Universidad de Colima

Maestra en Ciencias, rea: Biotecnologa

SUCESIN DE LA COMUNIDAD BACTERIANA EN SUELOS SALINOS
ENMENDADOS CON PAJA DE MAZ Y GLUCOSA

Tesis
Que para obtener el grado de

Maestro en Ciencias, rea Biotecnologa

Presenta:
Hctor Manuel Lpez Prez
Asesor:
Dr. Jos Gerardo Lpez Aguirre
Co-asesores:
Dr. Sergio Aguilar Espinosa
Dr. Javier Farias Larios
Dra. Mara del Roco Flores Bello
M.C. Salvador Guzmn Gonzlez

Tecomn, Colima, Noviembre del 2002

UNIVERSIDAD DE COLIMA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
OFICIO No. 646/2002.

C. HECTOR MANUEL LPEZ PREZ

EGRESADO DE LA MAESTRIA EN CIENCIAS
REA: BIOTECNOLOGA
PRESENTE.

Con fundamento en le dictamen emitico por el jurado revisro del colegiado del rea: de
Biotecnologa de esta Facultad a mi cargo, de su trabajo de tesis de Maestra y en virtud de que
efectu las correcciones y acat las sugerencias que le haban indicado los integrantes del mismo,
se le autoriza la impresin de la tesis " Sucesin de la comunidad bacteriana en suelos salinos
enmer ndados
con paja de maz y glucosa ", misma que ha sido dirigida por el Dr. Jos Gerardo
Lpez Aguirre, Profesor Investigador de esta Facultad.
Este documento reuni todas las caractersticas apropiadas como requisito parcial para
obtene r el grado de Maestra en Ciencias; rea:Biotecnologa y fue revisado en cuanto a forma y
conten ido por los C.C. M.C Salvador Guzmn Gonzalez, M.C. Arnoldo Michel Rosales y Dr.
Sergio Aguilar Espinosa, Profesores-Investigadores de la Universidad de Colima.
Sin otro particular de momento, me despido de usted muy cordialmente.

C.C.P. EXDIENTE ACADMICO DEL ALUMNO

C.C.P. EXPEDIENTE CORRESPONDIENTE.

C.C.P. ARCHIVO.
Of. No. 64612002.
RVMD/gmg**

km 40 Autopista Colima-Manzanillo Tecmon, Colima, Mxico C.P. 28100

Tel. 01 (313) 322 94 05 Ext. 52251 Fax 52252 fcba@tecoman.ucol.mx

DEDICATORIA

Esta tesis la dedico a mi espoca Alisa y a mis hijos Elisa y Hctor por haber
aguantado pacientemente el tiempo que no les puede dedicar durante mi
formacin como investigador.
A la memoria de mi padre Adulfo que es el modelo que como productor,
admiro y sigo.
A mi madre Felicitas que con su incomprendico sacrificio impuso mi
desarrollo crtico.

AGRADECIMIENTOS
Con un profundo Agradecimiento para las personas que integran y dirigen al
F i d e i c o m i s o R a m n l v a r e z Buylla d e A l d a n a , p o r h a b e r a p o y a d o
econmicamente el desarrollo de la investigacin por el cual me form como
Maestro en Ciencias.
Agradezco tambin al Ing. Jos Luis Cruz Valdez y al Lic. Mario Soto
Velsquez, que se encontraban dirigiendo en esos momentos la Escuela de
Administracin Agropecuaria y Desarrollo Rural y que como amigos ms que por
sus cargos facilitaron mi estancia en Tecomn, Colima, auxilindome para resolver
tanto problemas de ndole econmicos, como administrativos y personales.
Al Doctor Jos Gerardo Lpez Aguirre, por darme la confianza y la
suficiente libertad requerida para desarrollarme como investigador, pues sin ellas
todo trabajo realizado hubiera sido frustrante.
En esta seccin, no puede quedar inadvertida la influencia de mi hermano
el Dr. Joel Lpez Prez que es quien abri la brecha, la cual actualmente sigo.
Claro est que para que esto sucediera, fue decisivo la influencia y el apoyo del
Dr. Miguel Arenas Vargas que es y seguir siendo el punto de vista que retorno,
no sin antes ir al fondo de los conceptos que el siempre pone en la mesa de las
discusiones, con la finalidad de estimular el aprendizaje consciente del individuo.
A la IQ Teresa Castillo Velasco encargada del Laboratorio Central del rea
Agropecuaria por su apoyo y asesora desinteresada que en mltiples ocasiones
resolvi mis dudas y alent mis determinaciones.
De la misma manera agradezco al Dr. Salvador Guzmn Gonzlez por su
disposicin para asesorarme y facilitarme el desarrollo de las pruebas
microbiolgicas en el Laboratorio de Biotecnologa de la Universidad de Colima.
Con Agradecimiento tambin para mi compaero y amigo Francisco Javier
Barragn por su apoyo en el manejo del equipo del Laboratorio de la Facultad de
Ciencias Qumicas de La Universidad de Colima.

NDICE

ndice de Cuadros
ndicede Figuras
Resumen
Abstract
I. INTRODUCCIN
II. REVISIN DE LITERATURA
2.1. Concepto y criterio de suelos salinos
2.2. Condiciones microbiolgicas de los suelos salinos
2.3. Biodiversidad
2.3.1. Diversidad gentica en las poblaciones
microbianas
2.3.2. Diversidad funcional en las poblaciones
Microbianas
2.4. Sucesin microbiana y sus interacciones
2.5. Materia orgnica
2.5.1. Dinmica de la materia orgnica
2.5.2. Humificacin
2.5.3. Interacciones del complejo formado por la
materia orgnica los minerales y las arcillas.
2.5.4. interaccin de los sesquixidos con
la materia orgnica
2.5.5. Dinmica de la materia orgnica disuelta
2.5.6. Fijacin y mineralizacin de la materia orgnica
2.5.7. Componentes lbiles y estables
de la materia orgnica
2.6. Manejo botecnolgico de los microorganismos mediante
el uso de substratos orgnicos.
2.7. Determinacin de la diversidad funcional
2.8. El uso de los substratos por las bacterias
2.8.1. El uso de la glucosa en la determinacin de
los procesos del suelo.
III. MATERIALES Y MTODOS
3.1. Ubicacin del sitio experimental
3.1.1. Muestreo del suelo
3.2. Composicin de los tratamientos
3.3. Anlisis de las caractersticas fsicas del suelo
3.4. Anlisis qumicos
3.5. Pruebas microbiolgicas.
3.6. Diseo estadstico
3.6.1. Anlisis de varianza.
3.6.2. Determinacin del ndice de
disimilaridad de Jaccard.

Pg.
iii
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69
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71
73
75
75
78
i

3.6.3. Diseo estadstico para medir el ndice de

diversidad Shannon-Weaver.
3.6.4. ndices de uniformidad Shannon-Weaver.
IV. RESULTADOS
4.1. Propiedades qumicas en el suelo despus de la
aplicacin de las enmiendas e incubacin.
4.1.1. pH y conductividad elc trica.
4.1.2. Concentracin de los al niones
4.1.3. Actividad de los cationes
4.1.4. Materia orgnica
4.2. Propiedades fsicas
4.3. Pruebas microbiolgicas del suelo.
4.3.1. ndice de disimilaridad de Jaccard
4.3.2. ndice de diversidad y equidad Shannon-Weaver
V. DISCUSIN
5.1. Comportamiento de las caractersticas fisicoqumicas
del suelo.
5.2. Propiedades microbiolgicas
VI. CONCLUSIONES
VII. REFERENCIAS
VIII. ANEXO

ii

81
83
84
84
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101
108
108
115
120
123
150.

ndice de cuadros
Cuadro
Nmero
1. Proporcion taxonmica de los grupos de las eubacterias
encontradas en suelos normales e hipersalinos.
2 . Los substratos ofrecidos por las ecoplacas Biolog
3 . Contenido de substratos en las placas Biolog GN y
sus nmeros de cdigos, Biolog.
4 . Ejemplo de grupos funcionales de microorganismos previamente
investigados por microautoradiografa.
5 . Caractersticas geogrficas y climticas del sitio estudiado.
6. Caractersticas qumicas generales de los tratamientos
incubados a 90 das.
7. Concentracin total de los aniones (meq/100g) en los
tratamientos del suelo incubado.
8 . Concentracin total de los aniones (meq/100g) en los
tratamientos del suelo incubado y lavados.
9 . Concentracin de los cationes solubles (meq/100g) en
los tratamientos despus de la incubacin.
10. Concentracin de los cationes solubles (meq/100g) en
los tratamientos del suelo despus del lavado.
11. Caractersticas qumicas generales de los tratamientos
del suelo despus de la incubacin.
12. Caractersticas qumicas generales de los tratamientos
del suelo despus de la incubacin y lavado del suelo.
13. Efectos fsicos de la materia orgnica en la capacidad de
campo y conductividad hidrulica.
14. Cambios sucesionales en el consumo de cidos carboxlicos
medidos por ndice de disimilaridad de Jaccard.
15. Cambios sucesionales en el consumo de carbohidratos
medidos por ndice de disimilaridad de Jaccard.
16. Cambios sucesionales en el consumo de
aminocidos medidos por ndice de disimilaridad de Jaccard.
17. Matriz de disimilaridad funcional para los carbohidratos
en muestras de los tratamientos incubados a 90 das.
18. Matriz de disimilaridad funcional para los cidos
carboxlicos en muestras de suelos incubados 90 das.
19. Matriz de disimilaridad funcional para los aminocidos
en muestras de suelos incubados 90 das.
20. Comportamiento de la diversidad y uniformidadmetablica
(Shannon-Weaver) de las poblaciones a 30, 60 y 90 das de
la incubacin.

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100
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107

iii

ndice Figuras

Figura
Nmero

pgina

1. Composicin de la diversidad bacteriana del suelo (Trevors, 1998)

17
2 . Materia orgnica del suelo (MOS) y su dinmica (Zech et al., 1997) 34
3. Materia orgnica de los tratamientos: antes de la
incubacin (1) despus de la incubacin (2) y posterior al
lavado del suelo (3).

93

4. Consumo de los Substratos en las placas Biolog

GN por la poblacin bacteriana a los 30 das de incubaccin

102

5. Consumo de los Substratos en las placas Biolog GN

por la poblacin bacteriana a los 60 das de incubacin

103

6. Consumo de los Substratos en las placas Biolog GN

por la poblacin bacteriana a los 90 das de incubacin

104

7. Comportamiento de la diversidad a travs del tiempo

de cada uno de los tratamientos.

iv

105

Resumen

Se estimaron los cambios biolgicos y fisicoqumicos provocados por las

enmiendas de glucosa y paja de maz aplicadas a muestras de suelos salinos.
Los cambios biolgicos que se registraron se refieren a la diversidad funcional
o metablica de las poblaciones bacterianas a travs del tiempo, utilizando
patrones de uso de substratos Biolog para Gram negativos. Los datos fueron
procesados y evaluados por los ndices de diversidad y equidad Shannon,
matriz de correlacin Jaccard, ANOVA y la prueba para la comparacin de
medias Tukey. Aunque los cambios sucesionales observados a travs de la
diversidad metablica de las bacterias son evidentes, las condiciones fsicoqumicas prevalecientes dependieron de la actividad metablica de las
poblaciones bacterianas y estas a la vez dependieron de las caractersticas y
cantidades de substratos que se les ofreci para su consumo.

Abstract

Biological and physicochemical changes caused by glucose and straw addition

as amendment in a salive soil were observed. The biological changes
registered refer to the functional or metabolic diversity of the bacterial
populations through the time, using patterns of use of substrate Biolog for
negatives Gram bacteria. Data were processed and evaluated by the indexes of
diversity and justness Shannon, correlation womb Jaccard, ANOVA and the test
for the media comparison was done by Tukey test. Although the changes
scesionales observed through the metabolic diversity of the bacteria is evident,
the conditions prevalent Physicochemical depended on the metabolic activity of
the bacteria) populations and these at the same time depended on the
characteristics and quantities of substrates that were offered for their
consumption.

vi

I. INTRODUCCIN

La poblacin mundial que actualmente es de 6 mil millones, alcanzar 8 mil

millones en el 2020 y 9.4 mil millones en el 2050. Para ese ao, de la poblacin
mundial total, 8.2 mil millones vivirn en pases en vas de desarrollo, de los
cuales 3 mil millones residirn en ambientes ridos y semiridos. En donde la
escasez severa de recursos de agua fresca renovables y los elevados riesgos de
degradacin de la tierra por una amplia gama de procesos degradativos, como la
salinizacin y sodificacin del suelo seguirn siendo los ms importantes en los
sistemas de riego (Lal 2000a).
Tomando en cuenta que la distribucin de los problemas de salinidad y
sodicidad alrededor del mundo para la dcada de los 80's era de 77, 925,000 km 2
(Gupta y Abrol, 1990; Szabolcs, 1991). A esta cantidad habra que sumarle 10
millones de hectreas de tierras irrigadas en el mundo que son abandonadas
anualmente como consecuencia de los efectos adversos de la irrigacin,
principalmente por la salinidad y la alcalinidad (Szabolcs, 1986).
Adicionalmente al efecto adverso sobre el crecimiento de las plantas
cultivadas, la salinidad y los problemas que la acompaan como la alcalinidad y
sodicidad, pueden tambin tener efectos adversos sobre la biota del suelo y los
procesos esenciales para el mantenimiento de la salud del suelo (Pankhurst et al.,
2001). Por ejemplo, la biomasa microbiana, (Batra y Manna, 1997), mineralizacin
del carbono (Nelson et al., 1996; Pathak y Rao, 1998), la mineralizacin del
nitrgeno (Pathak y Rao, 1998) actividad de la celulasa (Badran, 1994) la actividad
de la deshidrogenasa (Batra y Manna, 1997) y la fijacin simbitica del nitrgeno
(Cordobilla et al., 1999) son todas afectadas cuando se incrementa la salinidad.
Las bacterias son elementos esenciales para la fertilidad biolgica de los
suelos, esto es debido a sus actividades, tales como la degradacin de los
residuos vegetales, la fijacin de nitrgeno y la produccin de metabolitos activos
funcionales (Zahran, 1997), compuestos por grupos radicales carboxilos, enlicos
y fenlicos, que aceleran las reacciones qumicas y contribuyen a la capacidad de
retencin inica (Shokohifard, 1991).

Estos metabolitos funcionales forman parte de la fraccin lbil de la materia

orgnica e influyen en la variacin en la capacidad de intercambio de cationes
(CIC) de las arcillas del suelo (Drake y Motto, 1986).
Para la formacin de estos metabolitos se requiere la existencia de
substratos orgnicos disponibles para los organismos que interfieren en su
descomposicin y se presente la humificacin de los residuos que para el caso de
la paja del maz, en el proceso de descomposicin alrededor del 80% del carbn
de los residuos se libera a la atmsfera como CO 2 en un periodo de 2 aos. El
carbn humificado remanente reemplaza la materia orgnica del suelo el cual es
mineralizado durante los cultivos (Wagner y Broder, 1993).
Para una rpida transformacin de los substratos orgnicos muy
lignificados como los residuos de cosecha de maz, es indispensable la presencia
de un co-substrato rpidamente metabolizable, tal como la glucosa (Kirt et al.,
1987).
El efecto sobre las arcillas para la formacin de los microagregados,
cuando incrementan los contenidos de materia orgnica en el suelo opera
inmediatamente despus de la adicin de materiales ricos en energa cuando la
actividad biolgica alcanza el mximo y la sntesis de la nueva materia orgnica es
abundante. Las arcillas pueden formar nuevos complejos de materia orgnica en
los cuales los metabolitos microbianos recientemente formados as como el
material celular son parcialmente protegidos de las condiciones naturales cuando
el carbono adicionado es usado eficientemente para la sntesis de los tejidos de
las bacterias y otros metabolitos (Srensen, 1981).
Si bien, los fenmenos microbiolgicos anteriores son explicados
ampliamente, an no queda claro el comportamiento de las poblaciones
microbianas cuando existen factores que perturban la actividad de la biomasa
microbiana total para la produccin de metabolitos a partir de materiales ricos en
energa, o si esta biomasa se incrementa solo en un pequeo rango de las
poblaciones bacterianas, que segn Torsvik et al. (1998), son responsables de la
actividad cuando el medio ambiente perturbado no es condicionante para su
desarrollo, pero s, para un mayor nmero de grupos funcionales de microbios.

Dicho comportamiento de la diversidad microbiana puede ser afectado por

los cambios del ecosistema, y estos patrones temporales de la diversidad pueden
ser sensitivos indicadores del funcionamiento del ecosistema para la evaluacin
de los sistemas disturbados o contaminados, de aqu que se requiere conocer la
estructura poblacional de los microorganismos (Kennedy y Smith, 1995).
La

estructura

de

las

poblaciones

microbianas

imprimen

ciertas

caractersticas funcionales en los ecosistemas del suelo, los cuales se encuentran

implcitos en todos los ciclos biogeoqumicos. Estas interacciones requieren de
explicaciones para poder comprender la composicin y la dinmica de las
comunidades microbianas. Esto implica que deben existir ciertas interacciones
biolgicas y fisicoqumicas para determinar la estabilidad del suelo (Young et al.,
1998).
Como una alternativa para la composicin de la diversidad microbiana que
adems apoye el desarrollo de la clasificacin taxonmica que se ha desarrollado
gracias a los mtodos usados para el aislamiento de los microorganismos, la
diversidad funcional basada en las caractersticas metablicas es una herramienta
til ya que esta es una consecuencia de la diversidad gentica taxo-especfica, los
efectos medioambientales en la expresin gentica y las interacciones ecolgicas
con otras taxas (Zak et al., 1994). La diversidad funcional es, por lo tanto, una
medida valuable por la cual se puede comparar y contrastar los diferentes
ecosistemas, hbitat, o sitios (Goodfriend, 1998).
La diversidad bacteriana puede decrecer si una o ms poblaciones
bacterianas se extienden a una relativa elevada densidad. Esto puede ser
alcanzado naturalmente cuando las condiciones medioambientales prevalecientes
favorecen a determinado biotipo de microorganismos (Trevors et al., 1998).
Tomando en cuenta las proposiciones que se han formulado para elucidar
las relaciones entre la diversidad de las especies y el funcionamiento de los
ecosistemas se considera que las especies de microorganismos de los medios
ambientes salinos pueden modificar su entorno al ser apoyadas con enmiendas
orgnicas, facilitando de esta manera cambios sucesionales de las poblaciones
bacterianas de los suelos salinos.

En esta investigacin se pretende estimar el efecto singular y el combinado

de las enmiendas de glucosa y paja de maz sobre las poblaciones bacterianas a
travs del tiempo, para contrastar la relacin existente entre los cambios
fisicoqumicos y bacteriolgicos de un suelo salino. Las metas planteadas son
medir el comportamiento metablico de las poblaciones bacterianas cada 4
semanas durante tres muestreos para comparar dicho comportamiento con las
condiciones fisicoqumicas del suelo al inicio y al final del experimento.

II. REVISIN DE LITERATURA

2.1. Concepto y criterio de suelos salinos

Los suelos afectados por sal en el mundo tienen una baja productividad por
la dominancia de las sales solubles (salinidad) y/o el sodio intercambiable
(sodicidad) (Gupta y Abrol, 1990). La magnitud de este problema es valorada por
Qadir et al., (1996) donde precisan que de las tierras cultivables entre 23 al 37%
son salinas y salino-sdicas.
Aunque la agricultura de irrigacin contribuye con una proporcin
substancial de nuestros alimentos y produccin de fibras. La extensin de las
reas irrigadas tienden a incrementar la degradacin por la salinizacin y la
consignacin de las aguas resultantes por la sobre-irrigacin y otras formas de
pobre manejo agrcola (Ghassami et al., 1995).
Los esfuerzos que se hagan para el control y recuperacin de los suelos
salinos segn Hendry y Buckland, (1990) deben estar encaminados por el
entendimiento de las causas en cada una de las reas del conocimiento especfico
de los suelos, como un prerrequisito necesario para recomendar soluciones a este
problema.
Dentro de las causas de salinidad de los suelos se encuentra el agua de los
drenes que puede elevarse hasta el nivel de la superficie del suelo de las tierras
bajas. La baja permeabilidad del suelo causa el pobre drenaje por impedimento
del movimiento del agua hacia abajo. Estos impedimentos pueden ser los
resultados de una desfavorable textura del suelo, estructura o la presencia del
endurecimiento de las llamadas capas de caliche (Pessarakli, 1991).
En muchas ocasiones, la sal aparece en la superficie del suelo como un
resultado del movimiento por la capilaridad hacia arriba de los mantos friticos
superficiales que contienen sales disueltas y se acumulan en la superficie, con la
subsiguiente evaporacin durante la estacin de secas en las regiones ridas
(Patcharapreecha et al., 1989; Seeling et al., 1990; Hendry y Buckland, 1990;
Connie et al., 1993).

Otra de las causas de la formacin de los suelos salinos puede deberse a

la incorporacin de las sales marina contenidas en el vapor del agua que es
transportado por el viento y depositadas sobre los suelos erosionados y las tierras
de las playas. lo cual puede ser significativo a escala regional. Las deposiciones
anualmente de los cloruros decrecen marcadamente afuera de los ocanos y es
ms baja a distancia mayores de 200 km tierra adentro (Chartres, 1993).
Las salinidad como un proceso de concentracin de sales solubles, puede
esperarse que altera la composicin qumica del suelo (Tripathi et al., 1998). Estas
concentraciones alteran el crecimiento de las planta, pues se inhiben bajo esas
condiciones debido a un desfavorable pH, excesivas concentraciones de sales,
desbalance de nutrientes y una pobre estructura del suelo (Batra y Manna, 1997).
El desbalance de los nutrientes se encuentra relacionado con la
preservacin de las arcillas que son muy importantes para los suelos salinos
debido a sus bajos valores de capacidad de intercambio de cationes y los bajos
contenidos de la materia orgnica, de aqu que se recomienda el mejoramiento de
estos suelos a travs del incremento de la materia orgnica (Patcharapreecha,
1989).
Lal (2000b), propone la restauracin de las tierras y ecosistemas
degradados por la salinidad y modicidad y obtener un crecimiento sostenido en la
produccin de alimentos, para esto es necesario convertir estas tierras
marginadas en tierra apropiada para su uso. Para tal efecto, el autor anteriormente
citado, considera que deber efectuarse a travs de tecnologas especficas para
la intensificacin agrcola. Estas tecnologas se dirigirn a los problemas de (i)
reforzamiento de la estructura del suelo, (ii) optimizando el uso minerales
fortaleciendo los mecanismos de reciclado, (iii) conservando las tierras u el agua
de riego a travs de la conduccin de las aguas residuales y adopcin de cultivos
de conservacin, (iv) mejorando la eficacia del uso de agua a travs del desarrollo
y adopcin de mtodos eficaces, reciclndola para su irrigacin.

Por lo que respecta al desarrollo de investigaciones donde se involucra la

aplicacin de enmiendas, dentro de las ms experimentadas se encuentran las
qumicas, que utilizan cidos o precursores de cidos como el azufre elemental y
pirita (Yahia et al., 1975; Follet et al., 1981; Alzubaildi y Webster, 1982; Kumar et
al., 1982; Germida et al., 1992; Lpez-Aguirre et al., 1999) enmiendas de yeso
(Suhayda et al., 1997, Haynes y Naidu, 1998). Este tipo de enmiendas se basa en
la correccin de los factores que dificultan la lixiviacin de las sales.
Adems de las investigaciones que se basan en la utilizacin de la
bioremediacin mediante el uso de bacterias que tienen una mayor capacidad
para transformar los contenidos de azufre elemental o algunas sales de sulfato; tal
es el caso de las investigaciones que se han desarrollado mediante la aplicacin
de bacterias acidoflicas como las del gnero Thiobacillus (Rupela y Tauro 1973;
Chapman, 1990; Grayston y Germida 1990).

2.2. Condiciones microbiolgicas de los suelos salinos

Los medios ambientes hipersalinos son considerados hbitat extremos los
cuales por su elevada salinidad limitan la diversidad microbiana (Garabito et al.,
1997).
Sobre las condiciones microbiolgicas de los suelos salinos, salinossdicos y sdicos se ha desarrollado una gran cantidad de investigacin aunque
esta se enfoca al comportamiento de la biomasa microbiana y la relacin que tiene
con la bioremediacin (Petersen et al., 1991; Beyer et al., 1992, Chorom y
Rengasamy, 1997; Batra y Manna, 1997) a travs de determinaciones enzimticas
y biomasa total (Rao y Pathak, 1996, Garca y Hernndez, 1996; Pathak y Rao,
1998), siendo an muy escasa la informacin sobre el comportamiento de las
estructuras poblacionales en los ecosistemas salinos del suelo (Goodfriend, 1998).
La

mayor

parte

de

la

informacin

generada

sobre

la

actividad

microbiolgica de los suelos salinos, se ha enfocado hacia el estudio del

comportamiento de la biomasa microbiana en su conjunto y su relacin con la
bioremediacin de este tipo de suelos (Rao et al., 1990; Vandana et al., 1990;

Petersen et al., 1991; Beyer et al., 1992; Rao y Pathak 1996; Garca y Hernndez,
1996; Batra y Manna 1997, Chorom y Rengasamy 1997; Pathak y Rao 1998).

Por otro lado Goodfriend, (1998) considera que la informacin generada

sobre el comportamiento de las estructuras poblacionales de los microorganismos
en los ecosistemas de los suelos en general y los salinos en particular es muy
escasa.
Es importante sealar que los microorganismos se encuentran implicados
en todos los cielos biogeoqumicos y la descomposicin de los materiales de
plantas, animales y contaminantes en los medios ambientes acuticos y del suelo
(Meyer y Bloom, 1997). Estas interacciones requieren de explicaciones para
comprender la composicin y la dinmica de las comunidades microbianas, ya que
el entender cmo se dan estos procesos, implica que deben existir ciertas
interacciones biolgicas y fsicas para determinar la estabilidad del suelo (Yung et
al., 1998) y su fertilidad (van Bremer, 1993).
Considerando que los suelos salinos agrcolas son ecosistemas con una
baja diversidad microbiana, debido a la alta concentracin de sales, cabe
mencionar que, bajo estas condiciones medioambientales los grupos de especies
funcionales que prosperen sern aquellos que por sus caractersticas genotpicas
tienen la capacidad fisiolgica y estructural para soportar altas concentraciones de
electrolitos, mismas caractersticas que se encuentran en las poblaciones de
bacterias halotolerantes y haloflicas (Rodrguez-Valera, 1988).
El estrs osmtico inico provocado por la osmolaridad de las soluciones es
considerado como la suma total de las concentraciones molares de los solutos
osmticamente activos. Este tiene un efecto de destruccin progresiva cuando los
niveles de salinidad van ms all de 1.0 dSm -1, reduciendo la medida de la
biomasa microbiana del suelo (Rao, 1994; Rao y Pathak, 1996). Este efecto
negativo sobre la biomasa microbiana se basa en la depresin de la respiracin
microbiana, especialmente cuando el NaCI es el responsable de la salinidad
(Garca y Hernndez, 1996).

Estos medios ambientes salinos dan entrada taxonmica mente a diversos

grupos

de

bacterias,

las

cuales

exhiben

modificaciones

fisiolgicas

caractersticas estructurales bajo las condiciones salinas prevalecientes. La

mayora de estas bacterias pueden osmoregularse por la sntesis de osmolitos
orgnicos compatibles tales como la glutamina, prolina y glicina betaina y unas
pocas de ellas acumulan solutos inorgnicos tales como el K+ y el Mg2+. La
morfologa de las bacterias es usualmente alongada, hinchada y muestra
contracciones de acuerdo con los cambios en la clula y el volumen citoplsmico.
La composicin qumica de la membrana puede ser tambin ocasionalmente
modificada, y la sntesis de los patrones de protenas, lpidos, cidos grasos y
polisacridos puede cambiar con un moderado incremento de la salinidad. Las
alteraciones ultraestructuradas en las clulas de las bacterias haloflicas no han
sido reportadas, y los cambios profundos en las propiedades celulares de estas
bacterias ocurren en concentraciones de alrededor de 2 Mol de NaCI (Zahran,
1997).
Existen dos principales grupos de bacterias adaptables a la elevada
concentracin de sales, estos son: las halotolerantes extremas y halfilas
extremas, las cuales crecen a un 25% p/v de NaCI como las Haloarchaeas que se
clasifican dentro de dos rdenes filogenticos, nueve gneros y ms de 25
especies (Aravalli et al., 1998).
Kushner y Kamekura, (1988) observaron que las halfilas moderadas
pueden crecer mejor en concentraciones del 10% p/v de NaCI.
Mientras que Kushner (1985), observ que las bacterias clasificadas como
halotolerantes son microorganismos no haloflicos que pueden tolerar elevadas
concentraciones de sal siendo capaces de crecer en 2.5 mol de NaCI (15% p/v)
siendo consideradas como halotolerantes extremas.
Estos grupos de bacterias resistentes al estrs por sal pueden ser fuentes
de abastecimientos para la industria biotecnolgica de acuerdo con los datos
obtenidos por Litchfield y Gillevet (2002), que consideran a la diversidad
metablica como una gran complejidad filogentica de las comunidades para

afirmar las necesidades de desarrollar ms medios verstiles para el cultivo de la

diversidad de las bacterias en los medios ambientes hipersalinos.
Sobre un punto de vista taxonmico se tienen importantes diferencias entre
los suelos hipersalinos, los suelos normales y las aguas; los primeros contienen
grupos taxonmicos los cuales son tpicamente de suelos normales. Los Vibrios
haloflicos, por ejemplo, los cuales son muy abundantes en las aguas, son
escasamente representados en los suelos; por contraste, los Bacillus, un gnero
virtualmente ausente en las aguas hipersalinas, son muy importantes en los
suelos. Parece adems, que las bacterias de lo suelos hipersalinos son
representantes haloflicos normales de las bacterias del suelo, mientras que las
aguas hipersalinas parecen ser representantes de las bacterias marinas (Cuadro
1) (Rodrguez-Valera, 1988).
Cuadro 1. Proporcin taxonmica de los grupos de las eubacterias encontradas en
suelos normales e hipersalinos.
Suelos normales
Bacillus
Arthrobacter
Actynomicetes
Agrobacterium
Pseudomonas
Alcaligenes
Flavobacterium
Corynebacterium
Micrococcus
Staphylococcus
Xanthomonas
Mycobacterium

% (rango)
7-67
5-60
10-33
1-20
3-15
2-12
2-10
5
5
5
5
5

Suelos hipersalinos
Pseudomonas
Bacillus
Alcalgenes
Micrococcus
Arthrobacter
Planococcus
Staphylococcus
Actynomicetes
Vibrio
Flavobacterium
Corynebacterium
Acinetobacter
Halobacterium
halobacterium
No determinados

%
22
19
11
8
6
5
4
3
3
3
2
1
1
1
12

Rodrguez-Valera, (1988).

