AMINOCIDOS Y PROTENAS

1. Introduccin
La protena, como su nombre indica, han sido consideradas durante muchos aos como el
componente primario de la materia viviente. Hasta mucho ms tarde no se reconoci la
gran importancia de los cidos nucleicos y han constituido materia de discusin a lo largo
de las ltimas dcadas. El principio bsico de la estructura de las protenas es bastante
simple. Consisten en largas cadenas de aminocidos enlazados unos a otro mediante
enlace pptidos. No obstante aparecen complicaciones:1) procedentes de la presencia de
alrededor de veinte tipos diferentes de radicales de aminocidos en las cadenas pptidas;
2) procedentes de la larga longitud de estas cadenas.
En este informe se discuten algunas reacciones de coloracin: reaccin con ninhidrina,
reaccin xantoproteica, Prueba de Milln, Prueba para aminocidos azufrados y la
reaccin de Biuret. As tambin se realiza la desnaturalizacin de protenas. Y finalmente
la precipitacin de la albumina con iones.
2. Objetivo

Identificar a qu tipo de aminocido o protena pertenece la muestra problema.

Realizar las reacciones de coloracin: (reaccin ninhidrina, xantoproteica, de Milln, para
aminocidos azufrados y de Biuret).
Realizar la desnaturalizacin de la albumina.
Ensayar la precipitacin de protenas mediante cationes e iones.

3. Metodologa
A. Reaccin con Ninhidrina. (Presencia de aminocidos libres)
Materiales/Solventes:

Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
Muestra problema
Solucin de ninhidrina

Procedimiento:
I.
II.
III.

Para realizar el ensayo con ninhidrina, primero a 6 tubos de ensayo agregar 1 mL de: triptfano,
glicina, cistena, albumina, tirosina y MP.
Agregar a cada uno de los tubos 3 gotas de la solucin de ninhidrina al 0,3%.
Calentar unos 3 minutos en b.m. y observar. Se considera positiva la reaccin positiva si la solucin
toma un color azul purpura.

Muestras a ensayar
Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
MP

Color antes de la reaccin

Translcido
Translcido
Translcido
Blanco lechoso
Translcido
Translcido

Cambio de coloracin
Violeta
Azul purpura
Translcido
Purpura suave
Translcido
Blanco plomizo

MINICONCLUSION: la cistena y la tirosina no presenta grupos amino libres. La

albumina si presenta aminocidos libres.

B. Reaccin Xantoproteica (presencia de aminocidos aromticos)

Materiales/Solventes:

Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
Muestra problema
Solucin de cido ntrico concentrado.

Procedimiento:
I. Colocar en 6 tubos de prueba 1 mL de la muestra a ensayar.
II. Aadir a los tubos de ensayo 1 mL de cido ntrico concentrado.
III. Llevar a bao mara durante 3 minutos.
IV. Agregar 1 mL de hidrxido de sodio al 20% a cada uno de los tubos.
Observar y anotar.

Muestras a ensayar
Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
MP

Color antes de calentar

Amarillo
Translcido
Translcido
Blanco lechoso
Translcido
Blanco lechoso

Cambio de coloracin
amarillo naranja
Translcido
Translcido
Amarillo
Amarillo
Amarillo suave

MINICONCLUSION: la reaccin xantoproteica nos indica si el aminocido presenta anillos

aromticos y si la reaccin es positiva presenta una coloracin amarilla. Entonces el
triptfano y la tirosina, presentan un anillo aromtico en su estructura. La albumina y la
MP presenta aminocidos aromticos.
C. Prueba de Milln (Presencia de restos fenlicos)
Materiales/Solventes:

Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
Muestra problema
Reactivo de Milln
Procedimiento:
I.

En cada uno de seis tubos de ensayo agregar 1 mL de:

triptfano, glicina, cistena, albumina, tirosina y MP.
II. A todos los tubos agregar 3 gotas del reactivo de Milln. III.
Calentar por unos minutos y observar.

