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INTRODUCCION

Aunque muchos esfuerzos estan siendo invertidos actualmente en el desarrollo de dietas


formuladas particuladas para las larvas de camarn, el xito de la larvicultura de hoy
todava depende principalmente de la disponibilidad de organismos alimentarios vivos.
El alimento vivo ms importante hasta hoy es la Artemia, en particular los nauplios recin
eclosionados fuera de los quistes. Los quistes de Artemia comercialmente disponibles se
cosechan de grandes ecosistemas naturales y los factores que pueden interferir en l a
produccin estn fuera del control humano. Consecuente, la disponibilidad de quistes de
Artemia no es predecible y los precios pueden fluctuar dentro de amplios mrgenes.
Es por lo tanto de primordial importancia que tal valioso recurso natural sea utilizado en la
manera ms eficiente. Primeramente, al momento de adquirir, el acuacultor deber
seleccionar el mejor producto entre las alternativas ofrecidas. Luego, cuando los nauplios son
producidos, las condiciones ptimas de eclosin deben ser observadas con respecto a
mximizar el rendimiento. Finalmente, la Artemia producida debe ser manipulada de tal
manera que sus propiedades nutritivas se conserven tan completas como sea posible hasta el
momento que stas sean alimentadas a las larvas.
El conocimiento de que el abastecimiento de quistes de Artemia puede ser limitado h a
intensificado el estudio de nuevas fuentes de alimento para
larvas de camarn.
Alternativas vlidas pueden ser encontradas entre los rotferos planctnicos (e. g.
Brachionus plicatilis, usualmente usado en la larvicultura de peces marinos), los coppodos
y tambin dentro de la misma Artemia en su estadio adulto (llamado biomasa de Artemia).
Sin embargo, en la bsqueda de un nuevo alimento vivo larvario no slo se dirige a disminuir
la dependencia de la industria en un artculo alimenticio, sino igualmente con el deseo de
diversificar el paquete nutricional que se ofrece actualmente a las larvas.
La eficiencia nutricional del alimento vivo es regida por condiciones naturales ( e.g.
Artemia) o zoo-tcnicas (e.g rotferos cultivados) y es una caracterstica determinante para
cada lote. En aos recientes varias tcnicas han sido desarrolladas y publicadas tanto como
para obtener un ptimo beneficio de las propiedades nutritivas de organismos alimentarios
vivos as como para modificarlas.
El propsito de este manual es de proveer informacin til e instrucciones prcticas para la
produccin y manipulacin de organismos zooplanctnicos como potencial alimento larvario;
as como tambin para documentar sobre su uso para propsitos especficos. El contenido de
ste es un breve resumen del conocimiento disponible que se ha generado a travs de los aos
por laboratorios de investigacin y por la misma industria de la larvicultura. Parte de la
informacin aqu presentada se obtuvo durante un proyecto de cooperacin tcnica. entre los
gobiernos de Blgica y Ecuador.
Se espera que este documento sea de utilidad y que la presente informacin pueda contribuir
a la optimizacin del uso de una gama creciente de organismos alimenticios vivos en el
cultivo de larvas de camarn. Cualquier observacin, comentario o informacin
suplementaria que contribuya con este objetivo ser muy apreciada.

Manual para la produccin y Uso de organismos Zooplanctnicos

BIOLOGIA Y ECOLOGIA DE LA ARTEMIA


CLASIFICACION SISTEMATICA
La clasificacin sistemtica de la Artemia hasta el nivel de gnero es dado por Flssner
(1972):
Clase
: Crustacea
Subclase
: Branchiopoda
Super Orden
: Anostraca
Familia
: Artemiidae
Gnero
: Artemia
Originalmente la Artemia salina ha sido descrita como la nica especie dentro de el gnero
Artemia. Observaciones de un nmero creciente de nuevas poblaciones descubiertas, dieron
pronto origen a un sin nmero de nombres especficos. Desde el principio del siglo 20
investigaciones citolgicas y genticas complementaron los mtodos tradicionales de
clasificacin basados en aspectos morfolgicos.
Como resultado de una serie de
experimentaciones de cruce de razas (XXXX) el aislamiento reproductivo entre ciertas
poblaciones podra ser demostrado y suplementado con datos analticos sobre iso-enzimas
(Bowen y Stirling, 1978) y hemoglobinas (Bowen et al, 1978) de las cepas bisexuales del
gnero Artemia han sido divididas en 6 especies hermanas:
-Artemia salina
-Artemia tunisiana
-Artemia franciscana
-Artemia persimilis
-Artemia urmiana
-Artemia monica

Lymington, Inglaterra (actualmente extincta)


Europa
Amrica (Norte, Central y Sur)
Argentina
Irn
Lago Mono, California-EUA

Varias poblaciones partenogenticas se conocen en Europa y Asia. A causa de importantes


diferencias entre estas poblaciones (e.g. el nmero de cromosomas) es difcil justificar su
articulacin dentro de la clasificacin taxonmica como una sptima especie hermana
" Artemia parthenogenica". Por lo tanto se ha sugerido que, a menos que las especies
hermanas exactas puedan ser definidas en cepa bisexual y hasta que la especificidad den el
camarn de salmuera sea ms claramente entendida (especialmente en las cepas
partengeneticas), el camarn de salmuera debera ser denominado por su nombre de gnero,
Artemia (XXX).
DISTRIBUCION
Hasta hoy se conoce que la Artemia se encuentra en casi 400 sitios esparcidos sobre los cinco
continentes. Una caracterstica comn de los biotopos de Artemia es el alto contenido de sal.
La mayora de los biotopos han sido colonizados por medio de la dispersin natural de
vectores tal como e.g. emigracin de los pjaros. Los ejemplos clsicos son las poblaciones de
las reas Caribea y Ceylon. Pero tambin el hombre ha contribuido a la dispersin de la
Artemia introduciendo el animal en regiones fuera de su rea de distribucin natural:
-primeramente, el camarn de salmuera fue trasplantado a nuevas salinas construidas (e.g.
Australia) debido a que se pens que contribuira a la capacidad productora de sal de la
planta.
-segundo, como la aquacultura se desarroll en una verdadera bio-industria y l a
disponibilidad de quistes de Artemia lleg a ser ms y ms limitada, nuevos sitios naturales
con el potencial comercial fueron explorados y algunos de ellos eventualmente fueron
inoculados ( e.g. las llanuras de sal del Noreste de Brasil).
-en tercer lugar, en un intento de mejorar el control de la produccin de Artemia fueron
creados e inoculados biotopos hechos por el hombre en reas adecuadas (e.g. estanques de
produccin de Artemia en el Sureste de Asia).

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En poblaciones permanentes la Artemia est presente durante todo el ao o sobrevive a


condiciones ambientales o climatolgicas adversas en un estado de proteccin bajo la forma
de quistes o huevos latentes (se explica mas adelante). Poblaciones no permanentes de
Artemia no pueden vencer condiciones ambientales o climatolgicas adversas y el hombre
tiene la necesidad de re-introducir nuevas poblaciones sobre una base anual.
La Artemia es un filtrador no-selectivo y se alimenta filtrando materia particulada de
origen biolgico (e.g. detritus orgnico de aguas de manglares) as como tambin de
organismos vivos de tamao apropiado (bacterias y algas microscpicas). De hecho debido a
la ausencia de predadores y competidores por alimento, la Artemia frecuentemente se
desarrolla en grandes monocultivos, y las densidades son principalmente controladas por la
limitacin de alimento. La reproduccin ovovivpara (nauplios como descendencia) ocurre
mayormente en niveles de baja salinidad, considerando que los quistes (reproduccin
ovpara) son producidos en salinidades ms all de 150 ppt.
CICLO DE VIDA Y DESARROLLO
El camarn de salmuera posee la propiedad de reproducirse de dos maneras diferentes.
Dependiendo de las condiciones ambientales ya sea
larvas de libre natacin
(ovoviviparidad) o quistes o huevos latentes (oviparidad) son liberados. En el ltimo caso
el desarrollo embrionario es reversiblemente interrumpido en el tero: en la etapa de
gstrula el embrin es rodeado por una cscara protectora quitinosa y una reserva de
carbohidrato es depositada. Por medio de este estado ametablico (diapausa), la Artemia
es capaz de sobrevivir condiciones ambientales extremas. Con la interrupcin de la condicin
de diapausa y con la trasnferencia de los quistes a condiciones ptimas de incubacin, la
gstrula reanuda su desarrollo hasta que sta emerja.
La primera etapa larval de l a Artemia (liberada como tal por ovoviviparidad
reproduciendo hembras o incubando fuera de los quistes), tambin llamada Instar I, tiene un
color castao-anaranjado (reserva acumulada de vitelo) y cuyas medidas promedian 0,5 mm
de longitud. Los aspectos tpicos de esta etapa son los 3 pares de extremidades en la regin
frontal, cada una de ellas con funciones especficas: las primeras antenas (o antenulas
teniendo una funcin sensorial), las segundas antenas (con funcin locomotora y filtradora) y
las mandbulas (con funcin de captura de alimento). El lado ventral de la larva est
cubierta por un gran labro que tambin est involucrado en el proceso de captacin
alimentaria. Un ocelo impar rojo se encuentra ubicado en la regin frontal entre las primeras
antenas.
La larva Instar I es incapaz de tomar el alimento, ya que su sistema digestivo no es an
funcional (la boca y el ano estn todava cerrados). Despus de alrededor de 12 horas el
animal muda en la segunda etapa larval (Instar II). A partir de esta etapa el sistema
digestivo es funcional y pequeas partculas de tamao que oscilan entre 1-40 m pueden ser
ingeridas (e.g. clulas de algas, bacterias, detrito).
La larva de Artemia crece a la etapa adulta mediante una serie de 15 mudas. Durante este
desarrollo larval las extremidades en la regin frontal continuamente se diferencian
resultando en, la reduccin gradual de las mandbulas larvales, finalmente reemplazadas
por las mandbulas del adulto y por un dimorfismo sexual de las segundas antenas. En los
machos stas se desarrollan en agarraderas musculares en forma de gancho que
desempearn en el futuro un rol pre-copulatorio. Las antenas de las hembras se degeneran en
pequeos apndices sensoriales.
En la Artemia adulta el aparato filtrador alimentario de la larva es reemplazado por las
maxilas, las maxilulas y 11 pares de toracpodos que se desarrollan en la regin del tronco.
Las ltimas estructuras son multi-funcionales y juegan un rol no solamente en la captacin
alimentaria pero tambin en la locomocin y respiracin.

