EXTRACCION DE LIPIDOS, DETERMINACION DE SU CONTENIDO EN FOSFATOS Y

ESTUDIO POR CROMATOGRAFA

1. INTRODUCCIN:
Los lpidos comprenden un grupo heterogneo de sustancias, ampliamente distribuidas en
animales y vegetales, cuya caracterstica comn es ser insolubles o poco solubles en agua y
solubles en solventes orgnicos. Esta propiedad se explica por la escasa polaridad de sus
molculas.
Son bsicamente steres de cidos grasos con diferentes alcoholes (glicerol, colesterol, esfingol).
Los lpidos, a diferencia de los aminocidos (que generan polipptidos) o los glcidos (que se
agrupan en polisacridos), no forman estructuras polimricas macromoleculares razn por la cual
su masa no alcanza valores muy elevados.
Desde el punto de vista biolgico desempean importantes funciones:
Son componentes esenciales de los seres vivos, en los que constituyen parte fundamental de
todas las membranas celulares. Las combinaciones de lpidos y protenas (lipoprotenas) son
constituyentes importantes de las clulas, presentes tanto en la membrana celular como en las
mitocondrias dentro del citoplasma y sirven tambin como medio para el transporte de lpidos en la
sangre.
En los animales forman el principal material de reserva energtica (grasas neutras). En el
organismo las grasas sirven como fuente de energa, de un modo directo as como de un modo
potencial, ya que se almacenan en el tejido adiposo. Tambin sirven como aislante trmico en el
tejido subcutneo y alrededor de ciertos rganos, y los lpidos no polares actan como aislantes
elctricos que permiten la rpida propagacin de las ondas de despolarizacin a lo largo de los
nervios mielinizados.
Desde el punto de vista nutritivo, los lpidos de los alimentos son importantes fuentes de energa
por su alto contenido calrico y, adems, frecuentemente vehiculizan vitaminas liposolubles estn
relacionadas con este grupo de compuestos numerosas sustancias de importante actividad
fisiolgica, como algunas vitaminas, hormonas, cidos biliares, etctera.
Los lpidos son biomolculas orgnicas formadas bsicamente por carbono e hidrgeno y
generalmente tambin oxgeno; pero en porcentajes mucho ms bajos. Adems pueden contener
tambin fsforo, nitrgeno y azufre .
Clasificacin de los lpidos
Los lpidos se clasifican en dos grupos, atendiendo a que posean en su composicin cidos
grasos (Lpidos saponificables) o no lo posean ( Lpidos insaponificables ).

Lpidos saponificables
Simples
Acilglicridos
Cridos
Complejos
Fosfolpidos
Glucolpidos
Lpidos insaponificables
Terpenos
Esteroides
Prostaglandinas
cidos grasos
Los cidos grasos son molculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada de tipo lineal, y
con un nmero par de tomos de carbono. Tienen en un extremo de la cadena un grupo carboxilo
(-COOH).

Se conocen unos 70 cidos grasos que se pueden clasificar en dos grupos :

Los cidos grasos saturados slo tienen enlaces simples entre los tomos de carbono. Son
ejemplos de este tipo de cidos el mirstico (14C);el palmtico (16C) y el esterico (18C) .
Los cidos grasos insaturados tienen uno o varios enlaces dobles en su cadena y sus molculas
presentan codos, con cambios de direccin en los lugares dnde aparece un doble enlace. Son
ejemplos el olico (18C, un doble enlace) y el linoleco (18C y dos dobles enlaces).

Propiedades de los cidos grasos

Solubilidad. Los cidos grasos poseen una zona hidrfila, el grupo carboxilo

(-COOH) y una zona lipfila, la cadena hidrocarbonada que presenta grupos metileno (-CH2-) y
grupos
metilo
(-CH3)
terminales.
Por eso las molculas de los cidos grasos son anfipticas, pues por una parte, la cadena
aliftica es apolar y por tanto, soluble en disolventes orgnicos (lipfila), y por otra, el grupo
carboxilo es polar y soluble en agua (hidrfilo).
Desde el punto de vista qumico, los cidos grasos son capaces de formar enlaces ster con los
grupos
alcohol
de
otras
molculas.
Cuando estos enlaces se hidrolizan con un lcali, se rompen y se obtienen las sales de los cidos
grasos correspondientes, denominados jabones, mediante un proceso denominado
saponificacin.

