Mutagnesis

Tema 4. Sistemas de reparacin.

Esta tabla corresponde a E.coli, por lo que de esta tabla, hay un tipo de reparacin, la
reparacin SOS, que los eucariotas no hacemos, el resto exactamente igual. Cualquier
mecanismo que implique detoxificacin (primera fila de la tabla), no ser un sistema de
reparacin, ya que lo que hace es evitar que el DNA pueda sufrir dao. Si evitamos el dao,
no lo reparamos. Todos los otros s que sern reparacin, ya que son mecanismos que
restauran la situacin inicial sin error, por ejemplo, eliminacin de dmeros, de uracilos, de
alquiles.

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Fotorreparacin.

En el dibujo vemos un dmero entre pirimidinas producido en una bacteria, efecto tpico de
la radiacin ultravioleta (que no es ionizante). En este caso, la fotoliasa lo reparar por
fotorreparacin si la bacteria se encuentra en un medio con luz; sin embargo, si la bacteria
se encuentra a oscuras, lo har por escisin.

Sistema de reparacin GO.

En la siguiente mutacin, se sustituye la guanina por
GO (guanina oxidada); si ahora se da una replicacin,
puede ser que se mantenga la base oxidada, tambin
puede ser que en la otra cadena se incorpore una A en
vez de una C, y finalmente, puede ser que si la clula
dispone de la glucosilasa especfica (FaPy),
selectivamente eliminar la base oxidada. Por tanto,
en esta ltima situacin, se nos repetir la situacin
inicial al cabo de dos rondas.
Dos glucosilasas actan conjuntamente para eliminar
las mutaciones causadas por las lesiones que produce
en el DNA el 8-oxodG. Las glucosilasas junto al
producto del gen mutT forman el sistema GO.
Cuando se originan lesiones GO en el DNA, por dao oxidativo espontneo, una glucosilasa
cifrada en el gen mutM elimina la lesin. An as persisten algunas lesiones GO que
emparejan errneamente con adenina. Una segunda glucosilasa producto del gen mutY
elimina la adenina de este emparejamiento errneo especfico, llevando al restablecimiento
de la citosina correcta por sntesis de reparacin.

Reparacin por transferasas.

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Si el DNA se replica, las alquilaciones suelen producir transiciones debido al apareamiento
incorrecto; ello se soluciona gracias enzimas que tienen que eliminar el grupo puesto. Si la
transferasa reconoce y trabaja correctamente, la base vuelve a ser la base originaria.

Si hay mucho dao, puede ser que el sistema enzimtico de reparacin est saturado y no
pueda repararlo; por tanto, en sistemas de mucha alquilacin, puede ser que estas enzimas
no solucionen el problema. Si algunas de ellas no se han reparado mediante este
mecanismo, podran repararse mediante escisin; este tipo de reparacin se denomina
generalista, ya que no est determinada para ninguna base en particular.

Cuando hay muchas alquilaciones puede darse una respuesta adaptativa, es decir, que la
clula genere la posibilidad de producir ms enzimas para poder reparar ms cantidad de
dao.
Esta respuesta adaptativa respecto a los agentes alquilantes, no se puede dar en eucariotas,
ya que es una respuesta caractersticas de bacterias donde se trabaja y actan los llamados
regulones.

Si tenemos la situacin de la imagen, vemos
que nos especifican unas secuencias
promotoras de este gen, habiendo adeninas,
una de las bases que ms suele alquilarse.
Imaginemos que en esta imagen no ha habido
alquilacin, y que por tanto, cada uno de estos
genes estn produciendo unas protenas o
productos a un nivel basal. Por tanto, como no
hay dao, no necesitamos reparar, y si no
necesitamos reparar, tampoco necesitamos
estimular la produccin de protenas
implicadas en la reparacin.

El gen ada, da lugar a una protena que puede
capturar dos grupos metil y dimetilarse;
cuando vemos que el producto del gen ada est
metilado, se colocar en la regin promotora
del gen correspondiente (todos aquellos implicados en el reguln); la interaccin har de
activador de la transcripcin de dichos genes. Por tanto, si en una situacin donde no hay
alquilacin hay pocas molculas (concentracin basal), cuando haya dao, se transcribirn
muchas de estas protenas.

Reparacin por escisin de nucletidos (NER).

Hablaremos ahora de la reparacin por
escisin de nucletidos (NER); en la imagen
vemos un fragmento de DNA que contiene
dmeros de pirimidina (cuyos casos ms
importantes son TT). Las dos seales que
vemos alrededor de dicho dmero, nos dicen
que las endonucleasas cortan a ambos lados
del dao, sea cual sea; una vez ha cortado,

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vendrn las exonucleasas para comerse todo el fragmento, dejando un hueco que se tiene
que reparar. Como en la cadena de abajo est la secuencia correcta, la usaremos como
molde para volver a sintetizar la daada, cosa que hacen las polimerasas; si actan de
manera correcta, esta escisin nos llevar a una situacin donde no se ha producido ningn
cambio a nivel de base, recuperando la secuencia perfecta. En cualquier proceso en el que
haya habido corte y sntesis, para restaurar la continuidad del DNA, deben actuar las
ligasas.

