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INTRODUCCION AL LABORATORIO
MICROSCOPIA
Objetivos
Conocer las partes, funciones, cuidados, manejo y utilidad del
microscopio ptico compuesto.
Realizacin de preparaciones microscpicas sencillas en fresco.
Introduccin
La microscopa es la ciencia basada en el uso de microscopios para la
observacin de objetos que no pueden ser visualizados a simple vista. El
microscopio (de micro-, pequeo, y scopio, observar) es el instrumento
ms frecuentemente utilizado y el ms til en el Laboratorio de
Microbiologa para el estudio de la morfologa y estructura de los
microorganismos, as como su reaccin a diferentes colorantes, lo cual
junto con otros criterios, permitir su identificacin, por lo tanto, es
importante conocer su adecuado manejo.
Entre los instrumentos pticos conocidos con el nombre de microscopio
se incluyen los llamados microscopios simples o lupas, compuestos por
una sola lente, o un solo sistema de lentes convergentes; y los
microscopios compuestos, cuya parte ptica consta de dos lentes, o dos
sistemas de lentes convergentes: ocular y objetivo.
El microscopio simple da una imagen aumentada, derecha y virtual.
El microscopio compuesto da una imagen aumentada, invertida y
virtual.
Sistema Mecnico:
Recibe tambin el nombre de estativo o montura del microscopio.
Base: Soporte sobre el cual se apoya el microscopio.
Brazo: Es un vstago articulado con el base y el brazo.
Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular
y binocular.
Mecanismo de movimiento:
Tornillo de Enfoque (Macromtrico): Acerca o aleja rpidamente el
objetivo a la preparacin para hacer un enfoque aproximado.
Tornillo Micromtrico: Permite enfocar con precisin, moviendo muy
lentamente el objetivo.
Revlver o Portaobjetivos: es una pieza giratoria provista de orificios
en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos
pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, lo que se
nota por el ruido de un pin que lo fija. Es una pieza giratoria provista
de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los
objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo,
lo que se nota por el ruido de un pin que lo fija.
Platina: Es la superficie sobre la cual se colocan las preparaciones.
Tiene un orificio en su centro para permitir el paso de la luz. En algunos
microscopios est dotada de un sistema con dos tornillos que permiten
el desplazamiento preciso de la preparacin.
Pinzas: son dos piezas metlicas que sirven para sujetar el objeto. Se
encuentran en la platina.
Tornillo del Condensador Permite subir o bajar el condensador
respecto a la platina para mejorar la iluminacin.
Parte ptica:
I1
Amplificacin:
Es la proporcin entre el tamao de la imagen observada al microscopio
y el tamao real del objeto. El aumento total puede calcularse como el
producto del aumento del ocular por el del objetivo.
Cada lente objetivo lleva inscripto su aumento: 5X, 10X, 40X o 100X.
(el signo X significa aumento).
La imagen aumentada producida por el objetivo, es tomada por el
ocular, y magnificada nuevamente. La imagen definitiva (que es
invertida, respecto a la original) resulta del producto entre el
aumento del objetivo por el aumento del ocular.
Por ejemplo:
Ocular: 10x
objetivo: 40x
Aumento Total: 10x40= 400x
Microscopios Electrnicos:
Parte Prctica
1. Observacin de hongos
Es una observacin cotidiana el hecho que si se deja un trozo de pan,
frutas, hortalizas etc. en un lugar hmedo, con el paso del tiempo es
probable que crezca sobre ellos mohos. Los principales mtodos
aplicados para la observacin microscpica de los cultivos son: la
observacin en fresco con una solucin adecuada, y las preparaciones
en cinta adhesiva.
Materiales:
Pan, frutas, verduras con moho
aguja de diseccin y asa de gancho
portaobjetos y cubreobjetos
azul de metileno
Cinta adhesiva transparente
Microscopio
2. Observacin de levaduras
Materiales:
Levadura fresca de panadera
Tubo de ensayo
Porta y cubreobjetos
3. Observacin de epidermis de cebolla
Materiales:
Cebolla.
azul de metileno
Pinzas, tijera, portas y cubreobjetos, cuentagotas.
Mtodo:
Interesa como material, la epidermis interna de una escama de bulbo de
cebolla. Para obtenerla, se corta una cebolla en dos mitades. Se separa
manualmente en cascos, sacando entre cada dos cascos una capa fina y
translcida, que es, precisamente, la epidermis interna, y se lleva a una
caja de Petri para que se desenrolle. Cortar dos trozos de esta
epidermis. Un trozo se coloca entre porta y cubre con una gota de agua,
cuidando que quede bien extendido y sin burbujas de aire. El otro trozo
se sumerge en azul de metileno durante 5 minutos y luego se enjuaga
con agua destilada hasta que no desprenda mas colorante y
posteriormente se coloca entre porta y cubre para su observacin.
Observacin:
Las clulas de la epidermis de la cebolla, poligonal y grande, se hallan
ntimamente adheridas unas con otras. La pared se destaca muy clara
teida por el colorante. En las clulas vivas se ven los ncleos aplanados
(con 2 o ms nucleolos) adosados a la pared. A medida que las clulas
van degenerando, el ncleo se redondea y tiende a situarse en el centro.
El citoplasma tiene un aspecto bastante claro, en l se distinguen
algunas vacuolas grandes, dbilmente coloreadas. En algunas ocasiones
se observa que la preparacin tiene a manera de mosaico, otros estratos
de clulas; stas proceden de las capas ms internas de las hojas que
fcilmente han podido ser arrancadas al desprender la epidermis. Para la
observacin es ms adecuado utilizar las zonas constituidas por un nico
estrato epidrmico.
Resultados:
Dibujar un trozo de epidermis de cebolla a pocos aumentos.
Dibujar una clula a gran aumento, sealando pared celular,
vacuolas y ncleo.
4. Observaciones en fresco de microorganismos
Permite observar en los microorganismos la movilidad, el color, el
tamao, la forma y la agrupacin en su forma natural viva y sin
alteraciones. Sin embargo, la observacin es difcil y se perdern varios
detalles debido al escaso contraste, por la poca diferencia entre el ndice
de refraccin del medio y de los microorganismos. Este problema se
resuelve utilizando el microscopio de campo oscuro y el de contraste de
fases.
Una forma de preparacin en fresco es la preparacin en
portaobjetos normal con cubreobjetos.
Otra forma es la preparacin en gota suspendida. Se utiliza un
portaobjeto excavado y un cubreobjetos.
Materiales:
Muestra
portas y cubreobjetos
asa de ojal