
MATERIALES
Erlenmeyer
Cajas Petri
Tubos de ensayo
Incubadora
Mechero

 Cmara de flujo laminar

Autoclave
PROCEDIMIENTO
Preparacin de medios de cultivos slidos y lquidos:
Preparar los medios de cultivo (PDA, NBPRI, KIMURA) de acuerdo a las
composiciones de la siguiente tabla y seguir las indicaciones que se den para su
preparacin.
Medio de NBPRI. Bacterias solubilizadoras de fosforo
Concentraci
Composicin del medio
n (g/L)
Glucosa
10
Ca3(PO4)2
5
5
NBPRI (medio MgCl2*6H2O
MgSO4*7H2O
0,25
con fosfato
KCl
0,2
insoluble)
(NH4)2SO4
0,1
Agar
13
pH
7
Caldo LB
Cloruro de sodio
5.0
Extracto de levadura 5.0
Peptona de casena
10.0
pH
7.2 0.2
Medio de mantenimiento levaduras
Reactivo
Glucosa
MgSO4.7H2O
KH2PO4
(NH4)2 SO4
Extracto de levadura
Peptona universal

Cantidad (g/L)
60
1
2
3
4
3,6

Medio Kimura Hongos

Medio slido
Medio lquido
(g/L)
(g/L)
20
20

Reactivo
Glucosa
Peptona
universal
Extracto
levadura
KH2PO4
MgSO4.7H2O
Agar

de

1
0.5
15

1
0.5
No

pH
Colorant
e

5.5

5.5

Concentraciones (ppm)
100
200
100
200

Orange II
Azul
ndigo
Medio CHU 13. Microalgas

CHU 13

Solucin Stock
1
2

3
4
5
6

Sln 1.
Sln 2.
Sln 3.
Sln 4.
Sln 5.
Sln.6

1ml/L
1ml/L
1ml/L
2 ml/L
2 ml/L
2 ml/L

Sustancia

Concentracin(g/L)

FeSO4. 7H2O
Na2EDTA
H3BO3
NaMoO4. 2H2O
CoCl2. 6H2O.
Mn Cl2
CuCl2. 2H2O
ZnSO4
K2HPO4
MgSO4. 7H2O
CaCl2.2H2O
KNO3
NaHCO3

7,5*10-3
9,16*10-3
2,859*10-3
0,05 *10-3,
0,081*10-3
1,146*10-3
0,054*10-3
0,1234*10-3
0,04
0,1
0,08
0,2
0,4

1. Preparacin del medio de cultivo solido (Agar):

Disolver todos los ingredientes de la tabla en 1 litro de agua destilada, agitar, ajustar
pH y calentar hasta su completa disolucin.
esterilizar en autoclave a 121C por 15 min y 15psi.
Verter el medio en cajas de petri estriles
En la caja Petri con medio slido, correspondiente a cada estudiante, inocule las
cajas con microorganismos obtenidos y aislados.
Luego incube dejando la caja invertida a 37C de 24 a 48 horas.
2. Preparacin del medio de cultivo liquido:

 Disolver todos los ingredientes de la tabla en 1 litro de agua destilada, agitar y

ajustar pH de acuerdo con el medio de cultivo.
esterilizar en autoclave a 121C por 15 min y 15psi.