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Dependiendo de la cepa y de las condiciones ambientales, la etapa de actividad


reproductiva se alcanza en un perodo de crecimiento de 2-3 semanas. La Artemia adulta
posee entonces una longitud 10-20 mm (los animales ms grandes son encontrados dentro de
las poblaciones partenogenticas).
Los machos tienen un par de penes en la parte posterior de la regin del tronco mientras que
las hembras pueden ser fcilmente reconocidas por el distintivo saco embrionario o tero que
se ubica inmediatamente detrs el undcimo par de toracpodos. El par de ovarios se sitan
detrs los toracpodos sobre ambos lados del tracto digestivo lineal.
La pre-copulacin en la Artemia bisexual madura es iniciada por el macho con el apego a las
hembras con sus agarraderas musculares. En esta "posicin de equitacin" los animales
pueden nadar conjuntamente por largos perodos de tiempo mientras ellos mueven sus
toracpodos en un golpe sincrnico. La real copulacin con la consecutiva fertilizacin
consiste de un rpido reflejo del macho en doblarse hacia adelante e introduciendo un pene en
la apertura del tero. En la Artemia partenogentica (poblaciones hembras) la fertilizacin
no tiene lugar y el desarrollo embrionario comienza tan pronto como los huevos alcanzan el
tero.

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BIOLOGIA Y ECOLOGIA DE ROTIFEROS


CLASIFICACION SISTEMATICA
El rotfero ms importante (hasta ahora) para propsitos de acuacultura es el Brachionus
plicatilis. Las siguientes secciones se referirn mayormente a esta especies en particular.
PHYLUM:
CLASE:
ORDEN:
FAMILIA:
GNERO:

Nemathelminthes o Aschelminthes
Rotatoria
Monogononta
Brachionidae
Brachionus

MORFOLOGIA
Rotatoria (= Rotifera) pertenecen a los ms pequeos metazoarios. Ellos raramente alcanzan
2 mm en la longitud del cuerpo. Los machos tinen un tamao reducido y son menos
desarrollados que las hembras; algunos miden tan solo 60 m. El cuerpo de todas las especies
consiste de un nmero constante de clulas, las diferente especies de Brachionus contienen
aproximadamente 1000 clulas las que no deben considerarse como identidades nicas sino
como un rea de plasma. El crecimiento del animal es asegurado por el aumento de plasma y
no por la divisin de la clula.
La epidermis contiene una capa densamente empaquetada de protenas similar a l a
queratina denominada la loriga. El cuerpo del rotfero se diferencia en tres partes distintas
que consisten de la cabeza, el tronco y pie. La cabeza lleva el rgano rotatorio o corona que es
reconocido fcilmente por sus cilios anulares. La corona retrctil asegura la locomocin y un
movimiento del agua en forma de remolino que facilita la captacin de pequeas partculas
alimentarias (principalmente algas y detrito).
El tronco contiene el tracto digestivo, consistiendo de un mastax que muele las partculas
ingeridas, el esfago, el estmago con glndulas gstricas y el intestino. El sistema
excretorio consiste de un par de protonefridios con clulas terminales (cyrtocitos), el conducto
y la vescula. Los protonefridios expulsa lquido excretorio y juegan un papel importante en
la regulacin osmtica. El rgano genital es impar (Monogononta) o pareado en los ordenes
Seisonidea y Bdelloidea. La apertura del conjunto externo de la vescula y el oviducto se
llama cloaca.
El pie es una estructura anillada retrctil sin segmentacin que termina en uno o cuatro dedos
poseyendo glndulas pedales que segregan una sustancia adhesiva en rotferos reptantes y
ssiles.
Tipos de cepas ( L y S)
Existen dos diferentes morfotipos de rotferos: el tipo pequeo (S) y el tipo grande (L). Ellos
difieren en la longitud de la loriga: 130-340 m (promedio 239 m) para el tipo L y 100-210
m (promedio 160 m) para el tipo S. Existen tambin diferencias en el peso, forma de las
espinas occipitales y de las temperaturas ptimas de crecimiento (el tipo L tiene un rango de
temperatura ms amplio, mientras el tipo S posee mayor resistencia a temperaturas ms
alta).
CICLO DE VIDA Y DESARROLLO
El ciclo de vida de Brachionus plicatilis presenta dos modos de reproduccin. Durante la
partenognesis las hembras amcticas producen huevos amcticos (diploide, cromosomas 2n)
los que se desarrollan nuevamente en hembras amcticas. Esta es la manera ms rpida de
reproduccin y por lo tanto la ms importante para la produccin intensiva de rotferos. Sin
embargo, el ciclo de vida puede volverse en reproduccin sexual ms complicada por
condiciones ambientales desfavorables. Durante la reproduccin sexual las hembras mcticas
y amcticas son producidas. Aunque ambas no son morfolgicamente diferentes, las hembras

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mcticas producen huevos haploides (n cromosomas). Las larvas que son incubadas fuera de
estos huevos mcticos infrtiles se desarrollan en diminutos machos haploides. Estos machos
son aproximadamente un cuarto del tamao de la hembra; ellos no poseen tracto digestivo ni
vescula, pero tienen un sobredimensionado testculo que se llena esperma maduro. Los
huevos mcticos que eclosionarn en machos son significativamente menores en tamao,
mientras que los huevos mcticos fertilizados son ms grandes y consisten de una capa externa
gruesa y dbilmente granulada. Estos son los huevos latentes y nicamente eclosionarn
hembras amcticas bajo cambios repentinos en las condiciones ambientales. Estos pueden ser
originados por cambios en las condiciones climatolgicas eventualmente provocando
variaciones en la temperatura, salinidad o en las condiciones alimenticias. Se debe
enfatizar que la densidad de la poblacin del rotfero juega tambin un papel importante en
la estrategia del modo de reproduccin. Aunque el mecanismo no es entendido completamente
se acepta generalmente que el sentido biolgico de producir huevos latentes, por causa de
condiciones ambientales desfavorables como sequa o fro, permite asegurar la supervivencia
de la poblacin.
El lapso de vida de los rotferos depende de la temperatura del cultivo, pero en un ambiente
controlado (25 C) el perodo de vida se ha estimado en 3.4 a 4.4 das. Generalmente, las
larvas llegan a ser adultas despus de 0.5 a 1.5 das por lo cual las hembras comienzan a
poner huevos aproximadamente cada cuatro horas. Se cree que las hembras pueden producir
diez generaciones de progenie antes que ellas eventualmente mueran. La actividad de
reproduccin de Brachionus depende de la temperatura del ambiente.
ALIMENTO
Los rotferos del gnero Brachionus como filtrador no selectivo, puede ingerir partculas de
alimento de 20-30 m. En la naturaleza consumen microalgas, bacterias, levaduras y
protozoarios. Los animales cultivados se alimentan mayormente con algas unicelulares y/ o
levaduras. Nannochloropsis es una de las microalgas utilizadas usualmente como alimento
del rotfero. Tiene un tamao de 2-3 m. Sin embargo tambin Tetraselmis e Isochrysis son de
alta calidad nutricional. La levadura de pan ha sido tambin empleada para el cultivo de
rotferos, pero el valor nutritivo resultante de los rotferos es muy pobre. Desde hace algunos
aos, existen dietas artificiales y de enriquecimiento en el mercado, las cuales son
nutricionalmente completas y pueden reemplazar totalmente el uso de algas y/ o levadura.

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NAUPLIOS DE ARTEMIA
SELECCION DEL LOTE DE ARTEMIA DE QUISTES
El valor de la Artemia como fuente econmico y nutricional para larvas de peces y de
camarones es determinado por un nmero de factores:

almacenamiento de los quistes


morfometra de los nauplios
la calidad nutricional de los nauplios
caractersticas de eclosin de los quistes

ALMACENAMIENTODE LOS QUISTES


El lapso de tiempo entre el envasado de los quistes y su consumo en el laboratorio puede
variar desde unas pocas semanas hasta varios aos. Su viabilidad durante este perodo
depende principalmente de las condiciones de procesamiento, transporte y almacenamiento
del cual slo parte del ltimo est bajo completo control del acuacultor.
De ser posible, se debera limitar a comprar aquellos lotes de Artemia que han sido
almacenados bajo condiciones de refrigeracin. Es tambin una buena prctica examinar el
contenido de agua de los quistes ya que este parmetro correlaciona negativamente l a
duracin de vida de los quistes: quistes con buena eclosin pero con un contenido de agua sobre
el 8% deberan nicamente ser considerados para inmediato consumo.
Condicin
procesamiento
envasado
almacenamiento
transporte
almacenamiento
almacenamiento

Responsable
productor
productor
productor
productor /distribuidor
distribuidor
acuacultor

Comentarios
producto limpio, humedad< 8%
al vaco o atmsfera inerte
refrigerado (2-10 C)
transporte refrigerado
almacenamiento refrigerado (2-10 C)
- almacenamiento refrigerado (2-10 C):
almacenamiento prolongado
- almacenamiento en fro (sala con aire
acondicionado ): perodo corto de almacenamiento

DIMENSIONES DE LOS NAUPLIOS DE ARTEMIA


Cuando el tamao de la presa no permite su captura e ingestin por parte del predador su
valor nutricional se reduce a cero. Por otra parte es buena prctica ofrecer a las larvas
organismos alimentarios vivos del mayor tamao como le sea posible manipular ya que
entonces la energa relativa de captura es ptima.
Dentro de las cepas de Artemia disponibles comercialmente la longitud del nauplio en Instar
I vara entre 420-500 m. Aunque las diferencias pueden parecer pequea, permite a l
acuacultor seleccionar la cepa ms apropiada para las larvas cultivadas. Especialmente en
la produccin de larvas de peces marinos el tamao correcto de la presa es importante ya que
estos organismos ingieren la presa capturada en su totalidad. En las larvas de camarones
penaeidos, el tamao de la presa es menos crtico a causa de su hbito de desgarrar la presa
en pedazos de tamao manipulable. Es sin embargo bien conocido que la Artemia de mayor
tamao (e.g. originaria del Gran Lago Salado, UTAH-EUA) son ingeridas por la zoea III con
gran dificultad mientras que los nauplios de menor tamao cosechados (e.g. salina cerca de
San Francisco) son capturadas fcilmente por las mismas larvas.