Muestras a ensayar
Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
MP

Color antes de calentar

Amarillo
Translucido
Blanquecino dos fases
Blanquecino
Translcido
Blanquecino

Cambio de coloracin
Amarillo
Translucido
Blanqueci
Un rojo pero muy suave
Rojo
Un rosado suave

MINICONCLUSION: esta prueba nos indica si presenta restos fenlicos o no,

identificamos que el nico aminocido que presenta un fenol en su estructura es la
Tirosina. Adems identificamos que la albumina y la MP presenta tirosina en su secuencia
de aminocidos.
D. Prueba para aminocidos azufrados.
Materiales/Solventes:

I.
II.
III.

Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
Muestra problema
Solucin de NaOH al 40%
Acetato de plomo al 10%
Procedimiento:
En cada uno de seis tubos de ensayo agregar 1 mL de: triptfano, glicina, cistena,
albumina, tirosina y MP.
Adicionar a todos los tubos 8 gotas de NaOH al 40% y llevar a bao mara.
Aadir 5 gotas de acetato de plomo al 10%. Observar si existe algn cambio de color.

Muestras a ensayar
Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
MP

Color antes de la reaccin

Translcido
Translcido
Translcido
Blanco lechoso
Translcido
Translcido

Cambio de coloracin
Translucido
Translucido
Marrn suave
Marrn intenso
Translucido
Marrn dbil

MINICONCLUSION: La cistena, es un aminocido azufrado; la albumina y la MP

presenta aminocidos azufrados.
E. Reaccin de Biuret (presencia de enlaces peptdicos)
Materiales/Solventes:

I.
II.
III.

Albumina
Glicina
Muestra problema
Solucin de NaOH
Sulfato de cobre CuSO4

Procedimiento:
En cada uno de 3 tubos de ensayo agregar 1 mL de: glicina, albumina, y MP.
Aadir 20 gotas de NaOH al 10%.
Luego adicionar 2 gotas de CuSO4. Observar el color que se forma.

Muestras a ensayar
Glicina
Albumina
MP

Color antes de la reaccin

Translcido
Blanco lechoso
Translcido

Cambio de coloracin
Celeste
Violeta
Violeta

MINICONCLUSION: las protenas y pptidos que contienen por lo menos 3 unidades de

aminocidos dan coloracin violeta. La albumina y la MP dan una coloracin violeta, eso
evidencia que presentan ms de 3 aminocidos unidos con enlaces peptdicos.
F. Desnaturalizacin de la albumina:
Materiales/Solventes:

Albumina
Etanol
cido clorhdrico HCl
cido ntrico HNO3
Hidrxido de sodio NaOH al 40%

Procedimiento:

VI.
VII.

I.
En cada uno de 5 tubos de ensayo agregar 1 mL de
albumina. II.
El primer tubo se lleva a bao mara.
III. Al segundo tubo se adiciona 4 mL de alcohol etlico.
IV. Al tercer tubo se adiciona unas gotas de cido clorhdrico concentrado.
V. Al cuarto tubo se agrega unas gotas de cido ntrico.
Al quinto tubo se adiciona 4 mL de hidrxido de sodio al 40%.
Anotar en que tubos se forma coagulacin.

Albumina
con
Reaccin

Alcohol etlico

HCl

HNO3

NaOH al 40%

MINICONCLUSION: la desnaturalizacin de la albumina se da con agentes

desnaturalizantes como el calor, HCl, HNO3 y NaOH.
G. Precipitacin de protenas mediante cationes.
Materiales/Solventes:

Agua
Albumina
cido clorhdrico
Hidrxido de sodio
Solucin de CuSO4
Procedimiento:

a.
b.
c.
d.
e.
f.
II.

