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Alimentos
Noticias Relacionadas
II.
Vigilancia de riesgos
La biotecnologa es una disciplina que se desarrolla con enfoques multidisciplinarios, ya que involucra a varias
ciencias como la biologa, la gentica, la agronoma, la qumica, y la medicina. Sus aplicaciones poseen un
carcter multisectorial, con grandes repercusiones en prcticamente todas las industrias, entre ellas la
farmacutica, la agrcola y la alimentaria.
En la produccin de alimentos, el impacto de la biotecnologa es evidente en procesos como la fabricacin de
bebidas alcohlicas o del queso, a tal grado que los productores han modificado las tcnicas de elaboracin
tradicional para dar paso a mejoras basadas en innovaciones biotecnolgicas.
Dentro de los laboratorios de investigacin, los especialistas en biotecnologa alimentaria, evalan la
introduccin del conocimiento gentico de los seres vivos, particularmente de los microorganismos, para
obtener ventajas en trminos del proceso.
Un ejemplo es la cerveza ligera, aquella a la que se le introdujo una levadura que puede degradar con mayor
eficiencia los carbohidratos de la cebada. En este caso, los cientficos realizaron un mejoramiento gentico
intencional que permiti una optimizacin del proceso. Logros similares prometen ser determinantes para el
futuro alimentario.
Para el investigador Agustn Lpez Mungua Canales, la biotecnologa alimentaria podra ser una solucin
tecnolgica que ayude a contender con una situacin tan compleja como la escasez de comestibles.
Los riesgos de la biotecnologa han suscitado una controversia entre cientficos. Por un lado, quienes apoyan
la siembra de organismos genticamente modificados por sus ventajas para aumentar la productividad; por
otro, los que alertan que puede traer daos irreparables al ambiente, destruccin o desaparicin de algunas
variedades de plantas.
En el caso de las variedades nativas de maz en Mxico, algunos cientficos han expresado que es mejor
evitar la siembra de maz transgnico como una medida precautoria. Actualmente, varios grupos de
investigacin en el pas y el mundo estn dedicados a reunir conocimiento que permita confirmar o rechazar
los posibles riesgos ambientales de las plantas transgnicas.
Los crticos manifiestan la necesidad de contar con estatutos ms rigurosos y completos, destinados a la
regulacin del desarrollo y uso de productos derivados de la biotecnologa alimentaria. Sin duda, frente al
aumento de la poblacin, urgen reacciones ante la probabilidad de una mayor crisis alimentaria.
2.
La Organizacin Mundial de la Salud ha definido los probiticos como organismos vivos que ingeridos en
dosis definidas ejercen efectos beneficiosos para la salud. Los microorganismos ms empleados con este fin
en la industria alimentaria son las bacterias lcticas (fundamentalmente, Streptococcus termophilus y
microorganismos del gnero Lactobacillus) y las levaduras (principalmente Saccharomyces cerevisiae). Los
alimentos que contienen microorganismos probiticos suelen presentarse al consumidor en forma de yogur u
otros derivados lcteos fermentados. La importancia que los consumidores confieren a este tipo de alimentos
en la sociedad actual se refleja en su considerable volumen de produccin y ventas.
2b) Como factoras celulares para la produccin de enzimas y otros compuestos
Desde hace aproximadamente tres dcadas, numerosas enzimas (renina y otras proteasas, lactasas,
amilasas, etc.) y otros compuestos como aditivos (espesante E-415: goma xantana; conservador E-234:
nisina; etc.), aminocidos (potenciador del sabor E-621: glutamato monosdico; agente de tratamiento de la
harina E-921: cistena; etc.), vitaminas (colorante E-101: riboflavina; antioxidante E-300: cido ascrbico, etc.),
empleados en la industria alimentaria, pueden producirse con la ayuda de microorganismos modificados
genticamente. Este mtodo de produccin presenta las siguientes ventajas: (i) permite producir compuestos
que no se pueden obtener por sntesis qumica o que estn producidos por microorganismos difciles de
cultivar; (ii) ofrece la posibilidad de optimizar la produccin de los compuestos de inters y de reducir los
costes de produccin; y (iii) ocasiona un menor impacto ambiental que la sntesis qumica, puesto que no
necesita condiciones extremas de temperatura y presin ni sustancias qumicas peligrosas, siendo adems
los residuos de la produccin ms fcilmente biodegradables. As, aunque los ingredientes mayoritarios de
productos como pan, queso, vino y cerveza no estn modificados genticamente, es posible encontrar en su
composicin aditivos y/o enzimas producidos mediante ingeniera gentica.
2c) Como bioconservantes
Se denomina bioconservacin al procedimiento que permite aumentar la vida til e incrementar la calidad
higinico-sanitaria de los alimentos mediante la actividad de determinados microorganismos y/o sus
metabolitos. En este sentido, las bacterias lcticas tienen la capacidad de inhibir el desarrollo de
microorganismos alterantes y patgenos de los alimentos mediante
diversos mecanismos, entre los que se incluye la produccin de
metabolitos como el cido lctico y las bacteriocinas. Esta aplicacin de la
biotecnologa a la conservacin de los alimentos ser tratada en
profundidad en un prximo blog.
