ANTICUERPOS MONOCLONALES Y SU

APLICACION EN HEMATOLOGIA.
RAMON F. MONTAO y EGIDIO L. ROMANO.
Ramn Montao, bilogo venezolano con postgrado en Inmunologa. Profesional de Investigacin del IVIC,
en el Centro de Medicina Experimental. Actualmente finaliza estudios a nivel de Doctorado en Inmunologa
en el IVIC y su ms reciente rea de trabajo ha sido el desarrollo, la produccin y caracterizacin de
anticuerpos monoclonales humanos. Direccin: Centro de Medicina Experimental, IVIC, Apartado 21827,
Caracas 1020-A, Venezuela.
Egidio Romano: Mdico venezolano con postgrado en Bioqumica e Inmunologa. Investigador Titular del
IVIC, en el Centro de Medicina Experimental Sus campos principales de trabajo son la Inmunohematologa y
la Inmunoqumica aplicadas fundamentalmente a enfermedades de la sangre. Direccin: Laboratorio de
Fisiopatologa, Centro de Medicina Experimental, IVIC, Apartado 21827, Caracas 1020-A.

RESUMEN
Desde su descubrimiento hacia finales del siglo pasado, los anticuerpos
han sido considerados molculas con una enorme potencialidad analtica
debido a su exquisita especificidad. Pero fue solo despus de la
introduccin por Khler y Milstein en 1975 de la tcnica para producir in
vitro anticuerpos con una especificidad predeterminada, que estos
reactivos pusieron de manifiesto su tremenda versatilidad prctica. La
posibilidad de producirlos en grandes cantidades y en forma pura y
adems el estar bien caracterizados qumicamente ha permitido que los
anticuerpos monoclonales (as se llama al producto obtenido de la
aplicacin de la mencionada tcnica) sean objeto de mltiples
aplicaciones. Las ms tempranas, afines de los aos setenta y principios
de los ochenta, se relacionaron con pruebas de histocompalibilidad y
reconocimiento de molculas de diferenciacin en clulas normales o
tumorales y con el reconocimiento de eptopos especficos en virus,
bacterias y otros microorganismos, o en molculas individuales de
protenas, carbohidratos, cidos nucleicos, etc. Ello redund en un
conocimiento ms detallado de distintas subpoblaciones celulares, de los
diferentes estadios de diferenciacin celular en diversos tejidos, en un
mejor tipeaje celular, en una mejor identificacin de microorganismos y
de sus variedades tanto para diagnstico como para epidemiologa y en
una gran cantidad de pruebas diagnsticas tipo ELISA y
radioinmunoensayo. En su versin original la tcnica descrita por Khler
y Milstein permite la produccin de anticuerpos monoclonales de origen
mrido, los cuales han sido y son actualmente de gran utilidad dentro del
campo de la hematologa y medicina en general. Desgraciadamente, su

uso en aplicaciones teraputicas y en el diagnstico in vivo de

enfermedades humanas se ha visto limitado. La presencia de anticuerpos
"naturales" anti-inmunoglobulina de ratn y la aparicin de una respuesta
inmune humoral secundaria a la administracin de estos reactivos en el
ser humano parecen ser los principales responsables de esta limitacin.
Lo anterior se ha constituido en la motivacin fundamental que ha
impulsado el desarrollo de tcnicas para la produccin de anticuerpos
monoclonales de origen humano, con la fundada esperanza de que
stos, al ser administrados en protocolos de profilaxia, terapia o en
aplicaciones diagnsticas, sean mucho menos inmunognicos que los de
ratn . El alcance potencial de utilizacin de los anticuerpos
monoclonales es tremendamente amplio e incluye campos como el
tratamiento del cncer, facilitamiento de transplantes de rganos,
imagenologa de tumores, entre otros. Desafortunadamente, la aplicacin
de esquemas anlogos a los utilizados en el modelo del ratn para la
generacin de anticuerpos monoclonales humanos no ha rendido los
frutos anticipados; un sinnmero de dificultades tcnicas han tenido que
ser enfrentadas y la literatura en el rea est llena de diferentes mtodos
de produccin y de "mejoras" a los procedimientos. De forma general,
dos caminos principales se utilizan actualmente para la produccin de
anticuerpos monoclonales humanos. Uno es la inmortalizacin de las
clulas productoras de anticuerpos, lo cual se logra mediante la
transformacin con el virus de Epstein-Barr y/o la generacin de
hibridomas y, ms recientemente, por medio del uso de tcnicas A
Ingeniera Gentica, las cuales se han revelado como una herramienta
tremendamente poderosa y promisoria para la preparacin, modificacin
y mejoramiento de los anticuerpos monoclonales, tanto de origen mrido
como humano. Estas dos aproximaciones, independientemente o en
forma combinada, son utilizadas en numerosos laboratorios en el mundo
para producir reactivos monoclonales humanos que eventualmente
puedan ayudar de manera efectiva a la prevencin, el tratamiento y
diagnstico de las enfermedades humanas. / PALABRAS CLAVE
/Anticuerpos monoclonales/ hematologa /

El trabajo pionero de Landsteiner a principios de siglo, que desemboc

en el descubrimiento de los grupos sanguneos y fue la base de lo que
hoy conocemos como "Bancos de Sangre", ilustr el potencial de los
anticuerpos como herramientas analticas. Pero fue solamente hacia la
mitad de este siglo que estas molculas comenzaron a ser utilizadas
eficientemente para la identificacin de subpoblaciones celulares. Esta

