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MANUEL
PRATIQUE
DANALYSE DE LEAU
4me dition
Fondation
Nationale
de la Sant
Ministre
Sant
Manuel Pratique
dAnalyse de lEau
4me dition
Brasilia, 2013
Sommaire
Prsentation....................................................................5
Examen bactriologique de leau ....................................7
Introduction..............................................................9
Les bactries coliformes..........................................11
Matriel utilis en bactriologie..............................13
Prparation du matriel en verre.............................14
Prparation des milieux de culture..........................15
Comment faire pour utiliser l'eau de dilution
pour la dtermination du NPP de coliformes...........17
Prlvement d'chantillons d'eau pour les
examens bactriologiques.......................................18
Procdures d'examen..............................................21
-- Les coliformes totaux...........................................21
-- Coliformes thermotolrants..................................26
-- Comptage des bactries htrotrophes.................28
-- Coliformes totaux.................................................29
-- Coliformes thermotolrants..................................32
-- Coliformes totaux et Escherichia coli....................36
Strilisation.............................................................38
Analyses physico-chimiques de leau ...........................41
Analyses Titrimtriques...........................................43
-- Gaz carbonique libre...........................................46
-- Chlorures.............................................................48
-- La duret totale....................................................51
-- pH.......................................................................54
Analyses colorimtriques........................................56
-- Le chlore rsiduel libre.........................................56
-- Couleur................................................................57
-- Aluminium...........................................................59
-- Turbidit...............................................................63
-- Temprature.........................................................67
-- Les Fluorures........................................................68
-- Prlvement et conservation des chantillons pour
les analyses physico-chimiques............................74
-- Essai de coagulation (Jar-Test)...............................75
-- Correction du pH de leau traite.........................79
-- Dtermination de la teneur de chlore actif dans
une solution de chlore (hypochlorite de sodium
et hypochlorite de calcium)..................................81
Prparation des Ractifs Utiliss dans les Analyses
Constantes dans ce Manuel...........................................83
Ractifs pour lalcalinit..........................................85
Ractifs pour CO2...................................................87
Ractifs pour lanalyse de chlorures........................89
Ractifs pour lanalyse de la duret.........................91
Ractifs pour lanalyse de laluminium....................94
Ractifs pour lanalyse de fluorures.........................96
Rgles gnrales pour corriger les solutions
titres......................................................................99
Relation de matriels de laboratoire danalyse de
leau......................................................................102
La bioscurit en laboratoire.................................107
Annexe A Collecte et conservation dchantillons
pour Comptage des cellules de cyanobactries et
cyanotoxines .............................................................. 111
Annexe B Dtermination du Giardia sp et du
Cryptosporidium sp dans leau par la technique de
filtration, de sparation immunomagntique et de
microscopie de limmunofluorescence........................119
Bibliographie...............................................................143
Elaboration..................................................................147
Prsentation
Ce manuel, rdig de faon et en en langage simple, vise
aider les personnes qui travaillent les laboratoires de
contrle de qualit des installations de traitement d'eau
pour les petites et moyennes entreprises, dvelopper leurs
activits quotidiennes.
L'ide est venue de la ncessit de disposer d'un instrument
dans le laboratoire de recherche qui pourrait accompagner
les pas des techniciens chaque instant et dans nimporte
o.
Dans ce manuel sont dcrites les procdures les plus courantes qui sont ralises en routine dans le laboratoire d'une
station de traitement de l'eau (ETA). Toutes les techniques
utilises dans ce manuel rpondent l'article 22 du Dcret
n 2.914/2011 du Ministre de la Sant, qui est en accord
avec les standards nationaux et internationaux les plus
rcents, telles que I) Standard Methods for the Examination
of Water and Wastewater, dautorit parmi les institutions
American Public Health Association (APHA), American
Water Works Association (AWWA) et Water Environment
Federation (WEF); II) United States Environmental Protection Agency (EPA), III), standards publies par l'International Standartization Organization (ISO); ainsi que des
mthodologies proposes par l'Organisation mondiale de
la sant (OMS). Chaque procdure aborde ici ncessitant
une connaissance plus approfondie, doit faire lobjet dune
consultation des principaux manuels traitant du sujet.
La premire partie de l'ouvrage aborde les examens bactriologiques comprenant la recherche de coliformes totaux et
thermo-tolrants, dont lEscherichia coli ainsi que le comptage standard des bactries htrotrophes, jusqu la prparation du matriel utilis, passant par la ralisation dessais
Introduction
DOrigine virale
L'hpatite A et E
La polio
La Gastro-entrite aigu et chronique
DOrigine parasitaire
dysenterie amibienne
parasite gastro-entrite
Agents pathognes
Salmonelle typhique
Salmonelle parathyphique A et B
Shigella sp
Vibrio cholerae
Escherichia coli Entrotoxique Campylobacter
Yersinia enterocolitica
Salmonelle
Shigella sp
Virus de lhpatite A et E
Virus de la poliomilite
Virus Norwalk
Rotavirus
Enterovirus
Adenovirus
Entamoeba histolytica
Girdia lmblia
Cryptosporidium
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Le mme dcret prvoit que le comptage des bactries htrotrophes devra tre effectu comme l'un des paramtres
permettant d'valuer l'intgrit du systme de distribution
(rservoir et rseau) devant tre effectu dans 20% des
chantillons mensuels de coliformes totaux dans les rseaux
de distribution, recommandant qu'il ne devra pas dpasser
500 units formatrices de colonies pour 1 ml d'chantillon
(500 ufc/ml).
Afin de respecter le standard de qualit microbiologique de
la potabilit, l'absence de coliformes totaux dans 100 ml
dchantillon la sortie du traitement est obligatoire. Toutefois, conformment l'annexe I du dcret n 2.914/2011 MS,
on admet la prsence de coliformes totaux dans seulement
1 chantillon mensuel pour des systmes ou des solutions
collectives qui approvisionnent moins de 20.000 habitants
et dans 5% des chantillons mensuels des solutions collectives ou des systmes qui approvisionnent plus de 20.000
habitants. Il est noter que dans les deux cas la prsence
d'Escherichia coli dans l'eau potable n'est pas permise.
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Flacons de collecte
a) mettre deux gouttes (0,1 ml) de thiosulfate de sodium
10% dans le flacon;
b) placer une bande de papier aluminium entre le goulot et
le bouchon de la bouteille;
c) envelopper le goulot et le bouchon dans du papier aluminium.
Pipettes
a) mettre une petite boule de coton dans la buse de la pipette;
b) l'envelopper dans du papier aluminium ou du papier kraft.
Milieux de culture
a) Bouillon lactos;
b) Bouillon lactos bili au vert brillant 2%;
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c) Bouillon EC;
d) Plate Count Agar.
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Milieu EC
a) peser 37,0 grammes de milieu dshydrat et les dissoudre
dans 1000 ml deau distille;
b) rpartir dans des tubes essai dont le tube Durhan inverti,
10 ml dans chaque tube, fermer les tubes;
c) striliser 121oC (1Kg/cm2 de pression) en autoclave
pendant 15 minutes;
d) conserver au rfrigrateur (valable pendant 96 heures).
Remarques:
1. Ce milieu se solidifie aprs refroidissement. Fondre dans
un bain-marie avant usage.
2. D la varit des milieux de culture existant sur le march, toujours suivre les instructions du fabricant qui sont
imprimes sur ltiquette du flacon.
Eau de dilution
Solution 1
- peser 34 grammes de phosphate de potassium monobasique (KH2PO4) et dissoudre dans 500 ml deau distille,
ajuster le pH 7,2 avec une solution dhydroxyde de
sodium de solution 1N et diluer 1 litre avec de leau
distille. On a besoin normalement de 175 ml de NaOH
1N pour augmenter le pH.
Solution 2
- peser 81,1 grammes de chlorure de magnsium hxahydrat (MgCl2.6H2O) et dissoudre dans 1 litre deau distille
Solution 3
- mlanger 1,25 ml de la solution 1 et 5 ml de la solution 2
avec 1 litre deau distille. Rpartir dans des tubes essai
dans des quantits, qui, aprs lautoclavage assurent un
volume de 9 0,2 ml.
- striliser en autoclave 121oC (1Kg/cm2 de pression)
pendant 15 minutes.