3. Control de la seguridad alimentaria
Las crisis alimentarias acaecidas durante los ltimos aos, as como
los avances experimentados en los mtodos de produccin y
transformacin de los alimentos, pusieron de manifiesto la necesidad de La biotecnologa ofrece la posibilidad de
actualizar la legislacin alimentaria europea, lo que desemboc en la emplear mtodos inmunoqumicos y
adopcin del Reglamento 178/2002 y, posteriormente, en la publicacin genticos para el control de la seguridad
en todos los eslabones de la cadena
del denominado Paquete de Higiene.
El nuevo enfoque adoptado para asegurar la inocuidad de los alimentaria, de la granja a la mesa.
alimentos considera que cada eslabn de la cadena de produccin de alimentos, desde la produccin primaria
y la produccin de piensos para animales hasta la venta al consumidor final (lo que se ha denominado con la
expresin de la granja a la mesa), tiene el potencial de influir en la seguridad alimentaria. En este contexto,
aparece el concepto de trazabilidad, es decir, la posibilidad de identificar el origen de un alimento y poder
seguir su rastro durante toda su vida til. La trazabilidad es una herramienta que asegura y/o restablece la
seguridad alimentaria y que ayuda a evitar fraudes y a recuperar la confianza del consumidor en la seguridad
de los productos alimenticios. Como se describe a continuacin, la biotecnologa puede aportar soluciones
tanto para el control de la seguridad alimentaria como para satisfacer la obligatoriedad de garantizar la
trazabilidad de los productos alimenticios.
3.1. Deteccin de agentes nocivos en los alimentos
Las tcnicas biotecnolgicas para la deteccin de agentes nocivos (microorganismos patgenos y/o sus
toxinas, alrgenos, residuos de tratamientos veterinarios, contaminantes abiticos de origen ambiental, etc.)
en los alimentos pueden emplearse individualmente o en combinacin con tcnicas analticas tradicionales
(como HPLC y cromatografa de gasesacopladas a espectrometra de masas). Los sistemas biotecnolgicos
de deteccin estn basados en tcnicas inmunoqumicas (ELISA, dispositivos de flujo lateral, ensayos de
aglutinacin con partculas de ltex, etc.), genticas (hibridacin de ADN, PCR y sus variantes, como PCR
cuantitativa en tiempo real, etc.), u otras (por ejemplo, deteccin de la bioluminiscencia del ATP). En muchos
casos, estas tcnicas se presentan bajo el formato de kitscomerciales sencillos de utilizar, que producen
resultados de forma rpida y que permiten la realizacin de ensayos de campo gracias a su portabilidad.
Asimismo, como se describi en unblog anterior, cada vez se dispone de una mayor variedad de
nanodispositivos compactos de anlisis (biosensores) para la deteccin de agentes nocivos presentes en los
alimentos.
3.2. Trazabilidad de los organismos modificados genticamente
Con el fin de que los consumidores puedan tomar decisiones razonadas acerca de los productos
alimenticios que adquieren, as como de que recuperen la confianza perdida con motivo de las crisis
alimentarias, es imprescindible que en el etiquetado de los alimentos aparezca una informacin lo ms veraz
y completa posible acerca de su composicin y forma de obtencin. En lo que se refiere a los alimentos y
piensos modificados genticamente, las normas relativas a las exigencias de etiquetado y
trazabilidad aparecen recogidas en los Reglamentos (CE) 1829/03 y 1830/03 del Parlamento Europeo y del
Consejo. Se trata, en definitiva, de que todos los eslabones de la cadena de produccin de alimentos
conozcan y transmitan a sus clientes la informacin relativa al empleo de organismos modificados
genticamente en sus productos. Los mtodos de anlisis de la presencia de organismos modificados
genticamente en los alimentos se basan en la deteccin de protenas (ELISA, dispositivos de flujo lateral) o
de ADN (mtodos basados en la tcnica de PCR, y, con menor frecuencia, microarrays). Es importante
destacar que cada uno de los eventos autorizados en la Unin Europea posee un mtodo de deteccin
especficamente desarrollado por la empresa que lo comercializa, lo que es imprescindible para solicitar su
autorizacin. La evaluacin cientfica y la validacin de estos mtodos se llevan a cabo por el Laboratorio
Comunitario de Referencia para Alimentos y Piensos Modificados Genticamente (CRL) en colaboracin
con la Red Europea de Laboratorios de Organismos Modificados Genticamente.
3.3. Identificacin de especies
La sustitucin de especies animales o vegetales por otras similares con menor valor econmico es uno de
los fraudes alimentarios ms frecuentes. Esta prctica supone no slo consecuencias econmicas, sino que,
en algunas ocasiones, puede originar problemas de salud en los consumidores (alergias) o conllevar
implicaciones ticas o religiosas. La identificacin de especies puede llevarse a cabo mediante mtodos
inmunoqumicos, como ELISA o Western blot, o genticos, basados en el anlisis de los
denominados marcadores moleculares genticos. stos consisten en secuencias de cidos nucleicos
capaces de proporcionar informacin especfica sobre un organismo. Su identificacin se realiza mediante
diferentes mtodos, entre los que se incluyen: Southern blot, anlisis de los polimorfismos de los fragmentos
de restriccin (RFLP) y diferentes variantes de la tcnica de PCR.
