Mariana Gonzlez Angela Urn

2016

Objetivo: Detectar y medir el nmero de microorganismos

presentes en superficies contaminadas.
Mtodo de Hisopado
Materiales

Hisopo
Suero fisiolgico 20 mL
TSA 50 mL
PDA 25 mL
Pipetas estriles
3 placas estriles
Vortex
Procedimiento
Humedecer el hisopo con suero fisiolgico y muestrear la superficie
previamente delimitada de 24 cm2 correspondiente a la manija de la
heladera del laboratorio.
Agregar al tubo de 10 mL de Suero fisiolgico y vortexear para desprender
los microorganismos
Sembrar dos placas con 1 mL de sta suspensin y otra con 0,1 mL. Luego
agregar TSA fundido y termostatizado a 45 C, sembrar otra placa con 1 mL
de la suspensin y agregar PDA.
Incubar las placas de TSA durante 48 hs a 35 C y las placas de PDA 5 das a
25 C
Criterio de aceptacin: < 10 ufc aerobios /cm2 y <1 ufc Hongos y levaduras /
cm2
Resultados:
Placa de PDA: Recuento de hongos y levaduras 1 ufc/cm 2
Placa de TSA (0,1mL): Sin crecimiento
Placa de TSA (1mL): Recuento presuntivo de mesfilos aerobios viables 1
ufc/ cm2.
Resultados:
Cumple con criterio de aceptacin para aerobios y para hongos y levaduras.

Mtodo de placa de contacto

Materiales
Placa de contacto (RODAC)
Superficie muestreada: mesada del laboratorio sin limpiar.
Procedimiento
Preparar la placa de contacto agregando el TSA en el centro de la placa.
Una vez solidificado, presionar ligeramente la zona de la placa que contiene
el TSA sobre la superficie lisa.
Retirar e incubar durante 48 hs a 35 C
Resultados:
Recuento de aerobios 14 ufc/ superficie.
TSA

Mtodo de Esponja
Materiales

Esponja estril
10 ml de suero fisiolgico
Guantes estriles
150 mL de TSB
Placa de medio cetrimide
Placa de medio MSA
2 placas de TSA
Ansas
Procedimiento
Humedecer una esponja estril con 10 mL de suero fisiolgico para
hidratarla.
Con guantes estriles muestrear la superficie de un equipo, microscopio
N21 en nuestro caso.
Realizar un enriquecimiento no selectivo mediante el agregado de la
esponja a un frasco con 150 mL de TSB.
Incubar a 35 C por 24 hs.

Realizar un aislamiento selectivo en placa de cetrimide y MSA para

Pseudomona aeruginosa y S. aureus respectivamente.
Para ambos casos, si se observan colonias tpicas realizar un re aislamiento
no selectivo en TSA, incubar a 35 C por 24 hs.
Realizar pruebas bioqumicas hasta llegar al gnero.
Resultados:
Primera etapa: Ausencia de Pseudomonas aeruginosa en microscopio n 21.
Presencia presuntiva de Staphylococcus aureus (colonias
tpicas en MSA)
Segunda etapa: Re aislamiento no selectivo en TSA y pruebas bioqumicas
Gram: cocos violetas.
No es suficiente con solo el Gram afirmar que es Staphylococcus aureus, se
indica entonces que se ha llegado al gnero Staphylococcus.
Mtodo de deteccin de portador sano de Staphylococcus aureus
Materiales
Hisopo
Placa de MSA
Placa de TSA
Procedimiento
Realizar un hisopado de la mucosa de las dos fosas nasales con un hisopo
estril. Descargar la muestra en una parte de la placa de MSA rotando el
hisopo de manera de desprender la mayor cantidad de muestra posible. Con
ansa estril proceder con un aislamiento por estras a partir de la zona de
descarga.
En caso de obtener colonias tpicas re aislar en TSA.
Resultados:
No se obtuvieron colonias tpicas .
Persona no portadora de Staphylococcus aureus.
Mtodo de enjuague
Materiales
Utensilio
300 mL de suero fisiolgico

100 Ml de suero fisiolgico

2 Filtros de 0,45 micras
Equipo de filtracin
Pinza
Alcohol 95%
Procedimiento
Colocar el utensilio a muestrear (Pinza) en un frasco con 300 mL de suero
fisiolgico y agitar.
Tomar 10 mL con pipeta estril del frasco que contiene el utensilio y filtrar.
Enjugar el filtro con 50 mL de suero fisiolgico.
Retirar el filtro y colocarlo en una placa de TSA.
Incubar a 35 C por 24 hs.
Colocar 100 mL del suero que contiene el utensilio en el equipo de filtracin,
filtrar.
Enjuagar con 50 mL de suero fisiolgico.
Retirar el filtro y colocarlo en una placa de TSA.
Incubar a 35 C por 24 hs.
Resultados:
Para 100 mL filtrados: SPREADER
Para 10 mL filtrados: 900 ufc/ pinza

Mtodo de Sedimentacin relacionado a la pesada de materia prima

Materiales
Placa de TSA
Procedimiento
Exponer una placa de TSA en el rea de pesada, mientras dure dicha
actividad.
Incubar 48 hs a 35 C.
Resultados:
Recuento de aerobios 9 ufc

Control de materia prima

Materiales

Materia prima: 10 g Almidn

50 mL TSA
25 mL PDA
3 placas estriles
Pipetas estriles
Procedimiento
En 90 ml de suero fisiolgico agregar 10 g de almidn (materia prima).
Sembrar dos placas con 1 mL de sta suspensin y otra con 0,1 mL. Luego
agregar TSA fundido y termostatizado a 45 C.
Sembrar otra placa con 1 mL de la suspensin y agregar PDA.
Realizar el recuento de microorganismos.
Especificacin: Aerobios < 500 ufc/g, hongos y levaduras < 5 ufc/g.
Resultados:
TSA: 0,1 mL: Recuento estimado de aerobios 1000 ufc/ g. No cumple
especificacin
TSA: 1 mL: Recuento estimado de aerobios 170 ufc / g. Cumple con
especificacin
PDA: 1 mL: Recuento estimado de hongos y levaduras 880 ufc/g. No cumple
con especificacin
Discusin:
Es ilgico que el resultado para la siembra de 0,1 mL sea mayor al resultado
para la siembra de 1 mL, pues a mayor cantidad de volumen, mas
microorganismos debera contener. Puede haber sucedido que al momento
de colocar el medio en la placa se hayan intercambiados las placas
previamente rotuladas.