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MARA
Informe Cientfico
RESUMEN
INTRODUCCION
OBJETIVOS
1.
2.
3.
4.
5.
FUNDAMENTO TEORICO
Lavarse siempre las manos despus de cada proceso , y antes de salir del
laboratorio.
Se debe evitar que las mangas, pulseras, etc. Entren en contacto con los reactivos o
muestras que se est manipulando.
Se deben cerrar los grifos y llaves de agua, gas, etc. Y desconectar los aparatos
utilizados durante la prctica.
Otros
MATERIALES DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
-
Materiales de Vidrio
Materiales de Metal
Materiales de Porcelana
Equipos
Reactivos y Medios de cultivo
PREPARACION DE MEDIOS
Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la
superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes
que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto
de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra
formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las
clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos,
cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta
por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se
siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.
Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible
diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de
bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo
especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la
mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est
presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que
slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que
cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan
catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases
que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros
medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren
los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los
glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas
de agar-sangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio
de microbiologa, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades
infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias.
SIEMBRAS Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
Como un resultado del tamao pequeo de los microorganismos, la cantidad de
informacin acerca de sus propiedades y caractersticas que puede ser obtenida de cada
individuo es limitada. Por lo tanto se estudia poblaciones conteniendo millones billones
de individuos.
Dichas poblaciones son obtenidas por crecimiento de microorganismos bajo condiciones
bien definidas llamadas Cultivos.
Dado que los microorganismos no requieren de mucho espacio para desarrollar, por lo
tanto se le puede crear un medio ambiente artificial en un tubo, frasco placa Petri, siendo
stos tres tipos ms comunes para dichos cultivos.
Teniendo en cuenta que los microorganismos son ubicuos es decir que se encuentran en
cualquier ambiente, pueden aislarse igualmente de diversos substratos, la decisin para
elegir un substrato de muestreo depende del grupo de Microorganismos de inters.
Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microorganismos a partir de muestras
complejas (suelo, agua, aire, alimentos, etc.) en las que hay una gran diversidad
microbiana, as como para comprobar la pureza de los cultivos obtenidos.
Los cultivos puros estn formados por un solo tipo de microorganismo; y son indispensables
para conocer las caractersticas morfolgicas, propiedades de tincin, actividad bioqumica,
patogenicidad, sensibilidad a antibiticos e identificacin de las especies microbianas.
Algunas veces los microorganismos se han adaptado a condiciones muy especficas y
podrn requerir procedimientos de trabajo para aislamiento y siembra especiales como es el
caso de microorganismos anaerobios, auttrofos, etc.
El aislamiento de cultivos microbianos puede realizarse por mtodos de dilucin, en medios
slidos por estra en placa o en medios lquidos. En el primer caso se considera que cada
clula bacteriana que se separa dar origen a una poblacin que formar una colonia
caracterstica, visible a simple vista.
La limitacin principal de estas tcnicas de dilucin, es que no es prctica para el
aislamiento a partir de mezclas donde el microorganismo de inters se encuentra en
pequeas cantidades, donde solamente se obtendrn las bacterias dominantes. Por lo que
para favorecer el aislamiento de cultivos de baja densidad, se aplican mtodos de cultivo en
medios que contienen nutrientes especiales, antibiticos, altas concentraciones de sales y/o
condiciones de pH, luz o temperatura para favorecer el crecimiento del microorganismo de
inters (medios selectivos).
Un medio de cultivo se define como un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos.
La diversidad metablica de los microorganismos es enorme, al igual que la variedad de
medios de cultivo. Los cuales mayormente se comercializan en forma de liofilizados que es
preciso rehidratar, siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolbiles se
esterilizan por filtracin y se aaden al resto de los componentes previamente esterilizados
en el autoclave.
Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son: Agar, Extractos, Azcares,
peptonas, etc
Los cultivos deben de ser hechos en forma completamente estril.
SIEMBRA EN PLACA (TCNICA DE ESTRA CRUZADA):
En la parte posterior y exterior de la caja, dividirla en cuatro cuadrantes. Tomar una muestra
con el asa previamente flameada y fra, inocular la muestra haciendo 4-5 estras simples
muy juntas de lado a lado sobre el primer cuadrante de la placa.
Flamear el asa de inoculacin y hacer girar la caja de Petri un cuarto de vuelta. Abrir
nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la superficie del medio lejos de la
zona de estras recin hechas.
Rozar con el asa una vez la superficie del conjunto original de estras y hacer un segundo
grupo de estras en el segundo cuadrante como en el caso anterior. Repetir el
procedimiento anterior en el tercer cuadrante y al efectuar la siembra en el ltimo cuadrante,
no se deber flamear el asa de siembra y se har una estra ms abierta (simple).
SIEMBRA EN AGAR INCLINADO:
Se introduce el asa de siembra en el tubo con cultivo crecido y se toma un inculo que se
extiende sobre el agar inclinado deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag.
En el caso del medio TSI, la siembra se deber realizar tanto en superficie (aerobiosis)
como en la profundidad del agar (anaerobiosis).
Una vez sembrados, colocar los cultivos a incubar a 37 C de 24 48h o hasta que se
observe crecimiento bacteriano. Si la evaluacin no se hace despus del periodo
mencionado, conservar las placas petri y los tubos con cultivo a 4C.
Otros tipos de siembra:
1.
Siembra por inmersin: se coloca el inculo en una placa Petri y sobre el mismo se
vierte el medio de cultivo previamente fundido. Se utiliza para microorganismos aerobios.
2.
Siembra en doble capa: similar por inmersin. Una vez solidificado el medio se
vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa . Este mtodo se utiliza
para microorganismos anaerobios facultativos y microaeroflicos.
3.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
autoclavado se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inculo, se extiende el
inculo hasta su absorcin total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda
para microorganismos aerobios estrictos.
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES:
Materiales base para preparar los siguientes medios de cultivo:
Otros Materiales:
Pipetas de 1 o 2 mL
Pipetas de 10 mL
Probetas
Mecheros
Incubadora a 37C
Equipos:
Parrilla de calentamiento
Autoclave
Balanzas
Estufa a 37
Esterilizadores
Medios de Cultivo:
Otroa materiales:
Mecheros
Asa de inoculacin
Incubadora
Muestras
Autoclave
METODOS
A. LAVADO Y ESTERILIZACIN DEL MATERIAL DE TRABAJO
Lavar las placas de Petri y pipetas con escobilln y detergente. Enjuagar con
abundante agua corriente.
Una vez seco el material, se proceder a envolver las placas de Petri y pipetas con
papel kraft.
Distribuir el medio en las placas de Petri que estn estriles dentro de una
campana de flujo laminar o en las proximidades del mechero, flameando bien
la boca de la botella para evitar las contaminaciones.
Autoclavar.
Sacar del autoclave e inclinar los tubos sobre una superficie angulada y dejar
que el medio solidifique.
Siembra
Seleccin de colonias y siembra en tubo
1. Tcnica aplicable en caso de tener crecimiento de colonias en una placa petri.
2. Examinar la placa estriada y escoger una colonia aislada marcando su posicin
con un circulo por el lado inferior de la placa petri.
3. Flamear la aguja de inocular.
4.Levantar la parte superior de la placa petri para sacar una porcin del cultivo
bacteriano seleccionado.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
Gua de laboratorio Microbiologa Ambiental - Adilmi Milagro Teran Dianderas, Maria Rosario
Valderrama Valencia
NFORMATOGRAFIA
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/preparacion-demedios-de-cultivo
http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoI.pdf