aplicacin analtica de los anticuerpos, es decir, el poder distinguir

poblaciones de clulas funcionalmente distintas pero morfolgicamente
similares, de tanta importancia en hematologa, experiment un avance
sustancial con el advenimiento de la metodologa que permiti el cultivo
continuo, en condiciones de laboratorio, de las clulas productoras de los
anticuerpos.
La clula responsable de la produccin de los anticuerpos es un tipo
particular de glbulo blanco denominado "linfocito B". Un principio
esencial en inmunologa es que cada linfocito B es capaz de producir
anticuerpos con una especificidad nica (Burnet 19591 As mismo, toda
la descendencia de ese linfocito B, es decir el "clon" que de l se derive,
tambin producir exactamente el mismo anticuerpo. Por lo tanto, para
producir anticuerpos idnticos unos a otros, "monoclonales", todo lo que
hace falta es poder cultivar en forma continua, en condiciones de
laboratorio, un clon de linfocitos B. En el sobrenadante de esos cultivos,
se tendrn secretados los anticuerpos monoclonales deseados.
Desgraciadamente, dada su naturaleza "mortal", los linfocitos B son
incapaces de crecer en cultivo ms all de una semana. De esta manera,
el obstculo fundamental para producir anticuerpos en el laboratorio
reside en lograr cultivar en forma continua los linfocitos B. A principios de
los aos setenta ya se dispona de la capacidad tcnica para el cultivo in
vitro de ciertas clulas malignas, entre ellas los linfocitos B provenientes
de un tipo de tumor llamado mieloma mltiple o plasmacitoma. Estas
clulas tienen la capacidad de crecer continua y cionognicamente, es
decir, de forma que una sola clula puede multiplicarse y originar muchas
otras idnticas. En 1975, George Khler y Csar Milstein, en un trabajo
seminal que les vali posteriormente el Premio Nobel, demostraron que
es posible fusionar o hibridar clulas de mieloma con linfocitos B, que los
hbridos resultantes heredan la capacidad para crecer indefinidamente en
cultivo y para producir anticuerpos, y que adems es posible aislar del
producto heterogneo de fusin. aquellos hbridos productores del
anticuerpo en el que se est interesado (Khler y Milstein, 1975).
En su forma inicial, la tcnica descrita por Khler y Milstein permite la
obtencin de anticuerpos monoclonales de ratn. Mediante el uso de
tcnicas similares se han preparado reactivos monoclonales
provenientes de otras especies e incluso de origen humano (James y
Bell, 1987; Glassy, 1993). La presente revisin pretende desarrollar, en
una forma accesible al lector no especialista, los aspectos ms
resaltantes de estas metodologas, haciendo nfasis en las tremendas

posibilidades prcticas de estos reactivos y en los avances recientes

para su produccin.
El proceso de produccin de un anticuerpo monoclonal implica entonces
la generacin de los hbridos o, ms apropiadamente, de los hibridomas
productores del mismo y ello involucra una serie de pasos o etapas
esenciales, las cuales se describen a continuacin.
Produccin de Anticuerpos Monoclonales de origen Mrido
Inmunizacin
En teora, es factible producir anticuerpos monoclonales especficos para
cualquier antgeno capaz de ser reconocido por los linfocitos B. Para la
inmunizacin es conveniente el uso de preparaciones puras de antgeno
en las cuales el peligro de competencia antignica, que pudiese desviar
la respuesta inmune humoral hacia una molcula irrelevante, no existe.
Pero en muchos casos el antgeno de inters se encuentra en una
molcula de la superficie celular difcil de aislar, lo que obliga a la
utilizacin de clulas Completas o extractos de membranas para la
inmunizacin (Goding, 1980). En otros casos, por ejemplo cuando se
trata de drogas o molculas pequeas, stas deben ser conjugadas a
portadores, y son estos conjugados las preparaciones usadas para la
inmunizacin (Hudson y Hay, 1989).
A menos que se trate de molculas poco inmunognicas, la inmunizacin
se realiza rutinariamente mediante la inyeccin M antgeno por va
subcutnea o intraperitoneal y en la forma de una emulsin. Ello permite
la liberacin lenta y constante del antgeno, asegurando una estimulacin
permanente. Esta inmunizacin se efecta en mltiples ocasiones,
normalmente en intervalos de dos semanas, para asegurar una buena
estimulacin y amplificacin de los clones de linfocitos B especficos para
el antgeno de inters (Harlow y Lane, 1988). La ltima estimulacin
usualmente se hace tres das antes de la fusin y por va intravenosa
para as obtener, en el bazo del animal inmunizado, una mxima
respuesta y una poblacin de clulas respondientes en fase de divisin.
Fusin
Luego de culminado el protocolo de inmunizacin y que se tiene la
certeza de que el mismo ha sido efectivo, el animal experimental es
sacrificado y se le extrae el bazo. Los linfocitos B, bien como parte del

total de la suspensin de clulas esplnicas o previamente purificados,

se mezclan con un nmero apropiado de clulas de mieloma que se
mantienen creciendo exponencialmente in vitro. Lo que sigue a
continuacin es el proceso de fusin en s, el cual debe realizarse a 37 y
consiste en aadir a la mezcla de clulas un pequeo volumen de un
agente fusgeno denominado polietilenglicol (PEG), mezclando
suavemente por espacio de uno a tres minutos. En estas condiciones, las
membranas de algunas de las clulas se fusionan, unindose los
citoplasmas y formndose los hibridomas. El PEG luego se elimina por
lavado y las clulas fusionadas se siembran en microplacas de cultivo
(Yokoyama, 1992).
El proceso de fusin es muy ineficiente: en general, menos del 1% de las
clulas terminan fusionndose (Johnstone y Thorpe, 1987; Harlow y
Lane, 1988). Esto trae como consecuencia que se requiera de un nmero
de clulas relativamente alto para el proceso de fusin (un bazo de ratn
contiene del orden de 101 clulas). En algunas circunstancias es posible
enriquecer la poblacin de linfocitos B especficos para el antgeno, lo
cual se logra asociando el antgeno a una fase slida y utilizando
procedimientos de aislamiento como separacin inmunomagntica
(Ossendorp et al., 1989 Lundkvist et al., 1993) o roseteo con glbulos
rojos recubiertos con el antgeno de inters (Myers et al., 1986). De
tenerse el equipo necesario, en los casos en los que se dispone de
pocas clulas, es preferible realizar la fusin mediante el proceso
denominado electrofusin, el cual resulta mucho ms eficiente (Foung,
1990).
Seleccin
Dado que la fusin es un evento completamente al azar, la mezcla de
clulas obtenidas luego de la misma estar formada por esplenocitos,
clulas de mieloma, esplenocitos fusionados entre s, clulas de mieloma
fusionadas entre s y adems por los hibridomas linfocito B-clula de
mieloma. En cultivo, los esplenocitos no fusionados mueren con el
tiempo por ser clulas normales. Sin embargo, las mielomatosas al ser
clulas tumorales pueden vivir indefinidamente y como se replican con
mayor rapidez que los hibridomas, creceran en forma predominante,
"ahogando" al resto de las clulas.
De lo anterior se desprende la necesidad de disponer de un mecanismo
de seleccin que permita solamente el crecimiento de los hibridomas,
eliminando a las clulas mielomatosas. Esto se obtiene con el llamado

