Algas para Aceite y Espirulia Piel PDF

Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal
Volumen 1 No. 1, 2010

RELBAA
Revista Latinoamericana de
Biotecnologa Ambiental y Algal
RELBAA
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ISSN en trmite. Nmero de folio 00000-355

Cdula de integracin Nm. 00000-354

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Editor en Jefe
Eugenia J. Olgun
Instituto de Ecologa, A.C., Mxico
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Editor Asociado
Gloria Snchez Galvn
Instituto de Ecologa, A.C., Mxico
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Comit Editorial
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Diseo del Estado de Jalisco,
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REVISTA LATINOAMERICANA DE BIOTECNOLOGA AMBIENTAL Y ALGAL // INSTITUTO DE ECOLOGA, A.C.
Km. 2.5 carretera antigua a Coatepec No. 351 Congr. El Haya. Xalapa, Veracruz, 91070, Mxico.

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Editor Asociado
Gloria Snchez Galvn
INECOL
MEXICO
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RELBAA
Objetivos y Temtica
La Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal (RELBAA), es la
primera revista en la regin, dedicada a la publicacin de trabajos inditos de
carcter cientfico y/o de desarrollo tecnolgico, revisiones crticas y notas cientficas
relacionados con la biotecnologa ambiental y algal, y tambin con bioprocesos ms
limpios para el desarrollo sustentable. Asimismo, ofrece un foro para que la
comunidad cientfica y tecnolgica latinoamericana, comunique sus investigaciones en
el mbito internacional. Los manuscritos enviados se sometern a un proceso riguroso
de revisin por pares.
Se considera a la Biotecnologa Ambiental como un campo multidisciplinario que
integra las ciencias y la ingeniera con el objeto de aprovechar el potencial bioqumico
de los microorganismos, plantas, animales y su material gentico, para desarrollar,
usar y regular sistemas biolgicos para la remediacin de ambientes contaminados
(suelo, aire, agua), as como para generar procesos ambientalmente pertinentes para
el uso sustentable de los recursos naturales y la conservacin del medio ambiente.
Por otra parte, se considera a la Biotecnologa Algal como un campo en donde se
integran las ciencias y la ingeniera para el aprovechamiento de las microalgas y de las
macroalgas con la finalidad de generar nuevos productos de inters alimentario,
farmacutico o energtico y/o para lograr el reciclaje de nutrientes de aguas
residuales y/o la captura de carbono y su transformacin en biomasa algal.
Finalmente, es importante sealar que en esta revista tambin se incluye la
temtica de los Bioprocesos ms Limpios, en consideracin a que contribuyen al
desarrollo industrial sustentable. Se adopta la definicin de Produccin ms Limpia de
Naciones Unidas: es la aplicacin continua de una estrategia ambiental integrada y
preventiva a procesos, productos y servicios para incrementar la eco-eficiencia y
reducir riesgos a los seres humanos y el medio ambiente.
La revista es una publicacin semestral a cargo de un grupo de investigadores del
rea de Biotecnologa Ambiental del Instituto de Ecologa, A.C. Ocasionalmente
aparecern nmeros especiales. Se aceptan trabajos en espaol, ingls y portugus.
Considerando que la tendencia actual es la publicacin en formato electrnico
logrando ahorro de papel, esta revista se publicar exclusivamente en este formato y
estar accesible al pblico en general sin costo, por lo menos el primer ao. Sin
embargo, es esencial que los usuarios citen los artculos dando crdito a los autores y
a la revista, citando la referencia completa como aparece en todas las pginas de
cada uno de ellos.

RELBAA
CONTENIDO
Vol. 1 No. 1
2010
Artculos originales de investigacin

Effect of culture medium and nutrient concentration on fatty acid content of
Chaetoceros muelleri
Juan Manuel Pacheco Vega, Marco Antonio Cadena Roa, M. del Pilar Snchez Saavedra,
Dariel Tovar Ramrez y Carlos Rangel Dvalos (Mxico) ............................................................. 6
Variacin estacional de arsnico total en algas comestibles recolectadas en el Golfo San
Jorge (Chubut, Argentina)
Adriana A. Perez, Laura B. Perez, Analia M. Strobl, Silvina Camarda, Silvia S. Farias, Clara
M. Lpez y Mara A. Fajardo (Argentina) ................................................................................... 16
Eliminao autotrfica de nitrognio pela oxidao de tiossulfato atravs de uma
cultura mista de microrganismos
Rafael S. Amim, Fabrcio B. Santana, Willibaldo Schmidell y Hugo M. Soares (Brasil) ............ 31
Revisiones crticas
Mecanismos de interaccin con cromo y aplicaciones biotecnolgicas en hongos
J. Flix Gutirrez Corona, ngeles E. Espino Saldaa, Alejandro Coreo Alonso, Francisco
Javier Acevedo Aguilar, Georgina E. Reyna Lpez, Francisco Jos Fernndez, Araceli
Tomasini, Kazimierz Wrobel y Katarzyna Wrobel (Mxico) ....................................................... 47
Arthrospira platensis como biofactora de metabolitos secundarios de inters
farmacolgico: el cido pipeclico
Leopoldo Naranjo-Briceo, Diego Rojas-Tortolero, Hctor Gonzlez, Rubn Torres Parra,
Jorge Zegarra Narro, Luca Sena DAnna, y Daynet Sosa del Castillo (Venezuela) .................... 64
Las microalgas oleaginosas como fuente de biodiesel: retos y oportunidades
Maribel M. Loera-Quezada y Eugenia J. Olgun (Mxico) .......................................................... 91
Nota Cientfica
Spirulina (Arthrospira) platensis en la prevencin del fotodao celular producido por luz
ultravioleta en ratones CF1
Luca Lpez-Agero, Mnica M. Storni, M. Cristina Zaccaro, Ana M. Stella y Gloria
Zulpa (Argentina) ........................................................................................................................ 117
Pacheco et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):6-15

6
Artculo original de investigacin
Effect of culture medium and nutrient concentration on fatty

acid content of Chaetoceros muelleri
Juan Manuel Pacheco Vega1*, Marco Antonio Cadena Roa1, M. del Pilar Snchez
Saavedra2, Dariel Tovar Ramrez3 y Carlos Rangel Dvalos1
1
Universidad Autnoma de Baja California Sur (UABCS), Apartado Postal 19-B. C.P. 23080.
La Paz, Baja California Sur, Mxico.
2
Centro de Investigacin Cientfica y de Educacin Superior de Ensenada (CICESE). Departamento de
Acuicultura, Kilmetro 107 Carretera Tijuana-Ensenada. Apartado Postal 2732 C.P. 22860.
Ensenada, Baja California, Mxico.
3
Centro de Investigaciones Biolgicas del Noroeste (CIBNOR) S.C. Apartado Postal 128, C.P. 23000.
La Paz, Baja California Sur, Mxico.
*
Author of correspondence: pacheco@uabcs.mx
Resumen
Los cidos grasos en microalgas bajo cultivo pueden ser modificados por las condiciones de
cultivo. La propuesta de este trabajo fue determinar el efecto de las formas de nitrgeno y su
concentracin en el contenido de cidos grasos polinsaturados (PUFA) de Chaetoceros muelleri.
La microalga C. muelleri fue mantenida en cultivos estticos a 19C y una intensidad de luz de
150 mmol m-2s-1. El medio fue utilizado como control. Las microalgas se cultivaron en tres
diferentes concentraciones de medio de cultivo (f, f/2 y f/4). El medio de cultivo experimental
fue preparado con fertilizantes agrcolas lquidos (AF) en tres diferentes concentraciones (AF,
AF/2 y AF/4). La microalga se cosech en la fase exponencial. La extraccin de cidos grasos
fue por transterificacin directa y su cuantificacin por cromatografa de gases. El mayor
porcentaje de cidos grasos altamente insaturados (HUFA) se obtuvo al utilizar el medio f/2
(8.65%), mientras que el menor porcentaje se obtuvo al utilizar el medio a base de fertilizantes
agrcolas (5.78%). Se encontr una relacin directa entre la cantidad de HUFA y la
concentracin de nutrientes en ambos tipos de medio de cultivo. Se concluye que para obtener el
mayor contenido de HUFA en C. muelleri, sta debe ser cultivada en el medio f/2 o su
equivalente AF/2. Adicionalmente, dicha prctica disminuye el costo de nutrientes.
Palabras clave: microalgas, Chaetoceros muelleri, cidos grasos, fertilizantes agrcolas, medio
de cultivo.
Abstract
Fatty acid content in microalgae can be modified by culture conditions. The purpose of this study
was to determine the effect of nitrogen sources and their concentration in the polyunsaturated
fatty acid (PUFAs) contents of cultured Chaetoceros muelleri. Chaetoceros muelleri was batch
cultured at 19C and a continuous light intensity of 150 mmol m-2s-1. Three different
concentrations of culture medium (f, f/2 and f/4) were used. The experimental medium was
7
prepared with liquid agricultural fertilizers (AF) in three concentrations (AF, AF/2 and AF/4).
Chaetoceros muelleri was harvested at lag phase. Extraction of fatty acids was performed by
direct transesterification and quantified by gas chromatography. The highest HUFA percentage
was obtained with f/2 medium (8.65%), while the lowest was obtained with AF/2 medium
(5.78%). A direct relationship between HUFA concentration and nutrient concentration in both
culture media was found. It is concluded that C. muelleri must be cultured with f/2 medium or
its equivalent AF/2 in an effort to obtain the highest HUFAs content. Additionally, the use of
AF/2 medium results in a more cost effective option.
Key words: microalgae, Chaetoceros muelleri, fatty acids, agricultural fertilizers, culture
medium.
1. Introduction
Microalgae cultures are used to feed fish
larvae, crustacean larvae and mollusks in all
stages (Meireles et al. 2003). Survival and
growth of these organisms is determined by
the nutritional quality of these cultures,
which is also related to the content of highly
polyunsaturated fatty acids (HUFAs)
(Spektorova et al. 1986; Meireles et al.
2003). Polyunsaturated fatty acids (PUFAs)
have specific physiological functions such as
being structural components of phospholipid
biomembranes (Trautwein 2001, Miliou et
al. 2006).
Several groups of marine
organisms (e.g. fishes and shrimps) require
an exogenous incorporation of PUFA due to
their inability to synthesize them. The
biochemical composition of microalgae can
be modified as a function of culture
conditions such as temperature, light
intensity and spectral composition, source
and concentration of nitrogen (Reitan et al.
1994). Among the different microalgae
species used in aquaculture, C. muelleri is
one of the most commonly used due to its
biochemical composition and ease of
production.
Agricultural fertilizers are widely used in the
preparation of media for microalgae in
outdoor cultures for commercial aquaculture
in Northwest Mxico (Lpez-Elas et al.
2005).
However, fertilizers frequently
contain more than one nitrogen source. This
may affect their relative availability for

microalgae uptake and growth, causing
variations in biomass yield and biochemical
composition (Lourenco et al. 2002;
Richmond 2003). The aim of this study was
to compare the production of HUFA by C.
muelleri grown with different concentrations
of a standard medium (f medium) and with a
non-conventional medium obtained from
agricultural fertilizers containing different
nitrogen sources (e.g. urea, ammonium and
nitrate).
2. Materials and methods

2.1 Culture maintenance
The C. muelleri strain used in this study was
obtained from the microalgae culture
collection of the Centro de Investigacin
Cientfica y de Educacin Superior de
Ensenada (CICESE). The main strain was
isolated from the Oceanic Institute of
Hawaii, USA in 1981. The culture was kept
non-axenic and in f/2 medium (Guillard
1975) at 19 C with continuous white light at
150 moles m-2s-1. The experiments in this
study were conducted at Pichilingue
Aquaculture
Laboratory
(latitude:
2416'12.80"N, longitude: 11019'19.20"W)
at the Universidad Autonoma de Baja
California Sur.
Seawater was filtered through 10, 5 and 1
m cotton filters and UV irradiated. For
culture maintenance, seawater was sterilized
8
as described by Guillard and Ryther (1962).
For plastic bag cultures, seawater was
disinfected as mentioned by Hemerick
(1973).
Agricultural fertilizers were
prepared with 72% phosphoric acid as the
source of phosphorous plus a liquid
fertilizer, with 32% total nitrogen provided
as urea (16.4%) and ammonium nitrate
(15.6%). These proportions matched the

phosphorous and nitrogen concentrations of
the f/2 medium. The f/2 medium (Guillard
1975) was used as control. For both culture
media, three nutrient concentrations were
used: f, f/2, f/4 and AF, AF/2, AF/4
(Table 1)
Table 1. Nutrient composition and concentration of the different culture media used in the present study.
Component /
Macronutrients
Nitrogen: Nitrate (7.8%),
Ammonium (7.8%), Urea (16.4 %).
Phosphoric acid
AF
AF/2
AF/4
f/2
f/4
mL L-1
ml L-1
mL L-1
mg L-1
mg L-1
mg L-1
118.4
59.2
29.6
150*
75*
37.5*
4.8
2.4
1.2
Sodium phosphate
Silica
Micronutrients
EDTA-Fe
10
2.5
1000.0
500.0
250.0
60
30
15
-1
-1
-1
-1
L-1
g L-1
gL
gL
gL
gL
8.6
4.3
2.1
8.6
4.3
2.1
Copper sulfate
19.6
9.8
4.9
19.6
9.8
4.9
Zinc sulfate
44.0
22.0
11.0
44.0
22.0
11.0
Cobalt chloride
20.0
10.0
5.0
20.0
10.0
5.0
Manganese chloride
360.0
180.0
90.0
360.0
180.0
90.0
Sodium molybdate
126.0
63.0
31.5
126.0
63.0
31.5
-1
-1
-1
-1
-1
mg L-1
Vitamins
mg L
mg L
mg L
mg L
mg L
Biotin
2.0
1.0
0.5
2.0
1.0
0.5
Cyanocobalamin (B12)
2.0
1.0
0.5
2.0
1.0
0.5
40.0
20.0
10.0
40.0
20.0
10.0
Thiamine HCl (B1)

*Only nitrate
2.2 Acclimation of the microalgae in the

culture media
Triplicate non-axenic cultures were kept for
eight days in 250 ml Erlenmeyer flasks with
150 ml of the three control nutrient
concentrations (f, f/2, f/4) and nonconventional (AF, AF/2, AF/4) culture
media. For each culture condition plastic
translucent bags of 28 cm x 66 cm (9 L),
were conducted in triplicate.
Cell concentrations were measured daily
with a Beckman DU 640 spectrophotometer
at 550 nm. The pH was measured daily with
an Orion 301 pH meter and maintained at 7-
8. The specific growth rate was measured as

described by Fogg and Thake (1987). The
cultures were maintained at 19 C with
continuous light at 150 moles m-2s-1.
Triplicate samples were used to evaluate
biomass production and cell composition.
Total dry weight was determined
gravimetrically according to Sorokin (1973).
Protein content was determined according to
Lowry et al. (1951) modified by Malara and
Charra (1972).
Carbohydrates were
determined according to White (1987) and
Dubois et al. (1956).
Lipids were
determined colorimetrically according to
9
Pande et al. (1963), after extraction with the
method of Bligh and Dyer (1959) modified
by Chiaverini (1972).
2.3 Extraction and characterization of fatty
acids
Samples of each experimental condition
(400 mL) were collected on the fourth day of
culture post acclimation. Each sample was
concentrated to 30 mL by centrifugation at
3000 rpm for 18 min using an IEC Centra
GP8R. Samples were then lyophilized with
a LABCONCO freeze dry system/freezone
4.5. The extraction of fatty acids was done
by direct transesterification (Carrapiso and
Garcia 2000). Injection of the samples was
then performed in a gas chromatograph,
Varian CP-3800, fitted with a Mass Detector
1200L. The samples were injected in 1 l
volumes into a capillary column Omegawax
250 of Funded Silica with dimensions of
30m X 0.25 mm X 0.25 um (SUPELCO).
The carrier gas was helium (99%) at a flowrate of 1.2 ml min-1. Identification of fatty
acids was made by comparing the obtained
retention times with those of commercial
standards of methyl-esters of PUFA (Kit,
SIGMA). In addition, further confirmation
was performed by comparing the masses of
the obtained compounds with those in a
mass spectra (NBS75K and NIST98) library.
2.4 Statistic analysis
Statistical analysis was performed using
STATISTIC 7.0 software for Windows
(Statsoft, USA). Percentage data obtained
from the proximal composition and fatty
acid profiles were arcsine-square-root
transformed prior to analysis. Differences in
cell concentration, specific growth rate, dry
weight and proximal composition of C.
muelleri cultured under the experimental
conditions were determined by one-way
analysis of variance (ANOVA). When

variances were homogeneous and residuals
were normally distributed, a Tukey a
posteriori test was used to identify
significant differences among treatments (P<
0.05). Differences in the percentage of each
fatty acid as a function of the culture media
and concentration of nutrients were
determined with a two-way analysis of
variance.
3. Results
Cell concentration and growth rate was
significantly different among treatments
(P<0.05). The lowest density was obtained
in the treatment AF/4, while maximum
density was obtained with the AF treatment.
Significant differences were found in the
growth rate among treatments (P<0.05)
(Table 2). The microalgae had the slowest
growth rate in AF/4 medium, while
maximum growth rates were observed with
the f, f/2 and AF/2 media (Table 2).
In terms of the proximal composition, the
highest protein content was observed with
the AF, AF/2, AF/4, f and f/2 treatments,
which f/4 had lower protein content
(P<0.05). Regarding lipid content, no
significant differences were observed for the
culture media treatments (P>0.05). The
carbohydrate content was not significantly
different among treatments (P>0.05) (Table
2).
The major saturated fatty acid (SFA) was
obtained AF/4 medium, while AF, AF/2, f,
f/2 and f/4 had lower content (Table 3).
There were significant differences in the
fatty acid profiles of monounsaturated
(MUFA) polyunsaturated (PUFA) and
highly unsaturated fatty acids (HUFA) of C.
muelleri due to the culture medium and
concentration (P< 0.05).
10
Table 2. Mean values and standard deviations of cell concentrations (106 cells ml -1), specific growth rate
(divisions day-1), dry weight (g per 106 cells) and proximate composition (as percentage of dry weight) of
Chaetoceros muelleri cultures in f and AF media prepared with agricultural fertilizer (AF) at different
nutrient concentrations. Standard deviation is indicated in brackets; values with the same letter within the
same row indicate that they are not significantly different (P>0.05; a>b>c>d>e>f).
Parameter
Culture medium
f
Cell concentration
f/2
1846.8
2482.1
d
Specific
f/4
AF
488.1
3818.7
2907.5
(45.1)
(478.3)
(141.2)
(19.4)e
0.832
0.914
0.479
0.860
0.548
0.378
(0.02)
(0.11)
(0.11)
(0.13)
(0.10)
(0.07)c
Proteins
28.9
29.9
22.7
25.1
27.2
29.6
Lipids
(0.6)
(0.2)
(0.7)
(3.2)
(3.6)a
6.5
7.0
6.1
6.5
7.3
7.2
Carbohydrates
Dry weight
(0.6)
(0.9)
(0.2)
(0.3)a
16.4
17.8
18.0
18.2
19.6
21.4
(2.0)a
(2.6)a
(1.2)a
(0.1)a
(2.7)a
(2.2)a
57.5
58.0
71.4
54.6
52.6
77.4
(5.2)
(2.0)
The lowest SAFA concentration was found

in f media (50.33%) and the highest in AF/2
media (63.95%).
The lowest MUFA
concentration was found in the AF/4
treatment (28.45%) and the highest value
was for F/4 treatment (36.51%). The lowest
PUFA was for AF/4 media (4.62%) while
that the highest value was for f/2 treatment
(17.18%).
Significant differences were obtained in the
concentration of HUFAs (P<0.05) such as
arachidonic acid (ARA), eicosapentaenoic
acid (EPA) and docosahexaenoic acid
(DHA) due to culture medium and
concentration.
The lowest HUFA percentages were
observed in treatment AF/4 (1.25%) and the
highest percentage was for treatment f/2
(8.65%). The EPA (20:5 n-3) levels in both
culture media and all concentrations were
significantly different (P<0.05).
Arachidonic acid (20:4 n-6) was not detected
in the AF treatment. Docosohexaenoic acid
(6.8)
(0.2)
(0.1)
(3.4)
growth rate
803.7
(206.9)
a
AF/4
(152.9)
a
AF/2
(5.0)
(2.2)
(6.8)a
(22:6 n-3) was only detected in the AF/2

treatment (Table 3).
4. Discussion
The biochemical composition of C. muelleri
can be altered by the culture medium and the
nutrient concentration in the medium. As
expected, those media with the lowest
concentrations of nutrients (f/4 and AF/4)
showed the lowest cell densities, possibly
due to the effect of low nutrient
concentration on the metabolic processes of
the microalgae (Darley 1987). Different
nitrogen sources could have affected
microalgae growth, as it is well known that
in plant tissues nutrient assimilation and
transport is modulated by nitrogen sources.
For instance, reduced nitrogen forms
(ammonium and urea) are preferred over
more oxidized forms, such as nitrate or
nitrite (Iriarte et al. 2007).
11
Table 3. Mean values of fatty acids of Chaetoceros mulleri cultures in f and AF media with different nutrient
concentrations. Data is presented as percentage of fatty acids; values with the same letter within the same row
indicate that they are not significantly different (P>0.05; a>b>c>d>e>f).
Fatty acid
Culture medium
f
f/2
f/4
AF
AF/2
AF/4
18.35 b
1.10 a
28.70cde
Trace
1.25 b
0.48 b
24.19 ab
1.05 a
21.55 d
0.05 c
3.38 a
0.57 b
13.69 c
1.19 a
36.28 b
0.10 a
0.15 a
25.68 a
1.40 a
25.07 de
0.08 b
0.28 d
0.17 d
15.32 bc
1.17 a
32.38 ce
0.04 c
0.72 c
2.11 a
13.78 bc
1.37 a
47.15 a
0.11 a
0.33 c
20:00
21:00
0.45 c
-
0.80 b
-
0.80 b
-
0.63 b
-
1.48 a
0.28 a
1.21 a
-
Sum SAFA
50.33
51.59
52.21
53.31
53.5
63.95
29.04 bc
0.41 ab
0.47 a
4.69
-
32.15 ab
0.37 b
0.19 b
1.09 b
36.11 a
0.18 b
0.08 c
0.13 c
27.98 bc
0.65 ab
0.18 b
0.81 a
-
33.39 ab
0.29 b
0.06 c
0.17 c
2.11 a
27.85 bc
0.14 b
34.61
33.80
36.51
29.62
36.02
28.45
16:2 (n-4)
3.96 a
3.30 b
1.04 c
2.21 b
1.58 c
0.73 c
16:3 (n-3)
5.50 ab
4.35 b
0.81 c
6.77
3.95 b
0.89 c
18:2 (n-6)
1.07 ab
0.17 d
1.11 b
0.52 c
0.44 c
1.14 a
0.71 a
0.34 bc
0.34 b
0.95 a
0.43 b
Saturated
14:00
15:00
16:00
17:00
18:00
19:00
Monounsaturated
16:1 (n-7)
16-1 (n-5)
17:1
22:1 (n-7)
22:1 (n-9)
20:1 (n-6)
Sum MUFA
0.46 b
-
Polyunsaturated
18:3 (n-3)
0.23 c
18:4 (n-3)
trace
trace
0.03 b
trace
0.18 a
20:4 (n-6)
1.24 b
0.50 c
0.26 c
0.13 d
20:5 (n-3)
4.06 e
7.41 a
0.99 d
4.80 b
4.58 c
1.12 f
22:6 (n-3)
0.94
4.06
8.65
1.49
4.80
5.78
1.25
Sum PUFA
14.82
17.18
4.82
14.64
Trace= detection of fatty acids present in trace amounts, - not detected.
12.70
4.62
Sum HUFA (ARA,

EPA and DHA)
11
12
South and Whittick (1987) described that

nitrogen sources that are reduced to
ammonium (NH+4) are preferably used for
amino acid biosynthesis. The low protein
concentration in the f/2 medium could have
had an effect on the low cell densities
obtained. The nitrogen deficiency in the
microalgae, due to nitrogen limitation during
the log phase, possibly affected protein
synthesis, thus reducing the amount of
soluble protein available for metabolic
processes. This was also observed by Matos
Moura et al. (2007).
An increase in the lipid content of the
cultures with lower nutrient content was
observed, since the accumulation of lipids in
microalgae can be induced by nitrogen
limitation in the medium (Snchez-Saavedra
and Voltolina 2005, Medina-Reyna and
Cordero-Esquivel, 1998). In other studies,
results obtained with Nannochloris atomus
and Tetraselmis sp. showed that the lipid
content decreases when a limitation of
phosphorus exists (Reitan et al. 1994). We
found no differences in the percentages of
carbohydrates. Collectively, these results
suggest that by the third day of culture
(harvest day), the microalgae had not been
able to accumulate carbohydrates. The low
dry weight in the microalgae cultured with
f/2 and AF/2 is attributed to the decline of
nutrients in the media, which eventually
leads to a decrease in the cellular content.
Desaturases catalyze the formation of double
bonds for the conformation of unsaturated
fatty acids (Martin et al. 2007). Previous
studies with Euglena gracilis found that the
desaturase acitivty is stimulated when
cultures are in the presence of NH+4. Also,
quantitative differences between distinct
forms of nitrogen can be determined from
the intake of nutrients by cells. In
cyanobacteria, it is known that there is a
periplasmic protein that makes solute
binding easier.
These are integral
cytoplasmic proteins with ATPase activity
associated that regulate the intake of NO-3

and NO-2 into the cell (Wu and Stewart,
1998; Martinez-Espinosa 2003). However,
in eukaryotic cells such as C. muelleri, NH4+
permeates through biological membranes
(Martinez-Espinoza 2003). Therefore, our
results show that the nutrient concentrations
of f/2 and AF/2 facilitate cell intake, thus
producing in this way the highest levels of
HUFA.
Results in this study also show that the fatty
acid profile of C. muelleri can be modified
by the concentration and source of nitrogen.
Liang and Mai (2005) found that in C.
gracilis the total amount of MUFA increased
while that of PUFA decreased with culture
age. These trends were also observed in the
present study. The biosynthesis of fatty
acids in chloloroplasts may be regulated by
acetyl coenzime-A and malanolin-ACPs,
which are enzymes that initiate the formation
of ACP protein transporters (Mcginnis and
Sommerfeld 2000).
In addition, the
proportion of PUFA in C. muelleri may vary
when different nitrogen sources are used
(Post-Beittenmiller et al. 1992 and Liang et
al. 2006). For instance, in a study by the
later authors, urea was the only chemical
form that yielded a high quantity of 20:5 n-3
fatty acids, followed by nitrates and
ammonia. In that same study, no significant
differences were found in the content of
other HUFAs, such as DHA. The present
results do not show a clear relationship
among the contents of HUFAs. Low (f/4
and AF/4) and high (AF) nutrient
concentration diminished the HUFA
concentration in C. muelleri. On the other
hand, induced stress by reducing nutrient
concentration in the culture media increased
the total lipid content of the microalgae.
However, this not always applies to the
HUFA proportion.
The results presented in this work are in
agreement with those of Pernet et al. (2003),
who mentioned that total lipids in C.
13
muelleri could increase because of nutrient
deficiency. The relative proportion of
nutrients can modify the fatty acid profile of
the microalgae, increasing SAFA and
MUFA proportion and in smaller amount
PUFA content.
The percentage of
phosphorus was found to be the limiting
nutrient related to the synthesis of
phospholipids.
Nevertheless, fatty acid
biosynthesis and proportion may vary
according to the microalgae species (GuanQun 2007).
5. Conclusions
Based on the results of the present study it is
concluded that, under the described
conditions, the specific growth of a four-day
culture of C. muelleri is affected when the
culture medium contains a low concentration
of nutrients (f/4 and AF/4). Depending on
the desired major cellular component
(proteins, lipids or carbohydrates) it is
recommended to use the culture medium
accordingly. To get the highest value of
HUFAs, the use of f/2 or the proposed AF
medium
(agricultural
fertilizers)
is
recommended.
Acknowledgments
This work was supported by the internal
project AICM-CTM-04-11-25-11-05-24 of
Universidad Autnoma de Baja California
Sur and the project SEP-CONACyT 454844.
We would like to thank Daniel Porras for his
assistance and Laura Carren for technical
training. We also thank Dr. L. Salinas-Flores
for critical and English review of the original
manuscript.
References
Bligh, E.G., Dyer, W.J. 1959. A rapid method of
total lipid extraction and purification. Can J

Physiol Biochem 37:911-917.
Carrapiso, A.I., Garcia, C. 2000. Development in

lipid analysis: some new extraction
techniques and in situ transesterification.
Lipid 35:1167-1177.
Chiaverina, J. 1972. Techniques d extraction et
analyses des lipids. Universit de Paris.
Station Zoologique. Villefranche-sur-Mer.
Notes de Travail 12:12p.
Darley, W.M. 1987. Biologa de las algas:
Enfoque fisiolgico.Ed. Limusa, Mxico,
D.F. 236p.
Dubois, M., Gilles, K. A., Hamilton, J.K.,
Rebers, P. A. Smith, F. 1956. Colorimetric
method for determination of sugars and
related substances. Ann Chem 28:350-356.
Fogg, G.E., Thake, B. 1987. Algal cultures and
phytoplankton
ecology.
3th
Edition.
University of Wisconsin Press. USA. 189p.
Guan-Qun C., Yue J., Feng C. 2007. Variation
of lipid class composition in Nitzschia laevis
as a response to growth temperature change.
Food Chem 109(1): 88-94.
Guillard, R.L.L., Rhyter, J.H. 1962. Studies on
marine planktonic diatoms I. Cyclotella nana
Hustedt and Detonula confervacea (Cleve).
Grans Can J Microbiol 8:229-239.
Guillard, R.L.L. 1975. Culture of phytoplankton
for feeding marine invertebrates. pp 29-60.
In: M.L. Smith and M.H. Chanley (Ed.).
Culture of Marine Invertebrates Animals.
Plenum Press, New York. 338p.
Hemerick, G. 1973. Mass culture. In: Handbook
of Physiological Methods. J.R. Stein, (Ed.).
pp.255-273.
Iriarte, J.L., Quiones, R.A., Gonzlez, R.R.,
Valenzuela, C.P. 2007. Relacin entre
actividad enzimtica y biomasa de ensambles
fitoplanctnicos en el sistema pelgico. Inv
Mar Valparaiso 35(1): 71-84
Liang, Y., Beardall, J., Heraud, P. 2006. Effects
of nitrogen source and UV radiation on the
growth, chlorophyll fluorescence and fatty
acid
composition
of
Phaeodactylum
tricornutum and Chaetoceros muelleri.
(Bacillariophyceae). J Photochem Photobiol
Biol 82:161172.
14
Lpez-Elas, J.A., Voltolina, Enrquez-Ocaa,
F., Gallegos-Simental, G. 2005. Indoor and
outdoor mass production of the diatom
Chaetoceros muelleri in a Mexican
commercial hatchery. Aquacult Nutr 33:181191.
Lourenco, S.O., Barbarno, E., Mancini-Filho, J.,
Schinke, K.P., Aidar, E. 2002. Effects of
different nitrogen sources on the growth and
biochemical profile of 10 marine microalgae
in batch culture: An evaluation for
aquaculture. Phycologia 41(2):158162.
Lowry, O. H., Rosebrough, N. J., Farr, A.L.,
Randall, R.J. 1951. Protein measurement with
the Folin phenol reagent. J Biol Chem
193:265-275.
Malara, G., Charra, R. 1972. Dosages des
proteines partiulaires selon la mthode de
Lowry. Universit de Paris. Station
Zoologique. Villefrenche-Sur-Mer. Notes de
Travail. 6:11p.
Martnez-Espinosa, R. 2003. Fisiologa de la
asimilacin de nitrgeno en Haloferax
mediterranei. Purificacin y caracterizacin
de nitrato y nitrito reductasas asimiladas.
Tesis Doctoral. Universidad de Alicante.
Facultad de Agroqumica y Bioqumica.
Espaa. 181p.
Martin, C.E., Oh, C.S., Jiang, Y. 2007.
Regulation of long chain unsaturated fatty
acid synthesis in yeast. Biochim Biophys Acta
Mar 1771(3):271-285.
Matos Moura, A., Bezerra Neto, E., Koening,
M.L., Eskinazi Leca, E. 2007. Chemical
composition of three microalgae species for
possible use in mariculture. Braz Arch Biol
Technol 50(3): 461-467.
McGinnis, K.M., Sommerfeld, M.R. 2000.
Plastid fatty acid biosynthesis in the diatoms
Nitzschia alba and Nitzschia laevis. J Phycol
36(s3):46-46.
Medina-Reyna, C. E., Cordero-Esquivel, B.
1998. Crecimiento y composicin bioqumica
de la diatomea Chaetoceros muelleri
(Lemerman), mantenida en cultivo esttico
con un medio comercial. Cienc Mar (UMAR)
6:19-26.
Meireles, L.A., Catarina A. Guedes A.C.,

Malcata F.X. 2003. Lipid class composition
of
the
microalga
Pavlova
lutheri:
Eicosapentaenoic and Docosahexaenoic
acids. J Agric Food Chem 51:2237-2241.
Milioub, H., Fintikakia, M., Tzitzinakisa, M.,
Kountourisa., Verriopoulos, G. 2006. Fatty
acid composition of the common octopus,
Octopus vulgaris, in relation to rearing
temperature and body weight. Aquaculture
256:311-322.
Pande, S. V., Khan, R. P., Venkitasubramanian,
T. A. 1963. Microdetermination of lipids and
serum total acids. Anal Biochem 6:415-423.
Perneta, F., Tremblayb,
R., Demersc, E.,
Roussy, M. 2003. Variation of lipid class and
fatty acid composition of Chaetoceros
muelleri and Isochrysis sp. grown in a
semicontinuous
system.
Aquaculture
221:393-406.
Post-Beittenmiller, D., Roughan, G., Ohirogge,
J.B. 1992. Regulation of plant fatty acid
biosynthesis analysis of acyl-coenzyme A and
acyl-acyl carrier protein substrate pools in
spinach and pea chloroplasts. Plant Physiol
100:923-930.
Reitan, K., Raunuzzo, J., Olsen, Y. 1994. Effect
of nutrient limitation on fatty acid and lipid
content of marine microalgae. Phycology
30:972-979.
Richmond, A. 2003. Handbook of Microalgal
Culture: Biotechnol Appl Bioc. Blackwell
Publishing, New York. 612p.
Snchez-Saavedra, M. P., Voltolina, D. 2005.
The growth rate, biomass production and
composition of Chaetoceros sp. grown with
different light sources. Aquacult Eng 35(2):
161-165.
Sorokin, C. 1973. Dry weight, packed cell
volume and optical density. 321-343 pp. In:
J.R. Stein (Ed.). Handbook of Phycological
Methods. Culture Methods and Growth
Measurements. Cambridge University Press,
Cambridge. 448p.
South, G. R., Whittick, A. 1987. Introduction to
Phycology. Blackwell Scientific Publications,
London. 341p.
15
Spektorova, L. V., Goronkova, O. I., Nosova, L.
P., Albitskaya, O. N., Danilova, G. 1986.
High-density cultures of marine microalgae
promising items for mariculture III. Mass
culture of Monochrysis lutheri Droop.
Aquaculture 55:231-240.
Trautwein, E.A. 2001. n-3 fatty acids
physiological and technical aspects for their
use in food. J Agric Food Chem 51: 22372241.
White, J.N.C. 1987. Biochemical composition

and energy content of six species of
phytoplankton used in mariculture of
bivalves. Aquaculture 60:231-241.
Wu, Q., Stewart, V. 1998. NasFED proteins
mediate assimilatory nitrate and nitrite
transport in Klebsiella oyitoca (pneumoniae)
M5al. J Bacteriol 180:1311-1322.
Zar, J.H. 1984. Biostatistical Analysis. PrenticeHall, New York. 622p.
Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30
16
Variacin estacional de arsnico total en algas comestibles

recolectadas en el Golfo San Jorge (Chubut, Argentina)
Adriana A. Perez1*, Laura B. Perez1, Analia M. Strobl1, Silvina Camarda1, Silvia S. Farias2,
Clara M. Lpez 3 y Mara A. Fajardo1
1
Centro Regional de Investigacin y Desarrollo Cientfico Tecnolgico (CRIDECIT), Universidad

Nacional de la Patagonia San Juan Bosco Comodoro Rivadavia, Chubut, Argentina.
2
Comisin Nacional de Energa Atmica, Gerencia de Tecnologa y Medio Ambiente (CNEA).
Buenos Aires, Argentina.
3
Ctedra de Toxicologa y Qumica legal. Universidad da Buenos Aires (UBA).
Buenos Aires, Argentina. J. M. Rodrigo 527 (9000) Comodoro Rivadavia, Chubut.
*
Autor de correspondencia: aaperez@sinectis.com.ar
Resumen
En las costas Patagnicas Argentinas las macroalgas marinas son explotadas para la obtencin
de ficocoloides destinados a la alimentacin y asimismo podran utilizarse como indicadoras
de bioacumulacin de contaminantes metlicos. El objetivo de este trabajo, fue determinar la
variacin estacional del arsnico total (As) en Porphyra columbina (alga roja) y Ulva sp. (alga
verde) en tres zonas del Golfo San Jorge (Argentina) y evaluarlas desde el punto de vista de la
inocuidad alimentaria. Las zonas de muestreo fueron Baha Solano (BS) y Punta Maqueda
(PM), ambas alejadas de la actividad antropognica y la desembocadura del Arroyo La Mata
(AM), sitio que recibe efluentes de la actividad petrolera e industrial. El As total se cuantific
mediante un espectrmetro de emisin de plasma inductivo (ICP-OES) multielemental
simultneo, axial, con detector de estado slido. En Porphyra columbina las medianas de la
concentracin de As total, oscilaron entre 21,9 a 39,3 g g-1 peso seco (p.s.) con variacin
estacional en AM y PM. En Ulva sp. las medianas fluctuaron entre 3,0 a 8,8 g g-1 p.s. y las
variaciones estacionales se dieron en BS y PM. La Ingesta Semanal Tolerable Provisional de
As (ISTP-OMS) para As inorgnico, que es la especie ms txica, es de 15 g-1kg de peso
corporal por semana. Para una persona de 70 kg correspondera un ISTP de 1050 g As por
semana. El consumo de 30 g de Porphyra columbina seca por semana, aportara valores de As
cercanos al ISTP si se tratara slo de As inorgnico, mientras que el consumo de Ulva sp. no
supondra un riesgo para la salud dado que Porphyra columbina bioconcentra ms As que
Ulva sp. Se recomienda llevar a cabo estudios de especiacin de As para evaluar el riesgo real
asociado a la ingesta de As a partir de macroalgas comestibles recolectadas en el Golfo San
Jorge que bioacumulan As.
Palabras clave: macroalgas, arsnico total, Porphyra columbina. Ulva sp., Argentina.
17
Abstract
In Argentineans Patagonian coast, marine seaweeds are exploited to obtain ficocoloids and
food, as well as to use them as pollutants biomonitors. The aim of this study was to determine
the seasonal variation of total arsenic (As) in Porphyra columbina (red seaweed) and Ulva sp.
(green seaweed) from three places of Gulf San Jorge (Argentina) and to evaluate them from
the point of view of food safety. Sampling sites were located at Bay Solano (BS) and Punta
Maqueda (PM) (non polluted areas, far from anthropogenic activities) and the mouth of the
Arroyo La Mata (AM), area that receives effluents from the oil activity. Total As was
quantified by multielemental, simultaneous inductively coupled plasma- optical emission
spectrometry (ICP-OES) provided with axial view and of solid state detectors. Arsenic
concentration, expressed in g g-1 dry weight (d.w.), in Porphyra columbina, ranged from 21.9
to 39.3; and seasonal variations for the metalloid were observed in AM and PM. For Ulva sp.,
Arsenic levels ranged between 3.0 at 8.78 g g-1 (d.w.); seasonal variations were detected in
BS and PM. Provisional Tolerable Weekly Intake (PTWI) value of 15 g As week-1kg-1
corporal weight is referred to inorganic As. For a 70 kg person, a PTWI of 1,050 g As per
week, would be expected. Considering As only present as inorganic As, a 30 g of Porphyra
columbina (d.w.) intake per week would provide As values near to the As ISTP. In contrast,
the intake of Ulva sp. would not represent a threat for human health. In conclusion, Porphyra
columbina bioaccumulate much more As than Ulva sp. and represents a higher risk. Authors
strongly suggest to carry out speciation studies related to As species present in edible
seaweeds from San Jorge Gulf to evaluate the real health risk.
Keywords: seaweed; total arsenic, Porphyra columbina; Ulva sp., Argentina.
1. Introduccin
El medio ambiente recibe aportes de
elementos de origen natural y antropognico.
Los naturales provienen de la formacin de
menas, meteorizacin, erosin de rocas,
lixiviacin y fenmenos asociados al
vulcanismo. Los aportes de origen
antropognico son consecuencia de la
actividad
humana,
principalmente
procedentes de la actividad industrial (Prs,
1980).
El medio acutico y en especial el marino, es
uno de los ambientes ms expuestos a los
contaminantes debido a que es el receptculo
final de todas las descargas naturales y de la
actividad humana. Los ocanos cubren
alrededor del 71% de la superficie terrestre,
aproximadamente 360 millones de km2.
Ellos son un espejo de la vida del planeta
Tierra (Gerlach, 1981). Esta inmensidad
contribuye al mito de que tienen una
capacidad de dilucin infinita y que por lo

tanto, pueden considerarse como un
gigantesco vertedero para todos los
desperdicios del hombre.
Los ocanos contienen ms de 30 elementos,
metales o metaloides presentes en cantidades
traza en los tres compartimentos: agua,
sedimentos
y
biota
marina.
Sus
concentraciones se ven incrementadas
fcilmente con la contaminacin generada
por la actividad antropognica. Algunos de
esos elementos vertidos, como es el caso del
As, pueden llegar a ser txicos para el
crecimiento y el metabolismo de los
vegetales y los animales marinos (Yun et al.,
2001).
El arsnico (As), un metaloide de color gris
acero y de olor aliceo, se encuentra
ampliamente distribuido en la naturaleza
formando diferentes compuestos minerales.
En su mayor parte, el arsnico es
18
transportado en el ambiente por el agua,
donde est usualmente en forma inorgnica,
como As (V) o As (III). En los organismos
marinos, se han detectado especies
arsenicales inorgnicas y orgnicas, estas
ltimas de menor toxicidad como es la
arsenobetana (que se encuentran en
concentraciones elevadas en los pescados,
moluscos y crustceos) y los arsenoazcares
presentes en macroalgas marinas y en
algunos moluscos (Cullen y Reimer, 1989;
Rose et al., 2007).
El As, ingresa al hombre por va digestiva a
travs del agua, los alimentos y por malos
hbitos higinicos en el trabajo (Falc et al.,
2006). En sus formas inorgnicas pueden
producir intoxicaciones tanto agudas como
crnicas, y est considerado como un
carcingeno para el hombre. Es genotxico y
un
conocido
carcingeno
asociado
especialmente con cncer de hgado, pulmn
y piel. El As (III) es capaz de unirse a los
grupos sulfihidrilos e inhibir la accin de
determinadas enzimas relacionadas con el
metabolismo celular y la respiracin (Soria
et al., 1995) y es generalmente reconocido
por ser mas txico que el As (V) (Rose et al.,
2007).
La utilizacin de las macroalgas como
alimento humano es una de las aplicaciones
ms antiguas y se remonta al ao 2.700 a.C.
en China. Paralelamente, los griegos y los
romanos las empleaban como alimento,
como plantas medicinales y en cosmtica.
Este hbito tan antiguo se observa an en
varios pases del sureste de Asia. Adems de
ser utilizadas para la alimentacin, tienen
aplicaciones industriales, agropecuarias,
mdico-farmacolgicas,
preparados
cosmticos y en la restauracin ambiental
(Mabeau y Fleurence, 1993; Caliceti et al.,
2002).
Se conocen unas 25.000 especies de algas, y
el hombre utiliza para alimentarse unas 160
(25 verdes, 54 pardas y 81 rojas) (Leister y
Morris, 1990). En Europa, desde hace unos
aos, se estn convirtiendo en una autntica

revolucin en materia alimentaria debido a
su contenido en nutrientes (Darcy- Vrilln,
1993).
En los pases occidentales el uso de algas ha
estado relacionado tradicionalmente con la
industria farmacutica y cosmtica. En las
ltimas dcadas se ha incrementado el
consumo directo de distintas especies de
algas por los beneficios nutricionales y
teraputicos ya que constituyen un alimento
rico en protenas, minerales y vitaminas y
otros nutrientes especficos como los cidos
grasos poliinsaturados (Mabeau y Fleurence,
1993; Darcy-Vrillon, 1993; Van Netten et
al., 2000).
Las algas del litoral martimo argentino
constituyen recursos naturales renovables
econmicamente importantes (Ferrario et al.,
1997). La mayora de las algas de la costa
patagnica argentina son explotadas para la
obtencin de ficocoloides. Sin embargo,
existen especies con posible utilizacin en
alimentacin como Porphyra columbina y
Ulva sp. (Fajardo et al., 1998).
La ingesta media de algas marinas en los
pases occidentales est lejos de ser la de los
pases orientales. En Japn, las algas llegan a
representar hasta un 25% de la dieta diaria,
siendo incorporadas directamente en estado
fresco o seco. Los japoneses consumen
anualmente un promedio de 1,6 kg de algas
marinas secas por persona (Fujiwara-Arasaki
et al., 1984) por lo que se estima una ingesta
de 3,3 g en peso seco por da (Darcy-Vrillon,
1993); asimismo se debe considerar en todos
los pases, la existencia de consumidores
mayores al promedio porque siguen una
dieta macrobitica y no se dispone de
antecedentes
correspondientes
en
la
Argentina. Solamente se cuenta con datos
previos realizados en la zona, los cuales
determinaron que el consumo de 30 g de
Porphyra columbina seca (tres cucharadas
de algas seca y molida), contribuiran con
una ingesta de 85 a 124 mg de cido
19
ascrbico, 400 a 636 mg de potasio, 200 a
272 mg de magnesio, de 6,2 a 9,0 g de
protenas, y 11,6 a 16,3 de fibra diettica, en
funcin de la estacin del ao en que sean
recolectadas (Fajardo, 1998).
Existe otro aspecto a tener en cuenta adems
de los beneficios nutricionales y es el que las
algas presentan una elevada capacidad de
bioconcentrar no slo elementos esenciales,
sino tambin elementos txicos del medio
ambiente. Por dicha razn, si las algas
provienen de reas contaminadas, su
consumo puede representar un peligro para
la salud pblica, aunque tambin pueden ser
utilizadas
como
bioindicadoras
de
contaminacin y agentes de remediacin del
ecosistema marino (Riget et al., 1997;
Almela et al., 2002).
En Argentina, las algas y productos
derivados, carecen de regulacin especfica
respecto al As. Desde el punto de vista de la
evaluacin de la seguridad alimentaria de
estos productos, la estimacin de la ingesta
de arsnico inorgnico a travs del consumo
de algas est siendo estudiada en pases
europeos, en el Sudeste asitico y China
(Yasui et al., 1983; Morita y Shibata, 1990;
Almela et al., 2002; Laparra et al., 2003,
2004; FSA, 2004)
y en forma ms
exhaustiva desde que se ha encontrado una
elevada concentracin de As total (103149
g g-1 p.s.) y As inorgnico (32,1- 69,5) en
un alga utilizada para la alimentacin
humana, llamada hiziki (Hizikia fusiforme).
En tal sentido, en julio del 2004 la British
Food Standard Agency advirti no ingerir
esta alga por su elevada concentracin de As
inorgnico (Besada et al., 2009).
El objetivo de este trabajo fue determinar la
variacin estacional del As total en Porphyra
columbina (alga roja) y Ulva sp. (alga verde)
del Golfo San Jorge (Argentina) y evaluar su
seguridad como alimento.
2. Materiales y Mtodos
2.1 Zona de Muestreo

El Golfo San Jorge est situado en la costa
de las provincias del Chubut y de Santa
Cruz, entre el Cabo Dos Bahas y el Cabo
Tres Puntas. De toda la costa Argentina es el
golfo ms pronunciado, con acantilados
activos que poseen una altura promedio de
2,50 m. La costa es muy irregular, con un
rgimen macromareal alto, posee accidentes
menores y plataformas de abrasin
(localmente llamadas restingas) que quedan
expuestas en bajamar.
Las puntas de este golfo encierran una
cuenca sedimentaria rica en hidrocarburos,
denominada Cuenca del Golfo San Jorge
(Sciutto,
1995).
Considerando
estas
caractersticas, las zonas de muestreo
elegidas de Norte a Sur fueron:
1) Baha Solano (BS): a 20 km al norte
Comodoro Rivadavia Provincia de Chubut
(45 38 L.S., 67 21 L.O.). Se caracteriza
por estar alejada de la actividad
antropognica.
2) Desembocadura del Arroyo La Mata
(AM): se ubica a 10 km al Sur de Comodoro
Rivadavia, Provincia de Chubut (45 52
L.S., 67 30 L.O.). Recibe efluentes de la
actividad industrial y petrolera.
3) Punta Maqueda (PM): se ubica a 30 km.
al Sur de Comodoro Rivadavia, en la
Provincia de Santa Cruz (46 01, L.S., 67
34 L.O.). Se caracteriza por estar alejada de
la actividad antropognica y por poseer una
restinga rocosa con piletas de marea de poca
extensin y profundidad. Los tres lugares de
muestreo se observan en la Figura 1.
En las zonas de muestreo se colectaron las
especies de inters: Porphyra columbina y
Ulva sp. estacionalmente (verano, otoo,
invierno y primavera) durante el ao 2002.
Al realizar la colecta se lavaron las algas in
situ con abundante agua de mar para
liberarlas de cuerpos extraos y de otras
clases de algas (epfitas). Se guardaron en
bolsas de polietileno y se transportaron
refrigeradas a 5 C al laboratorio.
20
Figura 1. Golfo San Jorge sitios de muestreo: Baha Solano, Arroyo La Mata y Punta Maqueda
En el laboratorio se lavaron con agua ultra

pura y se secaron a temperatura ambiente
durante 24 horas. Finalmente el material se
guard en envases plsticos, a -20 C hasta
el momento de su procesamiento.
Se conservaron rplicas en congelacin y se
apart material algal para ser herborizado.
2.2 Lavado del material
El material utilizado en la recoleccin,
pretratamiento y mineralizacin de las
especies estudiadas fue lavado con
detergente neutro, enjuagado con agua,
sumergido en HNO3 al 50% v/v durante 24 h
y enjuagado 6 veces con agua ultra pura.
El agua ultra pura fue obtenida por
bidestilacin en destilador de vidrio
convenientemente tratado con cido ntrico y
luego enjuagado con agua ultra pura.
2.3 Control de calidad del mtodo analtico

La exactitud de la metodologa se evalu de
acuerdo a requerimientos de la Norma
IRAM 301:2005 (equivalente a ISO/IEC
17025:05) y la gua EURACHEM-CITAC,
2000, empleando un material de referencia
certificado (CRM) BCR 279 Sea lettuce,
Ulva lactuca (Institute for Reference
Materials and Measurements, IRMM,
Bruselas, Blgica).
El material de referencia certificado (0,100
0,001 g) y un blanco de reactivos, fueron
tratados y mineralizados en las mismas
condiciones que las muestras para ser
analizados cada 25 determinaciones. Los
resultados
no
mostraron
diferencias
significativas con los valores certificados. La
precisin evaluada como repetibilidad fue
del orden del 5% para los mbitos de
concentraciones evaluadas en este trabajo
(Tabla 1).
21
Tabla 1. Concentracin promedio DE en material certificado de referencia BCR 279
(Sea lettuce) ao 2002, (n=10)
Elemento Certificado Encontrado Recuperado
g g-1 p.s.
g g-1 p.s.
%
As
3,09 0,20 2,87 0,17
93,3 4,8
p.s.: peso seco
2.4 Determinacin de humedad y molienda

De todas las algas recolectadas se eligieron
al azar siete organismos de cada especie
(siete muestras) los cuales fueron procesados
individualmente. Se descongelaron, se
llevaron a peso constante mediante el
mtodo indirecto por desecacin en estufa a
100 5 C (AOAC, 2006) y se molieron en
morteros de porcelana.
2.5 Mineralizacin
Se pesaron 0,100 0,001 g 0,200 0,001
g de la muestra seca y molida de cada unidad
muestral; se colocaron en vasos de Tefln
(Parr Instrument Company, Illinois, USA) y
se le agregaron 2 o 4 ml de HNO3 (J.T.
Baker ACS, EEUU), respectivamente. Se
colocaron en bombas de digestin, que
fueron llevadas a un digestor de microondas
para su puesta en solucin, a una potencia de
1200 watts (Sapp, 1991). Todos los
mineralizados
fueron
guardados
en
recipiente de polipropileno a 20 C, hasta
el momento de su cuantificacin.
2.6 Anlisis elemental cuantitativo
Las determinaciones de As se realizaron
mediante un espectrmetro de plasma
inductivo de argn (ICP OES), axial,
multielemental simultneo, provisto de
detector de estado slido y automuestreador
marca Perkin Elmer Optima 3100 XL
(Perkin Elmer, Ma. USA), cuyo software
operativo es el ICP- OPTIMA (Winlab 32
Versin 2.4).
El argn fue de calidad soldadura para
alimentacin de la descarga. Se emplearon
argn y nitrgeno calidad ultrapuro para el
enfriamiento de los detectores y para el
sistema ptico, respectivamente, provistos
por Indura S.A. (Argentina) en ambos casos.

