3. Investigar diferentes mtodos de preservacin celular.

Preservacin a corto plazo

El microorganismo en cuestin se siembra en su medio adecuado y una vez crecido se
guarda a 4C donde se mantiene unos das para su uso y se vuelve a resembrar en un
tiempo no mayor a un mes. El gran problema de la resiembra continua de un
microorganismo, es que se pueden generar mutaciones y adaptacin al medio de cultivo, lo
que termina generando cepas domesticadas cuyo comportamiento ya no representa a la
especie inicialmente aislada.
Existen otros mtodos de conservacin alternativos bastante utilizados para diversos tipos
de microorganismos como los hongos filamentosos, las levaduras y algunas bacterias. Un
mtodo consiste en suspender a los microorganismos en agua destilada estril o agua de
mar estril (en el caso de microorganismos marinos). Para hongos filamentosos que no
esporulan se pueden poner trocitos de agar en suspensin con el crecimiento del hongo.
En agua algunas bacterias podran morir y liberar sus componentes, que a su vez, podran
ser usados por otras bacterias para su crecimiento consecutivo. Por esta razn, en cada caso
ser importante evaluar la tasa de mutacin que los microorganismos podran sufrir bajo
esta condicin de resguardo. Para evitar la domesticacin y mutacin de bacterias (durante
su resguardo), se ha intentado inactivar su metabolismo, mediante tcnicas de resguardo
conocidas como mtodos restringidos. Estos mtodos se basan en la paralizacin del
crecimiento bacteriano mediante la eliminacin del agua disponible de la clula; donde se
permite la desecacin de bacterias en un soporte inerte y estril. En este caso las bacterias
se pueden colocar en soportes como papel filtro, bolitas de alginato e incluso sal gorda. Es
importante destacar que la desecacin en bolitas de alginato es un procedimiento bastante
eficaz para preservar bacterias; donde las clulas son conservadas en tubos estriles,
cerrados hermticamente y a una temperatura de entre 4C y 18C. La desecacin en sal
gorda, es un mtodo usado para halobacterias; en el cual, las clulas se mezclan con una
solucin de sal gorda y se secan aprovechando la higroscopicidad de la sal, la desecacin
no es total, pero las clulas dejan de multiplicarse por el nivel insuficiente de agua
disponible en el medio.
En varios de los mtodos de preservacin a corto plazo el riesgo de contaminacin celular
es alto debido a que los microorganismos estn expuestos a condiciones ambientales
normales. En el caso especfico de desecacin, las clulas sufren estrs por oxidacin y
prdida de agua, razn por la que el nmero de clulas viables disminuye notablemente,
especialmente para microorganismos sensibles.

Preservacin a mediano plazo

Este es un mtodo que requiere un laboratorio con una infraestructura costosa y el uso de
ultracongeladores que conservan a las clulas a -80C. El mtodo conocido como

congelacin ha resultado muy fcil de desarrollar y muchos laboratorios en el mundo lo

han elegido por su fcil manejo.
Para preservar microorganismos por congelacin, primero se cultiva al microorganismo en
cuestin y se deja crecer hasta la fase estacionaria temprana, las clulas del cultivo se lavan
o no con una solucin tampn y despus son adicionadas con un volumen equivalente de
una suspensin que contiene una sustancia que deber funcionar como protectora de las
clulas a la congelacin (crioprotector). Algunas veces se fracasa en preservar a un
microorganismo por congelacin. Esto podra ser debido a que las bacterias mueren si no se
usa el protector adecuado. Sin estos compuestos podran formarse agujas de agua y tambin
se genera un estrs osmtico debido a la baja disponibilidad de agua que ocurre durante el
proceso de congelacin. No obstante, la ventaja ms grande de este mtodo es que es muy
rpido y fcil de llevar a cabo.

Preservacin a largo plazo (liofilizacin)

Las clulas se resguardan mediante una metodologa alternativa conocida como
desecacin lquida, debido a que son sensibles a la desecacin rpida experimentada en la
liofilizacin. Debe de tomarse en consideracin que para incrementar la supervivencia de
las clulas que se resguardan bajo condiciones de liofilizacin, se ha implementado el uso
de sustancias que actan como protectoras (lioprotectores) y se tiene que explorar la
sustancia que protege a la bacteria que se desea resguardar.
La liofilizacin consiste fundamentalmente en extraer por sublimacin, bajo condiciones
de alto vaco, el agua de las clulas congeladas; que pasa directamente a un estado de vapor
debido a que no hay presin molecular que lo impida. En este mtodo, las muestras que
contienen la suspensin de microorganismos, son previamente congeladas (usando
nitrgeno lquido) e inmediatamente expuestas al vaco.
El vapor de agua extrado es atrapado por un condensador de refrigeracin que opera a
-110C. El vaco debe ser casi absoluto (menos de 10mTorr; 10m de Hg), lo que provoca
la evaporacin del hielo con la consiguiente prdida de calor que se produce en el proceso.
Por lo tanto, un liofilizador necesita una bomba de alto vaco, un condensador y
aditamentos para el funcionamiento principal.

4. Investigue los cuidados que se deben tener durante el trabajo en una campana de flujo
laminar.
Se debe introducir lentamente las manos dentro del rea de trabajo. Realizar los procesos y
tareas de forma metdica y cuidadosa.
Evitar tcnicas o procedimientos que puedan alterar los patrones de flojo del aire dentro de
la cabina.

Mantener todos los materiales, al menos cuatro pulgadas, dentro del marco de la ventana
frontal de la cabina. Realizar hacia el fondeo del rea de trabajo de la cabina todas las
operaciones contaminantes.
Evitar el uso de llamas abiertas. No debe trabajarse con mecheros dentro de la cabina de
seguridad biolgica. La llama que producen rompe el patrn de flujo laminar e incluso
puede llegar a quemar el filtro HEPA. En su lugar, trabajarse con incineradores tipo
elctrico.
Evitar retiro de las manos del rea de trabajo hasta que todos los procedimientos hayan sido
completados y todo el material potencialmente peligroso haya sido ubicado en las bolsas o
recipientes para manejar los desechos peligrosos.

Referencias:

Morales Y., Duque E., Rodrguez O., de la Torre J., Martnez R.,
Prez R., Muoz J.. (2010). Bacterias Preservadas, una Fuente
Importante de Recursos Biotecnolgicos. Biotecnologa, 14, 1317.
http://www.smbb.com.mx/revista/Revista_2010_2/GALERAS_47.pdf

Organizacin Panamericana de la Salud. (2002). Cabinas de

seguridad biolgica: Uso, desinfeccin y mantenimiento.
Washington, D.C.: Organizacin Panamericana de la Salud.
Tambin disponible en:
http://apps.who.int/medicinedocs/documents/s16575s/s16575s.pdf