medio HAT y el fundamento en que se basa es el siguiente: Las clulas

eucariotas disponen de dos vas para la sntesis del ADN. Una es la
llamada "va principal o de novo" y la otra es la "va de rescate", en la
cual se requiere la enzima hipoxantina-guanina-fosforibosiltransferasa (HGPRT) (Harlow y Lane, 1988). La clave de la seleccin
est en que las clulas de mieloma que se utilizan para la fusin son
deficientes en la enzima HGPRT, es decir, que sintetizan su ADN
nicamente por la va principal. Esta va principal puede ser bloqueada
por la adicin de la droga aminopterina (Hudson y Hay, 1989). De manera
que, si al medio de cultivo en el que crece el producto de fusin se aade
aminopterina, las clulas mielomatosas no fusionadas o fusionadas entre
s morirn, ya que sern incapaces de sintetizar ADN. Si consideramos
ahora las clulas hbridas, stas tienen la capacidad de crecimiento
tumoral heredada de las clulas mielomatosas, pero tambin tienen el
gen que codifica la enzima HGPRT, heredado de los linfocitos normales,
pudiendo sintetizar ADN por la va de rescate. De esta forma, en
presencia de Hipoxantina-Aminopterina-Timidina (HAT) las nicas clulas
con capacidad de crecimiento, "seleccionadas" gracias a un fenmeno de
complementacin gnica, son las hbridas.
Existe an otro evento de seleccin, el cual est destinado a identificar y
aislar, del total de hbridos producidos, a los hibridomas productores de
los anticuerpos de inters. La identificacin se logra con un mtodo
apropiado para la evaluacin de los sobrenadantes de cultivo y el
aislamiento se realiza mediante el clonamiento.
Evaluacin de los sobrenadantes de cultivo
Luego de unos siete a diez das post-fusin, en cada pozo de cultivo
habr varios hbridos creciendo, cada uno produciendo un anticuerpo
distinto y ser necesario aislarlos para obtener anticuerpos de una sola
especificidad. Para determinar en cules cultivos se encuentran los
anticuerpos con la especificidad deseada, y por ende las clulas
productoras de los mismos, se realizan ensayos de evaluacin o
"screening" en los sobrenadantes de cultivo. La forma que toman estos
ensayos de identificacin es variada y depende en buena medida del
antgeno emulado. Las ms usadas son pruebas tipo ELISA, "dot-blot" o
radioinmunoensayo cuando se trata de antgenos solubles, y pruebas de
inmunofluorescencia, inmunohistoqumica o de aglutinacin si el antgeno
est asociado a la membrana celular. En todo caso, embarcarse en la
tarea de producir anticuerpos monoclonales de una especificidad dada
sin antes tener un procedimiento de prueba o screening para dicho

anticuerpo que sea rpido, sencillo, especfico, sensible y aplicable a un

nmero elevado de muestras, es una tarea destinada al fracaso.
Clonamiento
Para obtener una preparacin monoclonal de anticuerpos, es necesario
aislar clones de clulas, en los que cada una es rplica exacta de la otra.
El procedimiento mediante el cual se obtienen muchas clulas idnticas
por replicacin a partir de una sola se denomina clonamiento. El mtodo
ms comn consiste en sembrar suspensiones celulares a gran dilucin
de manera que en un volumen dado pueda haber en promedio de
ninguna a unas pocas clulas. Una dificultad de este mtodo llamado
de dilucin al lmite (Harlow y Lane, 1988), es que las clulas no crecen
bien cuando estn aisladas. La manera usual de resolver este problema
es utilizar clulas nodrizas, generalmente fibroblastos o macrfagos, que
proveen la ayuda necesaria para el crecimiento a baja densidad (James y
Bell, 1987). Otro procedimiento menos empleado para el aislamiento de
los hibridomas es la siembra en medios semislidos de cultivo, la
posterior toma de las colonias y su siembra en medio lquido (Freshney,
1987).
Escalamiento de la produccin de anticuerpos monoclonales
Una vez que se han superado todos los inconvenientes y se ha logrado
obtener el hibridoma productor del anticuerpo deseado, el prximo paso
es su cultivo a escala para obtener el anticuerpo en las cantidades
deseadas. La produccin a mediana escala de los anticuerpos se puede
efectuar inoculando el hibridoma correspondiente en la cavidad
peritoneal de ratones singnicos a la lnea de mieloma utilizada para la
fusin y hacindolo crecer como un tumor mielomatoso, obtenindose el
anticuerpo en forma de lquido asctico (Gavilondo, 1990). A ora escala
de produccin, el cultivo se puede hacer en botellas rotatorias, en fibras
huecas o en fermentadores especiales diseados para tal fin (Freshney,
1987; Corrigan, 1988; Lubiniecki, 1990). Para aplicaciones clnicas el
anticuerpo debe estar caracterizado tanto qumica como funcionalmente
y con un alto grado de pureza (Sullman, 1989; Lucas, 1989;
Ronneberger, 1989). Otro aspecto de importancia para la produccin
es et almacenaje de los hibridomas. Esto se logra mediante
congelamiento en tanques especiales de nitrgeno lquido, en los cuales
las clulas son congeladas cuando se encuentran creciendo en fase
exponencial y con un alto ponerle de viabilidad. (Daggett y Simione,
1987).

Resumen del Proceso de Produccin de un Anticuerpo Monoclonal

Mrido
En la figura 1 se esquematizan los pasos necesarios para el desarrollo
de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales de ratn.

FIGURA 1. PROCEDIMIENTO PARA LA OBTENCION DE ANTICUERPOS MONOCLONALES DE RATON. TOMADO DE

MILSTEIN (1980)

Aplicaciones de los Anticuerpos Monoclonales de origen Mrido

Generalidades
Debido a que los anticuerpos monoclonales son reactivos qumicamente
bien definidos, susceptibles de ser producidos en forma pura y en
grandes cantidades, su uso potencial es muy extenso.
Las aplicaciones ms tempranas, a fines de los aos setenta y principios
de los ochenta, se relacionaron con pruebas de histocompatibilidad y
reconocimiento de molculas de diferenciacin en clulas normales o
tumorales, con el reconocimiento de eptopos especficos en virus,
bacterias y otros microorganismos, o en molculas individuales de
protenas, carbohidratos, cidos nucleicos, etc. Esto redund en un
conocimiento ms detallado de distintas subpoblaciones celulares, de los
diferentes estadios de diferenciacin celular en diversos tejidos, en una
mejor tipificacin celular, en una mejor identificacin de microorganismos
y de sus variedades tanto para diagnstico como para epidemiologa y en
una gran cantidad de pruebas diagnsticas tipo radioinmunoensayo y
ELISA. En esta revisin slo se detallarn algunas aplicaciones en el
campo de la hematologa y de ndole general en medicina.
Anticuerpos monoclonales como reactivos de identificacin
eritrocitaria
Desde principios de siglo se han utilizado sueros tipificadores para el
sistema sanguneo ABO que contienen una mezcla policlonal de
anticuerpos especficos para los antgenos A y B. A principios de los aos
ochenta, tanto en Inglaterra como en Canad, se produjeron anticuerpos
monoclonales Igm-Anti-A y Anti-B con las caractersticas adecuadas para
ser buenos reactivos de identificacin eritrocitaria (Voak et al., 19821 Su
posterior produccin en escala industrial con la consiguiente disminucin
en los costos ha hecho que hoy en da sean de uso casi universal
(Rouger y Anstee, 1918).
En aos ms recientes, tambin se 'han producido -reactivos
monoclonales que reconocen los grupos sanguneos A1, A2, H, Le(a) y
Le(b),P y P1, M, N, Kell y Lutheran (Hughes-Jones y Parsons, 1992).
Curiosamente, para el sistema Rh no se ha logrado obtener hasta el
presente anticuerpos monoclonales mridos. Por razones desconocidas,