Las lneas analticas fueron elegidas a partir
de la biblioteca del equipo. Las curvas de
calibracin se realizaron por sucesivas
diluciones de un estndar comercial de As de
concentracin 1000 g As/ml (CertiPUR
Merck, Darmstadt, Alemania) en HNO3 1,5
M. Las muestras se analizaron por
duplicado, previa dilucin 1/10, para ajustar
los valores de acidez a los de las respectivas
curvas de calibracin. Las concentraciones
halladas en solucin en las muestras
analizadas se obtuvieron por interpolacin
en las respectivas curvas de calibracin. Los
valores de concentracin de As (p/p) se
obtuvieron corrigiendo esos valores por las
pesadas y diluciones correspondientes.
2.7 Anlisis estadstico
Los resultados descriptivos se expresaron
como promedio con su desviacin estndar y
mnimomximo (Min-Max) para poder
comparar con los datos de bibliografa y
como mediana y quartilo (Q25 - Q75) por
tener una distribucin no paramtrica.
Para evaluar la asociacin entre variables se
utiliz el mtodo de las diferencias aplicando
la prueba de Wilcoxon-Mann Whitney y
Kruskal-Wallis empleando el test de
Student-Newman-Keuls como prueba posthoc. Los clculos estadsticos se realizaron
con el paquete informtico INSTAT 2.02 y
se
consider
como
estadsticamente
significativo un valor de p<0,05 y altamente
significativo un p<0,01 (Dawson y Trapp,
1994).
22
3. Resultados
En las Tablas 2 y 3 se observan las
concentraciones de As en Porphyra
columbina y en Ulva sp., respectivamente,
recolectadas en Baha Solano, Arroyo La
Mata y Punta Maqueda durante el ao 2002.

En las Figuras 2 y 3 se observan las
variaciones estacionales de las concentraciones de As en Porphyra columbina, y en
Ulva sp.
Tabla 2. Concentraciones de As en Porphyra columbina (g g-1 p.s.) en Baha Solano, Arroyo La Mata y
Punta Maqueda (n=7)
Estacin del ao
Verano
x DE
(Min-Max)
Mediana
(Q25-Q75)
Baha Solano
28,65,1
(18,8-34,3)
29,1 a
(27,3-31,7)
Arroyo La Mata
33,84,5
(27,5-39,3)
34,0 a
(30,9-37,1)
Punta Maqueda
22,94,4
(18,1-31,5)
21,9a
(20,7-39,9)
Otoo
x DE
(Min-Max)
Mediana
(Q25-Q75)
35,24,5
(27,7-42,3)
35,2 a
(33,8-36,7)
37,24,4
(31,6-44,3)
37,7 a
(33,9-39,3)
34,716,8
(26,9-44,9)
34,9 a
(29,2-38,8)
Invierno
x DE
43,611,1
(37,1-65,8)
39,3 a
(37,7-41,8)
30,7 12,3
(22,8-49,0)
25,5 a
(24,6-31,6)
36,1 5,1
(29,4-43,1)
36,3 a
(33,7-38,3)
Nd
22,38,2
(12,9-28,3)
25,8 a
(19,4-27,0)
35,66,3
(27,4-42,7)
36,1 a
(33,6-38,1)
(Min-Max)
Mediana
(Q25-Q75)
Primavera
x DE
(Min-Max)
Mediana
(Q25-Q75)
Superndices distintos en la misma fila indican diferencias estadsticamente significativas (p<0,05). Nd: no
determinado. DE: desviacin estndar. p.s.: peso seco
4. Discusin
Del anlisis de la Tabla 2 se desprende que
las concentraciones de As encontradas en
Porphyra columbina, oscilaron entre 21,9 a
39,3 g g-1 p.s. y que no existen diferencias
estadsticamente significativas entre los
lugares de muestreo (p>0,05) en cada
estacin del ao. Esto indicara que a pesar
de que la desembocadura del Arroyo La
Mata es una zona que recibe los efluentes
industriales y. petroleros no habra descargas

de este elemento. Sin embargo, en Ulva sp.
las concentraciones de As (que oscilaron
entre 3,0 a 8,8 g g-1 p.s.) presentaron
diferencias estadsticamente significativas
entre los lugares de muestro en invierno y
verano (p<0,05) siendo la desembocadura
del Arroyo La Mata donde el alga exhibi
valores mas altos (Tabla 3) .
23
Tabla 3. Concentraciones de As en Ulva sp. (g g-1 p.s.) en Baha Solano, Arroyo La Mata y Punta Maqueda
(n=7)
Estacin del ao
Verano
x DE
(Min-Max)
Mediana
(Q25-Q75)
Baha Solano
2,98 0,54
(2,09-3,45)
3,03 a
(2,92-3,39)
Arroyo La Mata
5,612,42
(2,08-8,46)
6,47 b
(3,79-7,35)
Punta Maqueda
4,560,97
(3,74-6,36)
4,02 a
(3,86-5,04)
Otoo
x DE
(Min-Max)
Mediana
(Q25-Q75)
7,79 0,94
(6,20-8,88)
8,10 a
(7,42-8,23)
9,221,67
(7,13-11,7)
8,78 a
(8,2-10,2)
6,641,3
(4,11-8,10)
7,00 a
(6,39-7,25)
Invierno
x DE
(Min-Max)
Mediana
(Q25-Q75)
7,210,71
(6,27-7,98)
7,44 a
(6,62-7,69)
8,150,79
(6,95-9,14)
8,16 a
(7,75-8,69)
6,311,51
(4,90-9,46)
6,12 b
(5,45-6,39)
Primavera
x DE
Nd
7,731,01
(6,7-9,04)
7,59 a
(7,09-8,23)
6,762,93
(3,61-10,53)
7,80 a
(3,94-7,92)
(Min-Max)
Mediana
(Q25-Q75)
Superndices distintos en la misma filas indican diferencias estadsticamente significativas (p<0,05).

DE: desviacin estndar. Nd: no determinado. p.s.: peso seco
Este comportamiento podra sugerir que

aunque en sta alga verde se hayan
registrado las concentraciones mas bajas de
As, esta especie es sensible a pequeos
cambios de concentracin de As y debera
tenerse en cuenta durante el proceso de
seleccin de una especie bioindicadora de
contaminacin de As, como lo han referido
varios autores en estudios similares
realizados sobre la bio concentracin de
metales pesados en Ulva sp. (Haritonidis y
Malea, 1995, Caliceti et al., 2002,
Castellanos et al., 2005).
En las Figuras 2 y 3 se observa que existi
variacin
estacional
estadsticamente
significativa en ambas especies (p<0,05). En
Porphyra columbina hay disminucin de las
concentraciones en verano en PM y BS
mientras que en la desembocadura del arroyo
La Mata las concentraciones diminuyen en
los meses de invierno y primavera y en Ulva
sp. se observa un comportamiento similar
excepto en AM donde no existi variacin

estacional. Existen distintos factores que
pueden explicar las variaciones estacionales.
Entre
ellos
se
describen
los
medioambientales (variaciones en las
concentraciones de metal en solucin,
interacciones entre metales y otros
elementos, salinidad, pH), los metablicos
(dilucin de volmenes de metal debido al
crecimiento), o pueden ser debidas a las
interacciones entre todos estos factores. La
idea de que las concentraciones de metal
disminuyen en la macroalga durante los
periodos de crecimiento y aumentan durante
el periodo inactivo en invierno ha sido
considerada desde hace mucho tiempo (Fuge
y James, 1974). Riget et al. (1995) observ
la
variacin
estacional
en
las
concentraciones de metal en Fucus
vesiculosus. Este estudio se llev a cabo en
Groenlandia en una rea alejada de fuentes
antropognicas de metales y as las
24
fluctuaciones encontradas deberan reflejar
las variaciones naturales; en este estudio se
describi que la variacin estacional podra
ser atribuible al crecimiento, por lo tanto, en
invierno fue cuando las concentraciones eran
ms altas ya que el crecimiento era mnimo y
estas disminuyeron en verano cuando el
crecimiento era mximo; sin embargo, en
todos los casos la variacin no podra
explicarse por este fenmeno. Haritonidis y
Malea (1995, 1999) atribuyeron el modelo
de
variacin
estacional
de
las
Verano
Otoo
concentraciones de varios metales en Ulva

rigida y Enteromorpha al crecimiento y a los
factores como la edad del tejido examinada,
y a factores abiticos como la salinidad y
temperatura (Villares et al., 2002).
Si se considera que Porphyra columbina
tiene un mximo de crecimiento al fin del
invierno y a los comienzos de la primavera
(Boraso de Zaixso, 1998), se puede presumir
que las concentraciones ms altas de As en
dicha estacin se deberan a su crecimiento.
Invierno
Primavera
Figura 2. Variacin estacional de la concentracin de As total en Porphyra columbina

(medianas DE); superndices distintos en la misma zona y lugar indican diferencias
estadsticamente significativas (p<0,001).
Verano
Otoo
Invierno
Primavera
Figura 3. Variacin estacional de la concentracin de As total en Ulva sp.

(medianas DE); superndices distintos en la misma zona y lugar indican diferencias
25
No est estudiado el comportamiento
ecolgico de Ulva sp. en el Golfo San Jorge
como para establecer patrones de
comparacin.
En general, los niveles de As tanto para
Porphyra columbina como para Ulva sp.
descritos en este estudio son del mismo

orden que los documentados por varios
autores (Tabla 4).
Tabla 4. Concentraciones de As (g g-1 p.s.) en especies de Ulva sp. y Porphyra sp. de distintas reas
geogrficas del mundo (promedios o rangos)
Especies
Ulva
lactuca
Ulva sp.
rea
Golfo de Thermaikos (Grecia)
As
4,5-11,1
Chile
4,07
Ulva sp.
Qubec (Canad)
6,0 2,4
Ulva sp.
Laguna de Venecia Italia
73
Ulva sp.
Espaa
5,2 0,05
Ulva sp.
Sud frica
6,20,30
Ulva sp.
Pennsula de Delmarva EEUU
3,70 1,15
Ulva sp.
Baha de Cienfuegos (Cuba)
1,25
Ulva
fasciata
Ulva
rigida
Porphyra sp.
Baha de Cienfuegos (Cuba)
1,10
Espaa
6,417,06
Qubec (Canad)
19 4,2
Porphyra sp.
Lago de Venecia Italia
13 13
Porphyra sp.
Chile
20,00
Porphyra sp.
Espaa
28,3 0,5
Porphyra sp.
Inglaterra
18-29
Porphyra sp.
Korea
6,28 0,19
Porphyra sp.
Japn
9,70 1,20
Porphyra sp.
Francia
4,25 0,13
Porphyra
umbilicales
Espaa
28,949,5
Referencias
Djingova et al.,
(1987)
Vasquez,
(1996)
Phaneuf et al.,
(1999)
Caliceti et al.,
(2002)
Almela et al.,
(2002)
Misheer et al.,
(2006)
Chaudhuri et al.,
(2007)
Castellanos et al.,
(2005)
Castellanos et al.,
(2005)
Besada et al.,
(2009)
Phaneuf et al.,
(1999)
Caliceti
(2002)
Vasquez
(1996)
Almela et al.,
(2002)
Martn Rose et al.,
(2007)
Rdenas de la Rocha et al.,
(2009)
(2009)
(2009)
Besada et al.
(2009)
26
Caliceti et al., (2002) en Italia, por Almela et

al., (2002) en Espaa, por Misheer et al.,
(2006) en las costas de Africa y por Wei et
al., (2003) en China y mas bajos que los
descriptos por Sfriso et al. (4 a 65 g g-1
p.s., con una media de 30 g g-1 p.s.) (Sfriso
et al., 2000) y ms altos que los encontrados
en Cuba en la Baha de Cienfuegos
(Castellanos et al., 2005). Los valores de As
son tambin del mismo orden que los
analizados por Besada et al. (2009) en
productos comerciales de algas comestibles.
Asimismo, un estudio realizado por Faras et
al. (2002) en la Antrtida mostr resultados
para algas rojas en los que las
concentraciones de As oscilaban entre 5 y 28
g g-1 p.s. Adems, los valores reportados
en este estudio para las dos especies
estudiadas coinciden con los resultados
obtenidos por Muse et al., (1989) en
macroalgas de dos localidades de la

provincia de Chubut.
Varios autores (Phillips, 1990; Almela et al,.
2002), describieron que la acumulacin de
As total en diferentes algas marinas es
funcin de la especie algal. La secuencia de
mayor
a
menor
capacidad
de
bioacumulacin observada por dichos
autores es: algas marrones > algas rojas >
algas verdes. Esta secuencia se observa en
las algas de este estudio, como puede
observarse en la Figura 4. En tal sentido, las
concentraciones medias anuales de As en
Ulva sp., fueron significativamente mas
bajas que en Porphyra columbina (p<0,001).
Esto sugiere que la acumulacin de As
depende de las caractersticas particulares de
las algas marinas ms que de los niveles
medioambientales de este elemento (Besada
et al 2009).
Figura 4: Concentraciones de As total en Ulva sp. y Porphyra columbina

(Promedio anual DE.); superndices distintos en la misma zona y lugar indican diferencias
Desde el punto de vista de la evaluacin de

riesgos, el contenido de As total en
alimentos carece de valor toxicolgico. Por
tal motivo, es necesaria la cuantificacin del
As inorgnico, trmino que engloba a las
especies arsenicales cancergenas y de
mayor toxicidad de las cuantificadas hasta

ahora en alimentos: As (III) + As (V). La
OMS establece el valor de referencia
toxicolgico para el As como As inorgnico,
no como As total y la Ingesta Semanal
Tolerable Provisional (ISTP) recomendada
27
es de 15 g semana-1 kg-1 de peso corporal,
lo que para un sujeto de 70 kg
correspondera a 1050 g As semanales
(Almela, 2002).
Si se estableciera una legislacin especfica
para los contenidos de As inorgnico en las
algas, se conseguira compatibilizar la
comercializacin y la proteccin del
consumidor. Sera pues conveniente seguir el
ejemplo de legislaciones ms avanzadas, que
regulan especficamente los niveles de As
inorgnico
en
algas
proponiendo
1
concentraciones de 1 g g- p.s. como es el
caso de Australia y Nueva Zelanda
(ANZFA, 1997) y de 3 g g-1 p.s como
Francia y USA. (Mabeau y Fleurence, 1993).
El primer aporte al respecto, fue el realizado
por Norman et al. (1987) quien incluy
adems del As inorgnico a los cidos
monometilarsnico
y
dimetilarsnico,
sobrestimando probablemente el contenido
de As inorgnico (Almela et al., 2006).
Aunque actualmente la concentracin de As
total no es un parmetro til, en el estudio de
las implicancias toxicolgicas derivadas del
consumo de algas comestibles, es el
parmetro utilizado. Si se supone un
consumo de 30 g de Porphyra columbina
seca por semana (Fajardo, 1998),
considerando el mximo valor de As
detectado (39,3 g g-1 en invierno) y en el
hipottico caso de que todo el As fuera
inorgnico, el ISTP para un sujeto de 70 kg
que habita en la zona de estudio sera de
1179 g, valor que supera el lmite
establecido por la OMS. Este anlisis
amerita llevar a cabo estudios de especiacin
del As, As (III) + As (V), para evaluar el
riesgo real que supone el consumo de estas
algas. Los niveles de As en Ulva sp. menores
a los encontrados en la Porphyra columbina,
hace suponer que su consumo no constituira
un riesgo para la salud.
5. Conclusiones
Existi variacin estacional de la
concentracin de As total en Porphyra
columbina, la cual se observ AM y PM. En
Ulva sp. las variaciones estacionales se
dieron en BS y PM. Estos datos debern ser
considerados en el proceso de su recoleccin
para el consumo humano.
La ingesta de 30 g de Porphyra columbina
seca por semana aportara valores de As
cercanos al ISTP si se considerara que todo
el As estuviese presente como As
inorgnico. En el caso de la ingesta de la
misma cantidad de Ulva sp, sta no
supondra un riesgo para la salud.
Considerando los aspectos toxicolgicos y
su posibilidad de ser utilizados para la
alimentacin humana, es de destacar la
mayor capacidad de bioacumulacin de As
que posee Porphyra columbina respecto a
Ulva sp.
Sera prioritario notificar a los consumidores
de estos cambios estacionales y establecer
vedas de consumo de macroalgas en
temporadas de mayor acumulacin del As,
as como realizar monitoreos peridicos para
llevar a cabo estudios de especiacin de As y
as poder evaluar el riesgo real en las algas
comestibles recolectadas en el Golfo San
Jorge.
Agradecimientos
A la Dra. Dinoraz Vlez del Instituto de
Agroqumica y Tecnologa de Alimentos,
Valencia, Espaa por su valioso aporte para
el desarrollo del presente trabajo.
28
Referencias
Almela, C., Algora, S., Benito, V., Clemente, M.
J., Devesa, V., Ser, M. A., 2002. Heavy
metals total arsenic and inorganic arsenic
contents of algae food products. J Agric Food
Chem 50: 91823.
Almela, C., Clemente, M. J., Vlez, D.,
Montoro, R. 2006. Total arsenic, inorganic
arsenic, lead and cadmium contents in edible
seaweed sold in Spain. Food Chem Toxicol
44: 19011908.
Anzfa. 1997. Australian New Zealand Food
Authority. Food Standards Code. Issue 41.
AOAC Association of Analytical Communities,
Official Methods for Analysis. 2006.
Association
of
Official
Agricultural
Chemists. The AOAC 18th, Washington
(DC). Government Printing Office.
Boraso de Zaixso A. 1998. Porphyra columbina
(Rhodophyta): II. Estadios de Desarrollo en
Punta Maqueda (Provincia de Santa Cruz,
Argentina). Physis 55:915.
Caliceti, M., Argese, E., Sfriso, A., Pavonim, B.
2002. Heavy metal contamination in the
seaweeds of the Venice lagoon. Chemosphere
47: 443-454.
Castellanos Gonzlez M. L., Lzara Sosa P.,
Angel R. Moreira G., Herminia Maya,
Saumel Prez S., Angel R. Len P., Gmez
M. B. (2005). Concentracin de arsnico en
macroalgas marinas de la Baha de
Cienfuegos, Cuba. Rev Invest Mar 26 (1):2126.
Cullen, W. y Reimer, K.J. 1989. Arsenic
Speciation in the Environment. Chem Rev 89:
713-764.
Chaudhuri, A., Mitra, M., Havrilla C.,
Waguespack, Y., Schwarz, J. 2007. Heavy
metals biomonitoring by seaweeds on the
Delmarva Peninsula, East Coast of the USA.
Bot Mar 151-158.
Darcy-Vrilln, B. 1993. Nutritional aspects of
the developing use of marine macroalgae for
the human food industry. Int J Food Sci Nut
44:23-35.
Dawson, S.B. y Trapp, R. 1994. Bioestadstica

mdica. 1ra ed. Mxico: Editorial El Manual
Moderno.
Djingova, R., Kuleff, I., Arpadjan, S.,
Alexandrov, S., Voulgaropoulos, A. 1987.
Neutron Activation and Atomic Absorption
Analysis of Ulva lactuca and Gracilaria
verrucosa from Thermaikos Gulf, Greece.
Toxicol Environ Chem 15:149-158.
EURACHEM-CITAC Guide. 2000. Quantifying
Uncertainty in Analytical Measurements.
Second Edition. S.L.R. Elison, M. Rosslein,
A. Williams Eds.
Fajardo, M.A., Alvarez, F., Pucci, O.H., Potela,
M.L. 1998. Contenido de algunos nutrientes,
minerales y variaciones estacionales en
Porphyra columbina, alga comestible de la
costa Patagnica Argentina. Arch Latinoam
Nutr 48(3):260264.
Fajardo, M. A. 1998. Estudio de las algas
patagnicas del gnero Porphyra para su
aprovechamiento en la alimentacin humana.
Tesis doctoral. Universidad Nacional de la
Patagonia San Juan Bosco. Chubut,
Argentina.
Falc, G., Nadal, M., Llobet, J.M., Domingo, J.
L. M. 2006. Riesgo txico por metales
presentes en alimentos. En: Camen, A.M.,
Repetto,
M.,
editores.
Toxicologa
Alimentaria. Espaa: Ediciones Daz Santos
p. 311-326.
Faras, S., Prez, S., Vodopivez, C.,
Smichowski, P. 2002. Levels of essential and
potentially toxic trace metals in Antrtic
macroalgae. Spectrochim Acta B 57: 21332140.
Ferrario, M., Sar, E., Krisler, A., Cerezo, A.,
Werlinger, C. 1997. Macroalgas de Inters
Econmico. Editorial de la Universidad
Nacional de La Plata 296.
FSA, Food Standard Agency. 2004. Committee
on toxicity of chemicals in food, consumer
products and the environment. United
Kingdom. Disponible en URL:
http://www.food.gov.uk/multimedia/pdfs/arse
nicseaweed.pdf
y
29
http://www.food.gov.uk/multimedia/pdfs/TO
X-2004-35.pdf
Fujiwara-Arasaki, T., Mino N., Kuroda, M.
1984. The protein value in human nutrition of
edible marine algae in Japan. Hydrobiol J
116/117: 513516.
Fuge, R., James, K. H. 1974. Trace metal
concentrations in Fucus from the Bristol
Channel. Mar Pollut Bull 5, 912.
Gerlach, S.A. 1981. Opportunities and uses of
the Ocean. Marine pollution Diagnosis and
Therapy. Berlin: Springer-Verlarg Berlin
Heidelberg New York p. 158-163.
Haritonidis, S. y Malea, P. 1995. Seasonal and
local variation of Cr, Ni and Co concentration
in Ulva rigida C. Agarth and Enteromopha
linza (Linneeus) from Thermaikos Gulf,
Greece. Envir Pollut 89: 319-327.
Haritonidis, S., Malea, P. 1999. Biocumulation
of metals by the green alga Ulva rigida from
Thermaikos Gulf, Greece. Envir Pollut 104:
365-372.
Laparra, J.M., Vlez, D., Montoro, R., Barber,
R., Farr, R. 2003. Estimation of arsenic
bioaccessibility in edible seaweed by an in
vitro digestion method. J Agric Food Chem
51: 6080-6085.
Laparra, J.M., Vlez, D., Montoro, R., Barber,
R., Farr, R. 2004. Bioaccessibility of total
As, inorganic arsenic, As (III) and As (V) in
raw and cooked H. fusiforme seaweed:
Influence of in vitro gastric and intestinal
stage. App Organomet Chem 18: 662-669.
Leister, G.L., Morris, J. 1990. Algae in Everyday
Life. Carolina Biological Supply Company.
U.S.A. 53(9): 3335.
Mabeau, S., Fleurence, J. 1993. Seaweed in food
products: biochemical and nutritional aspects.
Trends Food Sci Technol 4: 103-107.
Misheer, N., Kindness, A., Jonnalagadda, S. B.
2006. Seaweeds along KwaZulu-Natal Coast
of South Africa -3: Elemental Uptake by Ulva
lactuca (Sea Lettuce) J.Environ. Science
Health Part A 41:12491259.
Morita, M., Shibata, Y. 1990. Chemical form of

arsenic in marine macroalgae. App
Organomet Chem 4:181-190.
Muse, J.O., Tudino, M.B., d'Huicque, L.,
Troccoli, O.E., Carducci, C.N. 1989. Atomic
absorption spectrometric determination of
inorganic and organic arsenic in some marine
benthic algae of the southern Atlantic coast.
Environ Pollut 58:30312.
Norman, J. A., Pickford, C. J., Sanders, T. W.,
Waller, W. 1987. Human intake of arsenic
and iodine from seawater-based food
supplements and health foods available in the
UK. Food Add Contam 5:103-109.
Prs, J.M. 1980. Polucin por sustancias
minerales no nutritivas. En: Prs, J.M.
Bellan, G., Ramade, F., Ancellin, J., Le
Lourd, P.M., Gauthier, M., Soudan, F.,
Bellan, Santini, D. La Polucin de las aguas
marinas. Barcelona: Ediciones Omega p. 2233.
Phillips, D.J.H. 1990.Arsenic in aquatic
organisms: a review, emphasizing chemical
speciation. Aquatic Toxicol 16:161-186.
Phaneuf, D, Ct, I., Dumas, P., Ferron, L.A.
1999. Evaluation of the Contamination of
Marine Algae (Seaweeds) from St Lawrence
River and Likely to be Consumed by
Humans. Environ Res S A (80): S175-S182.
Riget, F., Johansem, P., Asmud, G. 1997.
Baseline levels and naturale variability of
elements in three seaweeds species from west
Greenland. Mar Pollut Bull 34: (3), 171-176.
Riget, F., Johansen, P., Asmund, G.1995.
Natural seasonal variation of cadmium,
copper, lead and zinc in brown seaweed
(Fucus vesiculosus). Mar Pollut Bull 30:(6),
409413.
Rdenas de la Rocha S., Snchez-Muniz F.J.,
Gmez-Juaristi M., Larrea Marn M.T. 2009.
Trace elements determination in edible
seaweeds by an optimized and validated ICPMS method. J Food Comp Anal 22: 330336.
Rose, M., Lewis J., Langhford N., Baxter M.,
Origgi S., Narber M., MacBain H., Thomas
K. 2007. Arsenic in seaweedForms,
30
concentration and dietary exposure. Food
Chem Toxicol 45: 1263-1267.
Sapp, R.E., and Davidson, S.D. 1991.
Microwave digestion of multi-component
foods for sodium analysis by atomic
absorption spectrometry. J Food Science 56
(5): 1412-1414.
Sciutto, J.C. 1995. Orgen y migracin de los
hidrocarburos en la cuenca del Golfo San
Jorge, Argentina. Naturalia Patagnica.
Ciencias de la Tierra 3: 1-23.
Sfriso, A., Pavoni, B., Marcomini, A., Orio, A.
A. 1992. Department of Environmental
Macroalgae, Nutrient Cycles, and Pollutants
in the Lagoon of Venice. Estuaries 15:517528.
Shibata, Y., Jin, K., Morita, M. 1990. Arsenic
compounds in edible red alga, Porphyra
tenera, and in nori and yakinori, fooditems
produced from red algae. App Organomet
Chem 4:255-260.
Soria, M.L., Repetto, G., Repetto, M. 1995.
Revisin general de la Toxicologa de los
metales. En: Repetto M. Toxicologa
Avanzada. Madrid: Editorial Daz Santo p.
393-424.
Van Netten, C., Hoption, Cann S. A., Morley,

D.R., and Van Netten, J. P. 2000. Elemental
and radioactive analysis of commercially
available seaweed. Sci Total Environ 255:
169-175.
Vasquez, J. A, Guerra, N. 1996. The use of
seaweeds as bioindicators of natural and
anthropogenic contaminants in northern
Chile. Hydrobiol 326:32733.
Villares, R., Puente, X., Caballeira A. 2002.
Seasonal Variation and Background levels of
heavy metals in two green seaweeds. Environ
Pollut 119:179-190.
Wei, C., Weihua, Li., Chao, Zhang, Marijn, Van,
Hulle, Rita, C., Xinrong, Zhang. 2003. Safety
Evaluation of Organoarsenical Species in
Edible Porphyra from the China Sea. J Agric
Food Chem 51: 5176-5182.
Yasui, A., Tsutsumi, C., Toda, S. 1983. Some
characters
of
water-soluble
arsenic
compounds in marine brown algae, Hijiki
(Hijikia fusiforme) and Arame (Eisenia
bicyclis). Agric Biol Chem 47:1349-1351.
Yun, Y.S., Park D, Park J. M, Volesky B 2001.
Biosorption of trivalent chromium on the
brown seaweed biomass. Environ Sci Technol
35:4353-4358.
Amim et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):31-46
31
Eliminao autotrfica de nitrognio pela oxidao de

tiossulfato atravs de uma cultura mista de microrganismos
Rafael S. Amim1, Fabrcio B. Santana2, Willibaldo Schmidell1 e Hugo M. Soares1*
1
Departamento de Engenharia Qumica Universidade Federal de Santa Catarina, Laboratrio de

Engenharia Bioqumica, Centro Tecnolgico. Campus Universitrio, C.P. 476 CEP: 88010-970
Florianpolis SC Brazil
2
Departamento de Qumica, Universidade Federal do Rio Grande Rua Eng. Alfredo Huch 475,
Rio Grande RS Brazil
*
Autor de correspondncia: soares@enq.ufsc.br
Resumo
Atualmente o principal impacto poluidor nos recursos hdricos ocasionado pelo lanamento de
efluentes industriais e esgotos domsticos sem tratamento. A matria orgnica continua sendo
aquela de maior impacto, devido s grandes quantidades envolvidas principalmente em pases em
desenvolvimento. No entanto, outros poluentes como metais pesados, nitrognio, fsforo e
enxofre, alm de micro poluentes de difcil biodegradao, tm sido matria de investigao.
Uma nova tecnologia para remover alguns destes poluentes dos efluentes a desnitrificao
autotrfica pela oxidao de compostos de enxofre como tiossulfato (S2O3-2), sulfeto (S-2) e
enxofre elementar (S0). Este processo realizado pela bactria Thiobacillus denitrificans. Neste
trabalho foi enriquecida uma cultura mista de microrganismos, inicialmente inoculado com uma
mistura de bactrias aerbias e anaerbias, provenientes de plantas de tratamento de efluentes
domsticos e industriais, submetidas a um meio autotrfico, para remover nitrognio na forma de
nitrato (N-NO3-) pela oxidao de compostos de enxofre na forma de tiossulfato (S-S2O3-2). Um
reator de 10 L de volume til foi alimentado diariamente durante 211 dias para adaptar a
biomassa. Uma remoo de nitrognio acima de 90% e uma converso total do enxofre na forma
de tiossulfato a sulfato foi obtida quando o processo apresentava-se estvel. Um balano de
massa feito para o reator em condies de pseudo estado estacionrio demonstrou que o processo
tratava-se da desnitrificao autotrfica do nitrato, utilizando o tiossulfato como doador de
eltrons, apresentando valores de relao entre a produo de sulfato e remoo de nitrognio
(YN/S) similares ao estequiomtrico (0,35 mgN-NO3-/mg S-SO4-2). Ensaios cinticos em batelada,
realizados com a cultura mista de microrganismos enriquecida, comprovaram os resultados do
balano de massa apresentando valores similares da relao YN/S. Concluiu-se que possvel
estabelecer este processo a partir de uma cultura mista de microrganismos facilmente encontrados
em sistemas de tratamento de efluentes convencionais, apresentando um grande potencial para
sua aplicao em larga escala.
Palavras chave: desnitrificao autotrfica, Thiobacillus denitrificans, remoo de nitrognio,
oxidao de enxofre.
32
Abstract
Nowadays, the main environmental impact is the pollution of the water resources caused by
industrial and domestic wastewater without treatment. The organic matter is still the main
pollutant that causes environmental impact on developing countries because of the large
quantities it is generated. However, other pollutants such as heavy metals, nitrogen, phosphorous
and sulfur, besides recalcitrant micro pollutants, have being a matter of investigation. A new
technology used to remove some of these pollutants in wastewaters is the autotrophic
denitrification by the oxidation of reduced sulfur compounds, such as thiosulfate (S2O3-2), sulfide
(S-2), and elementary sulfur (S0). This process is performed by Thiobacillus denitrificans. In this
work, it was enriched a mixed culture of microorganisms, inoculated with a mixture of aerobic
and anaerobic bacteria cultures from industrial and domestic wastewater treatment plants,
submitted to an autotrophic media, to remove nitrogen as nitrate (N-NO3-) by sulfur oxidation as
thiosulfate (S-S2O3-2). A 10 L net volume reactor was used to adapt the biomass during about 211
days of operation. Nitrogen removal above 90% and a complete conversion of the sulfur as
thiosulfate to sulfate was reached when the process was stable. A reactor input and output mass
balance on a pseudo steady state conditions demonstrated the main processes occurred was the
nitrate autotrophic denitrification using thiosulfate as final electron acceptor, showing a nitrate
removal and sulfate production yield (YN/S) similar to the stoichiometric value (0,35 mgN-NO3/mg S-SO4-2). Kinetic assays in batch reactors with the enriched microorganisms confirmed the
results obtained in the mass balance, showing similar values for YN/S. It was concluded that it is
possible to establish this process starting from a mixed culture of microorganisms easily found in
conventional wastewater treatment systems, presenting a great potential for its application in full
scale plants.
Keywords: autotrophic denitrification, Thiobacillus denitrificans, nitrogen removal, sulfur
oxidation.
1. Introduo
Atualmente, o principal impacto poluidor a
degradao
dos
recursos
hdricos,
ocasionada pelo lanamento de efluentes
industriais e esgotos domsticos sem
tratamento. Estes efluentes contm diversos
poluentes como metais pesados, matria
orgnica, e substncias como nitrognio e
enxofre.
Os impactos ocasionados pelo nitrognio no
meio ambiente so o fenmeno da
eutrofizao, toxicidade aos peixes (amnia),
doena em recm nascidos (nitrato), alm do
fato da amnia gerar demanda qumica de
oxignio (Liu e Koenig, 2002; Kimura et al.,
2002). Vrias indstrias promovem a
gerao de efluentes contendo elevadas
concentraes de nitrognio, podendo-se

citar a qumico-farmacutica (340 mgNNH4+. L-1), abatedouros (200mgN-NH4+.L1
), curtume (200-500 mgN-NH4+.L-1), usina
de lcool e acar (450 -1610 mgN.L-1),
suinocultura (1000 mgN-NH4+.L-1) entre
outras (Ramos et al., 2007; Mittal, 2005;
Carrera, 2003).
O impacto ambiental gerado pelo enxofre
consiste principalmente pela formao da
chuva cida, odor ofensivo, corroso de ao
e concreto, demanda qumica de oxignio,
toxicidade aos microrganismos e ao homem
(Gadekar et al., 2006; Vaiopoulou et al.,
2005). Entre as empresas que possuem
efluentes com essas caractersticas destacamse a txtil (1800-2000 mg SO4-2.L-1),
curtume (1800 mgSO4-2.L-1), fermento (5000
33
mg SO4-2. L-1); minerao (drenagens cidas
de minas, 350550 mg SO4-2.L-1, ou at
1500 7200 mg SO4-2.L-1), entre outras
(Menert et al., 2004; da Silva, 2005; Roger
et al., 2006; Boshoff et al., 2004). De acordo
com a resoluo do Conselho Nacional de
Meio Ambiente Brasileiro (Conama
357/2005) para lanamento de efluentes nos
corpos dgua, devem ser mantidos os
limites de 20 mgN-NH4+.L-1 e 1,0 mgS-2.L-1,
alm de preservar as
caractersticas e
padres de cada classe de gua (por exemplo
guas doces, classe 1, 10 mgN-NO3-.L-1 e
250 mgSO4-2.L-1).
Diante desta situao necessrio promover
o tratamento de efluentes evitando-se a
degradao do meio ambiente. Os processos
de tratamento para remoo de nitrognio
esto amplamente difundidos na literatura,
destacando-se
o
de
nitrificao/desnitrificao, alm dos novos
processos, Sharon, Oland, Canon, Anammox
e NOx (Schmidt et al., 2003; Verstraete e
Philipps, 1998; Ahn, 2006). Os destinados
remoo de enxofre, at hoje desenvolvidos,
consistem na reduo de sulfato a sulfeto
com posterior oxidao de sulfeto a enxofre
elementar e no stripping do sulfeto (Sipma
et al., 1999; Krishnakumar et al., 2004). A
maior dificuldade destes processos a de
atender aos parmetros da legislao, por
isso a importncia de desenvolvimento de
novas tecnologias.
Outra questo importante a ser lembrada
que todos os processos mencionados
promovem a remoo destes compostos
separadamente, no associando outros
metabolismos que ocorrem em um ambiente
natural, quando se trata um efluente real,
onde esto presentes vrios substratos
passveis de metabolizao havendo
necessidade de se investigar estas interaes.
Mais recentemente, vem se desenvolvendo
um processo que realiza a desnitrificao
autotrfica do nitrognio utilizando formas
reduzidas de enxofre como doadores finais
de eltrons como tiossulfato, sulfeto e

enxofre
elementar,
possibilitando
a
integrao dos ciclos bioqumicos do
nitrognio e do enxofre. A desnitrificao
autotrfica
via
enxofre
ocorre
principalmente
pela
atuao
do
microrganismo Thiobacillus denitrificans.
Estudos atuais caracterizam o Thiobacillus
denitrificans como anaerbio facultativo,
quimioautotrfico obrigatrio, membro do
-Proteobacteria (Wang et al., 2005; Beller
et al., 2006). Possui a capacidade de crescer
em condies aerbias, alm de, em
condies anaerbias, oxidar compostos de
enxofre utilizando nitrato, nitrito e xidos de
nitrognio como aceptores finais de eltrons.
A versatilidade metablica propicia grande
aplicao em sistemas de tratamento
biolgico. As condies timas para
crescimento so: temperatura entre 28 e 30
C, faixa de pH entre 6 e 8 (Kelly & Wood,
2000; Wang et al., 2005).
Wang et al. (2005) investigaram a cintica
de desnitrificao, com cultura pura de
Thiobacillus denitrificans, em processos em
batelada e contnuo, utilizando sulfeto de
hidrognio como doador de eltrons e nitrato
como aceptor. Concluiu-se que os fatores
determinantes para estabelecimento do
processo so a razo S-2/NO3- (5/3 a 5/2
sendo as ideais) e a concentrao de sulfeto
(< 300 mgS-2.L-1).
Moon et al. (2003), utilizando o mesmo
microrganismo, estabeleceram o processo de
desnitrificao autotrfica via oxidao de
enxofre elementar, obtendo eficincia de
remoo de nitrognio de 90%. Constatou-se
ainda o baixo acmulo de nitrito durante a
realizao do processo.
Visando a operao de reatores em escala
real, h necessidade de se verificar a
obteno de culturas de microrganismos
mais facilmente disponveis e abundantes,
capazes de realizar o processo de
compostos reduzidos de enxofre. Assim, o
34
objetivo deste trabalho foi o de adaptar uma
cultura mista de microrganismos, obtida de
processos convencionais de tratamento
biolgico, a este processo, alm de
caracterizar os seus parmetros cinticos e
compar-los aos apresentados na literatura
para as culturas puras de Thiobacillus
denitrificans.
2. Material e Mtodos
2.1 Microrganismos
O inculo utilizado para estabelecer o
processo de desnitrificao e oxidao do
enxofre foi coletado de duas fontes distintas.
Realizou-se uma coleta de lodo na Estao
de Tratamento de Esgoto, sistema de Lodos
Ativados, da Companhia de guas e
Saneamento do Estado de Santa Catarina
(Casan). Outra coleta foi realizada no
sistema de tratamento anaerbio de uma
indstria de bebidas, localizada em Santa

Catarina.
Os referidos inculos passaram por um
tratamento preliminar, sendo o inculo
Casan submetido a um sistema de
peneiramento, para remoo de partculas
suspensas, e o inculo anaerbio foi drenado
para reduzir o teor de gua do mesmo. O
inoculo inicial foi de 4g SSV.L-1 e uma
proporo de 50% (m/m) de cada lodo.
2.2 Meio de cultivo
O reator era alimentado diariamente com
soluo sinttica contendo nitrato (N-NO3-),
como fonte de nitrognio; Tiossulfato (SS2O3-2), como fonte de enxofre; bicarbonato
(NaHCO3-), como fonte de carbono e
tampo; alm de soluo de meio nutriente,
adaptado de Campos et. al. (1999), conforme
apresentado na Tabela 1.
Tabela 1: Soluo de nutrientes do meio estoque.

Composto
EDTA .2H2O
Concentrao (g/L)
55,35
FeSO4.7H2O
ZnSO4.7H2O
CaCl2.2H2O
4,99
21,99
7,34
MnCl2.2H2O
CuSO4.5H2O
(NH4)6.MoO24.4H2O
CoCl2.6H2O
5,06
1,57
1,10
1,61
KH2PO4
0,25
Os reagentes eram adicionados ao meio

sinttico a partir de duas solues estoques,
uma de enxofre (10 g S-S2O3-2.L-1) e outra
de nitrognio (10 g N-NO3-.L-1). O volume
adicionado de cada soluo estoque variou
de acordo com cada fase de operao do
reator contnuo. A partir de uma soluo
estoque de bicarbonato de sdio (40 g.L-1),
era adicionada a fonte de carbono do meio,
sendo utilizado 200 mL a cada 2L
alimentado, dosagem esta suficiente para

manter o pH em torno de 8. Alm disso,
adicionava-se diariamente 1,4 mL da soluo
de nutrientes a cada 2 L alimentado.
A contribuio de S-SO4-2 adicionado ao
meio de cultivo pela adio da soluo de
nutrientes foi de apenas 4,0 mg.L-1, sendo
esta desprezada no computo dos resultados,
uma vez que a faixa de concentrao deste
on estudada foi de 100 a 500 mg.L-1.
35
2.3 Reator semi-contnuo

A adaptao da cultura mista de
microrganismos foi feita em um reator sem
mistura mecnica, com volume total de 20L,
volume til de 10L, medindo 22 cm de
largura, 26 cm de comprimento e 36 cm de
profundidade, O sistema era completamente
vedado, evitando-se a introduo de
oxignio. Inicialmente o espao da fase
gasosa do reator foi lavada com argnio para
garantir anaerobiose.
O reator anaerbio foi operado durante 211
dias temperatura ambiente, sendo
alimentado com meio sinttico. A
alimentao era realizada uma vez ao dia,
num regime semi-contnuo, mantendo um
tempo de reteno hidrulica (TRH) de 5
dias. Durante a alimentao agitava-se o
contedo do reator para promover a sua
homogeneizao. A retirada de lquido
tratado era feita quando o reator estava em
repouso garantindo a sedimentao do lodo e

retirada do sobrenadante.
A operao do reator dividiu-se em trs
fases, sendo cada fase correspondendo a
progresses de carga de enxofre, conforme
descrito na Tabela 2.
A progresso de carga aplicada tinha por
finalidade permitir uma adaptao gradativa
da biomassa. A composio de S-S2O3-2 e NNO3- variaram de acordo com a condio de
operao aplicada ao reator, sendo mantida a
relao estequiomtrica de S/N, de acordo
com a Equao 1 (Santana, 2006).
Analisando-se a estequiometria proposta na
Equao 1 observa-se uma relao de 5
moles de S2O3-2 para 8 moles de NO3-, o que
implica em uma relao mssica S/N de
2,857, ou N/S de 0,35.
5S2O3-2 + 8 NO3- + H2O 10SO4-2 + 4N2 +2H+
(1)
Tabela 2 - Condies de operao do reator contnuo.