Lpidos simples
Son lpidos saponificables en cuya composicin qumica slo intervienen carbono, hidrgeno y
oxgeno.
Acilglicridos
Son lpidos simples formados por la esterificacin de una, dos o tres molculas de cidos grasos
con una molcula de glicerina. Tambin reciben el nombre de glicridos o grasas simples
Segn el nmero de cidos grasos, se distinguen tres tipos de estos lpidos:

los monoglicridos, que contienen una molcula de cido graso

los diglicridos, con dos molculas de cidos grasos
los triglicridos, con tres molculas de cidos grasos.
Los acilglicridos frente a bases dan lugar a reacciones de saponificacin en la que se producen
molculas de jabn.

Ceras
Las ceras son steres de cidos grasos de cadena larga, con alcoholes tambin de cadena larga.
En general son slidas y totalmente insolubles en agua. Todas las funciones que realizan estn
relacionadas con su impermeabilidad al agua y con su consistencia firme. As las plumas, el pelo ,
la piel,las hojas, frutos, estn cubiertas de una capa crea protectora.
Una de las ceras ms conocidas es la que segregan las abejas para confeccionar su panal.
Lpidos complejos
Son lpidos saponificables en cuya estructura molecular adems de carbono, hidrgeno y
oxgeno,
hay
tambin
nitrgeno,
fsforo,
azufre
o
un
glcido.
Son las principales molculas constitutivas de la doble capa lipdica de la membrana, por lo que
tambin se llaman lpidos de membrana. Son tambin molculas anfipticas.
Fosfolpidos
Se caracterizan por presentar un cido ortofosfrico en su zona polar. Son las molculas ms
abundantes de la membrana citoplasmtica.
Algunos ejemplos de fosfolpidos

Glucolpidos
Son lpidos complejos que se caracterizan por poseer un glcido. Se encuentran formando parte
de las bicapas lipdicas de las membranas de todas las clulas, especialmente de las neuronas.
Se sitan en la cara externa de la membrana celular, en donde realizan una funcin de relacin
celular, siendo receptores de molculas externas que darn lugar a respuestas celulares.

Terpenos
Son molculas lineales o cclicas que cumplen funciones muy variadas, entre los que se pueden
citar:
Esencias vegetales como el mentol, el geraniol, limoneno, alcanfor, eucaliptol, vainillina.
Vitaminas, como la vit. A, vit. E, vit.K.
Pigmentos vegetales, como la carotina y la xantofila.
Esteroides
Los esteroides son lpidos que derivan del esterano. Comprenden dos grandes grupos de
sustancias:
Esteroles: Como el colesterol y las vitaminas D.
Hormonas esteroideas: Como las hormonas suprarrenales y las hormonas sexuales.
COLESTEROL

El colesterol forma parte estructural de las membranas a las que confiere estabilidad. Es la
molcula base que sirve para la sntesis de casi todos los esteroides
HORMONAS SEXUALES

Entre las hormonas sexuales se encuentran la progesterona que prepara los rganos sexuales
femeninos para la gestacin y la testosterona responsable de los caracteres sexuales masculinos
HORMONAS SUPRARRENALES

Entre las hormonas suprarrenales se encuentra la cortisona, que acta en el metabolismo de los
glcidos, regulando la sntesis de glucgeno.

Prostaglandinas
Las prostaglandinas son lpidos cuya molcula bsica est constituida por 20 tomos de carbono
que forman un anillo ciclopentano y dos cadenas alifticas.

Las funciones son diversas. Entre ellas destaca la produccin de sustancias que regulan la
coagulacin de la sangre y cierre de las heridas; la aparicin de la fiebre como defensa de las
infecciones; la reduccin de la secrecin de jugos gstricos. Funcionan como hormonas locales.
Funciones de los lpidos
Los lpidos desempean cuatro tipos de funciones:
Funcin de reserva. Son la principal reserva energtica del organismo. Un gramo de grasa
produce 9'4 kilocaloras en las reacciones metablicas de oxidacin, mientras que protenas y
glcidos slo producen 4'1 kilocalora/gr.
Funcin estructural. Forman las bicapas lipdicas de las membranas. Recubren rganos y le dan
consistencia, o protegen mecnicamente como el tejido adiposo de pis y manos.
Funcin biocatalizadora. En este papel los lpidos favorecen o facilitan las reacciones qumicas
que se producen en los seres vivos. Cumplen esta funcin las vitaminas lipdicas, las hormonas
esteroideas y las prostaglandinas.
Funcin transportadora. El transporte de lpidos desde el intestino hasta su lugar de destino se
realiza mediante su emulsin gracias a los cidos biliares y a los proteolpidos.
Reaccin de saponificacin
Saponificacin. Es una reaccin tpica de los cidos grasos, en la cual reaccionan con lcalis y
dan lugar a una sal de cido graso, que se denomina jabn. Las molculas de jabn presentan
simultneamente una zona lipfila o hidrfoba, que rehuye el contacto con el agua, y una zona
hidrfila o polar, que se orienta hacia ella, lo que se denomina comportamiento anfiptico.
Reaccin de esterificacin
Esterificacin. Un cido graso se une a un alcohol mediante un enlace covalente, formando un
ster y liberndose una molcula de agua.