III.
IV.

I.
Agregar a 6 tubos las siguientes soluciones:
3 mL de H2O
3 mL de albumina
3 mL de H2O + 3 gotas de HCl
3 mL de albumina + 3 gotas de HCl
3 mL de H2O + 3 gotas de NaOH
3 mL de albumina + 3 gotas de NaOH
Importante: observar que se formaron 3 parejas de tubos. Los ensayos sin albumina son
necesarios para observar si el efecto observado en los tubos de prueba con albumina se
debe a la precipitacin de la protena o es el hidrxido metlico el que est precipitando.
Adicionar 20 gotas de sulfato de cobre (CuCO4) al 10%.
Hacer las comparaciones por parejas. Anotar los tubos donde se form precipitados.

Tubo de prueba
a

Formacin de p.p.
No

Reaccin
No hubo formacin de p.p.
pero si cambio de color.

No

No

No

e
f

Si
Si

Solo se evidencia un cambio

de color (celeste).
No hay formacin de p.p.
pero si hay cambio de color.
Cambia de color (azul
caribeo)
Hay precipitacin del agua
Se precipita la protena y
hay cambio de color.

MINICONCLUSIN: Los tubos a, c y me son aquellos tubos de comparacin y no

presentan albumina. El tuvo a esta en medio neutro, el tubo c en medio cido y el tubo f
en medio alcalino. De lo experimentado en el tubo e y f hay formacin de precipitado.
Entonces la precipitacin de albumina mediante CuSO4 se da solo en medio bsico.

H. Precipitacin de protenas mediante aniones.

Materiales/Solventes:

Albumina
cido clorhdrico
Hidrxido de sodio
Solucin de ferrocianuro
Procedimiento:
I.

Agregar a 3 tubos las siguientes soluciones:

a. 3 mL de albumina
b. 3 mL de albumina + 3 gotas de HCl
c. 3 mL de albumina + 3 gotas de NaOH
II. A todos los tubos adicionar 2 gotas de ferricianuro.
III. Agitar y observar el tubo que presenta precipitacin.

Tubo de prueba
a

Formacin de p.p.
Si

Si

No

Reaccin
Cambio a un color amarillo
dbil.
Presenta una coloracin
celeste verdoso suave
Color amarillo y dos fases.

MINICONCLUSIN: Los tubos a y b forman precipitado cuando reacciona el ferricianuro

con la albumina en medio neutro y en medio acido respectivamente. Cosa que no ocurre
en medio acido (albumina con HCl).

4. Conclusiones

la reaccin xantoproteica nos indica si el aminocido presenta anillos aromticos y si la reaccin es

positiva presenta una coloracin amarilla. Entonces el triptfano y la tirosina, presentan un anillo
aromtico en su estructura. La albumina y la MP presenta aminocidos aromticos.
La prueba de Milln nos indica si presenta restos fenlicos o no, identificamos que el nico
aminocido que presenta un fenol en su estructura es la Tirosina. Adems identificamos que la
albumina y la MP presentan tirosina en su secuencia de aminocidos.
La muestra problema (5-P) es una albumina. La cistena, es un aminocido azufrado; la albumina y
la MP presenta aminocidos azufrados.
las protenas y pptidos que contienen por lo menos 3 unidades de aminocidos dan coloracin
violeta. La albumina y la MP dan una coloracin violeta, eso evidencia que presentan ms de 3
aminocidos unidos con enlaces peptdicos.
la desnaturalizacin de la albumina se da con agentes desnaturalizantes como el calor, HCl, HNO 3
y NaOH.

5. Bibliografa

Keese R., Mller R.K., Toube T.P. Mtodos de laboratorio para Qumica Orgnica. 1
edicin. Editorial Limusa. Mxico DF. 1990
Durst H.D. Qumica Orgnica Experimental. Editorial Revert. Espaa 1985.
Morrison Robert. Qumica Orgnica. 5 edicin. Addison Wesley Iberoamericana. Estados
Unidos. 1990.
Rodney Boyer. Conceptos en Bioqumica. International Thomson Editores. Mxico. 2000.
Carey Francis. Qumica Orgnica. 3 edicin. editorial Mc Graw Hill. Espaa. 1999.
Holum John. Fundamentos de Qumica General, Orgnica y Bioqumica para ciencias de
la salud. Editorial Limusa. Mxico. 1999.
Solomons Graham. Qumica Orgnica. 2 edicin. Editorial Limusa Wiley. Mxico. 2000.
Haurowitz Felix. Qumica y funciones de las protenas. Ediciones Omega. Barcelona
Espaa. 1969.