Fases de operao do reator
Fase I
Fase II
Fase III
Carga mgS-S2O3-2.(L.d)-1
20
60
100
Concentrao mgS-S2O3-2.L-1
100
300
500
Concentrao mgN-NO3-.L-1
35
105
175
Tempo de reteno hidrulica TRH (d)
2.4 Ensaios cinticos de desnitrificao

autotrfica
Definidos os ensaios a serem realizados, o
inculo era coletado retirando-se a biomassa
do reator juntamente com o efluente dirio
(2L). Para permitir uma homogeneidade do
sistema inseria-se argnio (gs inerte)
mantendo o efluente em constante agitao
durante a coleta do lodo. Posteriormente
analisava-se o teor de slidos e prosseguia-se

com a lavagem do lodo, isto , propiciava-se
a decantao do lodo para, em seguida,
extrair o sobrenadante. Este procedimento
garantia a eliminao das substncias
contidas no efluente, contribuindo para
eliminar possveis interferncias durante os
experimentos com o inculo. Baseado na
anlise de slidos do efluente e na
36
concentrao desejada para o ensaio
preparava-se 2,5 L (mantendo-se a
concentrao celular de 2gSSV.L-1) de meio
sinttico para a realizao da cintica. O
referido meio era submetido a 10 minutos de
argnio para garantir a eliminao de
oxignio, que interfere no consumo de
tiossulfato oxidando-o. Finalizado o tempo
de insero de argnio, eram transferidos
150 mL de amostra do meio para dezesseis
frascos de soro. Para evitar a introduo de
oxignio de uma amostragem para outra,
adicionava-se argnio em cada frasco, at a
sua completa vedao. Na seqncia os
frascos eram inseridos em um incubador
rotativo a uma temperatura de 30 C (1C).
De acordo com a cintica em estudo
coletam-se amostras de tempos em tempos,
realizando-se as anlises em questo.
2.5 Metodologias analticas
O mtodo do cido saliclico, descrito por
Cataldo et al. (1975), foi adaptado e
empregado para a determinao de nitrato.
As determinaes de slidos suspensos
volteis e sulfato e tiossulfato, foram
realizadas de acordo com o Standard
Methods for Examination of Water and
Wastewater (APHA, 1995). O nitrognio
amoniacal (N-NH4+) foi analisado pelo
mtodo colorimtrico de Nessler segundo
Vogel (1981). A determinao de oxignio
dissolvido fez-se atravs de oxmetro WTW
porttil, modelo OXI 340. A determinao
do potencial de oxidao e reduo fez-se
atravs de uma sonda marca Digimed,
utilizando-se de um analisador modelo TH44.
3. Resultados e Discusso
3.1 Operao do Reator Contnuo

Na Figura 1 esto apresentados os valores
das concentraes de nitrato, amnio e
sulfato medidos no efluente do reator nas
trs fases do processo, durante os 211 dias
de operao. O nitrognio na forma
amoniacal, apesar de no ter sido adicionado
na alimentao, foi monitorado para verificar
se este poderia estar sendo formado por
algum
outro
metabolismo.
Ensaios
preliminares realizados por Amim (2008),
para testar as metodologias analticas de
acompanhamento dos ensaios, demonstraram
que h limitaes nas determinaes
analticas do tiossulfato, quando adicionado
ao meio de cultivo, e do enxofre elementar.
Assim, a verificao da oxidao do
tiossulfato
adicionado
d-se
pela
recuperao do enxofre na forma de sulfato.
A operao do reator foi caracterizada por
trs fases distintas, conforme descrito na
Tabela 2. Observa-se que as fases I e II
foram mais curtas em decorrncia do
objetivo do estudo. Planejou-se atingir a
concentrao de 500 mgS-S2O3-2.L-1 para
realizar ensaios cinticos, garantindo-se
assim
uma
atividade
maior
dos
microrganismos
e
aproximando
a
concentrao de enxofre a efluentes
industriais. Destaca-se ainda a elevada
converso de substrato, permitindo o rpido
aumento de carga, total converso de
tiossulfato a sulfato, com o concomitante
consumo de nitrato, e a baixa formao de
amnio.
Em termos de cargas aplicadas, observa-se
que esta poderia ser aumentada, pois no foi
atingido o limite do sistema. No houve
qualquer indicao de inibio do processo
pelas elevadas concentraes de nitrato e de
tiossulfato aplicados.
37
Figura 1: Monitoramento das concentraes dos ons durante a operao do reator

contnuo, nas fases I, II e III.
Na Tabela 3 observam-se as eficincias do

processo em cada etapa de operao. Nas
fases I e II praticamente ocorreu
desnitrificao total, e na fase III identificouse um pequeno residual de nitrato, que
promoveu a reduo da eficincia. Nesta
fase III houve uma oscilao maior da
concentrao de nitrato no efluente devido
remoo de biomassa do reator para a
realizao
dos
ensaios
cinticos,
caracterizando assim perodos com residual

de nitrato e variao de sulfato, mas o
processo foi capaz de se restabelecer com
altas eficincias de remoo de ambos
substratos. Estes esto coerentes com o
estudo de Monn et al. (2003) e Wang et al.
(2005) que apresentam converses similares
com o cultivo de Thiobacillus denitrificans
em cultura pura.
Tabela 3: Eficincia mdia do processo em cada etapa de operao do reator contnuo.
Remoo de
Nitrognio
92%
II
95%
100%
III
88%
100%
Fase
O controle do pH neste processo de

fundamental importncia. Os estudos
realizados por Santana (2006) direcionaram
os procedimentos praticados neste trabalho.
Na Figura 2 observa-se a variao do pH no
reator. O pH permaneceu em uma faixa de
7,70 a 8,37 e, em mdia, no valor 8,00, que,
Converso a sulfato
100%
para microrganismos como Thiobacillus

denitrificans em cultura pura, considerado
ideal (Kelly & Wood, 2000). A manuteno
do pH foi somente devido a adio de
bicarbonato no meio no havendo
necessidade de se adicionar cidos ou
lcalis.
38
Figura 2: Variao do pH no reator contnuo
Para se chegar s velocidades de converso

dos substratos e formao de produtos faz-se
necessrio o balano de massa do sistema,
conforme descrito a seguir.
A Equao 2 apresenta o balano de massa

para o nitrognio na forma de nitrato, que
est sendo convertido em nitrognio gasoso.
Supe-se que todo o nitrato est sendo
reduzido a N2 e no ocorra acmulo de
nitrito.
Nitrato consumido (N-NO3-)
d N NO3
D N NO3e D N NO3 s N X
dt
Onde:
N-NO3-e: concentrao de nitrognio
(nitrato) na alimentao do reator (mg NNO3-.L-1);
N-NO3-S: concentrao de nitrognio
(nitrato) no efluente ou no reator (mg NNO3-.L-1);
D: vazo especfica (d-1)
NO
3
(2)
N: velocidade especfica de consumo de

nitrato (mg N-NO3-.(gSSV.d)-1);
X: concentrao celular (gSSV.L-1).
Considerando-se um estado pseudoestacionrio para determinados perodos do
reator, pode-se escrever:
d N NO3
0
dt
Assim, rearranjando a Equao 4 temos a
Equao 4:
D N NO3 e N NO3 s
(3)
(4)
Sendo D calculado pela Equao 5:
D
Onde:
Q: vazo de alimentao (2 L.d-1)
V: volume do reator (10 L)
Q 2L / d
0,2 d 1
V
10 L
(5)
39
Atravs da Equao 4 pode-se calcular a

velocidade especfica de consumo de nitrato
de cada fase de operao do reator. Para
realizao destas medidas definiu-se o
perodo considerado em estado pseudo-
estacionrio, alm das concentraes mdias

de nitrato afluente e efluente, e a
concentrao celular mdia de cada fase,
conforme apresentado na Tabela 4.
Tabela 4: Velocidades especficas de consumo de nitrato durante as trs fases de operao do reator contnuo.
Fase
Perodo
(dias)
N-NO3-e
(mg.L-1)
N-NO3-s
(mg.L-1)
X
(g SSV.L-1)
N
(mg N-NO3-.
(g SSV.d)-1)
12-25
41,30
3,73
3,41
2,20
II
32-50
114,35
6,12
3,08
7,03
III
57-211
182,57
21,11
2,83
11,41
Observando-se os resultados percebem-se os

baixos valores de velocidades especficas de
consumo de nitrato, isto se deve em parte ao
TRH elevado, evidenciando assim a
possibilidade
de
reduo
deste
e
conseqentemente o aumento da atividade
dos microrganismos. Entretanto, o reator
tinha como principal funo manter a flora
bacteriana ativa e adaptar os microrganismos
ao processo de desnitrificao autotrfica via
oxidao do enxofre. Demonstra-se ainda
que, medida que houve um incremento na
concentrao de substrato, esta velocidade
tambm aumentou ratificando a adaptao

dos mesmos ao processo.
Sulfato produzido (S-SO4-2)
Devido ausncia de uma metodologia
capaz de quantificar a variao da
concentrao de tiossulfato em efluentes, o
balano de massa de enxofre limitou-se a
formao de sulfato. O balano de massa de
sulfato foi calculado baseado na Equao 6.
d S SO42
D S SO4 2 s s X
dt
Onde:
S-SO4-2: concentrao de sulfato produzido
no reator (mg S-SO4-2 .L-1);
s: velocidade especfica de produo de
sulfato (mg S-SO4-2.(gSSV.d)-1);
(6)
De forma similar ao desenvolvimento das

equaes para o nitrato, adotando-se as
mesmas consideraes para a vazo
especfica (D), o mesmo perodo de estado
pseudo-estacionrio e a concentrao celular
determinaram-se as velocidades de produo
de sulfato, explicitadas na Tabela 5.
40
Tabela 5: Velocidades especficas de formao de sulfato durante as trs fases de operao do reator
contnuo.
Fase
Perodo
(dias)
S-SO4-2s
(mg.L-1)
X
(g SSV.L-1)
12-25
107,38
3,41
S
(mg S-SO4-2.
(g SSV. d)-1)
6,30
II
32-50
326,34
3,08
21,19
III
57-211
548,62
2,83
38,77
Assim como para as velocidades especficas

de consumo de nitrato, houve um incremento
nas velocidades especficas de produo de
sulfato medida que foram aumentadas as
concentraes dos substratos.
Relao entre a produo de sulfato e
remoo de nitrognio
De acordo com a Equao 1, a relao entre
nitrognio removido (N-N2) e sulfato
produzido (S-SO4-2) de 0,35 mgN-N2.(mg
S-SO4-2)-1. Para verificar se o processo de
desnitrificao via oxidao do tiossulfato de

fato ocorreu segundo a Equao 1,
determinou-se a relao YN/S (fator de
converso do sulfato produzido em
nitrognio removido) atravs da Equao 7.
Este clculo baseou-se nas velocidades
especficas de consumo de nitrato (ou
formao de N2) e velocidades de produo
de sulfato determinadas no item anterior. Na
Tabela 6 esto apresentados estes valores.
YN / S
N
S
(7)
Tabela 6: Relao YN/S em cada fase de operao do reator contnuo.
N
(mg N-NO3-/g SSV. d)
2,20
S
(mg S-SO4-2/g SSV. d)
6,30
YN/S
(mgN-NO3-/mg S-SO4-2)
0,349
II
7,03
21,19
0,332
III
11,41
38,77
0,294
Fase
Os resultados indicam que o processo

estabelecido no reator anaerbio a
desnitrificao via oxidao do tiossulfato,
ratificada pelos valores de YN/S prximos ao
estequiomtrico (0,35 mgN-NO3-/mg S-SO42
). Salienta-se ainda que houve uma reduo
do fator medida que a concentrao de
substratos foi elevada. Isto pode ter ocorrido
pela oxidao de tiossulfato por outros
processos metablicos que a desnitrificao
autotrfica, visto que aumentou a
disponibilidade de substratos e por tratar-se

de uma cultura mista.
3.2 Ensaios Cinticos com a Cultura de
Microrganismos
Para caracterizar a cultura mista de
microrganismos adaptada e enriquecida no
reator foram realizados ensaios cinticos
para
avaliar
a
atividade
destes
microrganismos. Estes ensaios foram
realizados em cada fase de operao,
41
seguindo a metodologia descrita no item 2.4.
As condies do ensaio foram: manuteno
da temperatura em 30C, a concentrao
celular de 2 gSSV.L-1, variao da
concentrao de substrato de acordo com
aquelas aplicadas nas fases de operao

(utilizou-se a relao estequiomtrica
mssica S/N de 2,857). Nas Figuras 3, 4 e 5
pode-se observar o resultado destes ensaios.
Concentrao mg.L -1
Monitoramento da Biomassa
120,0
9,00
100,0
8,80
80,0
8,60
60,0
8,40
40,0
8,20
20,0
8,00
0,0
7,80
N-NH4+
N-NO3-
3
4
5
Tempo (h)
SO4-2
pH
Figura 3 : Ensaio cintico de monitoramento da cultura de microrganismos na fase I 100 mgSS2O3-2.L-1
Monitoramento da biomassa
Concentrao mg.L -1
350,0
9,20
300,0
8,80
250,0
200,0
8,40
150,0
8,00
N-NH4+
N-NO3S-SO4-2
pH
100,0
7,60
50,0
0,0
7,20
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Tempo (h)
Figura 4: Ensaio cintico de monitoramento da cultura de microrganismos na fase II 300 mgSS2O3-2.L-1
42
Monitoramento da biomassa
Concentrao mg.L -1
9,20
500,0
8,80
400,0
N-NH4+
8,40
N-NO3-
200,0
8,00
S-SO4-2
100,0
7,60
0,0
7,20
300,0
pH
8 10 12 14 16 18 20 22 24
Tempo (h)
Figura 5 : Ensaio cintico de monitoramento da cultura de microrganismos na fase III 500 mgSS2O3-2.L-1
Observa-se, pelos dados das figuras, que

medida que se aumentou a concentrao de
tiossulfato na alimentao mais tempo foi
necessrio para que os substratos fossem
consumidos, porm, todos chegaram a sua
converso mxima no perodo de ensaio.
respectivas curvas de concentrao de

substrato (nitrato) e produto (sulfato) com o
tempo, observando-se que as variaes das
concentraes de sulfato e nitrato so
praticamente lineares em funo do tempo
durante as primeiras 8 horas de experimento,
o que permite o clculo das respectivas
velocidades. As velocidades de consumo de
substrato (rS) e velocidades especficas de
consumo de substrato (S), foram calculadas
de acordo com as Equaes 8 e 9
respectivamente:
Atravs destas curvas podem ser calculadas

as velocidades de consumo de substratos e,
conseqentemente, as velocidades
especficas de consumo de substrato. Estas
velocidades foram calculadas a partir dos
valores de inclinao das tangentes das
rs
Sendo:
rS= velocidade de consumo de substrato ou
velocidade de formao de produto,
mg.(L.h)-1
dS
dT
S= concentrao, mg.L-1
T= tempo, h
1 dS
x dT
s *
Onde:
S= velocidade especfica de consumo de
substrato ou formao de produto,
mg.(gSSV.h)-1
(8)
x= concentrao celular, mgSSV.L-1

S= concentrao, mg.L-1
T= tempo, h
(9)
43
Na Tabela 7 esto representadas as
velocidades especficas de consumo de
nitrato e produo de sulfato, calculadas
atravs das Equaes 2 e 3 para cada uma
das fases. Calculou-se tambm o fator de

converso de sulfato produzido em
nitrognio removido (YN/S) em cada fase de
operao.
Tabela 7: Resultados dos ensaios cinticos.
Fases
N
mgN-NO3.(gSSV.h)-1
S
mgS-SO4-2
.(gSSV.h)-1
YN/S
mgN-NO3(mg S-SO4-2)-1
Fase I
3,156
9,848
0,32
Fase II
3,616
15,619
0,23
Fase III
5,387
19,261
0,28
O incremento dos valores de N e S

evidencia a adaptao e o aumento da
atividade
biolgica
com
a
maior
concentrao de substratos. Novamente, em
concordncia com o balano de massa
realizado para a operao do reator semicontnuo, confirma-se que o processo
realizado
pela
cultura
mista
de
microrganismos
desenvolvida
a
desnitrificao via oxidao do tiossulfato,
ratificada pelos valores de YN/S prximos ao
estequiomtrico (0,35 mgN-NO3-.(mg SSO4-2)-1), porm, um pouco inferiores aos
encontrados na operao contnua do
biorreator. As diferenas podem ser
atribudas ao crescimento celular, que no
est
computado
na
estequiometria
apresentada e a algum outro metabolismo
menos
expressivo,
realizado
pelos
microrganismos, por tratar-se de uma flora
mista. Santana (2006) obteve resultados
similares estudando a eliminao autotrfica
de nitrognio via integrao do ciclo do
enxofre, em reator SBR, operado em
distintas condies, utilizando uma cultura
mista. Para uma das condies, Santana
(2006) obteve velocidades especficas de
consumo dos substratos de 5,39 (mgN-NO3.(gSST.h)-1) e 24,61 (mgS-SO4-2.(gSST.h)-1).
Para sustentar a afirmao de que o processo
tratava-se
apenas
da
desnitrificao
autotrfica utilizando o tiossulfato como
aceptor de eltrons, Amim (2008) realizou

alguns ensaios complementares: o primeiro
foi para verificar se a oxidao do tiossulfato
poderia estar sendo promovida por alguma
falha operacional com a introduo de
oxignio no sistema; o segundo foi para
verificar a influncia da adio da fonte de
carbono autotrfica na forma de bicarbonato.
Chegou-se a concluso de que no ocorre
nenhuma
transformao
abitica
na
converso do tiossulfato. Concluiu-se
tambm que a ausncia de bicarbonato inibe
o processo, indicando que o bicarbonato
deve atuar como fonte essencial de carbono
e muito importante como corretivo de pH em
processos de desnitrificao autotrfica e
que o processo simultneo de oxidao de
tiossulfato e assimilao de carbono
orgnico no ocorre.
4. Concluses
A principal concluso deste trabalho foi de
que possvel estabelecer o processo de
compostos reduzidos de enxofre, no caso o
tiossulfato, partindo de um inculo misto e
de fcil disponibilidade, como reatores de
lodos ativados e anaerbios tratando
efluentes industriais. A resposta da flora de
microrganismos foi imediata, atingindo-se o
equilbrio do processo em poucos dias de
44
operao do sistema. A converso do
tiossulfato a sulfato foi de 100% e a do
nitrato foi superior a 90%, exceto alguns
perodos de instabilidade provocados por
retirada de material celular do reator.
Atravs dos ensaios cinticos com a cultura
mista
desenvolvida,
observaram-se
velocidades de consumo de nitrato e de
produo de sulfato compatveis com as
reportadas na literatura para culturas puras
de Thiobacillus denitrificans. Assim, foram
obtidos valores para o fator de converso de
sulfato produzido em nitrognio removido
(YN/S) prximos ao indicado pela
estequiometria, indicando que o principal
metabolismo
ocorrido
foi
o
da
desnitrificao autotrfica utilizando o
tiossulfato como aceptor final de eltrons.
Os resultados mostram o grande potencial de
aplicao em larga escala deste processo,
porm h muito que investigar na rea. Uma
das questes que devem ser abordadas, alm
da melhor caracterizao e identificao da
cultura mista de microrganismos, o
estabelecimento de condies do processo
para que oxide as formas mais reduzidas de
enxofre (S-2) em enxofre elementar, para que
este possa ser removido do sistema e
promover um processo de eliminao
conjunta de nitrognio e enxofre.
5. Agradecimentos
Agradecemos ao CNPq e FAPESC pelo
financiamento desta pesquisa e a CAPES
pela bolsa de mestrado.
6. Referncias
Ahn, Y.H. 2006.Sustainable nitrogen elimination
biotechnologies: A review. Process Biochem
41: 1709-1721.
Amim, R. S. 2008. Avaliao de parmetros
cinticos de uma cultura mista de
microrganismos destinados eliminao
autotrfica de nitrognio via oxidao de
tiossulfato.
Dissertao
de
Mestrado
(Engenharia Qumica). Departamento de
Engenharia Qumica, Universidade Federal
de Santa Catarina, Florianpolis, SC. 176 p.
APHA, AWWA, WEF. 1995. Standard methods
for the examination of water and wastewater.
19th.edn.
American
Public
Health
Association. Washington, DC.
Beller, H.R.; Chain, P.S.G.; Letain, T.E.;
Chakichrla, A.; Larmier, F.W.; Richardson,
P.M.; Coleman, M.A.; Wood, A.P.; Kelly,
D.P. 2006. The genome sequence of the
obligately
chemolithoautotrophic,
facultatively
anaerobic
bacterium
Thiobacillus denitrificans. J Bacteriol 188,
(4): 1473-1488.
Boshoff, G.; Duncan, J.; Rose, P.D. 2004.
Tannery effluent as a carbon source for
biological sulphate reduction. Water Res 38:
2651-2658.
Campos, J.L.; Garrido-Fernandes, J.M.; Mendez,
R.; Lema, J.M. 1999. Nitrification at high
ammonia loading rates in a activated sludge
unit. Bioresource Technol 68: 141-148.
Carrera, J.; Baeza, J.A.; Vicent, T.; Lafuente, J.
2003. Biological nitrogen removal of highstrength ammonium industrial wastewater
with two-sludge system. Water Res 37: 42114221.
Cataldo, D.A.; Haroon M; Schrader, L.E.;
Youngs, V.L. 1975. Rapid colorimetric
determination of nitrate in plant tissue by
nitration of salicylic acid. Comun Soil Sc.
Plant Anal 6: 71-80.
Da Silva, A. J. 2005. Biodessulfatao com
posterior oxidao parcial do sulfeto em
reatores operados em bateladas seqncias.
Tese de Doutorado (Engenharia Ambiental)
Escola de Engenharia de So Carlos,
Universidade de So Paulo. So Carlos, SP.
Gadekar, S.; Nemati, M.; Hill, G.A. 2006. Batch
and continuous biooxidation of sulphide by
Thiomicrospira sp. CVO: reaction kinetics
and stoichiometry. Water Res 40: 2436 -2446.
Kelly, D. P. Wood, A. P. 2000. Confirmation of
Thiobacillus denitrificans as a species of the
45
genus Thiobacillus, in the subclass of the
Proteobacteria, with strain NCIMB 9548 as
the type strain. Int J Syst Evol Microb 50:
547-550.
Reuse of tannery wastewaters by combination

of ultrafiltration and reverse osmosis after a
conventional physical-chemical treatment.
Desalination 204: 219-226.
Kimura, A, K.; Nakamura, M.; Watanabe, Y.

2002. Nitrate removal by a combination of
elemental sulfur-based denitrification and
membrane filtration. Water Res 36: 17581766.
Santana, F. B. 2006. Eliminao autotrfica de

nitrognio via integrao dos ciclos do
nitrognio e do enxofre em reator SBR. Tese
de Doutorado (Engenharia Qumica).
Departamento de Engenharia Qumica,
Universidade Federal de Santa Catarina,
Florianpolis, SC. 157 p.
Krishnakumar, B.; Madjumdar, S.; Manilal,V.B.;

Haridas, A. 2005. Treatment of sulphide
containing wastewater with sulphur recovery
in a novel reverse fluidized loop reactor
(RFLR). Water Res 39: 639-647.
Liu, L.H.; Koenig. 2002. A. Use of limestone for
pH control in autotrophic denitrification:
batch experiments. Process Biochem 37:.885893.
Menert, A.; Paalme, V.; Juhkam, J.; Vilu, R..
2004. Characterization of sulfate-reducing
bacteria in yeast industry waste by
microcalorimetry and PCR amplification.
Thermochim Acta 420: 89-98.
Mittal, G. S. 2006. Treatment of wastewater
from abattoirs before land application - a
review. Bioresource Technol 97: 1119-1135.
Moon, H.S.; Ahn, K.-H.; Lee, S.; Nam, K.; Kim,
J.Y. 2004. Use of autotrophic sulfur-oxidizers
to remove nitrate from bank filtrate in a
permeable reactive barrier system. Env Pol
129: 499-507.
Ramos, A.F.; Gomes, M.A.; Hontoria, E.; Lpez,
J. G. 2007. Biological nitrogen and phenol
removal from saline industrial wastewater by
submerged fixed-film reactor. J Hazard
Mater 142: 175-183.
Roger, M. F.; Roca, J.A. M.; Aleixandre, M.V.
G.; Pia, A. B.; Uribe, B. C.; Clar, A. I. 2007.
Schmidt, I.; Sliekers, O.; Schmid, M.; Bock, E.;

Fuerst, J.; Kuenen, J.G.; Jetten, Mike S.M.;
Strous, M. 2003. New concepts of microbial
treatment processes for the nitrogen removal
in wastewater. FEMS Microb Rev 27: 481492.
Sipma, J.; Lens, P.; Vieira, A.; Miron, Y.; Van
LierJ.B.; Pol, L.W. H.; Lettinga, G. 1999.
Thermophilic sulphate reduction in upflow
anaerobic sludge bed reactors under
acidifying conditions. Process Biochem 35:
509-522.
Vaiopoulou, E.; Melidis, P.; Aivasidis, 2005. A.
Sulfide removal in wastewater from
petrochemical industries by autotrophic
denitrification. Water Res 39: 4101-4109.
Verstraete, W.; Philips, S. 1998. Nitrificationdenitrification processes and technologies in
new contexts. Env Pol 102: 717-726.
Vogel, A. I. 1981. Anlise Inorgnica
Quantitativa. Quarta edio, Guanabara. Rio
de Janeiro, Brazil.
Wang, A.; Du, D.; Ren, N.; Van Groenestijn, J.
W. 2005. An innovative process of
simultaneous
desulfurization
and
denitrification by Thiobacillus denitrificans. J
Environ Sci Heal A 40 (10): 1939-1949.
46
Lista e Smbolos
N-NO3-: concentrao de nitrognio (nitrato) (mg N-NO3-.L-1)
N-NO3-e: concentrao de nitrognio (nitrato) na alimentao do reator (mg N-NO3-.L-1)
N-NO3-S: concentrao de nitrognio (nitrato) no efluente ou no reator (mg N-NO3-.L-1)
Q: vazo de alimentao (2L.d-1)
rS: velocidade de consumo de substrato ou velocidade de formao de produto, mg.(L.h)-1
S-S2O3-2: concentrao de enxofre (Tiossulfatotiossulfato) (mgS-S2O3-2L-1)
S-SO4-2: concentrao de sulfato produzido no reator (mg S-SO4-2L-1)
S: concentrao, mg.L-1
T: tempo (h)
V: volume do reator (L)
x: concentrao celular, (mgSSV.L-1)
YN/S: relao entre a produo de sulfato e remoo de nitrognio (mgN-NO3-/mg S-SO4-2)
N: velocidade especfica de consumo de nitrato (mg N-NO3-.(gSSV.d)-1)
s: velocidade especfica de produo de sulfato (mg S-SO4-2.(gSSV.d)-1)
Gutirrez et al., 2010. Rev latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):47-63
47
Revisin crtica
Mecanismos de interaccin con cromo y aplicaciones

biotecnolgicas en hongos
J. Flix Gutirrez Corona1*, ngeles E. Espino Saldaa1, Alejandro Coreo Alonso1,3,
Francisco Javier Acevedo Aguilar2, Georgina E. Reyna Lpez1, Francisco Jos Fernndez3,
Araceli Tomasini3, Kazimierz Wrobel2 y Katarzyna Wrobel2
1
Departamento de Biologa y 2Departamento de Qumica, Divisin de Ciencias Naturales y Exactas,

Universidad de Guanajuato, Campus Guanajuato. Noria Alta s/n, C.P. 36050, Guanajuato, Gto.
3
Departamento de Biotecnologa, Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa,
Av San Rafael Atlixco No.186, Col.Vicentina C.P.09340 Del. Iztapalapa, Mxico, D.F.
*
Autor de correspondencia: felixg@quijote.ugto.mx
Resumen
Esta contribucin tiene como objetivo revisar los estudios realizados acerca de los
mecanismos fngicos de interaccin con el cromo y las aplicaciones de dichos mecanismos en
el contexto de la Biotecnologa Ambiental, haciendo nfasis en algunas de las direcciones
futuras de investigacin y desarrollo tecnolgico.
El cromo es considerado como un contaminante ambiental, debido a su amplio uso en distintas
actividades industriales, entre las cuales se encuentran el cromado electroltico, el curtido de
pieles, la fabricacin de explosivos, etc. Las formas del cromo estables en el ambiente son el
cromo trivalente [Cr(III)] y el cromo hexavalente [Cr(VI)], siendo este ltimo altamente
txico y mutagnico para distintas formas de vida. A esto se suma que el Cr(VI) es altamente
soluble, lo que lo hace mvil en el suelo y en ambientes acuticos, con la consecuente
toxicidad para los ecosistemas.
La influencia negativa de la acumulacin de cromo sobre las poblaciones de microorganismos
del suelo ha sido ampliamente descrita, as como la consecuente aparicin de poblaciones de
organismos adaptados (tolerantes) al ambiente hostil. En el caso de los hongos, organismos
predominantes del suelo que actan como eficientes biotransformadores, se han realizado
estudios sobre los mecanismos de interaccin con el cromo, la mayora de los cuales se han
centrado en los procesos de biosorcin, caracterizndose ste por la unin pasiva del metal con
componentes de la superficie celular, y de bioacumulacin, en el cual ocurre la entrada del
metal a las clulas con gasto de energa. Las especies reportadas incluyen levaduras como
Saccharomyces cerevisiae, Candida sp., Pichia sp. y los hongos filamentos Aspergillus sp.,
Penicillium sp. y Rhyzopus sp. En estudios recientes, se han descrito cepas fngicas capaces
de realizar el proceso de transformacin de Cr(VI) a especies reducidas, por un mecanismo
bioqumico desconocido hasta la fecha. Dichas cepas comprenden levaduras como Candida
sp., Saccharomyces cerevisiae, Lecythophora sp., Candida sp., Aureobasidium pullulans y los
hongos filamentosos Aspergillus sp., Aspergillus tubingensis y Penicillium sp. Con algunos de
dichos organismos se han implementado procesos biotecnolgicos de biotratamiento de
efluentes industriales.
Palabras clave: hongos; cromo; biosorcin, bioacumulacin, biotransformacin; biotratamiento
de efluentes industriales, biorremediacin.
48
Abstract
This contribution aims to review studies on the fungal mechanisms of interaction with chromium
and the applications of these mechanisms in the context of environmental biotechnology, with
emphasis on some future directions for research and technological development
The metal Chromium (Cr) is considered an environmental pollutant due to its widespread use in
several industrial activities, among them electroplating, leather tanning, manufacture of
explosives, etc. The stable forms of chromium in the environment are trivalent chromium
[Cr(III)] and hexavalent chromium [Cr(VI)], the latter being highly toxic and mutagenic to
various life forms. Added to this, is the fact that Cr(VI) is highly soluble, making it mobile in soil
and aquatic environments with toxic consequences for ecosystems. The negative influence of the
accumulation of chromium on soil microbial populations has been widely described, and the
consequent emergence of populations of organisms adapted (tolerant) to the hostile environment.
In the case of fungi, soil predominant organisms that act as efficient bioconverters, there have
been several studies on the mechanisms of interaction with chromium, most of which have been
focused on biosorption processes, characterized by the passive binding of the metal to
components of the cell surface, and bioaccumulation, in which case the entry of the metal to the
cells occurs with energy expenditure. The reported species include yeasts such as Saccharomyces
cerevisiae, Candida sp, Pichia sp and the filamentous fungi Aspergillus sp, and Rhyzopus sp.
Recent studies have described fungal strains capable of performing the transformation of Cr(VI)
to reduced species by an unknown biochemical mechanism. These strains include yeasts such as
Candida sp, Saccharomyces cerevisiae, Lecythophora sp, Aureobasidium pullulans and the
filamentous fungi Aspergillus sp, Aspergillus tubingensis and Penicillium sp. With some of these
organisms studies have been carried out to implement biotechnological processes for the clean up
of industrial effluents.
Key words: fungi; chromium; biosorption, bioaccumulation, biotransformation; biotreatment of
industrial effluents and bioremediation.
1. El cromo en el ambiente
Entre los metales, el cromo ha atrado
amplio inters pblico y de agencias
regulatorias debido a la toxicidad que ejerce
sobre
los
ecosistemas,
incluyendo
microorganismos y animales.
El cromo es un metal de transicin
localizado en el grupo VI-B de la Tabla
Peridica. Aunque puede existir en varios
estados de oxidacin, las formas ms
comunes y estables en el ambiente son el Cr
trivalente Cr(III) y el Cr hexavalente Cr(VI),
las cuales poseen propiedades qumicas
distintas. El Cr(VI), considerado la forma
ms txica del cromo, se encuentra
usualmente asociado al oxgeno en forma de
cromatos (CrO42-) y dicromatos (Cr2O72-),
que debido a su gran solubilidad son

altamente mviles en el suelo y en ambientes
acuticos. Por otra parte, el Cr(III) se
encuentra en forma de xidos, hidrxidos o
sulfatos poco solubles, por lo cual es mucho
menos mvil, y existe unido a materia
orgnica en el suelo y en ambientes
acuticos (Palmer y Wittbrodt, 1991). El
Cr(VI) es un fuerte agente oxidante y en
presencia de materia orgnica es reducido a
Cr(III); esta transformacin es ms rpida en
ambientes cidos (McGrath y Smith, 1990).
Sin embargo, niveles elevados de Cr(VI)
pueden sobrepasar la capacidad reductora
del ambiente y puede as persistir como un
contaminante. Actualmente se ha establecido
que diversos compuestos de cromo, en forma
de xidos, cromatos y dicromatos, son
49
contaminantes ambientales presentes en
agua, suelos y efluentes de industrias, debido
a que dicho metal es ampliamente utilizado
en distintas actividades manufactureras, tales
como cromado electroltico, fabricacin de
explosivos, curtido de pieles, aleacin de
metales,
fabricacin de colorantes y
pigmentos, etc. (Calder, 1988).
2. Toxicidad del cromo

Los efectos biolgicos del Cr dependen de
su estado de oxidacin. El Cr(VI) es
considerado la forma ms txica del metal,
debido a que atraviesa fcilmente las
membranas biolgicas y puede ser
transportado activamente al interior de las
clulas por medio del transportador de
sulfato (Borst-Pauwels, 1981). El Cr(VI) es
altamente txico para todas las formas de
vida, siendo mutagnico y carcinognico en
animales y mutagnico en bacterias (Losi et
al., 1994). Se ha propuesto que la toxicidad
del Cr(VI) se debe a que dentro de las
clulas se generan intermediarios reducidos
de cromo que en presencia de H2O2
funcionan como catalizadores de una
reaccin tipo Fenton, generando Especies
Reactivas de Oxgeno (ERO), con el
consecuente dao oxidativo, produciendo
peroxidacin de lpidos, oxidacin de
protenas y cidos nucleicos (Ercal et al.,
2001; Liu y Shi, 2001). Sumner et al. (2005)
establecieron
que
en
la
levadura
Saccharomyces cerevisiae la oxidacin de
protenas es el principal mecanismo de
toxicidad de Cr(VI), siendo las protenas
glicolticas y las de choque trmico las
principalmente oxidadas, adems de que la
oxidacin es isoforma especfica. Hasta la
fecha se desconoce si dicho mecanismo
explica la toxicidad del Cr(VI) en otros
sistemas biolgicos. Por otra parte, los
compuestos de Cr(III) son relativamente
inocuos debido a que son insolubles y no
pueden atravesar las membranas biolgicas,
aunque en altas concentraciones pueden

presentar los mismos efectos txicos que los
de Cr(VI) (Wong y Trevors, 1988; Katz y
Salem, 1993). El Cr(III) funciona como un
oligoelemento esencial para los seres
humanos (Anderson, 1989).
3. Interacciones de los hongos con el

cromo
Los hongos son organismos ubicuos en la
naturaleza, que predominan en el suelo,
poseen propiedades fundamentales como
biotransformadores y juegan un papel
importante en los ciclos geoqumicos de los
metales (Gadd, 1993; Burford et al., 2003).
La influencia negativa de la acumulacin
del cromo sobre las poblaciones de
microorganismos del suelo ha sido
ampliamente descrita, as como la
consecuente aparicin de poblaciones de
organismos adaptados (tolerantes) al
ambiente hostil (Cervantes et al., 2001). Las
clulas fngicas interaccionan con el cromo
a diferentes niveles, desde la pared celular, el
periplasma y la membrana plasmtica, hasta
el citoplasma y los organelos celulares.
Dichos microorganismos requieren detectar
y regular los niveles intracelulares de cromo
a travs de sistemas de homeostasis que
mantienen un balance entre la incorporacin,
expulsin y captura del metal. Es comn
que los microorganismos nativos de sitios
contaminados con cromato muestren
resistencia al in, debido a que poseen
mecanismos activos o pasivos que les
permiten removerlo o destoxificarlo. En
ciertas especies se conocen con detalle
dichos mecanismos, algunos de los cuales
son de inters bsico y de importancia
biotecnolgica, esto ltimo en el contexto
del desarrollo de nuevas tecnologas para el
tratamiento de efluentes industriales y para
la biorremediacin de sitios contaminados.
De manera general dichos mecanismos
comprenden: (Fig. 1).
50
Biotransformacin de Cr(VI) a especies
reducidas (reduccin qumica), que puede
ser:
1) directa (enzimtica) o
2) indirecta (no enzimtica);

3) Incorporacin y bioacumulacin;
4) Biosorcin de Cr(III) y Cr(VI); y
5) Inmovilizacin.
Figura 1. Mecanismos de interaccin de los hongos con el cromo. Se ilustran los posibles
modos de transformacin qumica, as como las maneras de unin e incorporacin a las clulas
y la inmovilizacin mediante la formacin de complejos.
4. Biotransformacin de Cr(VI) a
especies
reducidas
(reduccin
qumica)
Dentro de las clulas microbianas el Cr (VI)
puede ser reducido a Cr (III) por sistemas
reductores, que pueden incluir rutas
enzimticas y no enzimticas. Hace varios
aos se haban descrito algunos reportes
sobre hongos capaces de reducir el Cr (VI) a
Cr (III) (Cervantes et al., 2001). En aos
recientes
dichos
estudios
se
han
incrementado; los organismos descritos
incluyen levaduras como Candida maltosa
(Ramrez-Ramrez et al., 2004), una cepa
industrial de Saccharomyces cerevisiae
(Ksheminska et al., 2006), Candida sp.
FGSFEP (Guilln-Jimnez, 2008), as como
Lecythophora sp. NGV-1, Candida sp.

NGV-9 y Aureobasidium pullulans (Villegas
et al., 2008). Entre los hongos filamentosos
se han descrito cepas de Aspergillus sp.
(Acevedo Aguilar et al., 2006; Fukuda et al.,
2008), Penicillium chrysogenum (Pazouki et
al., 2007), Penicillium sp (Acevedo Aguilar
et al., 2006; Fukuda et al., 2008) y
Aspergillus versicolor (Das et al., 2008). En
la mayora de los casos, los organismos
descritos poseen tolerancia a Cr(VI) y fueron
aislados de sitios contaminados con cromato,
ya sea de efluentes o licor de curtido de
teneras o suelo conteniendo residuos
industriales.
La Figura 2 muestra la capacidad de
transformacin del Cr(VI) a Cr (III) en
cultivos de las cepas tolerantes a Cr(VI) Ed8
51
de Aspergillus sp y H13 de Penicilium sp.;
como se muestra, dicha transformacin
ocurri con muy poca unin de cromo a la
biomasa ( 1.0 % del cromo total presente
en el medio), lo que indic que la reduccin
del Cr(VI) ocurre en el medio extracelular

(Acevedo et al., 2006). Despus de 60 h, el
color amarillo de los cultivos, debido a la
presencia de Cr(VI), ha desaparecido
completamente.
Figura 2. Reduccin de Cr(VI) a Cr(III) por las cepas Ed8 de Aspergillus sp y H13 de Peninicillium sp
(A) y aspecto de los cultivos (B). Cromo total unido a la biomasa despus de diferentes tiempos de
incubacin en presencia de Cr(VI) (C). Tomado de Acevedo Aguilar et al. (2006).
1) Biotransformacin directa (reduccin

enzimtica)
En los hongos se tiene poco conocimiento
sobre los sistemas de reduccin de Cr(VI);
se desconoce que tipo de sistema participa
en la destoxificacin del Cr(VI), ya sea
enzimtico o no enzimtico, intracelular o
extracelular.
Adems de las observaciones hechas con los
hongos filamentosos Aspergillus sp. y
Penicillium sp., mencionadas lneas arriba
(Fig. 2), se ha indicado que en cepas de las
levaduras
Saccharomyces
cerevisiae
(Ksheminska et al. 2006) y Candida sp
(Villegas et al., 2008) la reduccin de Cr(VI)
ocurre en el medio de cultivo, con muy poca
unin de Cr a la biomasa, proponindose que
esto refleja que la reduccin de Cr(VI)
ocurre en el medio extracelular (Ksheminska

et al. 2006). Hasta la fecha, slo en la
levadura Candida maltosa se ha reportado
actividad de cromato reductasa en extractos
libres de clulas (Ramrez-Ramrez et al.,
2004), aunque no se prob si dicha actividad
es la responsable de la reduccin de Cr(VI)
in vivo. Recientemente, se ha detectado
actividad de cromato reductasa en extractos
libres de clulas de la cepa Ed8 de
Aspergillus tubingensis (Coreo Alonso,
2009), la cual es resistente a cromato y posee
alta eficiencia para reducir el Cr(VI) a
Cr(III) en el medio extracelular (Acevedo
Aguilar et al., 2006, 2008); se desconoce el
papel de esta actividad en la reduccin in
vivo del Cr(VI). En varios gneros de
bacterias se ha documentado la actividad de
52
cromato reductasa, proponindose que la
misma puede constituir un mecanismo de
resistencia a Cr(VI) por participar en su
destoxificacin (Cervantes y Campos
Garca, 2007); dichas enzimas poseen
propiedades bioqumicas conocidas (nitrato
reductasa, flavin reductasa, ferrireductasa y
algunas flavoprotenas) y algunas son
capaces de reducir al Cr(VI) in vitro.
al.
2006), se encontr que el Cr(III)
formado por reduccin de Cr(VI) en el
medio
extracelular
se
encuentra
acomplejado con, al menos, dos compuestos
distintos producidos por la levadura, de
naturaleza desconocida; en su momento,
deber determinarse si dichos compuestos
corresponden a molculas reductoras de
Cr(VI).
2) Biotransformacin indirecta (reduccin

no enzimtica)
En el interior de las clulas microbianas los
reductores no enzimticos mas potentes
pueden ser el glutatin y la cistena; se ha
propuesto
que
en
la
levadura
Schizosaccharomyces pombe el glutatin
puede proteger de la toxicidad del Cr(VI)
por su capacidad de amortiguar al in
hidroxilo producido en su presencia (Pesti et
al., 2002).
La reduccin extracelular de Cr(VI) por
clulas fngicas podra deberse a la
produccin y excrecin de molculas
reductoras, las cuales se desconocen hasta
ahora. En el caso de bacterias, se ha descrito
que producen y excretan substancias
reductoras, como el in ferroso Fe(II) y H2S,
acoplando la oxidacin de molculas
orgnicas y de hidrgeno a la reduccin de
in frrico Fe(III) y sulfato, respectivamente
(Kamaludeen et al., 2003). Tambin,
recientemente, se demostr que las bacterias
Shewanella oneidensis y Shewanella sp.
secretan flavinas como parte de un sistema
extracelular de transferencia de electrones
(Marsili et al., 2008). Es factible que la
reduccin extracelular de Cr(VI) observada
en hongos filamentosos (Acevedo et al.,
2008) y levaduras (Ksheminska et al.
2006; Villegas et al., 2008) se deba a la
produccin y excrecin de molculas
similares a las descritas en bacterias o bien,
que produzcan molculas reductoras de Cr
(VI) especficas. En el caso de la cepa
industrial de S. cerevisiae (Ksheminska et
3) Incorporacin y bioacumulacin
En la levadura Saccharomyces cerevisiae se
ha descrito que el Cr(VI) puede incorporarse
a las clulas por un transportador aninico
no especfico, un sistema de permeasas que
transporta diferentes aniones como sulfatos
y fosfatos (Borst-Pauwels, 1981); dicho
sistema es codificado por los genes SUL1 y
SUL2 (Cherest et al., 1997). Se ha descrito
que en la levadura S. cerevisiae la expresin
de dichos genes es modulada positivamente
por el regulador transcripcional MSN1; la
falta de esta protena conduce a un nivel de
expresin bajo en los genes de los
transportadores SULI y SUL2, causa que se
acumule menos cromo en las clulas y
produce el fenotipo de tolerancia a Cr(VI)
(Chang, 2003). La incorporacin de sulfato
es un punto importante de regulacin del
metabolismo del sulfato en otros hongos;
dicha incorporacin esta sujeta a represin
metablica por azufre, la cual afecta la
expresin de los genes codificantes de las
permeasas de sulfato en Neurospora crassa
(Marzluf, 1997; Tao y Marzluf, 1998),
Aspergillus nidulans (Natorf et al., 1993,
1998) y Penicillium chrysogenum (Van de
Kamp et al., 2000).
Evidencia adicional sobre el uso del sistema
de transporte de sulfato para la
incorporacin del cromato, se obtuvo por la
observacin de que algunos mutantes
resistentes
a
cromato
de
hongos
filamentosos y levaduras mostraron una
dramtica disminucin en el transporte de
sulfato
(Cervantes
et
al.,
2001).
53
Recientemente, se ha mostrado que en el
genoma de algunos hongos filamentosos,
pero no en el de levaduras, existen
homlogos de la protena bacteriana ChrA
(Cervantes y Campos-Garca, 2007), la
cual pertenece a la superfamilia de
transportadores
CHR,
probablemente
implicadas en el transporte de sulfato y
cromato (Nies et al., 1998). En las bacterias
Pseudomonas aeruginosa y Cupriavidus
metallidurans la protena ChrA constituye
un determinante de resistencia a Cr(VI), por
funcionar como una bomba expulsora del
in (Cervantes y Campos-Garca, 2007;
Ramrez Daz et al., 2008). En hongos, la
funcin de estas protenas CHR homlogas

no ha sido analizada.
Una vez que inicia la incorporacin del
cromo, este puede ser acumulado por las
clulas fngicas durante el crecimiento. La
acumulacin del metal es influida por
diversos factores, como el pH del medio, la
concentracin inicial del metal, la especie
qumica de ste y la temperatura. La Tabla 1
muestra reportes de remocin de cromo del
medio por acumulacin del metal en la
biomasa de distintos gneros y especies de
hongos; es claro que entre los organismos
que remueven el cromo a altas
concentraciones iniciales de este en el medio
figuran las especies de Aspergillus.
Tabla 1. Remocin de cromo por bioacumulacin/biosorcin del metal con biomasa de hongos.
Metal
Microorganismo
Concentracin
inicial de metal
(mg/L)
pH
Remocin
(%)
Tiempo
(h)
Cr(VI)
Aspergillus foetidus
7.0
97
92
Cr(III)
Aspergillus oryzae
240
5.0
97
36
Cr(VI)
Rhizopus nigricans
100
2.0
80
Cr(VI)
Aspergillus sp.
100
5.0
92
18
Cr(VI)
Aspergillus niger
500
6.0
75
168
2150
5.5
71
36
Mala et al., 2006
72
5.5
78
36
Mala et al., 2006
Cr(III)
Cr(VI)
Aspergillus Nger
MTCC2594
Aspergillus niger
MTCC2594
Sin embargo, se ha descrito que tanto

levaduras como hongos filamentosos son
capaces de acumular concentraciones
elevadas de cromo en la biomasa; como
ejemplo, cabe mencionar que la levadura
Pichia guillermondii (Ksheminska et al.,
2005) y los hongos filamentosos Aspergillus
sp. (Srivastava y Thakur, 2006b) y Rhizopus
sp. (Zafar et al., 2007) acumulan alrededor
de 13.0, 8.2 y 4.5 mg de cromo por g de
biomasa, respectivamente.
Referencia
Prasenjit et al.,
2002
Nasseri et al.,
2002
Bai y Abraham,
2001
Congeevaram et
al., 2007
Srivastava y
Thakur, 2006
Es importante mencionar que en los reportes

mencionados
se
usaron
diferentes
condiciones, que incluyen los medios de
cultivo, la concentracin de cromo y la
relacin metal/biomasa, que dificultan las
comparaciones.
54
Tabla 2. Reportes de bioacumulacin/biosorcin de cromo en hongos filamentosos y levaduras en los ltimos 5
aos.
Bioacumulacin/
Organismo
Bioacumulacin/
Biosorcin de
Referencia
Biosorcin de Cr(VI)
Cr(III)
Aspergillus niger1
Si
Si
Mala et al., 2006
MTCC 2594
1
Aspergillus sp.
N.i.
Si
Congeevaram et al., 2007
Rhizopus sp.1
N.i.
Si
Zafar et al., 2007
Aspergillus sp.1
N.i.
Si
Aspergillus sp.1
Si
Hirsutella sp.1
N.i
Aspergillus sp.1
Aspergillus sp.1 N2;
Penicillium sp.1 N3
Si
Srivastava y Thakur, 2006a
Si
Si
Srivastava y Thakur, 2006b
N.i.
Si
N.i.
Si
Si
Si
Si
Si
Das et al., 2008