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Ambas cepas pertenecen a la misma especies hermana Artemia franciscana, sin embargo a
veces los productores de Artemia tratan de confundir a sus clientes relacionando el nombre de
las especie hermana directamente e incondicionalmente al de la cepa de San Francisco con el
consiguiente tamao naupliuar y mayor costo.
En caso de duda la longitud de los nauplios recin eclosionados deber ser verificado por
medicin microscpica directa. Una manera indirecta confiable para la estimacin de la
longitud naupliar, es la medida del dimetro del quiste: un alto y positivo grado de
correlacin ha sido ciertamente demostrado entre esas dos medidas biomtricas.
Medicin del dimetro de los quistes de Artemia y de la longitud de los nauplios recin
eclosionados
- Materiales y equipos requeridos
- microscopio binocular
-dispositivo de calibracin (e. g. micrmetro ocular o hematocitmetro)
- cristalera: erlenmeyer, pipetas, cajas petri
- sistema en pequea escala para incubar quistes de Artemia (botellas de 1 l o conos
de Imhoff)
- reactivos:lugol
- agua de mar
- Procedimiento (vese tambin la ilustracin: SELECCION DE LA CEPA ADEQUADA DE
ARTEMIA, Determinacin del tamao de los nauplios recin eclosionados)
- calibracin del equipo de medicin
- medida de la longitud de los nauplios recin eclosionados
- incubar los quistes de Artemia bajo condiciones ptimas a una densidad de 1 gl-1
- cosechar los nauplios eclosionados al T90
- medir una muestra de por lo menos 100 nauplios teidos y calcular el valor
promedio
- continuar la medicin de muestras de 100 nauplios hasta que la desviacin
estndard se encuentre debajo del 10% del promedio de las longitudes de los
nauplios
- medicin del dimetro de los quistes
-hidratar alrededor de 0,1 g de quistes durante 2 h en agua de mar a 25 C
-medir una muestra de por lo menos 100 quistes y calcular el valor promedio
-continuar la medicin de muestras de 100 nauplios hasta que la desviacin
estndard se encuentre debajo del 10% del promedio de las longitudes de los
nauplios
-estimacin de la longitud de los nauplius en base al dimetro de los quistes
-aplicar la frmula: Y= 1.5 x X + 92.1 (R2= 0.80)
donde: Y= longitud de los nauplios
X= dimetro de los quistes
a y b son valores constantes igualando a a y b respectivamente
CARACTERSTICAS DE ECLOSION DE LOS QUISTES DE ARTEMIA
El potencial de eclosin de los quistes de Artemia es cuantificado por el porcentaje de
eclosin (E%) y la eficiencia de eclosin (EE). El E% es de valor biolgico ya que indica la
viabilidad de los quistes como tal. La EE toma enconsideracin no solamente los quistes pero
tambin las posibles impurezas. La EE es de importancia econmica para el acuacultor ya
que representa el nmero de nauplios que eclosionan de 1g de producto tomando en
consideracin el producto entero (i.e. quistes e impurezas posibles).

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Otra caracterstica de eclosin de importancia prctica directa para el acuacultor es la tasa


de eclosin (TE) o la evolucin de la eclosin durante el perodo de incubacin. Es importante
que los quistes eclosionen de manera rpida y sincrnica.
Los puntos caractersticos en la curva de eclosin son:
t10
t50
t90
ts

tiempo cuando el 10% de los quistes viables han eclosionado


tiempo cuando el 50% de los quistes viables han eclosionado
tiempo cuando el 90% de los quistes viables han eclosionado
sincronizacin de la eclosin: t90-t10

Los procedimientos con respecto a la determinacin de EE, E% y TE se plantean en las


ilustraciones: SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA, y determinacin de
las caractersticas de eclosin.

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PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA


ECLOSION DE NAUPLIOS
Ilustracin: PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA, Condiciones de eclosin
La produccin de nauplios de Artemia por eclosin de quistes es una rutina ampliamente
conocida. El proceso consiste en tres fases: la desinfeccin de los quistes, la incubacin de los
quistes y la recoleccin de los nauplios.
Desinfeccin de los quistes
Debido a las grandes cargas bacterianas reportadas en los quistes de Artemia, deben ser
desinfectados en una solucin de cloro por 20 minutos (densidad de quistes: 50 g.l -1,
concentracin de cloro: 200 ppm de producto activo). Despus de la desinfeccin, los quistes se
enjuagan con agua dulce y son transferidos al medio de incubacin.
Incubacin de los quistes
Se pone los quistes previamente desinfectados en agua de mar en un tanque transparente de
forma cilndro-cnico, con aireacin suficiente para mantenerlos en suspensin. La densidad
de los quistes incubados no debe sobrepasar los 2 g.l-1. La temperatura se mantiene constante
de preferencia en el rango de 28-30 C y el pH debe ser superior a 8. La iluminacin es
continua, con una intensidad en la superficie del medio de incubacin de no menos de 2,000
lux.
Recoleccin de los nauplios eclosionados
Despus de 24 horas de incubacin la aireacin y la iluminacin son interrumpidas y se cubre
el tanque con una tapa opaca. Despus de 5-10 minutos las cscaras de los quistes vacos
flotan en la superficie y la mayora de los nauplios se concentran en el fondo del tanque de
donde son cosechados. Una segunda cosecha se efecta despus de otros 5-10 minutos. Con esta
rutina se recoge virtualmente todos los nauplios eclosionados y se evita la contaminacin por
las cscaras de quistes vacos.

DESCAPSULACION DE QUISTES DE ARTEMIA


Ilustracin: PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA, Descapsulacin
La descapsulacin de los quistes de Artemia consiste en la eliminacin completa de la capa
exterior (corin), mediante el uso de una solucin concentrada de hipoclorito de cloro.
Adems de resolver el problema de la separacin de nauplios y cscaras de quistes durante
la recoleccin de los nauplios recin eclosionados; la descapsulacin ofrece otras ventajas:
desinfeccin de los quistes, mejoramiento de la eclosin, disponibilidad de partculas
alimenticias de menor tamao y mas nutritivas que el nauplio.

MEJORAMIENTO DEL VALOR NUTRICIONAL DEL ALIMENTO VIVO


Ilustracin: PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA, Enriquecimiento
Investigaciones realizadas han demostrado que el valor nutricional de ciertos tipos de
alimento vivo no siempre cubre con los requerimientos de las especies cultivadas.
Aprovechando la manera especfica de alimentacin de la Artemia (por medio de filtracin
no selectiva), se han desarrollado durante los ltimos aos tcnicas para enriquecerlos. Los

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procedimientos, hoy en da ya bien establecidos en el mundo acuicultor pueden ser aplicados


para el enriquecimiento con cidos grasos, protenas, pro- y anti-biticos, etc.

PRESERVACION DEL VALOR NUTRITIVO DE NAUPLIOS DE ARTEMIA


Ilustracin: PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA, Preservacin al fro de los
nauplios
En los procedimientos rutinarios de la larvicultura es muy comn de que por motivos
econmicos el alimento vivo quede almacenado durante un cierto tiempo despus de su
produccin (p.ej. despus de la eclosin los nauplios de Artemia son almacenados por 8 horas
antes de ser distribuidos a las larvas). Si el almacenamiento ocurre bajo temperaturas
ambientales (25 C) el valor nutritivo disminuir significativamente por los procesos
metablicos del alimento vivo mismo. Para evitar este inconveniente se aplica el
almacenamiento a bajas temperatura (4-10 C).

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ROTIFEROS
APLICACION DE ROTIFEROS EN LA LARVICULTURA DE CAMARON
Sin duda el rea mas importante para el uso de rotferos en la acuacultura se situa el la
larvicultura de peces marinos. Para la mayora de las especies, el rotfero es indispensable
como primer alimento vivo debido al hecho que el nauplio de Artemia es inaccesible para
las larvas.
En la larvicultura del camarn el rotfero no es muy utilizado.
justifica por varias razones:

Sin embargo, su uso se

- tamao intermedio
por su tamao de 180 - 250 m, siendo intermedio entre algas (< 20 m) y nauplios de
Artemia ( 500 m), el rotfero es una presa adecuada para los estadios de zoea 1 - mysis 3:
a partir de la muda zoea 1-zoea 2 la larva es capaz de capturar e ingerir rotferos.
- movimiento lento
larvas que se encuentran en fases crticas de su desarrollo que por varias razones estn
dbiles, pueden tener dificultades para capturar nauplios de Artemia:; proporcionando
rotferos durante esas etapas se ayuda a la larva a conseguir ms fcil su paquete nutritivo
- biologa de la alimentacin
debido a la alimentacin por filtracin no-selectiva de los rotferos al igual que la Artemia ,
son presas excelentes para ser enriquecidas
- tasa metablica
el metabolismo muy accelerado del rotfero da la ventaje al larvicultor de poder reaccionar
muy rpido en condiciones crticas: para enriquecer rotferos con sustancias profilcticas se
necesita solamente unas pocas horas (comparado con las 24 horas de eclosin + 12/24horas de
enriquecimiento de los nauplios de Artemia)
La figura 1 muestra la ubicacieon del rotfero en el esquema alimenticio de larvas de
penaeidos.
PREY
SIZE
(m)