Conclusiones y perspectivas
Resumen
El presente trabajo de investigacin tuvo como objetivo producir etanol utilizando un jarabe
glucosado elaborado a partir de residuos de papa, naranja y yuca, por cultivo discontinuo
como una alternativa para el manejo de los residuos generados. Para cumplir con el
objetivo planteado se utilizaron cepas Saccharomyces cerevisiae, una cepa nativa (LYP) y
una cepa control (CTL) obtenida del Cepario de la Universidad. Posteriormente, para la
elaboracin de los medios de fermentacin los residuos se sometieron a un tratamiento de
hidrlisis qumica con cido clorhdrico al 2%v, temperatura de 75C y 8 horas, estos
parmetros fueron seleccionados como resultado del anlisis estadstico del diseo factorial
33 el cual encontr diferencias estadsticamente significativas (p0,05) en las variables
evaluadas sobre la generacin de azucares reductores. Finalmente, se realizaron
fermentaciones de 500ml a 30C 150rpm con base en un diseo factorial 42 para la
evaluacin de los sustratos fermentativos y el microorganismo fermentador, en donde se
encontr que no existen diferencias significativas (p0,05) tanto para los sustratos como
para las cepas: control (CTL) y nativa (LYP), en la produccin de etanol. Sin embargo, en
las interacciones entre variables si se encontraron diferencias altamente significativas
(p0,05), la mayor produccin de etanol obtenido fue de 3,15 y 2,6%v para la cepa LYP y
CLT, respectivamente, cuando se emplearon los jarabes de naranja y yuca como fuente de
carbono.
Palabras clave: Hidrlisis qumica, etanol, residuos agroindustriales.
Resumo
A presente pesquisa teve como objetivo produzir bioetanol utilizando um xarope de glicose
feita a partir de residuos de batatas, laranjas e mandioca, para o cultivo de lote, como uma
alternativa para a gesto dos resduos gerados. A cepa nativa de Saccharomyces cerevisiae,
e uma estirpe de controle obtido a partir da coleo de cultura da Universidade foi usado
para atingir o objetivo. Em seguida, para a preparao de meios de fermentao de
resduos foi usada uma hidrlise qumica utilizando cido clordrico 2%v, 75C e 8 horas,
estes parmetros foram seleccionados como um resultado da anlise estatstica
planejamento experimental 33,apresentando uma diferena estatisticamente significativas
(p0,05) nas variveis avaliadas na gerao de acares redutores. Finalmente
fermentaes 500ml foram realizados a 30C 150rpm com base em um planejamento
fatorial 42 para avaliao de substratos de fermentao e fermentao do microorganismo,
onde no foran encontradas diferenas significativas (p0,05) para ambos os substratos
como para as estirpes: controle (CTL) e nativos (LYP) na produo de etanol. No entanto
interaes entre as variveis se diferenas significativas (p 0,05), aumento da produo
de etanol obtida foi encontrado 3,15 e 2,6%v para tenso LYP e CLT, respectivamente,
quando utilizado laranja e mandioca como fonte de carbono.
Palabras-chave: Hidrlise qumica, etanol, resduos agro-industrial.
Cita: Quintero Mora LP, Martnez Castilla Y, Velasco Mendoza JA, Arvalo Rodrguez A,
Muoz YA, Urbina Suarez NA. Evaluacin de residuos de papa, yuca y naranja para la
produccin de etanol en cultivo discontinuo utilizandoSaccharomyces cerevisiae. rev.ion.
2015;28(1):43-53.
Introduccin
A nivel mundial, la preocupacin por el aprovechamiento de residuos ha tomado gran
fuerza entre la comunidad cientfica y sobre todo a nivel industrial, en donde los procesos
de transformacin generan subproductos que pueden ser tiles en otras actividades. De
hecho, estudios recientes han demostrado que las cscaras de frutas como la naranja
contienen antioxidantes que podran tener un efecto benfico en la salud humana [1]. Sin
embargo, los residuos generados en las transformaciones agroindustriales y por las
prdidas pos-cosecha en Colombia an no han sido aprovechados eficientemente, en parte,
porque su valor es an desconocido y, sobretodo, por la falta de mtodos apropiados para
la preparacin y caracterizacin de sustancias con la suficiente calidad e inocuidad como
para ser usadas en los procesos de mayor valor agregado [2].
Actualmente, el desarrollo de los recursos energticos tiene fuertes implicaciones en la
economa de los pases y est estrechamente vinculado con el ambiente por el impacto
negativo que genera sobre ste, lo cual hace necesario desarrollar acciones que en forma
conjunta contribuyan a su solucin. La generacin de alternativas energticas distintas a las
convencionales obtenidas principalmente de la explotacin del petrleo, ha conllevado al
uso de materias primas naturales dando lugar a los llamados biocombustibles dentro de los
cuales se destaca el bioetanol.
El etanol es considerado un recurso energtico sostenible, puesto que ofrece diversas
ventajas sobre los derivados del petrleo, como son: la disminucin en la produccin de
gases invernadero, disminucin del costo del combustible, mayor seguridad energtica y
apoyo a producciones agrcolas. ste se obtiene a partir de microorganismos, los cuales
realizan la fermentacin de azcares que se encuentran en productos vegetales, que
Metodologa experimental
Microorganismo
Se utiliz una cepa nativa de Saccharomyces cerevisiae (LPY) aislada de una bebida
artesanal fermentada del municipio de Durania, Norte de Santander, en un trabajo de
investigacin previo por Arvalo [6]. Como control se utiliz una cepa de Saccharomyces
cerevisiae (CTL) del cepario del Centro de Investigaciones Agrarias y Ambientales, de la
Universidad Francisco de Paula Santander. Las cuales fueron incubadas a 28 +/- 2C
durante 3 das en agar Sabouraud para su activacin.
Residuos Orgnicos
Las muestras de los residuos de papa, yuca y naranja fueron tomadas al azar de la central
de abastos de la ciudad de Ccuta CENABASTOS PROPIEDAD HORIZONTAL,
especficamente de las bodegas de mayoristas que comercializan estos productos, lo cual
facilit su recoleccin. Posteriormente estos fueron lavados y secados a 85C durante 2
horas. Finalizado el tiempo de secado, los residuos fueron molidos y tamizados con una
malla #60, obteniendo las harinas usadas para la elaboracin de los diferentes medios de
fermentacin.
Hidrlisis qumica
Para determinar las parmetros de hidrlisis llev a cabo un diseo factorial 3 3 con tres
concentraciones cido clorhdrico (2, 3, 4%v) temperatura (45, 60, 75C) y tiempo de
accin (20, 30 y 45 minutos) donde se tuvo como variable de respuesta la concentracin de
azcares reductores liberados, los cuales fueron determinados mediante tcnicas
colorimtricas utilizando el reactivo 3,5-cido dinitrosalicilico (DNS) [7]. Para el proceso de
hidrlisis se prepar una solucin de harina con una concentracin de 100 g/L en agua
destilada [8], con la harina obtenida a partir de cada residuo en el pre-tratamiento,
posteriormente se adicion el cido clorhdrico relacin 1:1, mililitros de solucin de harina
de papa o yuca- mililitros de cido. En el caso de la harina de naranja la solucin se realiz
directamente en cido. Las soluciones se llevaron a un bao mara durante el tiempo
establecido en el diseo factorial. Las soluciones se filtraron con papel filtro y al jarabe
obtenido se le ajust el pH entre 4-4,5 con NaOH 5N para posteriormente preparar el medio
de fermentacin.
Medio de fermentacin
Como sustrato y fuente de carbono se utiliz el hidrolizado obtenido de cada tipo de residuo
(papa, yuca y naranja), el pH fue ajustado a 4,5 0,2 con NaOH 5N, el medio fermentativo
fue suplementado con urea, Fosfato diamnico (DAP), MgSO4.7H2O en concentraciones de
700ppm, 571ppm, 1g/L, respectivamente. Los azcares fueron ajustados a un valor
correspondiente al 5% suplementando el medio con glucosa.
Fermentacin
La preparacin del inculo se realiz a partir de un cultivo joven de la levadura, para esto
se prepar una suspensin celular en solucin salina 8,5g/L estril hasta obtener una
turbidez igual al patrn 5 de McFarland. Posteriormente, se inocul en cada medio
fermentativo a base de los residuos a evaluar (papa, yuca, naranja y la mezcla entre ellos),
se dej incubando 24 horas, a una temperatura de 30C, 150rpm y pH de 4,5. La
fermentacin alcohlica para cada unidad experimental se llev a cabo en un reactor con un
volumen efectivo de trabajo de 500mL. El proceso se realiz a una temperatura de 28C +
2C, 150rpm y pH entre 4,5 - 5.
Diseo experimental
La Tabla 1 describe el diseo factorial 42 para los ensayos de fermentacin con dos
repeticiones para un total de 16 experimentos, con la finalidad de evaluar no solo el
sustrato de fermentacin sino el microorganismo fermentador, para lo cual se utiliz cepa
nativa de Saccharomyces cerevisiae y una cepa control de Saccharomyces
cerevisiaeobtenida del Banco de Cepas de la Universidad Francisco de Paula Santander. Para
ello se tuvo como variable de respuesta la concentracin de etanol producido, el cual fue
determinado mediante la tcnica de dicromato de potasio que se fundamenta en la reaccin
con el carbono presente en el etanol [9].
Anlisis estadstico
El anlisis estadstico de los resultados obtenidos en las etapas de hidrlisis qumica y
fermentacin, se llev a cabo mediante un anlisis de varianza multifactorial (ANOVA), con
un nivel de confianza del 95%, en el software STATGRAPHICS centurin XV.II
Seguimiento y determinacin de parmetros cinticos
Para esto se tomaron muestras cada 2 horas para los respectivos anlisis, determinacin de
la concentracin de etanol, concentracin de azcares reductores y la concentracin de
biomasa celular. A partir de los datos obtenidos, se determinaron los rendimientos
observados de biomasa a partir de sustrato (Yx/s) y de producto a partir de sustrato (Yp/s),
as como tambin la velocidad especfica de crecimiento ().
Resultados y Discusin
Hidrlisis qumica
La Tabla 2 relaciona los valores promedios obtenidos en el diseo experimental 33 de la
hidrlisis qumica. Al realizar el anlisis estadstico, dentro de los efectos principales en el
anlisis de varianza multifactorial se encontr que las tres variables: concentracin de
cido, tiempo de accin y temperatura, generan un efecto estadstico altamente
significativo (p0,05) sobre la generacin de azcares reductores, al igual que las
diferentes interacciones posibles entre las variables estudiadas. Estos resultados son
similares a los reportados por Kim y Hamdy [10] y a los reportados por Alarcn [11]
quienes estudiaron estas tres variables: temperatura (60 y 95C), concentracin de cido
sulfrico (1 y 5%v) y tiempo (1 y 5h), al analizar los datos en el software Manitab 15.0 se
encontraron diferencias estadsticamente significativas entre los tres factores para el
tratamiento del almidn.