Pas et al., 2004
Si
Si
Kaszycki et al., 2004
N.i.
Si
Yin et al., 2008
Fukuda et al., 2008
Aspergillus versicolor1
Candida intermedia2
Pichia guilliermondii2
ATCC 201911
Fusin de Candida2
tropicalis y Candida
lipolytica2
1
Hongo filamentoso; 2 Levadura. N.i. No investigado.
4) Biosorcin de Cr(III) y Cr(VI)

Se ha descrito la captura de cromo en la
superficie de hongos filamentosos y de
levaduras, como resultado de su unin con
componentes de la pared celular; en esta
estructura existen principalmente polisacridos, como glucanas, quitina y
quitosana, los cuales pueden estar asociados
con protenas, y otros componentes menores
como lpidos y melaninas (Gadd, 1993;
Pillichshammer et al., 1995; Cervantes et al.,
2001). Esta unin del cromo a la superficie
de los hongos ocurre de un modo
independiente de energa, de manera similar
a lo descrito con otros metales y se le ha
denominado biosorcin (Volesky y Holan,
1995;
Pillichshammer et al., 1995;
Cervantes et al., 2001). El micelio de los
hongos zigomicetos Mucor mucedo y
Rhizomucor miehei tratado qumicamente
muestra alta eficiencia para unir Cr; tambin,

las biomasas de Rhizomucor arrhizu,
Candida
tropicales,
Penicillium
chrysogenum y Aspergillus carbonarius
NRC401121 son excelentes biosorbentes
(Cervantes et al., 2001). Entre varios
aislados de hongos filamentosos, la cepa de
MP/92/3/4 de Mucor hiemalis mostr una
eficiencia mayor para biosorber Cr(III) a su
biomasa, comparado con la unin de Cr(VI)
(Pillichshammer et al., 1995).
En aos recientes se han incrementado las
investigaciones sobre el empleo de biomasa
fngica para remover cromo. La Tabla 2
muestra reportes descritos en los ltimos 5
aos, en los que se incluyen los resultados de
estudios hechos en cultivos con hongos
filamentosos o levaduras, predominando los
realizados con los primeros. Dado que en
dichos estudios se emple biomasa viva, los
55
datos obtenidos pueden deberse a los
procesos de bioacumulacin y/o de
biosorcin de cromo. En el reporte de Das et
al., (2008), mencionado en la Tabla 2,
mediante el empleo de espectroscopa
fotoelectrnica de rayos X, se describe que
en Aspergillus versicolor ocurre la unin de
Cr(VI) a la pared celular del micelio y que
los componentes de sta causan su reduccin
a Cr(III), el cual une electrostticamente al
Cr(VI) conduciendo a la formacin de
acmulos del metal en capas sobre la pared
celular.
Es probable que la interaccin de los hongos
con el cromo involucre dos o ms de los
mecanismos mostrados en la Figura 1.
Ejemplo de esto lo constituyen las recientes
observaciones de Das et al., (2008), en las
que se concluy que en A. versicolor ocurre
reduccin de Cr(VI) a Cr(III) y tambin
unin de ambos iones a la superficie celular.
Otra indicacin proviene de la observacin
de que la eficiencia de reduccin de Cr(VI)
a Cr(III) en la cepa Ed8 de Aspergillus sp.,

la cual ocurre en el medio extracelular
(Acevedo Aguilar et al., 2006), se estimula
dramticamente por la presencia en el
medio de cidos orgnicos, como citrato,
salicilato o tartrato (Fig. 3; Coreo Alonso
et al., 2009). Dichos compuestos son
productos del metabolismo microbiano
abundantes en el suelo, que actan como
efectivos acomplejantes del Cr(III) unido a
arcillas y otros componentes (Dubbin,
2004). Por ello, su efecto estimulatorio sobre
la reduccin de Cr(VI) por la cepa Ed8,
identificada como un aislado de Aspergillus
tubingensis (Coreo Alonso et al., 2009),
puede explicarse en base a que actan
favoreciendo la reaccin de reduccin de
Cr(VI), acomplejando al producto de esta.
Es factible que la estimulacin de la
reduccin microbiana de Cr(VI) por cidos
carboxlicos tenga un papel importante en la
atenuacin natural de dicho in (Coreo
Alonso et al., 2009).
Figura 3. Efecto de cidos carboxlicos en la eficiencia de reduccin extracelular del

Cr(VI) en la cepa Ed8 de Aspergillus tubingensis. Adaptado de Coreo Alonso et al.
(2009).
56
5. Tolerancia a Cr(VI)
La tolerancia a cromato ha sido descrita en
cepas fngicas de laboratorio mediante
induccin con agentes mutagnicos, as
como en aislados nativos de sitios
contaminados; en varios casos, tanto de
levaduras como de hongos filamentosos, se
demostr que la tolerancia al Cr(VI) se debe
a la alteracin del transporte de sulfato, que
conduce a una menor incorporacin de
cromato (Cervantes et al., 2001). Como ya
se mencion, los genes SUL, implicados en
el transporte sulfato, estn sujetos a
regulacin
transcripcional,
tanto
en
levaduras (Chang, 2003) como en hongos
filamentosos (Marzluf, 1997; Tao y
Marzluf, 1998; Natorf et al., 1993, 1998;
Van de Kamp et al., 2000). En otros casos se
producen fenotipos de hipersensibilidad a
Cr(VI), como resultado de la alteracin de la
ATPasa vacuolar o de estructuras vacuolares
(Gharieb y Gadd, 1998), o bien por la
alteracin de proteinas que protegen del
efecto oxidativo del Cr(VI), como la alkil
hidroperxido reductasa (Nguyen-Nhu y
Knoops, 2002) o la Cu,Zn-superoxido
dismutasa y la pptido metionina sulfxido
reductasa(Sumner et al., 2005).
6. Aplicaciones biotecnolgicas
Los procedimientos convencionales para la
remocin del cromato de sitios contaminados
son de tipo fisicoqumico e incluyen la
reduccin
qumica
seguida
de
la
precipitacin,
intercambio
inico
o
adsorcin sobre carbn activado, almina,
kaolinita o ceniza. Sin embargo, la mayora
de esos mtodos requieren de alta energa o
de cantidades grandes de reactivos
(Shrivastava et al., 1986). Los procesos
microbianos
de
biosorcin
y
de
transformacin qumica de cromo son

promisorios y de importancia prctica en el
contexto de la biotecnologa ambiental, ya
que pueden servir de base para el desarrollo
de procedimientos limpios y econmicos
para el tratamiento de aguas naturales, de
efluentes
industriales
o
para
la
biorremediacin de suelos contaminados. A
continuacin
se
describen
estudios
realizados en hongos sobre dichos procesos.
7. Biosorcin de Cromo
En 1995 se hizo un esfuerzo para resumir el
tipo y eficacia de los biosorbentes, as como
los procesos de tratamiento por biosorcin
(Volesky y Holan, 1995); de entonces a la
fecha los estudios han continuado de
manera intensiva, considerndose en muchos
casos el empleo de biomasa fngica, cultivada
en lote, en biorreactores o inmovilizada en
diferentes matrices, para remover por
biosorcin el cromo presente en medio de
cultivo o en efluentes industriales. Respecto
de los hongos, los organismos utilizados
incluyen Rhizopus nigricans (Bai y
Abraham, 2005), Penicillium chrysogenum
(Deng et al., 2006), Trichoderma viride
(Bishnoi et al., 2007), Aspergillus sp. e
Hirsutella sp. (Srivastava y Thakur, 2006
a,b), Rhizopus cohnii (Li et al., 2008) y
otros. En algunos casos, los estudios se
realizan utilizando biorreactores; en la Tabla
3 se muestra que la biomasa de Aspergillus
sp. incubada en un biorreactor puede
utilizarse para la remocin por biosorcin
del Cr presente en los efluentes de una
tenera o en medio de cultivo (Srivastava y
Thakur, 2006a); debido a que en los
efluentes existen otros compuestos que son
txicos, la eficiencia de remocin de Cr es
menor a la observada en medio de cultivo.
57
Tabla 3. Remocin de Cr por biomasa de la cepa
FK1 de Aspergillus sp. incubada en bioreactor.
Tiempo de
incubacin
(das)
1
3
5
Porcentaje de disminucin de
cromo presente en:
Medio de
Efluente
cultivo*
industrial**
65
30
70
48
85
60
* El cromo inicial fue de 500 ppm de Cr(VI). ** El

cromo inicial presente en el efluente fue 557 ppm,
determinado como Cr total. Adaptado de Srivastava y
Thakur (2006a).
En otros estudios se ha considerado el

empleo de biomasa fngica generada como
producto secundario de fermentaciones a
nivel industrial para la produccin de
alimentos,
bebidas
o
productos
farmacuticos; ejemplo de esto lo constituye
P. chrysogenum, utilizado para la
produccin de penicilina. En este caso se ha
considerado realizar modificaciones a la
superficie de la biomasa micelial, mediante
la adicin de cargas positivas por la
insercin en la misma del polmero
polietilenimina. Debido a la alta densidad
de grupos amino en las molculas del
polmero, la biomasa modificada mostr
potencial zeta positivo as como alta
capacidad de adsorber Cr (VI) (Deng et al.,
2006). Otro enfoque novedoso ha consistido
en la preparacin de microesferas
magnticas biofuncionales para la adsorcin
y recuperacin de Cr (VI); la subsecuente
aplicacin de la tecnologa de separacin
magntica hace el proceso ms conveniente.
En este procedimiento se utiliz biomasa
pulverizada del hongo Rhizopus cohni en la
preparacin de las microesferas; en este caso
la biosorcin ocurri en forma de Cr(VI) por
efecto de la biomasa fngica (Li et al.,
2008).
8. Transformacin qumica del

cromo
Dado que la movilidad y la toxicidad del Cr

dependen de su estado de oxidacin, las
reacciones redox que involucran al Cr son
importantes en la determinacin de su
destino en el ambiente y el riesgo de este
para la salud humana. Se puede anticipar que
la reduccin del Cr(VI) en ambientes
contaminados resulta de una interaccin
compleja de procesos biticos y abiticos. El
Cr(VI) puede ser reducido a Cr(III) en el
suelo por reacciones redox con especies
inorgnicas acuosas, transferencia de
electrones en superficies minerales, reaccin
con substancias orgnicas no hmicas, tales
como carbohidratos y protenas, o reduccin
por substancias hmicas del suelo (Palmer y
Wittbrodt, 1991). Como ya se mencion, la
actividad microbiana tambin puede
contribuir a la reduccin de Cr(VI) a travs
de la liberacin del in ferroso, sulfuros o
intermediarios orgnicos reactivos. Algunos
ligantes
solubles
orgnicos
pueden
influenciar el destino del Cr ubicado bajo las
superficies a travs de complejos con la
forma reducida Fe(II) u oxidada Fe(III) del
Fe, as como por el acomplejamiento del
Cr(III) en formas solubles (Buerge y Hug,
1998).
Como ya se mencion, la eficiencia de
reduccin de Cr(VI) de la cepa Ed8 de A.
tubingensis se estimula por cidos orgnicos
como el citrato, salicilato o tartrato (CoreoAlonso et al., 2009; Fig. 3), que provienen
del metabolismo microbiano y que son
abundantes en el suelo.
En base a esta observacin y a la capacidad
de la biomasa de la cepa Ed8 de A.
tubingensis de realizar de manera sostenida
la disminucin de los niveles de Cr(VI), se
implement un procedimiento continuo de
biotratamiento de efluentes industriales en
base a ciclos de recarga de efluentes
utilizando medio con agentes acomplejantes
(Coreo-Alonso et al., 2009; Fig 4 A, B).
Tomando en cuenta la concentracin inicial
de Cr(VI) en los efluentes, de alrededor de
58
50 g/ml, y 3 ciclos de recarga de 50 g/ml
cada uno, en medio con citrato se redujeron
alrededor de 180 g/ml despus de 96 h (Fig.
4A). Se obtuvo una mejora adicional en la
eficiencia del sistema utilizando medio
suplementado con una mezcla de salicilato y
tartrato, ya que despus de 3 ciclos de
recarga se obtuvo la reduccin de cerca de

140 g/ml de Cr(VI) despus de 24 h (Fig.
4B). Estos resultados indican la utilidad
biotecnolgica de la cepa Ed8 de A.
tubingensis para el diseo de procesos de
biotratamiento de efluentes industriales
contaminados con Cr(VI).
Figura 4. Proceso continuo de remocin de Cr(VI) de efluentes industriales (residuos de una cromadora) por
reduccin con biomasa de la cepa Ed8 incubada en medio con el acomplejante citrato (A), o una mezcla de salicilato
y tartrato (B). Las flechas indican recargas de efluente con la concentracin de Cr(VI) utilizada al inicio de las
incubaciones (50 mg/L). Tomado de Coreo Alonso et al. (2009).
Los reportes sobre aplicaciones de

microorganismos
para
estudios
de
biorremediacin de suelos contaminados con
cromato son escasos.
Uno de dichos
estudios incluy el empleo de bacterias no
identificadas, nativas del sitio contaminado,
las cuales se utilizaron en bioreactores para
tratar suelo contaminado con Cr(VI). Se
encontr que la reduccin mxima de Cr(VI)
ocurri con el empleo de 15 mg de biomasa
bacteriana por g de suelo (peso hmedo),
con 50 mg de melasas por g de suelo como
fuente de carbono; el bioreactor operado en
esas condiciones redujo completamente 5.6
mg Cr(VI) por g de suelo en 20 das
(Jeyasingh y Philip, 2004). En otro estudio
se utilizaron bacterias reductoras de Cr(VI)
no identificadas, nativas de un sitio
contaminado, en combinacin con el hongo
Ganoderm lucidum, ste ltimo utilizado
para remover por biosorcin el Cr (III)
formado. Los resultados obtenidos indicaron
que la reduccion de 50 mg/L de Cr(VI) por
las bacterias fue mxima, de alrededor de un

80%, con 10 g/L de peptona como fuente de
electrones
y un tiempo de retencin
hidraulica de 8 h. El Cr (III) producido fue
removido utilizando una columna con el
hongo Ganoderm lucidum como absorbente
y exceso de donador de electrones del
efluente del bioreactor; en esas condiciones,
la capacidad especfica de adsorcin de Cr
(III) de G. Lucidum en la columna fue de
576 mg por g (Krishna y Philip, 2005). En
otros estudios se ha probado la adicin de
fuentes de carbono a suelo contaminado
analizado en columna; en uno de esos
estudios se observ que la adicin de
triptona de soya a suelo adicionado de 1000
mg/L de Cr(VI) incrementa la reduccin del
in, debido a la accin de microorganismos
presentes en el suelo, aunque tal accin no es
observada
en
suelo
con
mayores
concentraciones (10,000 mg/L) de Cr(VI)
(Tokunaga et al., 2003). En otro trabajo se
observ que la adicin de nitrato y de
59
melasas acelera la reduccin de Cr(VI) a
Cr(III) por una comunidad microbiana nativa
estudiada en microcosmos en lote o en
columnas de flujo no saturado, bajo
condiciones similares a las de la zona
vadosa. En el caso de los microcosmos en
lote, la presencia de los mencionados
nutrientes caus 87% de reduccin de los 67
mg/L de Cr(VI) presentes al inicio del
experimento; los mismos nutrientes,
agregados a una columna de flujo no
saturado de 15 cm adicionada de 65 mg/L de
Cr(VI),
causaron
la
reduccin
e
inmovilizacin de 10% del cromo, en un
periodo de 45 das (Oliver et al., 2003).
9. Nuevos enfoques y direcciones de

los estudios
En pocos estudios en relacin con las
respuestas a cromo se han usado modelos
microbianos de laboratorio, como la
levadura sensible a Cr(VI) S. cerevisiae, que
ha sido ampliamente utilizada para la
elucidacin de distintos procesos biolgicos
fundamentales, gracias a la facilidad de su
manipulacin por procedimientos de
gentica molecular. En uno de dichos
estudios, utilizando cepas mutantes afectadas
en funciones de reparacin de dao a ADN,
de lpidos o de protenas (Sumner et al.,
2005) se estableci que en S. cerevisiae la
oxidacin de protenas es el principal
mecanismo de toxicidad de Cr(VI). Por otra
parte, la caracterizacin de aislados de
levaduras y de hongos filamentosos nativos
de sitios contaminados con Cr(VI), que
usualmente son tolerantes al in, puede
revelar
procesos
metablicos
y/o
mecanismos no presentes en modelos de
laboratorio, que podran ser relevantes para
las propiedades de tolerancia y capacidad de
destoxificacin del in. Ya sea en modelos
de laboratorio o en cepas fngicas de origen
ambiental, el anlisis del transcriptoma, del
proteoma y del metaboloma constituyen
herramientas poderosas para conocer los

cambios y respuestas a nivel genmico en la
expresin de genes, produccin de protenas
y funcionamiento de rutas metablicas,
como consecuencia de la exposicin a
metales. Adicionalmente, estudios complementarios de fisiologa molecular pueden
permitir establecer el papel de los
genes/protenas identificados como de
expresin/produccin diferencial en las
propiedades de resistencia a Cr(VI) y/o en la
capacidad de transformarlo a formas
reducidas. En estudios recientes se ha
analizado a nivel genmico la respuesta a
Cr(VI) y a otros metales en el modelo de
laboratorio S. cerevisiae (Jin et al., 2008); se
obtuvo informacin que revela los cambios
transcripcionales
asociados
con
la
exposicin a los metales (transcriptoma), as
como sobre la relacin entre la expresin de
alrededor de 4,700 genes no esenciales y la
sensibilidad a aquellos (deletoma). El
anlisis de estos dos tipos de informacin
revel que varias rutas de transduccin de
seales conservadas parecen estar involucradas en la respuesta a la exposicin a
metales. Estos estudios indican que la
respuesta al estrs causado por el cromato y
otros metales es compleja, posiblemente
resultante de la accin de varios sistemas de
regulacin transcripcional y asociada con los
efectos primarios y secundarios de la
interaccin de los metales con los
componentes celulares.
En el futuro, ser necesaria la integracin de
los resultados de la combinacin de estudios
de transcriptoma, protemicos y de
metabolmica, a fin de lograr obtener una
panormica de las respuestas celulares a
nivel del organismo completo. Derivado de
lo anterior, podr hacerse una seleccin y
manipulacin adecuada de genes de inters
para mejorar caractersticas particulares de
los microorganismos con fines biotecnolgicos. Otros aspectos de importancia
para una comprensin ms profunda de las
60
interacciones de las clulas fngicas con el
cromo, es la utilizacin de tecnologas de
alta resolucin tales como la microscopa
electrnica de transmisin (MET) y de
barrido (MEB),
espectroscopa de dispersin de rayos X y de aquellas que
permitan la deteccin de las especies
estables del cromo, ya sea en las clulas o en
el medio extracelular, como la espectroscopa fotoelectrnica de rayos X. Aspectos
adicionales de mejora futura comprenden la
modificacin y optimizacin de las condiciones de interaccin microorganismo-metal,
que conduzcan a una mayor eficiencia en la
reduccin del Cr(VI), o nuevas modificaciones qumicas de la biomasa que
incrementen la eficiencia en la biosorcin del
metal. Aunado a lo anterior, se requerrn de
nuevos estudios en biorreactores, tanto en
cultivos sumergidos como en fase slida, a fin
de alcanzar mejoras en la ingeniera de los
procesos de tratamiento de efluentes y de su
escalamiento. De igual forma, ser de
importancia incrementar los estudios sobre la
implementacin de procedimientos de
biorremediacin de suelos contaminados con
cromo, empleando cepas fngicas seleccionadas, solas o combinadas en consorcios
con bacterias, considerando tambin el
Reconocimientos
empleo de condiciones ambientales y

nutricionales adecuadas, que redunden en
procesos efectivos y econmicos.
10. Conclusiones
Los mecanismos fngicos de interaccin con
el cromo promisorios en el contexto de la
Biotecnologa Ambiental son la biosorcin,
la bioacumulacin y la biotransformacin;
de stos, el menos entendido a nivel
bioqumico es la biotransformacin.
Existen escasos estudios en relacin con las
respuestas a cromo en los hongos, por lo que
se espera que la aplicacin de los enfoques
de protemica, genmica y metabolmica
contribuya al entendimiento de los cambios
asociados con respuestas a la toxicidad del
in y/o de importancia para la
destoxificacin del mismo. A futuro, esta
informacin puede servir para el desarrollo
de nuevas variedades fngicas con
capacidades mejoradas.
Se requiere contar con un mayor nmero de
estudios en bioreactores que conduzcan a
mejoras en la ingeniera de los procesos para
el biotratamiento de efluentes industriales y
de procedimientos para la biorremediacin
de sitios contaminados.
wastes, using chromate-resistant strains of
filamentous fungi indigenous to contaminated
wastes. Can J Microbiol 52(9):809-815.
Este trabajo se realiz con el apoyo de los

proyectos
CB-2005-01-51635
de
CONACyT y UG-IBE-07-04 de la
Universidad de Guanajuato, Mxico.
A. Coreo Alonso y F.J. Acevedo Aguilar
recibieron una beca de posgrado del
CONACyT y del CONCYTEG, Mxico.
Acevedo Aguilar, F.J., Wrobel, K., Lofthus, K.,

Caruso, J.A., Coreo Alonso, A., Gutirrez
Corona, J.F., Wrobel, K. 2008. Analytical
speciation of chromium in in-vitro cultures of
chromate-resistant filamentous fungi. Anal
Bioanal Chem 392(1-2):269-276.
Referencias
Anderson, R. A., 1989. Essentiality of chromium in

humans. Sci Total Environ 86(1-2):75-81.
Acevedo-Aguilar, F.J., Espino-Saldaa, A.E.,

Len-Rodrguez, I.L., vila-Rodrguez, M.,
Wrobel, K., Wrobel, K., Lappe, P., Ulloa, M.,
Gutirrez-Corona, J.F. 2006. Hexavalent
chromium removal in vitro and from industrial
Bai, S.R., Abraham, T.E. 2005. Continuous

adsorption and recovery of Cr(VI) in different
types of reactors. Biotechnol Prog 21(6):16921699.
61
Borst-Pauwels, G. W. F. H. 1981. Ion transport in
yeast. Biochim Biophys Acta 650(2-3):88-127.
Bishnoi, N.R., Kumar, R., Bishnoi, K. 2007.
Biosorption of Cr (VI) with Trichoderma viride
immobilized fungal biomass and cell free Caalginate beads. Indian J Exp Biol 45(7):657-64.
Buerge, I.J., Hug, S.J. 1998. Influence of organic
ligands on chromium(VI) reduction by iron(II).
Environ Sci Technol 32(14):2092- 2099.
Burford, E.P., Fomina, M., Gadd, G.M. 2003.
Fungal involvement in bioweathering and
biotransformation of rocks and minerals. Miner
Mag 67(6):1127-1155.
Calder, L. M. 1988. Chromium contamination of
groundwater. In: Nriagu, J.O., Niwboer, E. (Eds)
Chromium in the Nature and Human
Environments. John Wiley & Sons, New York.
pp. 215-229.
Cervantes, C., Campos Garca, J., Devars, S.,
Gutirrez Corona, F., Loza Tavera, H., Torres
Guzmn, J.C., Moreno Snchez, R. 2001.
Interactions of chromium with micro-organisms
and plants. FEMS Microbiol Rev 25(3):335-347.
Cervantes, C., Campos-Garcia, J. 2007. Reduction
and efflux of chromate by bacteria. In: Nies
D.H., Silver, S. (Eds.) Molecular Microbiology
of Heavy Metals Springer-Verlag, Berlin, pp
407-420.
Chang, K.S., Won, J.I., Lee, M.R., Lee, Ch. E. Kim,
K.H., Park, K.Y., Kim, S-K., Lee, J.S., Hwang,
S. 2003. The putative transcriptional activator
MSN1 promotes chromium accumulation in
Saccharomyces cerevisiae. Mol Cells 16(3):291296.
Cherest, H., Davidian, J.C., Thomas, D., Benes, V.,
Ansorge, W., Surdin-Kerjan, Y. 1997. Molecular
characterization of two high affinity sulfate
transporters in Saccharomyces cerevisiae.
Genetics 145(3):627-635.
Congeevaram, S., Dhanarani, S., Park, J., Dexilin,
M., Thamaraiselvi, K. 2007. Biosorption of
chromium and nickel by heavy metal resistant
fungal and bacterial isolates. J. Hazard Mater
146(1-2):270-277.
Coreo Alonso, A. 2009. Caracterizacin del
sistema de reduccin de Cr(VI) de la cepa Ed8
de Aspergillus niger resistente a cromato. Tesis

de doctorado (Biologa), Posgrado en Biologa
Experimental, Universidad de Guanajuato,
Guanajuato, Gto. 78 p.
Coreo-Alonso, A., Acevedo-Aguilar, F.J., ReynaLpez, G.E., Tomasini, A., Fernandez, F.J.,
Wrobel, K., Wrobel, K., Gutirrez-Corona, J.F.
2009. Cr(VI) reduction by an Aspergillus
tubingensis strain: role of carboxylic acids and
implications for natural attenuation and
biotreatment
of
Cr(VI)
contamination.
Chemosphere 76(1):43-47.
Das, S.K., Mukherjee, M., Guha, A.K. 2008.
Interaction of chromium with resistant strain
Aspergillus versicolor: Investigation with
Atomic Force Microscopy and other physical
studies. Langmuir 24(16):8643-865.
Deng, S., Ting, Y.P. 2005. Polyethyleniminemodified fungal biomassas a high-capacity
biosorbent for Cr(VI) anions: sorption capacity
and uptake mechanisms. Environ Sci Technol
39(21):8490-8496.
Dubbin, W.E. 2004. Influence of organic ligands on
Cr desorption from hydroxy-Cr intercalated
montmorillonite. Chemosphere 54(8):10711077.
Ercal, N., Gurer-Orhan, H., Aykin-Burns, N. 2001.
Toxic metals and oxidative stress Part I:
Mechanisms involved in metal induced oxidative
damage. Curr Top Med Chem 1(6):529-539.
Fukuda, T., Ishino, Y., Ogawa, A., Tsutsumi, K.,
Morita, H. 2008. Cr(VI) reduction from
contaminated soils by Aspergillus sp. N2 and
Penicillium sp. N3 isolated from chromium
deposits. J Gen Appl Microbiol 54(5): 295-303.
Gadd, G. M. 1993. Interactions of fungi with toxic
metals. New Phytol 124(1):25-60.
Gharieb, M.M., Gadd, G.M. 1998. Evidence for the
involvement of vacuolar activity in metal(loid)
tolerance: vacuolar-lacking and defective
mutants of Saccharomyces cerevisiae display
higher sensitivity to chromate, tellurite and
selenite. BioMetals 11(2):101-106.
Guilln-Jimnez, F. de M., Morales-Barrera, L.,
Morales-Jimnez, J., Hernndez-Rodrguez,
C.H., Cristiani-Urbina, E. 2008. Modulation of
62
tolerance to Cr(VI) and Cr(VI) reduction by
sulfate ion in a Candida yeast strain isolated
from tannery wastewater. J Ind Microbiol
Biotechnol 35(11):1277-1287.
Jeyasingh, J., Philip, L. 2005. Bioremediation of
chromium contaminated soil: optimization of
operating
parameters
under
laboratory
conditions. J Hazard Mater 118(1-3): 113-120.
Jin, Y.H., Dunlap, P.E., McBride, S.J., Al-Refai, H.,
Bushel, P.R., Freedman, J.H. 2008. Global
transcriptome and deletome profiles of yeast
exposed to transition metals. PLoS Genet.
4(4):e1000053.
Kamaludeen, S.P.B., Megharaj, M., Juhasz, A.L.,
Sethunathan, N., Naidu, R. 2003. ChromiumMicroorganism
Interactions
in
Soils:
Remediation Implications. Rev Environ Contam
Toxicol 178:93-164.
Katz, S.A., Salem, H. 1993. The toxicology of
chromium with respect to its chemical
speciation: a review. J Appl Toxicol 13(3):217224.
Ksheminska, H.P., Jaglarz, A., Fedorovych, D.,
Babyak, L., Yanovych, D. Kaszycki, P., kolozek,
H. 2005. Bioremediation of chromium by the
yeast Pichia guilliermondii: toxicity and
accumulation of Cr (III) and Cr (VI) and the
influence of riboflavin on Cr tolerance.
Microbiol Res 158(1):59-67.
Ksheminska, H.P., Honchar, T.M., Gayda,G.Z.,
Gonchar, M.V. 2006. Extra-cellular chromatereducing activity of the yeast cultures. Cent Eur J
Biol 1(1):137-149.
Krishna, K.R., Philip, L. 2005. Bioremediation of
Cr(VI) in contaminated soils. J Hazard Mater
121(1-3):109-117.
Li, H., Li, Z., Liu, T., Xiao, X., Peng, Z., Deng, L.
2008. A novel technology for biosorption and
recovery hexavalent chromium in wastewater by
bio-functional magnetic beads. Bioresour
Technol 99(14):6271-6279.
Liu, K., Shi, X. 2001. In vivo reduction of
chromium (VI) and its related free radical
generation. Mol Cell Biochem 222(1-2):41-47.
Losi, M. E., Amrhein, C., Frankenberger, W. T. J.

1994. Environmental biochemistry of chromium.
Rev Environ Contam Toxicol 136:91-131.
Mala, S.M.J, Unni, N.B., Puvanakrishnan, R. 2006.
Bioaccumulation and biosorption of chromium
by Aspergillus niger MTCC 2594. J Gen Appl
Microbiol 52(3):179-186.
Marsili, E., Baron, D.B., Shikhare, I.D., Coursolle,
D., Gralnick, J.A., Bond, D.R. 2008. Shewanella
secretes flavins that mediate extracellular
electron transfer. Proc Natl Acad Sci USA
105(10):3968-3973.
Marzluf, G. A. 1997. Molecular genetics of sulfur
assimilation in filamentous fungi and yeast. Annu
Rev Microbiol 51:73-96.
McGrath, S.P., Smith, S. 1990. Chromium and
nickel. In: Alloway, B.J. (Ed.). Heavy Metals in
Soils. Wiley, New York, pp. 125-150.
Nasseri, S., Mazaheri, A.M., Noori, S.M., Rostami,
K.H., Shariat, M., Nadafi, K. 2002. Chromium
removal from tanning effluent using biomass of
Aspergillus oryzae. Pak J Biol Sci 5:1056-1059.
Natorf, R., Balijska, M., Paszewski, A. 1993. At
least four regulatory genes control sulphur
metabolite repression in Aspergillus nidulans.
Mol Gen Genet 238(1-2):185-192.
Natorf, R., Piotrowska, M., Paszewski, A. 1998. The
Aspergillus nidulans sulphur regulatory gene
sconB encodes a protein with WD40 repeats and
an F-box. Mol Gen Genet 257(3):255-263.
Nguyen-Nhu, N. T., Knoops, B. 2002. Alkyl
hydroperoxide
reductase
1
protects
Saccharomyces cerevisiae against metal ion
toxicity and glutathione depletion. Toxicol Lett
135(3):219-228.
Nies, D.H., Koch, S., Wachi, S., Peitzsch, N., Saier,
M.H. 1998. CHR, a novel family of prokaryotic
proton motive force-driven transporters
probably containing chromate/sulfate antiporters. J Bacteriol 180(21):5799-5802
Oliver, D.S., Brockman, F.J., Bowman, R.S.,
Thomas
L., Kieft, T.L. 2003. Microbial
reduction of hexavalent chromium under vadose
zone conditions. J Environ Qual 32(1):317-324.
63
Palmer, C.H., Wittbrodt, P.R. 1991. Processes
affecting the remediation of chromiumcontaminated sites. Environ Health Perspect
92:25-40
Pa, M., Milacic, R., Dralar, K., Pollak, N., Raspor,
P. 2004. Uptake of chromium(III) and
chromium(VI) compounds in the yeast cell.
BioMetals 17(1):25-33.
Pazouki, M., Keyanpour-Rad, M., Shafie, S.H.,
Shahhoseini, S.H. 2007. Efficiency of
Penicillium chrysogenum PTCC 5037 in
reducing low concentration of chromium
hexavalent in a chromium electroplating plant
wastewater. Bioresour Technol 98(11):21162122.
Pesti, M., Gazdag, Z., Emri, T., Farkas, N., Kosz,
Zs., Belgyi, J., Pcsi, I. 2002. Chromate
sensitivity in fission yeast is caused by increased
glutathione reductase activity and peroxide
overproduction. J Basic Microbiol 42(6):406419.
Pillichshammer, M., Pmpel, T., Pder, R., Eller,
K., Klima, J., Schinner, F. 1995. Biosorption of
chromium to fungi. BioMetals 8(2):117-121.
Prasenjit, B., Sumathi, S. 2005. Uptake of chromium
by Aspergillus foetidus. J Mater Cy Waste
Manag 7(2): 88-92.
Ramrez-Daz, M. I., Daz-Prez, C., Vargas, E.,
Riveros-Rosas,
H.,
Campos-Garca,
J.,
Cervantes, C. 2008. Mechanisms of bacterial
resistance to chromium compounts. BioMetals
21(3):321-332.
Ramrez-Ramrez, R., Calvo-Mndez, C., vilaRodrguez, M., Lappe, P., Ulloa, M.,VzquezJurez, R., Gutirrez-Corona, F. 2004. Cr(VI)
reduction in a cromate-resistant strain of
Candida maltosa isolated from the leather
industry. Antonie Van Leeuwenhoek 85(1):63-68.
Srivastava, H., Mathur, R., Mehrotra, I. 1986.
Removal of chromium from industrial effluent
by absorption on sawdust. Environ Technol
7(1):55-63.
Srivastava, S., Thakur, I.S. 2006a. Isolation and
process parameter optimization of Aspergillus
sp. for removal of chromium from tannery
effluent. Bioresour Technol 97(10):1167-1173.
Srivastava, S., Thakur, I.S. 2006b. Biosorption

potency of Aspergillus niger for removal of
chromium (VI). Curr Microbiol 53(3):232-237.
Sumner, E.R., Shanmuganathan, A., Sideri, T.C.,
Willetts, S.A., Houghton, E.J., Avery, S. 2005.
Oxidative protein damage causes chromium
toxicity in yeast. Microbiol 151(Pt 6): 19391948.
Tao, Y., G. A. Marzluf. 1998. Synthesis and
differential turnover of the CYS3 regulatory
protein of Neurospora crassa are subject to
sulfur control. J Bacteriol 180(3):478-482.
Tokunaga, T.K, Wan, J., Firestone, M.K., Hazen,
T.C., Olson, K.R., Donald, J. Herman, D.J.
Sutton, S.R., Lanzirotti, A. 2003. Bioremediation
and Biodegradation. In situ reduction of
chromium(VI) in heavily contaminated soils
through organic carbon amendment. J Environ
Qual 32(5):1641-1649.
Van de Kamp, M., Schuurs, T.A., Vos, A., Van der
Lende, T.R., Konings, W.N., Driessen, A.J.M.
2000. Sulfur regulation of the sulfate transporter
genes sutA and sutB in Penicillium
chrysogenum.
Appl
Environ
Microbiol
66(10):4536-4538.
Villegas, L.B., Fernndez, P.M., Amoroso, M. J., de
Figueroa, L. I.C. 2008. Chromate removal by
yeasts isolated from sediments of a tanning
factory and a mine site in Argentina. BioMetals
21(5):591-600.
Volesky, B., Holan, Z.R. 1995. Biosorption of
heavy metals. Biotechnol Prog 11(3):235-250.
Wong, P.T., Trevors, J.T. 1988. Chromium toxicity
to algae and bacteria. In: Nriagu, J.O., Nieboer,
E. Eds. Chromium in the Natural and Human
Environments. Wiley, New York, pp 305-315.
Yin, H., He, B., Peng, H., Ye, J., Yang, F., Zhang,
N. 2008. Removal of Cr(VI) and Ni(II) from
aqueous solution by fused yeast: study of cations
release and biosorption mechanisms. J Hazard
Mater 158(2-3):568-576.
Zafar, S., Aqil, F., Ahmad, I. 2007. Metal tolerance
and biosorption potential of filamentous fungi
isolated from metal contaminated agricultural
soil. Bioresour Technol 98(13):2557-2561.
Naranjo-Briceo et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):64-90
64
Revisin crtica
Arthrospira platensis como biofactora de metabolitos

secundarios de inters farmacolgico: el cido pipeclico.
Leopoldo Naranjo-Briceo1*, Diego Rojas-Tortolero1, Hctor Gonzlez2, Rubn Torres
Parra2, Jorge Zegarra Narro2, Luca Sena-DAnna1, y Daynet Sosa del Castillo3
1
Direccin de rea de Energa y Ambiente, Fundacin Instituto de Estudios Avanzados (IDEA).

C/ Hoyo de la Puerta-Baruta, Sartenejas, Caracas 1080, Venezuela.
2
Asociacin Civil Gente de Ciencias (GDC)
3
Direccin de rea de Agricultura y Soberana Alimentaria,
Fundacin Instituto de Estudios Avanzados (IDEA)
*
Autor de correspondencia: lnaranjo@idea.gob.ve
Resumen
Las cianobacterias constituyen una alternativa innovadora para ser utilizadas como factoras
celulares con el fin de producir grandes cantidades de metabolitos secundarios de inters
farmacolgico. El cido pipeclico est relacionado con el metabolismo de lisina en diversos
organismos y es un componente y precursor importante de la biosntesis de diversos compuestos
bioactivos tales como: inmunosupresores, pptidos no-ribosomales, poliqutidos y alcaloides en
microorganismos y plantas. En este sentido, diversos anlisis bioqumicos han demostrado la alta
capacidad de A. platensis de acumular lisina intracelularmente. En la naturaleza, la sntesis de
lisina tiene lugar por medio de dos rutas biosintticas distintas; mientras que en hongos
filamentosos el cido pipeclico se sintetiza va cido -aminoadpico, a travs de la ruta del aminoadipato para formar L-lisina, en plantas el cido pipeclico se sintetiza va sacaropina, a
travs del catabolismo de L-lisina. Sin embargo, en ambos casos, el intermediario piperiden-6carboxlico (P6C) es el precursor inmediato del cido pipeclico. La presente revisin tiene como
objetivo principal el estudio del metabolismo de cido pipeclico en diversos organismos y sus
posibles aplicaciones biotecnolgicas en la industria farmacutica. Asimismo, se plantea el uso
de A. platensis como factora celular para producir P6C, cido pipeclico u otros metabolitos de
inters farmacolgico.
Palabras clave: L-lisina, -aminoadipato, cido pipeclico, biosntesis, cianobacteria.
Abstract
The cyanobacteria are an innovative alternative to be used as cellular factories to produce large
amount of secondary metabolites of pharmacological interest. Pipecolic acid is related to lysine
metabolism in diverse organisms and is an important component and precursor for the
biosynthesis of several bioactive compounds such as immunosuppressants, non-ribosomal
peptides, polyketides and alkaloids in microorganisms and plants. In fact, several studies have
demonstrated the biochemical capacity of A. platensis to accumulate lysine intracellularly. In
nature, the synthesis of lysine occurs through two distinct biosynthetic pathways, whereas in
65
filamentous fungi the pipecolic acid is synthesized via -aminoadipic acid, through the aminiadipate pathway to form L-lysine, in plants pipecolic acid is synthesized via saccharopine,
through the catabolism of L-lysine. However, in both cases, the piperidine-6-carboxylic acid
(P6C) metabolite is the immediate precursor of pipecolic acid. The present review is focused at
the study of the pipecolic acid metabolism in diverse organisms and their potential
biotechnological applications in the pharmaceutical industry. Likewise, the use of A. platensis as
a cell factory to produce P6C, pipecolic acid or other metabolites with pharmacological interest is
disscused.
Keywords: L-lysine, -aminoadipate, pipecolic acid, biosynthesis, cyanobacteria.
1. Introduccin
Arthrospira platensis es una cianobacteria
filamentosa fotosinttica y alcalfila original
de ambientes bicarbonatados que pertenece a
la familia de las Oscillatoriaceae, Divisin
Cyanophyta (Ciferri, 1983). Desde pocas
ancestrales A. platensis ha sido estimada por
sus propiedades medicinales y nutricionales
(Ciferri, 1983; Belay et al. 1993, Belay et al.
1996; Subhashini et al. 2004; Thajuddin y
Subramanian, 2005; Ramrez-Moreno y
Olvera-Ramrez, 2006; Snchez et al.
2006;). Actualmente A. platensis tiene un
alto inters biotecnolgico y econmico
tanto para la industria alimentaria como
farmacolgica. Desde el punto de vista
alimentario, adems de ser fcilmente
digerible (Ciferri, 1983; Jaime et al. 1996;
Thajuddin y Subramanian, 2005; RamrezMoreno y Olvera-Ramrez, 2006), A.
platensis constituye una fuente potencial de
pigmentos, protenas, vitaminas, cidos
grasos, minerales, carbohidratos, cidos
nucleicos y aminocidos (Ciferri y Tiboni,
1985, Henrikson, 1989, Mosulishvili et al.
2002; Ramrez-Moreno y Olvera-Ramrez,
2006; Colla et al. 2007). Ms recientemente,
el potencial biotecnolgico de A. platensis y
otras microalgas se ha demostrado en una
amplia gama de usos, tales como, en la
degradacin de herbicidas organofosforados
(Lipok et al. 2007), la fijacin de gases de
efecto invernadero (de Morais, 2007), como
bioacumuladoras de metales pesados
(Chojnacka, 2005, Gong, 2005, Pane et al.
2007, Lodi, 2007), como biocatalizadoras en

procesos de biotransformacin (Utsukihara
et al. 2007), para la produccin de hidrgeno
(Juantorena et al. 2007) y en la produccin
de biocombustibles (Chisti, 2007), entre
otros.
Desde el punto de vista farmacolgico, las
cianobacterias constituyen una alternativa
innovadora para ser utilizadas como
factoras celulares para producir grandes
cantidades de metabolitos secundarios con
interesantes actividades farmacolgicas tales
como antibiticos, vitaminas, aminocidos,
enzimas, agentes antitumorales, protenas
heterlogas, entre otros (Singh, 2005;
Spolaore, 2006). En este sentido, la
ingeniera metablica surge como un campo
interdisciplinario que apunta a mejorar las
caractersticas celulares de los organismos
usando la biologa molecular como
herramienta para modificar las rutas
metablicas y/o la regulacin de las mismas
(Stafford y Stephanopoulos, 2001). Esto, con
la finalidad de disminuir o incrementar la
biosntesis de algn metabolito o un
producto final en particular. En la naturaleza,
la sntesis de lisina, un aminocido esencial
requerido en la dieta diaria de mamferos,
tiene lugar por medio de dos rutas
biosintticas completamente distintas: i) la
ruta del cido diaminopimlico y, ii) la ruta
del - aminoadipato (tambin denominada
ruta del cido -aminoadpico).
66
Figura 1. Ruta biosinttica del -aminoadipato para la formacin de L-lisina descrita en hongos. Se muestra la ruta
de conversin de cido pipeclico en lisina descrita en P. chrysogenum va -aminoadipato--semialdehdo y
sacaropina. As mismo, se muestra la conversin de cido -aminoadpico en cido pipeclico, componente y
precursor de numerosos metabolitos secundarios con interesantes actividades biolgicas. -AA--SA: aminoadipato--semialdehdo; P6C: cido piperiden-6-carboxlico. lys7: gen que codifica la sacaropina reductasa de
P. chrysogenum.
67
Se ha descrito que los hongos y las

euglenofitas utilizan la ruta del aminoadipato (Fig. 1) para la biosntesis de
lisina (Vogel, 1960; Rothstein y Saffran,
1963; Lejohn, 1971; Bhattacharjee, 1985;
Garrad y Bhattacharjee, 1992; Weidner et al.
1997; Casqueiro et al. 1999a, 2001;
Bauelos et al. 1999, 2000; Hijarrubia et al.
2001; Naranjo et al. 2001; 2002; 2004;
Teves et al. 2009). En este sentido, anlisis
bioqumicos han puesto en clara evidencia la
alta capacidad de A. platensis de acumular
lisina intracelularmente (Ramrez-Moreno y
Olvera-Ramrez, 2006).
La ruta biosinttica del -aminoadipato
comienza con la condensacin de cetoglutarato y acetil-CoA, y comprende
siete reacciones enzimticas consecutivas
para formar lisina. Adems, dicha ruta
provee diversos precursores para el
metabolismo secundario, tales como: el
cido -aminoadpico y el piperiden-6carboxlico (P6C; en equilibrio qumico
constante con su cadena abierta el aminoadipato--semialdehdo). El cido
pipeclico es un importante metabolito
secundario que se forma a partir del
metabolismo de lisina en diversos
organismos que incluye mamferos, plantas,
bacterias, levaduras y hongos (Aspen y
Meister, 1962; Baginsky y Rodwell, 1967;
Hartline y Rodwell, 1971; Kurtz y
Bhattacharjee, 1975; Wickwire et al. 1990a,
Wickwire et al. 1990b; Goncalves-Butruille
et al. 1996; Sim y Perry, 1997; IJlst et al.
2000; Dodt et al. 2000; Naranjo et al. 2001;
2004). Mientras que en hongos filamentosos
se ha descrito que el cido pipeclico se
sintetiza va cido -aminoadpico, a travs
de la ruta del -aminoadipato (Aspen y
Meister, 1962; Naranjo et al. 2004), en
plantas, el cido pipeclico se sintetiza va
sacaropina, a travs del catabolismo de Llisina (Goncalves-Butruille et al. 1996). No
obstante, es importante resaltar que, en
ambos casos, el P6C es el precursor

inmediato del cido pipeclico.
El inters farmacolgico sobre el estudio del
cido pipeclico radica en el hecho de que
este inminoacido es un componente y
precursor de la biosntesis de diversos
compuestos
bioactivos,
tales
como:
inmunosupresores, pptidos no-ribosomales,
poliqutidos y alcaloides.
La presente revisin tiene como finalidad el
estudio del metabolismo de cido pipeclico
en diversos organismos y sus posibles
aplicaciones biotecnolgicas en la industria
farmacolgica. As mismo, se plantea el uso
de A. platensis como biofactora y de
algunas estrategias de ingeniera biosinttica
del metabolismo de L-lisina para
incrementar la sntesis de P6C, cido
pipeclico y otros metabolitos de inters
farmacolgico, tomando en cuenta sus
ventajas comparativas.
2. Metabolismo del cido pipeclico