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Procdures d'examen
Les coliformes totaux
Mthode des tubes multiples (TM)
Matriel ncessaire:
a) tube essai
b) tagre pour tube essai
c) Tube Durhan
d) pipette gradue de 10 ml
e) pipette gradue de 1 ml
f) bec Bunsen ou une lampe alcool
g) bouillon lactos double concentration
h) bouillon lactos simple concentration.
i) bouillon lactos bili vert brillant 2%.
j) eau de dilution
k) anse de platine avec cble Kolle
l) incubateur biologique
Excution du test
Test prsomptif
a) prendre une batterie contenant 15 tubes essai rpartis
de 5 en 5;
b) inoculer avec une pipette strilise dans les 5 premiers tubes (ceux qui contiennent le bouillon lactos
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
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Test de confirmation
a) prendre les tubes du test prsomptif qui ont t positifs
(qui ont form du gaz) dans trois 3 dilutions 1:1, 1:10
et 1:100;
b) prendre un nombre gal de tubes contenant le milieu
de culture bili vert brillant 2%;
c) avec une anse de platine, prcdemment flambe puis
refroidie, retirer de chaque tube positif une partie de
l'chantillon positif et inoculer dans le tube correspondant contenant le milieu vert brillant. Cette procdure
est appele repiquage;
d) identifier les tubes;
e) incuber pendant 24/48 heures 35 0,5oC;
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Phases du test
Inoculer dans CL ou CLT
et inoculer pendant 24 2
heures 35 0,5oC
(A) Formation de gaz ou forte
augmentation.
Confirmer avec VB 35
0,5oC pendant 24/48 heures
1) Ne produit pas de
gaz. Absence de groupe coliforme
2) Produit du gaz.
Groupe coliforme
confirm.
1) Production de gaz ou
production douteuse et forte augmentation. Confirmer
comme dans (A)
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Exemple:
a) Dans 5 tubes de dilution 1:01, on a obtenu 3 tubes positifs;
b) dans 5 tubes de dilution 1:10, on a obtenu deux tubes
positifs;
c) dans les 5 tubes de dilution 1:100, on a obtenu un tube
positif;
d) la combinaison suivante sest forme: 3-2-1;
e) on dtermine les N.M.P en consultant le tableau 1.
Si vous ne voulez pas travailler avec 15 tubes pour dterminer
la NMP, faire seulement cinq tubes pour la dilution 1:1 (10
ml de milieu de culture + 10 ml d'chantillon) et calculer le
NMP en consultant le tableau 2.
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N.M.P./100 mL
0-0-0
0-0-1
0-1-0
0-2-0
1-0-0
1-0-1
1-1-0
1-1-1
1-2-0
2-0-0
2-0-1
2-1-0
2-1-1
2-2-0
2-3-0
3-0-0
3-0-1
3-1-0
3-1-1
3-2-0
3-2-1
4-0-0
4-0-1
4-1-0
4-1-1
4-1-2
4-2-0
4-2-1
4-3-0
4-3-1
4-4-0
5-0-0
5-0-1
5-0-2
5-1-0
5-1-1
5-1-2
5-2-0
5-2-1
5-2-2
5-3-0
5-3-1
5-3-2
5-3-3
5-4-0
5-4-1
5-4-2
5-4-3
5-4-4
<2
2
2
4
2
4
4
6
6
4
7
7
9
9
12
8
11
11
14
14
17
13
17
17
21
22
26
26
27
33
34
23
30
40
30
50
60
50
70
90
80
110
140
170
130
170
220
280
350
Limites
Infrieur
Suprieur
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
2.0
2.0
1.0
2.0
2.0
3.0
3.0
5.0
3.0
4.0
4.0
6.0
6.0
7.0
5.0
7.0
7.0
9.0
12
9.0
12
12
15
16
9
10
20
10
20
30
20
30
40
30
40
60
80
50
70
100
120
160
10
10
13
11
15
15
18
18
17
20
21
24
25
29
24
29
29
35
35
40
38
45
46
55
63
56
65
67
77
80
86
110
140
120
150
180
170
210
250
250
300
360
410
390
480
560
690
820
25
Suite du tableau 1
Combinaison
de positifs
N.M.P./100 mL
5-5-0
5-5-1
5-5-2
5-5-3
5-5-4
5-5-5
240
300
500
900
1600
1600
Limites
Infrieur
Suprieur
100
100
200
300
600
-
940
1300
2000
2900
5300
-
N.M.P./100 mL
0
1
2
3
4
5
< 2,2
2,2
5,1
9,2
16,0
>16,0
Limites
Infrieur
Suprieur
0
0,1
0,5
1,6
3,3
8,0
6,0
12,6
19,2
29,4
52,9
Infinito
Coliformes thermotolrants
Mthode des tubes multiples (TM)
Matriel ncessaire:
a) tubes essai avec le milieu CE;
b) un bec Bunsen ou une lampe alcool;
c) une anse de platine;
d) un bain-marie.
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Excution du test
a) prendre tous les tubes du test prsomptif qui ont t
positifs (formation de gaz) et tous les tubes ngatifs
dans lesquels il y a eu augmentation aprs 48 heures
sur trois dilutions (1:1, 1:10 et 1:100);
b) transfrer, avec une anse en platine flambe puis refroidie, une partie des tubes essai contenant le milieu
EC;
c) mlanger et laisser tous les tubes dans un bain deau
pendant 30 minutes;
d) incuber dans un bain-marie 44,5 0,2oC pendant 24
2 heures;
e) si aprs 24 heures ou moins, il y a une formation de gaz,
cela indique la prsence de coliformes thermotolrants;
f) calculer le N.M.P en consultant le tableau 1.
Remarque: Remarque: Ce test doit tre ralis en mme temps que
le test de confirmation pour les coliformes totaux.
Observation: Toujours effectuer ce test chaque fois que des tests
de confirmation pour les coliformes totaux sont effectus.
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Remarques:
a) avant de commencer les essais, dsinfecter la paillasse du
laboratoire en utilisant une solution d'alcool thylique
70% ou un autre dsinfectant qui ne laisse pas de rsidus;
b) Tous les chantillons doivent tre examins doivent tre
homogniss au moins 25 fois;
c) ne pas oublier de flamber le goulot des tubes essai
contenant des milieux de culture avant de les utiliser;
d) le thiosulfate de sodium 10% plac dans les flacons de
collecte sert neutraliser l'action du chlore;
e) les botes de Petri doivent tre places en position inverse
pour viter la condensation sur la surface de la glose
(agar);
f) effectuer un comptage standard des bactries htrotrophes toujours en double.
Coliformes totaux
Mthode de la membrane filtrante (MF)
Matriel ncessaire:
a) quipement de filtration avec un porte-filtre;
b) bote de Petri strilise de 47 mm;
c) filtres de membrane de 47 mm dune porosit de
0,45m, avec un carton absorbant;
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
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Coliformes thermotolrants
Mthode de la membrane filtrante (MF)
Matriel ncessaire:
a) quipement de filtration avec porte-filtre;
b) plaque strile de 47 mm ;
c) filtres membrane de 47 mm dune porosit de 0,45
m avec un carton absorbant;
d) milieu de culture (m FC broth base);
e) eau de dilution strile;
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Excution de l'essai
a) placer soigneusement un carton absorbant dans la bote
de Petri en utilisant une pince;
b) avec une pipette strile placer 2,0 ml de milieu de
culture sur le carton absorbant et refermer la plaque;
c) placer la membrane filtrante sur le porte-filtre laide
de la pince prcdemment flambe puis refroidie;
d) agiter le flacon contenant l'chantillon, au moins 25
fois;
e) ouvrir et flamber le goulot de la bouteille;
f) verser soigneusement dans 100 ml d'chantillon dans
le porte-filtre, en vitant que l'eau nclabousse les
bords suprieurs;
g) allumer la pompe vide (seringue) et aspirer;
h) aprs avoir filtr l'chantillon, laver trois fois les parois
de l'entonnoir avec de leau de dilution strile par 20
ml par le vide;
i) aprs le lavage et la filtration, vacuer le vide et retirer
lentonnoir du support;
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3. Les milieux de culture prpars pour une utilisation avec une membrane filtrante sont valables
pendant 96 heures sils sont gards au rfrigrateur
une temprature entre 2 et 10oC;
4. Lensemble de filtration peut tre galement strilis en autoclave.
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Strilisation
Les matriels suivants doivent tre striliss: flacons de collecte dchantillons, pipettes, botes de Ptri en verre, flacons
et tubes eau de dilution ainsi que les milieux de culture.