LARVAL STAGE OF DEVELOPMENT


ZOEA
I

II

POSTLARVA

MYSIS
III

II

III

II

III

IV

VI

VII

VIII

IX

1000
800

ROTIFERS

600
400
200
0
INSTAR I ARTEMIA

ENRICHED ARTEMIA

TETRASELMIS
CHAETOCEROS

Fig. 1.- Esquema alimenticio para larvas de camarn a base de alimentos vivos

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PRODUCCION DE ROTIFEROS
CULTIVO DE ROTIFEROS
Ilustraciones: PRODUCCION DE ROTIFEROS, Esquema de la produccin y rutina de trabajo
En el proceso de cultivo de rotferos se observa dos fases distintas: el mantenimiento de un
stock (cultivo en volumenes pequeos) y el cultivo masivo (cultivo en gran volumen)
Mantenimiento del stock de rotferos
Para este propsito se inocula volumenes pequeos (p.ej. tubos de ensayo de 20 ml) con unos 20
rotferos (densidad de no ms de 1 rotfero por ml - R.ml-1). Alimentando con algas
unicelulares (Tetraselmis maculata o Nannochloropsis oculata) estos cultivos llegan a
densidades de 10 R.ml-1 dentro de un periodo de 2 a 3 semanas. Posteriormente se filtra la
suspensin del cultivo utilizando una malla de 60 m, se enjuagan los rotferos y se los
transfiere a fiolas de 1 litro diluyndolos hasta 1 R.ml -1 en agua de mar conteniendo las
mismas algas. Cuando se estima una vez ms una densidad de 10 R.ml-1 en las fiola se cosechan
y se utiliza la cantidad requerida de rotferos previamente limpios para re-inocular tubos de
ensayos y el ciclo empieza nuevamente. Para el mantenimiento de los stock de rotferos se debe
utilizar agua de mar normal (35 ppt), filtrada y esterilizada. Se alimenta los cultivos
solamente una vez (al inicio). Los recipientes estn almacenados en un rea termostatizada
donde se observa muy estrictamente las medidas para que el riesgo de contaminacin sea
mnimo.
Cultivo masivo de rotferos
Utilizando los rotferos remanentes de las fiolas se inocula tanques de 50 litros, se alimenta
con algas hasta conseguir despus de 4 das una densidad promedio de 150 R.ml-1. Luego sern
transferidos a tanques de 200 litros, 500 litros hasta llegar a 5,000 litros, por un lapso de 4
das en cada fase. El alimento a utilizar vara de acuerdo a las necesidades, pudiendo ser
ste algas, levaduras, combinacin de los mencionados o levadura manipulada. De acuerdo
al alimento se obtienen diferentes densidades de rotferos (150-800 R.ml-1 proporcionando
algas y levadura manipulada respectivamente; la levadura de pan, posiblemente
complementado con algas da resultados intermediarios).
La tcnica implantada de produccin de rotferos, se basa en el tipo de cultivo de recoleccin
completa (cultivo batch). Consiste en inocular el cultivo y una vez que se ha alcanzado
densidad mxima se realiza la cosecha completa. Para alimentar con algas, inicialmente se
realiza un bloom fitoplanctnico en agua de mar (35 ppt), se pone dichas algas en los tanques
de produccin de rotferos y se inocula los animales a una densidad de 10-30 R.ml-1, para
despus de 4 das cosechar todo el volumen. De cada cosecha se utilizar el 80% para
alimentar las larvas y el remanente 20% sirve como inculo de un nuevo tanque. Cuando se
administra levadura de pan levadura manipulada se trabaja con salinidad de 20 ppt,
salinidad en que se observa mayor reproduccin de los rotferos. La densidad inoculada es de
alrededor de 200 R.ml-1 y la racin diaria usualmente utilizada de levadura de pan es de 1
g.10-6 de rotferos mientras que de la levadura manipulada se utiliza 300 - 550 mg.10 -6 de
rotferos. Esta tcnica de cultivo tiene dos variantes: una consiste en el mantenimiento de un
volumen constante de cultivo con un incremento en la densidad de rotferos o el
mantenimiento de una densidad constante de rotferos con un incremento en el volumen de
cultivo.
ENRIQUECIMIENTO DE ROTIFEROS
Ilustracin: PRODUCCION DE ROTIFEROS, Enriquecimiento
Igual que en la Artemia, donde la tcnica es ampliamente conocida, se puede enriquecer el
rotfero con una variedad de componentes activos.

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El componente activo debe ser presentado en forma accessible lo que significa en el caso del
rotfero: partculas con tamao inferior a 20 m o gotas de aceite emulsificadas en el agua
(dimetro alrededor de 1 m).
Las condiciones de enriquecimiento son similares a las mencionadas para la Artemia. Se
puede ejecutar el processo al final de un cultivo masivo (en el medio de cultivo mismo) o en un
medio fresco despus de la cosecha del cultivo masivo. Por lo tanto el tanque de
enriquecimiento, la calidad del agua, la aereacin y la temperatura son idnticos a los del
cultivo masivo.
- tanque de enriquecimiento
tanques cilindro-cnicos (de preferencia) con fondo plano
- calidad del agua
agua desinfectada (clorinada y consecutivamente neutralizada con tiosulfato de sodio)
el agua pude ser agua de mar normal ( 35 ppt) o diluida con agua dulce hasta 18-22 ppt)
- densidad de rotferos
400-600 rotferos.ml-1
- aireacin
moderada, sin embargo evitando que la concentracion de oxgeno baje hasta 5 ppm
- temperatura
25-30 C
- preparacin del alimento
bien licuado con agua de manera que el producto de enriquecimiento se presente en forma de
partculas individualizadas con un tamao mximo de 20 m o en forma de glbulos
aceitosos emulsificados con dimetro de 1m
- alimentacin
se agrega el producto de enriquecimiento en 2 raciones iguales de 150 ppm (0.15 g.l-1)
- primera racin: 6 horas antes de la cosecha
- segunda racin: 3 horas antes de la cosecha

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CULTIVO INTENSIVO DE ARTEMIA


La biomasa de Artemia puede ser producida intensivamente segn dos principios: recoleccin
completa (circuito cerrado) o flujo continuo (circuito abierto). Durante el proyecto se aplic
ambos mtodos.
El cultivo intensivo de Artemia es caracterizado por muy altas densidades de animales.
Cuando se utiliza algas unicelulares, siendo el alimento principal de la Artemia en su
ambiente natural, se necesita mantener continuamente grandes cantidades de cultivos de
fitoplancton. Por razones tcnicas y econmicas esta estrategia no es factible: el desarrollo
de procedimientos para el cultivo intensivo de Artemia entonces depende completamente de
la disponibilidad de un alimento apropiado y de bajo costo.
La produccin intensiva de Artemia es relativamente simple, sin embargo se necesita
instalar cierto nivel de tecnologa. La Artemia se alimenta por medio de filtracin del agua
reteniendo las partculas suspendidas de tamao entre unas micras hasta 60 m. Esta es una
accin continua realizada ms eficientemente cuando la densidad de partculas es constante.
Por consecuencia, la distribucin del alimento debe ser muy precisa por un lado y bastante
frecuente por otro. Lo ms conveniente (e.g. alimentacin durante la noche) es la distribucin
automtica de la cual la forma fsica variar segn el mtodo de cultivo (circuito cerrado o
abierto).
Otro factor importante es la circulacin del agua asegurando el uso ptimo del espacio de
cultivo disponible (distribucin de los animales), la suspensin homognea del alimento y la
aireacin suficiente para que no se formen zonas anaerbicas. La circulacin est
determinada principalmente por la forma y los dimensiones relativas del tanque de cultivo
y en la mayora de casos es realizada como efecto secundario de la aireacin. En tanques
cilindro-cnicos se puede instalar puntos de aireacin abiertos, difusores de aire o colares de
aireacin mientras que en los tanques rectangulares (tipo race-way) se aplica con preferencia
los air-water lifts.
Alimentos secos para Artemia
La dieta ms frecuentemente usada para el cultivo intensivo de Artemia es sin duda el
afrechillo de arroz micronizado. Este es considerado en algunos lugares como un producto de
desecho de la industria agrcola, y es por lo tanto disponible en grandes cantidades a bajo
costo. An ms, los excelentes resultados de produccin obtenidos en muchos experimentos
tanto en reas tropicales y sub-tropicales en todo el mundo han provado su conveniencia
desde el punto de vista nutricional.
Antes de que el afrechillo de arroz (al igual que otros alimentos potenciales) puedan ser
utilizados en los cultivos de Artemia, ste debe ser molido hasta obtener un tamao menor a
100 m. La mejor tcnica para obtener esto es la micronizacin. Sin embargo, dicha mquina
es raramente disponible y se deber buscar alternativas.
El mtodo ms simple consiste en pasar la materia prima a travs de un molino ordinario
para harinas tantas veces sea necesario hasta obtener una fraccin razonablemente pequea
que la requerida, 100 m. Esta porcin es separada de la fracin corriente tamizndola. Esta
combinacin de procedimientos toma bastante tiempo y tiene adems la desventaja de que
nutrientes especficos pueden estar selectivamente concentrados en las partculas mayores
las cuales, por su tamao, son eliminadas por dichoproceso. Una posibilidad para reducir
este problema es mezclar la fraccin corriente en una licuadora de cocina y subsecuentemente
exprimir la suspensin a travs de un filtro con malla de 100 m.
A pesar de los inconvenientes producidos por la ausencia de la maquinaria apropiada para
moler, el afrechillo molido y tamizado ha sido aplicado con xito en cultivos intensivos de
Artemia.

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Cultivo con recoleccin completa


Con este sistema no se aplica recambio de agua (circuito cerrado) y como consecuencia la
calidad del agua va progresivamente deteriorndose. La densidad de Artemia inoculada es
relativamente baja y la supervivencia despus un cultivo de 2 semanas no sobrepasa el 35%.
Cultivos realizados con este mtodo producen tpicamente unos 5-7 kg de Artemia adulta
despus 2 semanas de cultivo.
La deterioracin de la calidad del agua puede ser reducida por eliminacin de las sustancias
sedimentadas, lo que puede ser ejecutado manualmente por medio de sifoneo del fondo del
tanque o automticamente utilizando un separador de placas.
Alimentacin automtica
La mejor produccin de Artemia es alcanzada cuando la densidad en el medio de cultivo es
tan constante como sea posible. Conociendo el eficiente sistema de filtracin de la Artemia,
uno se da cuenta que alimentaciones frecuentes son la garanta para obtener resultados
aceptables de produccin. Por lo tanto, la alimentacin automtica es un requerimiento
necesario. La figura 2.1 presenta una versin simple de un sistema automatizado.

toma corriente

aire

suspensin de alimento

al tanque
de cultivo

temporizador

resevorio para
suspensin de
alimento

A: Parte electrnica
(temporizador y
aireador)
B: Reservorio para
la suspensin de
alimento
C: Air-water-lift

bomba de aire

Fig. 2.1.- Alimentacin automtica para cultivos intensivos de Artemia

El componente ms importante es el temporizador electrnico que activa un aireador de


acuario durante cierto tiempo y con una frecuencia determinada (e.g. se puede ajustar el
temporizador de manera que activara el aireador cada 20 minutos durante medio minuto).
A travs de un circuito de mangueras, el aire comprimido por el aireador es dirigido hacia el
reservorio que contiene la suspensin de alimento. Aqu, el incremento de la presin activa un
tipo de air-water-lift resultando en pequeas cantidades de la suspensin bombendolas
al tanque de cultivo.

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Purificacin primaria del agua


El sistema de purificacin del agua por medio de un separador de placas consiste de un filtro
con malla apropiada, una bomba de agua con flujo ajustable y un tanque de sedimentacin.
Los diferentes componentes estn interconectados por medio de mangueras y tubos.

FILTRO Y BOMBA

tubo de PVC

Marco del
filtro

Faja de material liso


(e.g. plstico)
malla de nylon

El filtro es colocado en interior del


tanque de cultivo previniendo la salida
de la Artemia durante el proceso de
filtracin. Este consiste de un marco de
tubos PVC, un collar de aireacin y una
malla de nylon intercambiable (figura
2.2.). Segn el crecimiento de l a
Artemia se selecciona el orificio de
malla apropiado. El agua circula del
tanque cultivo al separador de placas
por medio de aire comprimido (tipo airwater-lift).

Malla intercambiable

Fig. 2.2.- Filtro para cultivo intensivo de


Artemia: partes, componentes y forma de
ensamblar.