2.1. El cido pipeclico y su relacin con el
metabolismo de lisina en diversos
organismos
El cido pipeclico es un iminocido de seis
tomos de carbono que desempea distintas
funciones
metablicas
en
diversos
organismos. Adems de ser un intermediario
del catabolismo de lisina en mamferos,
plantas, bacterias, levaduras y hongos, el
cido pipeclico es un componente y un
precursor
importante
de
numerosos
metabolitos secundarios de microorganismos
y plantas. Desde el punto de vista
nutricional, el cido pipeclico tiene una
gran importancia ya que es capaz de
complementar la auxotrofa de lisina en
cepas mutantes de levaduras y hongos, tales
como Penicillium chrysogenum, Aspergillus
nidulans y Rhodotorula glutinis. Esto se
debe a que en estos microorganismos el
cido pipeclico se convierte en L-lisina
68
utilizando -aminoadipato--semialdehdo y
sacaropina como intermediarios. Con
relacin a la biosntesis de cido pipeclico,
en la naturaleza existen dos vas principales
que son: i) la va sacaropina (a travs del
catabolismo de L-lisina) y, ii) la va cido aminoadpico (a travs de la ruta del aminoadipato para la formacin de L-lisina).
A continuacin se describe el metabolismo
de este importante iminocido en algunos
organismos.
Mamferos
En mamferos, la lisina puede ser
catabolizada por dos vas distintas: por la
ruta de la sacaropina o por la ruta del cido
pipeclico (IJlst et al. 2000; Dodt et al.
2000). Aunque la lisina se cataboliza
principalmente a travs de la ruta de la
sacaropina en la mayora de los tejidos, en el
cerebro, la ruta del cido pipeclico es la
ms activa. En la ruta del catabolismo de
lisina va sacaropina, la lisina se transforma
en P6C a travs de dos reacciones
consecutivas llevadas a cabo por la
sacaropina deshidrogenasa y la sacaropina
reductasa. Tal como sucede en plantas
(Goncalves-Butruille et al. 1996; Tang et al.
2000; Zhu et al. 2000a, Zhu et al. 2000b),
estas dos reacciones son catalizadas por una
nica enzima bifuncional. Sin embargo, en el
cerebro, la actividad de esta enzima
bifuncional es muy baja, por lo que la lisina
se cataboliza predominantemente va cido
pipeclico a travs de dos reacciones
enzimticas usando cido piperiden-2carboxlico (P2C) y su cadena abierta 2-ceto6-aminocaproato como intermediarios (IJlst
et al. 2000; Dodt et al. 2000), tal como
muestra la Figura 2.
La primera pipecolato oxidasa caracterizada

y purificada en mamferos fue descrita en
primates por Mihalik et al. (1991). Dicha
protena, un monmero amarillo, posee un
peso molecular deducido de 46 kDa. En
primates y humanos, Mihalik et al. (1991),
demostraron que el cido pipeclico se oxida
mediante dos reacciones consecutivas de
deshidrogenacin para formar cido aminoadpico (Mihalik y Rhead, 1989). Los
resultados obtenidos por este grupo de
investigacin sugeran que la oxidacin del
cido pipeclico en primates y humanos se
llevaba a cabo a travs de una ruta similar a
la encontrada en Pseudomonas putida
(Baginsky y Rodwell, 1967). En esta
bacteria, se haba descrito que el cido
pipeclico se oxida inicialmente a P6C a
travs de una pipecolato oxidasa (cido
pipeclico + O2 P6C + H2O2). El P6C se
encuentra en equilibrio qumico constante
con el -aminoadipato--semialdehdo, de
tal manera que el P6C se abre
espontneamente al pH fisiolgico para
formar
-aminoadipato--semialdehdo.
Posteriormente, la oxidacin del aminoadipato--semialdehdo produce cido
-aminoadpico. Reuber et al. (1997),
aislaron y purificaron la pipecolato oxidasa
de conejos, la cual esta constituida por 390
aminocidos. Dicha enzima se caracteriza
por tener en el extremo amino terminal un
dominio de unin a ADP formado por una
alternancia , un motivo altamente
conservado en flavoprotenas. Adems,
Reuber et al. (1997) establecieron que la
sarcosina, el cido pipeclico y la prolina
eran buenos sustratos para esta enzima.
69
Figura 2. Representacin esquemtica de las dos rutas catablicas de lisina presentes en mamferos. (A) Ruta del
catabolismo de lisina va sacaropina y (B) Ruta del catabolismo de lisina va cido pipeclico. Aunque la lisina se
cataboliza principalmente a travs de la ruta de la sacaropina en la mayora de los tejidos, en el cerebro, la ruta del
cido pipeclico es la ms activa. -AA--SA: -aminoadipato--semialdehdo; P6C: cido piperiden-6carboxlico; P2C: cido piperiden-2-carboxlico.
70
Ms adelante, IJlst et al. (2000) describieron
la clonacin del gen que codifica la
pipecolato oxidasa en humanos a partir de
ADNc usando la informacin de la secuencia
de nucletidos de genes que codifican
pipecolato/sarcosina
oxidasas
descritas
previamente en conejos y ratones. La
hipottica pipecolato oxidasa de humanos
present una alta homologa con la sarcosina
oxidasa de ratones y algunas de las
sarcosinas oxidasas monomricas descritas
en bacterias. Adems, la protena deducida
tambin mostraba un dominio de unin a
ADP- similar a la pipecolato oxidasa de
conejos. En paralelo, Dodt et al. (2000)
describieron la clonacin del gen que
codifica la pipecolato oxidasa de humanos
por gentica reversa usando la secuencia de
aminocidos de la pipecolato oxidasa
purificada de primates. El ADNc clonado
present un marco de lectura abierta de 1170
pares de bases que codifica una protena de
390 aminocidos con una alta identidad con
todas las sarcosinas oxidasas y deshidrogenasas descritas, especialmente, con la
sarcosina oxidasa monomrica de Bacillus
sp. NS-129. Adems, Dodt et al. (2000)
tambin demostraron que esta enzima
oxidaba tanto el cido pipeclico como la
sarcosina, tal como lo haban descrito
previamente Reuber et al. (1997) con la
pipecolato oxidasa de conejos.
Con relacin a la localizacin subcelular, en
humanos, ratones y primates el cido
pipeclico se metaboliza en los peroxisomas
(IJlst et al. 2000; Dodt et al. 2000). En
conejos, perros, cerdos y ovejas la oxidacin
del cido pipeclico es predominantemente
mitocondrial (Singh et al. 1989; Mihalik y
Rhead, 1991) mientras que, en ratas, este
compuesto puede ser metabolizado tanto en
mitocondrias como en peroxisomas (Rao et
al. 1993).
La identificacin y caracterizacin de la
pipecolato oxidasa humana tiene una gran
importancia en el campo de la salud humana,
ya que se ha descrito que la acumulacin de

cido pipeclico es una de las principales
anormalidades bioqumicas asociada con
pacientes que sufren un desorden
generalizado en la biognesis de los
peroxisomas
(peroxisome
biogenesis
disorder o PBD), entre los que destacan: el
sndrome cerebro-hepato-renal de Zellweger,
una enfermedad gentica que se caracteriza
por la ausencia de peroxisomas morfolgicamente distinguibles; la adrenoleucodistrofa neonatal y la hiperpipeclico
acidaemia (Wanders et al. 1989, 1988;
Mihalik y Rhead, 1989; Mihalik et al. 1989;
Rao et al. 1993).
Tambin, se ha descrito que pacientes con
enfermedades crnicas, especialmente, con
encefalopata heptica, presentan niveles
altos de cido pipeclico en plasma
sanguneo (Fujita et al. 1999). Los pacientes
con PBD se caracterizan por presentar un
profundo retraso mental, una migracin
neuronal anormal y una degeneracin
excesiva del sistema nervioso central. En los
pacientes con PBD los peroxisomas se
encuentran ausentes con la deficiencia
concomitante de todas las enzimas
peroxisomales. La acumulacin de cido
pipeclico en estos pacientes se debe a una
actividad deficiente de la enzima pipecolato
oxidasa, lo que indica que esta enzima se
encuentra fuertemente implicada en la
degradacin del cido pipeclico a cido aminoadpico y que podra ser peroxisomal
al menos en humanos y monos (IJlst et al.
2000; Mihalik y Rhead, 1989; Wanders et al.
1988).
Aunque se ha caracterizado la pipecolato
oxidasa e identificado el producto de su
reaccin, el mecanismo exacto de oxidacin
del cido pipeclico no est an totalmente
claro. Sin embargo, se ha descrito que la
pipecolato oxidasa cataliza la conversin de
cido pipeclico en P6C el cual, de manera
espontnea, se encuentra en equilibrio con su
forma
lineal
el
-aminoadipato--
71
semialdehdo (Kramar et al. 1989; Mihalik y
Rhead, 1989; Wanders et al. 1989; Rao y
Chang, 1990a; Dodt et al. 2000; IJlst et al.
2000). Posteriormente, el -aminoadipato-semialdehdo se convierte a su vez en cido
-aminoadpico a travs de una reaccin de
deshidrogenacin dependiente de NAD
(Chang et al. 1990; Rao y Chang, 1990b).
Plantas
Las plantas producen una inmensa cantidad
y variedad de compuestos orgnicos, de los
cuales, la gran mayora parecen no estar
implicados directamente con los procesos de
crecimiento y desarrollo de las mismas, es
decir, son metabolitos secundarios (Croteau
et al. 2003). En plantas, el cido pipeclico
se considera un metabolito secundario
mientras que su anlogo, el aminocido
prolina, se considera como un metabolito
primario. En plantas, se ha descrito que el
cido pipeclico deriva del catabolismo de
lisina va -aminoadipato--semialdehdo
(Goncalves-Butruille
et
al.
1996).
Posteriormente, el P6C podra reducirse a
cido pipeclico mediante una reaccin
anloga a la catalizada por la pirrolina-5carboxilato (P5C) reductasa (EC 1.5.1.2)
(Stewart y Larher, 1980; Rosenthal, 1982;
Galili, 1995).
Momordica charantia (bitter melon), una
planta de la familia Cucurbitaceae de gran
inters en la medicina tradicional china y
africana contiene en sus frutos y semillas,
entre otros aminocidos libres, cido
pipeclico (Salawu et al. 1999). Esta planta
presenta
propiedades
antibiticas,
antimutagnicas, antioxidantes, antivirales,
antitumorales, astringentes, depurativas,
afrodisacas, inmunomodulares, citotxi-cas,
as como actividad inmunosupresora e
insecticida, entre otras (Leung et al. 1987;
Romeo, 1984). Tradicionalmente, se
recomienda para combatir problemas de la
piel (dermatosis, quemaduras, erupciones,
soriasis, etc.), la gonorrea, el reumatismo, la
artritis, el lupus, la diabetes, como
estimulante del apetito, para la regulacin de

la
fertilidad,
para
tratamientos
gastrointestinales y como insecticida. M.
charantia ha sido utilizada para el
tratamiento de ciertos tipos de cncer e
infecciones virales (Leung et al. 1987) y se
ha encontrado que el extracto hexnico de
esta planta posee actividad inhibitoria sobre
amastigotes y promastigotes de diversas
especies de Leishmania (Jaramillo, 2000).
As mismo, el cido pipeclico es un
fitoqumico que se acumula en grandes
cantidades en algunos miembros de la
familia Fabaceae y se ha descrito que es el
principal constituyente de la reserva de
aminocidos libres en el gnero Medicago
(Stewart y Larher, 1980; Rosenthal, 1982).
Adems, el cido pipeclico, se ha detectado
en frutos inmaduros (pericarpio y semillas)
de Coffea arabica y Camellia sinensis
(Higuchi et al. 1995), mientras que en
Sophora secundiflora, Cycas circinalis y
Phaseolus vulgaris se ha identificado en
semillas (Izaddoost et al. 1976; Li et al.
1996).
Las plantas conviven con una comunidad
depredadora muy activa constituida por
bacterias, insectos, hongos y vertebrados
herbvoros, por lo cual han desarrollado
diversos mecanismos de defensa que le han
permitido su supervivencia en este medio tan
hostil (Norton, 2002). El estudio de factores
txicos y anti-nutritivos en las leguminosas
Albizia lebbeck y Calliandra calothyrsus
permiti identificar la presencia de cido
pipeclico en sus hojas (Marlier et al. 1979;
Romeo, 1984; Romeo, 1988). Es importante
destacar que el cido pipeclico y sus
derivados que han sido aislados de las hojas
de C. calothyrsus poseen propiedades
insecticidas y fitotxicas (Romeo, 1984), por
lo cual, estos compuestos podran tener un
gran inters comercial en el campo de la
industria agroalimentaria. Por otro lado, se
ha observado que pequeas concentraciones
de cido pipeclico inhiben el crecimiento
72
de la radcula de semillas germinadas en
Astragalus sinicus y Morus alba, y se ha
demostrado que la conversin de lisina a
cido pipeclico induce floracin en Lemna
paucicostata 151 (Fujioka et al. 1987).
Tambin, se ha descrito que el cido
pipeclico es un soluto asociado con la
adaptacin osmtica de Ptelea sp., una
planta xerfita que se desarrolla en hbitats
ridos y semiridos (Steward y Larher, 1980;
Romeo, 1988).
Bacterias
En algunas especies de Pseudomonas se ha
descrito que el cido pipeclico proviene del
catabolismo de lisina (Baginsky y Rodwell,
1967; Hartline y Rodwell, 1971). En P.
putida, la L-lisina se convierte inicialmente
en D-lisina y P2C. Posteriormente, el P2C se
convierte en cido pipeclico por accin de
la P2C reductasa (Payton y Chang, 1982).
Por
otro
lado,
en
Streptomyces
hygroscopicus, el cido pipeclico tambin
deriva del catabolismo de L-lisina. Esta
bacteria
produce
rapamicima,
un
inmunosupresor que contiene en su
estructura una molcula de cido pipeclico
(Khaw et al. 1998). Adems, se ha descrito
que en el genoma de Escherichia coli existe
una P6C reductasa que cataliza la
reduccin de P6C en cido pipeclico. Fujii
et al. (2002) demostraron con experimentos
in vivo e in vitro que la actividad P6C
reductasa la lleva a cabo la pirrolina-5carboxilato (P5C) reductasa (EC 1.5.1.2)
codificada por el gen proC. La P5C
reductasa cataliza la reduccin de P5C en Lprolina, una actividad enzimtica encontrada
en una gran variedad de organismos
(Leisinger, 1987). Por otro lado, se ha
estudiado la capacidad osmoprotectora del
cido pipeclico en E. coli (Gouesbet et al.
1994) y Sinorhizobium meliloti (Gouffi et al.
2000), donde se ha demostrado que es un
compuesto efectivo capaz de optimizar el
crecimiento de estos microorganismos bajo
condiciones inhibitorias de osmolaridad.
Hongos filamentosos y levaduras

Al igual que en otros organismos, en
levaduras y hongos filamentosos el cido
pipeclico es un intermediario importante
que se encuentra estrechamente relacionado
con el metabolismo de lisina. El cido
pipeclico tiene un papel nutricional
importante en Aspergillus nidulans (Aspen y
Meister, 1962) y Rhodotorula glutinis (Kurtz
y Bhattacharjee, 1975), sin embargo, se ha
descrito que no posee ninguna funcin en la
ruta biosinttica de lisina de Saccharomyces
cerevisiae (Glass y Bhattacharjee, 1971;
Kurtz
y
Bhattacharjee,
1975).
A
continuacin se menciona el papel que
desempea el cido pipeclico en el
metabolismo de lisina en diferentes especies
de hongos y levaduras.
2.2. Conversin de cido pipeclico en Llisina
Rhodotorula glutinis
La biosntesis de lisina en R. glutinis, una
levadura roja aerbica obligada, se lleva a
cabo a travs de la ruta del -aminoadpico
como ocurre en levaduras y otros hongos
filamentosos (Broquist, 1971). Kurtz y
Bhattacharjee (1975), demostraron que
algunos mutantes auxtrofos de lisina de R.
glutinis podan crecer en medio mnimo
suplementado con cido pipeclico, sugiriendo
la importancia nutricional del cido pipeclico
en este microorganismo. Adems, demostraron
en la cepa silvestre de R. glutinis que el cido
pipeclico se convierte en -aminoadipato-semialdehdo. Por otro lado, Kurtz y
Bhattacharjee (1975) tambin demostraron que
en S. cerevisiae, a diferencia de los resultados
obtenidos en R. glutinis, el cido pipeclico no
jugaba ningn papel en la biosntesis de lisina.
Posteriormente, Kinzel y Bhattacharjee (1979)
presentaron por primera vez evidencias
genticas y bioqumicas de los pasos
especficos implicados en la ruta de conversin
de cido pipeclico se converta en lisina va
-aminoadipato--semialdehdo y sacaropina.
73
As mismo, determinaron que, en presencia de
la pipecolato reductasa, el cido pipeclico se
converta en -aminoadipato--semialdehdo
(en equilibrio con el P6C), un intermediario de
la ruta del cido -aminoadpico para la
formacin de lisina (Fig. 1). Adems,
demostraron que la reaccin llevada a cabo por
la pipecolato oxidasa no requera ningn
cofactor externo y el producto de su reaccin,
el
-aminoadipato--semialdehdo,
se
converta enzimticamente en sacaropina y
lisina. Por otro lado, Kinzel y Bhattacharjee
(1979), concluyeron que el cido pipeclico
era un precursor circunstancial de lisina en R.
glutinis y que ste no era un intermediario de
la ruta biosinttica de lisina. Posteriormente,
Kinzel y Bhattacharjee (1982), describieron
por primera vez la purificacin parcial y las
propiedades de la pipecolato oxidasa de R.
glutinis. La pipecolato oxidasa de R. glutinis
presenta un peso molecular aproximado de 43
kDa, se caracteriza por ser soluble y tener un
grupo sulfihidrilo esencial para su actividad.
La deteccin de perxido de hidrgeno indic
que la reaccin de oxidacin poda ser escrita
como se indica a continuacin: cido
pipeclico + O2 -aminoadipato-semialdehdo + H2O2. Adems, la capacidad
que tiene la enzima purificada de oxidar el
cido pipeclico in vitro indicaba que, a
diferencia de la pipecolato oxidasa de
Pseudomonas, no requera de aceptores de
electrones internos o de una cadena
transportadora de electrones. Aunque para ese
momento se haba descrito que el cido
pipeclico estaba implicado en la biosntesis
de lisina en A. nidulans y en el alga Euglena
gracilis, las bases bioqumicas, genticas y
enzimticas de la conversin de cido
pipeclico en lisina solamente se haban
determinado en R. glutinis.
Penicillium chrysogenum
Naranjo et al. (2001) demostraron que P.
chrysogenum es capaz de utilizar cido
pipeclico para complementar los requeri-
mientos nutricionales de varios mutantes

auxtrofos de lisina (lys-). La clonacin del
gen que codifica la sacaropina reductasa en P.
chrysogenum (denominado gen lys7), as como
la caracterizacin bioqumica y molecular de
mutantes auxtrofos de lisina que eran
incapaces de utilizar cido pipeclico para
complementar dicha auxotrofia (lys-/Pip-),
permiti determinar que en este hongo
filamentoso el cido pipeclico se convierte en
lisina a travs de su conversin en cido
piperidn-6-carboxlico (P6C) por accin de la
pipecolato oxidasa, y el P6C se convierte en
sacaropina y lisina a travs de dos reacciones
enzimticas consecutivas catalizadas por la
sacaropina reductasa y la sacaropina
deshidrogenasa respectivamente (Fig. 1).
2.3. Biosntesis de cido pipeclico va
sacaropina
Metarhizium anisopliae y Rhizoctonia
leguminicola
El inters de estudiar el metabolismo de lisina
y del cido pipeclico en M. anisopliae y el
hongo parsito R. leguminicola, se basa en que
estos aminocidos estn implicados en la
biosntesis
de
alcaloides
octahidroindoliznicos (Sim y Perry, 1997; Wickwire et
al. 1990a, Wickwire et al. 1990b). A
diferencia de N. crassa, donde la D-lisina es el
precursor del cido pipeclico (Fangmeier y
Leistner, 1980), se ha descrito que en M.
anisopliae y R. leguminicola la L-lisina es el
precursor en la biosntesis de cido pipeclico
(Wickwire et al. 1990a; Guengerich y
Broquist, 1973; Sim y Perry, 1997). En estos
hongos filamentosos, el cido pipeclico es un
producto del catabolismo de lisina y un
precursor inmediato para la formacin de
alcaloides octahidroindolizinicos tales como:
la
slaframina
(1S,6S,8aS-1-acetoxi-6aminooctahidroindolizina) y la swainsonina
(1,2,8-trihidroxioctahidro indolizina), tal como
muestra la Figura 3.
74
Figura 3. Representacin esquemtica de la biosntesis de cido pipeclico va sacaropina en los hongos

filamentosos Metarhizium anisopliae y Rhizoctonia leguminicola. El cido pipeclico deriva del catabolismo de Llisina y es un precursor inmediato para la sntesis de alcaloides octahidroindolizinicos. Mientras que R. leguminicola
es capaz de sintetizar ambos alcaloides, M. anisopliae solamente es capaz de producir swainsonina, un metabolito
secundario que tiene una potente actividad antitumoral. -AA--SA: -aminoadipato--semialdehdo; P6C: cido
piperiden-6-carboxlico.
La slaframina es un alcaloide con actividad

parasimpatomimtica, mientras que la
swainsonina es un potente inhibidor de manosidasas que tiene una importante
actividad antitumoral y es usado como
agente quimioteraputico en pacientes con
cncer (Sim y Perry, 1997; Goss et al. 1995;
Dennis et al. 1990; Dennis, 1986;
Humphries et al. 1986). Mientras que R.
leguminicola es capaz de sintetizar ambos
alcaloides, M. anisopliae solamente es capaz
de producir swainsonina. Los resultados
obtenidos por Wickwire et al. (1990a),
Wickwire et al. (1990b) demostraron que en
R. leguminicola el P6C se forma a partir del
catabolismo de L-lisina; adems, el P6C es
el precursor inmediato del cido pipeclico.
Experimentos biolgicos, bioqumicos y la
identificacin de los productos de las
reacciones por espectrometra de masas o
RMN, permitieron determinar inequvoca-
mente que el P6C, y no el P2C, se encuentra

implicado en la conversin de L-lisina en
cido pipeclico en R. leguminicola. Por otro
lado, Wickwire et al. (1990a), Wickwire et
al. (1990b) tambin demostraron en R.
leguminicola que la conversin de
sacaropina en P6C no era catalizada por la
accin de una sacaropina reductasa
dependiente de NADP como se esperaba,
sino que se llevaba a cabo por accin de una
flavoenzima no descrita anteriormente a la
que denominaron sacaropina oxidasa. La
reaccin llevada a cabo por la sacaropina
oxidasa se resume a continuacin:
Sacaropina + O2 P6C + Glutamato +
H2O2.
2.4. Biosntesis de cido pipeclico va
cido -aminoadpico
Hongos filamentosos
75
Se ha descrito en varios organismos que el
cido pipeclico se forma a travs del
catabolismo de lisina. Sin embargo, Aspen y
Meister (1962) demostraron en A. nidulans
que el cido pipeclico deriva de la ruta
biosinttica de lisina (va anablica) y no de
su catabolismo (Fig. 1). Estos autores,
identificaron algunas mutantes auxtrofas de
lisina de A. nidulans que eran capaces de
acumular cido pipeclico cuando crecan
sobre medio mnimo con cantidades
limitantes de lisina y que este proceda
mayoritariamente del cido -aminoadpico.
Es interesante resaltar, que esta fue la
primera evidencia descrita en hongos
filamentosos de que el cido pipeclico
deriva de la ruta biosinttica de lisina.
Ms recientemente, Naranjo et al. (2004)
demostraron que P. chrysogenum es capaz
de sintetizar cido pipeclico a partir del
cido -aminoadpico. El gen lys7 que
codifica la sacaropina reductasa en P.
chrysogenum fue interrumpido de manera
dirigida por la tcnica de la doble
recombinacin
homloga.
La
cepa
interrumpida (denominada P. chrysogenum
SR1-) carece de actividad sacaropina
reductasa, la cual, se recupera despus de la
transformacin de dicha mutante con el gen
lys7 intacto presente en un plsmido de
replicacin autonma. La cepa P.
chrysogenum SR1- es auxtrofa de lisina y
acumula P6C. Cuando el mutante P.
chrysogenum SR1- se crece con L-lisina
como nica fuente de nitrgeno y se aade
cido D, L--aminoadpico al medio de
cultivo, se acumulan intracelularmente
niveles altos de cido pipeclico. La
comparacin de la cepa SR1- con una cepa
interrumpida en el gen lys2 que codifica la
-aminoadipato reductasa, demostr que P.
chrysogenum sintetiza cido pipeclico a
partir del cido -aminoadpico y no a partir
del catabolismo de lisina (Fig. 1). En P.
chrysogenum la ruta de biosntesis de cido
-aminoadpico es muy activa, por lo tanto,
este mutante podra ser utilizado para

producir metabolitos secundarios de
importancia farmacolgica que contengan
cido pipeclico.
3.
Algunas
aplicaciones
biotecnolgicas del cido pipeclico
en la industria farmacolgica
3.1. Obtencin de cido pipeclico y sus
derivados por biotransformacin
La industria qumica fina (Fine Chemicals
Industry) ha tenido un gran auge durante los
ltimos aos, sobre todo en el rea
biofarmacutica y de la agricultura (Stinson,
2000; Thayer, 2008). Mercian y Lonza, entre
otras, son dos compaas farmacuticas que
se dedican a manufacturar qumicos finos,
entre ellos cido pipeclico. El proceso de
obtencin de cido pipeclico que emplea la
compaa Mercian es un claro ejemplo del
poder enantioselectivo de las bacterias. Este
proceso se basa en utilizar una cepa
recombinante de E. coli y L-lisina como
iniciador para
llevar
a cabo
la
biotransformacin de L-lisina a cido
pipeclico. Para lo cual, Fujii et al. (2002),
insertaron en E. coli JM109 el gen lat de
Flavobacterium lutescens que codifica la Llisina-6-aminotransferasa (LAT) descrito
previamente por Fujii et al. (2000). En este
sistema, la LAT convierte L-lisina en P6C y
ste se reduce a cido pipeclico por accin
de la P5C reductasa presente en el genoma
de la bacteria. Los resultados obtenidos por
Fujii et al. (2002), demostraron que ambas
enzimas son necesarias para llevar a cabo la
bioconversin de L-lisina a cido pipeclico
en E. coli. Por otro lado, el proceso de
obtencin de cido pipeclico que emplea la
compaa Lonza consiste en utilizar
picolinonitrilo como iniciador de la
biotransformacin, el cual se convierte
sucesivamente
en
picolinamida,
pipecolamida racmico y finalmente en
cido pipeclico. El mtodo usado en el
76
ltimo paso de la conversin es la
fermentacin con especies de Pseudomonas.
Un aspecto que se debe considerar se refiere
al desarrollo del denominado P6C World
usando biotransformacin (Asano y Ito,
2002). Aunque la actividad enzimtica
implicada en la reduccin de P6C a cido
pipeclico ha sido encontrada en varios
microorganismos, no se ha podido
caracterizar la enzima que cataliza dicha
conversin, ya que su sustrato, el P6C, es un
compuesto qumicamente inestable (Fujii et
al. 2002). No obstante, la compaa
farmacolgica Mercian (Fujii et al. 2002;
Asano y Ito, 2002) actualmente esta
explorando el P6C World y obteniendo
una coleccin de productos qumicos tiles
para la farmacologa derivados del P6C
usando biotransformacin, entre dichos
productos se encuentran: el cido aminoadpico y el cido pipeclico.
La ruta del -aminodipato para la biosntesis
de lisina de P. chrysogenum es muy activa
ya que el cido -aminoadpico, un
intermediario de la ruta, es un precursor
esencial para la biosntesis de penicilina.
Adems, se conoce que cepas de P.
chrysogenum interrumpidas en el gen lys2
que codifica la -aminoadipato reductasa
acumulan niveles altos de cido aminoadpico (Casqueiro et al. 1998; 2001;
2002). Por otro lado, se ha descrito que la
cepa de P. chrysogenum SR1-, interrumpida
en el gen lys7 que codifica la sacaropina
reductasa, acumula niveles altos de P6C y de
cido pipeclico, por lo que podra utilizarse
para producir metabolitos secundarios de
importancia farmacolgica que contengan
cido pipeclico (Naranjo et al. 2004).
3.2.
El
cido
pipeclico
como
osmoprotector
Osmoprotectores son aquellos compuestos
que son capaces de optimizar el crecimiento
celular bajo condiciones inhibitorias de
osmolaridad.
Los
mecanismos
de
osmoregulacin son muy similares en todos

los organismos vivos, incluyendo plantas,
animales y bacterias. En respuesta a la
elevada osmolaridad del ambiente, ellos
acumulan concentraciones intracelulares
relativamente altas de iones inorgnicos y
solutos compatibles. Los solutos compatibles
son molculas orgnicas de bajo peso
molecular recin sintetizadas, entre los se
encuentra el cido pipeclico. Luego de
haber disminuido la osmolaridad ambiental,
los compuestos compatibles pueden ser
liberados al ambiente y subsecuentemente
ser utilizados como osmoprotectores por
otros organismos que se encuentren bajo
estrs hiperosmtico (Gouffi et al. 2000;
Bayles y Wilkinson, 2000). En bacterias, la
capacidad
osmoprotectora
de
cido
pipeclico ha sido solamente estudiada en E.
coli (Gouesbet et al. 1994) y Sinorhizobium
meliloti (Gouffi et al. 2000), donde se ha
demostrado que la osmoproteccin de las
clulas al estrs salino solamente es efectivo
cuando estn presentes los dos ismeros del
cido pipeclico, mientras, que otros
estudios sealan que es preferible usar un
slo enantimero de la molcula como
osmoprotector. En plantas, se ha descrito que
el cido pipeclico y sus derivados estn
relacionados con la adaptacin osmtica en
algunas leguminosas y especies xerfitas que
se desarrollan en hbitats secos y alcalinos,
sometidas a altas temperaturas y a severas y
prolongadas pocas de sequa (Stewart y
Larher, 1980; Romeo, 1988).
3.3. El cido pipeclico como precursor de
alcaloides octahidroindoliznicos
En R. leguminicola y M. anisopliae se ha
descrito que el cido pipeclico es un
intermediario del catabolismo de lisina y un
precursor inmediato en la sntesis de
alcaloides octahidroindoliznicos (Sim y
Perry, 1997; Wickwire et al. 1990a;
Wickwire et al. 1990b). Estos alcaloides
tienen interesantes aplicaciones en el campo
77
de la salud humana, como la swainsonina,
que tiene una potente actividad antitumoral.
En este sentido, se ha demostrado
experimentalmente que inhibe la tasa de
crecimiento de melanomas y metstasis
humanos produciendo una mnima toxicidad
cuando es administrada en pacientes con
cncer (Sim y Perry, 1997; Goss et al. 1995;
Dennis et al. 1990; Dennis, 1986;
Humphries et al. 1986). En estos hongos
filamentosos, el catabolismo de lisina
procede va sacaropina (Fig. 3). Se ha
observado que la adicin de L-lisina a los
caldos de cultivo de M. anisopliae
incrementa significativamente la produccin
de swainsonina, lo cual indica que
modificaciones genticas en la ruta
biosinttica de lisina podran inducir un
aumento de la sntesis de dicho alcaloide en
este microorganismo. Con el objetivo de
monitorizar el efecto que producen los
cambios en las condiciones de cultivo o las
provocadas por modificaciones genticas
sobre la produccin del metabolito
secundario swainsonina, Sim y Perry (1997)
desarrollaron mtodos analticos mediante
HPLC con los que es posible estudiar los
niveles intracelulares de cada uno de los
metabolitos precursores de la swainsonina:
lisina, sacaropina, cido -aminoadpico y
cido pipeclico.
3.4. El cido pipeclico como sustrato de
pptidos sintetasas no-ribosomales (NRPS)
Los pptidos sintetasas no ribosomales son
protenas que estn organizadas en unidades
funcionales
interactivas
denominadas
mdulos, los cuales catalizan un conjunto de
reacciones catalticas que llevan a la
formacin de un pptido (Doekel y
Marahiel, 2001). La arquitectura modular
entre los pptidos sintetasas no ribosomales
(NRPS) y los poliqutidos sintasas (PKS)
presenta una fuerte analoga. De hecho,
ambos sistemas se han encontrado
combinados de manera natural (NRPS-PKS),
representando biofactoras que permiten

obtener
una
diversidad
estructural
ampliamente extendida de productos
naturales (Cane y Walsh, 1999). La primera
mezcla NRPS-PKS fue identificada en la
agrupacin de genes biosintticos de
rapamicina en Streptomyces hydroscopius
(Schwecke et al. 1995; Molnar et al. 1996).
Esta mezcla NRPS-PKS consiste en un
mdulo de NRPS para la incorporacin de
cido pipeclico integrada en un PKS. Una
organizacin anloga ha sido encontrada en
la agrupacin de genes biosintticos de
FK506 en Streptomyces sp. MA6548
(Motamedi y Shafiee, 1998). Se ha descrito
que S. hydroscopius es capaz de sintetizar
cido pipeclico a partir de L-lisina (Paiva et
al. 1993). Adems, se ha descrito en este
microorganismo que el cido pipeclico es
un precursor de la rapamicina (Molnar et al.
1996; Cheng y Demain, 1995). La adicin de
L-lisina a los caldos de cultivo de S.
hydroscopius incrementa la produccin de
rapamicina en un 150 %, lo cual, puede ser
debido a su conversin en cido pipeclico.
En la actualidad, el cido pipeclico se
utiliza como sustrato de algunas PKS en S.
hydroscopius con los que se obtienen
metabolitos secundarios (anlogos de la
rapamicina) con nuevas o incrementadas
actividades farmacolgicas, tales como:
inmunosupresores,
antitumorales
y
antifngicos (Reynolds y Demain, 1997).
Por otro lado, Nielsen et al. (1991), han
descrito
en
S.
hydroscopius
var.
ascomyceticus una enzima que activa cido
pipeclico que se encuentra implicada en la
biosntesis de la inmunomicina, un
inmunosupresor relacionado con FK506 en
este microorganismo. En los ltimos aos se
ha incrementado el nmero de secuencias
descritas de NRPS. Basados en estos datos y
en estudios bioqumicos avanzados, se puede
obtener una slida interpretacin sobre los
principios bsicos de organizacin y
arquitectura de los NRPS. El potencial de la
78
maquinaria biosinttica se ha visto
desarrollado por la reciente identificacin de
dominios enzimticos integrados (Doekel y
Marahiel, 2001). El estudio del principio de
los mecanismos que integran los NRPS
podra permitir la modificacin racional de
sus multi-dominios, lo cual, abrira un
camino lleno de posibilidades para
redisear productos naturales existentes y
ampliar la complejidad qumica que nos
ofrece la naturaleza (Doekel y Marahiel,
2001). Todo ello, permitira enriquecer las
alternativas teraputicas actuales en la lucha
contra las enfermedades en general.
4. A. platensis como biofactora para

producir P6C, cido pipeclico y
otros metabolitos secundarios de
inters farmacolgico
Uno de los principales problemas con el
desarrollo de compuestos bioactivos a partir
de fuentes naturales es el hecho de que estas
proveen un suministro limitado. A pesar de
que las microalgas ofrecen ventajas
comparativas en la denominada fase de
descubrimiento de nuevos compuestos de
inters biolgico, la disponibilidad de
procesos estandarizados se ve restringida
(Olaizola, 2003). Se han investigado y
propuesto
diferentes
aproximaciones
fisiolgicas y tecnolgicas para maximizar la
productividad del cultivo masivo de
microalgas (Chaumont, 1993; Grobbelaar,
2000; Richmond 1996; 2000). En este
sentido, los sistemas de produccin de
microalgas han sido clasificados en dos
grandes grupos, i) los sistemas abiertos, los
cuales, son principalmente canales de poca
profundidad tipo pista de carreras en los
que el cultivo est expuesto a la atmsfera y,
ii) los sistemas cerrados (fotobiorreactores y
biorreactores del tipo fermentadores), en los
cuales el contacto con la atmsfera es
limitado o nulo (Contreras-Flores et al.
2003). En el primer caso, biotecnlogos de
microalgas coinciden en el hecho de que el

perfeccionamiento de la tecnologa asociada
a los sistemas de cultivo a cielo abierto lleg
a su lmite. La baja densidad celular obtenida
en
estos
sistemas
origina
varios
inconvenientes que incluyen: la baja
productividad, fcil contaminacin, costosa
recuperacin del producto de medios
diluidos y la dificultad en el control de la
temperatura. Adems de los inconvenientes
asociados a los sistemas de cultivo a cielo
abierto, los fotobiorreactores cerrados
presentan una serie de ventajas que incluyen:
el cultivo en altas densidades, mayor control
de las condiciones y mantenimiento de un
cultivo puro, facilidad para la cosecha y un
menor costo de inversin (Contreras-Flores
et al. 2003). Sin embargo, y a pesar del
consenso entre los biotecnlogos de
microalgas
de
que
la
produccin
fotoautotrfica de metabolitos secundarios
de alto valor industrial requiere del uso de
fotobiorreactores cerrados y de su operacin
exitosa a nivel experimental, su utilizacin a
nivel comercial es escasa y limitada a unas
pocas especies (Olaizola, 2003).
Un aspecto que debe ser considerado en la
produccin microalgal masiva es la
existencia de restricciones en el sistema
costo-productividad de biomasa. En este
sentido, el factor costo de la tierra es
determinante tanto para el establecimiento
de un sistema de produccin microalgal
abierto o cerrado. El costo por este recurso
debe ser bajo por lo que generalmente se
escogen sitios de bajo valor comercial,
econmico y agronmico, tales como: zonas
desrticas, con baja fertilidad natural, tierras
impactadas por la actividad antrpica o
tierras
baldas.
Por
lo
tanto,
independientemente
del
sistema
de
produccin, el costo por este recurso deber
ser bajo. Por otro lado, se conoce que en los
sistemas abiertos existen costos asociados al
establecimiento y operacin (transferencia
de masa y agitacin) que suelen ser ms
79
altos, mientras, que los sistemas cerrados
poseen costos menores aguas abajo, por
alcanzar mayores densidades de cultivo. En
cualquier caso, la consecuencia lgica es que
la productividad volumtrica de biomasa
tanto en los sistemas cerrados como abiertos
debe ser lo suficientemente alta como para
compensar estos costos. Ms all, los
fotobiorreactores parecen ser la va ms
prometedora para el futuro de la produccin
de microalgas a gran escala (para una
revisin ver Olaizola, 2003).
Otros investigadores, por lo contrario,
afirman que las cantidades producidas por
unidad de rea, tanto en fotobiorreactores
como en sistemas abiertos, son comparables.
Lee (2001) reporta que la principal
limitacin del crecimiento de microalgas a
cielo abierto podra no estar en la captura de
la energa lumnica, sino en los pasos para la
conversin del carbono fotosintticamente
fijado en biomasa estructural. Por tanto, el
diseo de fotobiorreactores podra estar
alcanzando su lmite en lo que se refiere a la
reduccin de los costos de produccin. Una
aproximacin propuesta para lograr el
aumento de la productividad es la
combinacin de sistemas de cultivo que
combinen distintas formas de nutricin
(fototrfica, heterotrfica, mixotrfica) de
forma cclica, dependiendo de los productos
especficos que se requieran y de la duracin
de los ciclos de luz y oscuridad. Por ltimo,
Lee (1990; 2001) afirma que el sistema
fotosinttico y el metabolismo postfotosinttico requiere ser modificado
genticamente para vencer la limitacin en la
utilizacin de la energa lumnica para el
crecimiento y formacin de productos.
La utilizacin de las cianobacterias como
factoras celulares para producir metabolitos
secundarios con importantes actividades
biolgicas
tales
como
antibiticos,
vitaminas, aminocidos, enzimas, agentes
antitumorales, osmoprotectores, protenas
heterlogas, entre otros, representa un
especial
inters
para
la
industria
farmacolgica. En este sentido, Olaizola
(2003) describe que el proceso para la
produccin de compuestos bioactivos
contempla al menos dos etapas: 1) la
identificacin de nuevos compuestos, as
como el mejoramiento de los ya
identificados y; 2) desarrollo de sistemas de
produccin adecuados que permitan el
escalamiento a nivel industrial. No obstante,
el autor advierte que aunque las microalgas
poseen una alta productividad primaria,
muchos compuestos qumicos de inters son
producto del metabolismo secundario, este
ltimo activado en condiciones no
conducentes al crecimiento rpido. Este
hecho ha sido corroborado en la obtencin
de pigmentos de inters a partir de A.
platensis (Rojas, comunicacin personal).
Aunado al aumento de la productividad
volumtrica a nivel de fotobiorreactores, el
incremento de la produccin de compuestos
qumicos a partir de microalgas requiere de
la obtencin de nuevas cepas con
caractersticas fisiolgicas y bioqumicas
mejoradas orientadas a incrementar: la
velocidad de crecimiento, la tolerancia al
estrs abitico y el flujo metablico de
productos bioqumicos. Ms all, la ruta
biosinttica asociada a un determinado
compuesto podra ser transferida a un
organismo ms fcilmente cultivable. La
superproduccin de metabolitos secundarios
ha sido abordada habitualmente por
mutagnesis clsica de las cepas de
produccin. Este mtodo, aunque es muy
laborioso, ha sido generalmente muy
efectivo sobre todo para incrementar la
produccin de antibiticos en diversos
hongos filamentosos (Gutirrez et al. 2000).
No obstante, los adelantos biotecnolgicos
proporcionan una va mucho ms racional y
vanguardista para incrementar la eficiencia
de los programas de mejora de cepas a travs
del uso de la ingeniera metablica. Las
tendencias de investigacin ms recientes
80
consideran que para mejorar la produccin
de un determinado compuesto hay que
actuar, no slo sobre la ruta de biosntesis de
dicho compuesto, sino adicionalmente sobre
otras rutas que indirectamente pudieran
afectar la primera, tales como rutas de
secrecin, transporte, regulacin gnica, etc.
(Gutirrez et al. 2000). Unas de las
estrategias ms utilizadas en ingeniera
metablica son: i) el incremento del nmero
de copias de los genes de la ruta biosinttica
de inters y, ii) el incremento de la expresin
de genes mediante el cambio de sus regiones
promotoras por promotores de genes
constitutivos o de genes de expresin fuerte
del metabolismo secundario. Por otro lado, si
se requiere modificar el flujo metablico en
alguna ruta biosinttica con la finalidad de
inducir la acumulacin de algn metabolito
de inters, se procede a la interrupcin
dirigida del gen asociado a su conversin
enzimtica mediante diversas tcnicas
moleculares tales como de recombinacin
simple o doble recombinacin homloga
(Casqueiro et al. 1999b; Liu et al. 2001;
Naranjo et al. 2004; 2005).
En este caso, para incrementar el flujo
metablico hacia la acumulacin de P6C y
biosntesis de cido pipeclico en A.
platensis, se propone la utilizacin de la
tecnologa del ADN recombinante. Se ha
reportado que el cido pipeclico se forma a
partir del metabolismo de lisina en diversos
organismos incluyendo mamferos, plantas,
hongos, levaduras y bacterias. En hongos, el
cido pipeclico se sintetiza va cido aminoadpico a travs de la ruta del aminoadipato (Aspen y Meister, 1962;
Naranjo et al. 2004), mientras que en plantas
el cido pipeclico se sintetiza va
sacaropina, a travs del catabolismo de Llisina (Goncalves-Butruille et al. 1996).
Partiendo del caso de que A. platensis posea
una ruta similar a la del -aminoadipato para
biosintetizar lisina y de que el cido
pipeclico se sintetice va cido -
aminoadpico (Fig. 1), la desviacin del flujo

metablico para la biosntesis de lisina hacia
la acumulacin intracelular de P6C y cido
pipeclico podra llevarse a cabo mediante la
interrupcin dirigida del gen que codifica la
sacaropina reductasa; enzima dependiente de
NADPH que cataliza la conversin de P6C y
glutamato a sacaropina en la ruta del aminoadipato (Johansson et al. 2000a;
2000b; Bhattacharjee, 1985; Naranjo et al.
2001; 2004). Dicha interrupcin gnica
provocara la acumulacin de P6C,
intermediario inmediato anterior a la
sacaropina y precursor directo del cido
pipeclico (Fig. 1). As mismo, el suministro
ajustado de cido -aminoadpico a los
caldos de cultivo podra incrementar la
acumulacin de P6C y de cido pipeclico.
Por otro lado, partiendo del caso de que A.
platensis posea una ruta similar a la del
cido diaminopimlico para biosintetizar
lisina y de que el cido pipeclico se
sintetice va sacaropina, a travs del
catabolismo de L-lisina (Fig. 3), sera
aconsejable incrementar el nmero de copias
de los genes estructurales que codifican la
sacaropina deshidrogenasa, la sacaropina
reductasa o ambos, a la vez que se
suministre concentraciones ajustadas de Llisina o sacaropina a los caldos de cultivo.
Esto se debe a que dichos genes son
responsables de las dos primeras reacciones
enzimticas de la ruta catablica de L-lisina
descrita tanto en plantas como en hongos
filamentosos, donde la L-lisina se cataboliza
en sacaropina y P6C mediante dos
reacciones consecutivas llevadas a cabo por
la sacaropina deshidrogenasa y sacaropina
reductasa, respectivamente. Posteriormente,
el P6C podra reducirse a cido pipeclico
mediante la accin de la pipecolato reductasa
(Fig.1).
En este sentido, Naranjo y Moret (2008),
llevaron a cabo el primer reporte sobre la
identificacin parcial de genes biosintticos
de lisina en cianobacterias. Para ello, se
81
amplific por PCR un fragmento de ADN
interno del gen que codifica hipotticamente
la sacaropina reductasa de la cepa A.
platensis Lefevre 1963/M-132-1 (No.
Acceso GenBank FJ798612) empleando los
oligonucletidos
SR-F
(5GACTTGGTGAT(C/T)TCGCTGAT(C/T)3)
y
SR-R
(5CTCGAACTTGTGCTGGAGCAT-3).
Dichos oligonucletidos se disearon
tomando en cuenta las secuencias
aminoacdicas de hongos y levaduras
depositadas en el GeneBank, tales como:
Penicillium
chrysogenum
(NCBI
CAC87475; 449 aa); Neurospora crassa
(NCBI CAC28679; 448 aa); Magnaporthe
grisea (NCBI AAF91081; 450 aa);
Saccharomyces cerevisiae (NCBI P38999;
446 aa); y Schizosaccharomyces pombe
(NCBI Q09694; 450 aa), y el uso de codones
reportado
para
A.
platensis
(http://www.kazusa.or.jp/codon/cgibin/showcodon.cgi?species=118562).
Los resultados obtenidos revelaron la
existencia de una secuencia nucleotdica de
653 pb (No. Acceso GenBank FJ798613) en
el genoma de A. platensis cepa Lefevre que
muestra un 40% de identidad con los genes
lys7 y lys3 que codifican la sacaropina
reductasa de los hongos Ascomycetes P.
chrysogenum y M. grisea, respectivamente.
As mismo, la bsqueda de secuencias de
ADN homlogas a la clonada en A. platensis
contra genomas de diferentes hongos
depositados en Bases de Datos de acceso
pblico, mostr la existencia de un marco
abierto de lectura con una identidad de 40%
en el genoma de Neurospora crassa (Broad
Institute; ORF; No. Acceso XM_956002)
que codifica una hipottica sacaropina