Procdure de strilisation
a) prparer tout le matriel;
b) vrifier si le niveau de leau dans lautoclave est au-dessus
des rsistances. Complter si ncessaire;
c) dposer tout le matriel dans une bote mtallique et
fermer lautoclave;
d) ouvrir les deux loquets du couvercle pour ne pas permettre
la vapeur de sortir des bords de l'appareil. Brancher
lappareil dans la prise;
e) tourner le slecteur de temprature en position "maximum";
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l) teindre lappareil et attendre que le pointeur du manomtre atteigne la position "0". Cette procdure pourra tre
acclre en ouvrant lentement la valve de soupape de
vapeur;
Attention: Ne pas ouvrir cette valve en une seule fois!
m) quand le pointeur du manomtre atteint la position 0
et quil ny a plus de vapeur qui sort de la valve, ouvrir le
couvercle de lappareil et retirer le matriel.
Remarque: Il existe plusieurs modles dautoclaves sur le march
et il est important de toujours suivre les instructions du
fabricant.
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
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Analyses Titrimtriques
L'alcalinit totale
L'alcalinit totale de l'eau est donne par la somme des diffrentes formes d'alcalinit existantes, soit, par la concentration
des hydroxydes, des carbonates et des bicarbonates, exprime
en termes de carbonate de calcium. On peut dire que l'alcalinit mesure la capacit de l'eau neutraliser les acides.
La mesure de l'alcalinit est d'une importance fondamentale
dans le processus de traitement de l'eau, car cest en fonction
de sa teneur que stablit le dosage des produits chimiques
utiliss.
Normalement les eaux superficielles possdent une alcalinit
naturelle en concentration suffisante pour ragir au sulfate
d'aluminium dans les processus de traitement. Lorsque
l'alcalinit est trop faible ou inexistante, il est ncessaire
de provoquer une alcalinit artificielle en appliquant des
substances alcalines, comme la chaux hydrate ou la soude
(carbonate de sodium) afin datteindre cet objectif.
Lorsque l'alcalinit est trop leve, on procde l'inverse,
l'acidification de l'eau jusqu' obtention d'une teneur en
alcalinit suffisante pour ragir au sulfate d'aluminium ou
d'autres produits utiliss dans le traitement des eaux.
Mthode de dtermination
Le titrage avec l'acide sulfurique
Matriel ncessaire:
a) une pipette volumtrique de 50 ml;
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
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Fluxogramme de lanalyse
Echantillon de 50 ml
Indicateur
3 gouttes
si coloration
Titrer avec
45
Mthode de dtermination
Titrage avec de l'hydroxyde de sodium
Matriel ncessaire:
a) une burette de 50 ml;
b) un flacon Erlenmeyer de 250 ml;
c) une pipette volumtrique de 100 ml;
d) un bouchon en caoutchouc;
e) de lhydroxyde de sodium 0,02N;
f) phnolphtaline.
Technique
a) placer 100 ml dchantillon (sans agiter) dans un flacon
Erlenmeyer;
b) ajouter 10 gouttes de phnolphtaline, si la solution
se colore, elle ne contient pas de CO2, et si elle ne se
colore pas, continuer;
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47
100 ml
dchantillon
indicateur de
phnolphtaline
Chlorures
En gnral, les chlorures sont prsents dans eaux ltat brut
et transforms des concentrations allant de petites traces
jusqu' plusieurs centaines de mg/l. Ils sont prsents sous la
forme de chlorures de sodium, de calcium et de magnsium.
La mer a une forte concentration de chlorure qui est d'environ de 26.000 mg/l. De fortes concentrations de chlorures
peuvent restreindre l'utilisation de leau en raison de la saveur
qu'ils donnent et l'effet laxatif qu'ils peuvent causer. Le dcret
n 2.914/2011 du Ministre de la Sant brsilien tablit le
niveau de 250 mg/l comme maximum autoris pour leau
potable. Les mthodes conventionnelles de traitement des
eaux nliminent les pas chlorures. Leur limination peut se
faire par dsalinisation (osmose inverse) ou par lectrodialyse,
(change d'ions).
48
Mthode de dtermination
Titrage avec du Nitrate dargent
Matriel ncessaire:
a) une burette de 50 ml;
b) un bcher de 250 ml;
c) un flacon Erlenmeyer de 250 ml;
d) un mesureur de pH;
e) un bcher de 100 ml;
f) de la solution titre de nitrate d'argent 0,0141N;
g) de la solution de chromate de potassium indicateur
K2CrO4;
h) hydroxyde de sodium 1N;
i) acide sulfurique 1N;
j) Chlorure de sodium 0,0141 N.
Technique
a) placer 100 ml dchantillon dans le flacon Erlenmeyer;
b) ajuster le pH entre 7 et 10, en cas de besoin avec NaOH
ou H2SO4;
c) ajouter 1 ml de la solution indicatrice de K2CrO4;
d) titrer la solution avec du nitrate d'argent 0,0141N
jusqu ce que la solution vire au jaune rougetre qui
est le point de fin de titrage;
e) effectuer un essai en blanc de la mme faon que pour
lchantillon.
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
49
Calcul:
mg/L Cl =
(A B) x N x 35.45
mL dchantillon
o:
A = ml de solution titre utilise dans lchantillon;
B = ml de solution titre en blanc;
N = normalit de la solution titre;
100 ml
dchantillon
50
pH entre 7 et 10
1ml
dindicateur
La duret totale
Duret totale est calcule comme la somme des concentrations des ions calcium et magnsium dans l'eau, exprims
en carbonate de calcium.
La duret dune eau peut tre temporaire ou permanente.
La duret temporaire, appele aussi la duret carbonate est
cause par la prsence de calcium et de bicarbonates de
magnsium. Ce type de duret rsiste l'action des savons
et provoque des incrustations. Elle est appele temporaire
car les bicarbonates, par l'action de la chaleur, se dcomposent en gaz carbonique, eau et carbonates insolubles qui
se prcipitent.
La duret permanente, galement appele de duret de
non-carbonates est due la prsence de sulfates, chlorures et
nitrates de calcium et de magnsium, elle rsiste galement
l'action des savons, mais ne produit pas de dincrustations
car ses sels sont trs solubles dans l'eau. Ne se dcompose
pas sous l'action de la chaleur.
Le dcret MS n 2.914/2011 tablit la teneur en duret totale
de 500 mg/L de CaCO3 comme valeur maximale autorise
pour l'eau potable.
Mthode de dtermination
Titrage avec EDTA
Matriel ncessaire:
a) burette de 50 ml;
b) pipette volumtrique de 25 ml;
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
51
52
Calcul
Duret Totale en mg/L CaCO3 =
ml de EDTA x 1000 x Fc
ml dchantillon
Remarques:
1. Labsence dun point de virage dfini, indique gnralement le besoin dajouter un inhibiteur ou que lindicateur
est dtrior;
2. Il ny a pas besoin de plus de 5 minutes pour un titrage
mesur aprs lajout de la solution tampon;
3. Au cas o la duret de leau serait trs basse, utiliser un
chantillon plus grand, de 50 250 ml en ajoutant proportionnellement une quantit plus importante de solution
tampon de linhibiteur et de lindicateur.
4. Sil est ncessaire dutiliser un inhibiteur, ajouter 20
gouttes de linhibiteur II;
5. Fc = Facteur de correction de lEDTA si diffrent de 1.
Fluxogramme de l analyse
Mesurer 25ml
dchantillon
et diluer p/50
1 2 ml
de solution
tampon
transfrer dans
1 Erlenmeyer
de 250 ml
ajouter
lindicateur
Titrer avec
EDTA 0,01M
53
pH
Le terme pH est la concentration d'ions hydrogne dans une
solution. Dans leau, ce facteur est d'une importance exceptionnelle, en particulier dans les procds de traitement. Dans
les laboratoires de routine des usines de traitement, il est
mesur et ajust si ncessaire pour amliorer la coagulation/
floculation ainsi que pour contrler la dsinfection de leau,
la valeur du pH allant de 0 14. En dessous de 7 leau est
considre comme acide et au-dessus de 7 comme alcaline.