Reparacin por escisin de bases (BER).

Existe otro tipo de reparacin por escisin que no es por nucletidos, sino de bases (BER);
la base que es errnea, es reconocida por una glucosilasa especfica que la elimina,
quedndose un espacio sin base. La polimerasa y la ligasa, cuando acten, restaurarn la
cadena normal con la base correcta.
Una alteracin de una base que fuese muy grave por la adicin de un aducto voluminoso, el
arreglo se hara por NER, ya que esto implica una distorsin de la molcula. Los dos tipos de
reparaciones pueden cometer errores, pero en la que ms casos de error se pueden dar es
en la NER, dado que tienen que reparar fragmentos mayores de DNA.

Reparacin por missmatch.


En la siguiente imagen, a derecha e izquierda,
tenemos bases apareadas, y en el centro tenemos
dos bases que no son complementarias:
apareamiento errneo (missmatch). Esto se
puede reparar perfectamente escindiendo un
fragmento o la propia base, y esperar a que la
polimerasa incorpore la base que corresponde.
La eleccin de la base que se elimina (si la T o la
G), se basa en los patrones de metilacin que
posee una de las cadenas (ya que la nueva no lo
est an): eliminamos la base de la cadena que
no presenta metilacin. Si por lo que sea, esta
escisin se retrasa y la metilacin se adelanta,
ambas cadenas estarn metiladas, teniendo un
50% de escoger cualquiera de las dos hebras.
Este mecanismo, sin embargo, ocurre en
bacterias, y no se sabe si sucede o no en
eucariotas. En eucariotas, se dice que la
discriminacin entre ambas cadenas se basa en
los fragmentos de Okazaki, ya que la cadena que
los presente, ser la cadena nueva en la
replicacin, pero no est totalmente claro.

Reparacin post-replicativa.

Partimos de un DNA con dos dmeros; si el error no es reconocido por la DNA polimerasa y
la replicacin avanza, dejar a lado y lado un espacio sin replicar. Se puede producir la

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recombinacin y dar lugar un dplex recombinante defectuoso y a un recombinante
totalmente normal. Segn lo dicho, la reparacin post-replicativa no acta directamente
sobre los dmeros de pirimidinas, sino que reparan las discontinuidades que se originan por
la replicacin del DNA daado.


Reparacin SOS.

Esta reparacin se da solo en el caso de que haya muchos puntos daados; si se reparase
por escisin, las polimerasas introduciran bases que no se corresponderan con las de la
cadena complementaria, creando por tanto mutaciones tambin. El caso es que la clula
mantenga la integridad y consiga dividirse; si ya a las clulas hijas les da tiempo, ya
arreglarn los errores de correspondencia que haya, pero lo importante es que se mantenga
la integridad, y este es el objetivo de la reparacin SOS, que est demostrada nicamente en
bacterias.

Ampliacin: este mecanimo, presente en E.coli y otras bacterias relacionadas, acta cuando
en el DNA hay muchos errores, como agujeros, dmeros u otras distorsiones que dificulten
la reparacin.

Entonces, la bacteria induce la expresin de unos 25 genes, los productos de los cuales
permiten que la replicacin se produzca en este tipo de lesiones, a costa de su fidelidad.

La transcripcin de los genes implicados en la respuesta es regulada al menos en parte, por
un represor comn de la protena LexA, producto del gen lexA. Entre estos genes
encontramos los siguientes: recA, uvrA, uvrB, uvrD, sulA y sulB.

El sistema implica la protena RecA. Esta protena es activada por el DNA de cadena sencilla,
interacciona con LexA y causa su escisin, suprimiento su activad represora e induciendo
de esta manera la respuesta. Se trata de un sistema de reparacin propenso a error.

La denominacin SOS es debida a que es el ltimo recurso que tiene la clula para
minimizar el dao en su DNA.

Cuando se ha activado el sistema, la fuerza de replicacin en vez de pararse porque la
cadena molde contiene errores, avanza sobre la regin afectada. Esto es posible gracias a
que las enzimas de los sistemas SOS tienen condiciones muy laxas en el apareamiento de
bases, aadiendo nucletidos muy a menudo de manera incorrecta. Adems, el sistema
corrector de pruebas de la polimerasa tambin est relajado por tal de permitir que la
polimerizacin se produzca a pesar de la distorsin existente.

Por sus caractersticas, la reparacin SOS es mutagnica, pero permite que la clula
sobreviva al dao en el DNA.