reductasa. La figura 4 muestra un rbol
filogentico obtenido por MEGA 3.1
(mtodo Neighbour-Joining con Bootstrap
de 2.000 repeticiones y el modelo Jukes
Cantor) basado en el alineamiento mltiple
de secuencias nucleotdicas parciales de los
genes que codifican la sacaropina reductasa
de:
Aspergillus
flavus,
Aspergillus
fumigatus, P. chrysogenum, M. grisea,
Gibberella
zea,
N.
crassa,
Schizosaccharomyces
pombe,
Saccharomyces cerevisiae y la secuencia
obtenida a partir del ADN genmico de la
cepa A. platensis Lefevre. El rbol obtenido
muestra dos grupos claramente definidos
constituidos por las 6 especies de hongos
filamentosos y las 2 especies de levaduras,
los cuales de separan visiblemente entre s y
de A. platensis Lefevre. Tomando en cuenta
que las secuencias de ADN estudiadas
pertenecen a dos tipos celulares radicalmente
diferentes, los hongos y levaduras
(Eucariota) y la cyanobacteria en estudio
(Procariota),
es
de
esperarse
la
discriminacin de estos debido a su evidente
distancia evolutiva. Sin embargo, el
porcentaje de identidad obtenido con los
genes que codifican la sacaropina reductasa
reportada en hongos y levaduras podran
sugerir que: i) el fragmento de ADN clonado
corresponde a una regin interna del gen que
codifica la sacaropina reductasa de A.
platensis y; ii) la existencia de una ruta
similar a la del -aminoadipato descrita en
hongos presente en el genoma de esta
cianobacteria.
82
Figura 4. rbol filogentico de fragmento de ADN clonado de A. platensis Lefevre y secuencias nucleotdicas
internas de los genes que codifican sacaropinas reductasas en diversos hongos y levaduras. Ntese la presencia de 2
grupos bien diferenciados correspondientes a los hongos y las levaduras, separados entre s y de la cianobacteria.
Aspfl: A. flavus, Aspfu: A. fumigatus, Penic: P. chrysogenum, Magna: M. grisea, Gibbe: G. zea, Neuro: N. crassa,
Schiz: S. pombe, Sacch: S. cerevisiae, Arthr: A. platensis Lefevre.
No obstante, se debe tomar en cuenta que en

plantas y animales se ha descrito que el
catabolismo de L-lisina tiene lugar va
sacaropina a travs de dos reacciones
enzimticas consecutivas llevadas a cabo por
la sacaropina deshidrogenasa (SDH) y la
sacaropina reductasa (SR), las cuales son
sintetizadas a partir de un nico gen que
codifica
un
polipptido
bifuncional
(Epelbaum et al. 1997; Tang et al. 2000; Zhu
et al. 2000a, b). As mismo, se ha descrito
que existe una gran similitud entre las
protenas bifuncionales SR/SDH y las
protenas mofuncionales SR y SDH; y que
en las protenas bifuncionales SR/SDH los
dominios SR y SDH se encuentran
localizados en el extremo carboxilo terminal
y en el extremo amino terminal de la
protena, respectivamente (Kemper et al.
1999). En este sentido, el alineamiento de la
protena monofuncional SR de P.
chrysogenum con protenas bifuncionales
SR/SDH de plantas (Zea mays y Arabidopsis
thaliana) y animales (Homo sapiens y Mus
musculus), revel un porcentaje de identidad
considerable con la regin carboxilo

terminal de las protenas bifuncionales
estudiadas
(28,
26,
31
y 31%,
respectivamente) (Naranjo, 2003). Por lo
tanto,
los
resultados
obtenidos
preliminarmente debern confirmarse a
travs de slidos experimentos moleculares
y bioqumicos para determinar si el
fragmento de ADN clonado en A. platensis
corresponde realmente al gen que codifica la
SR monofuncional en la ruta del aminoadpico para la biosntesis de lisina o,
por el contrario, se trata de un gen que
codifica una protena bifuncional SR/SDH
asociada al catabolismo de la lisina, tal como
ocurre en las plantas y animales (GoncalvesButruille et al. 1996).
Por otra parte, desde el punto de vista
productivo, existen ventajas comparativas de
la utilizacin de A. platensis como posible
factora celular para producir P6C, cido
pipeclico u otros metabolitos secundarios
de inters farmacolgico, las cuales se
resumen a continuacin (Olgun, 2003;
Olaizola, 2003; Hallmann, 2007):
83
Fcilmente cultivable y cosechable a
niveles industriales, tanto en sistemas
abiertos como en cerrados,
Ciclo de vida corto, con posibilidad de ser
cultivada axnicamente,
Cultivable en medios de bajo costo
(inclusive aguas residuales),
Alta productividad volumtrica,
Capacidad de acumular compuestos de alto
valor agregado y la fcil extraccin de los
mismos,
Capacidad de crecer a valores de pH
elevados, lo cual aumenta la probabilidad de
mantener los cultivos monoalgales,
Capacidad de algunas cepas de crecer bajo
condiciones heterotrficas y mixotrficas,
Capacidad de soportar altas temperaturas,
Sumidero de gases que acompaan al CO2
en los sistemas tpicos de combustin (en
caso de que sean usados para el cultivo y el
secuestro de carbono), tales como los del
tipo SOx y NOx,
Presenta mltiples usos para la biomasa
una vez extrados los compuestos de inters.
Ha sido ampliamente investigada desde
mltiples puntos de vista (molecular,
bioqumica, fisiolgica y ecolgca).
5. Conclusiones
El inters farmacolgico sobre el estudio del
cido pipeclico radica en el hecho de que
este inminoacido es un componente y
precursor de la biosntesis de una amplia
diversidad de compuestos biolgicamente
activos. En la presente revisin se propone la
utilizacin de A. platensis como posible
factora celular para producir P6C, cido
pipeclico u otros metabolitos secundarios
con interesantes actividades farmacolgicas,
tales
como
antibiticos,
vitaminas,
aminocidos,
enzimas,
agentes
antitumorales, protenas heterlogas, entre
otros, los cuales tendran una aplicacin
importante en el campo de la salud humana y
animal.
Reconocimientos
Este trabajo de investigacin fue financiado
por el Sub-Proyecto BID-FONACIT No.
2006000537 Desarrollo y optimizacin del
cultivo de microalgas promisorias en la
nutricin animal (aves, porcinos, peces y
camarones) y creacin de la Red Venezolana
de Investigacin en Microalgas, Ministerio
del Poder Popular para la Ciencia,
Tecnologa e Industrias Intermedias de
Venezuela. Los autores agradecen a la Lic.
Moret por su apoyo tcnico.
Referencias
Asano, Y., y Ito, T. 2002. Selected abstract from
the 5th Japanese Symposium on the
Chemistry of Biocatlisis. ELSEVIER, J Mol
Catal B-Enzym 18:173-197.
Aspen, A.J., y Meister A. 1962. Conversion of
-aminoadipic acid to L-pipecolic acid by
Aspergillus nidulans. Biochemistry 1:606611.
Baginsky, M.L., y Rodwell, V.W. 1967.
Metabolism of pipecolic acid in a
Pseudomonas species. V. Pipecolate oxidase
and dehydrogenase. J Bacteriol 94(4):10341039.
Bauelos, O., Casqueiro, J., Fierro, F.,
Hijarrubia, M.J., Gutirrez, S., Martn, J.F.
1999a. Characterization and lysine control
expression of the lys1 gene of Penicillium
chrysogenum encoding homocitrate synthase.
Gene 226:51-59.
Becker, E.W. 1994. Microalgae: Biotechnology
and Microbiology. Cambridge University
Press Cambridge, UK.
Belay, A., Ota Y., Miyakawa K. y Shimamatsu
H. 1993. Current knowledge on potential
heath benefits of Spirulina. J Appl Phycol
5:235-241.
Belay, A., Kato, T., Ota, Y. 1996. Spirulina
(Arthrospira): potencial application as an
animal feed supplement. J Appl Phycol
8:303-311.
84
Bhattacharjee, J.K. 1985. -aminoadipate
pathway for the biosynthesis of lysine in
lower eukaryotes. In: Critical Reviews in
Microbiology. CRC Press. Boca Ratn, FL,
vol. 12, pp 131-151.
Chojnacka, K., Chojnacki, A., Grecka, H. 2005.

Biosorption of Cr3+, Cd2+ and Cu2+ ions by
blue-green algae Spirulina sp.: kinetics,
equilibrium and the mechanism of the
process. Chemosphere 59:75-84.
Broquist, H.P. 1971. Lysine

Methods Enzymol 17:112-129.
Ciferri, O. y Tiboni, O. 1985. The biochemistry

and industrial potential of Spirulina. Ann Rev
Microbiol 39:503-26
biosynthesis.
Casqueiro, J., Bauelos, O., Gutirrez, S.,

Hijarrubia, M. J., Martn, J.F. 1999b.
Intrachromosomal
recombination
in
Penicillium chrysogenum: Gene conversion
and deletion events. Mol Gen Genet 261:9941000.
Casqueiro, J., Gutirrez, S., Bauelos, O.,
Hijarrubia, M.J., Martn, J.F. 1999a. Gene
targeting in Penicillium chrysogenum:
disruption of the lys2 gene leads to penicillin
overproduction. J Bacteriol 181:1181-1188.
Casqueiro, J., Bauelos, O., Gutirrez, S.,
Hijarrubia, M. J., Martn, J. F. 1999.
Intrachromosomal recombination between
direct repeats in Penicillium chrysogenum:
gene conversion and deletion events. Mol
Gen Genet 261:994-1000.
Casqueiro, J., Gutirrez, S., Bauelos, O., Fierro,
F., Velasco, J., Martn, J.F. 1998.
Characterization of the lys2 gene of
Penicillium chrysogenum encoding alphaaminoadipic acid reductase. Mol Gen Genet
259(5):549-56.
Casqueiro, J., Gutirrez, S., Bauelos, O.,
Hijarrubia, M.J., Martn, J.F. 1999. Gene
targeting in Penicillium chrysogenum:
disruption of the lys2 gene leads to penicillin
overproduction. J Bacteriol 181(4):1181-8.
Chang, Y.F., Ghosh, P., Rao, V.V. 1990. Lpipecolic acid metabolism in human liver: L-aminoadipate--semialdehyde
oxidoreductase. Biochim Biophys Acta 8;
1038(3):300-305.
Cheng, Y.R., Fang, A., Demain, A.L. 1995.
Effect of amino acids on rapamycin
biosynthesis by Streptomyces hygroscopicus.
Appl Microbiol Biotechnol 43(6):1096-8.
Chisti, Y. 2007 Biodiesel from microalgae.
Biotechnol Adv 25:294-306.
Ciferri, O. 1983. Spirulina, The edible

microorganism. Microbiol Rev 47:551-78
Colla, L.M., Oliveira, C., Reichert, C., Vieira,
J.A. 2007. Production of biomass and
nutraceutical compounds by Spirulina
platensis under diferent temperature and
nitrogen regimes. Bioresource Technol
98:1489-1493.
Contreras-Flores, C., Pea-Castro, J.M., FloresCotera L.B., y Caizares-Villanueva, R.O.
2003. Avances en el Diseo Conceptual de
Fotobiorreactores para el cultivo de
microalgas. Interciencia. 8(8):450-456.
Croteau, R., Kutchan, T., Lewis, N. 2003.
Natural Products (Secondary Metabolites).
American Society of Plant Biologist, Chapter
24. [On line]
http://www.aspb.org/publications/biotext/intr
os/ch24.cfm
de Morais, M.G. y Costa, J.A.V. 2007.
Biofixation of carbon dioxide by Spirulina sp.
and Scenedesmus obliquus cultivated in a
three-stage serial tubular photobioreactor. J
Biotechnol 129:439-445
Dennis, J.W. 1986. Effects of swainsonine and
polyinosinic: polycytidylic acid on murine
tumor cell growth and metastasis. Cancer Res
46(10):5131-6.
Dennis, J.W., Koch, K., Yousefi, S., y
VanderElst, I. 1990. Growth inhibition of
human melanoma tumor xenografts in
athymic nude mice by swainsonine. Cancer
Res 50(6):1867-72.
Dodt, G., Kim, D.G., Reimann, S.A., Reuber, B.,
MacCabe, K., Gould, S., Mihalik, S. 2000. Lpipecolic acid oxidase, a human enzyme
essential for the degradation of L-pipecolic
85
acid, is most similar to the monomeric
sarcosine oxidases. Biochem J 345:487-494.
Doekel, S., y Marahiel, M.A. 2001. Biosntesis
of natural products on modular peptide
synthetases. Review. Metab Eng 3:64-77.
Fangmeier, N., y Leistner, E. 1980. A 15N NMR
study on D-lysine metabolism in Neurospora
crassa. J Biol Chem 255:10205-10209.
Fujii, T., Aritoku, Y., Agematu, H., Tsunekawa,
H. 2002b. Increase in the rate of L-pipecolic
acid
production
using
lat-expressing
Escherichia coli by lysP and yeiE
ampification. Biosci Biotechno. Biochem
66(9):1981-1984.
Fujii, T., Mukaihara, M., Agematu, H., y
Tsunekawa, H. 2002. Biotransformation of Llysine to L-pipecolic acid catalyzed by Llysine 6-aminotransferase and pyrroline-5carboxylate reductase. Biosci Biotechnol
Biochem 66:622-627.
Fujii, T., Narita, T., Agematu, H., Agata, N.,
Isshiki, K. 2000. Cloning and characterization
of pcd encoding delta-piperideine-6carboxylate
dehydrogenase
from
Flavobacterium lutescens IFO3084. J
Biochem (Tokyo) 128(6):975-82.
Fujioka, S., Sakuri, A., Yamaguchi, I.,
Murofushi, N., Takahashi, N., Kaihara, S.,
Takimoto,
A.
1987.
Isolation
and
identification of L-pipecolic acid and
nicotinamide as flower-inducing substances
in Lemna. Plant Cell Physiol 28:995-1003.
Fujita, T., Hada, T., y Higashino, K. 1999.
Origin of D- and L-pipecolic acid in human
physiological fluids: a study of the catabolic
mechanism to pipecolic acid using the lysine
loading test. Clin Chim Acta 287:145-156.
Galili, G. 1995. Regulation of lysine and
threonine sntesis. Plant Cell 7:899-906.
Garrad, R.C. y Bhattacharjee, J.K. 1992. Lysine
biosynthesis in selected pathogenic fungi:
characterization of lysine auxotrophs and the
cloned LYS1 gene of Candida albicans. J
Bacteriol 174:7379-7384.
Glass, J. y
Biosynthesis
Bhattacharjee,
of lysine in
J.K. 1971.
Rhodotorula:
accumulation of homocitric, homoaconitic

and homosicitric acids in a leaky mutant.
Genetics 67:356.
Grobbelaar, J.U. 2000. Physiological and
technological considerations for optimizing
mass algal cultures. J Appl Phycol 12:201206.
Goncalves-Butruille, M., Szajner, P., Torigoi, E.,
Leite, A., Arruda, P. 1996. Purification and
characterization of the bifunctional lysineketoglutarate
reductase-saccharopine
dehydrogenase from maize. Plant Physiol
110:765-771.
Gong, R., Ding, Y., Liu, H., Chen, Q., Liu, Z.
2005. Lead biosorption and desorption by
intact and pretreated Spirulina maxima
biomass. Chemosphere 58:125-13.
Goss, P.E., Baker, M.A., Carver, J.P, Dennis,
J.W. 1995. Inhibitors of carbohydrate
processing: a new class of anticancer agents.
Clin Cancer Res 1(19):935-44.
Gouesbet, G. Jebbar, M., Talibart, R., Bernard,
T., Blanco C. 1994. Pipecolic acid is an
osmoprotectan for Escherichia coli taken up
by the general osmoporters ProU and ProP.
Microbiology 140(Pt9):2415-22.
Gouffi, K., Bernard T., Blanco C. 2000.
Osmoprotection by pipecolic acid in
Sinorhizobium meliloti: specific effects of D
and L isomers. Appl Environ Microbiol
66(6):2358-64.
Guengerich, F.P., y Broquist, H.P. 1973.
Biosynthesis of slaframine (1S,6S,8aS)-1acetoxy-6-aminooctahydroindolizine, a parasympathomimetic alkaloid of fungal origin.
II. The origin of pipecolic acid. Biochemistry
12:4270-4274.
Gutirrez S., Casqueiro J., Martn, J.F. 2000.
Filamentous fungi as cellular factories:
Biodiversity of secondary metabolites. Rev
Iberoam Micol 17(1):54-60.
Hartline, R.A., y Rodwell, V.W. 1971.
Metabolism of pipecolic acid in a
Pseudomonas especies. VI. Precursors of
glutamate. Arch Biochem Biophys 142(1):3239.
86
Henrikson, R. 1989. Earth food Spirulina, Cited
from Recolina Ltd., Ronore Enterprises Inc.,
Launa Beach, California, pp. 27-65.
Higuchi, K., Suzuki, T., y Ashihara, H. 1995.
Pipecolic acid from the developing fruits
(pericarp and seeds) of Coffea arabica and
Camellia
sinensis.
16th
Colloquium.
Association Scientifique Internacionale du
caf. ASIC Conference. Kyoto.
Hijarrubia, M.J., Aparicio, J.F., Casqueiro, J.,
Martn, J.F. 2001. Characterization of the
lys2 gene of Acremonium chrysogenum
encoding a functional alpha-aminoadipate
activating and reducing enzyme. Mol Gen
Genet 264(6):755-62.
Humphries, P. 1986. Polymorphic DNA markers
genetically linked to disease-causing genes: a
review. Ir. J Med Sci 155(12): 425-30.
IJlst, L., Kromme, I., Oostheim, W., Wanders,
R.J. 2000. Molecular Cloning and Expression
of Human L-Pipecolate Oxidase. Biochem
Bioph Res Co 270:1101-1105.
Izaddoost, M., Harris, B.G., Gracy, R.W. 1976.
Structure and toxicity of alkaloids and amino
acids of Sophora secundiflora. J Pharm Sci
65(3):352-4.
Jaime, B., Artiles, A.M., Galindo, J., Fraga, I.
1996: Evaluacin de alimentos microparticulados en el cultivo larval de Penaeus
schmitti. Rev. Cub Invest Pesq 20(2):22-24.
Jaramillo, M.C. 2000. Accin Leishmanicida in
vitro de la cscara del fruto de Annona
muricara y aislamiento y caracterizacin de
compuestos activos de hoja de Annona
muricata y Momordica charantia. Grupo de
Investigacin en Sustancias Bioactivas
(GISB). Trabajo Especial de Grado de
Maestra en Qumica. [En Internet]
http://investigacion.udea.edu.co/gru/consolida
dos/sustan_bioactivas9900.htm
Johansson, E., Steffens, J.J., Emptage, M.,
Lindqvist, Y., Schneider, G. 2000a. Cloning,
expression, purification and cristalization of
saccharopine reductase from Magnaporthe
grisea. Acta Crystallogr. D. Biol Crystallogr
56:662-664.
Johansson, E., Steffens, J.J., Lindquist, Y.,

Schneider, G. 2000b. Crystal structure of
saccharopine reductase from Magnaporthe
grisea, an enzyme of the alpha-aminoadipate
pathway of lysine biosynthesis. Struct Fold
Des 8:1037-1047.
Juantorena, A.U., Sebastian, P.J., Santoyo, E.,
Gamboa, S.A., Lastres, O.D., SnchezEscamilla, D., Bustos, A., Eapen, D. 2007.
Hydrogen production employing Spirulina
maxima 2342: A chemical analysis. Int J
Hydrogen Energ 32:3133-3136.
Khaw, L. E., Bhm, G. A.,. Metcalfe, S.,
Staunton, J., Leadlay, P. F. 1998. Mutational
Biosynthesis of Novel Rapamycins by a
Strain of Streptomyces hygroscopicus NRRL
5491 Disrupted in rapL, Encoding a Putative
Lysine Cyclodeaminase. J Bacteriol 180:809814
Kinzel, J. J., y Bhattacharjee, J. K. 1979. Role of
Pipecolic Acid in the Biosynthesis of Lysine
in Rhodotorula glutinis. Bacteriol 138:410417.
Kinzel, J. J., y Bhattacharjee, J. K. 1982. Lysine
biosynthesis in Rhodotorula glutinis:
properties of pipecolic acid oxidase. J
Bacteriol 151:1073-1077.
Kramar, R., Kremser, K., Schon, H. 1989.
Peroxisomal oxidation of pipecolic acid in the
rat. J Clin Chem Clin Biochem 27(5):319321.
Kurtz, M., y Bhattacharjee, J.K. 1975.
Biosynthesis of lysine in Rhodotorula
glutinis: role of pipecolic acid. J Gen
Microbiol 86:103-110.
Leisinger, T. 1987. Biosynthesis of proline.
Neidhardt, F.C., Ingraham, J.L. Low, K.B.,
Magasanic, B., Schaechter, M., y Umbarger,
H.E. Escherichia coli and Salmonella
typhimurium: cellular and moleculae biology.
In: American Society for Microbiology.
Washington, DC. pp.345-351.
Lejohn, H.B. 1971. Enzyme regulation, lysine
pathways, and cell structures as indicators of
major lines of evolution in fungi. Nature 231
(5299):164-168.
87
Leung, S.O., Yeung, H.W., Leung, K.N. 1987.
The immunosuppressive activities of two
abortifacient proteins isolated from the seeds
of Bitter Melon (Momordica charanti).
Immunopharmacology 13:159-71.
Mihalik, S.J., Moser, H.W., Watkins, P.A.,

Danks, D.M., Poulos, A., Rhead, W.J. 1989.
Peroxisomal L-pipecolic acid oxidation is
deficient in liver from Zellweger syndrome
patients. Pediatric Res 25(5):548-552.
Li, C.J., Brownson, D.M., Mabry, T.J., Perera,

C., Bell, E.A. 1996. Nonprotein amino acids
from sedes of Cycas circinalis and Phaseolus
vulgaris. Phytochemistry 42: 443-445.
Mohn, F.N. 1988. Harvesting of micro-algal

biomass. In: Borowitzka M.A. and
Borowitzka
L.J.
(Eds.),
Micro-Algal
Biotechnology. Cambridge University Press,
Cambridge, 395 p.
Lipok, J., Owsiak, T., Mynarz, P., Forlani, G.,

Kafarski, P. 2007. Phosphorus NMR as a tool
to
study
mineralization
of
organophosphonatesThe
ability
of
Spirulina spp. to degrade glyphosate. Enzyme
Microb Tech 41:286-291.
Lodi, A., Soletto, D., Solisio, C., Converti, A.
2007. Chromium(III) removal by Spirulina
platensis biomass. Chem Eng J 136(2-3):152155.
Marlier, M., Dardenne, G., Casimir, J. 1979.
2S, 4R-carboxy-2-acetylamino-4-piperidin in
the leaves of Calliandra haematocephala.
Phytochemistry 18:479-481.
Mrquez F.J., Nishio N., Nagai S. 1995.
Enhancement of biomass and pigment
production during growth of Spirulina
platensis in mixotrophic culture. J Chem Tech
Biotechnol 62:159-164.
Mrquez F.J., Sasaqui K., Kakizono T., Nishio
N., Nagai S. 1993. Growth characteristics of
Spirulina platensis in mixotrophic and
heterotrophic conditions. J Ferment Bioengng
75:408-410.
Mihalik, S.J. y Rhead, W.J. 1989. L-pipecolic
acid oxidation in the rabbit and cynomolgus
monkey. Evidence for differing organellar
locations and cofactor requirements in each
species. J Biol Chem 264(5):2509-2517.
Mihalik, S.J., McGuiness, M., Watkins, P.A.
1991. Purification and characterization of
perixosomal L-pipecolic acid oxidase from
monkey liver. J Biol Chem 266:4822-4830.
Mihalik, S.J. y Rhead, W.J. 1991. Species
variation in organellar location and activity of
L-pipecolic acid oxidation in mammals. J.
Comp Physiol B 160(6):671-676.
Molnar, I., Aparicio, J.F., Haydock, S.F., Khaw,

L.E., Schwecke, T., Konig, A., Staunton, J.,
Leadlay, P.F. 1996. Organisation of the
biosynthetic gene cluster for rapamycin in
Streptomyces hygroscopicus: analysis of
genes flanking the polyketide synthase. Gene
169(1): 1-7.
Mosulishvili,
L.M.,
Kirkesali,
E.I.,
Belokobylsky, A.I., Khizanishvili, A.I.,
Frontasyeva, M.V., Pavlov, S.S., Gundorina,
S.F. 2002. Experimental substantiation of the
possibility of developing selenium- and
iodine-containing pharmaceuticals based on
blue-green algae Spirulina platensis. J
Pharmaceut Biomed 30:87-97.
Motamedi, H. y Shafiee, A. 1998. The
biosynthetic gene cluster for the macrolactone
ring of the immunosuppressant FK506. Eur. J
Biochem 256:528-534
Naranjo, L., Martin de Valmaseda, E., Bauelos,
O., Lpez, P., Riao, J., Casqueiro, J., 2001.
Conversion of pipecolic acid into lysine in
Penicillium chrysogenum requires pipecolate
oxidase
and
saccharopine
reductase:
characterization of the lys7 gene encoding
saccharopine
reductase.
J
Bacteriol
183(24):7165-72.
Naranjo, L., Martn de Valmaseda, E.,
Casqueiro, J., Ulln, R.V., Lamas-Maceiras,
M. 2004. Inactivation of the lys7 gene,
encoding
saccharopine
reductase
in
Penicillium
chrysogenum,
leads
to
accumulation of the secondary metabolite
precursors piperideine-6-carboxylic acid and
pipecolic acid from alpha-aminoadipic acid.
Appl Environ Microbiol 70(2):1031-9.
88
Naranjo, L.; Lamas-Maceiras, M., Ulln, R.V.,
Campoy, S., Teijeira, F., Casqueiro J.,
Martn, J.F. 2005. Characterization and
expression studies of the oat1 gene of
Penicillium chrysogenum encoding an
omega-aminotransferase: Induction by Llysine, L-ornithine and L-arginine and
repression by ammonium. Mol Genet
Genomics 274(3):283-94.
Naranjo, L., y Moret, J. 2008. Informe del SubProyecto de Biotecnologa N: 2006000537
Desarrollo y optimizacin del cultivo de
microalgas promisorias en la nutricin animal
(Aves, Porcinos, peces y Camarones) y
creacin de la "Red Biotecnolgica
Venezolana de Investigacin en Microalgas.
Componente Investigacin y Desarrollo,
Objetivo No. 9. Segundo Programa de
Ciencia y Tecnologa Fortalecimiento del
Sector Biotecnolgico como apoyo a la
Seguridad Alimentara del Pas Unidad
Especial de Biotecnologa (BID-FONACIT
II).
Naranjo, L. 2003. "Caracterizacin Bioqumica y
Molecular del Metabolismo del cido
Pipeclico en Penicillium chrysogenum".
Trabajo especial para optar al ttulo de doctor.
Departamento de Bioqumica y Biologa
Molecular. Facultad de Ciencias Biolgicas y
Ambientales. Universidad de Len. Espaa.
Nielsen, J.B., Hsu, M.J., Byrne, K.M., Kaplan,
L.
1991.
Biosynthesis
of
the
immunosuppressant immunomycin: The
enzymology of pipecolate incorporation.
Biochemistry 30:5789-5796.
Norton, B.W. 2002. Anti-nutritive and toxic
factors in forage tree legumes. In: R.C.
Gutteridge & H.M. Shelton (eds.) Forage
Tree Legumes in Tropical Agriculture
Chapter
4.3.
[En
Internet]
http://fao.org/ag/AGP/AGPC/doc/Publicat/Gu
tt-shel/x5556e01.htm
Olaizola, M. 2003. Commercial development of
microalgal biotechnology: from the test tube
to the marketplace. Biomol Eng 20:459-466
Olgun, E.J. 2000. The cleaner production
strategy applied to animal production. In:
Olgun E.J., Snchez G. and Hernndez E.
(eds), Environmental Biotechnology and

Cleaner Bioprocesses. Taylor and Francis,
London, pp. 227-243.
Olgun, E.J., Galicia, S., Anglo-Guerrero, O.,
Hernndez, E. 2001. The effect of low light
flux and nitrogen deficiency on the chemical
composition of Spirulina sp. (Arthrospira)
grown on pig waste. Bioresour Technol
77:19-24.
Olgun, E.J., Galicia, S., Camacho, R., Mercado,
G., Prez, T.J. 1997. Production of Spirulina
sp. in seawater supplemented with anaerobic
effluents in outdoor raceways under
temperate climatic conditions. Appl Microbiol
Olgun, E.J., Galicia, S., Mercado, G., Prez, T.
2003. Annual productivity of Spirulina
(Arthrospira) and nutrient removal in a pig
wastewater recycling process under tropical
conditions. J Appl Phycol 15:249-257, 2003.
Pane, L., Solisio, C., Lodi, A., Luigi, Mariottini,
G., Converti, A. 2008. Effect of extracts from
Spirulina platensis bioaccumulating cadmium
and zinc on L929 cells. Ecotoxicol Environm
Safety 70(1):121-6
Paiva, N.L., Demain, A.L. y Roberts, M.F. 1993.
The cyclohexene moiety of rapamycin is
derived from shikimic acid in Streptomyces
hygroscopicus. J Indust Microbiol 12:423428
Payton, C.W. y Chang, Y.F. 1982. piperideine-2-carboxylate
reductase
of
Pseudomonas putida. J Bacteriol 149:864871.
Ramirez-Moreno, L., y Olvera Ramrez, R.
2006. Uso tradicional y actual de Spirulina
sp. (Arthrospira sp). Interciencia 31:657-663.
Rao, V. V., Chang, Y. F. 1990a. L-Pipecolic acid
metabolism in human liver: detection of Lpipecolic oxidase and identification of its
reaction product. Biochim Biophys Acta 1038:
295-299.
Rao, V., and Y. F. Chang. 1990b. L-pipecolic
acid metabolism in human liver: L-alphaaminoadipate
delta-semialdehyde
89
oxidoreductase.
1038:300-305.
Biochim
Biophys
Acta
Calliandra leaves, pods and seeds.

ELSEVIER. Anim Feed Sci Tech 77:181-199.
Rao, V.V., Tsai, M.J., Xiaoming, P., Chang, Y.F.

1993. L-pipecolic acid oxidation in rat:
subcellular localization and developmental
study. Biochim Biophys Acta 1164: 29-35.
Snchez, M., Bernal, J., Rozo, C., Rodrguez, I.

2006. Spirulina (Arthrospira): an edible
microorganism. A Review. Univ Sci 8(1).
Reuber, B.E., Karl, C., Reimann, S.A. Mihalik,

S.J., y Dodt, G. 1997. Cloning and functional
expression of a mammalian gene for a
peroxisomal sarcosine oxidase. J Biol Chem
272:6766-6776.
Reynolds, K.A., y Demain, A.L. 1997.
Rapamycin, FK506, and ascomycin-related
compounds, pp. 497-520. In: Biotechnology
of Antibiotics. Strohl, W.R. (Ed.). Marcel
Dekker Inc, NY.
Richmond, A. 1986. Handbook of Microalgal
Mass Culture. CRC, Boca Raton: 528 pp.
Richmond, A. 1996. Efficient utilization of high
irradiance for production of photoautotropic
cell mass: A survey. J Appl PhycoL 8:381387.
Richmond, A. 2000. Microalgal biotechnology at
the turn of the millennium: A personal view.
J Appl Phycol 12:441-451.
Romeo, J.T. 1984. Insecticidal amino acids in
the leaves of Calliandra. Biochem Syst Ecol
12:293-297.
Romeo, J.T. 1988. Functional multiplicity
among nonprotein amino acids in Mimosoid
legumes: a case against redundancy.
Ecoscience 5(3). J. McNeil (Ed.) En Internet:
(http://www.bio.ulaval.ca/ecoscience/ARTIC
LE_ENG/vol5n3.htm).
Rosenthal, G.A. 1982. Plant nonprotein amino
acids.
Biological,
Biochemical
and
Toxicological Properties. Academic Press,
New York.
Rothstein, M. y Saffran, E.M. 1963. Lysine
biosynthesis in algae. Arch Biochem Biophys
101:373.
Salawu, M. B., Acamovic, T., Stewart, C. S. and
Roothaert, R. L. 1999. Composition and
degradability of different fractions of
Schwecke, T., Aparicio, J.F., Molnar, I., Knig,

A., Khaw, L.E., Haydock, S.F., Oliynyk, M.,
Caffrey, P., Cortes, J., Lester, J.B. 1995. The
biosynthetic gene cluster for the polyketide
immunosuppressant rapamycin. Proc Natl
Acad Sci 92:7839-7843.
Sim, K.L., & Perry, D. 1997. Analysis of
swainsonine and its early metabolic
precursors in cultures of Metarhizium
anisopliae. Glycoconjugate J. 14:661-668.
Singh, H., Usher, S., Poulos, A. 1989.
Dihydroxyacetone phosphate acyltransferase
and
alkyldihydroxyacetone
phosphate
synthase activities in rat liver subcellular
fractions and human skin fibroblasts. Arch
Biochem Biophys 268(2):676-686.
Singh, S., Kate, B.N., Banerjee, U.C. 2005.
Bioactive compounds from cyanobacteria and
microalgae: an overview. Crit Rev Biotechnol
25:73-95.
Spolaore, P., Joannis-Cassan, C., Duran, E.,
Isambert, A. 2006. Commercial applications
of microalgae. J Biosci Bioeng 101:87-96.
Stafford, D.E., y Stephanopoulos, G., 2001.
Metabolic engineering as an integrating
platform for strain development. Curr Opin
Microbiol 4(3):336-340.
Stewart, G. R., & F. Larher. 1980. Accumulation
of amino acids and related compounds in
relation to enviromental stress. In: B.J. Miflin
(ed.) The Biochemistry of plants, vol. 5.
Academic Press, New York. p. 609-635.
Stinson,
S.
2000.
Chiral
Drugs.
Science/Technology. Cover Story. American
Chemical Society. Vol. 78, No. 43. pp.55-78.
[En Internet]
http://pubs.acs.org/cen/coverstory/7843/7843
scit1.html
Subhashini, J., Mahipal, S. V. K., Reddy, M. C.,
Mallikarjuna Reddy, M., Rachamallu, A.,
Reddanna, P. 2009. Molecular mechanisms in
90
C-Phycocyanin induced apoptosis in human
chronic myeloid leukemia cell line-K562.
Biochem Pharmacol 68:453-462.
pipecolate oxidase in human liver and its

deficiency in the Zellweger syndrome.
Biochem Biophys Res Commun 154(1): 33-8.
Tang, G., Zhu, X., Tang, X., Galili, G. 2000. A

novel composite locus of Arabidopsis
encoding
two
polypeptides
with
metabolically related but distinct functions in
lysine catabolism. Plant J 23(2):195-203.
Wanders, R.J., Romeyn, G.J., Schutgens, R.B.,

Tager, J.M. 1989. L-pipecolate oxidase: a
distinct peroxisomal enzyme in man.
Biochem Biophys Res Commun 164(1):550555.
Teves, F., Lamas-Maceiras, M., Garca-Estrada,

C., Casqueiro, J., Naranjo, L., Ulln, R.V.,
Scervino, J.M., Wu, X., Velasco-Conde, T.,
Martn, J.F. 2009. Transcriptional upregulation of four genes of the lysine
biosynthetic pathway by homocitrate
accumulation in Penicillium chrysogenum:
homocitrate as a sensor system of the
pathway distress. Microbiology 155(pt
12):3881-92.
Weidner, G., Stefan, B., Brakhage, A.A. 1997.

The Aspergillus nidulans lysF gene encodes
homoaconitase an enzyme involved in the
fungus-specific lysine biosynthesis pathway.
Mol Gen Genet 355:237-247.
Thajuddin, N., y Subramanian, G. 2005.

Cyanobacterial biodiversity and potential
applications in biotechnology. Curr Sci
89:47-57.
Thayer, A. 2008. Optimism Prevails In Fine
Chemicals. Chemical & Engineering News.
American Chemical Society. January 28,
2008, Volume 86, Number 04, pp. 31-36.
[En Internet]
http://pubs.acs.org/cen/coverstory/86/8604co
ver3.html
Utsukihara, T., Okada, S., Kato, N., Horiuchi,
C.A. 2007. Biotransformation of -bromo and
, -dibromo alkanone to -hydroxyketone
and -diketone by Spirulina platensis. J Mol
Catal B-Enzym 45:68-72.
Vogel, H. J. 1960. Two models of lysine
synthesis among lower fungi: evolutionary
significance. Biochim Biophys Acta 41:172.
Wanders, R.J., Romeyn, G.J., van Roermund,
C.W., Schutgens, R.B., van den Bosch, H.,
Tager, J.M. 1988. Identification of L-
Wickwire, B.M., Harris, C.M., Harris, T.M.,

Broquist, H.P. 1990a. Pipecolic acid
biosynthesis in Rhizoctonia leguminicola; I.
The lysine, saccharopine 1-piperideine-6carboxylic acid pathway. J Biol Chem 265:
14742-14747.
Wickwire, B.M., Wagner, C., Broquist H.P.
1990b. Pipecolic acid biosynthesis in
Rhizoctonia leguminicola. II. Saccharopine
oxidase: a unique flavine enzyme involved in
pipecolic acid biosynthesis. J Biol Chem 265:
14748-14753.
Zhu, X., Tang, G., Galili, G. 2000a.
Characterization of the two saccharopine
dehydrogenase isozymes of lysine catabolism
encoded
by
the
single
composite
AtLKR/SDH locus of Arabidopsis. Plant
Physiol 124:1363-1372.
Zhu, X., Tang, G., Galili, G. 2000b. The
catabolic function of the alpha-aminoadipic
acid pathway in plants is associated with
unidirectional activity of lysine-oxoglutarate
reductase,
but
not
saccharopine
dehydrogenase. Biochem J 351(pt1):215-20.
Loera-Quezada y Olgun, 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):91-116
91
Revisin crtica
Las microalgas oleaginosas como fuente de biodiesel:

retos y oportunidades
Maribel M. Loera-Quezada y Eugenia J. Olgun*
Red de Manejo Biotecnolgico de Recursos. Instituto de Ecologa, A.C. (INECOL) Km. 2.5 Carretera
Antigua a Coatepec No. 351, Congregacin El Haya. Xalapa, Veracruz 91070, Mxico.
*
Autor de correspondencia: eugenia.olguin@inecol.edu.mx
Resumen
La presente revisin proporciona informacin actualizada con relacin a los principales retos
cientfico-tecnolgicos que se deben enfrentar y resolver para lograr producir biodiesel a partir de
microalgas a un costo competitivo. Se discute el entorno ambiental que ha generado la necesidad
de este tipo de producto, haciendo nfasis en el cambio climtico, los gases efecto invernadero
(GEI) y la produccin de Bioenergticos. Se detallan las ventajas que ofrece la produccin de
biodiesel a partir de microalgas, tales como: a) Las microalgas tienen un rendimiento de aceite
mucho mayor que cualquier cultivo convencional; b) Slo este bioenergtico tiene una verdadera
huella ecolgica pequea; c) En contraste con otros bioenergticos, se requiere una superficie
muy pequea para cubrir la demanda actual de diesel de petrleo; d) Las microalgas oleaginosas
pueden ser cultivadas en agua de mar, en agua salobre o en aguas residuales, disminuyendo as la
presin sobre el agua dulce requerida para la produccin de alimentos; e) Las microalgas son
excelentes captadoras de CO2 ; f) Con relacin a la emisin de gases invernadero, es de los
bioenergticos que muestran un valor negativo. Sin embargo, la tecnologa para la produccin de
biodiesel a partir de microalgas, an enfrenta grandes retos para lograr una produccin a escala
comercial y de manera rentable. Entre los ms importantes destacan: a) seleccin de cepas con
mayores productividades de biomasa y de lpidos, mejores perfiles de lpidos y mejor
adaptabilidad a condiciones de cultivo a gran escala, b) estrategias de cultivo muy efectivas para
lograr el mximo posible de productividad de lpidos y de biomasa al menor costo. Entre dichas
estrategias, destacan el uso de condiciones de estrs fisiolgico y el uso de aguas residuales para
reemplazar agua destinada al uso agrcola; c) seleccin del tipo de reactor o de una combinacin
de ellos para lograr mxima produccin de biomasa al mnimo costo y d) optimizacin de los
mtodos actualmente disponibles para extraccin de lpidos y transesterificacin de cidos grasos
para disminuir sus altos costos e impactos ambientales negativos. Se concluye que existen
diversas oportunidades en cada uno de los retos a vencer y que se deben combinar el
conocimiento cientfico ms avanzado con las actividades y capacidades empresariales que estn
emergiendo en busca de procesos competitivos. Las ventajas de este bioenrgetico de segunda
generacin y el escenario actual de precios del petrleo al alza, sugieren proyecciones optimistas
para lograr avances en el corto y mediano plazo que permitan producirlo a un costo competitivo.
Palabras clave: bioenergticos, cambio climtico,
triacilglicridos, fotobioreactores, lagunas abiertas.
microalgas
oleaginosas,
lpidos,
92
Abstract
This review provides current information regarding the scientific and technological challenges to
be addressed and solved in order to enhance the cost-effectiveness of the integral process for
producing biodiesel from microalgae. Global warming, greenhouse gases and production of
bioenergy are discussed primarily to provide a general framework. Several advantages of
microalgae compared to other sources of biodiesel are also discussed: a) microalgae produce a
significantly higher yield of lipids, compared to conventional crops for biodiesel production; b)
this bioenergy source shows the smallest ecological print; c) a smaller territorial surface is
required for fulfilling the current diesel from petrol demand, compared to the land surface
required by other bioenergy sources; d) microalgae can be cultivated either in sea water, brackish
water or wastewater, avoiding the pressure of the use of fresh water for food production; e)
microalgae perform excellent at CO2 capture; f) biodiesel from microalgae shows a negative
release of greenhouse gases. However, despite all the advantages shown by microalgae to
produce biodiesel, there are still several scientific and technological challenges to solve before
large scale production at competitive cost can be accomplished. Among the more important are:
a) selection of the best performing strains, concerning the highest biomass productivity and
highest oil yield, the best lipid profile and the best adaptability to large scale production; b) to
design very effective culture strategies to achieve high biomass and lipid productivity at a
competitive cost. Among the most important culture strategies, research on induction of higher
lipid content by physiological stress and successful cultivation in wastewater, is still full of
opportunities; d) selection of the best performing reactor design or a combination of various
types, in order to accomplish the highest biomass and lipid productivity at a minimum cost and e)
optimization of currently available processes for lipid extraction and transesterification of fatty
acids to decrease their high costs and negative environmental impacts. It is concluded that there
are several opportunities in each of the challenges to confront and a combination of scientific
knowledge and entrepreneur skills are required for the design of competitive processes. The
several advantages that this second generation bioenergy source possess and the international
scenario of fossil oil prices rising once again, suggest optimistic projections for achieving
production of biodiesel from microalgae at competitive prices in the medium and long term.
Keywords: Bioenergy sources, global warming, oleaginous microalgae, lipids, triacylglicerides,
photobioreactors, raceways, open ponds.
1. Introduccin
Indudablemente, el cambio climtico es uno
de los grandes desafos del siglo XXI ya que
sus impactos son globales y cada vez ms
severos, afectando la estabilidad econmica
y social del planeta, adems de la ambiental.
Entre los efectos ms graves destacan los
aumentos observados del promedio mundial
de la temperatura del aire y del ocano, el
deshielo generalizado de glaciares, las
modificaciones en los patrones de preci-
pitacin, los cambios en la intensidad o

frecuencia de eventos climticos extremos y
el aumento del promedio mundial del nivel
del mar, entre otros. Desde hace dcadas, se
conoce la estrecha relacin entre el aumento
continuo de emisiones de gases de efecto
invernadero (GEI) y el cambio global (IPCC,
2007).
Como respuesta a esta problemtica del
cambio global en los ltimos aos, las
polticas ambientales han favorecido un
incremento en el uso de biocombustibles a
93
nivel mundial, principalmente para sustituir
los combustibles fsiles utilizados en el
transporte vehicular. Estos nuevos desarrollos tecnolgicos, estn recibiendo atencin
y apoyo debido tanto a la preocupacin por
la disminucin de las reservas mundiales del
petrleo, as como a un esfuerzo para mitigar
las emisiones de los GEI. La tendencia
mundial es reducir al mximo el uso de
combustibles fsiles y reemplazarlos con
biocombustibles que sean renovables, no
contaminantes
y
carbono
neutrales.
Actualmente, los biocombustibles en los que
se ha invertido ms esfuerzo son el etanol a
partir de caa de azcar y del maz y el
biodiesel a partir de aceite de soya, canola,
girasol, palma de aceite. Sin embargo, la
sustentabilidad de la produccin de estos
biocombustibles se ha visto fuertemente
cuestionada, principalmente porque la gran
demanda de ellos requiere la conversin del
uso del bosques o reas naturales en
superficies agrcolas o incluso el uso de
superficies actualmente utilizadas para
produccin de alimentos (Majer et al.,
2009).
Para lograr una sustentabilidad econmica y
ambiental, se requiere que el proceso de
produccin de biocombustibles no slo sea
renovable, sino que tambin contribuya al
secuestro de CO2 atmosfrico (Schenk et al.,
2008).
Las
microalgas
oleaginosas,
consideradas
como
fuente
de
biocombustibles de segunda generacin,
contribuyen de manera importante a la
fijacin de CO2 y pueden ser utilizadas para
producir
una
amplia
gama
de
biocombustibles, tales como el biodiesel,
bioetanol, biometano y biohidrgeno,
adems de que producen metabolitos
secundarios con aplicacin en la industria
farmacutica,
para
complementos
nutricionales, acuicultura, cosmetologa.
(Rosenberg, et al., 2008; Schenk et al.,
2008).
Considerando que una de las limitaciones

actuales en la produccin masiva de
microalgas es todava el alto costo de
produccin, su cultivo para la produccin de
biodiesel utilizando a las aguas residuales
como fuente de nutrientes, es una alternativa
bastante promisoria y ambientalmente
sustentable. Existe amplia experiencia en el
uso de microalgas para el tratamiento de
aguas residuales, ya que son eficaces en la
remocin de nutrientes, materia orgnica,
metales pesados y de xenobiticos, entre
otros (Hernndez y Olgun, 2002; Olgun,
2003; Muoz y Guieysse, 2006). Sin
embargo, existen muy pocos reportes con
relacin al uso de agua residual para el
cultivo de microalgas oleaginosas y la
produccin simultnea de biodiesel.
Otra limitacin importante en este tipo de
desarrollo, es que aunque muchas especies
de microalgas son capaces de producir
grandes cantidades de lpidos, con frecuencia
las concentraciones altas de lpidos se
obtienen cuando las algas son sometidas a
condiciones de estrs impuestas por
estmulos fsicos y/o qumicos (Hu et al.,
2008), lo que con frecuencia est asociado a
condiciones de limitacin de nutrientes y por
lo tanto, a baja productividad de biomasa y
de lpidos.
Por lo anterior, algunos de los mayores retos
en el desarrollo de procesos para la
produccin de biodiesel con microalgas,
consisten en seleccionar las mejores cepas y
establecer estrategias de cultivo para que se
logre el mximo posible de productividad de
biomasa y de lpidos, a pesar de las
condiciones de estrs fisiolgico. Asimismo,
lograr este cultivo utilizando agua residual
con el objeto de evitar la competencia del
uso del agua para fines agrcolas, es de
primordial importancia y representa un gran
reto cientfico y tecnolgico.
La presente revisin est enfocada a discutir
las ventajas del uso de microalgas como
fuente de materia prima para la produccin
94
de biodiesel, adems de las ventajas
ambientales que ello conlleva, tales como las
altas tasas de fijacin de CO2 y el
tratamiento de aguas residuales, sin dejar de
lado la discusin de algunos de los retos a
nivel de proceso que an se deben resolver,
como los antes mencionados. No pretende
ser una revisin exhaustiva, dado que este
tema es muy actual y cada da se genera
mucha informacin. Sin embargo, el
objetivo general es proporcionar informacin
actualizada con relacin a los principales
retos tecnolgicos que se deben enfrentar y
resolver para lograr producir biodiesel a
partir de microalgas a un costo competitivo.
2. Aumento de los Gases de Efecto