SEPARADOR DE PLACAS
El separador de placas consiste de un tanque rectangular dividido en un compartimento
pequeo de entrada y un compartimento de sedimentacin. Existe una placa vertical
localizada a 2 cm del fondo del tanque que separa a los dos compartimentos,. En el
compartimento de sedimentacin estn ubicadas varias placas, de esta manera se incrementa
la superficie de sedimentacin. La inclinacin de las placas es de 30-45 grados (en l a
direccin del flujo).
El agua es continuamente bombeada hacia el separador donde pasa entre las placas. Para
resultados ptimos, el volumen del separador debe ser no menos del 10% del volumen del
tanque de cultivo. Se ajusta el flujo de la bomba de tal manera que el tiempo de retencin en
el separador sea entre 15-30 minutos. La instalacin del sistema igual como su
funcionamiento estn representados en la figura 2.3.

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inyeccin de aire
para crear el efecto
air-water-lift

tubo PVC

separador de placas
a
tanque de
cultivo
c
b
filtro para
retencin de
Artemia

a: tubo PVC
b: compartimento de entrada
c: placas (inclinacin: 30-45
direccin del flujo de agua

Fig. 2.3.- Instalacin de un sistema para la purificacin primaria de agua por medio de un separador
de placas

Preparacin de la infraestructura
Despus de la desinfeccin del tanque de cultivo con hipoclorito de sodio se lo enjuaga con
agua de mar hasta que no se detecta mas el olor del cloro. De igual manera se trata el
separador de placas, la tubera y las mallas. Inmediatamente antes de la inoculacin se
llena el tanque con agua de mar filtrada.
Origen de la cepa de Artemia
Para todo cultivo intensivo realizado durante el proyecto se utiliz Artemia del Gran Lago
Salado (Utah, EE.UU.).
Inoculacin del cultivo
Se inocul los tanques con nauplios recin eclosionados aplicando una densidad alrededor de
5,000 nauplios.l-1.
Operacin del cultivo
Durante los 3 primeros das del cultivo no oper el sistema de filtracin del agua mediante
el separarador de placas y la alimentacin se ejecut manualmente, de manera que l a
turbidez del medio de cultivo se mantenga alrededor de los 25 cm. A partir del cuarto da se
instal el sistema de filtracin utilizando en el filtro malla de 100 m. Al mismo tiempo
tambin se oper la alimentacin automtica. Durante el cultivo se calibr la frecuencia de
la alimentacin para llegar a obtener una turbidez de 25 cm. Dos veces por da se prepar
una nueva suspensin de alimento y diariamente se limpi las mallas. Desde el momento que
el tamao de la Artemia lo permiti se reemplaz la malla por otra con orificios ms
grande.
Debido a que no se aplic sistema de calentamiento el crecimiento de la Artemia vari
significativamente segn la estacin y los cultivos duraban entre 15-19 das.

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Cosecha del cultivo


En el momento que la Artemia lleg a la madurez (observado por la presencia de parejas) se
cosech el cultivo completamente. La manera mas conveniente fue de parar la aireacin
totalmente. Por falta de ox geno la Artemia se dirigi hacia la superficie en pocos minutos y
se la pudo colectar con una malla de 800 m.
Cultivo con flujo continuo
En el cultivo intensivo de Artemia con flujo continuo no se aplica purificacin de agua por que
el medio de cultivo esta reemplazada continuamente con agua de mar nueva. Una instalacin
de cultivo conveniente y confiable consiste del tanque de cultivo, un filtro con malla
apropiada, un tanque pulmn sirviendo como reservorio para el agua de recambio y l a
tubera conectando las diferentes partes mencionadas.
Los procedimientos para la preparacin de la infraestructura y la cosecha del cultivo son
igual a los mencionados para el cultivo con recoleccin completa. Se inocul los cultivos con
una densidad de 20,000 nauplios.l-1, tambin eclosionados de quistes originarios del Gran
Lago Salado.
Con excepcin de la alimentacin los modos de operacin tampoco difieren mucho entre
ambos tipos de cultivo. Durante los 3 primeros das se ejecuta exactamente los mismos
procedimientos come si fuera cultivo con recoleccin total. A partir del cuarto da, el medio
de cultivo fue reemplazado continuamente con agua de mar nueva. El tiempo de retencin era
de 24 horas. Aplicando el flujo continuo se mezcla el alimento con el agua de recambio en el
tanque pulmn. La concentracin del alimento en el agua de recambio esta determinada por
la turbidez requerida del agua de cultivo y el tiempo de retencin.
Potencial del cultivo intensivo
Despus de 15 das de cultivo alimentando con afrechillo de arroz se puede esperar cosechas
promedias (peso hmedo) por m3 de 5.8 kg en los cultivos cerrados y 6 kg en los sistemas
abiertos con eficiencias de conversin alimenticia de 0.8 y 1.2 respectivamente.
Despus de ser molido y tamizado se recupera unos 60% de la cantidad inicial del
afrechillo.

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CULTIVO EXTENSIVO DE ARTEMIA EN ESTANQUES


CULTIVO EXTENSIVO DE ARTEMIA EN AGUA DE ALTA SALINIDAD
El objetivo de esta mtodo de cultivo es de establecer y mantener poblaciones permanentes de
Artemia.
Preparacin de la planta piloto para la inoculacin de Artemia
Los cultivos extensivos de Artemia son precedidos por un periodo ms o menos extenso dentro
del cual se debe conseguir una salinidad alta ( 100 ups) gracias a la evaporacin del agua.
El tiempo requerido para alcanzar esta condicin depende de la profundidad del agua. Por lo
tanto, inmediatamente despus de terminar la construccin de la planta de produccin, se
debe llenar todos los estanques con un promedio de 20 cm de agua de mar (en los primeros das
se tiene que adicionar regularmente mas agua para compensar la prdida resultante de la
absorcin por el suelo, un proceso temporal conocido como saturacin del fondo del
estanque). Mediante el manejo del agua (ingreso) durante los siguientes meses se producir
una cantidad de salmuera suficiente para la primera inoculacin con nauplios de Artemia
recin eclosionados.
Para llenar el resto de la planta piloto se sigue el mismo procedimiento.
Origen de la cepa de la Artemia inoculada
Reportes de la introduccin de Artemia con propsitos de cultivo en estanques, fuera de la
distribucin natural, son numerosos. Los mejores resultados de produccin son obtenidos con
Artemia de la cepa franciscana (originaria de USA) y se pens que durante estos aos la
Artemia de los estanques podra ser transferida a sitios vecinos e.g.. las plantas para la
produccin de sal. En zonas que tienen poblaciones autctonas de Artemia es preferible de no
utilizar cepas exticas por la posible presencia local de vectores naturales para l a
dispersin de la Artemia (e.g. flamingos) se puede fcilmente y de manera irreversible
contaminar la cepa local.
Inoculacin de los estanques
Los estanques de Artemia tienen que ser inoculados con nauplios recin eclosionados. Si los
sitios de incubacin y de eclosin se encuentran distantes, condiciones apropiadas de
transporte debern ser consideradas.
- densidad de 500 nauplios.l-1
- temperatura ambiente es aceptable por cortos periodos de transporte, de otra forma el
agua necesitar ser temperada (e.g. 4 - 10 C); en este caso, es mejor aclimatar los
nauplios cerca del arribo a los estanques (e.g. 5 - 10 C.h-1)
- cuando el transporte es largo es inevitable suministrar aireacin mediante una bomba
porttil; otra solucin es la de tranportar los nauplios en fundas plsticas con oxgeno.
Para evitar temperaturas excesivamente altas, el mejor tiempo del da para la inoculacin
es el principio de la noche, o hasta la siguiente maana.
Control de la salinidad
Debido a que aguas de diferentes densidades no se mezclan, despus de cada lluvia una capa
de agua dulce se acumular encima de la salmuera. Una situacin parecida prolongada
puede ser perjudicial para las poblaciones de Artemia no tanto por el riesgo de que la
salinidad bajara excesivamente pero mas que todo por efectos indirectamente relacionados a
la formacin de la capa de agua dulce: ingreso de grandes cantidades de material inorgnico
y la estratificacin de las capas de agua.

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Ingreso de material inorgnico


Especialmente en estanques pequeos con una relacin baja entre el volumen del agua y la
circunferencia, gran cantidad de arcilla es llevada de las orillas hacia el estanque donde
se queda este material suspendido e interfiere muy seriamente con la biologa de l a
alimentacin de la Artemia (por filtracin no selectiva). Este fenmeno fue la causa de
que la primera poblacin de Artemia fue erradicada totalmente unos meses despus de la
inoculacin. Por el establecimiento, poco a poco, de vegetacin en las orillas se piensa que
problemas parecidos no se repetirn ms.
Estratificacin de capas
En sistemas con dos capas de agua de diferente densidad se establece un efecto
invernadero en el cual la temperatura en la capa inferior aumenta espectacularmente
(registrada hasta 80 C durante el proyecto). Bajo condiciones parecidas el oxgeno se
terminar muy rpidamente y procesos anaerobicos empezarn a desarrollarse con
consecuente formacin de sustancias txicas (e.g.. H2S). Cuando posteriormente las capas
se mezclaron las condiciones del volumen total del agua pueden ser prohibitivo para la
Artemia.

capa de agua
dulce
evacuacin de agua
dulce

capa de salmuera

Fig. 2.4.- Evacuacin de la capa de agua dulce formada encima de la salmuera de una piscina para
la produccin de Artemia.

Consecuentemente, en caso de que fuertes lluvias azoten la zona se debe tomar acciones
inmediatas para la evacuacin del agua dulce. Con este fin se coloca un tubo vertical en la
estructura de drenaje, abrindose unos centmetros debajo de la superficie del agua, de
manera que el agua dulce sea selectivamente drenada (figura 2.4).
Fertilizacin
Manteniendo un florecimiento de algas para proveer el principal alimento a las poblaciones
en desarrollo de Artemia, es uno de los objetivos ms difciles de conseguir en el cultivo
extensivoArtemia. Frecuentemente no se consigue una buena respuesta del fitoplancton con la
fertilizacin.
Varios productos (orgnicos y inorgnicos) combinaciones de productos pueden ser
utilizados para inducir y mantener florecimientos de algas unicelulares.
A continuacin se recomiendan cantidades de fertilizantes a utilizar:
Produccin de biomasa
La cosecha de la biomasa puede ser efectuada con una versin pequea del
piernn, siendo la malla la tpicamente utilizada por los larveros que pescan las postlarvas
en el mar. Las cosechas son determinadas por el principio de la produccin substituible
(PS) lo que significa que la fraccin de la biomasa cosechada puede ser regenerada durante el
tiempo entre dos cosechas consecutivas (figura2.5).

Manual para la produccin y Uso de organismos Zooplanctnicos

22

Biomasa en la piscina
A
B
.

