SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE SENA

PRACTICA N 4
TCNICAS DE SIEMBRA PARA HONGOS Y BACTERIAS
Reyes, Jenny; Arias, Jos Martin; Vaena, Luis Miguel; Anaya, Ronald, Montes, Jean Carlos;
margarita7111994@gmail.com
josemartin1052@gmail.com
lumig-@hotmail.com
silverronald@htmail.com
jeancarlosmontes97@outlook.com

Control De Calidad De Alimentos

RESUMEN
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio con el fin de obtener
los resultados que se desean para algn tipo de estudio. Para realizar este proceso con xito es
necesario llevar acabo procedimientos bsicos como son las tcnicas de siembra para hongos y
bacterias con el propsito de obtener cultivos puros, el cual se trata de un solo tipo de
microorganismo en un medio de cultivo.
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento
de los microorganismos es el cultivo. En esta prctica se llevaron a cabo las tcnicas bsicas de
siembra para hongos y bacterias con el fin de observar mejor su crecimiento y morfologa. En los
resultados se evidenciaron colonias de bacterias y hongos lo cual es posible que sean de una
misma especie por sus caractersticas morfolgicas sin embargo para comprobar su pureza es
necesario realizar una tincin de gran lo cual realizaremos en nuestra prxima prctica.

Palabras claves:

hongos, bacterias, siembra, cultivo, medios de cultivo, cultivo puro,

tcnica s de siembra, asas micolgica y bacteriolgica.

La
siembra
microbiolgica
es
un
procedimiento tcnico que consiste en
colocar una pequea fraccin o volumen de
la muestra, sobre o dentro, de uno o varios
medios de cultivo que contengan los
nutrientes necesarios par las especies que
presuntivamente contiene, con la finalidad de
que puedan desarrollarse adecuadamente,
para factibilizar su estudio y posterior
identificacin. El nmero de clulas
microbianas que se encuentran en el
volumen o fraccin sembrada se denomina
inculo.

Para el estudio de las bacterias y otros

microorganismos cultivables, es necesario
adems, conocer y reconocer la morfologa
microscpica y macroscpica a partir de su
crecimiento
en
medios
de
cultivo;
adicionalmente, es posible evaluar el
comportamiento de ellas frente a los
diferentes
compuestos
nutritivos
o
proporcionarles
aquellos
nutrientes
adecuados para favorecer su desarrollo.
Existen tcnicas adecuadas para realizar
estos cultivos, mediante el uso de algunos
elementos importantes para realizar las
siembras. La forma de sembrarlos depende
del tipo de microorganismo. Veremos en este
informe tcnicas de siembra para hongos y
bacterias.

MATERIALES Y MTODOS.

Muestras.

INTRODUCCIN

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Medio de cultivo de agar pc con muestra de
ambiente (bacterias) y medio de cultivo de
agar ogye con muestra de ambiente
(hongos).

AGAR PDA (patata destroza agar)

Materiales y equipos.
3 cajas Petri, 2 tubos de ensayo, 1 asa
bacteriolgica, 1 asa micolgica, 1 mechero
de alcohol, Toallas desechables, 1 rollo de
papel para sellar cajas Petri, 1 rollo de cinta
de papel, incubadoras, y autoclave.

Procedimiento:
Preparacin de medios de
cultivo.
Es indispensable leer las instrucciones del
fabricante para cada medio de cultivo y
pesar la cantidad necesaria segn el
volumen requerido.
AGAR NUTRITIVO

(autores, 2015)
Preparacin: disolver 39g en 1000ml de agua
desmineraliza, calentar en agua hirviendo y
agitar con frecuencia hasta la disolucin
completa. Tratar en autoclave (15mnts a
121C).
En esta prctica se prepararon 100ml de
agua desmineralizada para disolver el medio
de cultivo de agar pda.se halla la cantidad en
gramos del medio de cultivo para dicha
cantidad de agua desmineralizada.

39 gx 100 ml
=3,9 g de agar pda
1000 ml
Se disolvieron 3.9g de agar pda en 100ml de
agua desmineralizada.

Vaciado en cajas de Petri y

Tubos de ensayo.
(autores, 2015)
Preparacin: disolver 20g en 1000ml de
agua desmineralizada, calentando en un
bao de agua hirviendo o en corriente de
vapor y tratar en autoclave 15mnts a 121C.
En esta prctica se prepararon 300ml de
agua desmineralizada para disolver el medio
de cultivo de agar nutritivo se halla la
cantidad en gramos del medio de cultivo para
dicha cantidad de agua desmineralizada.

20 gx 300 ml
=6 g de agar nutritiv o
1000 ml
Se disolvieron 6g de agar nutritivo en 300ml
de agua desmineralizada.

Teniendo en cuenta los conocimientos

adquiridos sobre cmo realizar este
procedimiento para evitar alteraciones en los
resultados se procedi a realizar el vaciado
del agar nutritivo y el agar pda en las cajas
Petri de la siguiente manera: Se encendi el
mechero de alcohol y se trabaj detrs de el
al momento del vaciado en las cajas de Petri
y tubos de ensayo.
Se llen 1 caja Petri con 20ml de agar pda ,2
cajas Petri con 25ml de agar nutritivo y 2
tubos de ensayo con 5ml de agar nutritivo.
Los medios de cultivo de agar nutritivo en los
tubos de ensayo se inclinan con el fin de
observar motilidad y para conocer las
colonias por tapita. Esta tcnica se conoce
como tcnica de siembra por pico de flauta.

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(autores, 2015)
Despus de terminar el vaciado del medio de
cultivo en las cajas Petri se dejaron reposar y
se guardaron en la nevera para que se
solidificaran ms rpido. Los medios de
cultivo en los tubos de ensayo se solidificaron
a temperatura ambiente.

Siembra de muestras
medios de cultivo.

Se asla esta colonia en una caja Petri con

medio de cultivo agar pda anteriormente
preparada. Para este proceso se lleva a cabo
la tcnica de siembra por puncin el cual es
un Mtodo de siembra utilizado para
observar el crecimiento de hongos y as ms
adelante establecer su morfologa; as como,
para la transferencia o subcultivo de cepas
previamente almacenadas y /o conservadas,
como es nuestro caso. Este proceso
Consiste en tomar parte de micelio con un
asa micolgica (o asa recta), y por una
puncin suave en el centro de la caja inocular
el microorganismo a estudiar. Dependiendo
del objetivo, pueden hacerse mltiples
picaduras en el agar (varios puntos de
siembra) (perales, 2015)

en

Siembra en Agar PDA

(hongos): caja Petri.
Tcnica de puncin.
Se tom el medio de cultivo de agar ogye con
la muestra de ambiente con crecimiento de
hongos y se tom una colonia de moho que
mostraba un micelio verde lo cual significa
que ya estaba empezando a formar
estructuras reproductivas en este hongo
tambin se observ un aro de antibiosis el
cual probablemente estaba
produciendo
antibitico ya que inhiba el crecimiento de
los dems microrganismos a su alrededor.

(perales, 2015)

Siembra en Agar nutritivo

(bacterias): caja Petri.
Tcnica por agotamiento.
Se tom el medio de cultivo de agar plate
count con la muestra de ambiente la cual
mostro crecimiento de bacterias.

(autores, 2015)
(autores, 2015)

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Se aslo la colonia que mostraba forma
filamentosa en una caja Petri con medio de
cultivo
agar
nutritivo
anteriormente
preparada. Para este proceso se lleva a cabo
la tcnica de siembra por agotamiento el cual
es un buen mtodo para el aislamiento de
colonias. Mediante esta tcnica se busca
tener colonias separadas a partir de un
inoculo. Procedimiento: (i) se toma la caja de
Petri en la palma de la mano y ligeramente
inclinada; con la mano contraria, se manipula
el asa de argolla previamente esterilizada por
flameado directo a la llama y con ella se
recoge el material de cultivo, para colocarlo
en un rea perifrica de la caja haciendo
movimientos circulares para homogeneizar el
inculo. (ii) El asa debe ser nuevamente
flameada y enfriada en un lateral del agar
(procurando no daarlo); a continuacin se
realiza una estra partiendo de la primera y
arrastrando los microorganismos presentes
en ella hacia el extremo contrario de la
superficie del agar. Se debe procurar que en
cada seccin de la caja, las estras queden
trazadas con mayor separacin. (iii) Repita el
paso ii, por tres veces (algunos autores
reportan solo dos), recordando flamear y
enfriar el asa cada vez que culmine una
estra y solo tocar con el asa la estra
inmediatamente anterior, con el objetivo de ir
reduciendo la carga microbiana arrastrada
por la argolla. Finalmente se esteriliza el asa
antes de descartarla (perales, 2015)

microorganismos (incremento de inculo), en

la superficie de un agar. Esta tcnica de
siembra utiliza un hisopo, el cual se pasa por
toda la superficie de la placa en distintas
direcciones y finalmente por el borde para
que, el crecimiento de los microorganismos
sea total en la superficie de la placa.
(perales, 2015).

(perales, 2015)

Siembra en agar nutritivo:

tubos de ensayo.
Tcnica mixta (picadura y
estra).
Se tom la muestra de la misma colonia de
bacterias en agar plate count del proceso
anterior y se realiz la tcnica de siembra
mixta en uno de los tubos de ensayo con
agar nutritivo anteriormente preparado. Esta
tcnica se realiza sobre medios inclinados o
en bisel, con asa recta previamente
esterilizada en el mechero haciendo una
picadura hasta el fondo del tubo y luego
haciendo una siembra en estra sobre la
superficie expuesta del agar, deslizando el
asa por la superficie en bisel marcando las
estras; de tal manera que, con el asa
cargada se realizan los dos tipos de siembra
y sin retirarla del tubo, por ltimo se flamea la
boca del tubo antes de cerrarlo.

(www.biblioteca-medica.com.ar, 2012)

Tcnica masiva.
Se tom la otra caja Petri preparada
anteriormente con el cultivo de agar nutritivo
y de la misma colonia de agar plate count
(bacterias) se realiz la tcnica de siembra
masiva, el cual es un mtodo muy utilizado
para obtener un gran nmero de

(BIOLGICA, 2010)

Tcnica por estra simple.

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Se tom el otro tubo de ensayo preparado
con agar nutritivo y se procedi hacer la
siembra por estra simple de la misma
muestra del medio de agar plate count
(bacterias). Este proceso se realiza en el
tubo con medio slido inclinado (en bisel o
pico de flauta), y deslizando el asa sobre la
superficie expuesta del agar de manera que
se marquen surcos o estras y se flamea la
boca del tubo antes de cerrarlo.

(autores, 2015)

(www.biblioteca-medica.com.ar, 2012)
Nota: es importante resaltar que para cada
medio de cultivo ya sea en caja o en tubo se
realiz el rotulo correspondiente de acuerdo
a cada caso con el fin de evitar confusiones.

Crecimiento
Despus de realizar la siembra de hongos y
bacterias se reunieron todos los medios de
cultivo de agar nutritivo tanto cajas Petri
como tubos de ensayo, aparte se reunieron
los medios de cultivo de agar PDA en cajas
Petri y se prepararon para su crecimiento as:

(autores, 2015)
Luego se reunieron los medios de cultivo con
agar PDA se envolvieron en papel, se
rotularon y se llevaron a la incubadora a
25C 2 de 3 a 5 das.

Los medios de cultivo de agar nutritivo en

cajas se envolvieron en papel y los tubos se
colocaron en un soporte para tubos se les
col el rotulo a cada uno y se llevaron a la
incubadora a 37C 2 de 24 a 48 horas.

(autores, 2015)

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RESULTADOS
Siembra en Agar PDA
(hongos): caja Petri.

Tcnica de siembra masiva.

Se observ una colonia grande de forma
irregular, con bordes lobulados, con una
elevacin plana, de superficie lisa, y aspecto
mate.

Tcnica de puncin.
En el anlisis macroscpico se pudo
observar una colonia circular de superficie
plana. Tambin se observ contaminacin en
una parte del medio de cultivo ya que al
momento de la siembra en esa parte no se
aplic la puncin.

(autores, 2015)

Siembra en agar nutritivo:

tubos de ensayo.

(autores, 2015)

Siembra en Agar nutritivo

(bacterias): caja Petri.

Tcnica
estra).

mixta

(picadura

Se observ un crecimiento de forma rizoide,

con aspecto brillante, con elevacin plana y
bordes filamentosos.

Tcnica por agotamiento.

Se pudo observar una colonia de bacteria
color crema con forma irregular, elevacin
plana, bordes lobulados y superficie lisa con
aspecto mate.

(autores, 2015)

Tcnica por estra simple

Se observ el mismo crecimiento anterior con
la diferencia de que en este tubo no se vea
la colonia sembrada por la puncin realizada
en el fondo del tubo ya que en este mtodo
no se requiere de esta puncin.
(autores, 2015)

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CONCLUSION

(autores, 2015)

ANLISIS DE RESULTADOS
En la tcnica por puncin se pudo observar
un hongo el cual posiblemente sea un hongo
dimorfico ya que presenta forma de moho y
de levadura su forma suele depender de
factores ambientales tales como temperatura
as los levaduriformes a 37 y filamentosos a
temperatura ambiente otro factor puede ser
la concentracin de CO2 crecimiento en
suero etc. Las levaduras son hongos
unicelulares con forma oval o esfrica se
pueden multiplicar por fisin binaria.
Gemacin o divisin asimtrica. La
pseudohifa es una nueva celula que no se
separa y que adquiere forma filamentosa. En
este caso posiblemente se trata de una
levadura. (hoyos, 2013)
En la tcnica por agotamiento y masiva en
agar nutritivo se pudo observar colonias de
bacterias
planas de color crema con
elevaciones planas y bordes lobulados y
aspecto mate con la diferencia que en la
tcnica masiva se evidencian mayor nmero
de colonias.
En la tcnica mixta se observ el crecimiento
de una bacteria brillante con elevacin plana
y bordes filamentosos. La celula de las
bacterias
pueden
ser
observadas
macroscpicamente cuando se encuentran
en grupos, mientras que las colonias
celulares son agrupaciones formadas por la
reproduccin de las bacterias incubadas
alrededor de 24 horas aproximadamente,
entretanto que otras bacterias requieren un
mayor tiempo para formar colonias de
millones de bacterias. El tamao de las
colonias puede variar desde 0,5 a 4,0
milmetros de dimetro llegando a tener Uma
forma circular, puntiforme, irregular, rizoide o
fusiforme como es nuestro caso.

Al finalizar la prctica aprendimos a realizar

siembra de bacterias y hongos por medio de
diferentes
tcnicas
utilizando
adecuadamente diferentes dispositivos o
materiales para llevar a cabo la transferencia
de los microorganismos a medios de cultivos
que favorezcan su crecimiento, de igual
manera se logr diferenciar y conocer su
morfologa macroscpica de acuerdo a las
caractersticas
culturales
de
cada
microorganismo tambin aprendimos a aislar
este tipo de microorganismos y de esta
manera
identificar cultivos puros para
realizar posteriores estudios en el laboratorio
sobre los mismos. (vargas, 2014).

BIBLIOGRAFIA
autores. (16 de septiembre de 2015).
BIOLGICA, D. D. (2010).
MICROBIOLOGA. Obtenido de
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.
ar/guia.pdf
hoyos, b. a. (23 de febrero de 2013).
silideshare. Obtenido de univeesidad
catolica santo toribio:
http://es.slideshare.net/BrendaAurora
TafurHoyos/hongos-16726220
perales, j. (2015). tecnicas de siembra para
hongos y bacterias. valledupar:
microbiologo universidad de
pamplona.
vargas, t. (noviembre de 2014). Revista de
Actualizacin Clnica Investiga.
Obtenido de Morfologa Bacteriana:
http://www.revistasbolivianas.org.bo/s
cielo.php?pid=S230437682014001000002&script=sci_artt
ext
www.biblioteca-medica.com.ar. (17 de
septiembre de 2012). Obtenido de
http://www.biblioteca-

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medica.com.ar/2012/09/metodos-ytecnicas-microbiologicas.html