Invernadero (GEI) en la atmsfera
Las emisiones mundiales de los GEI por
efecto de actividades humanas han
aumentado desde la era preindustrial,
registrndose un aumento de aproximadamente 70% entre 1970 y 2004.
El dixido de carbono (CO2) es el GEI

antropognico ms importante. Sus emisiones anuales aumentaron aproxima-damente
un 80% entre 1970 y 2004, de tal manera
que en la era preindustrial el valor era de
aproximadamente 228 ppm y actualmente es
de 385 ppm. Las emisiones de CO2 originadas por actividades humanas proceden de
diversas fuentes, en su mayor parte de la
combustin de combustibles fsiles utilizados en la generacin de energa, en el
transporte vehicular, en los procesos industriales tales como la fabricacin de cemento.
La combustin de biomasa y la deforestacin
tambin juegan un papel muy importante
(Jain, 2008; IPCC, 2005; IPCC, 2007) (Fig.
1).
En Mxico, la combustin de energticos es
responsable de poco ms del 61% de las
emisiones de CO2 y del 46% de los GEI
(Alarco, 2006). Debido a esta problemtica,
la tendencia mundial es reducir al mximo el
uso de combustibles fsiles y reemplazarlos
con biocombustibles que sean renovables, no
contaminantes y carbono neutrales.
Figura 1. Emisiones mundiales anuales de GEI antropognicos entre 1970 y 2004 (IPCC, 2007)
95
El aumento de los GEI en la atmsfera ha
resultado en el aumento de la temperatura
ambiental, tanto del aire como del ocano,
generando deshielo de los casquetes polares
y el aumento promedio del nivel del mar. De
acuerdo al documento tcnico V del IPCC
(IPCC, 2002), la temperatura media de la
superficie de la Tierra ha aumentado en
0.6C durante los ltimos 100 aos, siendo
el ao 1998 el ms clido y la dcada de los
90, muy probablemente la dcada ms
clida.
El aumento de la temperatura tambin afecta
a las actividades agrcolas (Morton, 2007),
forestales (Kirilenko y Sedjo, 2007), a la
salud humana (Ebi, 2008), a las actividades
humanas en la regin rtica (IPCC, 2007) y a
algunos organismos terrestres particularmente vulnerables (Deutsch et al., 2008).
El impacto del calentamiento global en
organismos y ecosistemas marinos ha sido
ampliamente discutido por Brierley y
Kingsford (2009).
3. Bioenergticos
Los bioenergticos de primera generacin
son una fuente sustentable de energa slo
cuando los insumos se cultivan de manera
sustentable mediante prcticas agrcolas
amigables con la biodiversidad y slo se
deberan promover los bioenergticos con la
menor huella ecolgica. La huella ecolgica
de un pas es el rea total requerida para
producir el alimento y fibra que consume,
absorber los desechos de esa energa consumida y suministrar espacio para infraestructura (WWF, 2004). En el caso de los
biocombustibles, la huella ecolgica est en
funcin de algunos factores, tales como
eficiencia energtica o balance neto de
energa (energa generada/energa requerida)
del ciclo de vida del bioenergtico,
combinado con su rendimiento por hectrea.
Asimismo, las emisiones de los gases de
efecto invernadero durante el ciclo de vida
del producto, los niveles requeridos de agua,

fertilizantes y plaguicidas para el cultivo de
la materia prima y la cantidad de energa
requerida para cultivar y refinar la materia
prima, son considerados tambin parte de la
huella ecolgica de un biocombustible
(Groom et al., 2008). Las mejores alternativas parecen ser los biocombustibles de
segunda generacin, es decir, aquellos que
contribuyen en la reduccin del uso de tierra
debido a su potencial en rendimiento de
energa por hectrea, que no requieren tierras
cultivables y que no son empleados para
consumo humano. Dentro de esta categora
se encuentran los residuos ligno-celulsicos,
residuos agrcolas, la Jatropha curcas y
especialmente las microalgas (Mata, et al.,
2010).
3.1 Biodiesel a partir de plantas
El biodiesel es una mezcla de steres
monoalqulicos de cidos grasos de cadena
larga derivados de recursos renovables tales
como aceites vegetales o grasas animales
(ASTM, 6751-09). Esta definicin tambin
es aceptada por las especificaciones de la
Unin Europea (estndar EU 14214). Puede
usarse en su forma pura (B100) o en mezclas
con diesel fsil que pueden ser del 2% (B2),
5% (B5) y 20% (B20). Las propiedades del
biodiesel varan de acuerdo a la materia
prima y entre las ms sobresalientes y
atractivas estn su biodegradabilidad y no
toxicidad, comparado con el diesel fsil.
Frecuentemente, se considera que el balance
de carbono en la produccin de biodiesel a
partir de plantas es neutral. Sin embargo,
para mayor precisin, se debe tomar en
cuenta el carbono utilizado en todo el ciclo
de produccin, respecto al liberado durante
la combustin (Schenk et al., 2008).
La razn principal por la cual los aceites
vegetales no se pueden utilizar directamente
en los motores diesel es por su alta
viscosidad la cual est relacionada a su
estructura qumica. Conforme aumenta la
96
longitud de la cadena carbonada de los
lpidos, mayor es la viscosidad. Sin
embargo, la viscosidad disminuye cuando
aumenta el nmero de enlaces dobles (grado
de insaturacin). Existen cuatro procesos
qumicos que se utilizan para resolver el
problema
de
viscosidad:
dilucin,
microemulsificacin,
pirlisis
y
transesterificacin, siendo este ltimo el ms
recomendado y preferido (Canakci y Sanli,
2008; Shales, 2007). La reaccin de
transesterificacin es la transformacin de
un triglicrido en un ster alqulico de cidos
grasos, en presencia de un alcohol (metanol
o etanol) y un catalizador (un lcali o un
cido),
obteniendo
glicerol
como
subproducto. Las molculas lineales del ster
resultante reciben el nombre de biodiesel y
estn formadas por el ster del cido graso y
el alcohol. La reaccin de transesterificacin
requiere de 3 moles de alcohol por cada mol
de triglicridos para producir 1 mol de
glicerol y 3 moles de metil steres
(biodiesel). El biodiesel obtenido tiene me-
nor viscosidad, menor masa molecular,

menor intervalo de ebullicin y menor punto
de inflamacin que el triglicrido original
(Canakci y Sanli, 2008; Vasudevan y Briggs,
2008). En los procesos industriales se usan 6
moles de metanol por cada mol de
triglicridos para asegurar la produccin de
metil steres o biodiesel (Fukuda et al.,
2001). La figura 2 muestra un diagrama
general de los procesos de produccin de
biodiesel.
La produccin de biodiesel a partir de
plantas tiene algunas limitaciones, como por
ejemplo: a) est en conflicto con la
utilizacin de aceites para alimento y b) su
uso se ve limitado por las grandes
extensiones de terreno necesarias para la
produccin de
semillas oleaginosas.
Adems, para la produccin de biodiesel
slo se emplea la semilla de la planta y el
resto de la biomasa se desecha; adems, los
cultivos son dependientes de la estacin del
ao y su ubicacin geogrfica (Adamczak et
al., 2009).
Figura 2. Diagrama de flujo de los procesos para produccin de biodiesel.
97
3.2 Microalgas como fuente de biodiesel
Se
ha
reportado
que
diversos
microorganismos tales como las levaduras
Cryptococcus
curvatus,
Cryptococcus
albidus, Lipomyces lipofera, Lipomyces
starkeyi,
Rhodotorula
glutinis,
Rhodosporidium toruloides, Trichosporom
pullulan y Yarrowia lipolytica y bacterias
del grupo actinomicetos tales como
Mycobacterium spp., Rhodococcus spp. y
Nocardia spp., son capaces de sintetizar
triglicridos intracelulares, bajo ciertas
condiciones de cultivo, hasta en un 80% de
su peso seco utilizando diversas fuentes de
carbono (azcares, cidos orgnicos,
alcoholes y aceites entre otras) y diferentes
subproductos y/o residuos industriales o
agrcolas (suero de leche, hidrocarburos,
aceites vegetales, melazas de caa de azcar,
salvado de trigo, desechos de frutas y
verduras.) (Li et al., 2008a; Adamczak et al.,
2009). El problema al utilizar este tipo de
microorganismos, es el costo de produccin,
dado que requieren un alto consumo de
oxgeno. En contraste, en las ltimas dcadas
se ha destacado que las microalgas
representan una alternativa ms conveniente
que cualquier otro tipo de organismo para la
produccin de triacilglicridos y su
conversin a biodiesel, ya que algunas
especies oleaginosas, siendo organismos
fotosintticos, slo requieren energa solar,
agua, CO2 y algunas sales para producir muy
altos rendimientos de biomasa rica en lpidos
(Li et al. 2008a). De hecho, son los
organismos fotosintticos ms eficientes,
absorben ms CO2 y liberan ms O2 que
cualquier planta, crecen extremadamente
rpido y llegan a acumular grandes
cantidades de diversos productos. Algunas
microalgas doblan su biomasa en 24 h y el
tiempo de duplicacin de biomasa durante la
fase exponencial puede ser tan corto como
3.5 h (Chisti, 2007). De manera ms
especfica, los beneficios que se obtienen al
usar microalgas para la produccin de

biodiesel son:
a) Las microalgas tienen un rendimiento de
aceite mucho mayor que cualquier cultivo
convencional. Es de 10 a 20 veces mayor
que el derivado del aceite de palma y de 200
a 400 veces mayor que el derivado del aceite
de soya (Fig. 3).
b) Slo este bioenergtico tiene una
verdadera huella ecolgica pequea, dado
que requiere una superficie de 1-2 rdenes
de magnitud menores en comparacin a los
cultivos convencionales o los rboles.
Requiere de 1.5 a 3.2 millones de hectreas
(M has) para satisfacer el 50% de las
demandas de energticos de transportacin
en U.S.A. (Chisti, 2007). En contraste, la
soya, principal fuente de biodiesel en U.S.A.
requiere de 330 a 450 M has para un
propsito similar. En Mxico, se ha estimado
que slo se requiere el 1% de la superficie
total del pas, para cubrir el 100% de la
demanda actual de diesel de petrleo
(Garibay et al., 2009).
c) Con biodiesel de microalgas cultivadas en
lagunas abiertas (LA), slo se requieren
200,000 has para producir 1 quadrilln de
BTU (Sheehan et al., 1998). En contraste, se
requieren aproximadamente 40 millones de
has si se utiliza etanol derivado de maz o 20
millones de has si se utiliza biodiesel
derivado de frijol de soya.
d) Las microalgas oleaginosas pueden ser
cultivadas en agua de mar o en agua salobre,
disminuyendo as la presin sobre el agua
dulce requerida para la produccin de
alimento. Algunas otras especies aisladas de
agua dulce, pueden crecer en aguas
residuales,
tambin
eliminando
la
competencia por el uso de agua para la
agricultura.
e) Las microalgas son excelentes captadoras
de CO2. Por cada 100 ton de microalgas
producidas, se consumen 183 ton de CO2
(Chisti, 2007).
98
f) Con relacin a la emisin de gases
invernadero, es de los pocos bionergticos
con un valor negativo. Es decir, no se
produce CO2 durante el ciclo de vida de
produccin y el valor de este parmetro para
microalgas (-183 kgCO2/MJ) es el ms
negativo respecto a los otros bionergticos
con valores negativos (etanol a partir de

pastos o de residuos celulsicos). En
contraste, el diesel a partir de fuentes fsiles
produce 83 kgCO2/MJ y el etanol a partir de
maz produce 81-85 kgCO2/MJ (Chisti,
2007).
Productividad de aceite (L/Ha)

Microalgas (2)
136,900
Microalgas (1)
58,700
Palma de aceite
5,950
Coco
2,689
Jatrofa
1,892
Canola
1,190
Cacahuate
1059
Girasol
952
Grasa amarilla
907
Mostaza
572
Soya
446
Algodn
325
Maz
172
0
20000
40000
60000
80000
100000
120000
140000
Figura 3. Productividad de aceite de las microalgas en comparacin con los cultivos convencionales
(Gao et al, 2009; Schenk et al., 2008; Chisti, 2007)
(1) 30% de aceite en biomasa (con base a peso seco); (2) 70% de aceite en biomasa (con base a peso
seco)
4. Retos y oportunidades en la
produccin de biodiesel con
microalgas
Algunos de los parmetros claves que
afectan la factibilidad econmica de la
produccin de biodiesel a partir de
microalgas son: la productividad de la
biomasa microalgal, el contenido celular de
lpidos y sobre todo, la productividad de
lpidos (especialmente los triacilglicridos).
Este ltimo parmetro determina el costo del
proceso de cultivo, mientras que la
concentracin de la biomasa en el cultivo y
el contenido celular de los lpidos, afectan
significativamente el costo de los procesos
de extraccin y transformacin. Por lo tanto,

un proceso ideal debera permitir la
produccin de lpidos a la ms alta
productividad celular, con el contenido ms
alto posible en las clulas (Li et al., 2008b).
Desafortunadamente esta situacin ideal es
muy difcil de encontrar en la prctica, dado
que las clulas con alto contenido de lpidos
son producidas bajo condiciones de estrs
fisiolgico, el cual est asociado a
condiciones limitantes de nutrientes y por lo
tanto, de baja productividad de biomasa y de
lpidos.
Por lo anterior, los mayores retos en el
desarrollo de procesos para la produccin de
biodiesel con microalgas consisten en:
99
a) seleccionar las mejores cepas, en trminos
de mximo contenido de lpidos y mxima
productividad, mejor perfil de lpidos y
adaptabilidad al tipo de agua a utilizar y a las
condiciones ambientales;
b) establecer estrategias de cultivo
adecuadas que permitan lograr la mxima
productividad de lpidos y de biomasa;
c) lograr el uso de aguas residuales, evitando
contaminaciones;
d) seleccionar el tipo de reactor ms

adecuado o una combinacin de ellos, para
mxima produccin de biomasa al mnimo
costo;
e) lograr abatir los costos de cosecha, y
f) lograr una extraccin de lpidos y su
conversin a biodiesel, mediante estrategias
de mnimo costo.
Figura 4. Algunas de las especies de microalgas que se pueden emplear para la produccin de biodiesel. Fotos de
Dunaliella salina, Botryococcus braunii, Chlorella minutissima y Monodus subterraneus (Culture Collection of
Autotrophic Organisms (CCALA) http://www.butbn.cas.cz/ccala/index.php); fotos de Nannochloris sp. Nitzchia
sp. y Dunaliella tertiolecta (Plancton Oceanique Station Biologique of Roscoff http://www.sbroscoff.fr/Phyto/RCC/); foto de Chlorella vulgaris (Culture Collection of Algae, Charles University in Prague
(CAUP) http://botany.natur.cuni.cz/algo/caup-gallery.html) y foto de Nannochloropsis sp. (Ben-Amotz, 2009).
4.1 Seleccin de la especie de microalgas

con mejores atributos
La eleccin de la especie es el primer paso
para el desarrollo de un proceso de
produccin, ya que el xito depende
principalmente de ello. La especie debe tener
las caractersticas adecuadas para condiciones de cultivo muy particulares para

obtener productos especficos. Entre las
principales caractersticas deseables para
cultivos a gran escala estn: crecimiento
rpido, alto contenido de productos de alto
100
valor agregado, desarrollo en ambientes
extremos, clulas grandes en colonias o
filamentos, gran tolerancia a condiciones
ambientales, tolerancia a niveles altos de
CO2 (15% o ms), a contaminantes y al
efecto fsico de la agitacin o turbulencia.
Adems, no debe excretar autoinhibidores
(Griffiths y Harrison, 2009) (Fig. 4).
El Departamento de Energa de Estados
Unidos financi de 1978 a 1996 un
programa para desarrollar combustibles
renovables a partir de algas. El objetivo
principal del programa, denominado
Programa de Especies Acuticas, fue la
produccin de biodiesel a partir de algas con
alto contenido de aceite, cultivadas en
estanques al aire libre utilizando el CO2
liberado de centrales termoelctricas que
usaban carbn como combustible. Aislaron
ms de 3,000 especies con especial inters
en cepas productoras de lpidos; finalmente
no se hizo ninguna recomendacin en cuanto

a la mejor especie, pero si se report que el
rendimiento por acre de aceite de microalga
es aproximadamente 200 veces mayor que el
mximo rendimiento de cualquier cultivo
oleaginoso (Sheehan et al., 1998)
Posteriormente, se han descrito listas
numerosas de cepas de origen marino o
dulceacucolas que muestran un alto
contenido de lpidos (Chisti, 2007) y existen
diversos estudios con especies del gnero
Chlorella (Liu et al., 2008; Xiong et al.,
2008), con especies de Dunaliella (Takagi et
al., 2006), de Nannochloris (Takagi et al.,
2000) y con Botryococcus braunii (Li y Qin,
2005) por mencionar algunos de ellos.
Nannochloris y Dunaliella son especies
marinas con buenas ventajas para ser
cultivadas en zonas costeras. La tabla 1
muestra las diferencias del contenido de
aceite en algunas especies de microalgas.
Tabla 1. Contenido de aceite de algunas especies de microalgas.
Especie
Parietochoris incisa (d)
Nannochloropsis sp. (m)
Neochloris oleoabundans (d)
Chlorella vulgaris (d)
Crypthecodinium cohnii (m)
Scenedesmus obliquus (d)
Neochloris oleoabundans (d)
Nannochloropsis sp. (m)
Nanochloropsis oculata (m)
Dunaliella (m)
Choricystis minor (d)
Chlorella protothecoides (d)
Scenedesmus rubescens (m)
a
Contenido de
aceite (% del
peso seco)
60a
60a
56a
~
42a
41.14a
43b
38c
28.7c
27c
30.7c
67c
21.3c
50.3d
21d
73e
Productividad
de lpidos (mg
L-1 d-1)
NR
204
13.22
12.77
82
NR
133
90
127.2
151
33.5
82
NR
54
NR
Referencia
Solovchenko et al. (2008)
Rodolfi et al. (2009)
Gouveia et al. (2009)
Widjaja et al. (2009)
Mendoza et al. (2008)
Mandal y Mallick (2009)
Li et al. (2008c)
Gouveia y Oliveira (2009)
Francisco et al (2010)
Chiu et al. (2009)
Takagi et al. (2006)
Mazzuca-Sobczuk y Chisti (2010)
Xiong et al. (2008)
Liang et al (2009)
Matsunaga et al (2009)
Cultivo bajo supresin de nitrgeno; b Cultivo bajo deficiencia de nitrgeno; c Cultivo con suficiencia de
nutrientes; d cultivo heterotrfico; e Ausencia de nutrientes. m = marina y d = dulceacucola; NR = no reportado
101
Recientemente, Rodolfi et al. (2009),
investigaron 30 especies para seleccionar
aquellas con alta productividad en biomasa y
alto contenido de lpidos, encontrando que
Nannochloropsis sp., una especie marina, es
particularmente promisoria para la produccin de aceite. De igual manera, Gouveia y
Oliveira (2009), investigaron 6 especies de
microalgas tanto marinas como dulceacucolas para elegir en trminos de cantidad y
calidad de aceite la mejor materia prima para
la produccin de biocombustibles.
Neochloris oleoabundans (dulceacucola) y
Nannochloropsis sp. (marina) fueron las que
mostraron mayor contenido de lpidos (29 y
28.7%, respectivamente), lo cual las sita
como adecuadas para tal fin. ltimamente,
varios grupos de investigacin han
incursionado en la lnea de investigacin
para generar cepas genticamente mejoradas.
Aunque la aplicacin de la ingeniera
gentica para mejorar la produccin de
lpidos en fenotipos de eucariontes, se
encuentra en etapas muy tempranas, ya se
han desarrollado herramientas de manipulacin gentica en ciertos sistemas modelo
para manipular el metabolismo central del
carbono en estos organismos (Radakovits et
al., 2010). Sin embargo, es posible que los
resultados de esta estrategia sean de mediano
y largo plazo, considerando que se ha enfatizado que todava se requiere generar mucho
conocimiento para posteriormente lograr
manipular el metabolismo de lpidos en algas
(Greenwell et al., 2010.)
4.2 Induccin del aumento de la
productividad de lpidos
Las microalgas sintetizan cidos grasos
como precursores para la sntesis de varios
tipos de lpidos, los cuales varan
dependiendo de la especie: lpidos polares,
lpidos neutrales, ceras, esteroles, fosfolpidos, glicolpidos, carotenoides, terpenos,
tocoferoles, quinonas (Hu et al., 2008). Sin
embargo, slo los lpidos neutrales son
adecuados para la produccin de biodiesel y

de stos, los triacilglicridos.
El contenido total de los lpidos en las
microalgas puede variar desde 1 hasta 90%
del peso seco, dependiendo de la especie y
de las condiciones de cultivo (Spolaore et
al., 2006; Chisti, 2007). Cuando las
microalgas se someten a condiciones de
estrs impuestas por estmulos ambientales
qumicos y fsicos, solos o en combinacin,
ocurre sntesis y acumulacin de grandes
cantidades de triglicridos, acompaada por
considerables alteraciones en la composicin
de los lpidos y cidos grasos. Los
principales estmulos qumicos son la
deficiencia de nutrientes (nitrgeno, fsforo,
azufre y silicio), la salinidad y el pH del
medio de cultivo;
los fsicos son la
temperatura y la intensidad luminosa. La
deficiencia de nitrgeno es, con respecto a
los nutrientes, el factor que ms afecta el
metabolismo de los lpidos (De et al., 1999;
Li et al., 2008c; Hu et al., 2008; Mendoza et
al., 2008; Solovchenko et al., 2008; Gouveia
y Oliveira, 2009; Rodolfi et al., 2009).
Adems de estos factores, la fase de
crecimiento y la edad del cultivo tambin
afectan al contenido y composicin de los
cidos grasos, observndose un mayor
contenido de lpidos en la fase estacionaria
con respecto a la fase logartmica (Spolaore
et al., 2006; Hu et al., 2008). Con respecto a
la fase de crecimiento, Bigogno et al. (2002)
reportaron que en Parietochloris incisa se
observ un alto contenido de triacilgliceroles
(43% del total de cidos grasos) en la fase
logartmica, el cual aument hasta 77% en la
fase estacionaria.
La influencia de la deficiencia de nitrgeno
sobre la sntesis de lpidos fue descrita
primero en
algas verdes (Shifrin y
Chisholm, 1980), aunque estudios posteriores tambin lo han demostrado con
cianobacterias. Olgun et al., (2001), reportaron que el contenido de lpidos totales de
Spirulina sp. (Arthrospira) aument de 8% a
102
28.6% del peso seco, cuando se someti a
una limitacin por N y adems se cultiv a
una intensidad luminosa muy baja (66 mol
fotn m-2 s-1) en un medio com-plejo. En
relacin a microalgas verdes, en el gnero
Dunaliella, se ha descrito que su principal
lpido de reserva son los triglicridos y que
bajo condiciones de limitacin de nitrgeno
y con 1% de CO2, stos aumentaron del 1%
al 22%, respecto a los lpidos totales
(Gordillo et al., 1998). Asimismo,
Neochloris oleoabundans puede acumular
hasta el 80% de sus lpidos totales en forma
de triglicridos y la mayora de sus cidos
grasos son saturados en el rango de 16 a 20
carbonos, bajo condiciones de estrs
(Tornabene et al., 1983), lo cual la coloca
como una de las especies con mayor
potencial para la produccin de biodiesel.
Tambin se ha reportado que la adicin de
2% de CO2 estimul la acumulacin de
cido eicosapentanoico (EPA, 20:5n-3) en la
microalga marina Nannochloropsis sp.
(Hoshida et al., 2005).
Entre otros estudios relacionados tambin a
la induccin de lpidos del tipo TAG (triacilglicridos) bajo condiciones de limitacin de
nitrgeno, destacan los realizados con
Parietochloris incisa (Trebuxiophyceae) por
el grupo de Cohen en Israel. En uno de sus
trabajos, encontraron que P. incisa, acumula
cido araquidnico (AA) (20:4) y que hasta
el 90% del total del AA est depositado en
forma de TAGs. Bajo condiciones de
deficiencia de nitrgeno, el contenido de
cidos grasos alcanz el 35% del peso seco y
el AA excedi el 60% de los cidos grasos
(Khozin-Goldberg et al., 2002). Recientemente, se describi que a una alta
intensidad luminosa, se alcanzaron los ms
altos contenidos de cidos grasos totales y
que bajo deficiencia de nitrgeno, aument
de manera significativa el contenido de AA
respecto al total de cidos grasos
(Solovchenko et al., 2008).
Finalmente, muy pocos estudios sobre la

induccin de lpidos por limitaciones de
nutrientes se han realizado en condiciones
exteriores con reactores a escala piloto.
Despus de hacer crecer bajo condiciones
limitantes de nitrgeno a dos cepas marinas
y a dos cepas de agua dulce, Rodolfi et al.,
(2009), seleccionaron a Nannochloropsis sp
por haber acumulado el 60% de lpidos bajo
estas condiciones. En experimentos realizados con fotobiorreactores (FBRs) de 110
litros, se compararon las productividades
tanto en medio suficiente de nitrgeno, como
en medio deficiente. Se encontr que en el
primer medio, esta microalga marina
contena 32 % de lpidos, con una
productividad de biomasa de 0.36 g L-1 d-1 y
una productividad de lpidos de 117 mg L-1
d-1. En contraste, en condiciones limitadas
de nitrgeno, el contenido de lpidos
aument al 60% y la productividad de
lpidos a 204 mg L-1 d-1, aunque la
productividad de biomasa disminuy a 0.3 g
L-1 d-1. Los autores sealaron que se pueden
obtener entre 20 y 30 ton de lpidos por
hectrea, aunque estos datos deben
considerarse con reserva, dado que la unidad
experimental utilizada para generarlos fue de
un volumen de 110 litros.
Con respecto a la temperatura, se ha
observado en muchas algas y cianobacterias
que la insaturacin de los cidos grasos se
incrementa cuando desciende la temperatura
y viceversa, cuando la temperatura aumenta,
aumenta la saturacin de los cidos grasos.
Con relacin al efecto de la intensidad
luminosa, sta influye notablemente en la
composicin qumica en general, el
contenido de pigmentos y en la actividad
fotosinttica. Generalmente, una intensidad
luminosa baja induce la formacin de lpidos
polares (fosfolpidos y glucolpidos), los
cuales estn funcional y estructuralmente
asociados a las membranas celulares (Hu et
al., 2008).
103
En contraste, las altas intensidades

luminosas influyen en la disminucin del
contenido total de lpidos polares con el
concomitante incremento de la cantidad de
lpidos de almacenamiento, principalmente
triglicridos (Olgun et al., 2001; Khotimchenko y Yakovleva, 2005; Solovchenko et
al., 2008).
4.3 Uso de las microalgas como estrategia
para la mitigacin del CO2 y el tratamiento
de aguas residuales
La capacidad de las microalgas para fijar el
CO2 es de 10 a 50 veces mayor que la de las
plantas terrestres, por tal motivo, las
microalgas consumen la mayor cantidad de
CO2 en todo el planeta (Wang et al., 2008).
Aproximadamente la mitad de la biomasa en
peso seco de las microalgas, es carbono derivado del CO2, por lo tanto, por cada tonelada
producida de biomasa algal (peso seco), se
consumen de 1.3 a 1.8 toneladas de CO2
(Chisti, 2008).
La mitigacin del CO2 con microalgas puede
ser econmicamente ms rentable y ambien-
talmente sustentable cuando el proceso se

combina con otro como el tratamien-to de
aguas residuales (Harmelen y Oonk, 2006;
Wang et al., 2008). La combinacin del
tratamiento de aguas residuales y la fijacin
del CO2 con el cultivo de microalgas provee
un incentivo adicional debido a la reduccin
de compuestos tales como nitratos y
fosfatos, ya que las microalgas son capaces
de remover eficientemente el nitrgeno y el
fsforo as como algunos metales pesados
(Mallick, 2002; Olgun, 2003; Larsdotter,
2006; Powell et al., 2008). Por lo tanto, la
combinacin del cultivo de microalgas con
el tratamiento de aguas residuales
incrementa el beneficio ambiental de la
mitigacin del CO2, resultando adems en la
preservacin de los valiosos recursos
hdricos, ya que en muchas ocasiones, el
agua residual sin tratar, rica en nitrgeno y
fsforo, se vierte a los cuerpos de agua,
resultando en la eutrofizacin de ros y lagos
y el surgimiento de microalgas nocivas
(Wang et al., 2008; Wogan et al., 2008)
(Fig. 5).
Figura 5. La produccin de biodiesel a partir de microalgas puede contribuir a la mitigacin de

CO2 y al tratamiento de aguas residuales en un proceso rentable y ambientalmente sustentable.
104
El uso de microalgas para tratamiento de
diversos tipos de aguas residuales, ha sido
objeto de estudios en la ltima dcada
(Phang et al., 2000; Grnlund, 2002; Olgun
et al., 2003; Olgun, 2003; Bcares, 2006;
Hu y Sommerfeld, 2004; Asplund, 2008;
Gonzlez et al., 2008; Powell et al., 2008) y
ms recientemente con el doble propsito de
tratarlas y de producir biomasa algal para la
produccin de biocombustibles (Bhatnagar
et al., 2010; Johnson y Wen, 2010; Li et al.,
2010). Sin embargo, en este ltimo caso,
debe tomarse en cuenta que pueden
presentarse problemas adicionales tales
como contaminacin del cultivo y toxicidad
de algunos compuestos presentes en las

aguas residuales.
4.4 Seleccin del tipo de reactor ms
adecuado para el cultivo de microalgas
oleaginosas
La produccin de microalgas oleaginosas
con el objeto de obtener biodiesel se puede
realizar tanto en reactores cerrados,
generalmente llamados fotobiorreactores
(FBRs) o en reactores abiertos, conocidos
como raceways o Lagunas Abiertas (LA)
que tienen el mismo diseo que las Lagunas
de Oxidacin de Alta Tasa (LOATs) (Fig.6).
Figura 6. Tipos de reactores para el cultivo masivo de microalgas.

a) FBR tubular
(http://www.ebri.org.uk/index.html); b) FBR tubular (http://www.oilgae.com/); c) Vertical Algae Technology
(VAT) (http://www.valcent.net/s/Home.asp); d) FBR tipo placa (http://biofuels.asu.edu/biomaterials.shtml) y
e) Lagunas abiertas (LA) tambin conocidas como raceways (http://www.aurorabiofuels.com/).
105
Las LOATs y las LA son de forma elipsoidal
con una separacin central que permite
formar canales poco profundos en forma de
circuito cerrado; se mantienen en agitacin
mediante paletas giratorias y en ocasiones,
cuentan con mecanismos para suministrar
CO2 y nutrientes. Las principales ventajas
son el bajo costo de construccin, de
operacin y de produccin de biomasa. Sin
embargo,
tienen
varias
desventajas:
requieren de grandes reas de terreno, sufren
importantes prdidas de agua por
evaporacin, y de CO2 por difusin a la
atmsfera, el sistema de mezclado es
deficiente lo que origina una baja
concentracin celular, la cual a su vez,
origina una baja productividad. sta ltima
tambin resulta afectada por contaminacin
con otras algas y/o por organismos que se
alimentan
de
microalgas;
costosa
recuperacin del producto de medios
diluidos y dificultad para el control de la
temperatura y el pH. Estas desventajas de las
lagunas abiertas estimularon el desarrollo de
diversos tipos de fotobiorreactores, los
cuales son sistemas cerrados que permiten

un control ms preciso de las condiciones de
cultivo, (Chisti, 2007; Wogan et al., 2008;
Ugwu et al., 2008), el cultivo de una sola
especie por tiempos prolongados, la
obtencin de una alta productividad de
biomasa y se puede evitar la contaminacin
(MolinaGrima et al., 1999; Ugwu et al.,
2008).
La mayora de los FBRs expuestos a
condiciones ambientales exteriores se
caracterizan por tener grandes reas de
iluminacin y desde este punto de vista, los
tipo placa plana y los tubulares horizontales
inclinados son los mejores, excepto por la
dificultad de escalamiento, mientras que los
de columna de burbujeo, los airlift y el tipo
tanque agitado son de fcil escalamiento,
pero tienen reas de iluminacin menores
respecto al resto de los FBRs (Ugwu et al.,
2008). La figura 7 muestra una comparacin
de diversos parmetros de diseo y costo
entre los fotobiorreactores de tipo placa
plana y tubulares, as como de las LA o
raceways.
Figura 7. Algunas caractersticas de las Lagunas Abiertas (LA) y los fotobiorreactores de placa
plana y fotobiorreactores tubulares (Molina Grima y Acin (2009), comunicacin personal)
106
Por otro lado, es importante mencionar que
existen numerosos reportes en la literatura
sobre el uso de FBRs para la produccin de
microalgas, aunque la mayora son
experiencias a nivel laboratorio y muy pocas
a nivel de planta piloto (Rodolfi et al.,
2009). Las revisiones sobre este tema son
diversas. Chisti (2007) favorece el uso de
FBRs y sin embargo otros expertos que han
tenido aos de experiencias de cultivo de
microalgas a escala comercial defienden
ampliamente el uso de las lagunas abiertas o
raceways (Ben-Amotz, 2009; Benneman,
2008).
El debate se centra fundamentalmente en dos
aspectos: los FBRs son mucho ms
productivos que las LA y permiten controlar
mejor las posibles contaminaciones y sin
embargo, son mucho ms costosos, lo que
impide un costo adecuado de produccin de
biomasa (ver seccin de factibilidad

econmica). El resultado de esta situacin
es que los procesos desarrollados en
reactores cerrados no son rentables todava a
gran escala y algunas experiencias
comerciales de este tipo han fracaso en los
ltimos aos (ejemplo: planta en Alemania
del Dr. Otto Pulz). De hecho, todas las
plantas de produccin de microalgas a gran
escala operando actualmente, utilizan LA
para la produccin de astaxantina,
ferredoxina, beta caroteno y ficocianina
(Carvalho et al., 2006) y tambin para
produccin de biomasa de Spirulina
(Arthrospira) grado consumo humano y
acuicultura (Belay, 1997). La figura 8
muestra la produccin de Nannochloropsis
sp. a escala comercial para la produccin de
biodiesel por la empresa Seambiotics Ltd.
(Israel), utilizando lagunas abiertas.
Figura 8. Cultivo de Nannochloropsis sp. en lagunas abiertas (LA) para la produccin de biodiesel en Israel
(Seambiotic Ltd.). a) Nannochloropsis sp., b) cultivo en laboratorio, c) cultivo en LOATs, d) co-bio-floculacin, e)
cosecha de biomasa, f) Nannochloropsis sp. seca y g) biodiesel. (Ben-Amotz, 2009)
107
Tabla 2. Ventajas y desventajas de las lagunas abiertas y los fotobiorreactores para produccin de biomasa algal
(Ma, 2009).
TIPO DE REACTOR
VENTAJAS
Lagunas Abiertas
Sencillos y baratos de construir

Fciles de operar y mantener
Fotobiorreactores
Alta productividad
Menor contaminacin, menor uso de
agua y menor prdida de CO2
Mejor utilizacin de la luz y mejor
mezclado
Control en las condiciones de cultivo
En resumen, las ventajas y desventajas de

ambos tipos de reactores se muestran en la
tabla 2 (Ma, 2009).
Una manera de evitar algunas de las
principales desventajas del uso de las
lagunas abiertas y de los fotobiorreactores,
es optar por un cultivo que integra ambos
sistemas, el sistema de cultivo hbrido
(Schenk et al., 2008). La combinacin de
ambos sistemas es probablemente la eleccin
ms adecuada para obtener la mayor
productividad tanto de biomasa como de
lpidos, ya que la mayora de las microalgas
no acumulan biomasa ni producen lpidos de
manera simultnea. Este sistema se realiza
en dos etapas, en la primera se incrementa la
densidad celular y en la segunda se
incrementa la acumulacin de lpidos. La
primera etapa se lleva a cabo en sistemas
cerrados (FBRs), que pueden ser desde
simples bolsas de plstico hasta FBRs de alta
complejidad. El objetivo en esta etapa, es
obtener la mayor densidad celular posible y
minimizar el riesgo de contaminacin, bajo
condiciones de suficiencia de nutrientes. La
segunda etapa se realiza en lagunas abiertas
usando el inculo producido en el primer
paso y se estimula la biosntesis de lpidos
bajo condiciones de limitacin de nutrientes.
El resultado esperado es una alta densidad
celular y un alto contenido de aceite (Ryan,
2009). Este sistema fue adaptado
exitosamente para el cultivo a escala
DESVENTAJAS
Utilizacin deficiente de la luz
Luz y temperatura difciles de
controlar
Contaminacin y evaporacin
Costosos y complejos
Difcil control de la temperatura
Dao celular por turbulencia
Deterioro de materiales
Deterioro de equipo por corrosin
biolgica
Acumulacin de oxgeno
comercial (2 ha) de Haematococcus pluvialis

para la produccin de astaxantina y aceite
(Huntley y Redalje, 2007).
4.5 Cosecha de biomasa celular y
extraccin de lpidos
Se conoce ampliamente que uno de los
cuellos de botella y retos a vencer ms
importante respecto a la produccin de
biomasa microalgal y de metabolitos en
particular, consiste en la cosecha y
extraccin de los mismos. Incluso, en
procesos de tratamiento de aguas con
microalgas, el costo de la cosecha determina
la viabilidad econmica de todo el proceso
(Olgun, 2003). Se considera en general que
los problemas bsicos son: a) el tamao de
las microalgas (entre 3 y 30 m); b) el que
los cultivos tienen una densidad celular
relativamente baja, especialmente en las
lagunas abiertas (< 0.5 kgm-3 de biomasa
seca) y se requiere cosechar grandes
volmenes de lquido y c) que el costo de la
cosecha contribuye de una manera muy
importante (del 20 al 40%), al costo total de
produccin de la biomasa. En el caso de
algunos metabolitos o nutracuticos de alto
valor
agregado
como
el
cido
eicosapentanoico (EPA en ingls), el costo
de recuperacin asciende a 60% del costo
total de produccin (Molina Grima et al.,
2003).
108
Los mtodos ms comunes de cosecha de la
biomasa algal incluyen centrifugacin
(especialmente en el caso de las microalgas
unicelulares), filtracin cuando se han
formado flculos o se trata de microalgas o
cianobacterias relativamente grandes o
filamentosas
y
en
algunos
casos,
sedimentacin por gravedad, flotacin o
tcnicas de electroforesis. Sin embargo, la
centrifugacin es el proceso ms costoso y
generalmente se aplica slo cuando se
recuperan metabolitos de alto valor agregado
(Uduman et al., 2010). En consideracin a
que la mayora de las
microalgas
oleaginosas son pequeas o no filamentosas,
la filtracin no es un mtodo fcilmente
aplicable a la produccin de biodiesel a
partir de microalgas. En contraste, en la
actualidad, la floculacin con ciertas
modificaciones a la floculacin tradicional
que utiliza sales metlicas que contaminan la
biomasa, est siendo investigada por
diversos grupos de investigacin.
La recuperacin de biomasa microbiana por
floculacin, se basa en el hecho de que la
superficie
de
todas
las
bacterias,
cianobacterias y microalgas estn cargadas
negativamente debido a la presencia de
polisacridos extracelulares (Lee et al.,
2009). En el caso de las cianobacterias, se ha
determinado que los polisacridos extracelulares son heteropolmeros aninicos
complejos que en su mayora contienen
cido urnico y otras molculas peptdicas,
radicales acetilo, pirvico o derivados
sulfatados (De Philippis et al., 2001). Sin
embargo, la mayora de los mtodos de
floculacin no son adecuados para la
cosecha de biomasa algal para la produccin
de un bien de bajo costo como el biodiesel, y
algunos de ellos muestran interferencia con
el agua de mar (Lee et al., 2009). En
consideracin a estos aspectos, se desarroll
un proceso para la recuperacin de la
microalga marina Pleurochrysis carterae,
del grupo de los cocolitofridos, en el que se
utilizaron compuestos carbonados de fcil

disponibilidad, tales como el acetato, el
glicerol y la glucosa para cultivarla y
promover la formacin de polisacridos
extracelulares y la floculacin de las clulas.
El proceso es prometedor dado que se
encontraron
buenos
porcentajes
de
recuperacin de ms del 90% y un factor de
concentracin de 226 (Lee et al., 2009). Por
otro lado, Vandamme et al. (2010),
reportaron que el uso de almidn catinico
fue muy eficiente para flocular microalgas
de agua dulce (Parachlorella, Scenedesmus)
pero no para flocular microalgas marinas
(Phaeodactylum,
Nannochloropsis).
Adems, encontraron que de los floculantes
de tipo de almidn catinico disponibles en
el mercado, el Greenfloc 120 fue ms
eficiente que el Cargill C*Bond.
Por otro lado, se ha recomendado el uso de
otros procesos no convencionales para la
recuperacin a bajo costo de Chlorella para
produccin de biodiesel. Johnson y Wen (
2010)
reportaron el cultivo de esta
microalga sobre una superficie de espuma de
poliestireno, logrando una productividad de
biomasa de 25.65 gm-2 en base seca y un
rendimiento de cidos grasos de 2.31 gm-2 a
escala laboratorio. Aunque este mtodo no
convencional parece prometedor, faltan
estudios a mayor escala en los que se
resuelva de manera viable el raspado de las
placas de poliestireno que se colocan en la
base de las superficies de cultivo.
En relacin a la extraccin de los lpidos
intracelulares, este proceso se puede realizar
con o sin rompimiento celular previo. El
rompimiento celular puede llevarse a cabo
por mtodos tradicionales como el uso de la
prensa francesa que utiliza altas presiones
o por un mtodo ms moderno que es la
electroporacin, en el cual se aplica un
campo elctrico a las clulas para lograr
perforaciones en su pared celular. La
extraccin de los lpidos se puede realizar
con solventes qumicos en una o dos etapas
109
(Schenk et al., 2008). Tran et al. (2009),
evaluaron cinco mtodos diferentes ya
descritos en la literatura y concluyeron que
el ms adecuado para extraer los lpidos de
Botryococcus braunii y de Synechocystis sp.,
fue un mtodo de un solo paso con
derivatizacin para formar metil steres in
situ. Recientemente, se describi el uso
exitoso de solventes de polaridad
intercambiable (switchable-polarity solvents
(SPS) para extraer los lpidos de
Botryococcus braunii (Samori et al., 2010).
La mezcla DBU/octanol mostr los
rendimientos de recuperacin ms altos,
tanto de clulas liofilizadas como de
muestras lquidas (16% and 8.2%
respectivamente), en comparacin con
extraccin con n-hexano (7.8% y 5.6%,
respectivamente).
Es importante mencionar que la extraccin
con solventes no es amigable con el
ambiente, especialmente por las emisiones a
la atmsfera y por la disposicin final del
mismo. En consideracin a lo anterior, se
han desarrollado mtodos alternativos de
extraccin tales como el Proceso de
Extraccin Acuosa (AEP en ingls), el cual
ofrece las ventajas de una inversin menor
de capital, una operacin ms segura y una
produccin simultnea de aceite y de
fracciones ricas en protena con menos dao.
Ms an, se han utilizado diversas enzimas
para mejorar la extraccin de lpidos en este
tipo de proceso, alcanzando porcentajes de
recuperacin hasta del 90% (de Moura et al.,
2008).
Por otro lado, en relacin a las reacciones de
transesterificacin por va enzimtica, se ha
descrito que el uso de lipasas comerciales
(Novozymes) de origen microbiano y en
especial la lipasa N435 obtenida de Candida
antarctica e inmovilizada en soporte
hidrofbico, fue la ms eficiente tanto en el
sistema libre de solvente como en el sistema
con terbutanol como solvente, para la
transesterificacin de cidos grasos de

origen animal (Rivera et al., 2009).
5. Factibilidad econmica de la
produccin de biodiesel a partir de
microalgas
La factibilidad econmica de este producto
est en funcin del precio del petrleo, dado
que el diesel del petrleo es el principal
producto con el que tiene que competir. Los
costos del barril de petrleo han sido muy
variables en los dos ltimos aos puesto que
han estado sujetos a las presiones de la
economa internacional. La OPEP ha
previsto que el consumo de crudo se mueva
al alza, tras 2 aos consecutivos de
descensos y alcance los 85.13 millones de
barriles por da y ha insistido en considerar
aceptable un precio de 75 a 85 dlares por
barril para el 2010. De hecho, el precio del
petrleo crudo de Texas alcanz los $ 82.50
dlares por barril el 18 de Marzo del 2010
(Preciopetroleo.net). Dentro de este escenario, en el que los precios del petrleo estn al
alza, la viabilidad del biodiesel a partir de
microalgas es ms factible. Sin embargo, la
limitante principal contina siendo el costo
de la produccin de biomasa como lo han
indicado previamente varios autores (Chisti,
2008; Schenk et al., 2008; Rodolfi et al.,
2009; Garibay et al., 2009). Esta es la razn
por la cual ninguna de las 50 empresas que
han surgido para producir este tipo de
biodiesel, lo producen an a escala comercial y a costos competitivos (Pienkos y
Darzin, 2009). Dentro de este contexto, la
mayora de los trabajos que han evaluado
esta situacin a nivel internacional (revisado
por Milledge, 2010), coinciden en dos
puntos como requisitos esenciales para que
este proceso sea competitivo:
a) El costo de produccin de la biomasa
debe ser menor a $ 1.00 dlar/kg de biomasa
microalgal.
110
b) Se deben producir simultneamente una
serie de co-productos de alto valor agregado a
partir de la biomasa residual que queda despus
de la extraccin del aceite, del tipo de los
nutraceticos, fertilizantes y metano. Esto
favorece el concepto de Biorefinera en la que
se generan varios co-productos, adems del
biodiesel.
Finalmente, se recomiendan los siguientes
aspectos a tomar en cuenta tanto en el diseo de
procesos, como en la evaluacin de su
factibilidad econmica:
a) Utilizar datos reales resultados de la
experimentacin con relacin al contenido de
lpidos en la cepa a utilizar. Es muy comn
encontrar en la literatura, especialmente en la de
divulgacin y de mercadotecnia de empresas,
cifras no realistas con relacin a este parmetro.
b) No realizar proyecciones de gran escala
utilizando datos de pequea escala a nivel
laboratorio. Por lo anterior, deben favorecerse
los financiamientos para llegar a produccin de
planta piloto o de gran escala.
c) Considerar que a gran escala, los
fotobiorreactores
presentan
numerosos
problemas de operacin. En contraste, los
cultivos a escala comercial de las tres especies
de microalgas que ya se han explotado desde
hace algunas dcadas Spirulina (Arthrospira),
Dunaliella y Chlorella, se realizan en lagunas
abiertas (Borowitzka, 2006).
d)
Considerar que los fotobiorreactores
(FBRs), todava no son una opcin rentable de
acuerdo al estudio de factibilidad econmica de
la produccin de biodiesel a partir de
microalgas realizado por Gao et al. (2009). En
dicho estudio se compararon los costos de
produccin de la biomasa tanto en
fotobiorreactores (FBRs) cerrados como en
lagunas abiertas (LA) y se consideraron una
serie de variables que permiten disminuir los
costos de produccin del biodiesel como
producto final, incluso el uso del incentivo de
produccin de biodiesel que se ofrece en los
Estados Unidos (biodiesel tax credit). La
conclusin fue que la produccin en FBRs
cerrados, an con consideraciones de altsimos
rendimientos de biomasa (60% por arriba de los
actuales reportados), una disminucin del 50%
en el costo de inversin y otra de 50% por
reciclar el hexano utilizado durante la
transesterificacin, es 16.5 veces ms costoso
que la opcin ms competitiva de produccin
de biodiesel utilizando LA. En esta ltima, se
consider un 30% de aumento en la
productividad de la biomasa respecto a los
sistemas actuales y que el costo del CO2 es
mnimo ($0.2 dlares/kg). En estas condiciones,
el costo del galn de biodiesel en trminos de
equivalentes de energa fue de $ 0.94 dlares
(Tabla 3).
Tabla 3. Costo de biodiesel de microalgas en distintos escenarios, utilizando dos sistemas de

produccin: fotobiorreactores cerrados (FBRs) y lagunas abiertas (LA) o raceways
(Gao et al., 2009)
Aumento del
Costo del
Tipo de sistema
Rendimiento
Costo del CO2/kg
biodiesel algal
actual (%)
EE1 $/gal
Cerrado (50% costo de
inversin, 50%
60
n.a.
16.54
recuperacin de hexano)
Abierto
15
n.a
4.46
Abierto
20
n.a
3.24
Abierto
30
n.a
2.02
Abierto
0.0
$0.2
2.29
Abierto
20
$0.2
1.61
Abierto
30
$0.2
0.94
1
n.a. no aplica;
EE: Equivalentes de Energa
111
6. Comentarios finales
La produccin de biodiesel a partir de
microalgas ha pasado por diversas etapas
desde hace varias dcadas. El auge
acadmico que mostr desde los aos
ochentas se ha incrementado en la ltima
dcada, atrayendo cada vez a un mayor
nmero de investigadores de todo el mundo.
Por otro lado, el surgimiento de numerosas
compaas privadas interesadas en invertir
en este nuevo tipo de bioenergtico es
reciente, aunque registra un crecimiento
intenso y cada ao existen numerosos foros
y reuniones para promover la inversin en la
investigacin y desarrollo de este tipo de
biodiesel.
Los retos cientficos y tecnolgicos que se
requieren vencer para lograr disminuir los
costos de produccin de biomasa algal, as
como de produccin de biodiesel a costos
competitivos, estn relacionados a dar
respuestas creativas y rentables para lograr:
a) aumentar la productividad de biomasa
microalgal con el mayor contenido de lpidos
del perfil adecuado; b) lograr mayores
rendimientos de biomasa microalgal en
reactores que ofrezcan costos de inversin y
de operacin competitivos; c) disear nuevos
procesos de cosecha de biomasa por medio
de biofloculacin o uso de cepas con
capacidades intrnsecas de autofloculacin;
d) optimizar mtodos de extraccin de
lpidos y de su transesterificacin, que
permitan mayores rendimientos a menores
costos; e) disear nuevos procesos para la
generacin de co-productos de alto valor
agregado.
Finalmente, an falta mucho por recorrer en
el campo de la verdadera vinculacin para
que los empresarios, tanto nacionales como
extranjeros, inviertan en grupos de
investigacin de pases en vas de desarrollo.
El apoyo de las entidades gubernamentales
ms relacionadas a esta temtica se hace
imprescindible para lograr que los grupos de

investigacin avancen en sus desarrollos y se
puedan llevar a cabo evaluaciones tcnicoeconmicas a una escala piloto o semiindustrial. Tambin sera muy deseable que
las compaas que buscan aprovechar las
condiciones climticas favorables de pases
en el continente americano al sur de Estados
Unidos, estn dispuestas a compartir la
propiedad intelectual con los investigadores
latinoamericanos. Otro factor de gran
importancia que debe surgir,
es la
generacin de nuevas polticas pblicas a
nivel nacional e internacional para el
fomento de la I & D no slo en la
produccin de biodiesel, sino de biodiesel a
partir de microalgas.
Agradecimientos
Maribel M. Loera-Quezada es becaria del
Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa,
CONACYT-Mxico para realizar su
Doctorado en Ciencias en el INECOL, A.C.,
Eugenia J. Olgun agradece el apoyo del
INECOL, A.C. para realizar esta lnea de
investigacin.
Referencias
Adamczak, M., Bornscheuer, U.T, Bednarski,
W. 2009. The application of biotechnological
methods for the synthesis of biodiesel. Eur J
Lipid Sci Technol 111(8):808-813.
Alarco, G. 2006. Crecimiento econmico y
emisiones de CO2 por combustin de
energticos en Mxico, 2005-2030. Economa
Mexicana, Nueva poca. Vol. XV (002) pp.
291-325.
Asplund, M. 2008. Algal biomass growth as a
step in purification of leachate. Projekt
Mikrobiell Bioteknik 7.5 hp. Linkpings
University, Sweden.
ASTM Internacional. http://www.astm.org
112
Bcares, E. 2006. Limnology of naturals systems
for wastewater treatment. Ten years of
experiences at the experimental field for lowcost sanitation in Mansilla de las Mulas (Len,
Spain). Limnetica 25(1-2):143-154.
Belay A. 1997. Mass culture of Spirulina
outdoors - The earthrise farms experience. In:
Spirulina platensis (Arthrospira): Physiology,
Cell-biology and Biotechnology. (Vonshak,
A., ed). Taylor & Francis. London. pp.131158.
Ben-Amotz, A. 2009. Bio-fuel and CO2 capture
by algae. ANR meeting on Third Generation
Biofuels - February, 5th 2009. Paris, France.
Benemann, J.R. 2008. Microalgae biofuels - A
technology roadmap. 11th International
Conference on Applied Phycology. Applied
phycology in the 21st century; novel
opportunities in a changing world. Galway,
Ireland, June 21-27.
Bhatnagar, A., Bhatnagar, M., Chinnasamy, S.,
Das, K.C. 2010. Chlorella minutissimaa
promising fuel alga for cultivation in
municipal wastewaters. Appl Biochem
Bigogno, C., Khozin-Goldberg, I., Boussiaba, S.,
Vonshaka, A., Cohen Z. 2002. Lipid and fatty
acid composition of the green oleaginous alga
Parietochloris incisa, the richest plant source
of
arachidonic
acid.
Phytochemistry
60(5):497-503.
Borowitzka, M.A. 2006. Biotechnological and
environmental applications of microalgae.
[Online] Murdoch University,
http://www.bsb.murdoch.edu.au/groups/beam/
BEAMAppl0.html
Brierley, A.S, Kingsford, M.J. 2009. Impacts of
climate change on marine organisms and
ecosystems. Curr Biol 19(14):R602-R614.
Canakci, M.,
Sanli, H. 2008. Biodiesel
production from various feedstocks and their
effects on the fuel properties. J Ind Microbiol
Biotechnol 35(5):431-441.
Carvalho AP; Meireles LA; Malcata FX. 2006.
Microalgal reactors: a review of enclosed
system designs and performances. Biotechnol