Leau au pH de 7 est neutre.
Le dcret n 2.914/2011 du Ministre de la Sant recommande que le pH de l'Eau soit maintenu dans la gamme de
6,0 9,5 dans le systme de distribution.
Il existe plusieurs dispositifs sur le march de la dtermination du pH. Ils sont appels potentiomtres ou colorimtres.
Dans ce manuel est dcrit le fonctionnement de base d'un
potentiomtre, bien que les instructions du fabricant peuvent
varier et quelles doivent donc tre respectes.
Matriel ncessaire:
a) potentiomtre
b) cuves;
c) flacon laveur;
d) papier absorbant;
e) solutions tampons de pH connues;
Technique
a) allumer lappareil et attendre quil se stabilise;
54
Fluxogramme du test
55
Analyses colorimtriques
Le chlore rsiduel libre
Le chlore est un produit chimique utilis pour la dsinfection de leau. Il est important de le mesurer, car cela sert
contrler le dosage qui est appliqu ainsi que son volution
durant le traitement.
Le dcret n 2.914/2011 du Ministre de la Sant rend obligatoire le maintien dun minimum de 0,2 mg/l de chlore
rsiduel libre ou de 2 mg/l de chlore rsiduel combin tout
au long de l'extension du systme de distribution (rservoir
et rseau). Il recommande galement que la rutilisation
maximale duelle chlore libre n'importe quel point dans le
systme d'alimentation soit de 2 mg/l. Les principaux produits
utiliss sont: lhypochlorite de calcium, le chlorure de chaux,
lhypochlorite de sodium et le chlore gazeux.
Mthode de dtermination
Comparaison visuelle
Matriel ncessaire:
a) comparateur colorimtrique;
b) cuves de verre ou dacrylique;
c) DPD pour chlore libre en capsules.
56
Technique
a) remplir la cuve avec de leau dchantillon jusquau
niveau de 5,0 ml;
b) la placer du ct gauche de louverture de lappareil;
c) remplir une autre cuve jusquau niveau de 5,0 ml avec
lchantillon qui va tre test;
d) ajouter une capsule du ractif DPD dans le second
chantillon et mlanger;
e) placer une cuve avec lchantillon dans le compartiment droit de lappareil;
f) faire une lecture de la teneur en chlore avant 1 minute.
Note: Au moment deffectuer la lecture, positionner le comparateur (quipement) contre une source de lumire comme
par exemple une fentre, le ciel, ou une lampe. Tourner
le disque jusqu obtenir la mme tonalit dans les deux
tubes.
Rsultat
Le rsultat est exprim en mg/l de Chlore Rsiduel Libre.
Observation: Il existe sur le march diffrents types de comparateurs colorimtriques pour mesurer le chlore rsiduel, autant que pour lutilisation de orthotolidine
et leDPD. En cas de doute, consulter, comme toujours, les instructions du fabricant. Lutilisation de
lorthotolidine est viter tant donn quil sagit
dune substance cancrigne et quelle nest plus
recommande par les Standard Methods.
Couleur
La couleur de leau provient de matires organiques, comme
par exemple les substances humiques, les tanins mais galement les mtaux comme le fer et le manganse ainsi que les
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
57
rsidus industriels fortement colors. La couleur, dans les systmes publics dapprovisionnement deau, est esthtiquement
indsirable. Il est important de la mesurer, tant donn quune
couleur leve provoque son rejet par le consommateur et
lamne chercher dautres sources de suppression parfois
beaucoup moins sres.
Le dcret MS n 2.914/2011 tablit pour la couleur apparente
une valeur maximale permise de 15 (quinze) uH comme
standard organoleptique pour la consommation humaine.
Mthode de dtermination
Mthode de Comparaison visuelle
Matriel ncessaire:
a) tubes de Nessler longs de 50 ml;
b) support en bois;
c) solution-standard de chloroplatinate de potassium (500
units de couleur).
Technique
a) prparer les standards de couleur dans la bande de
5 50 units de couleur, mesurant 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5;5,0; 6,0 et 7,0 ml de la solution
standard (500 units de couleur) et les placer dans des
tubes de Nessler de 50 ml;
b) diluer avec de leau distille jusqu la marque de 50
ml;
c) mesurer 50 ml de lchantillon dans un autre tube de
Nessler et comparer avec les standards.
58
Rsultat
Le rsultat est lexprim en units de couleur ou unit
Hazen (uH).
Remarques:
1. la comparaison devra tre faite en regardant les tubes
verticalement contre un fond blanc;
2. Protger les standards de lvaporation et de la poussire;
3. lorsque la couleur de lchantillon est plus leve que 70
units, diluer jusqu obtenir un rsultat lintrieur de la
bande couverte par les standards. Dans ce cas, le rsultat
doit tre multipli par le facteur de dilution;
4. uH est lunit de lchelle de Hazen (platine-cobalte,
mgPt- Co/l).
Aluminium
Le test de laluminium est indiqu pour les stations de traitement o le sulfate daluminium est utilis comme coagulant.
Un dosage incorrect de ce coagulant se note la quantit
significative daluminium qui persiste dans leau traite.
Lhydroxyde daluminium Al(OH)3 form dans la raction
est amphotre. Sa ionisation seffectue par le pH acide ou
basique, selon les quations:
En pH acide:
Al(OH)3
[ H+]
Al3 + nH2O
+
En pH basique:
Al(OH)3
[OH-]
AlO33 + nH2O
59
Mthode de dtermination
La dtermination de laluminium peut tre faite grce aux
mthodes dabsorption atomique, de leriochrome cyanine R
en utilisant un photomtre de filtre ou un spectrophotomtre,
ainsi que par la mthode de comparaison visuelle, en utilisant
des tubes de Nessler.
Dans ce manuel, on dcrira la mthode de comparaison visuelle, considrant que la plupart des laboratoires des services
dapprovisionnement en eau ne possdent pas toujours des
quipements comme un spectrophotomtre ou dabsorption
atomique.
Ractifs
a) acide sulfurique 0,02N;
b) ractif tampon dactate de sodium;
c) riochrome Cyanine -R- (colorant);
d) solution de travail du colorant.
Technique
a) mesurer 25 ml dchantillon ou une portion dilue pour
25 ml dans un flacon Erlenmeyer de 125 ml;
b) ajouter 3 gouttes de mthylorange et titrer avec de lacide
sulfurique (H2SO4) 0,02N jusqu obtenir une lgre
coloration rose ple;
c) noter le volume utilis dacide et jeter lchantillon;
d) mesurer nouveau 25 ml dchantillon ou un aliquote
dilu dans 25 ml et les placer dans un tube de Nessler
de 50 ml;
e) ajouter lchantillon le mme volume dacide sulfurique utilis dans ltape N 2, en ajoutant 1 ml en trop;
f) ajouter 1,0 ml dacide ascorbique et mlanger;
g) ajouter 10,0 ml du ractif tampon et mlanger;
h) ajouter 5,0 ml de la solution de travail du colorant et
mlanger;
i) diluer immdiatement jusqu la marque de 50 ml avec
de leau distille;
j) mlanger et laisser reposer 5 10 minutes, ensuite comparer la couleur dveloppe par lchantillon avec les
standards prpars de la mme manire et la mme
heure.
61
Rsultat
Le rsultat est exprim en mg/m daluminium.
Observation: Dans cette mthode il nest pas ncessaire de prparer un chantillon blanc et ce nest pas recommand non plus pour les chantillons qui contiennent
de la couleur et de la turbidit car cela peut amener
des erreurs.
g Al/mL
0,0
2,5
5,0
7,5
10,0
12,5
Volume
dchantillon
25
25
25
25
25
25
mg/L Al
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
Remarques:
1. Pour le standard 0,0 mg/l, prendre 25 ml deau distille et
procder de la mme faon que pour les autres;
2. Prparer les standards chaque examen dchantillon;
3. Si le laboratoire possde un spectrophotomtre, faire une
lecture des standards 535 nm et tracer une courbe de calibration en papier semi logarithme (% de transmission par
concentration). Dans ce cas, il est ncessaire de prparer tous
les standards en cas dexamen dun chantillon. Effectuer
peine un ou deux tests pour vrifier la courbe de calibration
de lappareil.
