AGENTES FSICOS Y QUMICOS PARA EL CONTROL DE

MICROORGANISMOS
Los microorganismos pueden resultar beneficiosos al hombre en algunos
aspectos; sin embargo, tambin son un vehculo para la produccin de
enfermedades, por la produccin de toxinas propiamente dichas o metabolitos
txicos. Adems generan daos en cultivos, descomposicin de alimentos y
enfermedades en animales. Es por esto que el ser humano ha buscado los
procedimientos necesarios para destruir o controlar el crecimiento de los
microorganismos perjudiciales.
La evaluacin de la calidad microbiolgica del ambiente nos indica la cantidad de
microorganismos que estn presentes en un rea determinada. Los
microorganismos generalmente no estn flotando en el aire sino que se
encuentran sobre partculas inertes, por ejemplo polvo, gotas de agua, etc. que le
sirven como medio de transporte, las cuales pueden depositarse sobre las
superficies; es por ello que mientras ms limpia es un rea, menor ser el nmero
de microorganismos presentes en el aire de la misma.
Las personas tambin son una fuente de contaminacin, ya que liberan gran
cantidad de partculas al moverse, toser, estornudar, por exfoliacin de la piel, etc.
Algunas de estas partculas llevan microorganismos que podran contaminar el
material con el que se trabaja en un laboratorio; en este sentido los antispticos,
deben ser usados por el personal para descontaminar la piel y los tejidos
expuestos antes de entrar a las reas de manufactura.
1. CONCEPTOS PREVIOS:
ANTISEPSIA
Procedimiento que elimina microorganismos de un tejido vivo.
DECONTAMINACIN
Procedimiento mediante el cual los elementos contraminados con
microorganismos se vuelven seguros para el manejo del personal y pacientes.
DESINFECCIN
Procedimiento por el cual se destruyen parcial o totalmente los microorganismos
patgenos o de sus toxinas o vectores en los objetos y superficies inanimados,
con excepcin de las esporas bacterianas o micticas.
ESTERILIZACIN
Tcnica utilizada para eliminar de manera absoluta la totalidad de grmenes de
materiales u objetos.

 BIOCIDA
Los biocidas pueden ser sustancias qumicas sintticas, de origen natural o
microorganismos que estn destinados a destruir, contrarrestar, neutralizar,
impedir la accin o ejercer un control de otro tipo sobre cualquier organismo
considerado nocivo para el hombre.
BACTERIOSTTICO
Sustancia que dificulta la reproduccin bacteriana. Una sustancia bacteriosttica
no produce la muerte de las bacterias, pero al dificultar o impedir su reproduccin
la cepa bacteriana envejece y desaparece.
DETERGENTE ENZIMTICO (DE USO MDICO)
Agente tensoactivo a base de enzimas, de proteasas, amilasas, lipasas que
disgregan la materia orgnica (presente en los objetos).
GERMICIDA
Es un agente que destruye microorganismos, especialmente patgenos, en tejidos
vivos u objetos inanimados.
PROFILAXIS
Conjunto de medidas que se toman para proteger o preservar de las
enfermedades.
SPTICO
Presencia de microbios patgenos en tejidos vivos.
2. CONDICIONES QUE INFLUYEN EN LA ACCIN MICROBIANA
Hay ciertos factores que tienen que ser considerados a la hora de aplicar agentes
qumicos o fsicos para el control de microorganismos.
PH
Concentracin del agente qumico: Mientras ms concentrado est el
agente qumico, ms rpido se destruirn los organismos.
Intensidad del agente fsico: Cuanto ms intenso es el agente fsico (calor
o radiacin) ms rpidamente mata a los microorganismos.
Tiempo de exposicin: A mayor tiempo de exposicin, mayor es el nmero
de organismos destruidos.
Temperatura: A mayor temperatura se acelera la destruccin de los
organismos.

 Nmero de organismos: Mientras mayor sea el nmero de

microorganismos, ms tiempo se requiere para destruirlos.
Clase de organismo: Las clulas vegetativas (las que estn
metablicamente activas) son ms susceptibles que las esporas
bacterianas.
Estado fisiolgico de las clulas: Mientras ms antiguas sean las clulas,
ms rpido se destruyen.
Naturaleza del medio ambiente: Algunos ambientes desfavorecen la
destruccin rpida de los microorganismos, como por ejemplo los medios
viscosos.
3. MECANISMO DE ACCIN DE LOS AGENTES ANTIMICROBIANOS
3.1 DAOS AL ADN:
Las lesiones del DNA por radiaciones o sustancias qumicas aniquilan a la clula
principalmente al interferir con la replicacin del ADN. Dentro de este grupo
incluimos las rifamicinas y las quinolonas que actan en enzimas que participan en
los procesos de transcripcin y replicacin, y los nitroimidazoles y nitrofuranos que
actan directamente sobre el ADN, dandolo. Por lo general, los antibiticos de
este grupo no son particularmente selectivos en su accin y comportan cierta
toxicidad para las clulas eucariotas. La mayora de los antibiticos que actan
sobre el ADN son bactericidas rpidos y normalmente independientes del inculo y
de la fase de crecimiento bacteriano.
3.2 INHIBICIN DE LA SNTESIS DE LA PARED BACTERIANA:
Los antibiticos que inhiben la sntesis de la pared necesitan para ejercer su
accin que la bacteria se halle en crecimiento activo, y para su accin bactericida
requieren que el medio en que se encuentre la bacteria sea isotnico o hipotnico,
lo que favorece el estallido celular cuando la pared celular se pierde o se
desestructura. Suelen ser ms activos sobre las bacterias Gram positivas por su
mayor riqueza en peptidoglucano. En general, son poco txicos por actuar
selectivamente en una estructura que no est presente en las clulas humanas.
3.3 DESNATURALIZACIN DE PROTENAS:
Las protenas existen en un estado plegado tridimensional que depende de
enlaces disulfuro, covalentes intermoleculares y de varios enlaces no covalentes.
Al desorganizarse por una sustancia qumica o agente fsico, la protena deja de
funcionar. La mayora de los antibiticos de este grupo tienen actividad
bacteriosttica, aunque los aminoglucsidos se comportan como bactericidas. La
accin bactericida o bacteriosttica tambin va a depender de las concentraciones
del antimicrobiano, y del microorganismo afectado.
3.4 DESORGANIZACIN DE LA MEMBRANA O PARED CELULAR:

Los antimicrobianos que actan en esta estructura se comportan como

bactericidas, incluso en bacterias en reposo, y pueden tener alta toxicidad sobre
las clulas humanas, al compartir algunos componentes de la membrana
citoplsmica.
3.5 SUSTRACCIN DE LOS GRUPOS SULFHIDRILOS LIBRES:
Las protenas enzimticas que contienen cistena poseen cadenas laterales que
terminan en grupos sulfhidrilo. Enzimas y coenzimas no pueden funcionar a
menos que los grupos sulfhidrilo permanezcan libres y reducidos. De esta manera,
las sustancias oxidantes interfieren con el metabolismo al formar enlaces disulfuro
entre grupos sulfhidrilo vecinos, como los metales pesados, daando a la clula.
3.6 ANTAGONISMO QUMICO:
La interferencia de una sustancia qumica con la reaccin normal entre cierta
enzima y su sustrato se conoce como antagonismo qumico. Interrumpen
procesos que liberan energa y procesos biosintticos.
3.7 INHIBICIN ENZIMTICA:
Algunos antimicrobianos intervienen en la actividad enzimtica, generando
inhibicin del metabolismo normal del microorganismo, lo que conlleva a su
destruccin.
4. FACTORES FISICOS PARA EL CONTROL DE MICROORGANISMOS
Los mtodos fsicos se utilizan a menudo para lograr la descontaminacin, de
desinfeccin y la esterilizacin microbiana.
4.1 TEMPERATURAS
La eficacia del calor como agente antimicrobiano, se puede expresar como el
tiempo de muerte trmico (TMT), que se define como el tiempo ms corto
necesario para destruir los microorganismos en una suspensin, a una
temperatura especfica y en condiciones definidas. Sin embargo como la
destruccin es logartmica no es posible eliminar completamente los
microorganismos de una muestra.
4.1.1. TEMPERATURAS ALTAS:
A. ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO:
AUTOCLAVE:

Es el mtodo de eleccin por ser el ms fiable, eficaz y de fcil empleo. Se

introduce el material por esterilizar al autoclave en bolsas adecuadas y cerradas
durante 20 minutos a 121 C (para algunos agentes pueden ser necesarias otras
condiciones), teniendo la precaucin de que la atmsfera del autoclave est a
saturacin y desprovista de aire. El mecanismo consiste en llevar el agua al punto
de ebullicin de manera que el vapor llene la cmara, desplazando el aire frio.
Cuando todo el aire es expulsado, se cierran las vlvulas de seguridad y el vapor
satura toda la cmara, por lo que incrementa la presin hasta alcanzar los valores
deseados (121 C Y 15 lb de presin).
MECANISMO DE ACCIN:

Desnaturalizacin irreversible de enzimas y protenas estructurales por la accin

de la temperatura y el vapor.
Sirve para esterilizar medios lquidos, slidos, polvos, talcos, material quirrgico,
ropa quirrgica, material de vidrio, medios para cultivo como matraces, tubos,
placas, etc.
TINDALIZACIN O ESTERILIZACIN FRACCIONADA
Permite la esterilizacin de materiales que se inactivan o estropean a ms de 100
C bsicamente consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 o 4
ciclos) de dos fase sucesivas cada uno; puesto que las esporas resistentes
germinan durante los perodos de incubacin y en la siguiente exposicin al calor
las clulas vegetativas son destruidas.
Primera Fase:
El material se calienta mediante la autoclave de Chamberland, dejando abierta la
vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal, a una temperatura entre
50 a 100oC, durante 1 2 horas.
Segunda Fase:
En los intervalos, el material se incuba en una estufa, a 30-37oC durante 24 horas,
las esporas germinan y las bacterias resultantes se hacen ms sensibles al
calentamiento posterior.
La tindalizacin es un proceso de esterilizacin de las conservas crnicas, una vez
envasadas. Se aplica para eliminar bacterias con esporas resistentes, como el
bacilo del botulismo y utilizan este mtodo ya que ste no expone al producto a
temperaturas muy elevadas, lo que podra desnaturalizar su contenido.
PASTEURIZACIN:
Sirve para eliminar formas vegetativas de patgenos presentes en medios
lquidos. Es ms utilizado en la industria: leche, vinos, cerveza.

La temperatura seleccionada para la pasteurizacin se basa en el tiempo trmico

mortal de microorganismos patgenos (65- 68 C)
-

Pasteurizacin tradicional: 63 a 65C por 30 min

Pasteurizacin Flash: El lquido se calienta a 72 C por 15 segundos y
rpidamente se enfra. Puede ser adaptada a flujos continuos.

Ultra pasteurizacin: 150 C por 1-3 segundos

B. ESTERILIZACIN POR CALOR SECO:

El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles
elevados
de electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas.
HORNO O PUPINEL :
El material debe mantenerse en la estufa por el lapso de una hora a partir del
momento en que ha llegado a los 170 C. Funciona con dos parmetros:
a. Temperatura: 170C - 180C
b. Tiempo: para 170C es de 2 horas, para 180C es de 1 hora.
MECANISMO DE ACCIN: Microbicida, se basa en la accin oxidante del aire
seco caliente
Se esteriliza: polvo, talco, material de vidrio, material quirrgico, ropa quirrgica.
Elimina formas esporuladas. No esterilizar: agua, medios de cultivo y lquidos.
INCINERACIN
Se usa cuando se quiere eliminar material altamente contaminado. No debe haber
corriente de aire para no contaminar el ambiente.
B. TEMPERATURAS BAJAS:
CONGELACIN
Refrigeracin y congelacin son nicamente bacteriostticos, pues el metabolismo
de las bacterias esta inhibido por debajo de 0 C, cabe resaltar que no mata a los
microorganismos sino que puede conservarlos durante largos periodos de tiempo.
-Refrigeracin 0-7C
-Congelacin Profunda: 50 a 95C
-Liofilizacin: 76C

4.2.

DESECACIN

Inhibe el desarrollo de bacterias, produciendo la muerte en gran parte de ellas, ya

que los microorganismos necesitan agua para crecer y multiplicarse. El bacilo de
la tuberculosis, algunos estafilococos y esporas pueden resistir este mtodo.
4.3.
FILTRACIN
La esterilizacin por filtracin se logra por el paso de un lquido o un gas a travs
de un material capaz de retener los microorganismos presentes. Ciertos
dispositivos tienen poros, se pone el cultivo en el lquido y las bacterias quedan
atrapadas en los poros y pasa solo el lquido exento de bacterias. El poro es ms
pequeo que las bacterias.
- Filtracin de profundidad:
Estos filtros estn elaborados de materiales fibrosos o granulados dispuesto al
azar, de manera que dentro de la estructura del filtro se crean vas tortuosas
donde pueden quedar retenidos la mayora de los microorganismos presentes.
Entre sus ventajas se encuentran su alta capacidad de retencin de partculas
sobre su superficie y a travs de toda su estructura y que permiten filtrar grandes
volmenes. Sin embargo, tienen como desventajas que no presentan un tamao
de poro uniforme y existe la posibilidad de liberacin, hacia el material filtrado, de
partculas y microorganismos que hayan crecido dentro del filtro.
Dadas sus caractersticas los filtros de profundidad se usan principalmente como
prefiltros, ya que permiten eliminar las partculas grandes pero no la eliminacin
total de los microorganismos.
- Filtracin de membrana:
Son filtros elaborados generalmente de acetato de celulosa o nitrato de celulosa y
contienen poros de tamao uniforme. Este tipo de filtro tiene como ventaja que, al
conocer exactamente el tamao de poro que presentan, se pueden seleccionar
filtros capaces de retener la totalidad de los microorganismos presentes en una
solucin. Sin embargo, se saturan rpidamente y la velocidad de filtracin a travs
de ellos es lenta.
La esterilizacin por filtracin se emplea para materiales sensibles al calor, tales
como ciertos medios de cultivo, azcares, soluciones de antibiticos y otros
medicamentos, etc.
4.4.

EFECTO DE LA PRESIN HIDROSTTICA

La mayor parte de las especies bacterianas de hbitats continentales no pueden

crecer (e incluso mueren) cuando son sometidas a altas presiones (unos 600
Kg/cm2). Ello se debe a los siguientes efectos adversos:

 Aumento de la viscosidad del citoplasma.

Disminucin de la capacidad de las enzimas de unirse a sus respectivos
sustratos.
Interferencia en la divisin celular: las bacterias se alargan, se filamentan,
pero sin produccin de tabique transversal (crecimiento sin divisin celular).
Sin embargo, existen bacterias (sobre todo marinas) que toleran o requieren altas
presiones (barotolerantes y barfilas, respectivamente).
6.6.5 RADIACIONES
Su accin depende de:
El tipo de radiacin
El tiempo de exposicin
La dosis
6.6.4.1 IONIZANTES:
Producen iones y radicales libres que alteran la base de los cidos nucleicos,
estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de
los microorganismos. Se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles
(termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc.
La mayor causa de la muerte es la destruccin del ADN, no se utiliza para medios
de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los
componentes.
- Rayos gamma: Las radiaciones gamma tienen mucha energa y son emitidas
por ciertos istopos radiactivos, altamente dainos para molculas orgnicas
como el ADN.
- Rayos catdicos: Se usan para esterilizar material quirrgico, medicamentos y
otros materiales. Una ventaja es que el material se puede esterilizar despus de
empacado (ya que stas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura
ambiente.
6.6.4.2 NO IONIZANTES:

- Rayos Ultravioletas: Tiene un efecto letal y mutagnico, que depende de su

longitud de onda (corta) y su alta energa No tienen actividad ionizante, pero
provocan cambios qumicos en las molculas absorbentes, de modo que aparecen
molculas alteradas (fotoproductos) que originan la inactivacin de
macromolculas.
El mecanismo primario de dao al ADN es la formacin de dmeros de timina lo
que inhibe su funcin y replicacin.