.
.
. DIARIAS
.
.
.
COSECHAS

Tiempo (das)
Fig. 2.5.- Representacin esquemtica de la produccin sustituible: PS = A-B.

Se debe tomar en consideracin que:


existe una concentracin de la biomasa en la orilla opuesta al viento
se recomienda filtrar la biomasa por tramos paralelos a la direccin del viento
la densidad y el peso individual de la Artemia varia considerablemente; estas
caractersticas son directa y positivamente correlacionadas con la disponibilidad de
alimento (algas unicelulares)
la cantidad de Artemia cosechada varia de acuerdo a la disponibilidad del
alimento
la tasa de reproduccin de la Artemia tambin varia segn la disponibilidad del
alimento
el porcentaje de la biomasa substituible (PS) varia y se debe adaptar a l a
superficie cosechada
La ejecucin prctica de la cosecha y el clculo de la PS estn ilustrados en la figura 2.6.
Piernn
orificios de la malla:
800 m

Estanque de produccin

1 . . . . . . x

l
d

1
.
.

ancho y longitud del estanque


: ancho de la base del piernn
: direccin princ ipal del viento
: tramos de cosecha
: tramos de cosecha

Por cada tramo se filtra( d + c


2.z

). 100 %

l-k : superficie del agua


d : ancho de la base del
piernn
c : ancho del piernn en la
superficie del agua
: apertura del piernn

b
a, b:
d
v
1 .... x
1 ... y

c
d

d - h.tg() .
( o 2.z
) 100 %

del volumen

(dependiendo de la direccin, z = a b)
Ejemplo: haciendo tramos paralelos a la direccin principal del viento
estanque : - z =a= 75 m
piernn : - d= 1.5 m
- b = 100 m
- =60
- h = nivel del agua sobre el fondo
produccin substituible (PS) estimada = 15%
nmero de tramos : h = h 1= 0.4 m
x = 10.84 ~ 11 tramos
h = h 2= 0.8 m
x = 8.86 ~ 9 tramos
Fig. 2.6.- Clculo de la cosecha de cantidades sustituibles de Artemia

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CULTIVO EXTENSIVO DE ARTEMIA EN AGUA DE MAR NORMAL


La produccin de Artemia en estanques de alta salinidad es un proceso continuo y requiere
constante monitoreo y seguimiento de los cultivos. La operacin del proceso de produccin de
un organismo en un medio inslito (alto contenido de sal) demanda adems experiencia
especfica. La produccin actual es precedida por una fase de inicio durante la cual
cantidades suficientes de salmuera son producidas. Dicha fase es relativamente extensiva.
Para que la ejecucin del cultivo extensivo de Artemia sea de mas atraccin y accesibilidad
para un nmero mayor de los productores potencialmente interesados, una nueva tcnica ha
sido evaluada durante el curso del proyecto: la produccin extensiva de Artemia en agua de
mar normal.

Introduccin
Observaciones realizadas in situ demostraron que los depredadores principales de Artemia
son los coppodos y un miembro del grupo de la familia Corixidae (localmente conocida como
mosquilla). No se determin estos organismos hasta el nivel de especie. Experimentos
realizados en laboratorio revelaron que ambos depredadores prefieren diferentes tamaos
de Artemia. Los coppodos son solamente perjudiciales cuando la Artemia es pequea
(nauplio recin eclosionado hasta metanauplio de 4 das). Por el contrario, la mosquilla solo
toma como presa a los juveniles y adultos de Artemia, esta ltima siendo frecuentemente
capaz de escapar del ataque del depredador.
Para evitar la entrada de coppodos a los estanques, se utilizan mallas de 60 m que se
ubican en las estructuras de la entrada de agua. Las mosquillas son insectos que invaden los
estanques por el aire. Durante el tiempo que stas pasan en la columna del agua,
regularmente necesitan subir a la superficie para respirar. Una medida probada para
erradicar depredadores de iguales hbitos en estanques de camarones y de peces es l a
aplicacin de pequeas cantidades de diesel. La delgada capa de diesel previene que los
insectos alcancen la superficie, sofocndolos eventualmente.
Se pens que este tipo de cultivo de Artemia, a pesar de las medidas rigurosas,
eventualmente debera estar invadido de depredadores a parte de los mencionados
coppodos y mosquillas (e.g.cangrejos que pasan por los diques e inmediatamente comienzan
a reproducirse o peces que entran en los estanques como huevos transportados en las plumas de
los pjaros). Por lo tanto, la duracin anticipada para cada cultivo de Artemia debera
preferentemente estar restringida a una generacin.
Preparacin del estanque
Al inicio de las pruebas de cultivo, el estanque es tratado de manera similar a los estanques
de camarn entre dos producciones consecutivas siendo drenado, secado y calado. Secciones
del estanque que debido a la topografa no pueden ser drenados completamente, debern ser
especialmente tratados. Dichas reas indudablemente pueden ser infestadas con coppodos
que despus servirn de inculo en el siguiente cultivo de Artemia.
Toma de agua
Mediante anlisis de muestras de agua filtrada se demostr que la ausencia absoluta de
coppodos en el estanque de produccin es garantizada slo utilizando un filtro con orificios
no mayores a 100 m. Sin embargo, aunque el flujo de entrada se reduca, la malla de 100 m
se taponaba y eventualmente era expulsada. Por lo tanto, este mtodo es solamente
recomendado cuando pequeos volmenes de agua deben ser filtrados y/o cuando grandes
superficies de filtracin pueden ser instaladas. Para eliminar completamente los coppodos
del agua del estanque se sugiere construir una estructura de toma de agua consistente de una
bomba porttil y un filtro de acero inoxidable del tipo cross flow. Debido a la propiedad
de auto limpieza, grandes flujos de agua pueden pasar a travs de este tipo de filtro sin que
su superficie de filtracin sea taponada.
En ausencia del filtro de acero inoxidable (como fue el caso de los experimentos) se consider
necesario aplicar un sistema de filtracin doble. Se instal una serie de dos filtros

Manual para la produccin y Uso de organismos Zooplanctnicos

24

consecutivos con orificios de 800 y 200 m respectivamente (figura 2.7). Con la malla de 200
m la eliminacin total de los huevos de depredadores mayores (peces y crustceos) fue
asegurada mientras que la cantidad de coppodos que entraron al estanque fue
significativamente reducida. Como consecuencia, cualquier florecimiento de estos organismos
sera retardado y se increment las posibilidades que el nauplio de Artemia pase por los
periodos crticos en los cuales es presa fcil de los coppodos.

dique

filtro 800 m

dique

filtro 200 m

canal

piscina

Figura 2.7.- Toma de agua para cultivos extensivos de Artemia: infraestructura con filtracin doble

Origen de la cepa de Artemia inoculada


Para los diferentes ensayos, la cepa de EE.UU. proveniente del Gran Lago Salado fue
utilizada. Despus de cada ciclo de cultivo, el estanque fue completamente cosechado y la
inoculacin de esta cepa extica fue mucho menos daina para la integridad de la cepa local,
que hubiera sido si hubiese sido utilizada para los cultivos permanentes o semi-permanentes
en altas salinidades.
Inoculacin del estanque
Para asegurar producciones satisfactorias, la introduccin de Artemia en el sistema de
cultivo puede ser considerada solamente cuando los coppodos no son una amenaza. Dichas
condiciones se alcanzan cuando:
los coppodos estn completamente ausentes o presentes en bajas densidades:
inoculacin con nauplios recin eclosionadas puede ser realizada
coppodos estn presentes: inoculacin con metanauplios mayores, suficientemente
grandes de manera que son inaccesibles para los coppodos
INOCULACION CON NAUPLIOS RECIEN ECLOSIONADOS
La eclosin de los quistes y el transporte de los nauplios es idntico al descrito para el
cultivo de Artemia en alta salinidad. De nuestros experimentos se concluy que la
inoculacin de los nauplios recin eclosionados no es posible cuando la densidad de
coppodos excede a 1.l -1. En caso de que la estructura de ingreso de agua solamente
permite una filtracin con malla de 200 m, dicha condicin de seguridad es obtenida
inmediatamente despus de la filtracin. Sin embargo, inoculaciones a este momento
tienen la desventaja de que el fitoplancton no ha tenido el tiempo suficiente para
florecer y limitaciones de alimento pueden ocurrir. Este mtodo es por lo tanto mejor
practicado cuando las algas han florecido previamente en el reservorio o canal de
abastecimiento (e.g. cuando parte del canal de abastecimiento puede ser aislado y
separadamente fertilizado algunos das antes de llenar el estanque de produccin de
Artemia). Se supone (no comprobado) que los coppodos seran totalmente eliminados
cuando se utiliza el filtro de acero inoxidable; por eso, la inoculacin podra ser
pospuesta hasta por lo menos una semana despus del ingreso de agua, periodo dentro
del cual las algas se han desarrollado.