Turbidit
La turbidit de leau est due la prsence de matriaux solides
en suspension qui rduisent sa transparence. Elle peut tre
galement provoque par la prsence dalgues, de plancton,
de matire organique et plein dautres substances comme le
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
63
Mthode Nphlomtrique
Matriel ncessaire:
a) turbidimtre avec un nphlomtre;
b) cellules dchantillons de verre incolore (quartz),
c) ballon volumtrique de 100 ml;
d) pipette volumtrique de 5 ml;
e) ensemble de filtration;
f) filtres de membrane de 0,2 m.
Ractifs:
Eau libre de turbidit:
a) passer leau distille travers un filtre de membrane
de 0,02 m de porosit. Rincer le flacon de collecte au
moins deux fois avec de leau filtre et ne pas prendre
en compte les premiers 200 ml;
Suspension stock de turbidit standard primaire.
Solution I
- Dissoudre 1,0 g de sulfate dhydrazine (NH2). H2SO4
dans de leau distille et diluer 100 ml dans un ballon
volumtrique;
Avertissement: le sulfate dhydrazine est cancrigne. Eviter linhalation, lingestion et le contact avec la peau.
Solution II
- dissoudre 10,0g dhexamthylnettramine (CH2)6N4
dans de leau distille et diluer 100 ml dans un ballon
volumtrique;
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
65
Calcul:
uT =
A x (B + C)
C
o:
UT = UTN = Unit de Turbidit nphlomtrique;
A = Turbidit de lchantillon dilu;
B = Volume de la dilution (ml);
C = Volume de lchantillon pris pour la dilution.
Exemple: Une portion de 10 ml de lchantillon a t dilue pour
50 ml avec de leau libre de turbidit. Lorsquon effectue la lecture de cet chantillon dilu, on obtient 20
UT =
20 x (40 + 10)
10
UT = 100
Temprature
La temprature dpend de laugmentation de la consommation deau, de la fluoration, de la solubilit et de lionisation
des substances coagulantes, du changement du pH, de la
dsinfection, etc.
67
Technique
a)
b)
c)
d)
Les Fluorures
Ladjonction de fluor dans leau pour la consommation
humaine a pour finalit de prvenir les caries dentaires.
Aujourdhui, cette procdure est considre comme un processus normal de traitement de leau et la teneur optimale de
fluor est une partie essentielle de sa qualit. Pour cette raison
et pour dautres, son contrle seffectue obligatoirement dans
la station de traitement de leau (ETA).
Il existe plusieurs mthodes pour dterminer le fluor dans
leau. Les trois les plus connues sont: la mthode Spadns,
la Scott-Sanchis et la mthode de llectrode spcifique par
ions fluorures.
Dans ce manuel, nous ne dcrirons que la mthode Scott-Sanchis, qui mme si elle ne donne pas le degr dexactitude le
plus important, rpond aux attentes et cest la moins onreuse.
Cest une mthode de comparaison visuelle de couleur fate
en tubes de Nessler.
b)
c)
d)
e)
Ractifs:
a) solution norme de fluorures (1ml = 10 gF);
b) ractif Scott-Sanchis;
c) arsnite de sodium (0,5%).
Prparation des standards et de lchantillon:
a) prendre 7 tubes de Nessler de 100 ml;
b) remplir le 1er tube avec de leau distille (blanc);
c) pipeter dans le 2me tube 2 ml de la solution norme;
d) pipeter dans le 3me tube 4 ml de la solution norme;
e) pipeter dans le 4me tube 6 ml de la solution norme;
f) pipeter dans le 5me tube 8 ml de la solution norme;
g) pipeter dans le 6me tube 10 ml de la solution norme;
h) remplir le 7me tube avec 100 ml dchantillon ou
un aliquote dilu 100 ml. Sil y a du chlore dans
lchantillon, lenlever en ajoutant 0,1ml (2 gouttes)
de solution darsnite de sodium pour chaque mg/l de
chlore;
i) diluer les standards de 2 6 100 ml avec de leau
distille;
j) ajuster la temprature des standards et de lchantillon;
k) ajouter dans chaque tube, mme le blanc, (1er tube) 5
ml du ractif Scott-Sanchis;
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
69
Fluxogramme du test
Solution
standard
Ractif
Scott-Sanchis
5ml dans chaque tube
chantillon
70
Remarques:
1. La concentration des standards prpars (tubes de 2
6 correspond respectivement 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
mg/l dion fluorure;
2. de nombreux chantillons pourront tre analyss simultanment avec les standards;
3. Sil y a des intervenants dans les chantillons en concentrations qui peuvent altrer les rsultats, ces chantillons
devront tre distills.
Mthode Scott-anchis
Type derreur
Alcalinit (CaCO3)
400 mg/L
Aluminium (AL3+)
0,25 mg/L
--
Chlorure (Cl-)
2000 mg/L
Fer (Fe3+)
2,0 mg/L
Hexamtaphosphate
(NaPO3)6
1,0 mg/L
Phosphate (PO4-3)
5,0 mg/L
Sulfate (SO4-2)
300 mg/L
71
thermomtre
Ballon de
distillation
condensation
Ballon
volumtrique
Bec
de bunsen
72
Distillation de lchantillon
Ajouter soigneusement 300 ml dchantillon au mlange
dacide qui est rest de la distillation prliminaire et distiller
comme avant jusqu ce que la temprature atteigne 180oC.
A ce moment le liquide distill sera gal 300 ml.
Remarques:
1. Ne pas laisser la temprature dpasser 180oC, afin dviter des traces de sulfate dans le liquide distill.
2. Lorsque les chantillons haut contenu en fluorures sont
analyss, ajouter au ballon de distillation 5 mg de sulfate
dargent pour chaque mg de fluorure prsent dans lchantillon.
3. utiliser la solution dacide sulfurique plusieurs fois
jusqu ce que les contaminants des chantillons deau
accumuls dans le flacon de distillation commencent intervenir dans le liquide distill. Lorsque cela arrive, ne pas
tenir compte de lacide et recommencer nouveau.
Important: le dosage de fluor dans leau pour la consommation
humaine est tablit en fonction de la moyenne des tempratures
maximales journalires de la localit observes pendant une priode
dtermine.
73
Volume
minimum (mL)
Verre ou
polythylne
200
Rfrigrer
24h/14d
CO2
100
Analyse
immdiate
Dureza
100
HNO3 pH < 2
6 mois
Chlorures
100
pas besoin
7 jours
Aluminium
HNO3 pH < 2
6 mois
Polythylne
300
pas besoin
28 jours
Analyse
immdiate
Turbidit
Verre ou
Polythylne
200
Protger
de la lumire
Chlore
Rsiduel
Verre ou
polythylne
500
Analyse
immdiate
30min/2h
pH
200
Analyse
immdiate
Cor
500
Rfrigrer
24h
Paramtres
Alcalinit
Fluorures
Te m p r a ture
Conservation
Temps
maximum
24h
Remarques:
1. Les volumes dcrits ici sont estims. Dans la pratique, on
doit prlever le volume ncessaire pour la ralisation des
analyses, car il existe des rptitions danalyses qui sont
souvent ncessaires.
2. Lorsquon conserve avec de lacide nitrique, utiliser 2 ml
dacide pour chaque litre dchantillon.
3. Normalement, dans les stations de traitement des eaux
ETAs, les analyses doivent tre effectues immdiatement
aprs le prlvement. Il nest pas dusage de laisser les
chantillon beaucoup de temps avant de les analyser.
74
75
76
Procdure 1 (Considrant que leau brut ait une alcalinit naturelle suffisante et galement un pH optimal
de floculation).
a) placer 6 bchers d1 litre dans la plateforme de lappareil
de Jar-Test;
b) les remplir avec de leau brute jusquau niveau de 1000
ml;
c) allumer lappareil vitesse maximale de 100 r.p.m;
d) ajouter simultanment dans les bchers la quantit de
coagulant (sulfate daluminium) qui a t calcule pour
chaque bcher;
e) laisser agiter cette vitesse pendant 2 3 minutes (temps
de dtention dans la chambre de mlange rapide);
f) rduire la vitesse dagitation 50 r.p.m pendant 10 30
minutes (temps de dtention dans les floculateurs);
g) laisser les chantillons dcanter pendant un certain temps
(ce temps correspond la vitesse de sdimentation dans
le dcanteur 10 30 minutes);
h) recueillir les particules surnageant de tous les bchers et
analyser les paramtres ncessaires afin de vrifier lesquels
ont prsent le meilleur rsultat;
i) normalement le meilleur rsultat est celui qui a prsent
la plus grande rduction de couleur et de turbit et cest
ce dosage qui devra tre choisi.