El anlisis de varianza simple mostr que para cada una de las variables, el mejor nivel
evaluado fue, la concentracin de 2%v del cido clorhdrico, 75C de temperatura y tiempo
de accin de 30 minutos, puesto que fue en estos niveles donde se evidenci la mayor
liberacin de azcares reductores totales ATR, (ver Tabla 3), por lo que la estadstica
sugera trabajar con dichos niveles como parmetros de hidrlisis.
Durante el proceso de hidrlisis cida adems de producirse azcares fermentables, se ha
reportado que se generan productos de la degradacin de los azcares que inhiben el
metabolismo del microorganismo fermentador, dependiendo de su concentracin,
provocando una produccin deficiente de etanol. Los compuestos inhibidores de
fermentacin obtenidos a partir de los procesos qumicos sobre materiales lignocelulsicos
y almidn, son clasificados en tres grupos: derivados del furano o furaldehidos como el
furfural y el 5-hidroximetilfurfural (5-HMF), cidos orgnicos como el actico, frmico y
levulnico y compuestos fenlicos [12]. As, la cantidad de dichos productos de degradacin
depende tanto de la composicin de la biomasa tratada, como de las condiciones utilizadas
en el pre-tratamiento, como temperatura, presin, tiempo, pH y adicin de catalizadores.
Mientras mayores sean estas variables se espera mayor generacin de inhibidores. [13]
Sin embargo, al obtener valores medios de (ATR) tan bajos, es posible que no se haya
realizado la hidrlisis completa de las molculas de almidn presente en los residuos, al
encontrarse el valor medio de ATR ms bajo en la variable tiempo, se plante la prueba del
yodo, como una prueba adicional para determinar el tiempo en el que ya no hubiera accin
hidroltica significativa en la obtencin de azcares reductores.
Los valores de etanol alcanzados en los jarabes suplementados y sin suplementar de papa
son superiores a los reportados por Sossa et al. [12] quienes evaluaron un sistema
discontinuo secuencial compuesto por clulas deBacillus licheniformis para la hidrlisis de
almidn de papa y Saccharomyces cerevisiae para la produccin de etanol a partir del
hidrolizado, obteniendo porcentajes bajos de etanol 0,47 y 0,74%v, tanto en clulas libres
como inmovilizadas, respectivamente. En otras investigaciones realizadas con almidn de
yuca se reportan valores de 44,4 y 66g/L de etanol empleando -amilasas y glucoamilasas
en la hidrlisis enzimtica en un proceso de sacarificacin fermentacin [13]. En la
Universidad Nacional de Colombia, Monsalve et al. [14], obtuvo etanol a partir de cscaras
de banano y almidn de yuca mediante hidrlisis cida con cido sulfrico y fermentacin
con Saccharomyces cerevisiae y Zymomonas mobilis con concentraciones cercanas al 8%v
de etanol. Por otra parte, en una investigacin realizada por Tejeda et al. [15] para la
produccin de etanol a partir de la fermentacin alcohlica de jarabes glucosados derivados
de cscaras de naranja y pia empleando hidrlisis qumica con cido sulfrico al 5%v y
temperatura de 120C logran obtener 13,98g/L de etanol en cscaras de naranja y 1,22g/L
de etanol en cscaras de pia. Estos valores son inferiores respecto a los obtenidos en esta
investigacin empleando hidrlisis cida con cido clorhdrico diluido a bajas temperaturas
Diseo experimental
Dentro de los efectos principales al estudiar los resultados en el software (Tabla 4), se
encontr que no existen diferencias significativas (p0,05) en la produccin de etanol (g/L)
utilizando como sustratos fermentativos los jarabes obtenidos despus de un proceso de
hidrlisis de los residuos de papa, yuca, naranja y una mezcla entre ellos, por lo que al
utilizar cualquiera de stos se pueden encontrar resultados similares en los rendimientos de
etanol. Tampoco se encontraron diferencias significativas (p0,05), en la produccin de
etanol (g/L) a partir de los jarabes estudiados utilizando como microorganismos
fermentadores una cepa de Sacharomyces cerevisiae (cepa CTL) y una cepa nativa
de Sacharomyces cerevisiae (cepa LYP). Lo que indica que en condiciones iguales de
operacin la cepa LYP y la cepa CTL tienen la misma capacidad de produccin de etanol.
Sin embargo, al estudiar las interacciones entre las variables evaluadas, el tipo de sustrato
fermentativo y el tipo de microorganismo fermentador, se encuentran que existen
diferencias altamente significativas (p0,05) con respecto a la produccin de etanol (g/L),
ya que la capacidad fermentativa de las cepas LYP y CTL, en cada uno de los cuatro jarabes
de fermentacin (papa, yuca, naranja y mezcla) es diferente. Se observ que el mejor
comportamiento de las cepas LYP y CLT fue en los jarabes de naranja y yuca
respectivamente, con valores de 25,05 y 20,65g/L en la produccin de etanol. El
comportamiento ms desfavorable de las cepas LYP y CLT fue en los jarabes mezcla y
naranja, con valores de 19g/L cada una en la produccin de etanol, (ver Figura 2). Cabe
resaltar que la cepa control (CTL) present mejores resultados en tres de los cuatros
sustratos evaluados frente a la cepa nativa (LYP) que solo present resultados superiores
en el sustrato de jarabe de naranja. Los valores graficados son promedios de los resultados
obtenidos.