CUESTIONARIO
1. Cul es el grupo responsable de la reaccin positiva con la reaccin
xantoproteica? La seroalbumina dar positiva la reaccin.
El grupo responsable es el anillo aromtico que presenta el aminocido. Caracterstico
del triptfano que se precipita a partir de sus disoluciones en cido sulfrico al aadir
sulfato mercrico. La fenilalanina, al igual que otros compuestos tambin presenta un
anillo aromtico. La tirosina presenta una intensa absorcin y da lugar a una serie de
reacciones coloreadas.

Fenilalanina,
Phe, F

Tirosina, Tyr, Y

Triptfano, Trp, W

La secuencia de aminocidos de la seroalbumina contiene un total de 17 puentes di

sulfuro, un tiol libre (Cys 34) y un nico triptfano (Trp 214). Debido a la presencia del
triptfano la prueba xantoproteica con la seroalbumina dar positiva.

2. La albumina de hubo contiene aminocidos azufrados?

La albumina presenta 609 aminocidos en su secuencia con slo 585 aminocidos en
el producto final observado en la sangre. Debido a la presencia de los grupos SH de la

cistena y la metionina; la albumina da positivo en la Prueba para aminocidos

azufrados.

3. Cul o cules de los siguientes aminocidos dan reaccin positiva con el reactivo
de Milln?
La reaccin de Milln para determinar la presencia de restos fenlicos
( tirosina). Para ello, se procede a la mezcla de los reactivo de Milln a la sustancia, y
lo lleva a una cierta temperatura (alrededor de 50 C). En este momento un color rojo
ladrillo aparece si la presencia de tirosina.
Entonces de los siguientes aminocidos: triptfano, tirosina, histidina, fenilalanina,
metionina y glicina. El nico que dar positivo con la prueba de Milln es la tirosina.

4. con que prueba reconocera usted los enlaces peptdicos de una protena?
Con la prueba de Biuret: El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado
formado por la condensacin de dos molculas de rea con eliminacin de amonaco.
Esta reaccin est dada por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos
grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a travs de un solo tomo de
carbono o nitrgeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solucin acuosa
alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin
de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. Esta ltima
reaccin provoca un cambio de coloracin: violeta prpura o violeta rosado. Debe
Sealarse que el color depende de la naturaleza de las protenas; protenas y pptidos
dan un color rosado; la gelatina da un color azul.

5. Si se tiene una solucin neutra de protena y se le aade algunos mL de soda al

10%. Indicar si se precipita la protena al aadir unos mL de:
La precipitacin con iones se debe a que algunos cationes de metales pesados y
algunos aniones causan la precipitacin de la protena. Los cationes reaccionan con
las protenas cuando se encuentran en su forma aninica o bsica dando sales con los
iones carboxilato de protena. Los aniones formaran sales con las protenas cuando
estas se encuentren en su forma catinica o acida.
Ahora tenemos una protena en un medio neutro y se le aade soda (NaOH). Entonces
el medio de la protena cambia de neutro a bsico.
a. Ferricianuro de potasio: (K4[Fe(CN)6] 3 H2O) No forma precipitado, porque el
ferricianuro para reaccionar necesita de una protena en su forma catinica o acida.
b. Sulfato de cobre (II): (CuSO4) Si forma hay precipitacin de la protena. Por el sulfato
reacciona con la protena en su forma aninica o bsica.