Aunque en estos medios ambientes salinos se observa que el incremento

de la salinidad conduce al decremento de la diversidad (Rangarajan et al., 2002).
Por lo que respecta a las reas de riego donde por los problemas de
manejo del agua, los suelos con deficiente drenaje y prcticas de riego son

10

alterados por la acumulacin excesiva de sales, se crean condiciones para la

predominancia de poblaciones bacterianas halfilas y halotolerantes. Estos
microorganismos halotolerantes pueden estar presentes en menor proporcin en
los medios hipersalinos, aunque se considera que ellos desempean un papel
menor en estos medios ambientes (Rodrguez-Valera, 1988).
Desde otra perspectiva, Bastos et al. (2000), consideran que los medios
ambientes en general y los salinos en particular, contienen la diversidad gentica
suficiente

para

obtener

de

ellos

microorganismos

necesarios

para

la

bioremediacin.
Margesin y Shninner (2001) por su parte consideran que el uso de
microorganismos capaces de degradar desechos orgnicos en presencia de sal
puede diluir los costos en la prevencin de la salinidad, o la remocin de la sal por
smosis inversa, el intercambio fnico o electrodilisis antes del tratamiento
biolgico.

2.3. Biodiversidad
La Convencin de la Biodiversidad de Ro constituida por 130 pases en
1996, define tres tipos de diversidad: una que se refiere a la multitud de tipos de
naturaleza o ecosistemas, otra que es la diversidad del nmero de especies, y su
variacin gentica dentro de cada especie. Al referirse a la diversidad en los tipos
de ecosistemas, se habla de los sistemas que a su vez estn integrados por un
determinado nmero de especies que son comunes de acuerdo a su naturaleza
(Hbard 1998).
Grime (1997) argumenta que no se deben usar trminos tendientes a
confundir el funcionamiento de los ecosistemas pobres en diversidad de especies.
Pues algunos de los ecosistemas ms extensivos y antiguos del mundo
bosques boreales, pantanos, y tierras calientes contienen pocas especies, y que
por lo tanto los ecosistemas ricos en diversidad de especies y pobres en
diversidad de especies, lo que se necesitan es estabilidad para que los
ecosistemas funcionen, en tales casos, si las prdidas actuales en biodiversidad
tienen serios daos para su funcionamiento, entonces se reducen los beneficios

11

para los humanos.

Los procesos en los ecosistemas no son crucialmente dependientes de los
elevados niveles de la biodiversidad. Estos son determinados primariamente por
las caractersticas funcionales de los organismos componentes ms que por su
nmero. De aqu que las variaciones en la propiedad del ecosistema se
fundamenta en la descripcin de las diferencias de estas caractersticas
funcionales, que se basan especialmente en la captura de los recursos y su
dinmica de utilizacin (Grime, 1997).
Por otro lado, Torsvik et al. (1998) consideran que la biodiversidad basada
tradicionalmente en las especies como unidad, consiste de dos componentes, la
riqueza de las especies y la uniformidad de las especies (distribucin), aunque
para los organismos procariontes el concepto de especie es an oscuro.
Al respecto, Ward (1998), explica que desde el punto de vista natural, habr
que considerarse el hecho de que las especies compuestas por las poblaciones
naturales de procariontes, pues estas son integradas por una estructura que va
ms all de los meros agregados internos. De aqu que al hablar de la estructura
microbiana sea necesario considerar a las especies desde el punto de vista
evolutivo, ya que el genoma de las clulas cambia sobre el tiempo, respondiendo
a las condiciones medioambientales.
De acuerdo a lo anterior Wardle et al., (1998) definen como cuestiones an
no resueltas las siguientes: Un sistema con pocas taxas puede ser ms
vulnerable que un sistema compuesto por mltiples especies? Que nivel de
redundancia funcional es construido dentro de las redes alimentarias del suelo?
Es probable que el cambio global siempre reduzca la diversidad bitica del suelo
a nivel del cual los procesos claves se imparten?
Son muy pocos los ejemplos de los disturbios que afectan la diversidad de
las especies (Lawton et al., 1996), la composicin de los grupos funcionales as
como los ndices de los procesos de los ecosistemas. Esto es porque las plantas y
los organismos del suelo han evolucionado de manera conjunta y en el futuro
manejo global de los suelos debe incluirse el conocimiento de las especies y la
diversidad funcional (Wall y Moore, 1999).

12

Grime (1997) supone en primer lugar que es necesario una aproximacin

ms integrada a las grandes iniciativas de los cientficos con especial
conocimiento de la biologa funcional y las dinmicas de los recursos de las
plantas y los animales clave. En segundo lugar, considera que los experimentos
de laboratorio como los estudios de los ecosistemas naturales deben ser
informados por un conocimiento de la dinmica de los recursos y deben ser
designados con pruebas de predicciones en las bases de los atributos funcionales
de los componentes de las plantas y los animales.
Aunque la mayora de las investigaciones se orientan hacia modelos
predictivos ponen una menor atencin a las interacciones de los microorganismos
del suelo o a conocer nicamente las cajas negras tales como la biomasa
microbiana. Mientras que los modelos centrados en la interaccin de los
organismos quiz ayuden a predecir como los efectos del cambio global en la
biota del suelo afecten los procesos clave de los ecosistemas (Smith et al., 1998).
Altieri, (1999) considera que la biodiversidad favorece el reciclado de
nutrientes, el control local del microclima, la regulacin de los procesos
hidrolgicos locales, la regulacin de la abundancia de organismos indeseables, y
la desintoxicacin de qumicos nocivos. Estos procesos de renovacin y servicios
al ecosistema son en su mayor parte biolgicos, adems de que su persistencia
depende sobre el mantenimiento de la diversidad. Cuando estos servicios
naturales son perdidos debido a la simplificacin biolgica, los costos econmicos
y medio ambientales pueden ser bastante significantes.
La estabilidad de las propiedades del suelo a la perturbacin comprende
tanto a la resistencia como a la resiliencia. La resistencia se define como la
habilidad que tienen los suelos a los efectos inmediatos de la perturbacin, y la
resiliencia se refiere a la habilidad del suelo para recobrarse despus de la
perturbacin (Griffiths et al., 2001).
Como en los fenmenos de resistencia y resiliencia quedan incluidos los
factores biolgicos, Emmerson et al., (2001) consideran que la diversidad puede
influir aspectos de la funcin del ecosistema, pero las preguntas quedan sobre
como observar los patrones genticos, y si son los productos de la diversidad,

13

como tal, o bien son sus acciones y los rasgos distintivos que caracterizan las
especies los que definen a los sistemas ecolgicos.
De acuerdo con lo anterior, an quedan vigentes las hiptesis de
propuestas por Lawton y Brown (1993) como la de redundancia de las especies,
que considera que s todos los grupos funcionales estn representados en un
ecosistema, el funcionamiento de este no depende de la diversidad de las
especies. En otras palabras, dentro de los grupos funcionales las especies son
redundantes, o sustituibles. Esta puede ocurrir cuando las especies que quedan
dentro de un grupo funcional son capaces de compensar la biomasa de las
especies desaparecidas.
Proponen adems, la hiptesis de remaches que sugiere que todas las
especies tienen una significante contribucin al funcionamiento del ecosistema, as
como todos los remaches tienen una significante contribucin al funcionamiento de
un aeroplano (Lawton y Brown 1993; Lawton 1994).
Los cambios predichos por la hiptesis de remache son comprobados por
Tilman et al., (1997) demostrando con un modelo formal como las diferencias del
nicho con respecto a las especies conducen al decrecimiento de la produccin y la
explotacin de los recursos dentro de un nivel trfico cuando desaparecen
especies.
Adems de las dos hiptesis anteriores Lawton (1994), considera la
hiptesis de la respuesta idiosincrsica de acuerdo a la cual el funcionamiento de
un sistema cambia cuando quiera que una especie desaparece pero la direccin o
magnitud de la respuesta es impredecible.
Emmerson et al., (2001) retomando la hiptesis idiosincrsica demostraron
los efectos de diversidad representada en las especies de los sistemas marinos
costeros tanto a escala global como regional. Proveyendo evidencias del
incremento en la complementariedad del uso de los recursos se relaciona con el
aumento de diversidad y se mostr una fuerte evidencia de los efectos de la
diversidad en el ensamblaje natural de las comunidades a una escala regional.
La respuesta de la variabilidad entre las especies individuales es
consistente con un positivo pero idiosincrsico patrn de la funcin del ecosistema

14

con un incremento de la biodiversidad (Emmerson et al., 2001).

Las tres hiptesis difieren fundamentalmente con respecto a dos factores:
1) la dependencia del funcionamiento sobre la diversidad de las especies y 2) la
prediccin de la respuesta del funcionamiento para alterar la diversidad de las
especies (Lawton, 1994).

2.3.1. Diversidad gentica en las poblaciones microbianas

Con el descubrimiento del ncleo de los eucariontes, todos los organismos

vivos se dividieron en: procariontes, a los cuales les faltaba ncleo, y los
eucariontes, que lo posean. Posteriormente los datos derivados directamente del
genoma llegaron a estar disponibles, quedando claro que los procariontes se
constituyen en dos grupos, Eubacteria y Archaebacteria (Williams y Martin, 1996).
Los estudios de la diversidad microbiana representan la mayor oportunidad
de avanzar en la biologa y biotecnologa. Recientes progresos en la ecologa
microbiana molecular han demostrado que la extensin de la diversidad en la
naturaleza es mejor de lo que se pensaba (Rondon et al., 1999).
La biodiversidad en los procariontes se basa en una fundada y evolutiva
diferenciacin gentica (Zak et al., 1994), esta diferenciacin gentica bacteriana
mantiene una constancia relativa en su genoma (todos los genes presentes en un
microorganismo) y al mismo tiempo cambian por la recombinacin gentica.
Adquiriendo y perdiendo plsmidos y transposonos, recibiendo la transduccin,
transformacin, la conjugacin y la deteccin/insercin de DNA. Estas situaciones
dinmicas dentro de los lmites, dan las elevadas variantes y la diversidad de las
poblaciones que, despus de mantener a los microorganismos bsicos estas
pueden ser estudiadas por medio de los mtodos moleculares (Ward, 1998).
Segn Childress y Sharpe (1992), para el entendimiento de la ecologa de
las poblaciones microbianas y las comunidades se requiere de conocimiento
sobre, cmo el genoma de las clulas bacterianas cambia sobre el tiempo,
despus de que al mismo tiempo responden a las condiciones medioambientales.
Si los modelos de transferencia de genes en las bacterias del suelo son

15

representativas de la diversidad y la dinmica de los cambios que oc urren,

entonces algunas condiciones demuestran ser metablicas, estos han sido
resumidos como:

1. Las diferencias genticas entre las bacterias se representa por sus

capacidades metablicas para tolerar o funcionar bajo distintas condiciones,
tales como en la presencia de contaminantes.
2. La presencia y distribucin de genes necesarios para el
catabolismo de los contaminantes en la poblacin microbiana/bacteriana es
de considerable importancia. La presencia de los genes necesarios en
nicamente unas pocas clulas dentro de la poblacin bacteriana
incrementa la capacidad de degradabilidad cuando es probable que no
suceda un incremento proporcional a la expresin de los genes y por lo
tanto de la degradacin.
3. La inoculacin del suelo para aumentar la biodegradacin requiere
de conocimientos sobre los mecanismos de la transferencia de genes y la
frecuencia de la transferencia de genes para las clulas bacterianas
nativas. La manipulacin de los sistemas por optimizacin de las
condiciones medioambientales puede requerir informacin sobre la
distribucin inicial de los genes degradadores.
4. Los genes degradadores pueden estar localizados en los
cromosomas, los plsmidos y los transposonos. Si la poblacin bacteriana
est influenciada, disponer de un mayor conocimiento sobre la localizacin
de genes, facilitara optimizar las condiciones de degradacin de los
contaminantes blanco.
5. Los factores mecnicos, tales como: presencia de contaminantes,
temperatura, pH, disponibilidad de oxgeno operado a escala molecular y en
el mbito celular.

16

Al respecto los estudios evolutivos realizados por Bej et al., (1991) con
Pseudomona cepacia AC1100 demuestran el uso de los elementos genticos
movilizables para el cruzamiento molecular (evolucin) de tal manera que se
contribuye a la formacin de nuevas combinaciones genticas que incrementan la
diversidad gentica de la comunidad microbiana. Este tiene un potencial para
aumentar la evolucin cuando el nuevo y movilizable DNA se adiciona a la
comunidad microbiana, particularmente cuando los disturbios qumicos aumentan
la adaptabilidad por las recombinaciones. El incremento de la diversidad
trasciende indicando que la recombinacin gentica contribuye al incremento de la
diversidad en la mayora o en todas las recombinaciones que no son funcionales o
no competitivas.
En la Figura 1 se muestra como diversidad bacteriana del suelo est
compuesta por diversidad gentica, por las especies y por la diversidad funcional
dentro de la diversidad estructural (organizacin fsica) del sistema de estudio
(Trevors; 1998)

Figura 1. Composicin de la diversidad bacteriana del suelo (Trevors, 1998)

17

Ejemplo de este tipo de transducciones lo presenta Iwabuchi et al., (2002)

al adicionar Rhodococcus rhodochrous S-2 EPS1 al agua de mar conteniendo
nutrientes y la fraccin aromtica (FA) de petrleo ligero crudo de Arabia
resultando en la emulsin de la FA del petrleo, promoviendo el crecimiento de las
bacterias nativas, y aumentando la degradacin de los FA por estas bacterias.
Dentro de los factores que influyen en la diversidad gentica est la
variacin de los nichos en los hbitat que promueven la heterogeneidad gentica y
la divergencia de las lneas celulares clonales en las poblaciones, mientras que,
cuando estas se reducen por las modificaciones del suelo, la diversidad bacteriana
es tambin reducida, dando ventajas a algunas poblaciones de bacterias
favorecidas por el hbitat modificado (Torsvik et al., 1998).
Desde otra perspectiva, Bastos et al. (2000), considera que la conservacin
de los ecosistemas naturales no contaminados contiene la diversidad gentica
suficiente para hacer de ellos una vlida seleccin en la obtencin de
microorganismos tiles para la bioremediacin.
Por ltimo Torsvik y vres (2002), consideran que el siguiente paso en la
era de la ecologa microbiana ser para extraer el genoma, obtener informacin
sobre la funcin y evolucin de las bibliotecas de los cromosomas artificiales de
las bacterias de las comunidades del suelo (el metagenma).

2.3.2. Diversidad funcional en las poblaciones microbianas.

La necesidad de estudiar la diversidad funcional de los microorganismos en

su totalidad en cambio de los organismos puros, es para enfatizar en el sinergismo
de las especies, en tanto que el sinergismo es cuando dos o ms especies
conducen a la transformacin la cual una sola no puede llevar a cabo o cuyo
proceso al conducirse por las mutli-especies mezcladas es ms rpido que la
suma de los ndices de las reacciones efectuadas por separado (Laine et al.,
1997)
____________________________
1
Rhodococcus rhodochrous S-2 produce polisacridos extracelulares (S-2 EPS por sus siglas en ingls) estos
son D-glucosa, D-galactosa, D-mannosa, cido D-glucurnico, y lpidos, los cuales son importantes para la
tolerancia de la fraccin aromtica del petrleo crudo ligero de Arabia. (lwabuchi el al., 2000)

18

Los microorganismos del suelo median muchos procesos que son

esenciales para la productividad agrcola del suelo. Estos procesos incluyen
reciclado de nutrientes de las plantas, mantenimiento de la estructura del suelo,
degradacin de agroqumicos del suelo, y contaminantes y el control de las pestes
de los animales y las plantas (Parkinson et al., 1981; Atlas et al., 1990).
Desde que las comunidades microbianas difieren en nmeros y tipos, la
proporcin de los miembros de las comunidades individuales est sujeta tanto a
los cambios fsicos como a los cambios qumicos en el medioambiente, de igual
manera a los cambios causados por las actividades fisiolgicas como a las
metablicas de los microorganismos. Estos microorganismos que son abundantes
en el suelo pueden ser cultivados solo bajo ciertas condiciones porque pueden
desarrollar formas de dormancia y posibles formas no cultivables bajo otras
condiciones medioambientales (Zak et al., 1994).
La medicin aproximada de la biodiversidad de la comunidad microbiana
puede proveer ms informacin que la medicin de la presencia de poblaciones
individuales, las cuales no podran describir la funcin de la comunidad total
(Grayston y Campbell, 1996).
De aqu Staddon et al. (1998) consideren el hecho de que el decrecimiento
en la diversidad funcional refleja una severidad en la baja productividad sobre el
medioambiente del suelo, la disponibilidad de nutrientes y el pH del suelo.
Un problema mayor de los anlisis de la microbiologa del suelo es que la
mayora de los microorganismos no pueden ser caracterizados por las tcnicas
clsicas de cultivo microbiano, pues se estima que alrededor del 80 al 90% de los
microorganismos del suelo, an no son cultivados (Amann et al., 1995). Un
elevado nmero de especies microbianas son examinadas por su viabilidad pero
no por su estado cultivable, de aqu que los conocimientos en la biodiversidad
microbiana son particularmente escasos (Trevors, 1998).
La diversidad funcional es, por lo tanto, una medida de valor por la cual se
puede comparar y contrastar los diferentes ecosistemas y hbitat y que se puede
medir a travs del establecimiento de patrones de consumo de fuentes de carbn

19

por la comunidad microbiana en el momento que se impriman cambios

microambientales que afectan la dinmica de la poblacin microbiana (CarpenterBoggs et al., 1998).
Estos cambios microbianos pueden estar afectados por diversos factores
que pueden actuar de manera distinta en el comportamiento de la diversidad de
las poblaciones microbianas, tal es el caso que investig Yang et al., (2000), en
donde concluye que la contaminacin por pesticidas agrcolas causa un
decremento en la biomasa microbiana del suelo pero guardan una elevada
diversidad a nivel del DNA. En contraste, la contaminacin por fertilizantes
qumicos causan un incremento en la biomasa pero decrece la diversidad del
DNA.
Respecto al uso de fertilizantes Lupwayi et al., (2001) observaron que la
aplicacin

de

azufre

puede

tener

efectos

nocivos

directos,

sobre

los

microorganismos del suelo o indirectos, mientras que los efectos benficos a

travs del crecimiento de los cultivos, presumiblemente son debidos al incremento
de la exudacin de las rac es en la rizsfera de los cultivos saludables.
Por otro lado los riesgos que se tienen con la contaminacin de los
fertilizantes pueden ser valorados mediante el funcionamiento de las comunidades
microbianas, tal como lo muestran Martin et al., (1999) en los estudios donde
definen que solo se requiere de un umbral mnimo en la medicin de la
abundancia, equidad y diversidad de la estructura de la comunidad microbiana
para valorar la desnitrificacin espacial.
En cuanto al manejo del suelo Lupwayi et al., (2001) observaron que en la
labranza convencional se reduce significantemente la biomasa microbiana en un
suelo Luvisol cido y pobre en C, aunque esto generalmente no tiene efectos
significantes cuando se encuentra cercano a la neutralidad, los suelos Luvis oles y
Chernozem son ricos en C orgnico en los cuales se sobreestima la importancia
del C en el mantenimiento de la salud del suelo. En estos suelos, el azufre tiene
un significante efecto sobre la biomasa microbiana del suelo, y estos efectos sobre
la diversidad microbiana son ms frecuentes sobre los Luvisoles cercanos a la
neutralidad, los cuales son ms deficientes en azufre, que sobre los Luvisoles

20

cidos o los Chernozem.

Otro de los factores que afecta la diversidad funcional abordado por Degens
et al. (2000) se refiere al uso del suelo en las actividades agrcolas
convencionales, mismas que agotan las reservas del C orgnico en el suelo
causando la declinacin en la diversidad catablica de las comunidades
microbianas. Afirmando adems, que si bien, las implicaciones de estos procesos
microbianos son desconocidas, mantener el C orgnico del suelo puede ser
importante para preservar la diversidad microbiana.
Con respecto a la disponibilidad de fuentes de carbono Liu et al. (2000) en
sus estudios realiz ados en el desierto de Chihuahua, concluyen que la
disponibilidad de los substratos es el factor que ms afecta la diversidad y la
actividad de los microorganismos del suelo entre las estaciones del ao, y que la
humedad en este medioambiente no es un factor causante de las diferencias en la
diversidad microbiana funcional y la actividad entre el estrs de los tratamientos,
pudindose utilizar las mediciones para predecir algunas respuestas microbianas
bajo algn estrs particular.
Por otro lado Zhou et al. (2002), encontr que en las zonas vadosas de
sitios ricos en C orgnico, las comunidades microbianas consistentemente exhiben
patrones uniformes de distribucin con respecto a los contenidos de agua y la
profundidad del suelo. Concluyendo adems, que la uniformidad en la distribucin,
la cual implica competicin, no es esta la que influye en la estructura de estas
comunidades microbianas, ms bien es la heterogeneidad de las fuentes de
carbono lo que puede explicar la uniformidad de los patrones de diversidad
observados en las muestras con elevadas cantidades de carbono igual que en las
zonas saturadas.
Referente a la competitividad de los microorganismos Griffiths et al. (1999),
al analizar el DNA y los PLFA de las comunidades microbianas encontraron que
existen cambios en los gradientes determinados en las poblaciones microbianas y
que estos concuerdan con el incremento de la carga de los substratos. Esto puede
surgir como una consecuencia de la habilidad competitiva de los microorganismos
del suelo que dependen de la cantidad y disponibilidad de los substratos.

21

De aqu que Griffiths et al. (1999) proponen que para un entendimiento

completo de las interacciones que afectan la estructura de la comunidad
microbiana de la rizsfera requiere de la manipulacin experimental de las
interacciones de los compuestos individuales (e.g. las cantidades de exudados, la
humedad del suelo y el estado de los nutrientes del suelo).
Por otro lado, es tambin importante considerar el tipo de labranza a la que
se somete el suelo, por lo que Bending et al. (2000), comparan los efectos del
manejo de los suelos agrcolas con los cambios en la materia orgnica, para medir
la diversidad metablica y observ que las poblaciones microbianas son ms
sensitivas a los efectos del manejo, adems de tener valor como indicadores del
impacto del manejo sobre las propiedades biolgicas del suelo, y en el aumento
de la calidad de este.
Aunado al manejo y uso del suelo Degens et al. (2001), observaron que la
diversidad catablica se reduce en los suelos, que son menos resistentes por el
estrs ejercido por los cultivos o los disturbios comparado con los suelos de
pastizales, donde la diversidad catablica es elevada, esto lo demuestra
incrementando factores estresantes como las concentraciones de Cu, el pH y la
salinidad causando un incremento del catabolismo tanto en los suelos cultivados
como en los suelos de pastizales, pero es mayor el decrecimiento del catabolismo
en los suelos con cultivos que en los suelos por pastizales.
De acuerdo con Griffiths et al (2000), la resiliencia se reduce en los suelos
con el decremento de la biodiversidad. Al respecto, considera que los suelos no
son resilientes al estrs persistente, estos no recuperan los ndices de
descomposicin a travs del tiempo, pero los suelo con elevada biodiversidad son
ms resistentes al estrs que los suelos con la biodiversidad daada.
Con respecto a las prcticas de manejo Rangarajan et al. (2002),
encontraron que la agricultura orgnica puede ser capaz de mitigar lo perjudicial
del estrs salino a largo plazo, y restaurar la diversidad de las Pseudomomas,
adems de ser comparable con la diversidad encontrada en los sitios no salinos.

22

2.4. Sucesin microbiana y sus interacciones.

La teora de la sucesin predice que las especies oportunistas tienen una

elevada inversin de energa en reproduccin y que por lo tanto abarcan nichos
ms amplios, an sin embargo, estas sern reemplazadas por el equilibrio de las
especies que inviertan relativamente ms en energa para su mantenimiento
adems de abarcar nichos ms reducidos de acuerdo con el desarrollo de la
comunidad (Garland et al., 2001).
La ubicacin espacial de las bacterias puede ser atribuida a la capacidad
que estas tienen para obtener energa y los nutrientes necesarios sobre las
diversas fuentes y por ser dispersadas sobre la tierra como bioareosoles, en
nubes de polvo, por insectos y animales vectores y por el agua corriente por
encima y por debajo del suelo. De aqu que la dinmica de las poblaciones
microbianas pueda cambiar constantemente, de acuerdo con las posibilidades que
ellos tengan para la obtencin de los substratos que de manera natural o inducida
puedan disponer (Hodson, 1989).
Cuando existe una continuidad en el metabolismo microbiano, las
condiciones geoqumicas cambiantes permiten la sucesin de diferentes
ensamblajes microbianos (Urlich et al., 1998).
As como las condiciones geoqumicas dependen del metabolismo
microbiano, para que este se lleve a cabo son indispensables las fuentes de
energa, pero s esta no puede ser aprovechada por la influencia de los factores
medioambientales, como en el caso de la oscilacin de temperaturas extremas de
suelos glaciales estudiadas por Ohtonen et al. (1999), las comunidades
microbianas, durante la sucesin, no pueden incorporar todos los substratos
adicionales dentro de su biomasa, aunque rpidamente incrementan su
respiracin, mientras que en las etapas tardas la comunidad no puede reaccionar
a los elevados ndices de la respiracin por unidad de biomasa y estas quedan en
un "estado de ahorro de energa," acumulando el carbono dentro de su biomasa.
Encontraron adems, que la comunidad microbiana cambia de la dominacin
bacteriana en las primeras etapas a la dominacin fngica en las ltimas.

23

Los cambios en la estructura de las comunidades bacterianas del suelo

pueden influenciarse por la introduccin de filtrados manipulados genticamente.
Esto es demostrado por Natsch et al., (1998) donde al utilizar dos filtrados de
Pseudomonas fluorescens CHAO-Rif que se deriva de CHAO-Rif/pME3424
conduce pasajeramente a un aumento de la actividad metablica de las
comunidades bacterianas residentes sobre los dmeros y los polmeros de la
glucosa, por un proceso natural la sucesin demostrada a travs de los datos de
las dos muestras cambian la actividad metablica de la comunidad bacteriana con
respecto a las muestras no inoculadas.
En el proceso de desarrollo sucesional los microorganismos en general
tienen un patrn de crecimiento dependiente del tipo de substratos que tengan
disponibles, es debido a estos constituyentes como se refleja en el
comportamiento sucesional de las enzimas extracelulares, particularmente de las
xilanasas, (Kandeler et al., 1998) pectinasas, celulasas, y ligninasas (Stemmer et
al., 1998) cuando se trata plantas con paredes celulares altamente lignificadas.
Referente a las enzimas, Fioretto et al. (2001), realizaron estudios sobre la
descomposicin de esteras de hojas con especies arbustivas del mediterrneo
entre las que se encontraba Cistus incanus especie a la cual se le caen las hojas
en el verano comparndolas a las de Myrtus communis, que siempre se encuentra
verde. Ellos concluyeron que los anlisis de estas enzimas han mostrado
diferencias cualitativas y cuantitativas que dependen del tipo de estera de hojas y
las condiciones microclimticas lo que hace pensar en los cambios de la sucesin
microbiana.
Similar a los estudios de Fioretto et al., (2001); y Fisk et al., (2002)
concluyen en sus estudios que las diferencias cualitativas y cuantitativas que
forman las esteras de hojas de rboles son las que marcan las diferencias, siendo
la produccin de hojas del crecimiento ms viejo los que logran una mayor
retencin de nitrgeno, comparando las esteras de hojas los bosques maduros
producidas en el crecimiento secundario.
Este aparente sumidero de N no es el factor primario que influye la prdida
de N por lixiviacin. De cualquier manera, los patrones de la dinmica del N entre

24

los ecosistemas de los bosques individuales indican que las prdidas de N

corresponden a los ndices netos de mineralizacin y al flujo de deposiciones de N
de las esteras del otoo (indicadores del ciclo del N de la planta), los cuales son
independientes de la edad de los bosques, la biomasa en su conjunto, y a las
transformaciones en grues o del N de las etapas sucesionales que se compararon
(Fisk et al., 2002).
Por otro lado, Wilkinson et al., (2002), desarrollaron estudios sobre el estrs
por humedad en las comunidades microbianas de esteras de conferas
encontrando que los cambios en la comunidad microbiana son en respuesta al
derretimiento de la nieve, porque los grandes cambios en los cidos grasos
fosfolpidos asociados con los eucariontes se encontraron nicamente en esta
ocasin. Demostrando de esta manera que la estructura de las comunidades
bacterianas asociadas con la descomposicin de la estera de conferas es
elevadamente sensitiva a los cambios de las condiciones medioambientales.
Sobre los procesos relacionados con las interacciones de las especies de
microorganismos Alekhina et al. (2001), observaron en un modelo experimental de
suelos Podzolic y suelos castaos del Bosque Central la Reserva de la Biosfera
Estatal de Lomonosov que los hongos son los que predominantes en las fases
tempranas de sucesin microbiana, considerando que el desarrollo de bacterias y
actinomicetos estaban ms activo en las fases tardas. Los hongos con un micelio
espeso predominaron en los dos tipos de suelos durante los aos hmedos;
mientras que en aos secos, se observ el desarrollo de hongos con un micelio
delgado.
Con respecto al proceso de sucesin que se da en la descomposicin de
los residuos de la cosecha de maz, Wagner y Broder (1993) observaron una
proliferacin de la biomasa fngica (85% en comparacin con los actinomicetos y
las bacterias, para despus descender a los 2 aos de descomposicin). El
gnero inicial predominante fue Myrothecium, pero no se aisl por un periodo largo
despus de la descomposicin de componentes de los residuos lbiles. El
Aspergillus

consistentemente

se

encontr

en

una

cantidad

significante,

colonizando los residuos de maz a travs de la descomposicin.