Conclusiones
En el anlisis estadstico realizado arroj que para determinar las condiciones de operacin
de un proceso de hidrlisis qumico se debe tener en cuenta variables como: temperatura,
tiempo y concentracin de cido, ya que dentro de los efectos principales se encontr que
estas variables generan un efecto estadstico significativo (p0,05) sobre la generacin de
azcares reductores. El estado de descomposicin de los residuos hacen que la cantidad de
azcares fermentables disponibles sea muy baja para utilizarlos como sustratos de
fermentacin en la produccin de etanol, lo que hace necesario su suplementacin con otra
fuente de carbono como glucosa u otro residuo agroindustrial rico en azcares fermentables
para obtener mejores rendimientos en la produccin de este metabolito.
Sin embargo, cabe mencionar que los valores de Yp/s obtenidos indican que existi un buen
nivel de aprovechamiento del sustrato por parte del microorganismo. En general, la
produccin de etanol a partir de los sustratos es menor, frente a otras investigaciones en la
produccin de etanol de primera generacin.
El anlisis estadstico realizado para el proceso hidroltico indic que para determinar las
condiciones de operacin de un proceso de hidrlisis qumico se debe tener en cuenta
variables como: temperatura, tiempo y concentracin de cido, ya que dentro de los
efectos principales se encontr que estas variables generan un efecto estadstico altamente
significativo (p0,05) sobre la generacin de azcares reductores.
El estado de descomposicin de los residuos hacen que la cantidad de azcares
fermentables disponibles sea muy baja para utilizarlos como sustratos de fermentacin en
la produccin de etanol, lo que hace necesario su suplementacin con otra fuente de
carbono como glucosa u otro residuo rico en azcares fermentables para obtener mejores
rendimientos en la produccin de este metabolito. Sin embargo, cabe mencionar que los
valores de Yp/sobtenidos indican que existi un alto grado de aprovechamiento del sustrato
por parte del microorganismo.
En general, la produccin de etanol a partir de los sustratos evaluados es mayor, frente a
otras investigaciones en la produccin de etanol de segunda generacin en las cuales se
emplea como pre-tratamiento la hidrlisis qumica [15], pero menor frente a las cuales la
hidrlisis es de carcter enzimtico [13]. No obstante, aunque en la actualidad no se pueda
reemplazar del todo el uso de los cultivos energticos si se puede pensar en disminuir su
uso, buscando otras fuentes que se puedan incluir en los procesos productivos y ser
utilizados a la par; es all donde esta investigacin permite dilucidar dos beneficios
potenciales: el disminuir hasta en un 1% el uso de azcares provenientes de cultivos para
consumo humano como maz, remolacha y caa de azcar haciendo uso de residuos que
adems de aportar una pequea cantidad de azcar, hace un gran aporte a la problemtica
medio ambiental ya que al ser aprovechados generan un valor agregado y se disminuye la
acumulacin excesiva de los mismos en rellenos sanitarios donde su manejo inapropiado
puede repercutir en el detrimento medio ambiental.
Los residuos orgnicos siempre van a estar presentes tanto en la cadena productiva como
en la alimentaria de las sociedades, convirtindolos en materia prima con potencial para la
produccin de energa de tipo renovable en forma de etanol, puesto que no tienen costo
alguno y no compite con el suelo para la produccin de alimentos. Dado que las
concentraciones de alcohol alcanzadas no son competitivas frente a las obtenidas
industrialmente a partir de sustratos tradicionales es imprescindible continuar investigando
acerca del tema especficamente en las etapas de tratamiento de los residuos, que
permitan mejorar los rendimientos en la liberacin de azcares simples para ser sometidos
a fermentaciones alcohlicas con el objetivo de producir etanol.
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Resumen
and 2.6% for strains LYP and CLT respectively, when they used the orange syrup and
cassava as carbon source.
Keywords: chemical Hydrolysis, ethanol, waste.
Cita: Quintero Mora LP, Martnez Castilla Y, Velasco Mendoza JA, Arvalo Rodrguez A,
Muoz YA, Urbina Suarez NA. Evaluacin de residuos de papa, yuca y naranja para la
produccin de etanol en cultivo discontinuo utilizando Saccharomyces cerevisiae.
rev.ion. 2015;28(1):43-53.
Introduccin
A nivel mundial, la preocupacin por el aprovechamiento de residuos ha tomado gran
fuerza entre la comunidad cientfica y sobre todo a nivel industrial, en donde los
procesos de transformacin generan subproductos que pueden ser tiles en otras
actividades. De hecho, estudios recientes han demostrado que las cscaras de frutas
Metodologa experimental
Microorganismo
Se utiliz una cepa nativa de Saccharomyces cerevisiae (LPY) aislada de una bebida
artesanal fermentada del municipio de Durania, Norte de Santander, en un trabajo de
investigacin previo por Arvalo [6]. Como control se utiliz una cepa
de Saccharomyces cerevisiae (CTL) del cepario del Centro de Investigaciones Agrarias
y Ambientales, de la Universidad Francisco de Paula Santander. Las cuales fueron
incubadas a 28 +/- 2C durante 3 das en agar Sabouraud para su activacin.
Residuos Orgnicos
Las muestras de los residuos de papa, yuca y naranja fueron tomadas al azar de la
central de abastos de la ciudad de Ccuta CENABASTOS PROPIEDAD HORIZONTAL,
especficamente de las bodegas de mayoristas que comercializan estos productos, lo
cual facilit su recoleccin. Posteriormente estos fueron lavados y secados a 85C
durante 2 horas. Finalizado el tiempo de secado, los residuos fueron molidos y
tamizados con una malla #60, obteniendo las harinas usadas para la elaboracin de los
diferentes medios de fermentacin.
Hidrlisis qumica
Para determinar las parmetros de hidrlisis llev a cabo un diseo factorial 33 con tres
concentraciones cido clorhdrico (2, 3, 4%v) temperatura (45, 60, 75C) y tiempo de
accin (20, 30 y 45 minutos) donde se tuvo como variable de respuesta la
concentracin de azcares reductores liberados, los cuales fueron determinados
mediante tcnicas colorimtricas utilizando el reactivo 3,5-cido dinitrosalicilico (DNS)
[7]. Para el proceso de hidrlisis se prepar una solucin de harina con una
concentracin de 100 g/L en agua destilada [8], con la harina obtenida a partir de cada
residuo en el pre-tratamiento, posteriormente se adicion el cido clorhdrico relacin
1:1, mililitros de solucin de harina de papa o yuca- mililitros de cido. En el caso de la
Anlisis estadstico
El anlisis estadstico de los resultados obtenidos en las etapas de hidrlisis qumica y
Resultados y Discusin
Hidrlisis qumica
La Tabla 2 relaciona los valores promedios obtenidos en el diseo experimental 33 de
la hidrlisis qumica. Al realizar el anlisis estadstico, dentro de los efectos principales
en el anlisis de varianza multifactorial se encontr que las tres variables:
concentracin de cido, tiempo de accin y temperatura, generan un efecto estadstico
altamente significativo (p0,05) sobre la generacin de azcares reductores, al igual
que las diferentes interacciones posibles entre las variables estudiadas. Estos
resultados son similares a los reportados por Kim y Hamdy [10] y a los reportados por
Alarcn [11] quienes estudiaron estas tres variables: temperatura (60 y 95C),
concentracin de cido sulfrico (1 y 5%v) y tiempo (1 y 5h), al analizar los datos en
el software Manitab 15.0 se encontraron diferencias estadsticamente significativas
entre los tres factores para el tratamiento del almidn.
El anlisis de varianza simple mostr que para cada una de las variables, el mejor nivel
evaluado fue, la concentracin de 2%v del cido clorhdrico, 75C de temperatura y
tiempo de accin de 30 minutos, puesto que fue en estos niveles donde se evidenci la
mayor liberacin de azcares reductores totales ATR, (ver Tabla 3), por lo que la
estadstica sugera trabajar con dichos niveles como parmetros de hidrlisis.
Durante el proceso de hidrlisis cida adems de producirse azcares fermentables, se
ha reportado que se generan productos de la degradacin de los azcares que inhiben
el metabolismo del microorganismo fermentador, dependiendo de su concentracin,
provocando una produccin deficiente de etanol. Los compuestos inhibidores de
fermentacin obtenidos a partir de los procesos qumicos sobre materiales
lignocelulsicos y almidn, son clasificados en tres grupos: derivados del furano o
furaldehidos como el furfural y el 5-hidroximetilfurfural (5-HMF), cidos orgnicos
como el actico, frmico y levulnico y compuestos fenlicos [12]. As, la cantidad de
dichos productos de degradacin depende tanto de la composicin de la biomasa
tratada, como de las condiciones utilizadas en el pre-tratamiento, como temperatura,
presin, tiempo, pH y adicin de catalizadores. Mientras mayores sean estas variables
se espera mayor generacin de inhibidores. [13]
Sin embargo, al obtener valores medios de (ATR) tan bajos, es posible que no se haya
realizado la hidrlisis completa de las molculas de almidn presente en los residuos,
al encontrarse el valor medio de ATR ms bajo en la variable tiempo, se plante la
prueba del yodo, como una prueba adicional para determinar el tiempo en el que ya no
hubiera accin hidroltica significativa en la obtencin de azcares reductores.
evidencia que el aumento del tiempo de accin favoreci la hidrlisis del almidn.
Finalmente, bajo el criterio de la mayor concentracin de azcares reductores
obtenidos, se seleccionaron las condiciones de operacin para el proceso de hidrlisis
qumica, que fueron cido clorhdrico al 2%v, temperatura de 75C y 8 horas, para
obtener los jarabes usados en la elaboracin del medio de fermentacin, de acuerdo
con los resultados estadsticos obtenidos, revisin bibliogrfica y la prueba de yodo.
Fermentacin
El seguimiento a la produccin de etanol en las fermentaciones con los jarabes
obtenidos, se evidenci que la produccin de etanol es muy baja como se observa en
la Figura 1, y se present hacia las ltimas horas del proceso. Debido a la deficiencia
en la produccin de etanol observada, probablemente a la poca disponibilidad de
azcares reductores se opt por la suplementacin de cada uno de ellos con glucosa
ajustando este requerimiento al 5% del volumen efectivo de la fermentacin. La
produccin de etanol a partir de las cepas utilizadas evidenci que su comportamiento
fue similar en cada uno de los jarabes suplementados (ver Figura 1), obteniendo
como resultado la mayor produccin de este metabolito a partir del sustrato del jarabe
de naranja. Este resultado sugiere que debido al alto grado de descomposicin de los
residuos hacen necesario suplementar los jarabes puesto que la fuente de carbono
obtenida del tratamiento de hidrlisis qumica no es suficiente para obtener
rendimientos ptimos en la produccin de etanol.