Manual para la produccin y Uso de organismos Zooplanctnicos

25

INOCULACION CON METANAUPLIOS DE ARTEMIA


Los metanauplios de 5 das de edad han crecido hasta un mayor tamao al cual el
coppodo no puede tomar como presa (verificado experimentalmente). Las
condiciones del cultivo se describen a continuacin:
tanque de cultivo (m3)
4
densidad (nauplios.l-1)
2,000
alimento
da 0-1:
Tetraselmis sp.
da 2-4:
afrechillo de arroz
Los metanauplios son transportados al estanque en recipientes plsticos a una
densidad de 500.l-1.y inoculados a 100 animales por litro.
Control de depredadores
Se observ ausencia completa de peces y camarones durante el periodo de cultivo. Cangrejos
adultos fueron observados dentro y alrededor del estanque. Aunque no se lo determin
exactamente, se pens que su nmero y consecuente depredacin en la poblacin de Artemia
fue mnimo. En muestras de agua, larvas de cangrejo fueron ocasionalmente encontradas a los
diez das de ingresada el agua. En caso de que la inoculacin de Artemia fuera exitosa, las
larvas de cangrejo aparecieron en las muestras de agua slo cuando stas no eran dainas
para los juveniles de Artemia. Ninguna medida fue tomada para el control de estas larvas
que adems fueron muy pocas.
El principal depredador de la Artemia juvenil y adulta es indudablemente la mosquilla.
Estos organismos invaden los estanques inmediatamente despus del ingreso de agua y
adems reproducindose rpidamente.
Diez das despus de la inoculacin, las mosquillas fueron abundantes en las muestras de
agua y se decidi aplicar diesel al estanque en una proporcin de 10 l.ha-1. El efecto fue
obvio e instantneo: en pocos minutos el diesel se dispers en la superficie del agua y no slo
previno que las mosquillas pudieran tomar aire, sino que tambin se adhiri a sus cuerpos los
cuales se tornaron hidrofbicos. Por lo tanto, los organismos son incapaces de sumergirse e
inevitablemente son atrados a la superficie, la cual pocos minutos despus de la aplicacin
del diesel es cubierta por los desesperados insectos. Masas de mosquillas muertas y
moribundas se concentran en la orilla del estanque y pueden ser removidas fcilmente.
Este procedimiento fue aplicado justo antes de la cada del sol (parte del da con poco
viento) y al da siguiente no se observ evidencia de la presencia del diesel, slo en pequeas
secciones cerca de las orillas. Por la noche todas las trazas de diesel se haban evaporado y
no fueron observados efectos negativos para la poblacin de Artemia ni en ese momento ni
despus.
Aunque la poblacin de mosquilla fue seriamente daada con el tratamiento del diesel,
nunca desapareci totalmente. Se verific que desde el momento en que la capa de diesel
desapareci, una nueva invasin se produjo. Tambin se asumi que los huevos de l a
mosquilla sumergidos no fueron destruidos por el procedimiento y luego eclosionaron, dando
el nacimiento a una nueva generacin de mosquilla. Por lo tanto, aplicaciones de diesel deben
ser repetidas regularmente (cada 4 das en nuestro experimento).
Produccin de biomasa
De los ensayosse observ que la inoculacin con metanauplios ofrece una mejor oportunidad y
luego de 3 semanas de cultivo se produjo el equivalente a un poco menos de 300 kg de biomasa
por hectrea.
Conclusiones
El cultivo de Artemia en piscinas con agua de mar solamente es factible cuando se toma las
medidas para la eliminacin de predadores. En el caso especfico del Ecuador el depredador
ms importante es la mosquilla. Cuando se puede alcanzar esta condicin, esta manera de
produccin de biomasa requiere menos esfuerzo o experiencia que la produccin en salmuera y
las cosechas son mayores.

Manual para la produccin y Uso de organismos Zooplanctnicos

26

PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA


Enriquecimiento
PREPARACIN DEL TANQUE DE ENRIQUECIMIENTO
Se ejecuta la misma rutina como para la preparacin del tanque de eclosin

PREPARACION DE LOS NAUPLIOS

ECLOSIN

COSECHA

ENJUAGUE

CONCENTRACIN

RE-SUSPENSION DE LOS
NAUPLIOS

PREPARACION DEL PRODUCTO DE ENRIQUECIMIENTO

OOCC

7
8
9
/*
4
5
6
1
2
3
0+. -=
clculo de la cantidad del producto
de enriquecimiento

peso de la cantidad requerida

agitacin fuerte con licuadora de


cocina (3 - 5 minutos)

EJECUCION DEL ENRIQUECIMIENTO

Condiciones para el enriquecimiento de


nauplios de Artemia
t=0h
- tanque: con fondo cnico (preferencial)
plano

primera adicion: 0.3 g.l-1

- medio de enriquecimiento
- enriquecimiento en agua de mar normal
filtrada, previamente desinfectada y
neutralizada con 5 ppm de hipoclorito de
sodio y tiosulfato de sodio respectivamente
-

t = 12 h
segunda adicion: 0.3 g.l-1

aireacin
- fuerte, garantizando una concentracin de
oxgeno superior a 5 ppm
- adicionar suficientes difusores de aire

temperatura: 25-30 C

densidad: hasta 300 nauplios.ml-1

t = 24 h
COSECHA

PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA


Preservacin en fro

ECLOSIN

COSECHA

Alimentacin directa a las


larvas

ENJUAGUE

Preservacin a temperatura
ambiente durante 24 h

25 - 30 C

CONCENTRACIN

Preservacin al fro (4 -10 C)


durante 24 h

aireacin suave

2000-4000 Artemia.ml -1
500 Artemia.ml

-1

CARACTERISTICAS DE LOS NAUPLIOS DESPUES DE LA PRESERVACION BAJO DIFERENTES


TEMPERATURAS
Alimentacin directa a las
larvas

ESTADIO

Preservacin a temperatura
ambiene durante 24 h

Preservacin al fro (4 -10 C)


durante 24 h

Instar I

Instar II-III

0h

24 h

24 h

LONGITUD

480 m

700-900 m

480 m

PESO SECO

100 %

61 - 78 %

97 - 98 %

ENERGIA

100 %

66 - 84 %

EDAD

Instar I

PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA


Condiciones de eclosin
PREPARACION DEL TANQUE DE ECLOSION
PROCEDIMIENTO
- limpiar el tanque y la tubera de aireacin con
abundante agua
- disinfectar el tanque y la tubera con una solucin fuerte
de hipoclorito de sodio (e.g. 200 ppm de cloro activo)
- despus de 1-2 h enjuajar las paredes con agua hasta
que no se detecta ms olor a cloro
- llenar el tanque con agua de mar filtrada (de preferencia
utilizar agua pre-condicionada > 25 C)
- colocar el sistema de aireacin (utilizar suficiente
lneas para que la concentracin de oxgeno sea
superior a 2 ppm durante el proceso de eclosin)

HIPOC
DE
SODIO

HIP
OC

PROCEDIMIENTO
25-30 C
- disinfectar el agua con hipoclorito de sodio:
e.g. agregar 0.5 g de cloro activo por cada
100 litros de agua y aplicar aireacin suave
durante 1 h
- neutralizar el agua desinfectada: agregar 0.5
de tio-sulfato de sodio por cada litro de agua
- ajustar la temperatura: 25 - 30 C
- agregar los quistes
en
cantidades
equivalentes a 1 - 2 g.l-1

Na2

DESINFECCIN DE LOS QUISTES


PROCEDIMIENTO
Para reducir el nivel de contaminacin bacteriana se recomienda desinfectar los quistes antes de incubarlos
- suspender los quistes (50 g.l-1) en una solucin de hipoclorito (200 ppm de cloro activo) durante 20 minutos
- aplicar aireacin moderada durante la desinfeccin
- colectar los quistes en una malla( 120 m) y enjuagarlos con agua de mar antes de incubarlos en el tanque de eclosin

CONDICIONES PARA UNA ECLOSION OPTIMA


Agua
- agua de mar filtrada (100
m);
- salinidad: 25 -35 ppm
- pH: > 8

COSECHA

Iluminacin
- continua con intensidad en
la superficie del agua de
2000 lux

Temperatura
- 25 - 30 C
Aireacin
- agitacin fuerte del agua:
el nivel de oxgeno debe
ser > 2 ppm durante el
proceso de la eclosin

Densidad de
quistes
- 1 - 2 g.l-1
AA

Tanque de eclosin
- con fondo cnico

rh

PROCEDIMIENTO
- interrumpir la aireacin por 10 - 15 minutos
- dentro de este tiempo los nauplios se separan
de las cscaras vacas
- las cscaras flotan
- los nauplios se acumulan en el fondo del cono
- colectar los nauplios en una malla sumergida
con orificios de 120 m
filtro
tanque para la
coleccin de los
nauplios

drenaje del
filtro

para el tratamiento de los nauplios postcosecha refirase a la ilustracin #

PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA


Descapsulacin
PREPARACIN DEL TANQUE DE DESCAPSULACIN
Se ejecuta la misma rutina que para la preparacin del tanque de eclosin

PREPARACION DE LOS QUISTES PARA LA DESCAPSULACION: HIDRATACION

RH

aireacin fuerte

50 g.l-1

rh

- poner los quistes en agua de mar durante 30 minutos - 1


h (densidad equivalente a 50 g.l-1 )
- recolectar los quistes hidratados en una malla de 120
m y eliminar el exceso de agua
- estos quistes debern ser descapsulados dentro de
media hora

art
30 - 60
minutos
hidratacin

PROCEDIMIENTO

recoleccin y
eliminacn del agua

PREPARACION DE LOS REACTIVOS PARA LA DESCAPSULACION


REACTIVOS REQUERIDOS POR GRAMO DE QUISTE SECO
Descapsulacin
- Cloro activo
0.5 gramos
(use hipoclorito de sodio: NaOCl)
- NaOH
0.33 ml de una solucin al 40 %
- Agua de mar
14 ml - NaOCL - NaOH

OOCC

7
8
9
/*
4
5
6
1
2
3
0+. -=
clculo de las cantidades de
cada producto

Neutralizacin
- Tiosulfato de sodio: Na2S2O3 : solucin al 0.1 %

EJECUCION DE LA DESCAPSULACION
PROCEDIMIENTO
- llenar el tanque para la descapsulacin con agua de mar e instalar las lneas de aireacin
- adicionar los productos en el orden siguiente:
- quistes de Artemia
- Hidrxido de Sodio (NaOH)
- Hipoclorito de Sodio (NaOCl)
- verificar la temperatura, la descapsulacin es una reaccin exotrmica: para garantizar la viabilidad del embrin la
temperatura del medio de descapsulacin debe ser siempre menos de 40 C; con temperaturas crticas se debe
adicionar hielo
- verificar microscpicamente cada 30 segundos el progreso de la descapsulacin (la disolucin de la cscara)
- cambio del color de los quistes: caf gris naranja (color del embrin)
- al final del proceso cosechar los embriones rpidamente, se los enjuaga con agua de mar abundantemente
- para neutralizar cualquier remanente de cloro, suspender los embriones ligeramente en la solucin de tiosulfato de
sodio y los enjuaga otra vez con agua de mar

USO Y PRESERVACIN DE LOS QUISTES DESCAPSULADOS


- uso directo: eclosionar los quistes inmediatamente bajo condiciones ptimas
- uso futuro:
- preservacin durante un mximo de 1 semana: en refrigeracin (0-4 C) despus que el exceso de agua haya sido
eliminada (filtracin de la pasta de embriones con malla de 120 m)
- preservacin por largo tiempo: deshidratacin de los embriones con salmuera saturada (conteniendo 300 g.l-1 de sal
disuelta)

SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA


Determinacin de las caractersticas de eclosin: eficiencia (EE) y
porcentaje (E%) de eclosin
PREPARACION DE LOS ANLISIS: ECLOSIN DE QUISTES BAJO CONDICIONES ESTNDARES

PROCEDIMIENTO

28C

- eclosin bajo condiciones estndares


(iluminacin permanente, temperatura
constante: 28 C)
- tiempo t=0: incubacin de 2 g de quistes en
800 ml de agua de mar
- tiempo t=2: aadir 200 ml de agua de mar
(para re-suspender los quistes pegados a
la pared del recipiente)
- tiempo t=24: toma de muestras (100 l
utilizando una micro-pipeta automtica)

24

duracin de la eclosin (h)

DETERMINACION DE LA EFICIENCIA DE ECLOSION (EE)