25

En estudios realizados anteriormente por Hurst y Wagner (1969)

observaron que el crecimiento de los hongos en residuos de maz indica que el
80% de las hifas son de carcter hialino y un 20% son melnicas. Interpretado
esto en trminos de la no-viabilidad, las hifas hialinas que ya no son necesarias
para el hongo sugieren que pueden ser buenos substratos para las sucesivas
generaciones de microbios, incluyendo las bacterias aunque las paredes melnica
pueden ser resistentes a la descomposicin y quiz persistan en los tallos del
maz que quedan cuando progresa la descomposicin.
Siendo la quitina el principal constituyente de las hifas melnicas, se
retoman los estudios De Boer et al. (1999), donde utilizaron enmiendas de quitina
en suelos de dunas y observaron que ms de la mitad es descompuesta en las
primeras 4 semanas de incubacin. Esta rpida degradacin lo ms probable es
que sea debido al crecimiento de los hongos quitinolticos (principalmente
Mortierella spp. y Fusaarium spp.) y bacterias quitinolticas aunque la contribucin
a la degradacin a la quitina de estas ltimas es de menor importancia. Mientras
que en la etapa tarda de la incubacin prolongada, las unidades formadoras de
colonias de Strepotmycetes y hongos de lento crecimiento se incrementa
fuertemente.
Adems de las partes componentes de los hongos, en el proceso de
degradacin de la lignina y la celulosa efectuada por ellos mismos, resulta en la
formacin de metabolitos de bajo peso molecular, que son generalmente cidos
carboxlicos aromticos, los cuales pueden ser metabolizados por las bacterias
(Vicuna et al., 1993).
La mayor proporcin de hongos al inicio de la descomposicin de la
celulosa es demostrada por Schutter y Dick (2001), a travs de los datos
generados por las pruebas Biolog y la determinacin de los cidos grasos
fosfolpidos metil ester que revelaron un patrn sucesional en las comunidades
microbianas a travs del tiempo. Por ejemplo, un incremento en la utilizacin de
los carbohidratos de los suelos enmendados con celulosa al da 49 corresponde a
un incremento en la abundancia de cidos grasos fosfolpidos metil ester y la
diversidad, con cantidades elevadas de cidos grasos fngic os 18:1 omega 9c y

26

18:3 en omega 6c detectados en esos suelos.

Siendo los hongos los que mayormente contribuyen al reciclado de los
nutrientes, en los suelos agrcolas el uso de los fungicidas afecta la fertilidad
biolgica, existiendo an poco conocimiento sobre las formas en que acta sobre
las dems poblaciones microbianas. Al respecto Thirup et al., (2001), observaron
que el fungicida fenpropimoph (formulacin Corbel) deprime la actividad de la
poblacin bacteriana total hasta el da 17 y se estimula hasta el da 56. An sin
embargo, las pseudomonas y los actinomicetos no son afectados. La sucesin de
los dos subgrupos difiere considerablemente, as que, por cuanto a lo que se
refiere a las pseudomonas, su mayor desarrollo es en las etapas en la
descomposicin temprana, mientras que los actinomicetos son ms abundantes
despus de dos meses.
En la misma investigacin, aunque el fenmeno de sucesin se presenta, la
diversidad del DNA bacteriano medida por electroforesis en gradientes de gel
desnaturalizado se encontr inafectada por el fenpropimorph, por lo que se
demuestra una clara y elevada sucesin reproductible en la diversidad bacteriana
durante la descomposicin de las races de cebada (Thirup et al., 2001).
El fenmeno anterior se refiere a los factores antropognicos que interfieren
en los procesos naturales, aunque existen an muchos fenmenos que intervienen
en la sucesin de los organismos como la retroalimentacin entre las plantas, los
microorganismos y el ciclo de los nutrientes que juegan un papel muy importante
en la conduccin de la sucesin de los bosques entre otros ecosistemas. Tal y
como lo describen Fierer et al. (2001) que observaron cambios en el ciclo de los
nutrientes causados por qumicos secundarios (taninos) producido por el lamo
(Populus balsamifera) afectando la transicin del aliso (Alnus tenuiflora).
El peso molecular de la fraccin de los taninos sirve como una fuente de
carbn para las comunidades microbianas de Populus balsamifera pero son
txicos para los microbios en la rizsfera de Alnus tenuiflora. El elevado peso
molecular de la fraccin de los taninos parece actuar como substrato puente
extracelular y de esta manera limitar la mineralizacin del C y el N, con un fuerte
efecto en los suelos con Alnus tenuiflora (Fierer et al., 2001).

27

Observar los procesos de sucesin natural es importante, porque de ellos

podemos

obtener

informacin

valiosa

para

acelerar

los

procesos

de

bioremediacin de los ecosistemas disturbados. Al respecto Singh et al. (2001),

documentaron los patrones de la restauracin natural de los componentes y los
procesos del suelo en cinco sitios daados (de 1 a 58 aos) en los ecosistemas de
bosques hmedos y salados del Himalaya en Nepal. La comparacin se hizo con
un bosque no disturbado en un sitio de la misma regin. De acuerdo con los
trabajos realizados, se pude considerar que la acumulacin de la biomasa total del
suelo a travs del tiempo y la elevacin de los ndices de mineralizacin en las
etapas tardas de la sucesin pueden ser indicadoras del reestablecimiento de
riqueza del suelo y su restauracin del ciclo de los nutrientes durante el curso de
la restauracin del ecosistema.

2.5. Materia orgnica

Los residuos de las plantas, la biomasa de la mesofauna y la microbiana

son los principales materiales que forman la materia orgnica del suelo. Los
residuos de las plantas se componen de complejas mezclas de compuestos
orgnicos, principalmente polisacridos, biopolmeros alifticos y taninos. La
composicin y la relativa abundancia de estos compuestos varan ampliamente
entre las especies de plantas y el tipo de tejidos. Algunos componentes, tales
como la lignina, se encuentran exclusivamente en los residuos de las plantas los
productos especficos son formados por los microorganismos (e.g. amino
azcares) (Kogel-Knabner, 2002).
La materia orgnica del suelo es de gran importancia por ser fuente de los
principales nutrientes (N, P y K), la estabilidad del suelo y el flujo de los gases de
invernadero entre la superficie del suelo y la atmsfera. Esta representa la mayor
reserva de carbn dentro de la biosfera, globalmente se estima en 1400x1015 g,
aproximadamente dos veces ms que el CO2 atmosfrico y puede actuar tanto
como recurso y depsito para el C y los nutrientes (Post et al., 1982).

28

El Intergovernmental Panel on Climate Change (IPCC) que trabaja las

metodologas para establecer los inventarios de CO2 de las naciones, identifica
tres principales opciones de mitigacin para la agricultura: (a) reduccin de las
emisiones relacionadas con la agricultura (e.g. Reduccin de la labranza, menor
intensidad de la produccin), (b) uso de bio-combustibles remplazando a los
combustibles fsiles y (c) la captura de carbono (C) en los suelos (e.g., uso de
enmiendas de materia orgnica) (Poulson et al., 1998).
Referente a la captura del C, Dalal y Chan (2001) hacen algunos clculos
sobre las posibilidades que pueden surgir mediante el manejo sustentable de las
extensas reas del cinturn de los cereales en Australia. Esta rea cubre
aproximadamente 20 Mha de suelos cultivables y 21 Mha de praderas. Se calcula
que si estos suelos fueran adecuadamente aprovechados bajo prcticas efectivas
de manejo requeridas para reponer y mantener la materia orgnica necesaria para
una agricultura sustentable y restaurar las tierras degradadas, se tendra el
potencial de reducir la emisin a largo plazo de gas por alrededor de 50 toneladas
mtricas de CO2 equivalentes a un periodo de 20 aos.

2.5.1. Dinmica de la materia orgnica

Six et al. (2002), consideran que la materia orgnica del suelo puede ser:
(1) fsicamente estabilizada, o protegida sobre la descomposicin, a travs de la
microagregacin, o (2) por asociacin ntima con las partculas de arcilla y arena, y
(3) puede ser bioqumicamente estabilizada a travs de la formacin de
compuestos recalcitrantes de la materia orgnica del suelo (MOS).
La materia orgnica del suelo en sentido amplio, incluye los residuos de las
plantas (recursos primarios) los residuos de los animales del suelo y los
microorganismos (recursos secundarios), la materia orgnica disuelta (MOD), los
exudados de las races, y los compuestos macromoleculares hmicos
morfolgicamente inestructurados (Unger et al., 1997).

29

La materia orgnica es el principal recurso de N, S, P y otros nutrientes en

los suelos y es esencial para mejorar la produccin de los cultivos debido a los
cationes de intercambio y a la capacidad de retencin de agua. La reserva de C
del suelo es importante para mantener la disponibilidad de los nutrientes del suelo,
y de ello depende el manejo de los residuos para el sistema (Unger et al., 1997).
La materia orgnica forma los recursos base del sistema red microalimenticia que son indispensables para la microflora (bacteriana y fngica) y
estas a su vez alimentan a varios grupos de micro y meso-fauna. Las
interacciones trficas dentro de esta red alimenticia dirigen los procesos del nivel
de ecosistema tal como el flujo de energa y el ciclo de los nutrientes (Wardle et
al., 1998).

2.5.2. Humificacin

Los substratos hmicos son indivisibles dentro de tres fracciones crudas

basadas en la solubilidad de los cidos y bases acuosos: el humus, el cido
hmico, y el cido flvico. Cada fraccin de los substratos hmicos, tiene una gran
habilidad para interactuar con los iones metlicos, minerales y otros substratos
orgnicos para formar las asociaciones estables al agua (Schnitzer, 1989).
Junto con los grupos carboxilos, los grupos fenlicos contribuyen
mayormente a la capacidad de intercambio de cationes de la materia orgnica, as
como los complejos de metales (Hayes y Swift, 1990).

a. Rasgos caractersticos de la descomposicin y la humificacin.

La funcin clave de la descomposicin es que representa un servicio

ecolgico para el ecosistema total, cuando menos en un 60-90% de la produccin
primaria terrestre es descompuesta en el suelo (Hbard, 1998). Durante la
descomposicin de los residuos orgnicos y la humificacin, los recursos primarios
y secundarios son alterados por la lixiviacin, desintegracin y catabolismo. El

30

catabolismo y la lixiviacin son acelerados por parte de los animales consumidores

de mantillo orgnico como las lombrices de tierra (Lavelle et al., 1992).
La descomposicin de las plantas en el suelo va a depender de su
composicin tal y como lo demostraron Cookson, et al., (1998), cuando
incorporaron los residuos del cultivo de lupino la prdida de masa de los residuos
(75%) es casi dos veces ms que la paja de cebada (42%) y trigo (38%) despus
de 90 das de descomposicin. Las diferencias en la prdida de masa de los
residuos reflejan tambin una significante elevacin de las proporciones de ndice
de los substratos inductores de la respiracin y una mayor poblacin de las
bacterias e hifas de los hongos sobre los residuos de lupino que sobre las de la
paja de trigo y cebada.
A pesar de que los procesos de descomposicin de los residuos de materia
orgnica bajo condiciones anaerbicas son ms lentos, las proporciones de lignina
y polisacridos degradados sobre cada uno de los materiales lignocelulsicos es
similar bajo condiciones anaerbicas, lo que sugiriere una angosta unin entre la
degradacin anaerbica de la lignina y los componentes polisacridos de la
lignocelulosa (Benner et al., 1984).
La acumulacin de los materiales de las plantas como turba en las
marismas es probablemente el resultado de una combinacin de factores que
incluyen no solo los ndices relativamente ligeros de degradacin, que se
comparan con los pantanos salados, pues tambin se incluyen las condiciones
hidrolgicas, como son los ndices extremadamente bajos del movimiento del agua
y la escasez del arrastre de las mareas (Benner et al., 1984).
Durante la descomposicin y la humificacin de los residuos de la cosecha
del maz, alrededor del 80% del carbono se libera a la atmsfera como CO2 en un
periodo de 2 aos. El carbono remanente humificado reemplaza la materia
orgnica del suelo, el cual es mineralizado durante los cultivos (Wagner y Broder,
1993).
Field (2001) explica que las sustancias hmicas son muy recalcitrantes en
los medios anaerbicos como substratos, principalmente debido a la estructura de
su elevado peso molecular que no es hidrolizable, el cual es incompatible para que

31

la clula lo tome. Aunque las sustancias hmicas no proveen fuentes de carbono o

energa a los microorganismos, la evidencia presentada aqu indica que ellas son
muy activas como terminales aceptores de electrones y como mediadores del
potencial redox promoviendo la degradacin anaerbica y la biotransformacin de
los principales contaminantes.

b. Factores que controlan la humificacin

Los ndices de descomposicin son influidos por el metabolismo

microbiano, la localizacin de los substratos y la humedad del suelo (Young et al.,
1998). La humificacin, as como la descomposicin de los residuos orgnicos son
procesos primarios mediados por los microorganismos, que son controlados
principalmente por variables especficas del sitio como la temperatura, el rgimen
de disposicin de agua, pH y disponibilidad de los nutrientes (Goodfriend, 1998).
En los estudios conducidos por Wardle et al., (1999) se demuestra que las
propiedades biolgicas del suelo tales como la biomasa microbiana y su actividad
no son necesariamente adversamente afectados por la intensificacin de la
agricultura y que las consecuencias de la intensificacin principalmente dependen
de las prcticas las cuales alteran la calidad y la cantidad de residuos dejados.
Esta calidad depende de la composicin qumica de los recursos primarios
que controlan la descomposicin y la humificacin,. no por alterar la totalidad de
las rutas, sino por la variacin en sus proporciones. Los recursos ricos en fenoles,
grasas, y lignina son conocidos por descomponerse ms lentamente y por
contribuir marcadamente al conjunto de materia orgnica recalcitrante del suelo,
en comparacin a los compuestos de protenas y azcares (Swift et al., 1979).
La lignina es central para el ciclo del carbn de la tierra porque la lignina es
el segundo material ms abundante superado nicamente por la celulosa y, quizs
sea ms significante, porque la lignina protege fsicamente mucha de la celulosa
del mundo y la hemicelulosa sobre la hidrlisis enzimtica (Kirt y Farrel, 1987).
La composicin qumica de los materiales lignocelulsicos en donde la
extensibilidad, la digestibilidad y la adherencia de las paredes celulares son

32

propiedades importantes dictaminadas por las ligaduras de cruce en las paredes

celulares primarias de muchas plantas, los xiloglucanes forman la interfase entre
las microfibrillas y las paredes de la matriz pero en algunas monocotiledneas,
tales como el maz, la posicin es ocupada por los glucoronarabinoxilanes (GAX)
(Carpita, 1984).
Esta celulosa, en este complejo, forma lo que los microorganismos
celulolticos tpicamente encuentran bajo circunstancias naturales para hidrolizar,
tanto individualmente o como partes de un consorcio de microorganismos. Este es
el porqu estos organismos usualmente producen hidrolasas polisacridas para la
degradacin de la lignina, de acuerdo a esto las enzimas necesitan hidrolizar los
puentes de -1,4-glucosdicos en la celulosa (Tomme et al., 1995).
La actividad de la lignina va ms all de la mera composicin de los
compuestos recalcitrantes del suelo como lo demuestran Telysheva et al., (2002),
en sus estudios al obtener compuestos qumicos modificados con combinaciones
que contenan Silicio, nitrgeno y extractos solubles en agua biolgicamente
activos de la matriz de la lingina de rboles. Estos compuestos establecen un
efecto similar a las auxinas con la fraccin oligomtrica de la lignina y pueden ser
considerado como evidencia del efecto directo en los procesos fisiolgicos de las
plantas. Comprobando que la influencia de las composiciones de "los extractos de
lignina de los follajes de rboles" sobre el crecimiento de las plantas de trigo de
invierno, promueven el desarrollo de la masa verde de las plantas, adems de
revelar un incremento en la masa de las races.
En el proceso de descomposicin de la materia orgnica son necesarios
mecanismos de interaccin entre las bacterias, actinomicetos y hongos. Al
respecto Becker (1999) considera evidente que la comunicacin de clula a clula
es necesaria para la expresin de patrones similares de degradacin, sugiriendo
que las comunidades son sistemas regulados por si mismos los cuales son
formados por los compuestos de carbn suplementados.

33

En la Figura 2, se muestra la dinmica de la Materia Orgnica con especial

referencia a la descomposicin de esteras y la humificacin, mineralizacin,
lixiviacin de la materia orgnica disuelta (MOD).

34

Por otra parte Thompson et al. (1999), consideran que los cambios en la
composicin de las comunidades microbianas dependern de la calidad de los
substratos que estimulan el desarrollo y composicin de la estructura de las
poblaciones.
Desde otra perspectiva, Moller et al. (1999), contempla que en los
procesos de descomposicin se dan interacciones entre las bacterias y los hongos
y que de acuerdo con eso es ms probable explicarlas por competicin del
carbono de los substratos. Estas interacciones, de acuerdo con los datos que ellos
manejan para el ndice de mineralizacin, sugieren que estas se dan de manera
antagnica y que las transformaciones del carbn en un microcosmo controlado,
estimado como C mineralizado ms la formacin del carbn orgnico disuelto
(COD), es consistentemente ms elevado cuando los hongos estn presentes en
el inculo que cuando se comparan a las diversas comunidades de bacterianas
actuando solas.
Dentro de los procesos de humificacin se requiere llevar acabo los detalles
de la caracterizacin qumica de las fracciones que ingresan al suelo aunque
generalmente es aceptado que la materia orgnica particulada2 como los
materiales ligno-celulosos se deriva de las plantas, en contraste con la fraccin
lbil que en su mayora se deriva de los microbios, principalmente de los hongos.
(Six, et al., 2001).
Si bien la los materiales lignocelulosos pueden permanecer por un mayor
tiempo como materia orgnica recalcitrante, esta no quiere decir que permanezca
inactiva o no sufra ningn proceso de transformacin (Unger et al., 1997). Al
respecto Field (2001) observ que ciertas bio-conversiones anaerbicas, tales
como la dimetilzacin de la lignina y la reduccin de los grupos nitro- o azo pueden
activar los contaminantes durante los procesos de humificacin subsiguientes a la
exposicin del aire.

____________________________________________
2

Materia orgnica particulada.- Se refiere a la materia orgnica que se encuentra dispersa o no est unida en
sus superficies, similar a las partculas de arena; tal es el caso de las partculas finas de materiales lignocelulosos.

35

Las implicaciones cuantitativas y cualitativa de las bacterias, Actinomicetos,

y hongos en la descomposicin de la materia orgnica del suelo se ha encontrado
una media anual de biomasa microbiana de 71 gm-2 a una profundidad de 10 cm,
mientras que la biomasa mxima asociada con la descomposicin de los residuos
de maz es de 14 4 gm-2 de los cuales el 85% son hongos en comparacin con
las bacterias que es de 1.2 0.4 gm-2 y los Actinomicetos que es de 0.8 0.4
gm-2 (Wagner y Broder 1993).

c) Enzimas implicadas en los procesos de descomposicin y humificacin.

Las enzimas son indicadores de la calidad de la materia orgnica y su

transformacin. Un sistema heterogneo enzimtico extra e intracelular en los
microorganismos opera los controles de descomposicin de la materia orgnica
del suelo. Numerosas enzimas se han ensayado para estimar la actividad
enzimtica y la biomasa microbiana del volumen del suelo. Estas enzimas son
centrales para la actividad funcional de los microorganismos implicados en los
procesos de mineralizacin del nitrgeno y la descomposicin de los compuestos
de carbono orgnico (Stemmer et al., 1998).
La actividad enzimtica del suelo est asociada con la viabilidad de las
clulas y por los coloides del suelo los cuales son primariamente de origen
microbiano pero pueden tambin originarse de los residuos de las plantas y los
animales (Burns, 1982).
Mediante las enzimas se pueden estimar las condiciones de la fertilidad
biolgica del suelo. Tal es el caso de las estimaciones que se hacen a travs de
reacciones proteolticas que tienen gran importancia en el movimiento del
nitrgeno y su disponibilidad en los suelos. Estas reacciones son llevadas a cabo
por la proteasa, asparginasa, glutaminasa y deaminasa (Pathak y Rao, 1998).
Usando un anlisis de discriminacin, los suelos afectados por el manejo
pueden ser bien clasificados basndose en su biomasa microbiana y su actividad
enzimtica. El encontrar una elevada actividad de la xilanasa en el volumen del
suelo parece estar implicada en la calidad y cantidad de los residuos de materia

36

orgnica del suelo, seguida del crecimiento de la biomasa de las plantas. Esta
xilanasa, la cual es producida y liberada extensamente por los hongos saprofticos
en los medios aerobios, est principalmente en las partculas de las cortezas del
suelo con una proporcin de C:N elevada, indicando que estas enzimas
principalmente se encuentran protegidas por las partculas de materia orgnica
(Kadeler et al., 1999).
Debido a la complejidad de la disposicin de los principales azcares
constituidos en las plantas se requiere de un paquete enzimtico consistente de
endo y exoxilanasas para degradar los compuestos del xilan, y la hemicelulosa.
Estas enzimas estn directamente implicadas en la degradacin de la mayora de
los constituyentes polmeros de la cama de los compuestos de las plantas, de aqu
que sea un til indicador para la descomposicin de materia orgnica (RodrguezKbana, 1982; Sinsabaugh et al., 1994).

2.5.3. Interacciones del complejo formado por la materia orgnica los

minerales y las arcillas.

Las pruebas para predecir el estado de los nutrientes en el suelo, tambin

implican determinar la capacidad del suelo para adsorber en los sitios de
intercambio, numerosos cationes que incluyen el Ca2+, Mg2+ , K+ Na+ NH4+, Fe2++ y
Al2+. Estos cationes son retenidos con diferentes grados de tenacidad,
dependiendo de sus cargas, sus radios hidratados y los no hidratados. El total de
la cantidad de estos cationes expresada en meq/100 g o centimoles/kg sobre un
suelo seco que neutraliza las cargas negativas las cuales se desarrollan sobre
coloides minerales y orgnicos, es universalmente expresado como capacidad de
intercambio de cationes (Rhoades, 1982; Ngewoh et al., 1989).
La capacidad de intercambio catinico es un importante atributo de la
calidad del suelo porque describe el potencial del suelo para aceptar, retener y
liberar los nutrientes y otros qumicos (Karlen y Stott, 1994).
Lo anterior se puede entender con mayor claridad en los estudios de
Paustian y Schnrer. (1987) donde por regresin mltiple indican que el 59% de la

37

variacin en la CIC de todos los datos obtenidos de diferentes suelos de New

Jersey puede variar de acuerdo con los contenidos de arcillas y de materia
orgnica, ya que con las arcillas se tiene una CIC de 35 mientras que con la
materia orgnica es de 217 meq/100 g de suelo.
Muchos suelos tropicales son dominados por los minerales de cargas
variables con baja capacidad de intercambio de cationes, la materia orgnica es
muy importante para estabilizar los nutrientes del suelo porque tiene un punto de
carga cero e incrementa la capacidad de intercambio de cationes. Este punto de
carga cero de la materia orgnica, es de gran importancia por la dependencia del
pH de la capacidad de intercambio de cationes, que es crucial para predecir la
capacidad de amortiguacin del suelo y la susceptibilidad de los suelos a la
acidificacin (Nayak et al., 1990).
Lo anterior es explicado por Nielsen et al. (1995) y Curtin et al. (1996) que
consideran que la amortiguacin del pH de los suelos no calcreos es
principalmente debido a las reacciones de intercambio de cationes por lo cual los
grupos funcionales asociados con la materia orgnica y las arcillas actan como
verdaderas bolsas de amortiguadoras de los iones H+ y OH+.
Esta capacidad de retencin fnica de la materia orgnica se correlaciona
con la capacidad de intercambio de cationes y la presencia de grupos reactivos
funcionales (carboxilos, enlicos, fenlicos e hidroxilos) que son los compuestos
lbiles resultantes de la descomposicin de la materia orgnica por los
microorganismos (Shokohifard, 1991).
Adems de los grupos funcionales producidos durante el proceso de
humificacin, la misma biomasa microbiana encargada de producir estos cidos
orgnicos, incorpora algunas cantidades de iones dentro de su sistema y esta
puede ser de 2 a 3 veces ms elevados que los materiales orgnicos e
inorgnicos (Shokohifard, 1991).
Con relacin al complejo formado por la materia orgnica y las arcillas que
conducen a la estabilidad de la estructura del suelo, se puede decir que este
complejo al combinarse, forma la acumulacin de partculas que son resistentes
mecnicamente. Estas partculas acumuladas se refieren a los agregados del

38

suelo y son clasificadas en microagregados de <250 m. Subsecuentemente, los

agregados de menor tamao son unidos por la tercera dimensin formada por los
microorganismos, las hifas de los hongos, las races de las plantas, y los agentes
transitorios (e.g. polisacridos) formando macroagregados (>250 m). Debido a su
mayor labilidad y sus agentes aglutinantes fcilmente desintegrables, los
macroagregados son distintivamente menos estables que los microagregados
(Tisdall y Oades, 1982).
El efecto que tienen los substratos orgnicos en las arcillas por el
incremento de los contenidos de materia orgnica en el suelo, opera
inmediatamente despus de la adicin de materiales ricos en energa, cuando las
actividades biolgicas alcanzan el mximo y la sntesis de nueva materia orgnica
es abundante. Las arcillas pueden formar nuevos complejos de materia orgnica
en los cuales los recientemente formados metabolitos microbianos y el material
celular igualmente son parcialmente protegidos las condiciones naturales cuando
el C suplido es usado ms eficientemente para la sntesis de los tejidos de las
bacterias y otros metabolitos (Srensen, 1981).
En cuanto a los agregados, estos metabolitos pueden aumentar o prevenir
su dispersin. Los aniones orgnicos aumentan la dispersin por el incremento de
las cargas negativas en las partculas de arcilla y por el complejo formado con el
Ca2+, y otros cationes polivalentes tales como los de AI2+ y Fe2+, con los cuales
reducen sus actividades en las soluciones, pero adems, los polianiones pueden
ligar las partculas de arcilla juntndolas dentro de microagregados estables
(Greenland, 1965).
La estructura del suelo conformada por los agregados es funcin de los
agentes cementantes naturales entre las partculas del suelo son generalmente
compuestos orgnicos (Tisdal y Oades 1982; Oades 1984) de las plantas y
residuos de la biota del suelo, metales cationes polivalentes, y precipitados de las
sales del suelo (carbonatos, sulfatos). La deficiencia de uno o ms de estos
compuestos puede perjudicar severamente las capacidades de cementado,
resultando en el deterioro de la estructura del suelo.
Six, et al. (2001) concluyen, que las cuatro fracciones de la materia

39

orgnica [la fraccin ligera libre [1.85 g cm(-3)], la fraccin gruesa (250-2000 m) y
la fina (53-250 m) ms la materia orgnica particulada de los infraagregados] son
derivados predominantemente de las plantas, pero la alteracin microbiana lo
incrementa como sigue: la materia orgnica particulada gruesa de los intraagregados, en menor grado la fraccin ligera de los intra-agregados formados por
la materia orgnica particulada y menor en la fraccin lbil.

2.5.4. Interaccin de los sesquixidos en la materia orgnica

Los sesquixidos juegan un importante papel en la dinmica de la materia

orgnica de muchos suelos tropicales, tales como los Andosoles, Oxisoles, y los
Ultisoles, por su abundancia en estos suelos (Zech et al., 1997).
Los principales mecanismos de la adsorcin de la materia orgnica a los
xidos de Fe y Al son las atracciones electrostticas, los puentes de hidrgeno, y
las reacciones de ligaduras de intercambio. Tal y como en el caso de las arcillas
minerales, los grupos carboxilo de la materia orgnica controlan la adsorcin por
(Oades et al., 1989). La materia orgnica adsorbida por los sesquixidos es
dominada por los constituyentes alifticos y los O-alkil, mientras que las entidades
aromticas son menos prominentes (Baldock et al., 1992).
Aunque los hidrxidos y xidos de Al y Fe, junto con las arcillas minerales y
el carbono orgnico, son los que controlan la sorcin de la materia orgnica
disuelta (Kaiser y Zech, 1998).
Los xidos de aluminio y de hierro son considerados como los mejores
para eslabonar las cargas negativas de la materia orgnica y de las arcillas,
porque ellos tienen una estructura plana o de plato, contra la esfrica estructura de
los xidos de hierro, adems de ser qumicamente ms estables (Golberg y
Glaubig, 1987).
La disponibilidad del fsforo puede ser incrementada a travs de la
formacin de complejos estables con los xidos de aluminio cristalizados, (Martell
et al., 1988), de aqu la importancia de la fraccin lbil de la materia orgnica y de
los cidos hmicos (e.g., cido oxlico) en la cristalizacin de los xidos del

40

aluminio y el hierro (Huang y Schnitzer, 1986).

Con respecto a la proteccin fsica, la influencia de los sesquixidos sobre
los microambientes de los microorganismos juega un papel similar al que juegan
las arcillas minerales. Una razn adicional es la extremadamente baja solubilidad
de los complejos del Al y el Fe con la materia orgnica lo cual hace imposible a los
microorganismos usar los substratos de la materia orgnica (Zech et al., 1997).

2.5.5. Dinmica de la materia orgnica disuelta

La materia orgnica disuelta es la ms activa y mvil de la materia orgnica

de los suelos, ejerciendo una profunda influencia en la desnitrificacin, la qumica
cido/bsica de las soluciones del suelo, la li xiviacin de cationes, y movilizacin
de metales pesados, as como los xenobiticos orgnicos (Zech et al., 1997).
La composicin qumica de la fraccin de la materia orgnica disuelta es
principalmente compuesta por los productos de la mineralizacin y los productos
de re-sntesis microbiana (Guggenberger et al., 1994).
Los ndices de adsorcin de la materia orgnica disuelta son elevados en
los suelos con gran cantidad de sitios disponibles para la adsorcin. Por lo tanto
los ndices de adsorcin en los suelos con pocos sitios disponibles son bajos. En
tales suelos, es muy grande el tiempo de estancia de las soluciones en ellos y,
adems, un mejor tiempo de flujo de agua, puede ser necesario para remover la
materia orgnica disuelta en una extensin similar de suelos con elevadas
cantidades de sitios disponibles para la sorcin (Kaiser y Zech, 1998).
La materia orgnica participa en los procesos de transporte por debajo de la
superficie. Este proceso incrementa la solubilidad de los contaminantes del suelo y
los sedimentos (Kaieser y Zech, 1998).

2.5.6. Fijacin y mineralizacin de la materia orgnica

Dentro de los procesos biolgicos de mayor importancia que se dan para la

nutricin de las plantas se encuentran los relacionados con la fijacin y la

41

mineralizacin de los nutrientes. Esta ltima se refiere a la transformacin

mediada por los microorganismos de los elementos (C, N, P, S) que se encuentran
dentro de compuestos tales como el CO2, CH4, NH4+, NO3-, SO4-2, H2S, HPO3-2.
Mientras que la fijacin es el proceso de la inclusin del C, N, P y el S dentro de
los nutrientes que pueden ser compuestos de carbohidratos y nitrogenados (Zech
et al., 1997).
Por lo que se refiere a la mineralizacin del N, est se relaciona con la
descomposicin de la materia orgnica que da lugar a la liberacin de compuestos
nitrogenados gaseosos que incluyen el amoniaco (NH3 ); varios xidos de
nitrgeno, incluyendo el xido ntrico (NO), dixido de nitrgeno (NO2), pentxido
de dinitrgeno (N2O5), y el xido nitroso (N2O), y el vapor de cido ntrico (HNO3),
mientras que en la desnitrificacin (el efecto de desunin) se refiere al proceso de
reedificacin del N2 sobre los nutrientes nitrogenados (mayormente el NO3-)
(Socolow, 1999).
La asimilacin y la inmovilizacin son procesos por los cuales los nutrientes
favorecen al nitrgeno orgnico (asimilacin en las plantas, inmovilizacin en los
,microorganismos), y la mineralizacin es el proceso por el cual el nitrgeno
orgnico

es

descompuesto

en

nutrientes

nitrogenados.

La

asimilacin,

inmovilizacin y mineralizacin son capacidades encontradas ampliamente en la

naturaleza, pero la fijacin y la desnitrificacin pueden ser acompaadas
nicamente por microorganismos especializados (Socolow, 1999).
Una de las interpretaciones de los eventos de mineralizacin e
inmovilizacin en los suelos estudiados es que son dos grupos funcionales de
bacterias: uno que usa las protenas como fuentes de C y N y otros grupos los que
usan carbohidratos como energa y fuentes de C y NH, mineralizados por los
primeros como fuente de N. Esto puede proveer una unin entre la funcionalidad
bacteriana en trminos de los requerimientos y las dos principales rutas de
transformacin del N en el suelo: la mineralizacin y la inmovilizacin (Gibbs y
Barraclough, 1998).
Los diazotrofos de vida libre en el suelo requieren de una elevada
proporcin de C:N para favorecer su crecimiento. Los bosques maduros tienen

42

una abundancia de carbn el cual puede actuar como un substrato para la fijacin
de N2 por los hetertrofos de vida libre (Kahindi et al., 1997).
Con respecto a la relacin de C: N la descomposicin de los residuos con
bajo contenido de N tales como las pajas de trigo, sorgo, maz, y otros residuos de
cultivos de granos con elevada proporcin de C:N, pueden resultar en la
inmovilizacin microbiana del suelo y del N de los fertilizantes, de esta manera se
reduce la disponibilidad de N para los subsecuentes cultivos (Unger et al., 1997).
La inmovilizacin del N en los residuos de paja es principalmente un
proceso bitico en el cual la actividad fngica tiene un papel mayor que la biomasa
bacteriana (Cheschire et al., 1999).
Los resultados de Gibbs y Barraclough (1998) demuestran que el grueso de
la mineralizacin del nitrgeno es ligeramente afectado por la adicin de la
sucrosa, aunque incrementar marcadamente la inmovilizacin del N. Lo que
confirman en sus trabajos iniciales donde demuestran que la descomposicin es
afectada por las bacterias y la asimilacin de los pptidos o aminocidos ocurre
sin la mineralizacin.
Bajo condiciones de inundacin, la descomposicin de la paja puede servir
como fuentes de energa para la fijacin de N2 en las capas superiores. De
acuerdo con Raice y Paul (1972), los organismos fijadores de N2 en las capas
anaerbicas son dependientes de suplementacin de nutrientes de los organismos
presentes en las capas aerbicas.
La mayor fijacin de N2 bajo condiciones de inundacin puede ser debido a
la provisin de una adecuada humedad, la suplementacin de nutrientes y
condiciones favorables de aireacin para el desarrollo de los microorganismos
fijadores de N2 (Rajaramamohan-Rao 1976).
Las sales afectan grandemente la volatilizacin y la nitrificacin de
(NH4)2SO4 y la urea. La inhibicin de la nitrificacin por las sales se encuentra
entre un rango de 8 a 83% de acuerdo al contenido de sales. Considerando
finalmente que la amonificacin es menos sensitiva a la salinidad que la
nitrificacin (McClung y Frankenberger, 1985).

43

De acuerdo a las apreciaciones de Laura (1976), cuando se adiciona

materia orgnica a los suelos la mineralizacin del N ocurre menos rpido en los
suelos cidos que en los suelos neutros o alcalinos. La principal base
experimental para este punto de vista es que la mineralizacin del nitrgeno se
incrementa cuando se adiciona cal a los suelos cidos en un periodo corto.
Mientras que cuando se usan enmiendas de sal en suelos normales hasta llegar a
un PSI de 92, la inhibicin completa de los procesos de nitrificacin no son
sorprendentes, pues dichos procesos pueden ser debidos a los organismos
autotrficos

los

cuales

requieren

ciertas

condiciones

ptimas

para

su

funcionamiento.
Los estudios de Pathak y Rao (1998) sobre la nitrificacin en suelos salinos
demuestran que la actividad microbiana es deprimida por las sales, pero la
mineralizacin bioqumica contina por la accin enzimtica (aminasas y
deaminasas) que no son afectadas por la salinidad y que al final es el resultado de
la actividad microbiana, esto soporta el hecho de que la mineralizacin del N es de
naturaleza microbiolgica.
Por otra parte McClung y Frankenberger (1987), concluyen que la
amonificacin es estimulada a bajas concentraciones de sal e inhibida a elevadas
cantidades, mientras que la nitrificacin es muy sensitiva a la salinidad.
La estimulacin de la amonificacin a baja salinidad es explicable con base
en la solubilizacin de la materia orgnica que liberan substratos carbonceos
como protectores osmticos para los microbios (Broadbent y Nakashima, 1971).
Aunque la actividad microbiana es deprimida por las sales esta puede ser
estimulada por la adicin de enmiendas orgnicas como en el caso de la alfalfa,
que aparentemente reduce la sensibilidad del Nitrobacter spp., Nitrosomonas spp.,
al NaCI, teniendo un comportamiento similar toda la poblacin microbiana
(McCormik y Wolf, 1980).
Burket y Dick (1998), consideran que las investigaciones futuras sobre el
comportamiento del grado de diversidad microbiana resulte del manejo del suelo
y/o su gnesis como factores importantes en el control de las transformaciones de
nitrgeno. Aunque la medicin de la diversidad gentica tal como la

44

caracterizacin del DNA provee informacin sobre la biodiversidad sta no puede

determinar si los genes o las fusiones de estos son expresados.
Por otro lado, Zak et al., (1994) consideran til lograr algunas
aproximaciones que se relacionen con la transformacin del nitrgeno desafiando
la poblacin microbiana con diversos substratos de carbn para determinar la
diversidad funcional.
Hadas et al., (1998) consideran que el incremento de los contenidos de
materia orgnica del suelo por incorporacin de los residuos de los cultivos,
guardara pequeas concentraciones de N inorgnico para evitar la lixiviacin de
NO3- lo que sera importante para el sostenimiento de la calidad del suelo y el
medioambiente.
Por otro lado, Cheschire et al. (1999), encontraron que los mecanismos por
los cuales el N es inmovilizado bajo condiciones de campo an son desconocidos.
Aunque es conocido que la materia orgnica particularmente la que contiene una
elevada proporcin de C:N, se descompone en el suelo inmovilizando el N
inorgnico. Una proporcin de este N puede ser remineralizada, inmovilizndolo
para prevenir o retardar la prdida de nitrato al permanecer en el suelo, mejorar la
economa de los fertilizantes nitrogenados y decreciendo el riesgo de contaminar
el agua del subsuelo.
Al respecto, los mismo autores, al analizar los residuos de paja,
encontraron que la inmovilizacin del N es principalmente por procesos biticos,
en los cuales la actividad de los hongos juegan un papel mucho mayor que la
biomasa bacteriana. Pero que la continuidad de la inmovilizacin del N dentro de
la paja sin el concomitante incremento del N microbiano indica una posible
limitacin del carbono.
Desde otra perspectiva, Hadas et al. (1998), encontraron que la produccin
de CO2 es reducida por una deficiente disponibilidad de N en la descomposicin
de la paja.
En los suelos con problemas de alcalinidad la mineralizacin del carbn se
incrementa. Uno de los argumentos que generalmente se anteponen a estos
efectos puede ser que el incremento de la alcalinidad aumenta la disponibilidad de

45

materia orgnica para los microorganismos y de esta manera aceleran la

descomposicin. Las razones para una mayor disponibilidad pueden ser la
disolucin, dispersin o la hidrlisis de la adicin as como la materia orgnica
original del suelo. De cualquier manera, los resultados tambin muestran que el
acelerado efecto de la alcalinidad se detienen nicamente despus de cierto
periodo, probablemente despus de un periodo de adaptacin cuando la poblacin
adaptada se hace activa a la elevada salinidad (Laura, 1976).
Por otro lado, Rao y Pathak (1998), encontraron que decrece la
mineralizacin de C con el incremento de la salinidad debido a la deprimida
actividad microbiana, pero la firme evolucin del CO2 a lo largo de tres meses de
estudio muestra que la microflora heterotrfica es activa a elevada salinidad, la
actividad es apenas afectada, de igual manera que a elevada alcalinidad; la
solubilidad de la materia orgnica a elevado pH entre su forma coloidal resulta en
un incremento de la disponibilidad de substratos, de esta manera se releva el
estrs por pH en los microorganismos.

2.5.7. Componentes lbiles y estables de la materia orgnica

Las formas sensitivas de la materia orgnica a las modificaciones a corto

plazo, influyen en las actividades biolgicas y se comportan como un reservorio de
nutrientes para las plantas y los organismos del suelo (Bragato y Primavera,
1998).
Si bien el 55 al 70% de todos los residuos de C de las plantas y los
animales regresan al suelos, son liberados dentro de la atmsfera como CO2
despus de 1 a 2 aos, quedando en los suelos los compuestos lbiles que
promedian entre una cuarta y una tercera parte del to tal de la materia orgnica del
suelo en las regiones templadas (Warner y Broder, 1993).
Los componentes de la fraccin lbil funcionan como agentes de enlace
transitorios, los cuales son descompuestos rpidamente por los microorganismos.
Los grupos ms importantes de estos agentes son los polisacridos que incluyen
(i) polisacridos microbianos producidos con varios materiales orgnicos que son

46

adicionados al suelo, y (ii) algunos de los polisacridos asociados con la biomasa

microbiana en la rizsfera. Los polisacridos son producidos rpidamente pero
tambin se descomponen con la misma rapidez, son asociados con los grandes
agregados transitorios (>200 m de dimetro) (Tisdall y Oades, 1982).
Los contenidos de materia orgnica lbil y la actividad biolgica del suelo
estn ntimamente ligados con la agregacin y la condicin estructural del suelo.
De tal manera que la prdida de la materia orgnica lbil del suelo puede tender a
reducir la estabilidad de los agregados del suelo (Haynes y Naidu, 1998).
Mediante el anlisis de espectrofotometra de protones en los extractos
alcalinos del suelo se demostr que la fraccin lbil no es de origen microbiano
pero se liga fuertemente por los procesos de descomposicin, esta fraccin ms
bien proviene de los materiales de las plantas degradas que son ricas en
sustancias alifticas particularmente las ligadas a los aromticos. Esto se debe a
que la fraccin lbil tiene un menor contenido de glucosamida que el total del
suelo, indicando con esto que el carbono de esta fraccin no proviene de los
hongos (Six et al., 2001).
La biomasa de las plantas consiste principalmente en lignina, celulosa y
hemicelulosa, que constituyen el mayor producto del carbn fotosintticamente
fijado. Mientras que la lignina es el segundo ms abundante polmero, y constituye
entre el 15 al 30% de las paredes celulares de las gimospermas (de madera
blanda) y las angiospermas (de madera dura). La lignina forma una matriz
circundante en la celulosa, que es el polmero ms abundante. Desde esta
incrustada matriz retarda significantemente la despolimerizacin microbiana de la
celulosa, la degradacin de la Ggnina est a un significante paso en ciclo global
del carbono (Gold y Alic, 1993).
Los componentes orgnicos de la materia orgnica del suelo pueden
persistir en el suelo por cientos o por miles de aos y son grandemente
representativos de los substratos hmicos dentro de los cuales se encuentran la
celulosa, hemicelulosa y la lignina, y otras macromolculas orgnicas, las cuales
son intrnsecamente resistentes al ataque microbiano o fsicamente protegidos por
la asociacin con los minerales de la superficie o atrapados dentro de los

47

agregados minerales o capas de arcillas. En general, cuando es perdido como

CO2 un substrato dado, muchos de los residuos de C pueden ser encontrados en
la biomasa microbiana del suelo, y menos C puede ser estabilizado en el humus
del suelo (Tisdall y Oades 1982).
Estos substratos recalcitrantes como la lignina que se encuentra en los
residuos de la cosecha de cultivos en una proporcin del 5 al 30% son un
importante substrato para la formacin del humus del suelo debido a su resistencia
a la descomposicin (Unger et al., 1997).
Por lo que respecta a la paja de maz como substrato tiene una elevada
relacin de C:N [entre 45 a 50:1, Stemmer et al., (1999)], adems de contener una
elevada proporcin de lignina (Wagner y Broder, 1993), esta puede ser
descompuesta con mayor rapidez por los microorganismos aerbicos, debido a la
posicin en la que se encuentra.

2.6. Manejo biotecnolgico de los microorganismos mediante el uso de

substratos orgnicos.

Barnett et al., (1999) consideran a las bacterias como microorganismos con

una gran capacidad para producir nuevos fenotipos denominada plasticidad.
Aunque en la actualidad an no queda claro el fenotipo descrito como plasticidad
para los estudios sobre las poblaciones ecolgicas de las bacterias en los medios
ambientes complejos, es un hecho de que este fenmeno se relaciona con los
procesos de comunicacin qumica.
Becker (1999), en sus estudios concluye que es evidente la existencia de
una comunicacin de clula a clula y que es necesaria para la expresin de
patrones similares de degradacin, ya sea de los substratos disponibles, as como
para

los

contaminantes

que

ocasionan

factores

estresantes

como

los

hidrocarbonos, del tipo de los aceites contaminantes depositados en el suelo y

aguas subterrneas contaminadas con combustible. Sugiriendo en su documento

48

que las comunidades son sistemas regulados por si mismos los cuales se forman
por los compuestos de carbn suplementados.
Los estudios de Drury, (1999) basados en la utilizacin de substratos
orgnicos para incrementar la accin de las bacterias aerbicas deprimidas por los
efectos estresantes, como en el caso de las aguas residuales de las minas, esta
estimulacin es fundamental para el desarrollo de sistemas que aceleren los
procesos de biotransformacin de las aguas residuales contaminadas de la
industria y la minera.
De manera similar a la posicin ideolgica de los autores anteriores,
Thouand et al., (1999) prueban ocho productos bacterianos comerciales que, de
acuerdo a los fabricantes, son capaces de degradar el petrleo. Estos estudios
comparan la actividad de biodegradacin del petrleo crudo por los inculos
comerciales contra los inculos naturales (Iodos activados y agua de acuario
tropical).
Los resultados condujeron a la conclusin que el inculo natural, como
cualquiera, se adapte o no adapte al petrleo crudo, es ms activo (de 16 a 25%
ms de prdida sobre el peso del petrleo crudo) y nicamente un inculo
comercial es capaz de degradar el 18% de petrleo crudo (Thouand et al., 1999).
Con la misma posicin que el autor anterior, Avnimelech (1999), en su
investigacin sobre estanques acucolas, control el nitrgeno orgnico para
manipular las proporciones de carbn/nitrgeno y observ que esto tiene un gran
potencial como mtodo de control de las condiciones qumicas y microbiolgicas
para los sistemas acucolas.
Este enfoque parece ser prctico y no un medio caro para reducir la
acumulacin de nitrgeno inorgnico en los estanques. El control es inducido por
la alimentacin de las bacterias con carbohidratos, y a travs de las subsiguientes
tomas de nitrgeno del agua por las bacterias, por la sntesis de las protenas
microbianas (Avnimelech, 1999).
Al igual que en los estanques acucolas, algunos de los compuestos de
nitrgeno pueden ser contaminantes que ocasionan problemas en otros sistemas
de produccin. Los reactores biolgicos que son parte de los pre-tratamientos para

49

evitar el lixiviado de nitritos a los mantos freticos, requieren de estudios sobre los
mecanismos para evitar el lixiviado de cancergenos como los nitritos. Al respecto
Helmer et al., (1999), desarrollaron investigaciones mediante el manejo de los
substratos para equilibrar las relaciones C:N en Mechemich (Alemania) en donde
observaron que el 60% del nitrgeno o ms, son eliminados bajo condiciones
mnimas de oxgeno disuelto (OD). El amoniaco es convertido sin la acumulacin
de nitritos y nicamente se produce una pequea cantidad de nitrato.
Los resultados indican que bajo concentraciones mnimas de OD las
bacterias autotrficas oxidadoras de amonio deben ser el agente causal de las
prdidas de nitrgeno observadas por la desnitrificacin aerbica/anaerbica con
el nitrito como electrn aceptor y el amonio (o quiz la hidroxilamina) como
electrn donador (Helmer et al., 1999).
Al analizar el desarrollo biotecnolgico del rea de la fertilidad biolgica, se
observa que los microorganismos del suelo, y los procesos que ellos gobiernan,
son esenciales para la sustentabilidad a largo plazo de los sistemas agrcolas,
aunque muchos de los estudios sobre los efectos de la agricultura en la microflora
del suelo solo se han desarrollado a corto plazo (Wardle et al., 1998).
Entre los estudios a largo plazo, realizados por Wardle et al., (1999) para
determinar los efectos de los herbicidas en el comportamiento de las poblaciones
microbianas, observaron que los tratamientos con atrazina permiten una elevada
biomasa de las hierbas causada por un gran incremento en la biomasa microbiana
y la respiracin despus de 3 aos, y en ambos sitios labiomasa microbiana est
positivamente correlacionada con la biomasa de las hierbas y negativamente con
la biomasa de las plantas de los cultivos.
De acuerdo al estudio de Wardle et al., (1999) se demuestra que las
propiedades biolgicas del suelo tales como la biomasa microbiana y su actividad
no son por necesidad adversamente afectados por la intensificacin de la
agricultura y que las consecuencias de la intensificacin principalmente dependen
de las prcticas de cultivo, las cuales alteran la calidad y la cantidad de residuos
dejados.
Por otro lado, es importante considerar que la estimulacin de la fertilidad

50

biolgica en los suelos depende de la biodisponibilidad de los compuestos

orgnicos en el suelo y que los sedimentos comnmente declinan con el contacto
qumico del suelo a travs del tiempo (envejecimiento) de aqu que sea importante
una constante renovacin sobre todo de las fuentes de carbn fcilmente
disponibles (White et al., 1999).
Dentro de los fenmenos que engloba la fertilidad biolgica se encuentran
las relaciones existentes entre las bacterias benficas y la rizsfera de las plantas,
misma que puede ser limitada para las bacterias benficas introducidas como
inculos para que colonicen la espermsfera de las plantas y que pueden ser
limitadas por la competicin con los microbios nativos del suelo por recursos, tales
como compuestos reductores del carbn (Buyer et al., 1999).
Las investigaciones previas sobre el uso biotecnolgico de los substratos
para estabilizar los distintos medios ambientes que comprometen a las
poblaciones microbianas, se pueden recapitular en lo econmico en los estudios
realizados por Hunter-Cervera (1998), donde se considera que podra resultar ms
econmico el uso de la bioremediacin mediante el estmulo de la diversidad
microbiana como alternativa de tratamiento para la disposicin de desechos,
formacin y recuperacin de suelos, fijacin de nitrgeno, bioremediacin de
qumicos y biotecnologa, ya que se ha estimado que los tratamientos no
biolgicos pueden costar alrededor de $750 billones (US dlares) en los siguientes
30 aos para remediar todos los conocidos riesgos de los sitios con problemas de
esta ndole en los Estados Unidos.
Mientras que por otro lado Pimentel et. al., (1997), estiman un gasto diez
veces menor cuando es usada la bioremediacin sobre el mismo periodo de
tiempo. Alrededor del mundo el costo de la bioremediacin puede ser de 14
billones por ao comparado con el uso de las tecnologas actuales que es de 135
billones por ao.

51

2.7. Determinacin de la diversidad funcional

Para el logro de los objetivos planteados existe una gran cantidad de

informacin sobre nuevas tcnicas que describen la diversidad funcional que
pueden expandir nuestra comprensin de la estructura de las comunidades
microbianas.
Dentro de estas tcnicas se encuentran las que se basan en la utilizacin
de las fuentes de carbn, que son las ms usadas para poder distinguir las
comunidades microbianas y su comportamiento en los diferentes suelos (Garland
y Mills 1994), esta prueba tambin se considera para medir el potencial
metablico.
Debido a que las comunidades microbianas difieren en nmeros y tipos, la
proporcin de los miembros de las comunidades individuales est sujeta tanto a
los cambios fsicos como a los cambios qumicos en el medioambiente, de igual
manera a los cambios causados por las actividades fisiolgicas como a las
metablicas de los microorganismos (Zak et al., 1994).
Los microorganismos que son abundantes y que pueden ser cultivados bajo
ciertas condiciones pueden desarrollar formas de dormancia y posiblemente
formas no cultivables bajo otras condiciones medioambientales (Hunter-Cervera,
1998).
Es por esto que los estudios de la ecologa microbiana implican, adems
del aislado de los microorganismos, la deteccin de los procesos y productos
dentro de las comunidades por empleo de ensayos biolgicos y qumicos, que
incluyan tcnicas como las moleculares, determinacin de cidos grasos
fosfolpidos, y los perfiles metablicos a travs de la utilizacin de fuentes de
carbn (Westover et al., 1997), para la medicin de las dimensiones
biogeogrficas de la diversidad microbiana y aumentar de esta manera el
conocimiento fundamental de la ecologa de los organismos (Cavigelli et al., 1995).
Respecto a la capacidad metablica de los microorganismos sobre el suelo,
se puede decir que, se refiere a la simple medicin de la diversidad metablica y
es anloga al conteo de especies sobre diferentes medios ambientes para

52

comparar la diversidad (Burket y Dick, 1998).

Estas aproximaciones en las comunidades al medir la biodiversidad pueden
proveer ms informacin que medir la presencia de individualidades en las
poblaciones, lo cual puede ser descrita por la funcin de la comunidad total
(Grayston y Campbell, 1996).
Lo complicado del entendimiento de la biodiversidad entre los procariontes
de vida libre es debido a nuestra inhabilidad para cultivarlos fiablemente, y como
resultado, muchos organismos quedan desconocidos (Ward et al., 1990).
De aqu que, una ruta para reducir la complejidad y estudiar la diversidad
de las comunidades es limitar el estudio nicamente a la conjugacin de la
comunidad. Estos pueden ser grupos funcionales de bacterias o grupos
filogenticos de bacterias (vreas y Torsvik, 1998), a los cuales se les denomina
biotipos y que se refieren a unidades operacionales taxonmicas. Dicho trmino
puede ser usado en lugar de las especies, para caracterizar y comparar las
poblaciones y las comunidades (Torsvik et al., 1998).
El anlisis de las comunidades del suelo ha tenido trabas por la inhabilidad
de los microbilogos para aislar y cultivar todas las especies presentes, o de igual
manera tener una razonable representatividad de los subgrupos. Adems, la
identificacin de los microorganismos aislados se dificulta y se lleva demasiado
tiempo, de esta manera se limita el nmero de muestras que pueden ser
procesadas. Para evitarse estas dificultades, el nmero de ensayos se desarrolla
sin la necesidad de aislamiento de los microorganismos en cambio se usan las
mediciones genticas, y las propiedades funcionales o estructurales del total de la
comunidad (Buyer y Drinkwater, 1997).
Aunque la medicin de la diversidad gentica, tal como la caracterizacin
del DNA, provee informacin sobre la biodiversidad, sta no puede determinar si
los genes o las fusiones de estos son expresadas (Burket y Dick, 1998).
Las pruebas de la utilizacin de substratos han incrementado su uso para la
caracterizacin de las comunidades microbianas. La aplicacin de los mtodos
estadsticos como el anlisis del componente principal o anlisis componente
correspondiente, son mtodos para muestras nicas que especifican la

53

contribucin de los substratos para la separacin entre los grupos funcionales

(Hitzl et al., 1997a).
Las aproximaciones de la utilizacin de substratos de carbn se basan en
medir el metabolismo oxidativo de las bacterias producido por el consumo de los
substratos para generar patrones del potencial de uso del carbono de las fuentes
disponibles (Buyer y Drinkwater, 1997).
El mtodo Biolog es selectivo, i.e. este permite nicamente las actividades
metablicas de los microorganismos aerbicos o anaerbicos facultativos,
heterotrficos y copiotrficos capaces de crecer a un ndice suficiente en el medio
de cultivo del Biolog para su registro (Wnsche et al., 1995).
El sistema Biolog como herramienta para medir la diversidad bacteriana
funcional, que se define con base en la distribucin y el tipo de fuentes de carbn
en pocillas que la comunidad bacteriana usa en el momento de hacer un muestreo
se caracteriza por las siguientes:
Ventajas del sistema Biolog (Trevors, 1998):

Es un procedimiento rpido no caro, confiable para determinar la

huella de las comunidades microbianas del suelo.

Provee ndices de similitud para las comunidades microbianas.

Determina el potencial metablico de las comunidades.

Desventajas (Trevors, 1998):

Las placas no se designaron para los anlisis del suelo.

Hay relatividad entre las reacciones.

El sistema Biolog primeramente fue ideado para ayudar a identificar los

cultivos de especies de bacterias Gram-negativas (GN) de importancia clnica. El
sistema consta de 95 substratos (Cuadro 3) distribuidos en una placa para Gramnegativos y fueron seleccionados sobre un conjunto inicial de 500 fuentes de
carbn, despus de desarrollar pruebas en 6000 filtrados, que se basaban en su
utilidad de acuerdo a la importancia clnica de las especies (Bochner, 1989).
Las placas para Gram-positivos (GP) contienen tambin 95 substratos que
son escogidos para ayudar a distinguir las bacterias que se caracterizan por este
tipo de tincin. De los 95 substratos que se utilizan en las placas son comunes

54

sesenta y dos tanto para las placas GN como para las placas GP y 33 substratos
son nicos para cada placa (Biolog system, 3938 Trust Way, Hayward, California,
USA 94545).
Es importante hacer notar que aunque el sistema es desarrollado para
examinar la actividad respiratoria ms que el crecimiento, las bacterias pueden
crecer en las fuentes de las pocillas. Si el inculo diluido usado tienen menos de
108 clulas por ml-1, el color no puede desarrollares, o bien puede tener una
funcin sigmoidea a travs del tiempo, en el cual los retrasos iniciales representan
un periodo durante el cual el inculo crece hasta alcanzar 108 clulas ml-1, adems
las fases lineales de crecimiento representan una actividad metablica especfica
de un microbio en un substrato especfico para las especies. De esta manera,
todas las fases de crecimiento son afectadas por la fisiologa de los microbios
sobre los substratos individuales. Resumiendo, la fase inicial retrasada es
elevadamente dependiente de la densidad celular en el inculo (Haack et al.,
1995).
Debido a que la fbrica produce tambin placas MT, en las cuales las
pocillas contienen el tinte de tetrasolium pero no substratos orgnicos, el
investigador puede crear un juego de substratos hechos a la medida, de aqu que
existan propuestas como las de Insam (1997), para seleccionar los substratos
disponibles

comercialmente

como

placas

de

multi-substratos

(Biolog,

PhenePlate ) que no son especficos para las muestras medioambientales. De

aqu que se reconozca la necesidad de un juego de substratos para los anlisis
medioambientales.
La reduccin en el nmero de substratos es aconsejado para permitir un
nmero estadstico razonable de rplicas (Hitzl et al., 1997b). De la misma manera
Haack et al., (1995), argumentan que un nmero menor de substratos que los 95
ofrecidos en las placas Biolog son suficientes para distinguir entre las
comunidades de los ecosistemas acuticos y terrestres.
Insam (1997), propone un control adicional a las 96 fuentes de las micropocillas. Este control adicional se basa en 31 substratos, cada uno con 3 rplicas
(Cuadro 2), considerando que la reduccin en el nmero de substratos se

55

aconseja para permitir un nmero estadstico razonable de rplicas (Hitzl et al.,

1997b).
Cuadro 2: Los substratos ofrecidos por las ecoplacas Biolog
Aminas
Putrecina
Fenil etildiamina

carbohidratos
cidos carboxlicos
-D-Lactosa
-keto cido glutrico
-metil-D-glucosa D-cido galacturnico

polmeros
-ciclodestrina
Glicgeno

Amino cidos
Arginina
L-asparginina

D-manitol
I-eritritol
Glucosa-I-fosfato

D-cido glutmico
D-cido mlico
cido itacnico

Tween 40
Tween 80
Compuestos
Fenlicos

L-fenilalanina
L-serina

Xilosa
D-cido
Galactnico
Lactona

metil piruvato
-cido hidrxibutrico

2-hidrxibenzoato

El mtodo es propuesto por Hitzl (1997a), e Insam, (1997), para encontrar

los requerimientos estadsticos sin la necesidad de usar demasiadas rplicas en
las placas. El anlisis de los patrones de utilizacin de substratos para la
caracterizacin de las comunidades microbianas es representado con varias
aproximaciones estadsticas diferentes. De una manera u otra, el nmero de
rplicas

estudiadas

debe

ser

usualmente

baja

para

permitir

probar

estadsticamente las hiptesis. Esto tambin es propuesto para el estudio de la

cintica de los perfiles ms que el uso de la lectura singular para los anlisis
(Haack et al., 1995).

2.8. El uso de los substratos por las bacterias

Los perfiles de las respuestas catablicas de los microorganismos para los

contenidos de las fuentes de carbono orgnico del suelo se relacionan en lo
general con la diversidad catablica de los microorganismos (Degens, et al.,
2000).

56

57

Esta diversidad funcional de las comunidades microbiana incluyen una relativa

expresin

de

las

actividades

implicadas

en

tales

funciones

como

la

descomposicin, transformacin de los nutrientes y la promocin del crecimiento

de las plantas. La diversidad de las funciones de la descomposicin de los
substratos llevada a cabo por los microorganismos heterotrficos representa un
componente de la diversidad funcional microbiana (Guiller et al., 1997).
La influencia de los nichos en donde se localicen los microorganismos
puede implicar en la adaptacin y preferencia de los substratos. Como lo
demuestran Schutter y Dick (2001), al enmendar suelos limo-arenosos con
residuos de cosecha, ellos observaron que tienen una relativa elevada actividad
para los carbohidratos, aminocidos y cidos carboxlicos contenidos en las placas
Biolog adems de mostrar una mayor diversidad de acuerdo con las pruebas
FAME's comparado con las comunidades de los tratamientos de la glucosa.
Estas preferencias de los substratos por las comunidades microbianas
pueden ser usadas para identificar los grupos funcionales de bacterias, como en
los trabajos de Nielsen et al., (1999), donde se considera la factibilidad de medir la
actividad fisiolgica a travs de la hibridacin fluorescente in situ con substratos
marcados que de acuerdo a la preferencia de algunos grupos de bacterias pueden
ser caracterizados y enumerar su funcionalidad a travs de la microautoradiografa
(Cuadro 4).
El consumo de substratos puede estar condicionado al estado fisiolgico de
las bacterias como lo explica Alexander (1997), que considera que el crecimiento
de los microorganismos bajo condiciones de limitacin de nutrientes depende de
las capacidades co-metablicas de las bacterias. De esta manera se ven los
aspectos diuxicos3 de la utilizacin de nutrientes, que son las jerarquas que
algunos substratos tienen al ser ms favorables que otros para el desarrollo de las
bacterias, pudindose encontrar esta sorprendente co-utilizacin de los nutrientes
como una caracterstica esencial de sobrevivencia en los medios ambiente
_____________________________________________
3

Crecimiento diuxico.- fenmeno mediante el cual un microorganismo, al serle proporcionado ms de un

compuso orgnico, metabolizar hasta su terminacin el compuesto preferencial antes de utilizar un segundo
compuesto, dando como resultado dos fases distintas de crecimiento separadas por una fase de retardo.

58

deficientes saturados de concentraciones de nutrientes. Una serie de documentos

han revelado que la utilizacin simultanea es comn para muchas combinaciones
de

substratos

de

azcar

bajo

condiciones

quimiostticas4

con

niveles

micromolares de estados firmes de nutrientes.

Cuadro 4. Ejemplo de grupos funcionales de microorganismos previamente
investigados por microautoradiografa.
Microorganismo

Substrato utilizado

Bacterias autotrficas
Bacterias heterotrficas

14C-HCO3
3
H-glucosa

referencia

Carmen, 1990
Meyer-Reil, 1978

Mezclas de
3

H-aminocidos

Bacterias oxidadoras

Nilsson y Sundbck 1996

C-HCO3-

Nielsen et al., 1999

P-PO4-

14

Bacterias biodegradadoras
de fsforo

33

Nielsen et al., 1999

Bacterias desnitrificadoras

14

Nielsen et al., 1999

C-acetato, NO3

La capacidad co-metablica de las bacterias es demostrada por Grayston y

Capbell (1996), manejando la Pseudomonas cepacia en presencia de dextrosa
para lograr co-metabolizar el pentaclorefenol el cual es incapaz de usar como
fuente de carbn o energa.
Esta capacidad co-metablica puede ser debida a las caractersticas que
tienen algunos substratos de servir como electrones aceptores. Tal y como lo
demuestran Finneran et al., (2002) y Chen et al., (2000) al comprobar que algunas
de las propiedades de los substratos como la glucosa es actuar como electrn
aceptor.

______________________________________________
4

Quimiostato.- sistema de cultivo en flujo continuo que mantiene una poblacin de microorganismos en la
fase exponencial de crecimiento durante un largo intervalo de tiempo, limitando la concentracin de un
substrato esencial.

59

La utilizacin de los polmeros en las placas Biolog es particularmente

elevada en los suelos enmendados con gelatina, la cual es similar a la estructura
de los polmeros de colgena de las placas Biolog (Schutter y Dick, 2001).
El composteo de los residuos de la caa de azcar por las bacterias y los
hongos nativos es acelerado por el uso de melaza como un substrato inicial. Los
estudios muestran diferencias significantes de varios parmetros entre el control y
los tratamientos donde se aplic la melaza, principalmente, en la descomposicin
visual de los residuos, la poblacin bacteriana y fngica, pH del suelo, contenidos
de celulosa, actividad celular, y materia orgnica del suelo (Boopathy et. al., 2001).
Las bacterias no son especializadas en un substrato en particular, pero su
diversidad les da la habilidad para usar las combinaciones de substratos bajo
diferentes condiciones fisicoqumicas, de aqu que la diversidad metablica de los
microbios descansa usualmente en trminos del uso de los complejos compuestos
orgnicos, como en los suelos orgnicos en donde los diferentes substratos
qumicos pueden ser muy elevados (vreas y Torsvik, 1998).
Esta diversidad microbiana encontrada en los suelos orgnicos se reduce
con la labranza, particularmente en el volumen del suelo durante las labores de
cultivo, y se incrementa con la etapa de crecimiento de las plantas. Esta diversidad
reducida no es nicamente a travs de la reduccin del enriquecimiento de los
substratos, tambin se incrementa la dominancia de algunos grupos que
encuentran situaciones ventajosas para su desarrollo (Lupwayi et al., 1998).
La biodiversidad de los microorganismos fijadores de nitrgeno de vida
libre, es un fenmeno ubicuo de varios gneros de bacterias las cuales proceden
lentamente bajo muchas condiciones ptimas y son reguladas por la cantidad y
persistencia de nichos anaerbicos y la disponibilidad de substratos (Ward et al.,
1990), como lo sugieren Zak et al., (1994) que al incrementar la introduccin de
carbono fcilmente disponible se estimula la actividad microbiana aumentando el
ciclo del nitrgeno y su disponibilidad.
Estas bacterias fijadoras de nitrgeno de vida libre como las diazotrofas
requieren de una elevada proporcin de C: N para favorecer su crecimiento, como
en los bosques maduros que tienen una abundancia de carbn el cual puede

60

actuar como un substrato para la fijacin de N2 por las hetertrofas de vida libre
(Kahindi et al., 1997).
Dentro de las afinidades de los substratos por las diazotrofas aisladas en
las races de los pastos salados se encuentra el cido carboxlico, mientras que
por otro lado, son pocos los aislados cuando los cultivos de la raz de Spartina son
suplementadas con glucosa o sucrosa, no sucediendo lo mismo cuando se
suplement con sucrosa a los medios de cultivo para las races de Juncus
roemerianus que aumenta substancialmente el nmero de filtrados (Bagwell et al.,
1998).
Los substratos rpidamente disponibles, e.g. la glucosa, incrementan los
agregados estables al agua, los cuales trascienden durante varias semanas,
aunque sta es descompuesta rpidamente por los microorganismos del suelo
(Tisdall y Oades, 1982).
Esta trascendencia quiz se deba a la estimulacin de la actividad
microbiana, misma que produce geles de polisacridos extracelulares, los cuales
actan como agentes adherentes en los suelos (Burns y Davies, 1986), adems
de producir protones a travs de los cidos grasos que pueden reducir
dramticamente el pH del suelo, lo cual es linealmente relacionado a la proporcin
de la adicin de glucosa, confirmando la efectividad de la recuperacin de los
suelos alcalinos sdicos (Chorom y Rengasamy, 1997).
El crecimiento microbiano estimulado por los substratos orgnicos crea
condiciones geoqumicas que prevalecen en la superficie terrestre. Cuando los
microorganismos metabolizan varios electrones donadores a costa de los
electrones aceptores disponibles, forman la zona redox, a lo largo de las rutas de
flujo del agua. Estas condiciones geoqumicas cambiantes permiten la sucesin de
diferentes ensamblajes microbianos (Ulrich et al., 1998).
Las reacciones de xido-reduccin influyen en la capacidad de retencin
inica, por la presencia de grupos reactivos funcionales (carboxilos, enlicos y
fenlicos) que aceleran las reacciones qumicas, adems de que la biomasa
microbiana incorpora algunas cantidades de iones dentro de su sistema. Esta
retencin inica de la biomasa microbiana es de 3 a 4 veces ms elevada que en

61

los materiales orgnicos e inorgnicos (Shokohifard, 1991).

Con respecto a los suelos salinos, la capacidad de retencin fnica de la
materia orgnica aumenta la actividad microbiolgica del suelo. Aunque algunas
de las influencias regenerativas de la materia orgnica son aplazadas y esta
actividad puede mejorarse nicamente con la lixiviacin de las sales removidas.
(Rao y Pathak 1996; Haynes y Naidu 1998).

2.8.1. El uso de la glucosa en la determinacin de los procesos del suelo.

Los mtodos para determinar la biomasa total usando la adicin de glucosa

asumen que todos los microorganismos vivos responden a la glucosa de una
manera aproximadamente equivalente (Anderson y Domsch, 1978).
Es probable que los mtodos que se basan en la estimulacin de la
respiracin por glucosa sean aplicados primeramente a los componentes de la
biomasa microbiana que es ms activa, o ms selectiva (Linch, 1984).
De acuerdo con lo anterior Wardle y Parkinson (1990) encontraron que los
mtodos basados en la estimulacin de la respiracin por glucosa son ms
aplicables a los componentes primarios de la biomasa microbiana la cual es ms
activa, o ms selectiva, pero que la biomasa microbiana inactiva responde
inmediatamente despus de la adicin de la glucosa, y que el ndice de respiracin
por unidad de biomasa puede variar de acuerdo con la diversidad de algunos
componentes (el componente glucosa-responsable de la biomasa microbiana
total).
El coeficiente respiratorio microbiano (RQ), es definido como la proporcin
de la evolucin del CO2 por molcula de O2 tomada. El RQ es frecuentemente <1
durante el metabolismo basa) cuando no se han adicionado substratos. En el
transcurso de las primeras cuatro horas de la adicin de la glucosa, los valores del
RQ son regularmente aproximados a 1, entre las 4 a las 24 horas despus de la
adicin de la glucosa cuando el crecimiento microbiano ocurre, el RQ es

62

aproximadamente de 1.3 o mayor pero variar significativamente dependiendo del

uso del suelo, el horizonte del suelo y las precondiciones del suelo (Dilly, 2001).
Los valores de RQ<1 durante el periodo inicial del crecimiento microbiano
puede no ser atribuido a las propiedades abiticas del suelo. De esta manera, la
microbiota aparentemente se adapta de completa oxidacin y la incorporacin de
los substratos disponibles. Las mediciones correspondientes de la respiracin
basa) y la induccin de la respiracin por los substratos con los tipos de esteras
tambin muestran valores de RQ diferentes a 1 (Dilly, 2001).
La estimulacin de la respiracin por la glucosa estudiada por Theenhaus et
al., (1997) en los suelos de bosques, considerando que el coeficiente de
respiracin (RQ) ser de 1.00 en las primeras horas de la adicin de glucosa [que
es aplicado a los substratos con una proporcin equilibrada de carbono/oxgeno
(Stotzky, 1965)], lo que indica que los microorganismos aerbicos metabolizan la
adicin de glucosa. En contraste, los suelos arables enmendados con glucosa el
RQ es de 1.25, lo que sugiere que la glucosa adicionada es usada por los
microorganismos anaerbicos.
En los suelo arables sin enmienda de glucosa el RQ es de 0.72, indicando
que los microbios usan los materiales bajos en oxgeno [grasas, protenas <1.0
(Stotzky, 1965)]. En contraste los suelos de los bosques sin la adicin de glucosa
el RQ es de 1. 19, indicando alguna actividad de los microorganismos anaerbicos
en estos suelos (Theenhaus et al., 1997).
Por la respuesta de la biomasa microbiana, la glucosa tambin ha sido
usada como un indicador de la actividad microbiana (Vekemans et al., 1989). Tal
es el caso de Chenu, et al., (2001) que adicion glucosa a los suelos arenosos
como enmienda, y observ que se incrementa la cantidad de bacterias y hongos
dramticamente tanto entre las superficies como en la superficie de los agregados
mientras que en los suelos arcillosos, no se incrementa dentro de los agregados
de aqu que sea evidente el contrastante hbitat en los agregados del suelo.
Yang y Chang, (1998) evalan la actividad de los microorganismos en la
produccin de metano observando que este metabolito se incrementa con la
cantidad de arroz, abono verde, soca de maz, xilan, avicel y composta que se

63

adiciona al suelo, mientras que con la suplementacin de glucosa, sucrosa y la

urea se inhibe.
La actividad microbiana y la induccin de la respiracin de substratos se
encuentran positivamente correlacionadas con la productividad de las plantas. La
similaridad entre los patrones de la biomasa y la actividad microbiana sugiere que
de la productividad de las plantas se deriva la productividad microbiana o que la
limitacin de los recursos para cada una de estas dos comunidades co-vara
(Broughton y Gross, 2000).
De acuerdo con lo anterior los estudios de Keeling et al., (1998) demuestran
que en suelos tratados con enmiendas de composta combinada con glucosa o con
almidones, en un periodo de 12 meses las poblaciones de bacterias diazotrofas
incrementan en un 300% y la toma de nitrgeno por las plantas incrementa sobre
un 100% en los primeros dos meses, por lo que se concluye que la fijacin del
nitrgeno y la disponibilidad de N para la planta es estimulada por los tratamientos
de glucosa incluida en la composta, pero los mecanismos de estos procesos
requieren de investigaciones ms extensivas.
La anterior observacin es reforzada por los estudios de Stief, (2001) donde
observ que la adicin de fuentes de carbonolorgnico disueltos (glucosa,
metanol) generalmente incrementa el ndice del consumo anaerbico de nitrato e
intensifica la concentracin del nitrato. Las diferentes escalas de este incremento
se relacionan probablemente con la degradabilidad de los respectivos compuestos
y la composicin taxonmica de la comunidad microbiana implicada en los
diferentes regmenes de alimentacin.
Por otro lado, Kim et al., (1998) evalan la actividad microbiana con
respecto a la disponibilidad del fsforo, encontrando que la actividad ms elevada
de la fosfatasa alcalina y cida es alcanzada con los tratamientos con glucosa y
almidn. Aunque estos tratamientos no muestran una elevacin del fsforo
disponible en el suelo a largo plazo comparado con el control, es posible que se
deba a la incorporacin del P en la biomasa microbiana del suelo.
En los estudios de Strauss y Lamberti, (2000) realizados en los sistemas de
agua dulce, las enmiendas de carbono a partir de glucosa incrementan los ndices

64

de la respiracin bacteriana por 4 a 6 veces ms que en los controles, adems de

que decrece significantemente la nitrificacin e incrementa la actividad microbiana.
Lo que evidencia que la actividad microbiana limita el nitrgeno y al competir entre
s, las bacterias nitrificantes disminuyen por la menor disposicin de NH4+, con la
consiguiente reduccin del ndice de nitrificacin.
Con respecto a la proporcin en la que se estimula la biomasa microbiana
total con el uso de la glucosa como inductor del ndice de respiracin, se han
manejado algunos mtodos como los que inhiben del crecimiento de los hongos
junto con los inhibidores de las bacterias. Encontrndose que el efecto es
tpicamente <60% de la estimulacin de la respiracin por la adicin de glucosa
(Wardle y Parkinson 1990).
De acuerdo con West (1986), las dos valoraciones son necesarias cuando
el mtodo usado es la induccin del ndice de la respiracin, despus de la
inhibicin microbiana, e. g. que la proporcin de bacterias: hongos en el
componente inhibidor sensitivo de la biomasa es el mismo que en el inhibidor del
componente insensitivo y que los componentes de las bacterias y los hongos de la
biomasa microbiana tota l responden igualmente a la glucosa.
Las proporciones de bacterias y hongos en los suelos enmendados con
glucosa, son analizados por Schutter y Dick (2001) usando los datos de los cidos
grasoso fosfolpidos metil ster a travs del componente principal revelando que
las cantidades de hongos son mayores durante los primeros 21 das de
incubacin.
Lin y Brookes, (1999) determinaron con mayor exactitud las proporciones
de los hongos y las bacterias en los suelos considerando que estos
microorganismos pueden cambiar rpidamente su metabolismo debido a la
utilizacin de la glucosa como enmienda, despus de la fumigacin u otros
tratamientos biocidas. Las proporciones que encontraron en los suelos de potreros
(con el 24% de arcillas) fueron de 19 +/- 4.2% para las bacterias y para los hongos
el 82 +/- 4.0% del total de la biomasa mientras que en los prados con gramneas
(con 8% arcillas) la proporcin es de 25 +/- 1.2% para las bacterias y 76 +/- 4.5%
para la biomasa formada por los hongos.

65

Las funciones de la glucosa no solamente son las de proporcionar fuentes

de energa a los microorganismos, sino que esta puede servir como molcula
donadora de electrones, tal y como lo propone Finneran et al., (2002), en sus
estudios sobre microorganismos del U(VI) en los sedimentos de acuferos
colectados en pilas de fbricas. Ellos consideran que la adicin de acetato o
glucosa estimulan la remocin de uranio U(VI) por estimulacin de la actividad
microbiolgica, reduce los U(VI) ms eficientemente que otros donadores de
electrones tales como el lactato, benzoato, o formato, El U(VI) es removido
concurrentemente con la reduccin de Fe(III) y antes de la reduccin a sulfato.
Basado en el mismo principio de la donacin de electrones Chen et al.,
(2000) demuestran que el surfactante (Triton X-100) a bajas concentraciones
(0.024 o 0.09 CMC) inhibe los ndices de crecimiento de Mycobacterium sp o las
Pseudomonas sp sobre el antraceno como fuente de carbono. Recobrar los
ndices de crecimiento microbiano puede ser logrado por la dilucin de los
surfactantes, despus de la adicin de ms surfactantes dado un decrecimiento
inmediato en los ndices de crecimiento. La no inhibicin del Triton X-100 es
observada con la adicin de glucosa, facilitando que los surfactantes se adsorban
entre las superficies de las clulas y las partculas de antraceno.
Por lo que respecta a la glucosa y la glicina usadas como enmienda en la
biodegradacin de poly(3-hidroxibutirato-co-3-hidroxivalerato) (PHBN) juegan un
papel importante en la inhibicin y aceleracin de las diferentes fases
biodegradadoras y eventualmente aceleran la biodegradacin en la suspensin del
suelo (Song et. al., 2002).
Con respecto al uso de la glucosa de los canales de energa que entran a
las redes alimenticias las investigaciones realizadas por Nieminen y Setala, (2001)
demuestran que cuando se us la glucosa como plantilla de fuente de carbono no
se encontraron evidencias que soporten la hiptesis que un solo canal de energa
adicional puede estabilizar el flujo a travs de la red alimenticia, y aumentar la
descomposicin. Esto explica la elevada resiliencia del sistema con referencia a
los hongos exclusivamente, y por la redundancia de las especies, e. g. el hecho de

66

que los nemtodos que se alimentan de los hongos inducen cambios similares en
los hongos que en las bacterias.

67

III. MATERIALES Y MTODOS

3.1. Ubicacin del sitio experimental

El rea de estudio, se localiza en la planicie costera de Tecomn, Municipio

del Estado de Colima, tiene una superficie total de 80,120.7 ha, de las cuales
60,930 hectreas se dedican a la agricultura. De esta superficie 29,213 ha estn
bajo riego. La zona, tiene gran importancia econmica en el Estado y ha
presentado graves afecciones en los rendimientos agrcolas debido a los procesos
de degradacin de la salinidad (INEGI 1995).
El lugar de muestreo se localiza en el rancho "Chococo", a 20 km de la
carretera Tecomn a Cerro de Ortega. La localizacin geogrfica y caractersticas
climticas se retomaron del INEGI (1995), as como de la informacin recabada de
la Comisin Nacional del Agua mismos que se presentan en el cuadro 4.

Cuadro 5. Caractersticas geogrficas y climticas del sitio estudiado.

Indicadores
Longitud
Latitud
Altura
Temperatura
Evapotranspiracin
Precipitacin media anual
Uso del suelo
Unidades de suelo Fases
qumicas

El Chococo
1847'
10355
10 msnm
26.9 C
1785.4 mm
801.2 mm
Agrcola
Hplico
Salina/Sdica

El experimento se llev acabo en el Laboratorio de Fertilidad Biolgica de

Suelos del rea de Posgrado de la Universidad de Colima localizado en el km 40
de la carretera Colima-Manzanillo y en la Facultad de Ciencias Qumicas
localizado en el km 9 de la carretera Colima-Coquimatln.

68

3.1.1 Muestreo del suelo

Se tomaron 20 muestras con un peso promedio de 9 kg c/u, a una

profundidad de 0 a 20 cm, estas muestras fueron secadas al sol y tamizado con
malla de 2 mm y posteriormente fueron mezcladas hasta obtener una muestra
homognea.
En la experimentacin se midi el comportamiento de la estructura
poblacional bacteriana cada 4 semanas durante tres muestreos, determinado a
travs de su actividad metablica a travs de las pruebas Biolog que establecen
un patrn del uso de los substratos contenidos placas. Para compararla con las
caractersticas fisicoqumicas del suelo al inicio y al final de la fase experimental
que dur 12 semanas.

3.2. Composicin de los tratamientos

El diseo experimental consiste en 4 tratamientos (control, paja de maz,

glucosa, y paja de maz ms glucosa) se manejaron tres niveles de glucosa y dos
niveles de paja de maz con 3 repeticiones cada tratamiento, en un diseo
completamente aleatorio.
Para la preparacin de los tratamientos con paja de maz fue necesario
molerla en un molino marca Willey, nmero 4, usndose una malla de 1 mm para
mezclarse homogneamente con el suelo. Mientras que la glucosa se mezcl sin
diluir con el suelo seco.
Los tratamientos estudiados fueron los siguientes:
- Mezcla de suelo con 2 y 4% de paja.
- Mezcla de suelo con 2, 4 y 6% de glucosa
- Mezcla de suelo con las combinaciones de paja y glucosa anteriormente
mencionadas
- Un testigo al que no se le agreg enmienda.

69

Lo anterior dio como resultado 12 tratamientos, realizndose tres

repeticiones de cada uno de ellos.
El suelo de los tratamientos se deposit en columnas de PVC de 10 cm de
dimetro por 30 cm de altura, con un peso de 3.420 kg.
Las muestras para el anlisis bacteriolgico se tomaron desde la capa
superior del suelo hasta 15 cm de profundidad cada 4 semanas de acuerdo con la
tcnica propuesta por lvarez-Rogel et al. (1997).
Todas las columnas fueron humedecidas inicialmente al 80% de la
capacidad de campo y posteriormente la humedad se mantuvo al 50% de la
capacidad de campo. Las columnas se incubaron por 12 semanas bajo las
mismas condiciones de humedad y temperatura ambiente condicionadas por la
proteccin de un invernadero y al final del experimento se realizaron las pruebas
fsicas y qumicas de los tratamientos.

3.3. Anlisis de las caractersticas fsicas del suelo

a) Caractersticas granulomtricas
Las caractersticas granulomtricas que se determinaron fueron: porcentaje
de arena, limo arcilla (textura) empleando el mtodo de Boyoucos. Estas
caractersticas se evaluaron en el total de las muestras recolectadas y mezcladas
de donde se obtuvo el suelo para los distintos tratamientos.

b) Conductividad hidrulica
La conductividad hidrulica se determin por el mtodo de carga constante,
el cual consiste en ponerle a una columna de suelo con una carga constante de
agua y evaluar a travs del tiempo la infiltracin de esta colectando en un
recipiente de volumen conocido el gasto que se almacena con intervalos de
tiempo definidos, posteriormente se calcula la velocidad de flujo y aplicando la
ecuacin de Darcy se calcula la conductividad hidrulica.
El resultado de las pruebas qumicas del suelo se efectu despus del

70

lavado a tres volmenes.

Se corri una prueba de conductividad hidrulica para las muestras del
suelo original al inicio del experimento y al final (12 semanas despus) fue
determinada para todas las muestras de los tratamientos.

c) Capacidad de campo.
La capacidad de campo se determin en columnas de suelo de plstico
transparente de 30 cm de altura y 37 mm de dimetro interior, a las cuales se les
deposit 250 cm3 de suelo a las cuales se les adicionaron 35 ml de agua
destilada.
El porcentaje de humedad retenido por el suelo se hizo a las 24 horas de
adicionada el agua a las columnas de suelo. Tomando el tercio medio de la parte
humedecida, el cual se sec en estufa a 110 C hasta llevarlos a peso constante,
por diferencia de pesos se calcul el contenido de humedad correspondiente a la
capacidad de campo.

3.4. Anlisis qumicos

El contenido de materia orgnica del suelo se determin a travs del
mtodo propuesto por Walkley y Blanck (1934).
Para la realizacin de los anlisis qumicos del suelo, primero se hizo una
dilucin de suelo -agua (1:5) con 24 h de reposo con el fin de extraer los aniones y
cationes del suelo disueltos en la solucin y as poder determinar las siguientes
variables: pH, medido por el potencimetro (marca Conductronic), la conductividad
elctrica (CE) expresada en dS/m a 26 C se determin con un puente de CE
(Lectro Mh.-Meter Lab Line).
Las pruebas que se llevaron a cabo fueron las siguientes:

a) Determinacin del sodio y el potasio por flamometra.

El sodio se determin por espectrofotometra de flama, usndose una
longitud de onda en la lnea espectral de 589.0 y 589.6 nm. La tcnica se trabaj

71

mediante un espectrofotmetro Corning modelo 410.

Para la determinacin del potasio se us el mismo espectrofotmetro usado
para la determinacin del sodio solo que la longitud de onda en la lnea espectral
fue de 766.4 nm.
El estndar de concentracin del Na+ con la cual se elabor la curva de
calibracin

entre

0.230

hasta

19.017

mmol/L

con

una

lectura

en

el

espectrofotmetro entre 0.2 hasta 7.9 respectivamente. Mientras que el estndar

para la medicin del K+ iba de 0.0113 hasta 4.52 mmol/L con una lectura en el
espectrofotmetro entre 0.1 hasta 8.2 respectivamente.

b) Determinacin del calcio + magnesio por titulometra de EDTA.

El calcio y el magnesio se determinaron por medio de la titulacin con
versenato. El contenido de carbonatos y bicarbonatos fue determinado por medio
de titulacin del cido sulfrico, mientras que los cloruros se determinaron usando
la titulacin con nitrato de plata. Todos estos fueron realizados basndose en la
metodologa descrita por Richards (1954).
Los anlisis anteriores se determinaron en el laboratorio de Fertilidad
Biolgica del suelo del edificio de posgrado de la Facultad de Ciencias Biolgicas
y Agropecuarias de la Universidad de Colima.

c) determinacin de intercambio catinico

La determinacin de la capacidad de intercambio de cationes se realiz por
el mtodo de Polemio y Rhoades (1977).

d) Determinacin de los carbonatos y bicarbonatos.

Estas pruebas se llevaron acabo por titulacin con cido sulfrico al 0.05 N,
usando como indicadores la fenolftaleina y el anaranjado de metilo.

e) Determinacin de cloruros
Los cloruros se determinaron por titulacin con nitrato de plata, despus de
la titulacin de los carbonatos y bicarbonatos agregndosele una gota de cromato

72

de potasio para 5 ml de alcuota de la muestra de las soluciones del suelo 1:5.

Despus se titula con nitrato de plata al 0.05 N hasta la obtencin de rojo
permanente.

e) Determinacin de sulfatos
Los sulfatos se determinaron por turbidimeta usando una solucin
estabilizadora compuesta por glicerina, cido clorhdrico, alcohol isoproplico,
cloruro de bario y agua destilada.
La solucin patrn se elabor con K2SO4 para determinar la curva de
lectura y relacionarla con las cantidades de sulfatos contenidos en las muestras.
Los anlisis se determinaron por medio de la absorbancia con un
espectrofotmetro (Marca Spectronic 20).

3.4. Pruebas microbiolgicas.

Para determinar la estructura de la comunidad bacteriana, se usaron las
pruebas metablicas que establecen patrones del uso de fuentes de carbono
(sistema Biolog; Pepper et al., 1995) como a continuacin se describe:

a) Procedimientos para la extraccin del paquete celular del suelo.

Se prepararon matraces de 500 ml con 10 g de suelo fresco a la capacidad
de campo en la que se encuentre al momento de tomar la muestra y 90 ml de
solucin Ringer extractora compuesta por las siguientes concentraciones de sales
por litro de solucin segn Hitzi (1997):
Tipo de sal

concentracin

NaCI

2.05

KCI

1.05

CaCl2

0.83

KH2PO4

0.48

MgSO4.7H2 O

0.87

La solucin extractora se esteriliz en autoclave por 20 minutos a una

presin constante de 20 Psi.

73

Toda la cristalera despus de lavarla fue enjuagada con agua destilada

para evitar el dao de las clulas por los posibles residuos de jabn, adems de
esterilizarse junto con la solucin extractora.
Las muestras debidamente preparadas en los matraces, se agitaron a 140
rpm a temperatura ambiente por 1 h y despus se centrifugaron a 700g por 10
min. El sobrenadante (10 ml) se removi por junto y fue reemplazado con solucin
de cloruro de sodio al 0.85% (10 ml). La centrifugacin y la remocin del
sobrenadante se repiten dos veces, dando treinta ml de sobrenadante junto.
El sobrenadante recolectado se centrifug a 700g por 10 minutos para
remover algn remanente de suelo. Despus de esta centrifugacin el
sobrenadante obtenido se centrifug dos veces (8000g/10 min) con 30 mi de agua
estril desionizada.
En cada uno de los centrifugados se obtiene solos los comprimidos del
paquete celular que queda en el fondo, los cuales son resuspendidos de nuevo
con una solucin salina de cloruro de sodio al 0.85% (p/v) para purificar el paquete
celular, de tal manera que no queden residuos que puedan contener substratos y
contaminar las placas Biolog (Staddon y Trevor, 1998).
Despus de extrado y purificado el paquete celular se suspendi en agua
desionizada mediante agitacin de los tubos vortex, y se midi la absorbancia con
un espectrofotmetro a = 540 nm. Posteriormente se ajust la densidad del
inculo con una absorbancia de 0.182-0.212 con la siguiente frmula:

20-10.0200 (absorbancia ptima de lectura)

Eq. 20-1 ----------------------------------------------------------Lectura de absorbancia de la muestra

x mL de la muestra
= -----------------------------20 mL

Donde x es el volumen de suspensin necesario

20-x = mL de la solucin salina a ser adicionada sobre el volumen para dar
la densidad ptica requerida.
b) Inoculacin de las placas BIOLOGTM
Para la inoculacin de las placas Biolog se us una micropipeta graduada a

74

100 l para cada una de las 96 pocilla contenidas en las placas (Derry, 1998).
Antes de inocular las placas se marcaron con el nmero de grupo y la fecha
correspondientes.
Las placas ya inoculadas se incubaron a 30 C durante 120 horas.
Los registros de los resultados, se efectuaron de manera visual para cada
una de las 96 pocillas de las placas, usando un formato cuadriculado en el cual
apareca en el mismo orden, el nombre y localizacin de cada uno de los
substratos contenidos en las pocillas.
Cada fondo de la pocilla que reaccionaba al tinte de tetrazolium,
transformndolo al formzan, apareca de color prpura en la placa lo cual se
consider como positivo.

Los datos con los que se registraron las placas fueron las siguientes:
Fecha:
Hora:
Tipo de placa:
Tipo de medio:
Placa #:
Nombre del filtrado:
Nmero de filtrado:
Observaciones:
Los signos usados para la identificacin de los resultados en las tarjetas
fueron:

XX = Positivo,

B = lnea bordeada,

.. = negativo

Las reacciones se observaron cada 24 horas, nmero de pocillas positivas

(120 horas).

3.5. Diseo estadstico

Para establecer las comparaciones entre los tratamientos de las pruebas
fisicoqumicas se hizo una comparacin de medias por medio de la prueba de

75

Tukey, el anlisis de varianza se us para observar la homogeneidad de las

muestras de los tratamientos en las pruebas biolgicas, mientras que para
determinar diversidad funcional se manej el ndice de diversidad Shannon (GreigSmith, 1983; Magurran, 1988), el ndice de uniformidad (Hill, 2000) se efectu para
medir la distribucin del cons umo de los substratos mientras que para establecer
las diferencias metablicas de las poblaciones se manej la matriz de correlacin
de Jacard basado en los grupos de substratos.

3.5.1. Anlisis de varianza.

Para la presente investigacin se dise en hoja de clculo Excel el
programa para el anlisis de varianza, tomando en cuenta los datos de los
resultados de los doce tratamientos con sus tres rplicas basndose en los
siguientes clculos:
Se dispuso de los datos de las repeticiones de cada uno de los
tratamientos, considerando las repeticiones como el nmero de observaciones
(Yij) donde la observacin es la j-sima bajo el tratamiento i = 1, 2,.., t. y j = 1, 2,
., r. los totales de los tratamientos requieren un subndice y el total para el
tratamiento i-simo puede denotarse Yi, donde el punto indicaba que todas las
observaciones para el tratamiento i-simo se suma para obtener el total. Las letras
t y r se usaron para designar el nmero de los tratamientos y el nmero de
repeticiones de cada tratamiento; de aqu que t = 12 y r = 3 respectivamente.
Para cada tratamiento se obtuvieron simultneamente Yi j Y 2ij por lo tanto:
i Yi = Y.. y ( j Y 2ij) = jj Y 2ij

ec 1

Para obtener el factor de correccin FC de la ecuacin 1 y la suma de

cuadrados total (ajustada para la media) de la ecuacin 2. El factor de correccin
es el cuadrado de la suma de todas las observaciones dividido por su nmero,
como se plantea en la siguiente frmula:

C = Yi/rt = ( ij Yij)2
rt

76

ec 2

El total de la suma de los cuadrados es como sigue

SC = ij Y2ij C

ec3

La suma de los cuadrados se atribuye a la variable de clasificacin, esto es,

a los tratamientos, que suelen llamarse suma de cuadrados entre los grupos o
suma de cuadrados de los tratamientos, que se calcul con la siguiente frmula:
SC Error = ( j Y2ij -Y2i )
r

ec 6

Los valores calculados de la variacin (F) se obtuvieron dividiendo el

cuadrado medio de los tratamientos por el cuadrado medio del error, esto es F =
cuadrados medios entre los tratamientos entre los cuadrados medios dentro de los
tratamientos.
El error estndar de la media de tratamientos y el de una diferencia entre
medias de tratamientos se calcularon con las ecuaciones 7 y 8 respectivamente
SY~ =

rS

~ =
SY~ - Yi

Sr

ec 7

ec 8

Cada una de estas ecuaciones se interpret y se aplic en hojas de clculo

Excel para obtener un programa en donde procesar todos los datos de las pruebas
fisicoqumicas de los tratamientos.
Las diferencias mnimas significantes
El criterio de prueba para examinar directamente las diferencias entre las
medias (dms), se estableci mediante la aplicacin de las siguientes formulas:
~ - ~
dms = T /2 SYI
Yi

dms = T /2 S

2(F)
r

ec9

77

donde S es la raz cuadrada de la varianza del error combinada. Como las

dms se calcula una vez entre las medias y se requiere de la varianza del error
combinada, su uso es una comodidad en relacin con la ejecucin de pruebas t
individuales.

3.5.2. Determinacin del ndice de disimilaridad de Jaccard.

Como mtodo adicional para determinar la correlacin existente entre las

poblaciones de cada uno de los tratamientos se utiliz la matriz de correlacin de
Jaccard (Sneath y Sokal, 1973), que permite el estudio de la diversidad funcional
de las poblaciones bacterianas, que se da a travs del agrupamiento logrado por
el uso del patrn de consumo de substratos, en las MicroPlacas Biolog actuando
como marcadores metablicos.
Los marcadores pueden ser cualquier caracterstica que nos permita
estudiar la diversidad, para el presente caso se utilizaron las respuestas al
consumo de los substratos por las poblaciones de bacterias Gram- presentes en
los tratamientos, o patrn de uso de los substratos.
El objetivo de los mtodos de diversidad es, inferir el parecido funcional o
relacin entre los grupos estudiados.
Estos objetivos muchas de las veces se traslapan y confunden, pero en
general podemos pensar que si se est trabajando con individuos representativos
de especies muy diferentes, entonces el objetivo ser filogentico, que se refiere a
la reconstruccin del rbol evolutivo de los individuos. Pero si se est trabajando
con poblaciones de la misma especie o individuos representativos de las
poblaciones de la misma especie, entonces en la mayora de los casos el objetivo
ser la caracterizacin de las poblaciones y el estudio de la variabilidad dentro de
ellas.
Para el presente estudio se utilizaron los carbohidratos, los cidos
carboxlicos y los aminocidos, por ser los que mayor diferenciacin metablica
presentaron.
La siguiente tabla resume las aplicaciones de los mtodos:

78

Aplicaciones:
P = Poblaciones,
M = Muestras representativas.
DE = dentro de especies, EEM = Entre especies muy relacionadas, EEP
entre especies poco relacionadas.
T = La cantidad promedio de substratos utilizados por la muestra.
P = se aplica a Poblaciones
M = se refiere al nmero de muestras representativas.
DL = se define la disimilaridad dentro de los lotes.
Se define solo las relaciones existentes entre los grupos de substratos
(EEM), y las muestras que menos se relacionan (EEP).
Las observaciones de las matrices de correlacin, son tiles porque estas
pueden puntualizar las observaciones entre las variables que pueden mostrar las
coherencias del juego de datos y puede evidenciar la participacin individual de
los parmetros a evaluar (Helena et al., 2000).
Al comparar un par de variables de dos poblaciones, el inters es conocer
qu tan similares son? O, equivalentemente, qu tan diferentes (disimilares)
son?. Es necesario dar respuesta numrica y existen varias formas de hacerlo. Si
se consideran dos poblaciones, es decir i vs. j a las cuales se les determina su
disimilaridad con respecto las variables, en la siguiente tabla:

Comparando los patrones para un solo substrato en las poblaciones i vs. j.

Uso
Poblacin i
Totales

0
A
C
A+C

Poblacin j
1
B
D
B+D

A+B
C+D
N= A+ B+ C+D

En donde cada literal es utilizada para denotar el nmero total de cada

caso; es decir, "A" representa el nmero de variables que en la poblacin "i" que
no aparecen (0) que en la poblacin "j" tampoco aparece; etc. por ejemplo, si se

79

supone que para dos poblaciones se tienen resultados de un patrn de 15

variables como se muestra:
Pobl.
I
j

1
0
1

2
1
1

3
1
0

4
0
0

5
1
1

6
0

7
0
1

8
1
1

9
1
1

10
1
0

11
0
1

12
1
0

13
0
1

14
0
1

15
1
1

Esto resultara en la siguiente tabla:

Comparando los patrones para un solo substrato en las
poblaciones i vs. J.
Uso
Poblacin i

0
A=2
C=3
5

0
1

Totales

Poblacin j
1
B=5
D=5
B10

7
8
15

Es claro que las "similaridades" entr las poblaciones estn dadas por A y
D, mientras que las diferencias o "disimilaridade estn dadas por B y C. Esta
informacin se puede resumir en un coeficiente de similaridad o disimilaridad de
diferentes maneras. Con respecto al coeficiente de Jaccard.

SJ = D / ( B + C + D ) = 0.3846
Este coeficiente vara entre 0 y 1. Se puede definir los correspondientes
coeficientes de disimilaridad como D = 1 S, con lo que tenemos:

D J = 1 SJ = ( B + C ) / ( A + B + C + D )
Considerando un caso de tres poblaciones en donde se analizan 15
variables preestablecidas, nos preguntamos qu tan diferentes son?
Pobl.
i
j
K

1
1
1
0

2
0
1

3
1
0
0

4
0
1
1

5
1
0
0

6
1
0
0

7
1
0
0

8
1
0
0

9
1
0
0

10
1
0
0

11
1
0
0

12
1
0
0

13
1
0
0

14
1
0
0

15
1
0
0

La siguiente tabla presenta la matriz de disimilaridad de las tres

poblaciones.
80

Disimilaridad de Jaccard
dj
j
i
0.9285714
j
0.0000000

k
1.000000
0.666667

Primero notemos que todas las variables de las poblaciones i vs k son

diferentes; por lo tanto da una disimilaridad entre las dos poblaciones de 1.
Las poblaciones i vs j difieren en las variables 3 a 15; 13 de 15 son
diferentes y el coeficiente de Jaccard es de 0.9285714 mientras que para las
poblaciones j y k el coeficiente es de 0. 666667.

3.5.3. Diseo estadstico para medir el ndice de diversidad ShannonWeaver.

La diversidad, es formada a travs de dos componentes: primero por la
representatividad del nmero de las especies presentes o la riqueza normalmente
denominada; y la abundancia relativa de la especie o la representacin de estas,
llamada en general regularidad, equidad o uniformidad. El ndice H', tambin
denominado de informacin de Shanno n, Shannon-Weaver, y de ShannonWiener, contempla esos dos componentes.
Para tales mediciones de diversidad se considera como cero cuando slo
se tiene una especie y, cuando hay 2 o ms especies, es mxima si todas las
especies tienen el mismo nmero de individuos (es decir, cuando las proporciones
de todas las especies son iguales, p1 = p2 =.... = ps ). El valor de H se ha calculado
en muchos estudios ecolgicos, los cuales muestran que H generalmente vara
entre 1.5 y 3.5 y que raramente pasa de 4.5 (Magurran, 1988).
El valor de esta expresin depende de N, el tamao de la poblacin, lo que
impide comparar directamente las probabilidades calculadas para dos entidades
con diferentes poblaciones. Para hacer esto, calculamos el promedio geomtrico
de esta probabilidad y se obtiene:
[(p1)n1]1/N * [(p2)n2]1/N * [(p3)n3]1/N

81

Las reglas de operacin de potencias indican que si un nmero (z), elevado

a la potencia (a) es nuevamente elevado a la potencia (b), el resultado es el
nmero (z) elevado a la multiplicacin de a*b. Entonces, podemos re-escribir la
ecuacin anterior como:
(p1)n1/N * (p2 )n2/N * (p3)n3/N
Aunque anteriormente se vio que: (n1/N) = p1; (n2/N) = p2 y (n3/N) = p3, por
lo que re-escribimos:
(p1)p1 * (p2)p2 * (p3)p3
Para evitar los exponentes y productos, tomamos el logaritmo (natural) y
obtenemos:

p1*log p1 + p2*log p2 + p 3*log p3

Si llamamos Q al resultado de esta suma y utilizamos el signo de sumatoria,

obtenemos:
Q = pi log pi , con i = 1,2,3.
Ahora se puede dar una interpretacin a la frmula H = - pi log pi. El ndice
de diversidad Shannon mide (el recproco de) la probabilidad de seleccionar todas
las especies en la proporcin con que existen en la poblacin, es decir, mide la
probabilidad de que una muestra seleccionada al azar de una poblacin
infinitamente grande contenga exactamente n1 individuos de especie 1, n2 de
especie 2,.... y ns individuos de la especie S (Greig-Smith, 1983; Hill, 2000).
As el logaritmo de la abundancia de una especie en una comunidad
depende del logaritmo de la abundancia inicial y de las variaciones en su tasa real
de crecimiento a lo largo del tiempo.

82

Si una especie se encuentra en equilibrio con su medio, las tasas reales de

crecimiento oscilarn aleatoriamente, a veces incrementando la poblacin cuando
ocurren periodos favorables y a veces disminuyndola cuando ocurren periodos
desfavorables.
De acuerdo con el Teorema del Lmite Central (citado por Hill, 2000)
(Teorema que demuestra que todas las variables estadsticas aditivas tienen una
distribucin normal de Gauss), el logaritmo del nmero de individuos tendr una
variacin Gaussiana a lo largo del tiempo.
Si la distribucin del logaritmo de las abundancias de una especie vara de
forma Gaussiana a lo largo del tiempo, entonces, en un tiempo dado, la
distribucin del logaritmo de las abundancias de varias especies en un slo tiempo
y lugar tambin debe variar normalmente. Es decir, que en un instante dado habr
algunas especies que se presenten en grandes abundancias y otras que lo hagan
en cantidades mucho ms bajas, pero el logaritmo de sus abundancias tendr una
distribucin normal.
Todos los clculos propuestos en el mtodo descrito anterior fue
interpretado y programado en hojas de clculo Excel para cargar los datos
generados en las placas Biolog de cada uno de los tratamientos.

3.5.4. ndices de uniformidad Shannon-Weaver.

El ndice de uniformidad se calcul con los datos obtenidos del ndice de

diversidad Shannon tomando en cuenta la siguiente frmula:

E= H/1n S
Donde:
H= ndice Shannon de diversidad
S = nmero de fuentes con color desarrollado

83

IV. RESULTADOS

Los resultados obtenidos en el suelo original utilizado fueron: pH (relacin

suelo agua 1:5) de 9.3, conductividad elctrica de 1.44 dS/m-1, capacidad de
campo 22.4 % y 0.91 % de materia orgnica (MO). La textura de este suelo es
formada por 52.7% arena, 31.9 limo y 15.4 arcilla.

4.1. Propiedades qumicas en el suelo despus de la aplicacin de las

enmiendas e incubacin.

4.1.1. pH y conductividad elctrica.

Todos los tratamientos a los que se les agreg solo paja de maz como
enmienda no presentaron diferencias significativas (P<0.05) en el pH del suelo con
respecto al tratamiento control (T1) as como los tratamientos T4, T7 y T10 que
tenan como caracterstica contener 20 g/kg de suelo de glucosa, ya sea esta sola
o combinada con paja.
Los tratamientos enmendados con los ms altos contenido de glucosa ya
sean solos o combinados con paja mostraron un pH ms cercano a la neutralidad
fueron T6, T9 y T12 con pH de 7.6, 7.4 y 7.4 respectivamente.
El decrecimiento del pH despus de la incubacin fue acompaado por una
elevada concentracin de electrolitos en la solucin del suelo de todos los
tratamientos, destacando los tratamientos T6, T9 y T12 por su elevada
conductividad elctrica (CE) mismos que se correlacionan con el menor pH
(Cuadro 6).
En todos los tratamientos existi una estrecha relacin entre el incremento
de las proporciones de glucosa adicionada como enmienda y el aumento en la CE,
observndose adems que no se presentaron diferencias significativas (P<0.05)
con respecto al suelo control (T1), los tratamientos que contenan solo paja y los
que contenan concentraciones bajas de glucosa independientemente que estos
se encontraran combinados con paja (T2 T3, T4, T7 y T10), que adems present el
pH ms elevado con respecto a los tratamientos (Cuadro 6).

84

Cuadro 6. Caractersticas qumicas generales de los tratamientos incubados a 90 das.

Antes del la vado
Trat.
pH

CE

Despus del lavado

pH

dSm-1
T0
9.3
1.44
9.3
T1
9.1a
1.57a
9.8a
T2
8.8a
1.83a
8.7b
T3
8.4a
2.03a
9.4b
T4
8.0b
2.77a
8.9b
T5
7.7b
3.47b
7.7c
T6
3.83b
7.6b
7.6c
T7
8.2b
2.07a
8.7b
T8
7.7b
3.33b
8.8b
T9
7.4c
4.70c
8.4b
T10
8.0b
2.33a
8.7b
T11
7.8b
3.03b
8.1 c
T12
7.4c
3.83b
8.3b
Nota: las mismas letras no tienen diferencias significativas

CE
dSm-1
ND
0.57
0.40b
0.40b
0.33c
0.30c
0.30c
0.43b
0.40b
0.30c
0.47
0.40c
0.37c

Despus del lavado el suelo (tres volmenes) se increment el pH en todos

los tratamientos, adems de observarse diferencias significativas (P<0.05) entre el
tratamiento control (T1) con un pH de 9.8, y todos los dems tratamientos, siendo
los de menor pH T5, T6, T9 , T11, y T12 que a pesar de incrementar el pH por efecto
del lavado, este no fue tan elevado como en los dems, adems de coincidir con
los tratamientos que tuvieron el pH ms bajo antes del lavado del suelo.
La mayor concentracin de electrolitos despus del lavado del suelo se
present en el tratamiento control y T10 que no presentaron diferencias significativa
(P<0.05) entre ellos (0.57 y 0.47 dSm-1 respectivamente) mientras que los dems
si presentaron diferencias significativas (P<0.05) con concentraciones electrolticas
menores (Cuadro 6).

4.1.2. Concentracin de los aniones

a). Cloruros
Despus de la incubacin el tratamiento con la ms alta concentracin de
glucosa (T6) y todos los tratamientos donde se combinaron las enmiendas de paja
con glucosa no mostraron diferencias significativas con respecto al tratamiento
control (T1) que fue el que present la ms alta concentracin de cloruros despus
de la incubacin (5.17 meq/100g).
85

Se observ que las concentraciones de los cloruros en los suelos

enmendados solo con paja (T2 y T3) y en los tratamientos con concentraciones de
glucosa de 20 y 40 glkg de suelo (T4 y T5), disminuyeron las concentraciones de
cloruros significativamente (P<0.05), mientras que en los tratamientos combinados
no se presentan diferencias significativas con respecto al suelo control (Cuadro 7).
Despus del lavado del suelo las concentraciones de los cloruros en las
soluciones de los suelos fueron mayores que antes del lavado, siendo T1 y T12 los
que mayor concentracin presentaron tanto antes como despus del lavado del
suelo. (Cuadros 7 y 8).

b). Bicarbonatos
Despus

de

la

incubacin

las

concentraciones

de

bicarbonatos

presentaron diferencias significativas (P<0.05) entre el tratamiento control (0.0

meq/100g) y todos los tratamientos con concentraciones de glucosa mayores a los
40 g/kg de suelo, presentndose los mayores incrementos en T6, T9 y T12 (6.68,
8.59 y 7.34 meq/100g respectivamente). En los tratamientos con paja y los
tratamientos con 20 g/kg de glucosa ya sea que esta estuviera sola o combinada
con paja no se presentaron diferencias significativas con respecto al tratamiento
control (T1) (Cuadr 7).
Bajo el proceso del lavado del suelo despus de la incubacin no se
presentaron diferencias significativas (P<0.05) entre el tratamiento control (T1) y
los tratamientos T2 y T5 . Aunque se observ que en todos los suelos tratados con
enmiendas, disminuyeron los bicarbonatos por el efecto de este proceso.
Por otro lado, se observ que los tratamientos T6, T9 y T12 fueron los que
mayor cantidad de bicarbonatos retuvieron despus del lavado, lo que coincide de
nuevo con los tratamientos que contenan mayores concentraciones glucosa
utilizadas como enmienda (Cuadro 8).

86

Cuadro 7. Concentracin total de los aniones (meq/100g) en los tratamientos del

suelo incubado.
CI-

CO32-

HCO3

T0

7.20

ND

ND

SO42mg/L
ND

T1

5.17a

1.65a

0.00a

38.7a

T2
T3

3.25b
1.83b

1.55a
1.35a

0.80a
0.75a

63.3c
62.0c

T4
T5
T6

2.83b
2.50b
3.75a

1.20a
1.25a
1.20a

1.88a
6.38b
6.68b

46.2a
46.0a
46.3a

T7
T8
T9

4.75a
4.78a
5.08a

0.90a
0.23b
0.20b

3.00a
5.96b
8.59c

46.7b
48.0b
50.3b

T 10
T 11
T 12

5.22a
5.00a
5.30a

1.00a
0.23b
0.38b

3.08a
5.56b
7.34b

48.7b
49.3b
50.7b

Tratamientos

Nota: las mismas letras no tienen diferencias significativas

Cuadro 8. Concentracin total de los aniones (meq/100g) en los tratamientos del suelo
incubado y lavados.
Tratamientos

Cl-

CO3-

HCO3-

T0

7.20

ND

ND

SO42mg/L
ND

T1

13.8a

1.80a

0.00a

19.3a

T2
T3

10.7c
12.1 b

1.35a
0.80b

0.60a
1.61c

4.0c
5.0c

T4
T5
T6

12.6a
12.0b
12.3b

0.98b
0.75b
0.45c

0.68b
0.45a
1.20b

7.0c
6.0c
5.3c

T7
T8
T9

13.0a
12.1 b
12.8a

0.90b
0.23c
0.23c

0.68b
1.39c
1.20b

8.7b
7.3c
5.0c

T 10
T 11
T 12

12.7a
12.5a
13.8a

0.63b
0.53b
0.45c

0.79b
1.16b
1.28b

7.7c
7.0c
5.7c

Nota: las mismas letras no tienen diferencias significativas

87

c). Carbonatos
Con respecto a los carbonatos despus de la incubacin, se observ que
estos disminuyen en algunos de los tratamientos donde se combin la paja con
concentraciones de glucosa superiores a 40 g/kg (T8, T9, T11 y T12) mientras que en
todos los dems tratamientos no se observaron diferencias significativas entre si
(P<0.05) (Cuadro 7).
Despus del lavado del suelo los carbonatos en la solucin del suelo permanecen
ms elevados en el grupo control (T1) y en el tratamiento donde se adicion paja
en proporciones de 20 g/kg (T2) mismos que no presentan diferencias
significativas entre s, adems de que las concentraciones de carbonatos en T1
son ms elevadas despus del lavado del suelo, mientras que en todos los dems
tratamientos las disminuciones son evidentemente significativas (P<0.05).

d). Sulfatos
El efecto de los tratamientos en el incremento de la concentracin de los
sulfatos despus de la incubacin fue considerablemente mayor cuando se usaron
enmiendas de paja con respecto a los dems tratamientos, mientras que en los
tratamientos control y los que contenan solo glucosa como enmienda no
mostraron diferencias significativas entre s (Cuadro 7).
Con respecto a las concentraciones de sulfatos por el efecto del lavado del
suelo, se observa que estos disminuyen en todos los tratamientos, aunque las
mayores concentraciones se presentaron en el tratamiento control, que fue
diferente significativamente a los dems tratamientos, los cuales mantuvieron una
proporcin dos a tres veces menor que el tratamiento control (Cuadro 8).

4.1.3. Actividad de los cationes

a) Calcio y Magnesio
Sobre el efecto de los tratamientos en las concentraciones del Ca2+
despus del periodo de incubacin, se observ que no existen diferencias
significativas (P<0.05) entre el tratamiento control, comparado contra los

88

tratamientos donde se usaron enmiendas de paja sola y en los tratamientos T4, T7,
T10, y T11 (Cuadro 9).
El comportamiento del Mg2+ despus de la incubacin fue igual que el del
Ca2+, en cuanto a la significancia (P<0.05) entre los tratamientos, aunque las
concentraciones de este catin fueron menores que las del calcio (Cuadro 9).

Cuadro 9. Concentracin de los cationes solubles (meq/100g) en los tratamientos

despus de la incubacin.
Ca2+
5.10

Mg 2+
4.6

Na+
8.9

K+
0.29

T1

3.02a

1.75a

7.63a

0.70a

T2
T3

3.18a
3.43a

1.46a
1.43a

7.73a
7.78a

0.80a
1.00a

T4
T5
T6

4.10a
8.74b
8.49b

2.38a
4.90b
5.41 b

9.15b
9.41 b
8.29a

0.72a
0.70a
0.75a

T7
T8
T9

3.96a
8.90b
13.8b

2.53a
5.12b
8.65c

6.36a
6.24a
6.71a

0.90a
1.20a
1.30a

T 10
T 11
T 12

4.78a
4.90b
8.99b

2.66a
3.76b
7.03b

7.96a
8.29a
8.75a

1.30a
1.50b
2.20b

Tratamientos
T0

Nota: las mismas letras no tienen diferencias significativas

Tanto el Ca2+ como Mg2+ de las soluciones del suelo despus del lavado,
presenta una mayor concentracin en los tratamientos que contenan glucosa a
concentraciones mayores de 40 g/kg mientras que los dems tratamientos no
mostraron diferencias significativas (P<0.05) con respecto al tratamiento control
(Cuadro 9).
Despus del lavado del suelo se observa que las cantidades tanto del Mg2+
como del Ca2+ disminuyen, pero que adems las diferencias existentes entre estos
dos cationes antes del lavado del suelo son ms equilibradas.

89

b) Potasio
Las concentraciones del potasio por efecto de los tratamientos despus de
la incubacin, solo presentan diferencias significativas (P<0.05) los tratamientos
T11 y T12 con respecto a los dems tratamientos (Cuadro 9).
En las concentraciones del potasio despus del lavado del suelo se observ
que existen diferencias significativas (P<0.05) en T3, T8 , T10, T11 y T12 los cuales
presentaron una mayor concentracin con respecto a los dems tratamientos
(Cuadro 10).
Cuadro 10. Concentracin de los cationes solubles (meq/100g) en los tratamientos del
suelo despus del lavado.
Tratamientos
T0

Ca 21
5.1

Mg2+
4.6

Na+
8.9

K+
0.29

T1

2.0a

2.6a

1.6a

0.16a

T2
T3

2.2a
2.3a

2.1 a
2.2a

1.4a
1.5a

0.29a
0.36b

T4
T5
T6

2.3a
2.2a
2.1a

2.3a
2.3a
1.1c

1.1a
1.0a
0.9b

0.16a
0.16a
0.20a

T7
T8
T9

2.4a
2.6a
2.9b

2.0b
2.6a
2.1a

1.5a
0.6b
0.3b

0.23a
0.45b
0.32a

T 10
T 11
T 12

2.7a
3.7c
3.7c

2.3a
2.0b
2.6a

1.4a
1.2a
0.3b

0.34b
0.37b
0.55b

Nota: las mismas letras no tienen diferencias significativas

c) Sodio
Se observ que las concentraciones del sodio por efecto de los
tratamientos despus de la incubacin solo presentan diferencias significativas
(P<0.05) los tratamientos T4 y T5 con concentraciones mayores al tratamiento
control (9.15 y 9.45 respectivamente contra 7.63 meq/100g de suelo para T1)
(Cuadro 9).
El efecto del lavado del suelo para el Na + de los tratamientos fue
significativo (P<0.05) con respecto al tratamiento control en los tratamientos T5, T 8,

90

T9 y T12, los cuales presentan las menores concentraciones en las soluciones del
suelo (Cuadro 10).

c) Relacin de Adsorcin del Sodio (RAS).

Con respecto a la RAS de los tratamientos despus de la incubacin se
observ que solo existen diferencias significativas (P<0.05) entre el tratamiento
control y los tratamientos que contenan enmiendas de glucosa en las tres
concentraciones, las cuales mostraron una menor RAS. (Cuadro 11).
Cuadro 11. Caractersticas qumicas generales de los tratamientos del suelo despus
de la incubacin.
Tratamientos

RAS

PSI

T0

ND

ND

CIC
meq/L
ND

T1

5.8a

7.42a

58.0a

T2
T3

5.6a
6.0a

6.91a
7.69a

63.0a
70.3b

T4
T5
T6

5.1b
5.4b
5.5b

6.33b
6.83b
6.80b

61.0a
63.7a
64.3a

T7
T8
T9

5.9a
5.8a
5.8a

7.45a
7.40a
7.40a

66.7b
68.3b
78.7c

T 10
T 11
T 12

5.7a
5.7a
5.8a

7.25a
7.25a
7.40a

66.7b
69.3b
80.3c

Nota: las mismas letras no tienen diferencias significativas

Despus del lavado de los suelos las RAS de todos los tratamientos no
mostraron diferencias significativas (P<0.05) observndose un rango en la RAS de
0.9 a 1.3, observndose el mismo comportamiento en o
l s bajos porcentajes del
sodio intercambiable que fueron de 0.03 a hasta 0.73. (Cuadro 12).

91

Cuadro 12. Caractersticas qumicas generales de los tratamientos del suelo despus
de la incubacin y lavado del suelo.
Tratamientos

RAS

PSI

T0

ND

ND

CIC
meq/L
ND

T1

1.2a

0.52a

42.3a

T2
T3

1.3a
1.3a

0.73a
0.65a

50.7a
58.8a

T4
T5
T6

1.1a
1.0a
0.9a

0.38a
0.23a
0.08a

41.3a
41.7a
43.0a

T7
T8
T9

1.0a
0.9a
0.9a

0.17a
0.08a
0.03a

53.3a
54.3a
56.0a

T 10
T 11
T 12

1.1a
1.1a
0.9a

0.03a
0.46a
0.30a

57.5a
62.0a
63.0a

Nota: las mismas letras no tienen diferencias significativas

d) Capacidad de Intercambio Catinico (CIC)

Con respecto a los suelos antes del lavado la capacidad de intercambio
catinico en T1 fue el que present la menor capacidad de intercambio catinico
(CIC) (58.0 meq/L). Observndose diferencias significativas (P<0.05) con la
adicin de las enmiendas orgnicas solo cuando se adicion paja en
concentraciones de 40 g/kg de suelo y en los tratamientos donde se combin la
paja con la glucosa en las distintas proporciones.
El incremento de la CIC en los tratamientos con paja es mayor que el
obtenido al adicionar glucosa en proporciones similares, observndose que el
incremento de las enmiendas combinadas se encuentra relacionado con las
concentraciones de paja adicionada ms que en la cantidad de glucosa adicionada
(Cuadro 11).

92

Despus del lavado de los suelos se observa que los arrastres de los
solutos disminuyen la CIC, no existiendo diferencias significativas en ninguno de
los tratamientos (Cuadro 12).

4.1.4. Materia orgnica

Las concentraciones de MO antes de iniciar la incubacin se encontraban
en un rango de 0.9 para el tratamiento control, hasta 10.8 meq/100g de suelo
representado por T12 (Grfica 6).
El anlisis de la materia orgnica despus del periodo de incubacin
present variaciones en todos los tratamientos incrementndose en T1 y T2,
aunque que los dems tratamientos presentaron bajas significativas (P<0.05)
durante el periodo de incubacin todos los tratamientos con enmiendas
mantuvieron diferencias significativas con respecto al tratamiento control (Grfica
1 y Cuadro 13).
Con respecto a las determinaciones despus del lavado del suelo el
porcentaje de MO bajo sensiblemente en todos los tratamientos, aunque se
mantuvieron las mismas relaciones existentes entre la MO y CIC ponindose de
manifiesto las prdidas de materia orgnica disuelta arrastrada por la lixiviacin
(Cuadro 11 y Figura 1).

93

Figura 1. Materia orgnica de los tratamientos: antes de la incubacin (1)

despus de la incubacin (2) y posterior al lavado del suelo (3).

4.2. Propiedades fsicas

a) Conductividad Hidrulica
Se puede considerar que las enmiendas mejoraron significativamente
(P<0.05) los ndices de infiltracin solo en los tratamientos donde se combinaron
40 g/kg de paja con las distintas proporciones de glucosa no siendo as para los
dems tratamientos.

b) Capacidad de campo
La capacidad de campo (CC) se midi a travs de muestras del suelo
original por separado, usando las mismas proporciones de enmiendas que se
usaron para cada uno de los tratamientos antes de iniciar la incubacin.

94

Cuadro 13. Efectos fsicos de la materia orgnica en la capacidad de campo y

conductividad hidrulica.
Tratamientos
T1

MO
%
1.63a

CC
%
18.0a

CH
cm/min
0.1 a

T2
T3

3.38b
4.52b

23.5b
27.1 b

0.6a
1.6a

T4
T5
T6

2.77b
3.88b
4.97b

19.9a
20.2a
21.1a

0.3a
0.2a
0.4a

T7
T8
T9

3.45b
4.68b
5.54c

21.6a
22.7a
22.7a

0.9a
1.7a
1.8a

T 10
T 11
T 12

4.47b
5.13c
5.49c

26.8b
27.2b
27.8c

2.7b
2.8b
5.0c

Nota: las mismas letras no tienen diferencias significativas

En cuanto a la capacidad de campo los tratamientos con diferentes

concentraciones de paja y los tratamientos donde se combin la paja en
concentraciones de 40 glkg de suelo con diferentes concentraciones de glucosa,
presentaron un incremento en la retencin de agua en comparacin con los dems
tratamientos que no presentaron diferencias significativas con respecto al
tratamiento control (T1).

4.3. Pruebas microbiolgicas del suelo.

Los cambios sucesionales de las poblaciones bacterianas de los
tratamientos analizados tienen un comportamiento metablico distinto, cuando
estas poblaciones son estimuladas con enmiendas de paja de maz y glucosa lo
cual es comprobado a travs de la diversidad de las poblaciones, determinado por
los ndices de diversidad y uniformidad de Shannon-Weaver, y el ndice de
disimilaridad de Jaccard representado en una matriz de correlacin.
Para tal medicin se usaron como marcadores metablicos el consumo de
los 95 substratos contenidos en las pocillas de las placas GN Biolog, los cuales se

95

manejaron

por

grupos

separados

de

carbohidratos,

cidos

carboxlicos,

aminocidos, aminas y aminas.

Para complementar la informacin de los cambios sucesionales solo se
tomaron en cuenta los grupos funcionales de los carbohidratos, los cidos
carboxlicos, y los aminocidos, para establecer los ndices de disimilaridad de
Jaccard entre la estructura poblacional bacteriana provocada por el efecto de las
diferentes enmiendas usadas en cada uno de los tratamientos.

4.3.1. ndice de disimilaridad de Jaccard

La matriz de correlacin de Jaccard fue usada porque a travs de esta se
puede puntualizar las asociaciones entre las variables que pueden mostrar una
coherencia global del juego de datos y se puede evidenciar la participacin de las
poblaciones particulares en cada uno de los tratamientos en el consumo de los
substratos. Para la elaboracin de los Cuadros 13 al 18 donde se muestran las
correlaciones entre las variables, adems de considerar un nivel de significancia
entre las correlaciones para una rcrtica de 0.246, donde P = 0.05 cuando se usan
grados de libertad elevados (35).
a) Comportamiento metablico de las poblaciones bacterianas durante el
procesos de incubacin.
El consumo de los cidos carboxlicos por las poblaciones bacterianas
encontradas en las muestras tomadas durante 30 y 60 das del proceso
incubacin para los tratamientos T2 al T6 muestran disimilaridad en el consumo de
los substratos con respecto al tiempo de muestreo, mientras que para los
tratamientos donde se mezclaron las enmiendas (T7 al T12) as como para el
tratamiento control (T1) no presentaron ndices de correlacin significantes que
demuestren cambios en el consumo de los cidos carboxlicos (Cuadro 14).
La correlacin hecha en muestras tomadas a 30 y 90 das demuestra una
correlacin significante de similitud en los tratamientos del T1 al T5 y T1, y T12,
mientras que el resto de los tratamientos manifestaron cambios en el
comportamiento metablico con respecto al consumo de los cidos carboxlicos en
los dos periodos de incubacin.

96

Cuadro 14. Cambios sucesionales en el consumo de cidos carboxlicos medidos

por ndice de disimilaridad de Jaccard.
Tratamiento

T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T 10
T 11
T 12

disimilaridad
disimilaridad
entre el muestreo
entre el muestreo
a 30 y 60 dasa 30 y 90 das
0.083
0.154
0.533
0.214
0.400
0.143
0.278
0.143
0.278
0.200
0.368
0.375
0.077
0.267
0.125
0.313
0.188
0.313
0.240
0.438
0.125
0.125
0.125
0.176

disimilaridad
entre el muestreo
a 60 y 90 das
0.077
0.563
0.286
0.389
0.316
0.368
0.248
0.313
0.353
0.333
0.133
0.067

Nota: La rcrtica para la diferenciacin de la disimilaridad es 0.246, (P = 0.05)

Los cambios metablicos observados en el consumo de los cidos
carboxlicos entre los periodos de incubacin 60 y 90 das fueron para los
tratamientos T2 al T10 con un comportamiento metablico disimilar, mientras que
los tratamientos T1, T11 y T12 no demostraron cambios significantes en su
comportamiento metablico (Cuadro 14).
La similaridad que presentan los tratamientos T11 y T12 a 30, 60, y 90 das
de incubacin es diferente a la similaridad que presenta en el suelo control (T1) en
esos mismos periodos hecho demostrado cuando se compar el comportamiento
metablico de las poblaciones entre cada uno de los tratamientos (Cuadro 18).

97

Cuadro 15. Cambios sucesionales en el consumo de carbohidratos medidos por

ndice de disimilaridad de Jaccard.
Tratamiento

T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T 10
T 11
T 12

disimilaridad
disimilaridad
entre el muestreo
entre el muestreo
a 30 y 60 das a 30 y 90 das
0.111
0.067
0.560
0.267
0.500
0.267
0.318
0.364
0.333
0.333
0.407
0.280
0.250
0.304
0.274
0.267
0.360
0.292
0.393
0.292
0.393
0.250
0.276
0.251

disimilaridad
entre el muestreo
a 60 y 90 das
0.000
0.480
0.500
0.292
0.320
0.254
0.400
0.251
0.296
0.250
0.179
0.138

Nota: La rcrtica para la diferenciacin de la disimilaridad es 0.246, (P = 0.05)

Respecto al consumo de los carbohidratos, cuando se comparan los
periodos 30 contra 60 das as como los periodos 30 contra 90 das de incubacin
se observaron cambios metablicos en las poblaciones de todos los tratamientos
donde se usaron enmiendas, mientras que cuando se comparan los periodos 60 y
90 das los tratamientos del T2 al T10 presentan disimilaridades metablicas en
esos dos periodos (Cuadro 15).
El comportamiento metablico de las poblaciones bacterianas para el
consumo de los carbohidratos en los tratamientos T11 y T12 cuando se comparan
los periodos de incubacin 60 contra 90 das, estos difieren en similitud con el
tratamiento control (Cuadro 17).

98

Cuadro 16. Cambios sucesionales en el consumo de aminocidos medidos por

ndice de disimilaridad de Jaccard.
Tratamiento

T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T 10
T 11
T 12

disimilaridad
entre el muestreo
a 30 y 60 das
0.143
0.333
0.429
0.462
0.462
0.500
0.308
0.250
0.286
0.357
0.385
0.286

disimilaridad
entre el muestreo
a 30 y 90 das
0.143
0.273
0.308
0.364
0.364
0.417
0.333
0.250
0.250
0.250
0.500
0.357

disimilaridad
entre el muestreo
a 60 y 90 das
0.000
0.091
0.286
0.333
0.167
0.231
0.214
0.167
0.154
0.286
0.400
0.313

Nota: La rcrtica para la diferenciacin de la disimilaridad es 0.246, (P = 0.05)

El comportamiento metablico de las poblaciones bacterianas de los
tratamientos para el consumo de los aminocidos presentan ndices de
disimilaridad en los tratamientos T2 a T12 cuando se comparan las muestras
tomadas a 30 y 60 das y 30 contra 90 das mientras que cuando se comparan los
periodos de incubacin 60 contra 90 das los tratamientos T3, T4, T10, T11 y T12 son
los que presentan ndices de disimilaridad (Cuadro 16).

b) Comparacin de las poblaciones bacterianas entre los tratamientos

La disimilaridad entre las poblaciones bacterianas medida en al final del
periodo de incubacin para el consumo de carbohidratos, se manifiesta a partir de
los tratamientos T5 al T12 comparados con el tratamiento control y los tratamientos
T2, T3 y T4.
Los tratamientos que no presenta disimilaridades en la actividad metablica
son los tratamientos T1 comparado contra T2, T3 y T4 mientras que por otro lado se
manifestaron ndices de similaridad entre T6, T9, T10, T11 y T12 (Cuadro 17).

99

El comportamiento de las poblaciones bacterianas de los tratamientos con

respecto al consumo de los cidos carboxlicos es similar a lo manifestado con los
carbohidratos, salvo que aqu el tratamiento control, los tratamientos enmendados
solo con paja fueron similares en los consumos para este substrato, mientras que
las disimilaridades se manifestaron en los tratamientos donde se us glucosa
como enmienda y en el resto de los tratamientos en los cuales se aplican
enmiendas combinadas de paja y glucosa en diferentes proporciones (Cuadro 18).
Se observaron ndices de similaridad al comparar el consumo de los cidos
carboxlicos entre las poblaciones bacterianas de los tratamientos T1, T2 y T3
mientras los tratamientos T7 hasta T12 presentan similaridad entre ellos.

100

Con respecto al grupo funcional de los aminocidos, se manifiesta una

similaridad metablica en las poblaciones bacterianas entre los tratamientos T1 al
T5, mientras que a partir de los tratamientos T6 al T12 se presentan disimilaridades
metablicas de las poblaciones bacterianas con respecto a los tratamientos
anteriormente mencionados, observndose adems ndices de disimilaridad de los
tratamientos T1, y T12 contra todos los dems tratamientos (Cuadro 19).

4.3.2. ndice de diversidad y equidad Shannon-Weaver

La utilizacin de los grupos funcionales polmeros, aminaslamidas y
miscelneos de las placas Biolog GN dan un bajo ndice de clasificacin
metablica, por lo tanto, solo se consideraron en el conteo global, junto con los
grupos funcionales de los carbohidratos, cidos carboxlicos y aminocidos, para
determinar los ndices de diversidad y equidad Shannon Weaver.
El patrn metablico de los substratos en las placas Biolog se midi a las
24, 48, 72, 96 y 120 horas de incubacin, para observar el comportamiento
metablico de las clulas bacterianas extradas de las muestras de suelo de las
columnas incubadas a 30, 60, y 90 das.
El comportamiento metablico del paquete celular extrado del suelo a los
30 das present el menor consumo de substratos en todos los tratamientos
comparndolo contra las muestras tomadas a 60 y 90 das.

101

La cantidad menor de substratos consumidos fue el del suelo control con 9

substratos a las 24 horas para estabilizarse en 46 a las 120 horas, mientras que el
consumo ms elevado se present en T12 que a las 24 horas de incubacin el
nmero de substratos era de 33 y a las 120 horas se estabiliz en 60 (Figura 2).

Figura 2. Consumo de los Substratos en las placas Biolog GN por la

poblacin bacteriana a los 30 das de incubacin.
El comportamiento del desarrollo de color es similar para todas las palcas
Biolog usadas para los tratamientos en diferentes periodos de incubacin de las
columnas de suelo. Este desarrollo de color es mayor en las primeras 72 horas
volvindose asinttico a partir de este periodo.
Respecto a los periodos de incubacin de 60 y 90 das, se present una
mayor actividad metablica que a los 30 das de incubacin para todos los

102

tratamientos a los cuales se les adicionaron enmiendas de glucosa, de paja o la

combinacin de ambas (Figuras 3 y 4).

Figura 3. Consumo de los Substratos en las placas Biolog GN por la poblacin

bacteriana a los 60 das de incubacin.

Se observ un incremento de la utilizacin de los substratos por las

poblaciones para todos los tratamientos en donde se aplicaron enmiendas,
sobresaliendo aquellos en donde las proporciones de glucosa eran mayores,
presentndose adems un incremento mayor de la diversidad en los tratamientos
donde se combin la glucosa con paja.

103

El rango de consumo para el muestreo a 60 das fue de 47 substratos para

T1 hasta 75 para T12, mientras que el rango de consumo observado a 90 das fue
de 46 substratos en T1 a 69 en T12.

Figura 4. Consumo de los Substratos en las placas Biolog GN por la poblacin

bacteriana a los 90 das de incubacin.

El ndice de diversidad y equidad Shannon-Weaver calculado sobre los

datos del patrn de uso de substratos GN Biolog a los 90 das de incubacin
muestran una diversidad con un rango que va desde 2.24 en el tratamiento control
(T1) hasta 3.31 en T12 , en donde se agregaron 40 g/kg de paja y 60g/kg de glucosa
como enmienda. Estos datos concuerdan con el comportamiento metablico de
las poblaciones bacterianas determinado a travs del ndice de disimilaridad de
Jaccard donde se observan cambios sucesionales en cuanto a la utilizacin de los
substratos. Siendo importante sealar que el comportamiento de la diversidad
104

funcional muestra un incremento en el muestreo a los 60 das, mientras que a los

90 das esta tiende a disminuir en todos los tratamientos a los cuales se les
agregaron enmiendas, mientras que en el tratamiento sin enmienda no se
presentaron cambios en la diversidad durante todo el periodo que dur la prueba.

Figura 5. Comportamiento de la diversidad a travs del tiempo de cada uno de los

tratamientos.
Respecto a la relacin de las enmiendas usadas y la diversidad medida por
el ndice Shannon en los 95 substratos GN Biolog, se observa que los tratamientos
en donde las concentraciones de glucosa son mayores, o bien en donde las
enmiendas de paja y glucosa se combinan, se obtiene una curva tendiente
(estimada usando ANOVA) a incrementar progresivamente la diversidad funcional
de las poblaciones hasta los 60 das, con un decremento a los 90 das de
incubacin de los suelos, sin que este llegue a ser menor que el detectado a en el
tratamiento control antes del periodo de incubacin, todo esto se presenta en los
tratamientos con enmiendas (Figura 5 y Cuadro 20).

105

A los 30 das de incubacin se observ una tendencia a incrementar la

diversidad detectados a travs de ANOVA en todos los tratamientos donde se
usaron enmiendas, aunque solo se presentaron diferencias significativas (P<0.05)
tanto en el incremento de la diversidad como en la uniformidad del consumo de los
substratos, en los tratamientos que contena glucosa o los tratamientos donde se
mezclaron las enmiendas de paja con glucosa, destacando por su mayor
diversidad funcional y un mayor ndice de equidad en el consumo de los
substratos T12 (Cuadro 20).
Se observ que la diversidad metablica es tendiente (ANOVA) a
incrementar en todos los tratamientos a los 60 das de incubacin, aunque no se
observaron diferencias significativas (P<0.05) en T1 y T2, destacando por su
elevada diversidad metablica de nuevo T12.
Respecto al ndice de equidad Shannon medido a los 60 das se observ
que este se comport de manera diferente al incremento de la diversidad para
este mismo periodo, ya que solo T11 y T12 muestran diferencias significativas (P =
0.060) con respecto a los dems tratamientos (Cuadro 20).
A los 90 das de incubacin se observ que la diversidad metablica de las
poblaciones en todos los tratamientos es tendiente (P =0.089) a declinar con
respecto a las tendencias observadas (P = 0.060) los 60 das, conservndose las
diferencias significativas (P<0.05) en los mismos tratamientos destacando de
nuevo la mayor (P = 0.054) diversidad funcional los tratamientos T11 y T12 (Cuadro
20).

106

Cuadro 20. Comportamiento de la diversidad y uniformidad metablica (Shannon-Weaver)

de las poblaciones a 30, 60 y 90 das de la incubacin.
Trat.
T1

Diversidad
30 das
2.109(0.05)a

uniformidad
30 das
0.557(0.009)a

Diversidad
60 das
2.253(0.048)a

uniformidad
60 das
0.585(0.060)a

Diversidad
90 das
2.237(0.055)a

uniformidad
90 das
0.581(0.06C)a

T2
T3

2.141(0.15)a
2.205(0.14)a

0.563(0.028)a
0.576(0.028)a

2.652(0.073)a
2.892(0.073)b

0.661(0.100)a
0.705(0.070)a

2.429(0.100)a
2.525(0.073)a

0.605(0.100)a
0.616(0.070)a

T4
T5
T6

2.557(0.12)b
2.365(0.12)b
2.604(0.22)b

0.643(0.023)b
0.607(0.023)a
0.652(0.041)b

2.940(0.073)b
3.116(0.048)b
3.212(0.048)b

0.714(0.070)a
0.746(0.100)a
0.764(0.150)a

2.700(0.073)a
2.780(0.096)b
3.100(0.146)b

0.656(0.070)a
0.666(0.100)a
0.737(0.150)b

T7
T8
T9

2.636(0.10)b
2.844(0.12)b
2.764(0.03)b

0.658(0.018)b
0.697(0.022)b
0.682(0.005)b

3.004(0.073)b
3.020(0.048)b
3.132(0.073)b

0.726(0.120)a
0.729(0.070)a
0.749(0.100)a

3.132(0.121)c
2.940(0.073)b
2.972(0.096)b

0.757(0.120)b
0.710(0.070)b
0.711(0.100)b

T10
2.684(0.13)b
T11
2.700(0.03)b
T12
2.892(0.03)c
ANOVA
P =0.102

0.667(0.024)b
0.670(0.005)b
0.705(0.005)c
P =0.019

3.292(0.073)b
3.419(0.073)b
3.547(0.096)c
P =0.060

0.778(0.150)a
0.801(0.100)b
0.824(0.100)b
P =0.011

2.988(0.146)b
3.212(0.096)c
3.308(0.096)c
P =0.089

0.706(0.150)b
0.753(0.100)b
0.769(0.100)c
P = 0.021

* el promedio de los tratamientos (la desviacin estndar). Dentro de cada una de las columnas, para cada
dato de las muestreas, los datos seguidos por las diferentes letras significan diferencias con el uso de la
prueba de Tukey (P<0.05).

107

V. Discusin

En el presente trabajo se evaluaron las respuestas fisicoqumicas y los

cambios sucesionales en la diversidad funcional de la poblacin bacteriana que
presenta un suelo salino, cuando este es enmendado con paja de maz y glucosa,
reflejados en el consumo de los patrones de substratos Biolog GN.
S bien, estos medios ambientes son considerados hbitat extremos, los
cuales por su elevada salinidad limitan la diversidad bacteriana (Garabito et al.,
1998) tiene la suficiente capacidad para reaccionar al estmulo de fuentes de
carbono e incrementar su diversidad, no sin antes sufrir diferentes cambios
sucesionales que se relacionan con las condiciones fisicoqumicas provocadas por
los metabolitos producidos en el transcurso del consumo de los substratos por los
microorganismos prevalecientes en determinadas etapas de su desarrollo.