Diseo experimental
Dentro de los efectos principales al estudiar los resultados en el software (Tabla 4), se
encontr que no existen diferencias significativas (p0,05) en la produccin de etanol
(g/L) utilizando como sustratos fermentativos los jarabes obtenidos despus de un
proceso de hidrlisis de los residuos de papa, yuca, naranja y una mezcla entre ellos,
por lo que al utilizar cualquiera de stos se pueden encontrar resultados similares en
los rendimientos de etanol. Tampoco se encontraron diferencias significativas
(p0,05), en la produccin de etanol (g/L) a partir de los jarabes estudiados utilizando
como microorganismos fermentadores una cepa de Sacharomyces cerevisiae (cepa
CTL) y una cepa nativa de Sacharomyces cerevisiae (cepa LYP). Lo que indica que en
condiciones iguales de operacin la cepa LYP y la cepa CTL tienen la misma capacidad
de produccin de etanol.
Sin embargo, al estudiar las interacciones entre las variables evaluadas, el tipo de
sustrato fermentativo y el tipo de microorganismo fermentador, se encuentran que
existen diferencias altamente significativas (p0,05) con respecto a la produccin de
etanol (g/L), ya que la capacidad fermentativa de las cepas LYP y CTL, en cada uno de
los cuatro jarabes de fermentacin (papa, yuca, naranja y mezcla) es diferente. Se
observ que el mejor comportamiento de las cepas LYP y CLT fue en los jarabes de
naranja y yuca respectivamente, con valores de 25,05 y 20,65g/L en la produccin de
etanol. El comportamiento ms desfavorable de las cepas LYP y CLT fue en los jarabes
mezcla y naranja, con valores de 19g/L cada una en la produccin de etanol,
(ver Figura 2). Cabe resaltar que la cepa control (CTL) present mejores resultados
en tres de los cuatros sustratos evaluados frente a la cepa nativa (LYP) que solo
present resultados superiores en el sustrato de jarabe de naranja. Los valores
graficados son promedios de los resultados obtenidos.
altos se encontraron en el jarabe mezcla para las dos cepas, 0,115 y 0,116, en esta
fermentacin la fase exponencial fue ms larga agotando el sustrato disponible para la
fermentacin. Los valores de rendimientos de producto obtenidos de acuerdo con
Boudarel [19] se encuentran dentro de los rangos de rendimientos experimentales los
cuales varan entre 90 y 95% del terico, es decir, de 0,469 a 0,485. Los rendimientos
en la industria varan entre 87 y 93% del rendimiento terico.
Conclusiones
En el anlisis estadstico realizado arroj que para determinar las condiciones de
operacin de un proceso de hidrlisis qumico se debe tener en cuenta variables como:
temperatura, tiempo y concentracin de cido, ya que dentro de los efectos principales
se encontr que estas variables generan un efecto estadstico significativo (p0,05)
sobre la generacin de azcares reductores. El estado de descomposicin de los
residuos hacen que la cantidad de azcares fermentables disponibles sea muy baja
para utilizarlos como sustratos de fermentacin en la produccin de etanol, lo que hace
necesario su suplementacin con otra fuente de carbono como glucosa u otro residuo
agroindustrial rico en azcares fermentables para obtener mejores rendimientos en la
produccin de este metabolito.
Sin embargo, cabe mencionar que los valores de Yp/s obtenidos indican que existi un
buen nivel de aprovechamiento del sustrato por parte del microorganismo. En general,
la produccin de etanol a partir de los sustratos es menor, frente a otras
investigaciones en la produccin de etanol de primera generacin.
El anlisis estadstico realizado para el proceso hidroltico indic que para determinar
las condiciones de operacin de un proceso de hidrlisis qumico se debe tener en
cuenta variables como: temperatura, tiempo y concentracin de cido, ya que dentro
de los efectos principales se encontr que estas variables generan un efecto estadstico
altamente significativo (p0,05) sobre la generacin de azcares reductores.
El estado de descomposicin de los residuos hacen que la cantidad de azcares
fermentables disponibles sea muy baja para utilizarlos como sustratos de fermentacin
en la produccin de etanol, lo que hace necesario su suplementacin con otra fuente
de carbono como glucosa u otro residuo rico en azcares fermentables para obtener
mejores rendimientos en la produccin de este metabolito. Sin embargo, cabe
mencionar que los valores de Yp/s obtenidos indican que existi un alto grado de
aprovechamiento del sustrato por parte del microorganismo.
En general, la produccin de etanol a partir de los sustratos evaluados es mayor, frente
a otras investigaciones en la produccin de etanol de segunda generacin en las cuales
se emplea como pre-tratamiento la hidrlisis qumica [15], pero menor frente a las
cuales la hidrlisis es de carcter enzimtico [13]. No obstante, aunque en la
actualidad no se pueda reemplazar del todo el uso de los cultivos energticos si se
puede pensar en disminuir su uso, buscando otras fuentes que se puedan incluir en los
procesos productivos y ser utilizados a la par; es all donde esta investigacin permite
dilucidar dos beneficios potenciales: el disminuir hasta en un 1% el uso de azcares
provenientes de cultivos para consumo humano como maz, remolacha y caa de
azcar haciendo uso de residuos que adems de aportar una pequea cantidad de
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