2. OBJETIVOS :
Objetivo general:
Estudiar muestras de lpidos por medio de diferentes tcnicas de separacin en relacin a su
contenido en fosfatos
Objetivos especficos:
Observacin cualitativa de los componentes de yema de huevo
Separar de la yema de huevo triacilglicridos y fosfolipids por medio de extraccin
Determinar el contenido
espectrofotomtricos.

de

fsforo

en

fosfolpidos

por

medio

de

procedimientos

Realizar un estudio cromatogrfico y determinar el nmero de componentes de la muestra

fosfolipidica.
Calcular el Rf de los diferentes componentes de la muestra fosfolpidica.
3. PROCEDIMIENTO:
Observaciones iniciales:
Yema de huevo
(aprox. 0,5 ml. )

Agregar

Agua
(1 ml. )

Etanol
(1 ml )

Acetona
(1 ml )

CloroformoMetanol 2:1
(1 ml)

Filtrar
Acetona
(1 ml )

Agregar

Filtrado
(mezcla)

Extraccin de lpidos neutros y fosfoipidos:

Yema de
huevo

agregar

Mezcla
CloroformoMetanol 2:1
(40 ml)

filtrar
Solucin
De NaCl
(25 ml)

lavar

Filtrado
(mezcla)

recolectar
Residuo

Fase
Orgnica

evaporar

agregar
Mezcla
(2 fases )

enfriar

Acetona
(15 ml )

decantar
Precipitado

redisolver

Solucin B

ter de
Petrleo
(10 ml )

Determinacin de fsforo de las dos fracciones:

TUBO A

TUBOB

evaporar
40 mg de
lpidos no
fosforilados

40 mg de
lpidos
fosforilados

2 ml
H2SO4

1 ml
H2SO4

agregar

digerir
H2O2
Por gotas

Solucin de
fsforo
10 ppm

H2O2
Por gotas

agregar
40 ml
H2O

40 ml
H2O

aforar
Agua
Destilada
Hasta 50 ml

Agua
Destilada
Hasta 50 ml

2 ppm

4 ppm

6 ppm

8 ppm

Colocar 5ml
Tubo 1
H2O
destilada

Tubo2
Muestra
A

Tubo 3
M . A.
1;10

Tubo 4
Muestra
B

Tubo 5
M. B.
1:10

2 ml de
solucion de molibdato y
0,8 ml de
sulfato ferroso

Leer a 740nm

Tubo 6
2 ppm

Tubo 7
4 ppm

Tubo 8
6 ppm

Tubo 9
8 ppm

Resolucin de la mezcla de fosfolipidos mediante cromatografia

Cromatofolio
(18 X 4 )

Marcar

franjas

Frente del
Disolvente
marcar
1 cm.

Sembrar

Cortar las
cuatrofranjas

Frasco con

Sacar

eluyente

Una gota

introducir Con capilar

asperjar

Bisulfato de

Ninhidrina

Amonio
(20%)

colocar
Estufa a
105c
(20 min. )

4.) RESULTADOS.
Determinacin del contenido de fsforo de las dos fracciones:
Tubo A tonalidad amarillenta
Tubo B tonalidad blanquecina

cido
sulfrico
(diluido)