6. Explique a que se debe la desnaturalizacin de las protenas.

Una protena se desnaturaliza cuando pierde si estructura secundaria, terciaria o

cuaternaria. La desnaturalizacin es la desorganizacin de la forma molecular
completa de una protena. Esta puede presentarse como un desdoblamiento o
desenrolla miento de las hlices o como separacin de subunidades. La efectividad de
un agente desnaturalizante depende del tipo de protena.
La primera teora sobre desnaturalizacin razonable fue enunciada por Wu. En esta
teora se supuso que la desnaturalizacin consiste en una reorganizacin de las
cadenas pptidas en la molcula de la protena debido a la rotura de ciertos enlaces
dbiles, mediante agentes de desnaturalizacin (calor, detergentes, disolventes
orgnicos, cidos y bases fuertes, radiacin UV, solucin de urea, radiacin por
microondas, etc.); los enlaces dbiles mencionados mantendran juntas las cadenas.
Aplicando los conceptos de Wu se puede decir con seguridad que la desnaturalizacin
consiste en una alteracin de la conformacin de cadenas.

7. Por qu el cido ntrico produce una coloracin amarilla cuando se pone en

contacto con un pedazo de cabello o piel?
La queratina es una protena con estructura helicoidal, muy rica en azufre, que
constituye el componente principal de las capas ms externas de la epidermis de los
vertebrados y se encuentra en el cabello. El colgeno es una molcula proteica que
forma fibras, las fibras colgenos. Estas se encuentran en todos los animales
pluricelulares. Son secretadas por las clulas del tejido conjuntivo como los
fibroblastos, as como por otros tipos celulares. Es el componente ms abundante de la
piel y de los huesos. El cido ntrico produce una coloracin amarilla debido a la
presencia de aminocidos aromticos de la queratina y el colgeno.

8. Cmo separara usted una mezcla de aminocidos?

Mediante la electroforesis: Las protenas son molculas cuya carga neta depende del
contenido de una serie de aminocidos (fundamentalmente cido glutamico, cido asprtico,
lisina, arginina e histidina) y del grado de ionizacin de estos al pH considerado.
La separacin depende de la densidad de carga de las molculas y, as, cuanto mayor sea la
densidad, mayor ser la velocidad de migracin en un campo elctrico hacia el polo que
determine su carga neta.
La primera etapa del proceso es la aplicacin de la muestra. En papel o acetato de celulosa, esto
se puede efectuar de forma puntual (permite el anlisis de varias muestras simultneamente en
pequeas cantidades) o longitudinalmente (permite el estudio de una sola muestra pero en
mayor cantidad). La muestra se aplica disuelta en el tampn de electroforesis, del que est
impregnado el soporte y que se encuentra en los reservorios de la cubeta, y se deposita en una
pequea zona, lo ms estrecha posible, en el centro o en un extremo del soporte (si se conoce
cul va a ser la direccin de desplazamiento de la misma) y de forma perpendicular a la
direccin del campo elctrico. Conviene evitar la proximidad de los bordes del papel, ya que all
el campo elctrico no es homogneo y se distorsionan las bandas segn avanzan.
En los geles de agarosa, se perfora el gel con ayuda de un troquel o una pipeta de dimetro
adecuado y se elimina esa porcin por succin. La perforacin puede ser cilndrica o rectangular,
dependiendo del nmero y cantidad de muestra a analizar y la muestra se deposita en el orificio
practicado sin que llegue a rebosar. En este caso, el tampn esta embebido en el soporte
(agarosa).
La electroforesis termina cuando se haya producido la mxima separacin de los componentes
de la muestra, pero sin sobrepasar los lmites del soporte.

9. Aplicacin de la reaccin de un aminocido con la ninhidrina en

cromatografa. Haga la ecuacin.
Todos los aminocidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y forman dixido
de carbono, amonaco y un aldehdo que contiene un tomo de
Carbono menos que el compuesto original. Esta reaccin da lugar a la formacin de un
producto color azul o prpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar
el aminocido). En el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino
libre, sino un grupo amino, la
Coloracin final es amarilla. El amonaco, la mayora de los polipptidos y las protenas
pueden desarrollar coloracin en esta reaccin, pero a diferencia de los aminocidos,
no liberan CO2. Recuerde que la coloracin azulada o violeta ser proporcional a la
concentracin del aminocido.
La reaccin entre un aminocido y la ninhidrina es la siguiente: