UNIVERSIDAD CENTRAL DE NICARAGUA

RECINTO JINOTEPE
FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

GUA DE LABORATORIO 1.
DATOS GENERALES:
CARRERA: MEDICINA.
ASIGNATURA: HISTOLOGA.
TEMA: USO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO Y MTODOS HISTOLGICOS.
FORMA DE ORGANIZACIN: LABORATORIO.
DURACIN: 2 HORAS.
OBJETIVOS:
1. Conocer los diferentes mtodos existentes para el estudio de la
organizacin histolgica del cuerpo humano.
2. Familiarizarse con el manejo adecuado de las diferentes partes de un
microscopio ptico.
3. Enumerar los pasos en orden cronolgico de la tcnica de inclusin en
parafina.
4. Reconocer en un corte histolgico teido con H y E la coloracin ms
utilizada
en nuestro medio, las estructuras tisulares basfilas y
eosinfilas.
5. Identificar en un corte histolgico las caractersticas generales de las
clulas de acuerdo a su afinidad.
6. Interpretar un corte histolgico.
INTRODUCCIN
Actualmente el conocimiento de la estructura y funcin de los organismos
biolgicos est fundamentado en los mtodos necesarios para la
investigacin de las clulas y los tejidos, siendo ejemplo claro de esta la
Microscopa Electrnica, La inmunohistoqumica, el fraccionamiento celular
y las tcnicas para el estudio del ADN. Todo esto hace necesario contar con
conocimientos bsicos, los mtodos aplicados con mayor frecuencia para
que el estudio de la Histologa no sea nicamente de algunos hechos, sino
que tambin nos permita adoptar una postura crtica ante ellos, como por
ejemplo la determinacin de un tratamiento definiendo la utilizacin de un
medio diagnstico especifico.

El microscopio es el aparato ms importante del Laboratorio y consta de:

Parte mecnica
1. Pie o soporte: Sirve cmo base al Microscopio y en el se encuentra la
fuente de iluminacin.

2. Platina: Superficie sobre la que se colocan las reparaciones. En el centro

se encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay
un sistema de pinzas o similar, para sujetar el portaobjetos con la
preparacin y unas escalas que ayudan a conocer que parte de la muestra
se est observando. La platina presenta 2 tornillos, generalmente situados
en la parte inferior de la misma, que permite desplazar la preparacin
sobre la platina, en sentido longitudinal y transverso respectivamente.
3. Tubo: Cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el
soporte de oculares y objetivos.
4. Revlver portaobjetivos: Estructura giratoria que contiene los objetivos.
5. Brazo o Asa: Une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el
Microscopio Para trasladarlo de lugar.
6. Tornillo macromtrico o del enfoque grosero: Sirve para obtener un
primer enfoque de la muestra al utilizarse el objetivo de menor aumento.
Desplaza la platina verticalmente de forma perceptible.
7. Tornillo micromtrico o de enfoque fino: Sirve para un enfoque preciso
de la muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el
macromtrico. Tambin desplaza verticalmente la platina, pero de forma
prcticamente imperceptible. Es el tornillo de enfoque que se utiliza, una
vez realizado el primer enfoque, al ir cambiando a objetivos de mayor
aumento.
Parte ptica:
1. Oculares: Son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador,
situados en la parte superior del Microscopio. Son cilindros huecos
provistos de lentes convergentes cuyo aumento se resea en la parte
superior de los mismos, (normalmente 10X en los microscopios que se
utilizaran en esta prctica). Dependiendo de que exista uno o dos oculares
pueden ser mono o binoculares.
2. Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la
parte inferior del tubo, mediante el revlver. En esta estructura se pueden
acoplar varios objetivos (ordenados de forma crecientes segn sus
aumentos, en el sentido de las agujas del reloj). Un anillo coloreado es
distintivo de los aumentos de cada objetivo, que tambin van grabados en
el lateral del mismo.
a. El objetivo X10 aumenta 10 veces.
b. El objetivo X40 aumenta 40 veces.
c. El objetivo X100 aumenta 100 veces (Generalmente se encuentra
marcado con un anillo rojo para indicar que se debe usar con aceite de
inmersin). Estos objetivos de inmersin no se utilizaran normalmente en
estas prcticas.
3. Condensador: Sistema de lentes convergentes que capta los rayos de
luz y los concentra sobre la preparacin, de manera que proporciona
mayor o menos contraste. Se regula en altura mediante un tornillo.
4. Fuente de Iluminacin: El aparato de iluminacin esta constituida por
una lmpara halgena de bajo voltaje (12v) situada en el pie del

Microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que

enva los rayos luminosos hacia la platina.
5. Diafragma o Iris: Sobre el reflector de la fuente de iluminacin.
Abrindolo o cerrndolo permite graduar la intensidad de la luz.
6. Transformador: Ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la
red, es necesario para enchufar el Microscopio. El transformador dispone
de un potencimetro para regular la intensidad de la luz.

II. PREVIO A LA ACTIVIDAD

1. Habilidades y conocimientos:
a.

Realice un cuadro que refleje lo mtodos existentes para el estudio

histolgico del ser humano.

Mtodos histolgicos
MICROSCOPIA

PREPARACION DE
TEJIDO PARA EXAMEN
MICROSCOPICO
CULTIVO DE CELULAS ,
TEJIDO Y ORGANOS

FRACCIONAMIENTO
CELULAR

Anlisis de las muestras

histolgicas con la ayuda
del
microscopio,
se
clasifican
en
dos
microscopio
de
luz
y
electrnico.
Preparacin de un tejido
para su anlisis, incluyen:
muestras tisulares delgadas
y translucida, y tinciones.
Permiten la observacin de
los
efectos
de
ciertos
tratamientos
sobre
la
estructura y funcin de
clulas aisladas, tejidos y
rganos.
Esta
tcnica
incluye
la
rotura mecnica de clulas
y la separacin posterior de
sus componentes mediante
centrifugacin para anlisis
microscpico o bioqumico.

b. Haga un cuadro sinptico sobre los componentes y funciones de las

partes del microscopio y selelos en el dibujo.

c. Definir y utilizar correctamente los trminos siguientes:

Poder de resolucin:
El poder de resolucin est determinado en parte por la
longitud de onda de la radiacin empleada para iluminar el espcimen y es
inversamente proporcional a la misma, es decir, a menor longitud de onda, mayor
poder de resolucin. El haz de electrones puede tener longitudes de onda
variables, las cuales influyen en el lmite de resolucin que a su vez depender del
voltaje empleado para acelerar los electrones.
Micra: Unidad de longitud equivalente a la millonsima parte del metro.
Poder de ampliacin: es la capacidad de un microscopio de para aumentar la
imagen.
Angstrom: Unidad de medida equivalente a la diez mil millonsima parte del metro,
0.000,000,000,1 metros, cuyo smbolo es , utilizada principalmente para indicar
las longitudes de onda de la luz visible. En un centmetro caben 10 millones de
angstroms.
Micrmetro: El micrmetro, micrn o micra es una unidad de longitud equivalente a
una milsima parte de un milmetro. Su smbolo cientfico es m.
Nanmetro: El nanmetro es la unidad de longitud que equivale a una mil
millonsima parte de un metro (1 nm = 109 m). Se utiliza para medir la longitud
de onda de la radiacin ultravioleta, radiacin infrarroja y la luz.
Colorante histolgico: Se utiliza para localizar y distinguir entre los diversos
componentes celulares y tisulares.
Acidofilia: Propiedad que tienen algunas estructuras celulares y algunos tejidos
para unirse a colorantes de tipo cido, como la eosina.

 Basilia: Material que aparece en el citoplasma de algunas clulas, que presenta

una afinidad por colorantes bsicos.

d. En qu consiste la tcnica de inclusin en parafina?