ratones y ratas no reconocen adecuadamente las distintas

especificidades dentro de este sistema. No obstante, s se dispone de
reactivos monoclonales Anti-Rh de origen humano, aspecto ste sobre el
cual volveremos ms adelante.
Reactivos para la prueba de Coomhs o anti-globulina
Reactivos monoclonales especficos para el fragmento Fc de la IgG
humana (anti-IgG), bien sea solos o en mezcla con monoclonales anticomplemento (anti-C3d y anti-C3c), tambin han sido producidos y son
de uso extendido por ser ms econmicos que los reactivos policlonales,
aunque no necesariamente de mejor calidad (Engelfriet y Voak, 1987).
Reactivos para tipificacin de histocompatibilidad
Reactivos monoclonales especficos para formas allicas del complejo
principal de histocompatibilidad humano HLA Clase I y Clase II se
encuentran comercialmente disponibles y han reemplazado en muchos
casos a sueros policlonales y a clulas homocigotas (Pistillo et al., 1988).
No obstante, es bueno sealar que ms recientemente la tipificacin
HLA-Clase II ha evolucionado hacia el uso de sondas de ADN y
amplificacin por reaccin en cadena de polimerasa (PCR) (Oka et al.,
1994; Versluis et al., 1994).
Inmunofenotipificacin
Anticuerpos monoclonales contra molculas de la superficie de clulas
de numerosos tejidos han sido preparados. Muchas de estas molculas
de superficie son utilizadas como marcadores especficos, bien sea de la
naturaleza de la clula o del estado de diferenciacin en el que se
encuentra. Corno ejemplo citaremos anticuerpos monoclonales
especficos para un complejo molecular llamado CD3 que se encuentra
en todos los linfocitos T pero no en los linfocitos B, contra las molculas
CD4 y CD8 que son marcadores especficos para linfocitos T
cooperadores y T citotxicos respectivamente y contra la molcula
llamada CD34, presente en clulas pluripotenciales hematopoyticas
(Horejsi, 1991; LDAD, 1993).
Mediante el uso de anticuerpos monoclonales tambin se han podido
identificar molculas asociadas a ciertos tumores, por ejemplo variantes
mutantes del oncogen P53 en tumores del tracto gastrointestinal

(Odgen et al., 1994) y de la mama (Jacquemier et al., 1994) y algunos

carbohidratos asociados a tumores linfohematopoyticos (de Vries y van
den Eijnden, 1992; Sell, 1993). La identificacin de estos marcadores en
biopsias y en aspirados de tejidos tumorales, secreciones, etc., permite la
tipificacin del tumor. Muchas veces esto es de gran inters porque no
slo ayuda al diagnstico sino que tambin la presencia o no de ciertas
molculas de diferenciacin puede estar asociada a un mejor o peor
pronstico (Geisler et al., 1991; Porter-Jordan y Lippman, 1994).
Usualmente la identificacin se realiza empleando los anticuerpos
monoclonales especficos, seguido de anticuerpos anti-ratn conjugados
a fluorescena y usando luego microscopa de fluorescencia o ms
modernamente con los aparatos llamados citofluormetros (Drouet y
Lees, 1993; Macey, 1993). Algunos ejemplos recientes de este tipo de
aplicaciones se esbozan a continuacin.
Inmunofenotipijicacin de leucemias
Anticuerpos monoclonales son utilizados para la caracterizacin del
fenotipo del blasto leucmico (De Waele et al., 1991; Traweek, 1993).
Algunos de los marcadores ms utilizados son: CD3, CD4, CD5, CD7,
CD8, CD 11,
CD13, CD14, CD16, CD19, CD20, CD21, CD22, CD30, CD33, CD34,
CD45, CALLA, la enzima TdT, inmunoglobulinas de superficie, RABI,
diversos eptopos del TCR, FcR, CR1, y en general, los marcadores
relacionados a clulas primitivas indiferenciadas, linfoblastos, blastos
relacionados a linfocitos T y linfocitos B, clulas mielomatosas, blastos
relacionados a la serie granuloctica, blastos relacionados a monocitos,
blastos indiferenciados de tipo mielomonocticos, etc. La caracterizacin
por la presencia o no de determinados marcadores, como se dijo antes
no slo permite un diagnstico ms preciso del tipo de malignidad sino
que tambin ayuda a establecer parmetros pronsticos (Mirro 1992)
Adicionalmente, puede obtenerse informacin acerca del grado de
eficacia de un tratamiento determinado y del grado de enfermedad
residual mediante la estimacin del porcentaje de blastos leucmicos
remanentes (De Rossi et al., 1993). Estudios similares a los anteriores
tambin se efectan en el caso de linfomas (Perkins y Kjeldsberg, 1993).
Diagnstico e Inmunotipificacin de Cncer
La deteccin de cncer es quizs una de las aplicaciones ms
importantes y de mayor potencial de los anticuerpos monoclonales. Estos