PROCEDIMIENTO

LUGOL

- fijar la muestra con unas gotas de LUGOL


- observacin microscpica y conteo del nmero de
nauplios: N (= 42 en el ejemplo ilustrado)
- clculo de la EFICIENCIA DE ECLOSIN (EE)
- cantidad de quistes incubados: C = 2 g
- volumen de la eclosin: V = 1000 ml
- volumen de la muestra: M = 100 l = 0.1 ml
- EFICIENCIA DE ECLOSIN
EE

N x V
=

42 x 1000
= 210000 nauplios.g-1

=
M C

0.1 2

DETERMINACION DEL PORCENTAJE DE ECLOSION (E%)

PROCEDIMIENTO
- la muestra previamente fijada con LUGOL y
analizada para la EE ser tratada con
HIPOCLORITO DE SODIO
las cscaras vacas y los quistes que no
eclosionaron se disuelven (descapsulacin)
de estos ltimos quedan los embriones
- observacin microscpica y conteo de los
embriones: E (=9 en el ejemplo ilustrado)
-clculo del PORCENTAJE DE ECLOSIN (E%)
- nmero de nauplios: N (= 42 en el ejemplo
ilustrado)
- nmero de embriones: E (= 9 en el ejemplo)
- PORCENTAJE DE ECLOSIN
E% =

N
N+E

42
42 + 9

= 82.3 %

HIPOCLORITO

SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA


Determinacin de las caractersticas de la eclosin: Tasa de eclosin
PREPARACION DE LOS ANLISIS: ECLOSION DE QUISTES BAJO CONDICIONES ESTANDARES

28C

14

15

16

24
duracin
de la eclosin (h)

PROCEDIMIENTO
LUGOL
- eclosin bajo condiciones estndar (iluminacin permanente,
temperatura constante: 28 C)
- tiempo t=0: incubacin de 2 g de quistes en 800 ml de agua
de mar
- tiempo t=2: aadir 200 ml de agua de mar (para resuspender quistes pegando a la pared del recipiente)
- tiempo t=14: toma de la primera muestras (100 l utilizando
una micro-pipeta automtica) y determinacin del E%
- tiempo t = 15 , t = 16, ... t = 24: repite las acciones de t =14

EJEMPLO
Al final de la experiencia se calcula la para cada muestra la EE relativa a la EE despus 24 h:
EE t
ERt =
100
EE 24
t: duracin de la
eclosin (h)
EE ( 106 nauplios.g-1 )

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

10

25

50

100

140

165

185

195

205

210

ER

2.4

4.8

11.9

23.8

47.6

66.7

78.6

88.1

92.9

97.6

100

VALORES TPICAS DE LA TASA DE


ECLOSIN
- t90 , t50 y t10 : los tiempos despus de los
cuales 90%, 50% y 10% de los quistes
viables han eclosionados
- ts = t90 - t10 : una valor terica dando una
estimacin de la sincrona de la eclosin;
lotes aceptables deben tener ts < 6 horas
- en el ejemplo ilustrado:
- t90 = 22 horas
- t10 = 15 horas
- ts = 7 horas
- t50 = 18.5 horas

SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA


Determinacin del tamao de los nauplios recin eclosionados
CALIBRACION DEL OCULAR
cuadrilla del hemocitmetro
Calibracin

cuadro estandard del


hemocitmetro: sss mm2

100

escala del ocular

65 unidades de la escala del ocular


corresponden con 4 x sss mm

campo del micrscopio

1 unidad corresponde con ttt mm

MEDICION DEL DIAMETRO DE LOS QUISTES DE ARTEMIA


quiste de Artemia

hidratacin de los quistes


2 h en agua de mar con
aireacin suave

observacin microscpica y determinacin del dimetro de los quistes


para una estimacin confiable se debe calcular el promedio de por lo menos
100 quistes

MEDICION DEL TAMAO (LONGITUD) DE NAUPLIOS DE ARTEMIA


incubacin de los
quistes y eclosin
de nauplios

nauplio de Artemia

LUGOL

preparacin de la
muestra

observacin microscpica y determinacin del tamao de los nauplios


para una estimacin confiable se debe calcular el promedio de por lo
menos 100 nauplios

RELACION ENTRE EL DIAMETRO DE


LOS QUISTES DE ARTEMIA Y EL
TAMAO DE LOS NAUPLIOS RECIEN
ECLOSIONADOS
(segn datos de Vanhaecke, 1983 y
Vanhaecke & Sorgeloos, 1980; en: Lger et
al., 1986)

PRODUCCION DE ROTIFEROS
Enriquecimiento

PREPARACION DE LOS ROTIFEROS


ENRIQUECIMIENTO EN EL MEDIO DE
CULTIVO

ENRIQUECIMIENTO EN AGUA NUEVA

Cosecha del cultivo masivo,


limpieza de los rotferos y
transferencia a un tanque
con agua nueva

PREPARACION DEL PRODUCTO DE ENRIQUECIMIENTO

OOCC

7
8
9
/*
4
5
6
1
2
3
0+. -=
clculo de la cantidad del

agitacin fuerte con licuadora de


cocina (3 minutos)

producto de enriquecimiento
peso de la cantidad requerida

EJECUCION DEL ENRIQUECIMIENTO


ENRIQUECIMIENTO EN EL MEDIO DE CULTIVO

Condiciones para el enriquecimiento de


rotferos

ENRIQUECIMIENTO EN AGUA NUEVA

t=0h
primera adicin: 0.15 g.l-1

- tanque: con fondo cnico (preferencial)


plano
- medio de enriquecimiento
- enriquecimiento en el medio de cultivo:
medio del cultivo
- enriquecimiento en agua nueva: agua de
mar normal de 18-22 ppt previamente
desinfectada y neutralizada con 5 ppm de
hipoclorito de sodio y tiosulfato de sodio
respectivamente

t=3h
segunda adicin: 0.15 g.l-1

- aireacin
- moderada, garantizando una concentracin
de oxgeno superior a 5 ppm
- agregar difusores de aire
- temperatura: 25-30 C

t=6h
-1

- densidad: 400-600 rotferos.ml

COSECHA

PRODUCCION DE ROTIFEROS
Esquema de produccin
Mantenimiento del stock

Tubo de ensayo

Cultivo masivo

Tanque cnico
-1

densidad (rotiferos.ml-1 )
inoculacin : 30
cosecha
: 150

densidad (rotferos.ml )
inoculacin :
1
cosecha
: 10
20 ml

tiempo de cultivo (das)


20

tiempo de cultivo (das)


4

50 l

densidad (rotferos.ml-1 )
inoculacin : 30-150
cosecha
:150-800
tiempo de cultivo (das)
4

200 l

Fiola
densidad (rotferos.ml-1 )
inoculacin :
1
cosecha
: 10

1000 ml

densidad (rotferos.ml-1 )
inoculacin : 30-150
cosecha
:150-800

tiempo de cultivo (das)


20

tiempo de cultivo (das)


4

500 l

Condiciones ptimas para el cultivo masivo de rotferos


- calidad del agua:
salinidad: agua de mar diluda con agua dulce hasta obtener
una salinidad de 18 -22 ppt
el medio de cultivo debe ser filtrado y clorinado (5 ppm de
cloro activo durante 1h) y finalmente neutralizado (5-6 ppm
de tiosulfato de sodio)
- temperatura: 25-28 C
- aireacin: bastante suave manteniendo la concentracin de
oxgeno > 2 ppm
los difusores de aire se suspenden 15 cm encima del fondo
del tanque

Preparacin del alimento


- algas
Nannochloropsis oculata:
5.106 celulas.ml-1
Tetraselmis maculata:
0.5.106 celulas.ml-1
las algas son producidas segn los procedimientos
normales de cultivo
se alimenta con algas una vez por da
- levaduras
levadura de pan: 1g.d-1 por cada milln de rotferos
levadura manipulada: entre 310-550 g.d-1 por cada milln de
rotferos, segn tabla de alimentacin
se disuelve la cantidad requerida por cada alimentacin en
agua de mar (hasta 50 g.l-1 ) y se lo agita durante 3 minutos
en una licuadora de cocina
la cantidad diaria se distribuye proporcionalmente para 4-6
raciones

Tanque rectangular con fondo plano


densidad (rotferos.ml-1 )
inoculacin : 30-150
cosecha
:150-800
5000 l

tiempo del cultivo (das)


4

Tabla de alimentacin (levadura


manipulada)
da del
cultivo
(#)

densidad
de rotferos
(rotferos.ml-1 )

alimentacin
(mg.10-6 .da-1 )

200

550

250

440

350

340

450

310

600

----

PRODUCCION DE ROTIFEROS
Rutina de trabajo
DA 0: INOCULACION DEL CULTIVO
Preparacin del tanque para un nuevo cultivo
- instalar las lneas de aireacin
- llenar el tanque con el medio de cultivo, clorinar y
neutralizar; si se aplica el mtodo Cultivo con
Volumen Constante (CVC) tambin proporcionar la
cantidad requerida de algas

aireracin
inculo

Inoculacin
- alrededor de 200 rotferos.ml-1

tanque de cultivo

cultivo de algas
(opcional
)

suspensin
de alimento

Alimentacin
- a base de 1 g de levadura de pan.d-1 por cada milln
de rotferos dividido en 4-6 raciones, para la levadura
manipulada se consulta la tabla de alimentacin

DAS 1-4(6): MANTENIMIENTO DEL CULTIVO

adicin de algas
(opcional)
conteo

clculo del alimento

alimentacin
(4x/d)
cultivo de
algas
(opcional)

preparacin del
alimento

tanque de
cultivo

Mantenimiento del cultivo


- estimar la densidad de rotferos
(como el promedio de varias
muestras de 100 l)
- calculo de la cantidad del alimento
para el da (a base de 1 g de
levadura (manipulada).d-1 para cada
milln de rotferos
- preparacin del alimento
- alimentacin (4-6 raciones por da)
- proporcionar la suspensin de algas
(opcional)

DA 4(6): COSECHA DEL CULTIVO

Cosecha del cultivo


80 %

20 %
tanque de
cultivo

produccin
neta

inculo

malla de 60 m

hipoc
hlo
de
limpiar y desinfectar el tanque
cosechado

vaco sanitario
(1 da)

Cosecha del cultivo


- se divide la cosecha en dos partes: con la primer
a parte (20 % de la cosecha total) se inocula un
nuevo cultivo, la segunda parte (80 %, siendo la
produccin neta) servir como alimento para las
larvas
- el tanque cosechado ser limpiado y desinfectado
segn la manera usualmente aplicada en tanques
de eclosin de Artemia
- antes de re-utilizar el tanque para un nuevo
cultivo se lo deja secar durante un da (vaco
sanitario)

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