5.1. Comportamiento de las caractersticas fisicoqumicas del suelo.

a) Comportamiento del pH y la CE
Despus del periodo de incubacin disminuy significativamente (P<0.05) el
pH en todos los tratamientos que contenan glucosa en proporciones mayores o
iguales a 40 g/kg de suelo ya sea que esta se encontrara sola o combinada con
paja. Esta disminucin del pH fue acompaada de un incremento en las
concentraciones de los electrolitos en las soluciones del suelo para todos los
tratamientos que contenan enmiendas.
Este comportamiento se considera que es debido a los productos de la
descomposicin de la glucosa, que en los primeros das da lugar a la produccin
de metabolitos como los cidos carboxlicos y los grupos hidroxil fenlicos, tal y
como lo explica Kim et al. (1998), por lo que probablemente el pH haya sido similar
al de los suelos tratados en el experimento de Choromo y Rengasamy (1997) en
donde registran un pH dentro de los primeros 30 das menor que 6.8, aunque al
final del periodo de incubacin (320 das) el valor de este parmetro qued en 7.4,

108

mientras que para el presente experimento, el pH en los tratamientos con

concentraciones de 60 g/kg de glucosa y los combinados de paja en las distintas
proporciones con 60 g/kg de glucosa (T6, T8 , T9, T11 y T12) el pH estuvo en un
rango de 7.3 a 7.7 en comparacin de los dems tratamientos donde el pH fue
ms elevado (P<0.05).
Estas bajas sensibles en el pH de los suelos por el uso de fuentes de
carbono fcilmente disponible, de acuerdo con Huettl (1993) se consideran que es
debido a los compuestos orgnicos simples que son liberados durante la
descomposicin microbiana, tales como las grasas, carbohidratos y protenas; que
a su vez son convertidos por otro tipo de microorganismos en cidos grasos
voltiles y eventualmente H2, CO2 y CH4.
Otra de las causas que menciona Huettl (1993) en la acidificacin de los
suelos y que concuerdan con los resultados de la presente investigacin se debe a
la disminucin de las bases de saturacin que al decrece el almacenaje
intercambiable del K+, Ca2+ Mg2+ y Na+ en el suelo, estos cationes se pierde por
humedecimiento y lixiviado debido a la percolacin de los aniones orgnicos tal y
como se observa en las reducciones de la capacidad de intercambio catinico por
la prdida de la materia orgnica disuelta (MOD) despus del lavado del suelo de
los tratamientos (Cuadros 16 y 17).
Aunado a la explicacin anterior Rao y Pathak, (1996) consideran que la
reduccin del pH de los suelos alcalinos, posiblemente se debe a los productos de
la descomposicin de la materia orgnica que interfieren en la reduccin del PSI y
la disminucin de la RAS1:5 aunque en esta investigacin solo se presenta este
fenmeno de manera significativa (P<0.05) en los tratamientos que contienen solo
glucosa como enmienda, quiz debido a la mayor produccin de metabolitos que
conforman la MOD (Cuadro 16).
Relacionado con la MOD se observ que el incremento de los cationes
solubles, la RAS, el PSI, la CIC y los porcentajes de MO en los tratamientos con
enmiendas a 90 das de incubacin y la subsiguiente disminucin despus del
lavado del suelo, demuestran que el flujo preferencia) del transporte de los solutos,

109

puede ser afectado por las caractersticas biogeoqumicas del suelo as como por
la distribucin relativa de los solutos en los poros.
La produccin de cidos orgnicos a partir de la descomposicin de las
enmiendas de glucosa (Chorom y Rengasamy, 1997) y paja (Bada, 2000)
incrementa la estabilidad del Ca2+ y el Mg2+ que se intercambia con el Na + , lo que
hace que el RAS no se vea afectada en los suelos salinos tal y como se observ
en el presente estudio (Cuadro 11 y 15).
Si consideramos solo los datos de las concentraciones electrolticas por
salinidad sin tomar en cuenta las dems condiciones fisicoqumicas y biolgicas
del suelo las concentraciones de 1.0 dSm-1 pueden destruir progresivamente las
clulas (Rao, 1994; Rao y Pathak, 1996; Garca y Hernndez, 1996) y adems
limitar la diversidad microbiana (Garabito et al., 1998).
De acuerdo con las observaciones anteriores el presente estudio difiere en
cuanto a que ellos determinaron que la CE se encuentra negativamente
relacionada con la actividad microbiana del suelo aunque estas observaciones
fueron hechas bajo condiciones de campo y sin la alteracin de las condiciones
del suelo por el efecto de las altas concentraciones de las enmiendas.
Estos hechos pueden ser observados si las poblaciones microbianas no
disponen de fuentes de carbono para modificar su medio ambiente y de esta
manera poder soportar mayores concentraciones de electrolitos (hasta 4.7 dSm-1
en T9), como las que se presentan en los tratamientos con enmiendas que
incrementan la diversidad bacteriana, en la medida que ellas disponen de fuentes
de carbono fcilmente disponibles, para sintetizar osmolitos orgnicos compatibles
como la glutamina, prolina, glicina-betaina y algunas acumulan solutos inorgnicos
tales como el K+ y el Mg2+ , adems la sntesis de patrones de protenas, lpidos,
cidos grasos y polisacridos pueden cambiar (Zahran, 1997; Tripathi et al., 1998).
La sntesis de estos compuestos orgnicos, forma lo que se conoce como
materia orgnica disuelta, que acta ligando los electrolitos que pueden ocasionar
la disminucin del crecimiento y muerte de las clulas microbianas. Adems de los
grupos funcionales producidos durante le proceso de humificacin, la misma
biomasa microbiana encargada de producir estos cidos orgnicos, incorpora

110

algunas cantidades de iones dentro de su sistema y esta puede ser de 2 a 3 veces

ms elevados que los materiales orgnicos e inorgnicos (Shokohifard, 1991).
Si bien, en los estudios de Bada (2000) los acolchado y el enterrado de
paja de maz conducen al decremento de la CE a nivel de campo en el presente
estudio se presenta un incremento de la CE debido a que los factores que pueden
influir en la lixiviacin de los electrolitos son controlados en las columnas
experimentales, por lo tanto se puede observar que las pajas son capaces de
incrementar electrolitos solubles para su posterior lixiviado, que para el presente
caso fue por el efecto del lavado del suelo despus de un periodo de de 90 das
de incubacin (Cuadro 11).

b) Materia orgnica y CIC

Los tratamientos que contenan solamente glucosa como enmienda

mostraron la ms baja concentracin de MO despus del lavado del suelo, pero
adems se hace notar que la CIC de todos tratamientos disminuy de manera
similar (P<0.05), de tal manera que esto puede deberse a la prdida de MOD por
el flujo del agua de lavado.
Para reforzar la apreciacin anteriormente descrita, s comparamos los
tratamientos en donde se aplic paja y las combinaciones de glucosa con paja se
observa que se mantienen niveles significativamente ms elevados de MO
despus del lavado, siendo importante tambin sealar que las mayores
cantidades de MO se dan en los tratamientos donde se combinan las enmiendas,
que en los tratamientos donde se utiliz nicamente paja o glucosa, que adems
reflejan una menor CIC despus del lavado del suelo.
Lo anterior se explica por Kaiser y Zech (1998) en cuanto a que la sorcin
de la MOD es ms elevada en los suelos con grandes cantidades de sitios
disponibles para la adsorcin. De acuerdo con esto los ndices de sorcin de la
materia orgnica disuelta son bajos, en los suelos con pocos sitios de porcin

111

disponibles. En tales suelos, el mayor tiempo de residencia de las soluciones del

suelo y, adems, un flujo de agua menos rpido, puede ser necesario para
remover la MOD a una extensin similar que en suelos con elevadas cantidades
de sitios disponibles para la sorcin. De esta manera el incremento de la
traslocacin de la MOD puede fluir en el agua rpidamente.
El incremento de la diversidad en las bacterias encontrada en el presente
estudio, puede ser debida al efecto de la CIC en la sobrevivencia de los
microorganismos como explica Amato y Ladd, (1992) en sus estudios donde
encontraron una cerrada correlacin entre las concentraciones de la biomasa
nativa

12

C y la CIC, y los espacios porosos totales que sugieren que las reacciones

de adsorcin pueden ser de gran importancia para que los organismos localizados
dentro de los pequeos poros sobrevivan.
Respecto a la supervivencia de las bacterias Kim et. al. (1998), encontraron
que en los tratamientos donde usaron glucosa al 1 % a un periodo de 55 das,
hubo una mayor sobrevivencia de las bacterias solubilizadoras de fsforo que con
otros tratamientos.
El efecto de la glucosa en la diversidad de las bacterias puede ser benfico,
sobre todo para aquellas bacterias de gran importancia para la fertilidad de las
plantas como las diazotrofas que a largo plazo incrementan en un 300% cuando
se usan enmiendas de glucosa (Keeling et al., 1998).
Adems del efecto de adsorcin provocado por la mayor CIC al adicionar
glucosa, (a incorporacin de la paja maz en los tratamientos increment la
capacidad de sorcin de los solutos orgnicos en los procesos de lavado. Esto
segn Hadas et al., (1998) y Stemmer et al. (1999) se debe a las caractersticas
fsicas y a la lenta descomposicin de las pajas cuando se mezclan con el suelo,
adems de incrementar la actividad microbiana cuando las pajas es mezclada con
fuentes de carbono fcilmente disponibles como la glucosa.
La influencia de las relaciones de C:N en la eficiencia la descomposicin de
este tipo de fuentes de C provenientes de la paja, puede ser limitante solo en las
primeras etapas de descomposicin, tal y como lo explican Hadas et al. (1998)
quienes trabajan con paja de trigo mezclada con arena y una suspensin

112

microbiana de suelos, para medir la eficiencia de crecimiento de la biomasa

microbiana y su eficiencia en la transformacin de polisacridos, donde indican
que esta es considerada ms lenta para las etapas tempranas (primeros 50 das)
con proporciones de C:N de 91:1 que con proporciones de 5:1 aunque esta
diferencias son acortadas con en transcurso del tiempo (hasta los siguientes 150
das).
Por otro lado las poblaciones que pueden estar disminuidas o poco
favorecidas con el uso de fuentes de carbono con una alta proporcin de C:N, son
los diazotrofos de vida libre en el suelo que requieren de una elevada proporcin
de N para favorecer su crecimiento (Kahindi et al., 1997), aunque para el caso de
la recuperacin de los suelos salinos lo prioritario sera disminuir las
concentraciones de sales que afectan la fertilidad biolgica.
El incremento de los iones solubles despus de la incubacin, con la
consecuente disminucin despus del lavado, puede deberse a la capacidad que
tiene MOD para atraer y retener los iones y arrastrarlos tal y como se demuestra
en las altas concentraciones de cationes solubles de los tratamientos con
enmiendas antes del lavado y la baja concentracin de estos despus del lavado
del suelo (Cuadros 14 al 15).
A pesar de que existe un arrastre de solutos y de MOD, la CIC se sigue
manteniendo elevada en las combinaciones de paja y glucosa despus del lavado
del suelo (Cuadro 17). Esto concuerda con las explicaciones de Chen et al., (1997)
en donde considera que las arcillas depositadas en la superficie de los poros y las
cubiertas de los materiales orgnicos actan como retenedores de solutos, pero
los efectos ms significantes pueden estar relacionados con los movimientos en
las reacciones de adsorcin inicial que se presentan en la cubierta de los poros.

113

Desde otra perspectiva Noack et al., (2000) explican que las partculas del
suelo se clasifican segn el tamao y as aumenta el grado de la posible filtracin
fsica que los coloides con mayor movilidad en tierras de carga baja pueden
escapar bastante filtracin fsica por la matriz del suelo. Esto es aplicable
principalmente a la saturacin de la tierra por concentraciones de sal, sobre todo
cuando la saturacin es elevada y las interacciones entre las partculas aumentan
la movilidad.
El efecto de mayor movilidad de las partculas del suelo por efecto de la
filtracin se pudo demostrar cuando se incrementaron las concentraciones de paja
a 40g/kg combinndola con las distintas concentraciones de glucosa.

c) Textura del suelo y conductividad hidrulica

Las manifestaciones biogeoqumicas cambiantes de las propiedades del
suelo, solo se pueden efectuar por la actividad de los microorganismos que utilizan
las enmiendas como sustratos para su crecimiento. Para tal efecto se requiri
mantener el suelo de los tratamientos a un 50% de la capacidad de campo,
considerado esto como suficiente para un adecuado transporte de los solutos,
tales como los compuestos orgnicos que servira como suplemento de las clulas
microbianas en el medio ambiente de los macroporos tal y como los proponen
Vinther et al., (1999).
En la presente investigacin, la incorporacin de paja de maz como
enmienda mejora la infiltracin del agua cuando esta es incorporada al suelo en
concentraciones de 40 g/kg de suelo cuando esta se acompa de glucosa lo que
concuerda con los resultados de Badia, (2000) en su investigacin realizada en
suelos salinos in situ, indicando adems que se mejora la estabilidad de los
agregados y el qCO2 para los suelos salinos pero no para los sdicos. Observ,
adems, que despus de un periodo lluvioso, las sales solubles se lixiviaron pero
no se modific significativamente el volumen de sodio.
La mejora en la capacidad de infiltracin del agua que se obtuvo sobre
todo con los tratamientos donde se combina la paja con la glucosa se explica en

114

los estudios de Chenu (1993) y Nelson et al. (1999), donde observaron que el
incremento en la conductividad hidrulica (CH) es debido a la mejora en la textura
del suelo por efecto de los polisacridos microbianos que tienen una actividad
adherente y actan como un agente agregante en los suelos, de tal manera que la
estabilizacin de los suelos enmendados con glucosa y las combinaciones con
paja de maz puede ser atribuida en parte a la produccin de este muclago
microbiana formado por los carbohidratos en el subsuelo y los materiales alifticos
en la tapa del suelo que estabilizan el agua.
Las diferencias encontradas en los tratamientos para la CH se pueden
explicar con las observaciones de Tarchizky et al., (1998) que consideran que las
diferencias que se pueden encontrar en la CH dependen de la magnitud de las
propiedades del suelo, de las concentraciones de la MOD, el pH de la solucin y
los tipos de cationes intercambiables.

5.2. Propiedades microbiolgicas

La comunidad bacteriana del suelo afectado por salinidad cuando esta no
es estimulada por el uso de fuentes de carbono como las enmiendas demostr
tener una baja capacidad para utilizar los substratos de carbono de las placas
BiologTM, lo que significa una menor diversidad funcional comparado con todas las
comunidades bacterianas que se desarrollaron en el suelo salino tratado con
diferentes combinaciones de paja y glucosa (P<0.05).
Esto se explica por la rapidez con la que las bacterias responden a los
estmulos medioambientales produciendo nuevos fenotipos, aunque no queda
claro el fenotipo descrito como "plasticidad" para los estudios sobre las
poblaciones ecolgicas de las bacterias en los complejos medios ambientes. Esta
capacidad de diversificacin de las bacterias hace que se alteren sus propios
fenotipos (Barnett et al., 1999).
La capacidad de respuesta de las bacterias a la disposicin de fuentes de
carbono fcilmente disponibles permite a las bacterias liberar metabolitos

115

osmoprotectores que pueden ayudarlas a crecer con elevadas concentraciones de

sal (Lai, et al. 1999).
Estos osmoprotectores sirven a su vez para corregir los problemas de las
altas concentraciones de los suelos salinos tal y como se demuestran en los
resultados de esta investigacin que concuerdan con las de Pankhurst et al.,
(2001) donde indican que la capacidad de intercambio catinico y los
bicarbonatos-extrables tuvieron una correlacin significativa con la variacin en la
utilizacin de los patrones de substratos BiologTM, que describen las diferencias de
las comunidades microbianas del suelo inducidas por la salinidad y la alcalinidad
aumentada de los suelos analizados.
Respecto a la explicacin anterior en el presente estudio efectivamente se
present una correlacin proporcional en el incremento de la diversidad funcional
de las poblaciones de los tratamientos demostrados a travs del patrn de
substratos Biolog GN y incremento de los bicarbonatos y de la CIC.
En esta investigacin se observ que la diversidad funcional de las
poblaciones microbianas deprimidas por el efecto de la salinidad tienen la
capacidad de incrementar la diversidad, cuando estas son apoyadas por fuentes
de carbono combinadas de glucosa y pajas de maz, al igual que en los resultados
de Bastos et al., (2000) donde observaron la capacidad que tienen las poblaciones
microbianas de incrementar la diversidad gentica, como respuesta a medios
ambientes adversos simulados, cuando estas se desafan a contaminantes como
los fenoles y altas concentraciones de sales.
En el presente estudio se apoya la capacidad de respuesta que tienen las
poblaciones microbianas para utilizar las fuentes de carbono fcilmente
disponibles y establecer por si mismas el equilibrio de su propio medioambiente
que les permite crecer y diversificarse. Lo que concuerda con la idea de Bastos et
al., (2000) en cuanto a que los ambientes naturales, contienen la diversidad
gentica y funcional suficiente para hacerles opciones vlidas en el aislamiento de
microorganismos tiles en bioremediacin.

116

Desde otra perspectiva los resultados de la presente investigacin se

ajustan a la premisa de Grime (1997) que considera a los ecosistemas pobres en
diversidad requieren solo de estabilidad, por otro lado Zak et al., (1994) explican
que esta estabilidad se encuentra comprometida por los compuestos orgnicos, y
que tanto la estabilidad de los ecosistemas como la diversidad se vern
comprometidas por la estructura de la comunidad microbiana del suelo mediante
el proceso de sucesin (Young et al., 1998).
En la presente investigacin se determin que el comportamiento
metablico de las poblaciones bacterianas puede ser alterado con la sola adicin
de fuentes de carbn fcilmente disponibles para todos los microorganismos.
Esto es explicado por Vekemans et al., (1989) y Wardie y Parkinson, (1990)
basndose en que todos los microorganismos vivos responden a la glucosa de
una manera aproximadamente equivalente. De aqu que la respuesta obtenida por
la adicin de la glucosa como enmienda al suelo, se deba a la biomasa microbiana
total, porque incluye tanto a la biomasa activa como a la inactiva. Esta respuesta
es similar para los hongos y las bacterias.
Este incremento en la biomasa microbiana implica entonces la modificacin
de la estructura poblacional, que solo se manifiesta con el uso de tcnicas
moleculares o pruebas metablicas como las efectuadas en la presente
investigacin.
La variacin de disimilaridad (Cuadros 19 al 24) y los ndices de diversidad
Shannon (Grfica 5) encontrados en las poblaciones a travs del tiempo, para los
tratamientos donde se utiliza glucosa, pone de manifiesto que la actividad
metablica se diversifica debido al incremento de la parte de la poblacin que se
estimula con el consumo de los metabolitos y organismos muertos que fueron los
primeros en utilizar la glucosa como lo demostrado por Chotte et al., (1998)
El considerar otras fuentes de carbn complejas como lo son las pajas que
adems contienen una alta concentracin de materia orgnica recalcitrante, da
margen a otro tipo de comportamiento metablico de las poblaciones observadas
en el incremento de los ndices de disimilaridad de Jaccard y el ndice de
diversidad Shannon, relacionndose con las mejoras en la caractersticas

117

fisicoqumicas de los tratamientos con enmiendas.

Aunque se desarrollaron todos los clculos de los ndices de disimilaridad
en la matriz de Jaccard con el total de las fuentes de carbono presentes en las
pocillas de las placas Biolog se usaron solamente los grupos de carbohidratos,
cidos

carboxlicos,

los

aminocidos

por

separado

para

analizar

el

comportamiento metablico de las poblaciones bacterianas.

Lo anterior es compartido con Thompson et al., (1999) debido a la claridad
de las respuestas que se obtienen en los cambios sucesionales de las
poblaciones, en cuanto a que la composicin de las comunidades reflejan un
mayor potencial en la estimacin metablica valorada por la habilidad de
asimilacin de este tipo de fuentes de carbn, que son los que se encuentran
especialmente comprometidos con la composicin de las comunidades de las
poblaciones (cuadros 19 al 24).
La capacidad de respuesta de las poblaciones microbianas a la paja y la
glucosa no solamente implica un incremento en la biomasa microbiana, sino que
este incremento es acompaado por un cambio estructural de las poblaciones que
a su vez imprimen cambios microambientales que se establecen por los
metabolitos producidos por los microorganismos que inician la descomposicin de
las enmiendas incorporadas al suelo.
Lo anterior se explica por los resultados de Wagner y Broder (1993) y
Moller et al., (1999) donde los autores primeramente citados, se basan en
observaciones hechas sobre las interacciones existentes entre el crecimiento de
los hongos y las bacterias, en la descomposicin del rastrojo de maz y los autores
posteriores trabajan con hojas de haya, observando que el crecimiento inicial de
los hongos implica a las hifas que presumiblemente crecen afuera del suelo y
dentro de los residuos durante los primeros 3-5 das. En ambas investigaciones se
considera que las hifas son buenos substratos para la sucesin posterior de otros
microbios como las bacterias, pero las hifas melnicas pueden ser resistentes a la
descomposicin y probablemente persistan en la parte oscura de los residuos
orgnicos.

118

Adems de las hifas existen compuestos fcilmente metabolizables, que

son de bajo peso molecular, como los cidos orgnicos y los azcares, disponibles
para un rpido desarrollo de la biomasa microbiana, la cual, en el caso de la paja,
es predominantemente de origen fngico en suelos sin problemas de salinidad
(Cheschire et al., 1999).
Es importante considerar para futuras investigaciones las interacciones de
los hongos y las bacterias por las apreciaciones hechas en las investigaciones de
Pankhurst et al., (2001) que demuestra la existencia de una proporcin ms baja
de cidos grasos fngicos que bacterianos en la tierra afectada por salinidad de
uno de sus sitios investigados para tal efecto ellos utilizaron las tcnicas de los
cidos grasos biomarcadores presentes en las uniones-ster y los perfiles de los
cidos grasos fosfolpidos metil ster.
Por la importancia que tiene la medicin de la capacidad metablica de las
poblaciones microbianas en general y bacterianas en lo particular se considera de
gran importancia el uso de las pruebas Biolog para investigaciones que se puedan
desarrollar in situ, ya sea para medir las caractersticas de las poblaciones nativas
de los suelos salinos as como para observar el comportamiento de las
poblaciones microbianas cuando estas son estimuladas con fuentes de carbono,
ya sean estas fcilmente metabolizables o bien se usen substratos que por su alto
contenido de lignina sean ms recalcitrantes.

119

VI. CONCLUSIONES

Aunque las tendencias en diversidad Shannon-Weaver observadas a travs del

ANOVA indican cambios en la diversidad metablica de las poblaciones, en
todos los tratamientos donde se usaron enmiendas, solo cuando se combina la
glucosa a concentraciones de 40 g/kg con las diferentes cantidades de paja
usadas en este experimento para aplicarse al suelo salino, provocaron cambios
metablicos significantes (P<0.05) en las poblaciones bacterianas que se
manifiestan a travs del patrn de consumo de los 95 substratos Biolog GN.

Los ndices de disimilaridad metablica medidos en las poblaciones bacterianas

por medio de la matriz de Jaccard, demuestran cambios metablicos
sucesionales para el consumo de los cidos carboxlicos, carbohidratos y
aminocidos, en todos los tratamientos donde se usaron enmiendas excepto
para el tratamiento control.

Las tendencias (ANOVA) en los cambios metablicos a travs del tiempo,

tambin se muestran a travs del incremento en los ndices de diversidad
Shannon de todos los tratamientos donde se usaron enmiendas. La curva
marcada por el comportamiento de la diversidad muestra una elevacin
progresiva desde el inicio del experimento hasta los 60 das de la incubacin
para descender a los 90 das sin que esta decrezca al nivel del tratamiento
control que se mantiene durante todo el periodo. De aqu que sea evidente el
cambio metablico sucesional de las poblaciones bacterianas.

Todos los tratamientos donde se usaron enmiendas de glucosa, ya sea esta

combinada o sola en sus diferentes concentraciones, presentan un menor pH, a
la vez que se incrementa en gran proporcin la concentracin de los electrolitos
en los solutos del suelo.

120

 La RAS disminuy cuando se us solo glucosa como enmienda en sus diferentes

proporciones mientras que con los dems tratamientos no se presentan
diferencias significativas.

Las concentraciones de los bicarbonatos en los tratamientos solo presentaron

diferencias significativas cuando se mezcl la glucosa a concentraciones de 40
g/kg de suelo con las diferentes proporciones de paja, mientras que las
concentraciones de los carbonatos disminuyen de manera significativa (P<0.05)
en los tratamientos con las mayores concentraciones de paja mezclada con
glucosa (T11 y T12).

Con el uso de las enmiendas de paja se concluye que las concentraciones de los
cloruros disminuyen, as como con el uso de a glucosa sola en concentraciones
de 20 y 40 g/kg de suelo (P<0.05) con respecto a los dems tratamientos.

Las concentraciones de los sulfatos se- incrementa significativamente (P<0.05)

con el uso de las pajas y las combinaciones que se hicieron con las diferentes
concentraciones de glucosa

Resulta interesante las observaciones que se hicieron con respecto a al

comportamiento de los sulfatos y cloruros ya que estos ltimos se incrementan
significantemente despus del lavado del suelo, en contraste con el
comportamiento de los sulfatos que disminuye drsticamente bajo estas mismas
condiciones de tratamiento.
El Ca2+ y el Mg2+ de las soluciones del suelo, presenta una mayor concentracin
(P<0.05) en los tratamiento con glucosa a concentraciones mayores de 40 g/kg
de suelo, mientras que las concentraciones del Na + soluble son ms elevadas en
los suelos enmendados solo con glucosa en concentraciones de 20 y 40 g/kg
(P<0.05).

121

 Existe una tendencia a incrementar (ANOVA) la velocidad de infiltracin del

agua, cuando se combinan la paja con diferentes proporciones de glucosa,
aunque solo se presentan diferencias significativas (P<0.05) en los tratamientos
combinados con las ms altas proporciones de paja con glucosa (T11, y T12).
Aunque no queda determinado si el efecto de las combinaciones es debido a los
cambios metablicos provocados por los microorganismos, o es tan solo un
efecto adicional de las caractersticas fisicoqumicas impuestas por las
enmiendas, independientemente de las condiciones de los metabolitos
producidos por los microorganismos.
Aunque los cambios sucesionales observados a travs de la diversidad
metablica de las bacterias son evidentes, las condiciones fisicoqumicas
prevalecientes dependieron de la actividad metablica de las poblaciones
bacterianas y estas a la vez dependieron de las caractersticas y cantidades de
substratos que se les ofreci para su consumo.

122

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149

Anexo

150

MAPAS CONCEPTUALES DE LOS

CAPTULOS DESARROLLADOS
COMO REVISIN DE LITERATURA

151

152

153

154

155

156

156

157

157

158

159

159

160

160

161

162

162

163
163

164

ING. RODOLFO V. MORENTN DELGADO

DIRECTOR DE LA F.C.B.A.
PRESENTE

En atencin a que el C. Hector Manuel Lpez Prez, alumno egresado de la

Maestra en Ciencias, rea Biotecnologa, con nmero de cuenta 98-4301,
ha realizado todas las correcciones al manuscrito de tesis que present al
cuerpo acadmico de revisores, constituido por: M.C. Salvador Guzmn
Gonzlez, M.C. Arnoldo, y Dr. Sergio Aguilar Espinosa profesores-investigadores
de la U de C. Me dirijo respetuosamente para solicitarle la autori zacin de
impresin de la tesis titulada: "Sucesin de la comunidad bacteriana en
suelos salinos enmendados con paja de maz y glucosa".
Esta tesis ha sido dirigida por el Dr. Gerardo Lpez Aguirre
Sin otro asunto ms que tratar, reciba saludos

Atenta mente
Tecomn, Colima a 21 de Noviembre de 2002

Km. 40 Carretera Colima- Manzanillo, Tecomn Colima, Mxico Cp. 28100

Tels 01 (313) 3229409, 01 (312) 3161000 exts. 52500, 52500 Tel-fax: 01 (313) 3229405 Email saguilar@ucol mx

UNIVERSIDAD DE COLIMA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS

Tecomn, Col., a 25 de Octubre de 2002

Asunto: Aprobacin de Tesis de Maestra

DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA

RESPONSABLE DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
PRESENTE.
Los abajo firmantes, por este medio nos dirigimos a Usted, para informarle
que, una vez que hemos concluido la revisin del documento titulado:
"SUCESIN DE LA COMUNIDAD BACTERIANA EN SUELOS SALINOS
ENMENDADOS CON PAJA DE MAZ Y GLUCOSA", que presenta el C . Hctor
Manuel Lpez Prez como requisito para obtener el grado de Maestro en
Ciencias, determinamos que las observaciones que se le hicieron al
documento han sido incorporadas y por lo tanto otorgamos nuestra
autorizacin para que se realice su impresin final y de esta manera
continen los trmites .acadmicos correspondientes.
Agradecemos de antemano la oportunidad brindada en la revisin de este
documento, y al mismo tiempo nos ponemos a sus respetables rdenes para
continuar apoyando la formacin de recursos humanos de alta calidad.

UNIVERSIDAD DE COLIMA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS
Tecomn, Col., a 15 de Noviembre de 2002
Asunto: Liberacin de Tesis de Maestra

DR. SERGIO AGUILAR ESPINOSA

RESPONSABLE DEL POSGRADO EN BIOTECNOLOGA
PRESENTE.
Por este medio me dirijo a Usted, para informarle que, una vez que hemos
discutido la revisin hecha por los revisores, as realizadas las observaciones del
documento titulado: "SUCESIN DE LA COMUNIDAD BACTERIANA EN
SUELOS SALINOS ENMENDADOS CON PAJA DE MAZ Y GLUCOSA", que
presenta el C. Hctor Manuel Lpez Prez como requisito para obtener el grado
de Maestro en Ciencias, he determinado que el documento rene los requisitos
necesarios para que el mencionado alumno pueda obtener el grado
presentndose con la defensa de dicho documento.

Agradezco la oportunidad brindada para colaborar en la formacin de recursos

humanos de alta calidad.
Sin ms por el momento, reciba un cordial saludo.

ATENTAMENTE

c.c.p. Dr. Carlos E. Izquierdo Espinal. Delegado Regional No. 2

c.c.p. Ing. Rodolfo V. Morentn Delgado. Director de la F. C. B. A.
c.c.p. Hctor Manuel Lpez Prez. Alumno
c.c.p. Archivo