Observacin: Todas las muestras con sulfato ferroso calientan

Muestra

Color

Absorvancia
740 nm
Agua destilada Precipitado azul
0
Patrn 2ppm
Transparente
0.01
Patrn 4ppm
Transparente
0.028
Patrn 6ppm
Precipitado verde
0.051
Patrn 8ppm
Transparente
0.045
Muestra A
Cambia de amarillo fuerte a amarillo ms intenso 0.081
y se generan dos fases: fase lquida transparente
y un precipitado amarillo
Muestra A 1:10 Cambia de amarillo intenso a amarillo menos 0.003
intenso formndose dos fases: fase lquida
transparente y precipitado amarillo
Muestra B
Cambia de amarillo fuerte a amarillo intenso
0.226
Muestra B 1:10 Cambia de amarillo fuerte a amarillo menos 0.008
intenso
* Clculos:
R = -0.48
Y = a + bx
A = 4.2
B = -0.59
Grfica:
Muestra

Absorvancia74
0 nm

0
0,6
1,6
2
4
6
8
16,2
45,2

0
0,003
0,008
0,01
0,028
0,151
0,045
0,081
0,226

- Muestra A:
Si
Y = 0.081
Entonces
X = 6.98
- Muestra A:10
Si
Y = 0.003
Entonces
X = 7. 11
- Muestra B:10:
Si
Entonces

Y = 0.008
X = 7.1

Muestra B:
Si
Entonces

Y = 0.226
X = 6.7

Resolucin de la mezcla de fosfolpidos mediante cromatografa:

No existen resultados.

5. DISCUSIONES:
En la tercera parte del laboratorio (resolucin de la mezcla de fosfolpidos mediante
cromatografa), no existen resultados, esto posiblemente se debi ya que no se utiliz papel de
cromatografa en capa fina correcto. La presencia de lpidos no fue observada.
El porcentaje obtenido de fosfatos en un fosfolpido es demasiado bajo en relacion al encontrado
en bibliografa. Es posible que la muestra haya estado contaminada o que la proporcin de
reactivos utilizados hayan sido incorrectos (preparacin desequilibrada).
6. CONCLUSIONES:
Los lpidos pueden ser separados por distintos mtodos de acuerdo a la afinidad polar, debido a
esto se utiliz acetona triglicridos y colesterol de fosfolpidos.
Por el porcentaje obtenido, se determino que en la yema de huevo no hay gran cantidad de
fosfolpidos.
El porcentaje de fsforo encontrado en las muestras fue muy bajo en relacin al porcentaje
utilizado en la muestra patrn.
7. CUESTIONARIO
Definir a que se denomina lpido y que roles juegan los lpidos en la yema de huevo.
Lipidos, grupo heterogeneo de substancias que se encuentran en los organismos vivos.Los lipidos
se hacen notar de otros tipos de copuestos organicos, por que no son solubles en agua
(hidrosolubles ) sino en disolventes orgnicos ( alcohol y eter).
Entre los lpidos ms importantes estn los fosfolpidos, que son componentes mayoritarios de la
membrana de la celula.
Los fosfolpidos limitan el paso del agua y compuestos hidrosolubles a travs de la membrana
celular, permitiendo asi a la celula mantener un reparto desigual de estas sustancias entre el
exterior y el interior .
Los roles que cumplen son delimitacin de la membrana bilipdica que separa la yema de la clara.
Reserva de energa para el futuro embrin.
Dibujar las estructuras de los lpidos que se espera observar en la yema de huevo.

Fosfolpido

Triglicrido
C17 H35 - CO OH
HO CH2
C17 H35 - CO OH + HO CH =
C17 H35 - CO OH
HO CH2
3 molculas de
Glicerina
cidos estericos

C17H35 CO O CH2
3 H2O
C17H35 CO O CH
C17H35 CO O CH2
Triestearina

Colesterol

Explicar como se puede llevar a cabo una cromatografa de lpidos en fase gaseosa y qu
ventajas presenta.
El anlisis de las complejas mezclas de cidos grasos obtenidos por hidrlisis de los lpidos
naturales, constituy un problema, hoy da puede realizarse el anlisis preciso y muy sensibilizado
de mezclas de cidos grasos mediante la cromatografa gas-lquido. En ste procedimiento los
cidos grasos son convertidos en una forma ms voltil, generalmente sus steres metlicos. Se
emplea un transporte inerte gaseoso como el nitrgeno, como fase mvil.

8. BIBLIOGRAFA

Donald, V. 1995. Bioqumica. 2da Edicin. Editorial Jhon Wiley New York

Lehninger, A. 1994. Bioqumica. Decimosptima reimpresin. EDICIONES OMEGA S.A.

Barcelona, Espaa.

Smith y Feinberg. 1979. Cromatografia sobre el papel, capa fina y electroforesis. Primera
edicin. Editorial Alhamba.