77
78
Alcalinit
thoriquement
ncessaire
mg/L (CaCO3)
Alcalinit
naturale
dsire
(CaCO3)
Quantit
thorique de
cal mg/L *
Quantit de cal
souhaitable
mg/L *
10
15
20
25
30
40
50
5
7
9
12
14
18
25
7
10
14
17
20
27
34
3
4
5
7
8
10
13
4
6
8
10
12
15
19
79
Mthode de dtermination
Essai du marbre
Matriel ncessaire:
a) ballon volumtrique de 1000 ml;
b) mesureur de pH;
c) une balance;
Ractif:
Carbonate de calcium
Technique
a) mettre 750 ml deau filtre dans un ballon volumtrique
de 1000 ml;
b) dterminer le pH et lalcalinit (I) de cette eau;
c) ajouter 10 grammes de carbonate de calcium au ballon;
d) agiter pendant 1/2 heure; laisser dcanter et filtrer;
e) dterminer le pH;
80
81
Technique
a) mesurer 1,0 ml de la solution;
b) dissoudre dans 50 ml deau distille;
c) ajouter 5,0 ml dacide actique concentr (glacial);
d) ajouter 1,0 g de iodure de potassium;
e) titrer avec une solution de thiosulfate de sodium 0,1
N;
f) noter les ml de thiosulfate utiliss.
Calcul
% de chlore =
o:
(A-B) x N x 35,45
P x 10
82
Standardisation de la solution
Placer 50 ml dune solution de carbonate de sodium 0,02
N dans un flacon Erlenmeyer de 250 ml et ajouter 4 gouttes
dindicateur mthylorange. Titrer avec H2SO4 0,02N jusqu
ce que lindicateur ait une lgre coloration jauntre. Noter
le volume dacide utilis.
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
85
N X V
V
o:
N = normalit du H2SO4 dsire;
V = volume dacide utilis dans le titrage;
N = normalit du carbonate de sodium;
V = volume du carbonate de sodium utilis.
1 ml de H2SO4 0,02 N = 1,0 mg de CaCO3
Indicateur mthylorange
Peser 0,100 grammes de mthylorange et les dissoudre
dans200 ml deau distille.
Phnolphtaline
a) dissoudre 1 gramme de phnolphtaline dans un peu
deau distille et diluer 200 ml.
b) ajouter des gouttes de NaOH 0,02 N jusqu lapparition
dune lgre coloration rose.
86
87
Si le volume de H2SO4 0,1 N utilis dans le titrage est suprieur ou infrieur 10 ml, calculer le Facteur de correction
(Fc) de la solution de NaOH en utilisant la formule suivante:
Fc (NaOH) =
mL H2SO4 x Fc (H2SO4)
mL de NaOH
88
Remarques:
1. Il nest pas facile de visualiser lorsque lindicateur vire.
Effectuer un test blanc avec 100 ml deau distille pour
comparer la couleur au moment o lindicateur vire;
2. En ajoutant lindicateur, la solution devient jauntre et
la fin du titrage la solution reste lgrement jauntre;
3. Leau libre de CO2 peut tre obtenue en bouillant de
leau distille pendant 15 minutes et en la refroidissant rapidement temprature ambiante.
Phnolphtaline
a) dissoudre 1 gramme de phnolphtaline dans un peu
deau distille et diluer 200 ml;
b) ajouter quelques gouttes de NaOH 0,02N jusqu lapparition dune lgre coloration rose.
89
100
Vp
o:
Fc = Facteur de correction.
Vp = Volume de AgNO3 utilis dans le titrage.
Solution indicatrice de chromate de potassium (K2CrO4)
a) peser 50 grammes de K2CrO4 et les dissoudre dans un
peu deau distille;
b) ajouter de la solution dAgNO3 0,0141 N jusqu la
formation dun prcipit rouge;
c) laisser reposer pendant 12 heures;
d) filtrer et complter le volume pour obtenir 1000 ml
avec de leau distille.
90
91
25
Vp
o:
Fc = Facteur de Correction;
Vp = Volume dEDTA utilis dans le titrage.
Solution tampon pour la duret
a) peser 16,9 grammes de chlorure dammoniac (NH4Cl)
et les dissoudre dans 143 ml dhydroxyde dammoniac
concentr (NH4OH);
b) ajouter 1,25 grammes de sel de magnsium dEDTA t
diluer 250 ml avec de leau distille.
Observation: Si vous ne disposez pas de sel de magnsium
dEDTA, dissoudre 1,179 grammes de sal sodique
dEDTA et 780 mg de MgSO4.7H2O ou 644 mg de
MgCl2.6H2O dans 50 ml deau distille et ajouter
le tout la solution de ltape a) en compltant le
volume pour 250 ml avec de leau distille.
93
95
Ractifs Scott-Sanchis
a) ajouter le mlange acide la solution ractive Zirconil-alizarine;
b) complter le volume pour 1000 ml avec de leau distille et mlanger;
c) conserver dans un flacon ambre et dans un endroit
protg de la lumire directe. Ce ractif reste stable
pendant 6 mois.
Arsnite de sodium
a) peser 5 g darsnite de sodium (NaAsO3) et dissoudre
dans un peu deau, diluer pour 1 litre avec de leau
distille (utiliser 1 goutte pour chaque 0,1mg de chlore
existant dans lchantillon).
Observation: cette solution est toxique viter lingestion et le
contact avec la peau.
97
98
Calcul
Normalit =
1
mL de thiosulfate consomm
Rgle 1
Lorsque le volume consomm de la solution titrer est gal
au volume de la solution-standard pris pour le titrage, cela
signifie quelle est exacte. Ex.: 10 ml de HCl 0,1N ont t
consomms pour titrer 10 ml de Na2CO3 0,1N.
Rgle 2
Lorsque le volume consomm de la solution titrer est infrieur que le volume du standard pris, cela signifie que la
solution titrer est plus concentre. Dans ce cas, corriger de la
faon suivante: Ex.: 8,3 ml de HCl 0,1 N ont t utiliss dans
le titrage de10 ml de Na2CO3 0,1N; en appliquant lquation
suivante, nous avons: 8,3: 10:: x: 1000.
Les calculs effectus donnent:
10x = 8,3 x 1000
x = 8300/10 x = 830 ml
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
99
Ensuite, on mesure 830 ml de la solution titrer et on complte 1000 ml avec de leau distille. Faire un nouveau
titrage pour vrifier la rigueur du dosage qui ne doit pas rester
au-dessous de 9,9 et au-dessus de 10,1 ml.
Rgle 3
Si le volume de la solution titrer est suprieur celui de
la solution standard, cela signifie que la solution titrer est
plus dilue. Dans ce cas, on calcule le facteur de correction
de la faon suivante:
Exemple: 10,5 ml dune solution de HCl 0,1N ont t consomms pour titrer 10 ml dune solution standard de Carbonate de Sodium.
En appliquant lquation suivante, nous avons:
10,5: 10:: 1: x
Les calculs effectus donnent:
10 = 10,5x x = 10/10,5 x = 0,9524
Le facteur de correction de la solution est donc de
0,9524.
100
Procdure de lavage
Pour de la verrerie neuve:
a) la majorit des matriels en verre neuf est lgrement
alcaline, de ce fait ces matriels doivent tremper
pendant quelques heures dans une solution dacide
chlorhydrique ou nitrique 1% avant dtre lavs.