pueden ser usados in Ovo para la localizacin de tumores o de sus

metstasis cuando se dispone de reactivos especficos para antgenos
presentes en la membrana de la clula tumoral (Goldenberg y Schlom,
1993), o in vitro utilizndolos en ensayos tipo ELISA para la deteccin, en
muestras de suero u otros fluidos biolgicos, de molculas como la
gonadotropina corinica (Yoshimura et al., 1994), la alfafetoprotena (Sell,
1993) o el antgeno prosttico especfico (Sell, 1993; Ploch y Brawer,
19941 En el caso de antgenos asociados a membrana, los anticuerpos
monoclonales son conjugados a elementos trazadores radioactivos tales
como radioistopos del indio, tecnecio, iodo o bismuto, son administrados
en el paciente y luego se procede a tomar gammagrafas permitiendo la
localizacin y adems dando una idea de la masa tumoral. El campo de
esta aplicacin incluye multitud de tumores entre los cuales se destacan:
el de la mama, el uterino, el ovrico, el del colon, el del recto, el
prosttico, el del pulmn, el del hgado, y muchos otros ms (Goldenberg
y Schlom, 1993).
Diagnstico de trombosis
Una aplicacin potencial parecida a la anterior es la del diagnstico de
trombosis usando anticuerpos monoclonales con especificidad por
molculas asociadas al proceso de coagulacin, los cuales han sido
previamente radiomarcados (Wu et al., 1992). Estos anticuerpos,
mediante tcnicas de radioinmunoensayo e incluso ELISA, tambin
permiten el diagnstico de procesos patolgicos como por ejemplo
la coagulacin intravascular diseminada (Lill et al. 1993).
Aplicaciones teraputicas
Para ser utilizado como tratamiento, un anticuerpo monoclonal debe
combinarse directamente a un antgeno dado y causar la destruccin de
la clula portadora de dicho antgeno o ser conjugado a un compuesto
teraputico el cual es dirigido por el anticuerpo a un sitio especfico. En
este segundo caso, el anticuerpo puede ser conjugado a una droga, un
agente quimioteraputico, a un compuesto radioactivo, a una toxina, o
ser asociado genticamente a una toxina, formando las as llamadas
inmunotoxinas. Algunos ejemplos importantes de este grupo de
aplicaciones son los conjugados de anticuerpos monoclonales con la
cadena alta del ricino y con la toxina diftrica (LeMaistre et al., 1993; Li y
Ramakrishnan, 1994) y la utilizacin de inmunoliposomas llenos con
drogas como metotrexato y adriamicina (Jones y Hudson, 1993;
Uyama et al., 1994). Este tipo de conjugados ha sido usado para dirigir la

droga o la toxina al sitio propicio en pacientes con tumores de mama, de

ovario, de pulmn, colorectal y melanomas, entre otros (Skolnick, 1993;
Vitetta, 1994).
Anticuerpos monoclonales especficos para linfocitos T, B, para linfocitos
de leucemias linfoides crnicas de clulas T y de linfomas han sido y son
evaluados actualmente para el tratamiento de estas enfermedades
(Faguet y Agee, 1993; Grossbard y Nadler, 1994). Anticuerpos similares
son usados en procedimientos in vitro para la eliminacin de clulas
tumorales y de clulas T-citotxicas. La eliminacin de stas ltimas se
ha asociado con una menor frecuencia de reaccin injerto contra
husped en casos de trasplantes de mdula sea (Champlin et al.,
1990). El problema de la enfermedad injerto-contra husped es quizs la
complicacin ms seria de los trasplantes de mdula sea. En este
sentido, anticuerpos monoclonales especficos para el receptor, de la IL-2
han sido usados con xito en aquellos casos en los cuales la terapia con
corticosteroides ha fallado (Sykes, 1993). Estas preparaciones tambin
han sido empleadas con xito en algunos casos de anemia
aplsica (Schinger et al., 1993).
Otras aplicaciones
En el campo de la industria farmacolgica los anticuerpos monoclonales
tambin han sido de gran utilidad. Por ejemplo, empleando
procedimientos de cromatografa de afinidad, estos reactivos se usan
ampliamente en la purificacin de hormonas, citocinas y de otros
productos biolgicos destacndose el interferon alfa, beta y gamma, los
factores VIL VIII, IX y von Willebrandt de la coagulacin la uroquinasa, las
interleucinas IL-2 e IL-3, la gonadotropina corinica y algunas betaglicoprotenas especficas del embarazo. As mismo, anticuerpos
monoclonales dirigidos contra agentes patgenos tales como bacterias
gram-negativo, Hemophilus influenza, virus de la hepatitis A y B, o contra
productos bacterianos como el lipopolisacrido de la pared de bacterias
gram-negativo y toxinas como la diftrica o tetnica pueden su usados en
protocolos de inmunizacin pasiva (Ziegler et al, 1991; Lang et al., 1993;
Gustafsson et al., 1993).
Anticuerpos Monoclonales Humanos
Generalidades

como hemos podido apreciar, los anticuerpos monoclonales de origen

mrido han sido y son actualmente de gran utilidad dentro del campo de
la hematologa y medicina en general. Desgraciadamente, su uso en
aplicaciones teraputicas y de diagnstico in vivo se ha visto limitado por
una serie de obstculos. En primer lugar y como era de esperarse, la
administracin de inmunoglobulinas (Igs) de ratn al humano induce una
respuesta inmune en contar de estas protenas (la llamada respuesta
HAMA: "Human Anti-Murine Antibodies") que limita por una parte su
eficacia y utilidad, y por la otra la posibilidad de incrementar la dosis y/o
extender o repetir el tratamiento (Schroff et al., 1985; Larrick y Gavilondo,
1989). A eco se suma el descubrimiento reciente de que los seres
humanos poseen en abundancia y de forma "natural" ciertos anticuerpos
llamados anti-Gal que son especficos para el azcar "galactosa (alfa 1-3)
galactosa" (Galili et al., 1984). El problema con los anticuerpos anti-Gal
es que el azcar galactosa (alfa 1-3) galactosa se encuentra presente en
el componente glicosdico de las Igs de ratn (Thall y Galili, 1990;
Borrebaeck et al., 1993; Lund et al., 1993). En consecuencia, se ha
postulado que las Igs de ratn, al ser administradas pasivamente en un
ser humano, seran rpidamente reconocidas por los anticuerpos antiGal, pudiendo neutralizarse los efectos teraputicos buscados, incluso
antes de la aparicin de la mencionada respuesta HAMA (Borrebaeck et
al., 1993). Estudios recientes indican que la enzima responsable de la
incorporacin del azcar Gal (alfa 1-3) Gal en glicoprotenas y otras
biomolculas no es activa en los seres humanos y en consecuencia las
Igs humanas no poseen esta estructura (Galili y Swanson, 1991).
Ahora bien, las diferencias en el patrn de glicosilacin de las Igs entre el
humano y el ratn pudieran ser importantes en otro contexto, el de la
fisiologa y las funciones efectoras de estas molculas. Un nmero
considerable de evidencias indica que el componente glicosdico de los
anticuerpos es un elemento modulador de su capacidad para mediar la
activacin de la cascada del Complemento, la actividad citotxica
dependiente de anticuerpos (ADCC), y parmetros como la vida media
biolgica en tejidos y en la sangre (Koide et al., 1977; Walker et al., 1989;
Tao y Morrison, 1989; Wright et al., 1990; Lund et al., 1990; Dorai et al.,
1991; Morrison, 1992; Wawrzynczak et al., 1992; Hand et al., 1992). Por
esta razn los anticuerpos de ratn pudieran resultar ineficientes para
mediar, en el cuerpo humano, las mencionadas funciones efectoras y/o
verse alterada su fisiologa.
Otro obstculo lo constituye la forma cmo el sistema inmune del ratn
"reconoce" a los antgenos. Cuando un ratn es inmunizado con una

molcula, su sistema inmune reconoce ciertas regiones llamadas

eptopos, hacia las cuales va dirigida la respuesta de anticuerpos. Ahora
bien, para una molcula dada estos eptopos no necesariamente son los
mimos que reconoce el sistema inmune humano y por tanto no siempre
es posible obtener anticuerpos de ratn con la especificidad requerida.
Es as como por ejemplo, hasta los momentos nadie ha logrado obtener
anticuerpos monoclonales de ratn anti-Rh (bien sea anti-D u ola
especificidad dentro del sistema) (Thompson y Hughes-Jones, 1990).
Otra consecuencia de lo mencionado anteriormente se ilustra con los
anticuerpos monoclonales murinos dirigidos a especificidades dentro del
complejo principal de histocompatibilidad humano, HLA. Con frecuencia
stos carecen de la especificidad fina, restringida, que se observa con los
reactivos humanos (Pistillo et al., 1988).
Estas dificultades se han constituido en las motivaciones principales para
el desarrollo de los anticuerpos monoclonales humanos ya que, en
principio, stos deben ser mucho menos inmunognicos que los de
origen mrido y adems estarn exentos de los problemas funcionales
antes mencionados. El alcance potencial de utilizacin de estos reactivos
es tremendamente amplio e incluye campos como el tratamiento del
cncer, facilitamiento de trasplantes de rganos, imagenologa de
tumores, entre otros. Adems, como ya se mencion, los anticuerpos
monoclonales humanos seran herramientas tiles para la identificacin
de antigenos que el sistema inmune del ratn reconoce en forma
diferente del sistema inmune humano, como es el caso del grupo
sanguneo Rh y los antgenos del complejo principal de
histocompatibilidad HLA.
Produccin de anticuerpos monoclonales humanos
La produccin de anticuerpos monoclonales humanos ha sido abordada
desde dos frentes principales. Uno es a travs de la inmortalizacin de
las clulas productoras de anticuerpos, aspecto que detallaremos a
continuacin, y el otro mediante el uso de tcnicas de biologa molecular
y ADN recombinante, el cual se describe ms adelante, en la seccin que
hemos titulado "Anticuerpo de segunda generacin"
Inmortalizacin de las clulas productoras de anticuerpos
La preparacin de anticuerpos monoclonales humanos mediante la
inmortalizacin de las clulas productoras de stos ha tenido que
enfrentar dos escollos importantes que vale la pena mencionar antes de

detallar las tcnicas por las cuales se ha abordado este objetivo. Uno es
la fuente de donde obtener los linfocitos B humanos. En la mayora de los
casos, la sangre perifrica ha sido la fuente prcticamente obligada
(James y Bell, 1987). Desgraciadamente, en la sangre perifrica la
proporcin relativa de linfocitos B es baja si se compara con rganos
linfoides como el bazo y los ganglios. Adems, se cree que en la sangre
perifrica son pocos los linfocitos B que se encuentran en el estadio
adecuado de diferenciacin para rendir hbridos productores de
inmunoglobulinas (Schwaber et al., 1984).
El otro aspecto es la inmunizacin. A menos que uno cuente con la
suerte de tener individuos inmunizados de forma "natural", son pocos los
casos en los que deliberadamente se puede inmunizar a un ser humano
para luego obtener una muestra de sus linfocitos B inmunes y utilizarlos
para la produccin de anticuerpos monoclonales. Resultados obtenidos
por Melamed en 1987 realizando estudios para la produccin de
anticuerpos monoclonales humanos con especificidad por el grupo
sanguneo Rh ilustran la importancia que la inmunizacin tiene para la
generacin de un anticuerpo monoclonal. En estos estudios se encontr
que el tiempo para la obtencin de los linfocitos desde el momento M
ltimo "contacto con el antgeno" resulta crtico para el xito o fracaso
(Melamed et al, 1987).
La utilizacin de esquemas de inmunizacin in vitro se mantiene como
una alternativa promisoria para la resolucin de este problema. Haciendo
uso de los avances en el conocimiento de los mecanismos y seales
solubles que se ponen en juego durante la aparicin de la respuesta
inmune humoral, como por ejemplo la interaccin de linfocitos B con
linfocitos T cooperadores activados que expresan el ligando para CD40
(Banchereau et al., 1991) y con clulas dendrticas foliculares, el efecto
de ciertas interleucinas como las IL-2, IL-4, IL-5 (Phillips y Klaus, 1992;
Morikawa et al., 1993), la IL-6 (Hirano y col., 1987; Tosato et al., 1988), la
IL-10 (De Waal et al., 1992; Briere et al., 1993; Burdin et al., 1993) y la
forma soluble de CD23 (Thorley-Lawson, 1988), en conjunto con los
avances en el desarrollo de nuevos agentes adyuvantes tipo P3C-X
(Hoffman et al., 1990) y muramil-dipptido (Carrol et al., 1990) y la
caracterizacin de las influencias que ejercen in vitro las poblaciones
celulares presentes en la sangre perifrica que, como se mencion, es la
fuente principal para la obtencin de los linfocitos B en la mayora de los
casos (eliminacin de la poblacin de linfocitos T CD8+) (Borrebaeck,
1988), es probable que pronto se disponga de una manera confiable de
inmunizar linfocitos B humanos in vitro.

La inmortalizacin de las clulas humanas productoras de anticuerpos se

ha hecho bsicamente por tres vas. Una es la transformacin de los
linfocitos B humanos con el virus de Epstein-Barr (VEB); otra la fusin de
clulas somticas para generar horno o heterohibridomas y una ltima
que combina las dos primeras; es decir, transformacin con el VEB
seguido de fusin celular.
Inmortalizacin por transformacin con el VEB
Desde 1968 se conoce que la infeccin de linfocitos B humanos con el
VEB induce en ellos un proceso de transformacin que les faculta para
crecer por perodos prolongados en cultivo, generndose las, as
llamadas lneas linfoblastoides (Pope et al., 1968). El primer reporte de
tina lnea linfoblastoide productora de anticuerpos de especificidad
conocida fue hecho por Steinitz en 1977, quien obtuvo anticuerpos
monoclonales humanos especficos para el hapteno NNP (Steinitz et al.,
1977). La tcnica es relativamente sencilla: consiste en aislar la fraccin
de clulas mononucleares (CMN) a partir del "buffy coat" de una muestra
de sangre, obtenida de un donante en cuyo suero se hayan detectado los
anticuerpos deseados. Estas CMN son luego incubadas con una fuente
de VEB, lo cual permite que ocurra la infeccin viral con la subsecuente
multiplicacin celular y produccin de anticuerpos. Dado que las clulas
B infectadas expresan antgenos virales en su superficie (ThorleyLawson, 1988) y ms del 95% de los seres humanos posee inmunidad
contra el VEB (es el agente causal de la mononucleosis infecciosa o
enfermedad del beso) (Henle et al, 1968), es necesario eliminar o
inactivar los linfocitos T citotxicos especficos presentes en las CMN.
Esto se logra comnmente aadiendo a los cultivos fitohemaglutinina o
ciclosporina A. Al cabo de unos 7-10 das se examina el sobrenadante de
los cultivos en busca de aquellos que contengan los anticuerpos
deseados y se procede a aislar o clonar las clulas linfoblastoides
productoras de stos. Dicho aislamiento se ha realizado mediante
tcnicas de roseteo, "panning" o "FAC-sorting" (Kozbor y Roder, 1983) y
es necesario debido a que las clulas linfoblastoides obtenidas
constituyen una poblacin heterognea en la cual, por lo general,
terminan predominando las clulas B no productoras de las
inmunoglobulinas de inters.
A pesar de su simplicidad, muchos investigadores han encontrado
numerosos inconvenientes al tratar de producir anticuerpos
monoclonales mediante la transformacin con VEB. Quizs el ms
importante de estos inconvenientes es la manifiesta incapacidad que

exhiben las clulas linfoblastoides para clonarse a baja densidad celular

(James y Bell, 1987). Como mencionamos, este clonamiento es
fundamental para minimizar el riesgo de sobrecrecimiento de las clulas
en las que no estamos interesados por encima de las que s, pero
adems es importante para garantizar la clonalidad de una preparacin
dada de anticuerpos. De manera que, aun teniendo xito en la fase de
aislamiento o seleccin, en muchos casos el producto obtenido es
oligoclonal, no monoclonal. Adems, la experiencia acumulada indica que
las clulas linfoblastoides tienden con el tiempo a disminuir e incluso a
detener la produccin de anticuerpos y a dejar de crecer (Thompson,
1988).
Preparacin de hibridomas
Otra manera de inmortalizar las clulas productoras de anticuerpos ha
sido mediante la fusin de clulas somticas para generar hibridomas
humanos (Abrams et al., 1986). Por diversas razones, algunas de ellas
no del todo entendidas, la produccin de hibridomas humanos ha
resultado bastante ms dificultosa que la obtencin de los homlogos
hibridomas de ratn. Entre estas razones se encuentra la no
disponibilidad de una pareja (o parejas) de fusin adecuada. La
obtencin de lneas mielomatosas humanas equiparables a las existentes
en el modelo murino ha resultado difcil. Las clulas de mieloma humano
se adaptan pobremente a crecer en cultivo y adems exhiben baja
fusogenicidad y eficiencia de clonamiento. As mismo, las pocas lneas
que se han generado son productoras, ya sea de cadenas livianas o
pesadas (Kozbor y Roder, 1983: James y Bell, 1987; Thompson, 1988;
Larrick y Gavilondo, 1989).
Estos inconvenientes han provocado la utilizacin de las lneas
mielomatosas mridas en la construccin de "heterohibridomas" humanoratn. Sin embargo, con este sistema se ha presentado el problema de la
inestabilidad de los hbridos. Esta inestabilidad radica,
fundamentalmente, en la ocurrencia de un fenmeno denominado
segregacin (prdida preferencial de los cromosomas de una especie
que ocurre cuando se hibridizan clulas somticas de diferentes
especies). Desafortunadamente, en el caso de los heterohibridomas
humano-ratn los cromosomas que se segregan son los humanos
(James y Bell, 1987). Tratando de disminuir este problema se ha optado
por preparar hbridos humano-ratn (los llamados "heteromielomas") para
usarlos como pareja de fusin, con la esperanza de que al tener un
componente humano previo, el nuevo hbrido no segregue tan

vigorosamente los cromosomas humanos (Foung et al., 1986; Grunow et

al., 1988; Jahn et al., 1990).
Transformacin con el VEB + fusin celular.
La otra forma cmo se ha abordado el problema de producir anticuerpos
de manera continua en el laboratorio es mediante la combinacin de las
dos tcnicas antes mencionadas, es decir transformacin con VEB y
posterior fusin con mieloma o heteromieloma. Este enfoque ha
resultado ms exitoso que cualquiera de las dos tcnicas por separado.
En esencia, el esquema bsico de ambas tcnicas es respetado: luego
de la transformacin y enriquecimiento de las clulas transformadas
productoras del anticuerpo, stas se fusionan con una poblacin de
clulas de mieloma o heteromieloma. El producto de fusin es ahora
sometido a un proceso de doble seleccin negativa en un medio que
contiene una droga para eliminar las clulas mielomatosas (por lo
general aminopterina, ya que ordinariamente las clulas de mieloma
utilizadas son deficientes en la enzima HGPRT) y una droga para
eliminar las clulas linfoblastoides humanas no fusionadas (se emplea
Ouabaina, un inhibidor de la ATP-asa Na-K de la membrana celular, para
el cual las clulas humanas exhiben una mayor susceptibilidad que las
de ratn). Esta variante fue introducida en 1982 (Kozbor et al., 1982) y ha
sido ampliamente utilizada para la produccin de anticuerpos
monoclonales humanos contra distintos antgenos.
Mediante el uso de estas tcnicas varios laboratorios en el mundo,
incluyendo el nuestro ubicado en el Instituto Venezolano de
Investigaciones Cientficas, han producido anticuerpos monoclonales
humanos anti-Rh. El inters fundamental en esta rea reside en su
posible utilidad como reactivos de clasificacin eritrocitaria y en su
potencial uso como sustitutos de la preparacin policlonal anti-Rh que
actualmente se utiliza para prevenir la inmunizacin materno-fetal en los
casos de incompatibilidad Rh. No obstante, estos anticuerpos tambin
han ayudado enormemente a definir los detalles finos de la antigenicidad
del antgeno D y a la identificacin y caracterizacin de la(s) molcula(s)
en la(s) que reside el factor Rh.
Resumen del Proceso de Produccin de un Anticuerpo Monoclonal
Humano
En la figura 2 se esquematizan los pasos necesarios para el desarrollo
de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales humanos.

FIGURA 2. ESQUEMA PARA LA PRODUCCIN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES HUMANOS TOMADO Y MODIFICADO

DE KOZBOR Y RODER, 1983.

Anticuerpos monoclonales de segunda generacin

En esta seccin se tratar lo relativo a dos modalidades de produccin
de anticuerpos monoclonales que tienen una perspectiva tremenda en el
campo de la teraputica y el diagnstico in vivo. Son stas la produccin
de anticuerpos biespecficos y de anticuerpos recombinantes.
Anticuerpos biespecficos
Es bien sabido que una molcula de inmunoglobulina reconoce dos
determinantes antignicos iguales, gracias a la existencia en su
estructura de dos puntos de combinacin idnticos. Pero sera muy til
disponer de inmunoglobulinas en las cuales cada sitio de unin (o punto
de combinacin) reaccione con un determinante antignico diferente,
permitindoles as interactuar simultneamente con dos antgenos
distintos. Son estas molculas las que han sido llamadas anticuerpos
biespecficos. Su preparacin se ha logrado mediante la fusin de, ya
sea un hibridoma especfico para uno de los antgenos con linfocitos de
un animal inmunizado contra el otro antgeno (generndose clulas
hbridas llamadas triomas), o de dos hibridomas cada uno con
especificidad por un antgeno distinto (dando lugar a los llamados
cuadromas). Tanto los triomas como los cuadromas expresan los genes
de las inmunoglobulinas provenientes de ambas clulas progenitoras y
en ambos ocurre la combinacin aleatoria de los productos proticos de
estos genes. Por lo tanto, estas clulas producen anticuerpos
monoespecficos para cada antgeno pero adems producen molculas
de anticuerpos especficas para ambos antgenos (Gavilondo, 1990), A
ttulo de ejemplo, en 1993 Kaneko y col. publicaron en la revista "Blood"
la generacin de un anticuerpo biespecfico de uso potencial en el
tratamiento en humanos de la leucemia mieloide aguda. Este anticuerpo
es especfico para la molcula CD3 presente en los linfocitos T humanos
y para la molcula CD13, la cual se expresa abundantemente en las
clulas leucmicas. In vitro, este monoclonal hbrido fue capaz de
estimular la lsis de clulas leucmicas provenientes de pacientes con
leucemia mieloide aguda, por parte de clulas mononucleares de sangre
perifrica autlogas, estimuladas con interleucina 2 o interleucina 7. Los
autores proponen a este monoclonal como una herramienta para la
eliminacin de clulas CD13+ en trasplantes de mdula sea autloga en
pacientes con este tipo de leucemia (Kaneko et al., 1993).
Anticuerpos recombinantes

Las tecnologas de ADN recombinante se han revelado como una

herramienta tremendamente poderosa y promisoria para la preparacin,
modificacin y mejoramiento de los anticuerpos monoclonales, tanto de
origen mrido como humano. Esto ha sido posible gracias al
conocimiento detallado que se tiene en la actualidad sobre la estructura y
organizacin de los genes que codifican a las molculas de
inmunoglobulina (Max, 1993). La combinacin de este conocimiento y
estas tecnologas ha permitido hacer verdadera ingeniera molecular para
preparar molculas de inmunoglobulina en las que las regiones que
determinan la especificidad por el antgeno provienen de genes de ratn
y el resto de la molcula es codificado por genes humanos. Virtualmente
todo el trabajo de ingeniera molecular, cuyos detalles escapan de los
alcances de esta revisin, se realiza a nivel del ADN. El producto de este
trabajo son genes hbridos o, ms apropiadamente, recombinantes que
ahora pueden ser insertados en vectores adecuados los cuales permiten
su expresin (transcripcin a ARN mensajero y traduccin a protena) en
bacterias o en clulas eucariotas como ciertos hongos unicelulares o
lneas celulares de mamferos. Han surgido as los llamados anticuerpos
"quimricos" y "humanizados" como una alternativa tecnolgica en los
intentos de evitar o disminuir la respuesta inmune humana antiinmunoglobulina de ratn, que se genera cuando inyectamos un
anticuerpo murino, pero sin perder la especificidad que ste nos brinda
(Winter y Milstein, 1991 ). A ttulo de ejemplo se puede mencionar el
trabajo de Hale y col., publicado en 1988 por a revista "Lancet" donde se
seala la utilizacin de ese tipo de reactivos humanizados en el
tratamiento de pacientes con linfomas, obtenindose mejores resultados
que con el uso de los monoclonales murinos (Hale et al., 1988).
Estas tecnologas tambin han permitido la preparacin de genes que
codifican molculas hbridas en las que el fragmento Fc del anticuerpo ha
sido sustituido por una enzima, una toxina o una droga. Estos genes
recombinantes pueden tambin ser expresados apropiadamente,
obtenindose molculas con la capacidad de reconocer especficamente
a un antgeno (mediante el fragmento de inmunoglobulina) y con una
propiedad funcional nueva, distinta de la del anticuerpo "natural",
conferida por la actividad enzimtica, de toxina o de droga que le ha sido
artificialmente incorporada. Un ejemplo interesante y con una enorme
potencialidad prctica lo constituye un gen recombinante preparado por
Schnee en 1987, en el cual se combinaron los segmentos gnicos que
codifican la cadena beta del activador tisular del plasmingeno y la regin
de combinacin de la cadena pesada de un anticuerpo monoclonal con

especificidad por la fibrina. Al ser expresado este gen, se obtuvo una

protena recombinante capaz de reconocer especficamente cogulos de
fibrina y participar en su disolucin (Schnee et al., 1987). As mismo, una
serie de inmunotoxinas (as se llaman las protenas recombinantes
anticuerpo-toxina) han sido preparadas y estn siendo evaluadas para su
uso como agentes profilcticos en la enfermedad injerto contra husped
que aparece con frecuencia luego de un transplante de mdula sea
(Antin et al, 1990), en la eliminacin de clulas leucmicas u en el
tratamiento de linfomas (Amlotet al., 1993; Grossbard y Nadler, 1994).
Conclusin
El advenimiento de los anticuerpos monoclonales ha sido, en el mbito
de las ciencias biomdicas, uno de los desarrollos metodolgicos ms
importantes de los ltimos 20 aos. Su utilizacin parece no tener ms
lmites que aquellos que se imponga el usuario, como bien lo ha ilustrado
la generacin de los llamados anticuerpos monoclonales catalticos
(Danishefsky, 1993; Janda et al., 1993). El detallado conocimiento de la
organizacin de los genes que codifican estas protenas, en conjunto con
las avanzadas tecnologas para la manipulacin gentica de las que se
dispone en la actualidad, ha permitido el desarrollo de tcnicas para la
elaboracin de genotecas combinatorias tanto de origen humano como
mrido (Winter y Milstein, 1991), las cuales se anticipa sean de gran
unidad en el entendimiento de enfermedades autoinmunes relacionadas
con la respuesta inmune humoral (Rapoport et al., 1995) y en la
elaboracin de reactivos teraputicos aplicables a una variedad de
patologas (Glassy, 1993).
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