Prog 22(6):1490-1506.
Chisti, Y. 2007. Biodiesel from microalgae.
Biotechnol Adv 25(3):294-306.
Chisti, Y. 2008. Biodiesel from microalgae beats
bioethanol. Trends Biotechnol 26:126-131.
Chiu, S.-Y., Kao, C.-Y., Tsai. M.-T., Ong, S.-C.,
Chen, C.-H., Lin, C.-S. 2009. Lipid
accumulation and CO2 utilization of
Nannochloropsis oculata in response to CO2
aeration. Bioresource Technol 100(2):833-838
De, B.K., Chaudhury, S., Bhattacharyya, D.K.
1999. Effect of nitrogen sources on -linoleic
acid accumulation in Spirulina platensis.
JAOCS 76(1):156.
De Moura, J.M.L.N., Campbell, K., Mahfuz, A.,
Jung, S., Glatz C.E., Johnson L. 2008.
Enzyme-Assisted Aqueous Extraction of Oil
and Protein from Soybeans and Cream Deemulsification. J Am Oil Chem Soc 85:985995.
De Philippis, R., Sili, C., Paperi, R., Vincenzini,
M.
2001.
Exopolysaccharide-producing
cyanobacteria and their possible exploitation:
A review. J Appl Phycol 13(4):293-299.
Deutsch, C.A., Tewksbury, J.J., Huey, R.B.,
Sheldon, K.S., Ghalambar C.K., Haak, D.C.,
Martin, P.R. 2008. Impacts of climate
warming on terrestrial ectotherms across
latitude. Proc Natl Acad Sci USA
105(105):6668-6672.
Ebi, K.L. 2008. Adaptation costs for climate
change-related cases of diarrhoeal disease,
malnutrition, and malaria in 2030. Global
Health 4:9.
Francisco, E.C., Neves, D. B., Jacob-Lopes, E.,
Franco, T. T. 2010. Microalgae as feedstock
for biodiesel production: carbon dioxide
sequestration, lipid production and biofuel
quality. J Chem Technol Biotechnol 85: 395403.
Fukuda, H., Kondo, A., Noda H. 2001. Biodiesel
fuel production by transesterification of oils. J
Biosci Bioeng 92(5):405-416.
113
Gao, Y., Gregor, Ch., Liang, Y., Tang, D., Tweed.
C. 2009. Algae biodiesel. a feasibility report.
BPRO 29000.
Garibay Hernndez, A., Vzquez-Duhalt, R.,
Snchez Saavedra, M.P., Serrano Carren, L.,
Martnez Jimnez, A. 2009. Biodiesel a partir
de microalgas. BioTecnologa 13(3):38-66.
Gonzlez, C., Marciniak, J., Villaverde, S.,
Garca-Encina, P.A.,
Muoz, R. 2008.
Microalgae-based
processes
for
the
biodegradation
of
pretreated
piggery
wastewaters. Appl Microbiol Biotechnol
80(5):891-898.
Gordillo F.J.L. Goutx, M., Figueroa, F.L., Niell,
F.X. 1998. Effects of light intensity, CO2 and
nitrogen supply on lipid class composition of
Dunaliella viridis. J Appl Phycol 10(2):135144.
Gouveia. L., Oliveira, A.C. 2009. Microalgae as
a raw material for biodiesel production. J Ind
Microbiol Biotechnol 36(2):269-274.
Gouveia, L., Marques, A. E., Lopes da Silva, T.,
Reis, A. 2009. Neochloris oleabundans UTEX
#1185: a suitable renewable lipid source for
biofuel production. J Ind Microbiol Biotechnol
36:821-826.
Greenwell, H.C, Laurens, L.M.L., Shields,. RJ.,
Lovitt, R.W., Flynn, K.J. 2010. Placing
microalgae on the biofuels priority list: a
review of the technological challenges. J R Soc
Interface 7(46):703-726.
Griffiths, M.J., Harrison S.T.L. 2009. Lipid
productivity as a key characteristic for
choosing algal species for biodiesel
production. J Appl Phycol 21(5):493-507.
Grnlund, E. 2002. Microalgae at wastewater
treatment in cold climate. Licentiate Thesis.
Division of Sanitary Engineering. Department
of
Environmental
Engineering,
Lule
University of Technology, SE-971 87, Lule,
Sweden.
Groom, M.J., Gray, E.M., Townsend, P.A. 2008.
Biofuels and biodiversity: principles for
creating better policies for biofuel production.
Conserv Biol 22(3):602-609.
Harmenlen, T., Oonk, H. 2006. Microalgae

biofixation processes: applications and
potential contributions to greenhouse gas
mitigation options. Report order no. 36562.
International network on biofixation of CO2
and greenhouse gas abatement with
microalgae operated under the International
Agency Greenhouse Gas R&D Programme.
Sponsored by EniTecnologie, S.p.A., San
Donato Milanese, Milan, Italy. pp. 45.
Hernndez, E. Olgun, E.J. 2002. Biosorption of
heavy metals influenced by the chemical
composition of Spirulina biomass. Environ
Technol 23:1369-1377.
Hoshida, H., Ohira, T., Minematsu, A., Akada, R.,
Nishizawa, Y. 2005. Accumulation of
eicosapentaenoic acid in Nannochloropsis sp.
in response to elevated CO2 concentrations. J
Appl Phycol 17(1):29-34.
Hu, Q., Sommerfeld, M. 2004. Selection of high
performance microalgae for biorremediation of
nitrate-contaminated groundwater. Technical
report for grant number 01-HO-GR-0113.
School of Life Sciences, Arizona State
University. March 1, 2003 to Frebruary 28,
2004. pp. 13.
Hu, Q., Sommerfeld, M., Jarvis, E., Ghirardi, M.,
Posewitz, M., Seibert, Darzins, A.I. 2008.
Microalgal triacylglycerols as feedstock for
biofuel production: perspectives and advances.
Plant J 54(4):621-639.
Huntley, M.E., Redalje, D.G. 2007. CO2
mitigation
and
renewable
oil
from
photosyntheticmicrobes: a new appraisal.
Mitig Adapt Strateg Glob Change 12(4): 573608.
IPCC, 2002. Cambio climtico y biodiversidad.
Documento
tcnico
V
del
Grupo
Intergubernamental de Expertos sobre el
Cambio Climtico. Gitay, H., Surez, A.,
Dokken, D.J. Watson, R. (eds). 93 pp.
IPCC, 2005. IPCC Special report on carbon
dioxide capture and storage. Prepared by
Working Group III of the Intergovernmental
Panel on Climate Change [Metz, B., Davidson,
O., de Coninck, H.C., Loos, M., Meyer,
(eds.)].
Cambridge
University
Press,
114
Cambridge, United Kingdom and New York,
NY, USA, 442 pp.
IPCC, 2007. Cambio climtico 2007: Informe de
sntesis. Contribucin de los grupos de trabajo
I, II y III al Cuarto Informe de Evaluacin del
Grupo Intergubernamental de Expertos sobre
el Cambio Climtico [Equipo de redaccin
principal: Pachauri, R.K., Reisinger, A.
(directores de la publicacin)]. IPCC, Ginebra,
Suiza, 104 pp.
Jain, R. 2008. Global climate change: impacts and
policy options. Clean Techn Environ Policy
10(1):1-5.
Johnson, M.B., Wen, Z. 2010. Development of an
attached microalgal growth system for biofuel
production. Appl Microbiol Biotechnol
85:525-534.
Khotimchenko, S.V., Yakovleva, I.M. 2005.
Lipid composition of the red alga Tichocarpus
crinitus exposed to different levels of photon
irradiance. Phytochemistry 66(1):73-79.
Khozin-Goldberg, I; Bigogno, C; Shrestha, P;
Cohen, Z. 2002. Nitrogen starvation induces
the accumulation of arachidonic acid in the
freshwater green alga Parietochloris incisa
(Trebuxiophyceae). J Phycol 38(5):991-994.
Kirilenko, A.P., Sedjo, R.A. 2007. Climate
change impacts on forestry. Proc Natl Acad
Sci USA 104(50):19697-19702.
Larsdotter, K. 2006. Microalgae for phosphorus
removal from wastewater in a nordic
climate. A doctoral thesis from the School
of Biotechnology, Royal Institute of
Technology, Stockholm, Sweden. pp. 44.
Lee, A.K, Lewis, D.M., Ashman, P.J. 2009.
Microbial flocculation, a potentially low-cost
harvesting technique for marine microalgae for
the production of biodiesel. J Appl Phycol
21:559-567.
Li, Y., Qin, J.G. 2005. Comparison of growth and
lipid content in three Botryococcus braunii
strains. J Appl Phycol 17(6):551-556.
Li, Q., Du, W., Liu, D. 2008a. Perspectives of
microbial oils for biodiesel production. Appl
Microbial Biotechnol 80:749-756-
Li, Y., Horsman, M., Wu, N., Lan, C.Q., DoboisCalero, N. 2008b. Biofuels from microalgae.
Biotechnol Prog 24(4):815-820.
Li, Y., Horsman, M., Wang, B., Wu, N., Lan,
C.Q. 2008c. Effects of nitrogen sources on cell
growth and lipid accumulation of green algae
Neochloris oleabundans. Appl Microbiol
Li, X., Hu, H-Y., Yang, J. 2010. Lipid
accumulation and nutrient removal properties
of a newly isolated freshwater microalga,
Scenedesmus sp. LX1, growing in secondary
effluent. New Biotechnol 27(1)59-63.
Liang, Y., Sarkany, N., Cui, Y. 2009. Biomass
and lipid productivities of Chlorella vulgaris
under
autotrophic,
heterotrophic
and
mixotrophic growth conditions. Biotechnol
Lett 31:1043-1049.
Liu, Z.Y., Wang, G.C., Zhou, B.C. 2008. Effect
of iron on growth and lipid accumulation in
Chlorella vulgaris. Bioresource Technol
99(11):4717-4722.
Ma, J. 2009. Microalgae for biodiesel, CO2
capture and wastewater treatment. UNLV
Renewable Energy Symposium.
Majer, S., Mueller-Langer, F., Zeller, V.,
Kaltschmitt, M. 2009. Implications of
biodiesel production and utilization on global
climate - a literature review. Eur J Lipid Sci
Technol 111(8):747-762.
Mallick, N. 2002. Biotechnological potential of
immobilizated algae for wastewater N, P and
metal removal: a review. Biometals 15(4):
377-390.
Mandal, S., Mallick, N. 2009. Microalga
Scenedesmus obliquus as a potential source for
biodiesel production.
Appl Microbiol
Mata, T.M., Martins A.A., Caetano N.S. 2010.
Microalgae for biodiesel production and other
applications: A review. Renew Sust Energ Rev
14:217-232.
Matsunaga, T., Matsumoto, M., Maeda, Y.,
Sugiyama, H., Sato, R., Tanaka, T. 2009.
Characterization of marine microalga,
Scenedesmus sp. strain JPCC GA0024 toward
115
biofuel production. Biotechnol Lett 31:13671372.
wastewater recycling process under tropical

conditions. J Appl Phycol 15(2-3): 249-257.
Mazzuca-Sobczuka, T., Chisti, Y. 2010. Potential

fuel oils from the microalga Choricystis minor.
J Chem Technol Biotechnol 85:100-108.
Phang, S.M., Miah, M.S., Yeoh, B.G., Hashim,

M.A. 2000. Spirulina cultivation in digested
sago starch factory wastewater. J Appl Phycol
12(3-5):395-400.
Mendoza, H., Molina Cedres, C., de la Jara, A.,

Nordstrm, L., Freijanes, K., Carmona, L.
2008. Variacin cuantitativa y cualitativa de la
composicin
en
cidos
grasos
de
Cryphtecodinium cohnii en condiciones de
supresin de nitrgeno. Grasas Aceites
59(1):27-32.
Milledge, J.J. 2010. The challenge of algal fuel:
economic processing of the entire algal
biomass. Materials Engineering Newsletter
1(6):4-5.
Muoz, R. Guieysse, B. 2006. Algal-bacteria
processes for the treatment of hazardous
contaminants: a review. Water Res 40:27992815.
Molina Grima, E., Acin Fernndez, F.G., Garca
Camacho,
F.,
Chisti.
Y.
1999.
Photobioreactors: light regime, mass transfer,
and scaleup. J Biotechnol 70(1-3):231-247.
Molina Grima, E., Belarbi, E.H., Acin
Fernndez, F.G. Robles Medina, A., Chisti, Y.
2003. Recovery of microalgal biomass and
metabolites: process options and economics.
Biotechnol Adv 20:491-515.
Morton, J.F. 2007. The impact of climate change
on smallholder and subsistence agriculture.
Proc Natl Acad Sci USA 104(50):1968019685.
Olgun, E.J., Galicia, S., Angulo-Guerrero, O.,
Hernndez, E. 2001. The effect of low light
flux and nitrogen deficiency on the chemical
composition of Spirulina sp. (Arthrospira)
grown on digested pig waste. Bioresource
Technol 77(1):19-24.
Olgun, E.J. 2003. Phycoremediation: key issues
for cost-effective nutrient removal processes.
Biotechnol Adv 22(1-2):81-91.
Olgun, E.J., Galicia, S., Mercado, G., Prez, T.
2003. Annual productivity of Spirulina
(Arthrospira) and nutrient removal in a pig
Pienkos, P.T, Darzins, A. 2009. The promise and

challenges of microalgal-derived biofuels.
Biofuels Bioprod Bioref 3:431-440.
Powell, N., Shilton, A.N., Pratt,. S., Chisti, Y.
2008. Factors influencing luxury uptake of
phosphorous by microalgae in waste
stabilization ponds. Environ Sci Technol
42(16):5958-5962.
Radakovits, R., Jinkerson, R.E., Darzins, A.,
Posewitz,. MC. 2010. Genetic Engineering of
Algae for Enhanced Biofuel Production.
Eukaryotic Cell 9 (4): 486-501.
Rivera, I., Villanueva, G., Sandoval, G. 2009.
Produccin de biodiesel a partir de residuos
grasos animales por va enzimtica. Grasas
Aceites 60(5):469-474.
Rodolfi, L., Zitelli, G.C., Bassi, N., Padovani, G.,
Biondi, N., Bonini, G., Tredici, M.R. 2009.
Microalgae for oil: Strain selection, induction
of lipid synthesis and outdoor mass cultivation
in a low-cost photobioreactor. Biotechnol
Bioeng 102(1):100-112.
Rosenberg, J.N., Oylerl, G.A., Wilkinson, L.,
Betenbaugh, M.J. 2008. A green light for
engineered algae: redirecting metabolism to
fuel a biotechnology revolution. Curr Opin
Rutz, D., Janssen, R. 2008. Biofuel technology
handbook. WIP Renewable Energies. Project
report Biofuel Marketplace 2nd version. 152p.
Ryan, C. 2009. Cultivating clean energy. The
promise of algae biofuels. This report was
carried out from July 2008 to June 2009 for
the Natural Resources Defense Council
(NRDC) under the sponsorship of the Gordon
and Betty Moore Foundation (Palo Alto, CA).
Preparation was supervised by NRDC and
Terrapin Bright Green and conducted with the
advice and assistance of the NRDC Algae
Biofuels Advisory Committee.
116
Samori, C., Torri, C., Samori, G., Fabbri, D.,
Galletti, P., Guerrini, F,. Pistocchi, R.,
Tagliavini,
E. 2010.
Extraction
of
hydrocarbons from microalga Botryococcus
braunii with switchable solvents. Bioresource
Technol 101(9): 3274-3279.
Schenk, P.M., Thomas-Hall, S.R., Stephen, E.,
Marx, U.C., Mussgnug, J.H., Posten, C.,
Kruse, O., Hankamer, B. 2008. Second
generation
biofuels:
high-efficiency
microalgae for biodiesel production. Bioenerg
Res 1(1):20-43.
Shales, S. 2007. Biodiesel: a microbiologists
perspective. Microbiologist June 26-29.
Sheehan J, Dunahay, Benemann, T. J, Roessler,
P. 1998. A look back at the U.S. Department
of Energys Aquatic Species Program:
Biodiesel from algae. Close-out report.
National Renewable Energy Lab, Department
of Energy, Golden, Colorado, U.S.A. Report
number NREL/TP-580-24190, dated July
1998.
Shifrin, N., Chisholm. S. 1980. Phytoplankton
lipids: environmental influences on production
and possible comercial applications. In:
(Shelef, G., Soeder, C. eds.) Algal Biomass
Elsevier, Amsterdam, pp. 627-645.
marine microalgae Dunaliella cells. J Biosci

Bioeng 101(3):223-226.
Tornabene, T.G., Holzer, G., Lien S., Burris, N.
1983. Lipid composition of the nitrogen
starved green alga Neochloris oleoabundans.
Enzyme Microb Tech 5(6):435-440.
Tran, H.L., Hong, S.J., Lee C.G. 2009. Evaluation
of extraction methods for recovery of fatty
acids from Botryococcus braunii LB 572 and
Synechocystis sp. PCC 6803. Biotechnol
Bioproc E 14:187-192.
Uduman, N., Qi, Y., Danquah, M.K., Forde, G.M,
Hoadley, A. 2010. Dewatering of microalgal
cultures: A major bottleneck to algae-based
fuels. J Renew Sust Energ 2: 012701-012715.
Ugwu, C.U., Aoyagi, H., Uchiyama, H. 2008.
Photobioreactors for mass cultivation of algae.
Bioresource Technol 99(10):4021-4028.
Vandamme, D., Foubert, I., Meesschaert, B.,
Muylaert, K. 2009. Flocculation of microalgae
using cationic starch. J Appl Phycol DOI
10.1007/s10811-009-9488-8.
Vasudevan, P.T., Briggs, M. 2008. Biodiesel
production-current state of the art and
challenges. J Ind Microbiol Biotechnol
35(5):421-430.
Solovchenko, A.E., Khozin-Goldberg, I., DidiCohen, S., Cohen, Z., Merzlyak, M.N. 2008.
Effects of light intensity and nitrogen
starvation on growth, total fatty acids and
arachidonic acid in the green microalga
Parietochloris incisa. J Appl Phycol
20(3):245-251.
Wang, B., Li, Y., Wu, N., Lan, C.Q. 2008. CO2
bio-mitigation using microalgae. Appl
Microbiol Biotechnol 79(5):707-718.
Spolaore, P., Joannis-Cassan, C., Duran, E.,

Isambert, A. 2006. Commercial applications of
microalgae. J Biosci Bioeng 101(2):87-96.
Wogan, D.M., Da Silva, A.K., Webber, M.E.,

Stautberg, E. 2008. Algae: pond powered
biofuels. ATI Cleanenergy Incubator. The
University of Texas at Austin. pp. 23.
Takagi, M., Watanabe, K., Yamaberi, K.,

Yoshida, T. 2000. Limited feeding of
potassium nitrate for intracellular lipid and
triglyceride accumulation of Nannochloris sp.
UTEX LB1999. Appl Microbiol Biotechnol
54(1):112-117.
Takagi, M., Karseno, S., Yoshida, T. 2006. Effect
of salt concentration on intracellular
accumulation of lipids and triacylglyceride in
Widjaja, A., Chien, C.C., Ju Y.H. 2009. Study of

increasing lipid production from fresh water
microalgae Chlorella vulgaris. J Taiwan Inst
Chem E 40(1):13-20.
WWF. 2004. Living planet report. World Wide

Fund for Nature (World Wildlife Fund). Loh,
J., Wackernagel, M. (eds). Gland, Switzerland.
Xiong, W., Li, X., Xiang, J., Wu, Q. 2008. Highdensity fermentation of microalga Chlorella
protothecoides in bioreactor for microbiodiesel production. Appl Microbiol Biotechnol
78(1):29-36.
Lpez-Agero et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):117-123
117
Nota cientfica
Spirulina (Arthrospira) platensis en la prevencin del fotodao

celular producido por luz ultravioleta en ratones CF1
Luca Lpez-Agero1, Mnica M. Storni1, M. Cristina Zaccaro1, Ana M. Stella2
y Gloria Zulpa1*.
1
Laboratorio de Fisiologa Vegetal y Biologa de Cyanobacteria, Facultad de Ciencias Exactas y

Naturales, Universidad de Buenos Aires, Intendente Giraldes 2620 CP 1428,
Ciudad Autnoma de Buenos Aires, Argentina.
2
Laboratorio de Ecoporfirinas, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires.
Consejo Nacional de Investigaciones Cientficas y Tcnicas (CONICET)
*
Autor de correspondencia: cyanob@bg.fcen.uba.ar
Resumen
El fotoenvejecimiento ocurre por exposicin a radiaciones solares de longitudes de onda del
ultravioleta (UV), debido a la liberacin de un exceso de radicales libres, los cuales pueden
producir la ruptura del DNA, daar los lpidos de las membranas celulares e interferir con el
funcionamiento celular. En la bsqueda de compuestos bioactivos capaces de reducir el aumento
en la produccin de radicales libres, originado por el estrs medioambiental, se ha sealado a las
cianobacterias como fuente de numerosas sustancias bioactivas. El objetivo del presente trabajo
ha sido evaluar el efecto protector de Spirulina (Arthrospira) platensis en ratones expuestos a luz
UVC. Ratones hembras adultas CF1, fueron tratados con S. (Arthrospira) platensis como
complemento dietario y aplicacin sobre la piel del extracto crudo etanlico de biomasa, e
irradiados diariamente. Los ratones se pesaron semanalmente y al final de los tratamientos se
extrajo sangre en la cual se determin la actividad de creatina cinasa (ATP creatina Nfosfotransferasa, EC2.7.3.2) en plasma heparinizado y se realizaron cortes histolgicos de la piel
para evaluar el dao celular. La actividad de creatina cinasa, que aument por efecto del UVC,
disminuy un 49.44% con respecto al control, cuando se aplica a la piel con 100 L de extracto
crudo etanlico de S. (Arthrospira) platensis. En tanto que administrada como complemento
dietario, disminuy la actividad de creatina cinasa en un 27.21%. En conclusin, ambos
tratamientos disminuyeron el fotodao manteniendo la integridad de la epidermis e
incrementando el nmero de folculos pilosos que en algunos casos dan origen a pelos dobles o
triples lo cual indica que S. (Arthrospira) platensis es una fuente promisoria de productos
naturales con efecto antienvejecimiento.
Palabras clave: cianobacteria, Spirulina (Arthrospira) platensis, creatina cinasa, ratones,
fotodao.
118
Abstract
Exposition to solar light may cause photoaging, due to the production in excess of free radicals,
responsible for the DNA molecule rupture, cellular membrane lipid damage and cellular
metabolism interference. In the search of new bioactive compounds capable of reducing the free
radicals produced by environmental stress, Cyanobacteria have been cited as a source of a variety
of promising substances. The aim of this work is to evaluate the protective effect of
Spirulina(Arthrospira) platensis on mice exposed to UVC light. Female adult mice CF1 were
given S. (Arthrospira) platensis as dietary supplement or treated with biomass ethanolic crude
extract topical formulation, and were daily irradiated. Mice were weighted every week. In order
to evaluate the cellular damage, at the end of the experiment, creatin kinase (ATP creatin kinase
N-phosphotranferase, EC 2.7.3.2) activity was determined in heparinized plasm and histological
slices of the skin were prepared. Creatin kinase activity increased with UVC radiation and
decreased by 49.44% compared with the control when the skin was treated with 100 S.
(Arthrospira) platensis ethanolic crude extract. Given as dietary supplement, S. (Arthrospira)
platensis decreased creatin kinase activity by 27.21%. Both treatments decreased the
photodamage keeping the epidermal integrity and increasing the number of hair follicles which
occasionally produced double or triple hairs indicating that S. (Arthrospira) platensis is a
promising source of natural compounds with anti-aging effect.
Keywords: Cyanobacteria, Spirulina (Arthrospira) platensis, creatin kinase, mice, photodamage.
1. Introduccin
Los rayos ultravioleta lesionan los
queratinocitos, melanocitos y fibroblastos
cutneos porque provocan la liberacin de
radicales libres, los cuales pueden producir
la ruptura del ADN, daar los lpidos de las
membranas celulares e interferir con el
funcionamiento celular (Herschenfeld y
Gilchrest 1998). En consecuencia, la
exposicin repetida a la luz solar produce
daos en la piel tales como arrugas, manchas
y textura engrosada, y tambin alteraciones
enzimticas, dando como resultado su
envejecimiento.
Este fotoenvejecimiento ocurre por exposicin a radiaciones solares ultravioleta (UV)
que se clasifican en ultravioleta A (UVA) de
320 a 400 nm, ultravioleta B (UVB) de 280
a 320 nm y ultravioleta C (UVC) de 100 a
290 nm. Las longitudes de onda entre 340 y
400 nm tienen efecto a nivel de dermis y
actan sinrgicamente con los rayos UVB en
el fotoenvejeci-miento y en la carcino-
gnesis. El UVC es el principal agente de la

carcinognesis, y puede producir adems
quemaduras severas. La radiacin UVC
puede ser un problema para las personas que
viven a gran altura sobre el nivel del mar, o
en zonas con alta polucin donde la capa de
ozono est disminuida (Ke et al., 2008).
Existe un especial inters por encontrar una
fuente natural que produzca compuestos
bioactivos capaces de reducir el aumento en
la produccin de radicales libres originado
por el estrs medioam-biental, en particular
por luz UV. En la bsqueda de este tipo de
compuestos se ha sealado a las cianobacterias como fuente de numerosas
sustancias bioactivas, tales como fitorreguladores con actividad de citocininas
(rdg y Pulz, 1996) que ejercen efecto
antienvejecimiento y regulan la divisin
celular (Kieber, J. 2006). Tal es el caso de la
citocinina sinttica cinetina, que agregada a
cultivos de piel humana, retrasa la aparicin
de caractersticas asociadas con el envejecimiento celular, evitando el dao oxidativo y
119
glioxidativo de las protenas y el ADN
(Arcuri, 2001; Hipkiss, 2001; Rattan, 2002).
El objetivo del presente trabajo ha sido
evaluar el efecto protector de Spirulina
(Arthrospira) platensis (Cianobacteria) bajo
la forma de complemento dietario o
aplicacin cutnea, en ratones expuestos a
luz UVC.
2. Materiales y mtodos
2.1 Cepa cianobacteriana y obtencin de
biomasa
Spirulina (Arthrospira) platensis (Cianobacteria)
pertenece a la coleccin de
cultivos del Laboratorio de Fisiologa
Vegetal y Biologa de Cyanobacteria,
depositada en Facultad de Ciencias Exactas
y Naturales, Universidad de Buenos Aires,
adquirida comercialmente. Fue cultivada en
un fotobiorreactor de 2 L de capacidad bajo
un sistema semi-continuo,
en medio
Zarrouk (1966). El cultivo fue mantenido
con luz fluorescente a 45 mol fotn m-2 s-1
(Quantum Radiometer Photometer, modelo
LI-185B; Li-Cor, Lincoln, Nebraska 68504,
USA), y un fotoperodo de 12:12, aireacin
estril y a temperatura controlada a 37C.
Cada 15 das se retir 1L de cultivo y se
complet el nivel con adicin de medio
fresco. Para corroborar que el material biolgico
se encontraba en el mismo estado fisiolgico se
hicieron evaluaciones bioqumicas y de
crecimiento. Valores promedio: densidad
ptica promedio a 620 nm: 0.168+0.003;

peso fresco promedio en g/100 mL de
cultivo: 10.00+1.476; peso seco promedio en
g/100 mL de cultivo: 0.829+0.001 y
protenas totales en mg/mL de cultivo 0.175
+ 1.60.
La biomasa de S. platensis obtenida fue

separada del medio de cultivo por filtracin,
secada al aire, pulverizada y fraccionada en
dosis para ser usada como complemento
dietario. Con una alcuota de biomasa fresca
se prepar el extracto crudo etanlico (Zulpa
de Caire et al., 1990, modificado).
2.2 Ratones CF1

Hembras adultas crecidas y mantenidas en el
Bioterio de la Facultad de Ciencias Exactas
y Naturales (Universidad de Buenos Aires).
2.3 Diseo experimental
36 ratones CF1 de 6 meses (31.31 2.21 g
cada uno), se dividieron en 6 grupos de 6
ratones cada uno y se alojaron en jaulas
individuales. Fueron alimentados durante 30
das con producto comercial balanceado
con/sin complemento dietario y agua ad
libitum segn correspondiera, recibiendo
diariamente los siguientes tratamientos:
I. Dieta Comercial (DC)
II. DC+ irradiacin con UVC.
III. DC+ irradiacin con UVC+flancos
derecho e izquierdo depilados (1 cm2)
IV. DC+ irradiacin con UVC+flancos
derecho e izquierdo depilados (1cm2)
+aplicacin cutnea de cada flanco con 100
L de extracto etanlico de S. platensis.
V. DC+1.5 mg de S. platensis como
complemento dietario
VI. DC+1.5 mg de S. platensis como
complemento dietario+irradiacin con UVC
En los tratamientos con irradiacin (5
minutos) se utiliz una lmpara Philips,
4W/G4 T5 Holland., = 280 nm, colocada a
20 cm de distancia de los animales.
2.4 Parmetros morfolgicos y bioqumicos
Los ratones se pesaron semanalmente. Para
evaluar el dao celular al finalizar los
tratamientos se extrajo sangre por puncin
ocular y se dos la actividad de creatina
cinasa
(CC):
ATP
creatina
Nfosfotransferasa, EC2.7.3.2 en plasma
heparinizado, por el mtodo UV optimi-zado
(CC-NAC: creatina cinasa activada por Nacetil cistena), con reactivos Wiener
Laboratorios SAIC-Argentina.
2.5 Cortes histolgicos
A los 30 das de tratamiento los ratones
fueron anestesiados con ter etlico y luego
120
sangrados. Para el estudio de cortes
histolgicos seriados se obtuvieron muestras de piel de todos los tratamientos (de la
parte depilada en el caso de los trata-mientos
3 y 4). Dichas muestras fueron fijadas con
formaldehdo
4%
en
(solucin
amortiguadora) 0.1M fosfato para realizar
cortes de cristato, coloreados con el
Tricrmico de Masson (Ibaez et al., 2007)
y posteriormente observadas al microscopio
ptico (20x).
2.6 Anlisis estadstico
El diseo experimental fue completamente
aleatorio con las
repeticiones correspondientes en cada caso (n=6). Los datos
fueron sometidos a un anlisis de varianza
(ANOVA) y para detectar diferencias entre
tratamientos y entre diferentes tiempos se
us la prueba de Tukey HDS (p<0.05).
3. Resultados
Los tratamientos aplicados durante los 30
das del experimento no modificaron el peso
corporal de los ratones adultos CF1
verificndose solamente alteraciones en el
metabolismo y en la piel.
Para evaluar el dao celular se determin la
actividad de creatina cinasa en plasma de
sangre heparinizada de los ratones para cada
tratamiento (Tabla 1). La actividad de la
enzima aument un 28.59% en el
tratamiento II (DC+irradiacin con UVC)
respecto del control I (DC). El dao celular
medido por la enzima creatina cinasa fue
mayor, con un 41.86%, en el tratamiento III
(DC+irradiacin con UVC+flancos derecho
e izquierdo depilados, 1 cm2) con respecto al
control I (DC). La depilacin de los flancos
derecho e izquierdo acenta en un 10.32% el
aumento de la enzima con respecto al
tratamiento II no rasurado. Por otra parte, la
actividad de creatina cinasa disminuye un
44.23 y 49.44% en el tratamiento IV (DC+
irradiacin con UVC+flancos derecho e
izquierdo depilados (1cm2) + aplicacin

cutnea en cada flanco con 100 L de
extracto etanlico de S. platensis), con
respecto a los controles irradiados (II y III).
En el tratamiento V (DC+1.5 mg de S.
platensis como complemento dietario), la
actividad de creatina cinasa no muestra
diferencia significativa con respecto al
tratamiento I; mientras que en el tratamiento
VI (DC+1.5 mg de S. platensis como
complemento dietario + irradiacin con
UVC), la actividad de creatina cinasa
disminuye un 27.21% con respecto al
tratamiento II.
Los estudios histolgicos muestran que en el
tratamiento I la piel est completamente
recubierta por la epidermis (Figura 1). Los
folculos pilosos son cortos, no pasan al
celular subcutneo, encontrndose posiblemente en la fase de catagen o telogen
(Cotsarelis, 2006). En contraste, la
irradiacin con UVC (tratamiento II)
provoca
la
prdida
de
epidermis,
observndose zonas de dermis desnuda. Los
folculos pilosos se encuentran en una etapa
aparentemente regresiva, muchos incluso
carecen de pelo (Figura 2). En el tratamiento
III, que difiere del II por los flancos
depilados, se observa lo mismo que en el
caso anterior (Figura 3). En el tratamiento IV
en el que la piel depilada est protegida por
una aplicacin con extracto de S. platensis,
la epidermis est conservada a pesar de la
irradiacin mostrando ms folculos que en
los especmenes no tratados. El extremo
basal del folculo parece tener una forma
diferente y se aproxima al celular
subcutneo; lo cual podra ser el comienzo
de anagen. Se observan folculos con pelos
dobles o triples (Figura 4). Los animales que
recibieron S. platensis como complemento
dietario no mostraron diferencias con el
tratamiento I (Figura 5). La epidermis est
conservada.
Los folculos pilosos son
cortos, no pasan al celular subcutneo, en
tanto que en el tratamiento VI donde los
121
animales son irradiados con luz UVC, los
folculos se encuentran en fase de
crecimiento (anagen), son ms largos y
tienen un bulbo muy desarrollado, adems

de mostrar una epidermis completa (Figura
6).
Tabla 1: Actividad enzimtica de creatina cinasa (U/L) en plasma heparinizado de ratones bajo tratamientos
del I al VI.
II
48.80+0.35a
62.75+0.50 b
TRATAMIENTOS
III
IV
69.23+0.45 c
35.00+0.35 a
V
44.71+0.46 a
VI
45.67+0.28 a
Tratamientos: I. Dieta Comercial DC; II. DC+5 min diarios de irradiacin con UVC; III. DC+5 min diarios de
irradiacin con UVC con flancos derecho e izquierdo depilados; IV. DC+5 min diarios de irradiacin con
UVC con +flancos derecho e izquierdo depilados + aplicacin cutnea en cada flanco con extracto etanlico
100 L de S(Arthrospira) platensis ; V. DC+1.5mg de S.(Arthrospira) platensis como suplemento dietario;
VI. DC+1.5mg de S. (Arthrospira) platensis como suplemento dietario+5 min diarios de irradiacin con UVC.
Diferentes letras indican diferencias significativas (p< 0.05).
Figura 1. Corte histolgico de piel de ratones CF1

del Tratamiento I.

del Tratamiento II.

del Tratamiento III.

del Tratamiento IV.
122

del Tratamiento I.
4. Discusin
Se sabe que niveles altos de creatina cinasa
indican una alteracin del funcionamiento
celular que puede darse por diversos factores
tales como la edad, el gnero, la raza, la
masa muscular, la actividad fsica y la
condiciones ambientales (Brancaccio et al.,
2008). Si bien en la bibliografa consultada
no se consignan datos referentes a la relacin
entre los niveles de CC y tratamientos con
S.(Arthrospira) platensis, hemos obser-vado,
en las condiciones de nuestro experimento,
que tanto la ingesta de S. (Arthrospira)
platensis como la aplicacin de sus
productos intracelulares protegen contra el
fotodao. Este efecto podra deberse a la
presencia en S. (Arthrospira) platensis de
sustancias con actividad biolgica, tales
como: reguladores del crecimiento vegetal,
carotenos, vita-minas, etc. (Zulpa de Caire et
al., 1979; Kapoor y Mehta, 1993). El efecto
benfico se verifica tambin en los estudios
histolgicos realizados, que muestran
resultados similares a los inferidos por
actividad de la CC.

del Tratamiento IV.
contra el fotodao, medido por la actividad

de la enzima CC indicadora de dao celular.
As, S. (Arthrospira) platen-sis produce
sustancias con efecto benfico dando
proteccin a la epidermis y favore-ciendo el
incremento del nmero de folculos pilosos
que en algunos casos dan origen a pelos
dobles y triples.
Finalmente, los resultados obtenidos en el
presente trabajo de investigacin indica que
S. (Arthrospira) platensis es una fuente
promisoria de productos naturales con efecto
antienvejecimiento.
Reconocimientos
Dra ngela Suburo, Universidad Austral,
Argentina. (CONICET), por la realizacin e
interpretacin de los cortes histolgicos.
Wiener Laboratorios SAIC-Argentina, por la
gentil donacin de los reactivos utilizados en
la determinacin de la actividad enzimtica.
Este trabajo ha sido realizado en el marco
del subsidio UBACYT X844, de la
Universidad de Buenos Aires, Argentina.
Referencias
5. Conclusiones
Tanto la ingesta de S. (Arthrospira) platensis
como la aplicacin cutnea con extracto
crudo etanlico de la biomasa protegen
Arcuri, A.M. 2001. N6 furfuryladenina. Dermac

1:42-43.
Brancaccio, P., Maffulli, N., Buonauro, R.,
Limongelli, F.M. 2008. Serum enzyme
123
monitoring in sports medicine. Clinical J
Sports Medicine 27(1):1-18.
Cotsarelis, G. 2006. Epithelial stem cells: A
folliculocentric view. J Invest Dermatol
126:1459-1468.
Herschenfeld, R.E., Gilchrest, B.A. 1998. The
accumulative effects of ultraviolet radiation
on the skin: photoageing. In: Hawk, J.L.M.
(Ed) Photodermatology. Oxford University
Press. New York, USA. pp 69-87.
Hipkiss, A.R. 2001. On the struggle between
chemistry and biology during aging.
Implications for DNA repair, apoptosis and
proteolysis, and a novel route of intervention.
Biogerontology 2(3):173-178.
Ibaez, J., Sosa, F., Vern, G., Vadillo, C.,
Aguirre, J., Navarro, S., Acevedo, S. 2007.
Falso seudoaneurisma del ventr-culo
izquierdo. Rev Argent Cardiol 75(5):21-23.
Kapoor, R., Mehta, U. 1993 Utilization of carotene from Spirulina platensis by rats.
Plant Food Hum Nutr 43:1-7.
Ke, M.S., Camouse, M.M., Swain, F.R.,
Oshtory, S., Matsui, M., Mammone, T.,
Maes, D., Cooper, K.D., Stevens, S.R.,
Baron, E.D. 2008. UV protective effects of
DNA repair enzymes and RNA lotion.
Photochem Photobiol 84(1): 180-184.
Kieber, J. 2006. Cytokinins: Regulators of cell
division. In: Taiz, L., Zeiger, E. (Eds.) Plant
Physiology. Sinauer Associates, Inc.,

Publishers, Sunder-land, Massachusetts. pp.
543-569.
rdg, V., Pulz,
cytokinin-like
Arthronema
determined by
82:57-67.
O. 1996. Diurnal changes of

activity in a strain of
africanum (Cyanobacteria),
bioassay. Algological Studies
Rattan, S.I.S. 2002. N6-Furfuryladenine (kinetin)

as a Potential Anti-Aging Molecule. J AntiAging Med 5(1):113-116.
Zarrouk, C. 1966. Contributin ltude dune
Cyanophyce. Influence de divers facteurs
physiques et chimiques sur la croissance et la
photosynthse de Spirulina maxima (Setch et
Garner) Geitler. Tesis PhD Universidad de
Pars, Francia. 198 p.
Zulpa de Caire, G., Zaccaro de Mul, M.C.,
Storni de Cano, M. 1979. Productos
extracelulares de Nostoc muscorum Ag. (cepa
79 a) obtenidos en medios con y sin nitrgeno
combinado. I: sus efectos sobre plntulas de
arroz. Int J Exp Bot(Phyton) 37(1):1-13.
Zulpa de Caire, G., Storni de Cano, M., Zaccaro
de Mul, M.C., Halperin, D.R. de. 1990.
Antimycotic
products
from
the
Cyanobacterium Nostoc muscorum against
Rhizoctonia solani. Int J Exp Bot (Phyton)
51(1):1-4.

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Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal

Volumen 1 No. 1, 2010

ISSN en trmite. Nmero de folio 00000-355

Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal

Universidad de Almera, Espaa

Instituto de Ecologa, A.C.,

Katiushka Arvalo Nio

Adriana Matiz Villamil

Universit degli Studi di

scar Monroy Hermosillo

Universidade de Mogi das

Jorge Luis Folch Mallol

Marcia Morales Ibarria

Leopoldo Naranjo Briceo

Jorge Gmez Hernndez

Mariano Gutirrez Rojas

Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal

Gloria Snchez Galvn

Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal

Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal

Artculos originales de investigacin

Pacheco et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):6-15

Effect of culture medium and nutrient concentration on fatty

Author of correspondence: pacheco@uabcs.mx

may affect their relative availability for

2. Materials and methods

(15.6%). These proportions matched the

Thiamine HCl (B1)

2.2 Acclimation of the microalgae in the

8. The specific growth rate was measured as

analysis of variance (ANOVA). When

The lowest SAFA concentration was found

(22:6 n-3) was only detected in the AF/2

Sum HUFA (ARA,

South and Whittick (1987) described that

associated that regulate the intake of NO-3

total lipid extraction and purification. Can J

Carrapiso, A.I., Garcia, C. 2000. Development in

Meireles, L.A., Catarina A. Guedes A.C.,

White, J.N.C. 1987. Biochemical composition

Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30

Variacin estacional de arsnico total en algas comestibles

Centro Regional de Investigacin y Desarrollo Cientfico Tecnolgico (CRIDECIT), Universidad

Autor de correspondencia: aaperez@sinectis.com.ar

Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30

capacidad de dilucin infinita y que por lo

Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30

aos, se estn convirtiendo en una autntica

Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30

2.1 Zona de Muestreo

Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30

En el laboratorio se lavaron con agua ultra

2.3 Control de calidad del mtodo analtico

Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30

2.4 Determinacin de humedad y molienda

por Indura S.A. (Argentina) en ambos casos.

Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30

Mata y Punta Maqueda durante el ao 2002.

industriales y. petroleros no habra descargas

Perez et al., 2010. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 1(1):16-30

Superndices distintos en la misma filas indican diferencias estadsticamente significativas (p<0,05).

Este comportamiento podra sugerir que

excepto en AM donde no existi variacin