Pour de la verrerie dj utilise:
a) Les matriels en verre dj utiliss avec un milieu de
culture (botes de Ptri, tubes de culture), doivent tre
striliss avant dtre lavs. Ensuite ils doivent tre
placs dans un grand rcipient contenant de leau et 1
2% de savon ou de dtergent, en les laissant bouillir
pendant 30 minutes. Ils doivent ensuite tre rincs
leau courante, nettoys avec des dtergents neutres et
rincs nouveau;
b) Dans certaines situations o les matriaux de verre
ne pourraient pas tre propres avec des dtergents
communs ou dautres produits de nettoyage, il serait
ncessaire dutiliser un mlange constitu dacide sulfurique et de solution sature de dichromate de sodium,
prpare de la faon suivante: mlanger 1 litre dacide
sulfurique concentr avec 35 ml de la solution sature
de dichromate de sodium. Cette solution ne doit pas
tre utilise pour le lavage de verreries utilises pour
lanalyse du chrome.
Remarques:
1. La solution prcite est acide et attaque la peau;
2. ne pas permettre le contact entre la main et la solution;
3. la solution attaque les tissus. Eviter le contact avec les
affaires;
4. ne pas laver avec cette solution les verres colls comme
les cuves utilises dans les spectrophotomtres, les cuves
de turbidit, etc.;
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
101
102
Verrerie
a) tube pour culture, sans bord, taille 150 x 16 mm;
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
103
Matriels divers
a) anse de platine calibre 3 mm de diamtre;
b) cble Kolle pour manipuler le platine;
c) coton en feuille pour la bactriologie;
d) crayon dermographique;
e) bouillon lactos, dshydrat, en emballage de 100 ou 500
grammes;
f) bouillon lactos, bili vert brillant 2%, dshydrat, en
emballage de 100 ou 500 grammes;
g) milieu ENDO MF, pour coli total, en emballage de 100
ou 500 grammes;
h) milieu EC MF, pour coli fcal, en emballage de 100 ou
500 grammes;
i) pourpre de bromocrsol en emballage de 5 grammes;
j) tagre pour tubes essai, avec une capacit de 15 tubes
de 180 x 18 mm, en bois ou en plastique rsistant.
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La bioscurit en laboratoire
Dans ce manuel ne sont contenues que les principales procdures en matire de bioscurit en laboratoire, procdures
qui devront tre respectes par les techniciens qui travaillent
dans ce domaine.
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f) Garder les quipements de scurit dans un local facilement accessible et porte de tous les employs du
laboratoire, tels que:
extincteur dincendie;
douche durgence;
lave-yeux;
couverture de scurit;
masque gaz;
masque et lunettes de scurit, etc.
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Annexe A
Indroduction
A la fin de llaboration de ce manuel, dj rvis et adapt
la lgislation actuelle concernant la qualit de leau pour la
consommation humaine, les procdures de base de collecte
dchantillons de leau afin de didentifier et de compter les
cyanobactries dans les sources dapprovisionnement ont
t incluses.
Une telle initiative est due une eutrophisation en hausse
des milieux aquatiques qui a t produite principalement par
lactivit humaine, causant un enrichissement artificiel de ses
cosystmes. Les sources principales de cet enrichissement
ont t identifies comme les dversements dgouts domestiques et industriels des centres urbains ainsi que la pollution
diffuse venant des rgions agricoles. Cette eutrophisation
artificielle produit des changements dans la qualit de leau,
dont: la rduction de loxygne dissout, la perte des qualits
scniques, cest--dire, des caractristiques esthtiques du
milieu et de son potentiel de loisir, la mort de nombreux
poissons et laugmentation de lincidence de floraison de
micro-algues et de cyanobactries, avec des consquences
ngatives sur lefficience et le cot du traitement de leau,
lorsquil sagit de la source dapprovisionnement public. Ces
floraisons ou blooms se caractrisent par une croissance
intense de ces micro-organismes sur la superficie de leau, formant une couche dense de cellules de plusieurs centimtres
de profondeur, ayant des consquences sur la sant publique.
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b) sil y a une floraison de cyanobactries et que le comptage de ces dernires dpasse 20.000 cellules/ml, des
chantillons devront tre collects la source et la
sortie de lETA, selon le dcret MS n 2914/2011;
c) sil ny a pas de de floraison de cyanobactries, un
chantillon devra tre collect au point de captation
de lETA, la source.
Identification des chantillons
a) tous les chantillons devront tre identifis par une
numrotation sur le flacon de collecte mme, mentionnant galement les fiches de collecte ou fiches de
prlvement;
b) les fiches de prlvement accompagneront les chantillons et devront comporter les donnes suivantes: nom
et adresse de lintress, nom et type de la source, date
et heure de collecte, description du local de collecte
GPS, nom du collecteur et apparition de phnomnes.
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Annexe B
Dtermination du Giardia sp et du
Cryptosporidium sp dans leau par la technique
de filtration, de sparation immunomagntique
et de microscopie de limmunofluorescence
Introduction
La transmission de protozooses via lapprovisionnement
deau, en particulier le Giardia et le cryptospordium, est un
sujet de proccupation grandissant pour la sant publique.
Les protozoaires sont des micro-organismes eucariotiques,
unicellulaires, sans parois cellulaires qui se nourrissent de
bactries et dautres organismes. La plupart des protozoaires
sont ltat libre et on les rencontre frquemment dans les
eaux superficielles, dont (o ?) beaucoup despces sont
parasites. Les effets sur la sant dcoulant de lexposition
aux protozoaires prsents dans leau de consommation sont
multiples. Leffet le plus commun se manifeste par des drangements gastro-intestinaux, normalement de courte dure.
Cependant, chez les individus sensibles, tels que les enfants,
les personnes ges et les immunodprims, les effets peuvent
tre plus graves, chroniques et mme fatals.
La transmission de protozooses via lapprovisionnement
deau, en particulier le Giardia et le cryptospordium, est un
sujet de proccupation grandissant pour la sant publique.
Les protozoaires sont des micro-organismes eucariotiques,
unicellulaires, sans parois cellulaires qui se nourrissent de
bactries et dautres organismes. La plupart des protozoaires
sont ltat libre et on les rencontre frquemment dans les
eaux superficielles, o beaucoup despces sont parasites. Les
effets sur la sant dcoulant de lexposition aux protozoaires
prsents dans leau de consommation sont multiples. Leffet
le plus commun se manifeste par des drangements gastro-intestinaux, normalement de courte dure. Cependant, chez les
individus sensibles, tels que les enfants, les personnes ges
et les immunodprims, les effets peuvent tre plus graves,
chroniques et mme fatals.
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1. Principe de la mthode
La technique de dtection du Cryptosporidium et du Giardia dcrite dans cette procdure est base sur les tapes
suivantes: concentration de lchantillon par filtration et
centrifugation, purification par sparation immunomangntique (IMS), coloration et lecture de lames (microscopie
de limmuno-fluorescence FA). Le cryptosporidium et le
Giardia sont identifis grce des colorants DAPI (de langlais 4-6-Diamidino-2-phenylindole) et une microscopie
de contraste par interfrence diffrentielle. Cette mthode
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
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2. Interfrents
Turbidit
Organismes ou dtritus
auto-fluorescence ou
Immuno-fluorescence
Contamination
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Inexprience du laborantin
Lidentification d(oo)cystes au
microscope exige une capacit
du
laborantin
didentifier
autant les genres grce un
chantillon
environnemental
(compos de components divers)
qu lentranement dans les
tapes diverses des mthodes
dutilisation des quipements.
3. Scurit
Les dangers de contamination biologique associe et le risque
dinfection par des cystes et des oocystes sont levs dans cette
mthode, tant donn quelle inclut la manipulation dchantillons concentrs dorganismes pathognes vivants (actifs), cest
pourquoi ils doivent tre manipuls avec des gants;
Le laboratoire doit tablir des mesures de scurit et des
pratiques de sant appropries, observant les procdures
de scurit typiques des laboratoires de microbiologie qui
traitent des organismes pathognes durant la prparation,
lutilisation et llimination dchantillons concentrs, de
ractifs et de matriels dans la manipulation et la strilisation
dquipements;
Les connaissances de la toxicit ou de la carcinognicit des
composants ou ractifs utiliss ne sont pas bien consolides,
ainsi chaque composant doit tre trait comme potentiellement dangereux pour la sant, ce qui implique une exposition
la plus rduite possible ces produits;
Le transport dchantillons contenant des agents infectieux
doit tre ralis de faon rigoureuse, en procdant de prfrence linactivation des agents. En outre, on doit respecter
les standards et les lgislations en vigueur concernant le
transport dagents biologiques inactifs ou non.