Consiste en volver al tejido firme y evitar el machacamiento u otra alteracin tisular
durante los cortes, lo que permite muestras delgadas y uniformes.
2. Explicar con sus propias palabras.
a. La accin de las colorantes Hematoxilina y Eosina. Qu
componentes celulares se tien con cada uno de ellos?
La hematoxilina es una base que tie componentes cidos de la clula (ncleos, regiones
acidas del citoplasma, matriz del cartlago, DNA, RNA y polianiones como
glucosaminoglucanos sulfatos) en un color azuloso o violeta, mientras que la eosina es un
cido que tie los compontes bsicos (regiones y protenas bsicas del citoplasma, fibras
de colgeno, componentes tisulares acidfilos) de un color rosado, rojo o faxea.

b.

En un cuadro clasificar los organitos celulares de acuerdo a su

afinidad a la Hematoxilina Y eosina.
HEMATOXILINA
EOSINA
ncleos, regiones acidas del citoplasma, regiones
y
protenas
bsicas
del
matriz del cartlago, DNA, RNA y citoplasma,
fibras
de
colgeno,
polianiones como glucosaminoglucanos componentes tisulares acidfilos
sulfatos

c.

Cul es el objetivo de la fijacin de los tejidos cuando se preparan

cortes histolgicos.
Es conservar la organizacin estructural del tejido.
d. Qu se entiende por Acidofilia y Basofilia?
Acidofilia es la propiedad que tienen algunas estructuras celulares y algunos tejidos para
unirse a colorantes de tipo cido, como la eosina mientras que la basofilia es la propiedad
que tienen algunas estructuras celulares y tejidos que presenta una afinidad por
colorantes bsicos como la hematoxilina.
e.

La utilidad de las tcnicas de observacin de tejidos vivos preparacin

de tejidos muertos, Inmunohistoqumica, fraccionamiento celular.
Fijacin, deshidratacin, aclaramiento e infiltracin, inclusin, cortes, criofractura y grabado
por congelacin, montaje y tincin
f. Ventajas y desventajas del mtodo de inclusin en parafina.

VENTAJAS
Crean un medio homogneo.
Facilidad del corte.

DESVENTAJAS
Apolaridad del tejido.
Aveces crean alteraciones que no

 Precisin del corte.

son homogneas.
Al cortar la muestra, reaccionan de
forma muy distinta a la retraccin
debido al distinto grosor y
naturaleza de la pared celular.

g. Pasos de la tcnica de inclusin en parafina, en orden sucesivo y el

propsito de cada uno.
El tejido infiltrado se coloca en un molde lleno con el medio de inclusin, el cual se
endurece y forma un bloque, que se extrae del molde, y se fija al mandril. Cuando se
coloca en el micrtomo, el mandril conserva al bloque en su lugar para la obtencin de
cortes.
h. Artefactos ms frecuentes que se pueden presentar en cada uno de
los pasos de la tcnica de inclusin en parafina
Molde, mandril, micrtomo.

DESARROLLO:
1. Realice paso a paso el adecuado enfoque de una laminilla
histolgica con el Microscopio ptico.
2. Observacin de una preparacin.
Antes de utilizar el microscopio, limpie todos los lentes con
papel toalla.
Conecte la fuente de luz encindalo.
Coloque el objetivo de menor aumento en posicin por debajo
del tubo del microscopio, sentir un chasquido cuando haya
quedado colocado.
Coloque la preparacin del porta objeto sobre la platina del
microscopio y asegrelas con las pinzas o sujetadores
correspondientes, asegrese que el portaobjetos a observar sea
colocada adecuadamente y que contenga el cubreobjetos.
Baje el objetivo de menor aumento con el tornillo de ajuste
grueso (Macromtrico). Aproximadamente medio centmetro por
encima del cubreobjetos de la preparacin.
3. Seale en un corte teido con Hematoxilina y Eosina, los
componentes del tejido que se tien Basfilos y Eosinfilos.
4. Identifique los artefactos ms frecuentes de la tcnica de inclusin
en parafina.

5. Identifique: Clulas Ncleos Citoplasma celular, Sustancia

intercelular: Forme (fibras) y amorfa (Espacios), Vasos sanguneos.