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
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4. Equipements et matriels
Remarque: les marques ou les fournisseurs cits le sont titre de
rfrence. Des rsultats quivalents peuvent tre atteints en utilisant dautres marques, il faut nanmoins
respecter ladquation des intrants utiliss.
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5. Ractifs
5.1 Hydroxyde de sodium;
5.2 Acide chloridrique;
5.3 A
ctone;
5.4 G
lycrole;
5.5 E thanol;
5.6 M
thanol;
5.7 Eau ractive (eau ultra pure);
5.8 Tween 20 (Sigma Chemical);
5.8.1 Tampon phosphate salin PBS pH 7.4 (Sigma Chemical): 8 g NaCl; 0.2 g KCl; 1.15 g Na2HPO4 anhydre;
0.2 g KH2PO4; 1,0 L deau ractive;
5.8.2 DAPI 4',6-diamidino-2-phenylindole (Sigma Chemi- cal);
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6. Prlvement dchantillon
6.1 Remplir entirement le contenant assurant ainsi une
collecte de 10 L (la version de la mthode utilisant un
filtre dponge Filta Max a t valide pour un volume
de 50 L, toutefois des volumes dchantillon alternatifs
peuvent tre utiliss);
6.2 Les chantillons devront tre prlevs dans un volume
unique et conservs au rfrigrateur entre 1oC et 10oC,
sans les congeler, jusqu leur traitement;
7. Identification de lchantillon
7.1 Identifier correctement l chantillon;
7.1.1 Enregistrer les informations concernant la provenance
de lchantillon ainsi que la date et lheure de prlvement;
7.1.2 Enregistrer les donnes de lanalyse: date du dbut de
lanalyse, volume analys et volume du centrifugat;
7.1.3 Enregistrer les lots des ractifs et des solutions utiliss.
8. Filtration
8.1 Mettre le filtre en mousse sur le porte-filtre;
8.2 Connecter laide de tuyaux de silicone ou du porte-filtre
au rcipient contenant lchantillon et la pompe ou la
ligne de pression;
8.3 Leffluent pendant le processus de filtration doit tre
conserv dans un rcipient gradu afin de mesurer son
volume;
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9. E lution
Remarque: le processus dlution dcrit utilise la station de lavage
Filta-Max, il est fortement recommand de lire les
instructions du fabricant afin de connatre le fonctionnement du montage et du mode dopration de lappareil. On peut galement utiliser un Stomacher en
option.
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10. Centrifugation
10.1 Centrifuger le tube de 50 ml 1500g pendant 15 minutes.
10.2 Aspirer avec soin ce qui surnage jusqu 5 ml au dessus
du sdiment laide dune pipette de Pasteur.
10.3 Enregistrer le volume du sdiment.
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x 5,0 mL
Par exemple, si le volume du prcipit est de 1,2 ml, le volume total ncessaire est de 12 ml. Ajouter de leau purifie
au tube centrifuger pour complter le volume 12 ml.
11.1.3 Si tout le volume obtenu est soumis lIMS, le diviser
par 5 ml et calculer le nombre de sous-chantillons
qui devront tre analyss (en arrondissant au chiffre
rond suprieur le plus proche). Dans lexemple sit
ci-dessus, 12/5 ml = 2,4, en arrondissant cela donne
3 sous-chantillons.
Manuel Pratique dAnalyse de lEau
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11.1.4 Si le volume tre analys est partiel, remuer vigoureusement le volume total en vortex afin de suspendre
compltement le prcipit.
11.2 Prparer pour chaque concentr 1,5ml dune dilution
1X du tampon SL-A 10X. Pour chaque 1,0 ml requis de
la solution dilue, mlanger 100L (0,1ml) et 900L
(0,9ml) deau ractive.
11.3 Transfrer 5ml de lchantillon concentr (ou sous-chantillon) dans le tube de Leighton (ct plat) contenant 1,0 ml de chaque tampon SL-A 10X et SL-B 10X
(Dynabeads GC-Combo) laide dune pipette de 10ml.
11.4 Rincer deux fois avec de leau ractive le tube contenant le concentr (ou sous-chantillon), de sorte que
le volume final dans le tube de Leighton soit de 12 ml.
11.5 Ajouter chaque tube de Leighton (contenant lchantillon
et les tampons), 100 ml de DynabeadsCrypto-Combo
et 100ml de DynabeadsGiardia-Combo, homogniss lavance dans le vortex pendant 10 secondes.
Mettre les tubes dans lagitateur rotatoire pendant au
moins 1 heure, 18rpm.
11.6 Transfrer le tube de Leighton dans le concentrateur
magntique de particules (MPC1 ou MPC6), homogniser, manuellement et avec soin, dans un angle de
90o approximativement pendant 2 minutes.
11.7 Eliminer ce qui surnage sans retirer le tube du concentrateur magntique de particules et sans remuer la matire.
11.8 Si lchantillon est flou, liminer ce qui surnage, suspendre le sdiment dans 10 ml de PBS et rpter la procdure dans le concentrateur magntique de particules.
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12. Coloration
12.1 Laisser les lames scher temprature ambiante pendant la nuit (ou jusqu ce que la lame soit compltement sche). Suivre les instructions du fabricant afin
deffectuer la coloration immuno-fluorescente.
Remarque: la coloration doit tre commence dans les 72h suivant la prparation de la lame.
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12.7 Seller les bords de la lamelle couvre-objet prcautionneusement avec du vernis transparente.
12.8 Prparer des lames de contrle positif ou ngatif, en
suivant les spcifications du fabricant.
Remarque:
lexamen microscopique doit tre commenc tout
de suite aprs la fin de la coloration, mais si les colorants ne perdent pas leur fluorescence, il peut tre
ralis dans un dlai de 168h (7 jours) si les lames sont
conserves labri de la lumire.
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Bibliographie
Bibliographie
BATALHA, B. H. L.; PARLATORE, A. C. Controle da qualidade da gua
para o consumo humano: bases conceituais e operacionais. 1. ed. So
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BRASIL. Ministrio da Sade. Fundao Nacional de Sade. Manual tcnico de anlise de gua para consumo humano. Braslia: Funasa, 1999.
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COELHO, L. Tcnicas de laboratrio clnico. So Paulo: Atheneu, 1968.
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MAIER, F. J. Fluoruracion del agua potable. 1. ed. Mxico: Limusa-Wiley,
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ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD (OMS). Guias para a calidad
del agua potable. 2. ed. Ginebra, 1995. v.1.
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______. Guias para a calidad Del agua potable. 3. ed. Ginebra, 2004. v.1.
ORGANIZAO PAN-AMERICANA DA SADE (OPAS). Fascculo gua: a
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SANTOS FILHO, D. F. Tecnologia de tratamento de gua: gua para indstria. 1. ed. Rio de Janeiro: Editora AN, 1976.
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Elaboration
Elaboration
Elaboration
Marinaldo da Silva Valente/Suest/AM/Funasa
Collaborateurs de Funasa
Osman de Oliveira Lira/Suest/PE/Funasa
Nilce Bazzoli/Suest/MG/Funasa
Jlio Csar Reis da Silva/Suest/MA/Funasa
Raimundo Rodrigues dos Santos Filho/Suest/MA/Funasa
Miguel Crisstomo Leite Brito/Densp/Funasa
Coordination
Maria Fernanda Bittencourt/Densp/Funasa
Rvision Technique
Felizana M.M. da S. Palhano
Girlene Rodrigues Leite
Vilma Ramos Feitosa/Densp/Funasa
Marinaldo da Silva Valente/Suest-Am/Funasa
Rvision de la 3me dition
Ana Maria Moreira Dias Cocag/Desam/Funasa
Aristeu de Oliveira Junior Cocag/Desam/Funasa
Antonio Carlo B. Brando Cocag/Desam/Funasa
Demtrius Brito Viana Consultant OPS/Funasa
Osman de Oliveira Lira URCQA/Sesam/Suest-PE/Funasa
Rvision orthographique et grammaticale de la 3me dition
Leila Santos Coesc/Gab/Prsi/Funasa/MS
Examen 4me dition et mise jour
Ana Maria Moreira Dias Cocag/Desam/Funasa
Aristeu de Oliveira Junior Cocag/Desam/Funasa
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