Susceptibilidad in Vitro de Candida Albicans y No Albicans Aisladas de Prótesis Dentales de Pacientes Con Estomatitis Protésica A Tres Sustancias de Desinfección

26/7/2016 SusceptibilidadinvitrodeCandidaalbicansynoalbicansAisladasdePrtesisDentalesdePacientesconEstomatitisProtsicaaTresSustanciasdeDe
Internationaljournalofodontostomatology
versinOnlineISSN0718381X
Int.J.Odontostomat.vol.9no.3Temucodic.2015
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http://dx.doi.org/10.4067/S0718381X2015000300004
Int.J.Odontostomat.,9(3):373377,2015.
SusceptibilidadinvitrodeCandidaalbicansyno
albicansAisladasdePrtesisDentalesde
PacientesconEstomatitisProtsicaaTres
SustanciasdeDesinfeccin
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InvitroSusceptibilityofCandidaalbicansandNon
albicansIsolatedfroDentalProthesisinPatientswith
DentureStomatitistoThreeDisinfectants
DiegoMichelCastilloSauceda*Ma.ConcepcinTelloZavala**Luis
OctavioSnchezVargas*Ma.BerthaGmezGutirrez**Nadya
NavaZrate*&SarayArandaRomo*
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*LaboratoriodeBioqumica,MicrobiologayPatologa,FacultaddeEstomatologa,UniversidadAutnomade
SanLuisPotos,SanLuisPotos,Mxico.
**LaboratoriodeMicrobiologaFacultaddeMedicina,UniversidadAutnomadeSanLuisPotos,SanLuisPotos,
Mxico.
Correspondenciaa:
RESUMEN:Apesardelgrannmerodeproductosdisponiblesparalalimpiezadeprtesisdentales,el60%de
los portadores hace uso de ellos, posiblemente por la situacin econmica. El objetivo fue determinar la
susceptibilidad antifngica in vitro que presenta Candida y sus especies a tres sustancias utilizadas para la
desinfeccin de prtesis (hipoclorito de sodio, cido actico y solucin de superoxidacin). Se obtuvieron
aisladosclnicos de Candida de pacientes portadores de prtesis diagnosticados con estomatitis protsica, para
suposteriorestudiodesusceptibilidadinvitroalasdiferentessustancias.Elhipocloritodesodioal0,5%mostr
in vitro una mayor inhibicin para las cepas de Candida albicans y Candida no albicans. El cido actico y la
solucin de superoxidacin no mostraron inhibicin in vitro frente a ambas cepas. El hipoclorito de sodio al
0,5%tieneunefectoinhibitorioinvitrosobrelascepasdeC.albicansyCandidanoalbicans.
PALABRASCLAVE:Candidaalbicans,estomatitisprotsica,hipocloritodesodio.
ABSTRACT: Despite the large number of products available for denture cleaning, less than 60% of denture
wearers use them, possibly due to the economic situation. The aims were to determine the in vitro antifungal
susceptibility of Candida species to three denture disinfectants (Sodium hypochlorite, acetic acid and super
http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0718381X2015000300004&script=sci_arttext&tlng=pt
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oxidized solution). Clinical isolates were obtained from denture wearers diagnosed with denture stomatitis for
its posterior in vitro susceptibility study to the different substances. 0.5% Sodium hypochlorite showed the
higher in vitro inhibitory effect on Candida albicans and nonalbicans. Acetic acid and super oxidized solution
showed no inhibition in both species. 0.5% Sodium hypochlorite has an in vitro inhibitory effect on Candida
species.
KEYWORDS:Candidaalbicans,denturestomatitis,sodiumhipoclorite.
INTRODUCCIN
Cuandoseintroducedentrodelacavidadoralunaprtesisdental,Candidaescapazdeadherirseycolonizarla,
aumentando su frecuencia a un 66,7% en stos pacientes (Williams et al., 2011). De acuerdo con varios
estudiosinvitro,lacontaminacinmicrobiana de la resina acrlica se produce rpidamente, y las levaduras se
adhierenmuybienalabasedelaprtesis(Jacksonetal.,2014Kochetal.,2013).UnavezquelaCandidase
adhiere sobre las superficies de stas y coloniza, es capaz de desarrollar la formacin de una comunidad de
microorganismos unidos a una superficie y rodeados por una matriz extracelular polisacrida denominada
biofilm (Williams et al. Koch et al.). La transicin de Candida, desde un comensal inocuo a organismo
patognicoescompleja,ydependetantodefactoreslocalescomosistmicos,quecontribuyenaldesarrollode
estomatitis protsica (EP), reportndose C. albicans como el principal agente etiolgico en el 71,4% de los
casos.LaEPtambinseasociaalamalahigienedelaprtesis,loquedemuestralaimportanciadesulimpieza
empleando mtodos mecnicos o qumicos (Williams & Lewis, 2000). Existen en el mercado diversos agentes
utilizados para la desinfeccin de las prtesis de bajo costo, como el cido actico (AC), un lquido astringente
que tiene potencial antimicrobiano. Estudios in vitro han demostrado que las bajas dosis fungicidas del cido
actico inducen la apoptosis de C. albicans. La inmersin total de dentaduras en una solucin de AC al 10% o
5% durante la noche, reduce las colonias (cfu/ml) de Candida en la saliva, as como la presencia de EP el
efectoderemocinescomparableconunasolucindehipocloritodesodio(NaOCl)al1%(Pintoetal.,2008).
ElNaOCl,actacomoagenteantifngicocuandoesempleadoensolucinparasumergirlasprtesisencasode
EP,debidoaquereducelacapacidaddeadhesindeCandidaalasclulasepiteliales(Estrelaetal.,2013).Ha
sidoempleadopormuchotiempocomodesinfectanteprotsico,yaquereduceelcrecimientomicrobianosobre
las superficies de la prtesis. Segn estudios (Estrela et al. Davi et al., 2010), la inmersin de la prtesis en
0,5% de NaOCl, durante 5 minutos, es suficiente para eliminar C. albicans. Chau et al. (1995) establecen que
una inmersin de 10 min en NaOCl al 5,25% es efectiva para desinfectar superficies internas y externas del
acrlicodelaprtesis,sinembargo,debeemplearseunavezalasemanayaquedecoloraelacrlicoyafectasu
fuerzadeflexin.
Tambin existen agentes desinfectantes de costo elevado por ejemplo la solucin electrolizada de sper
oxidacin (SSO), una solucin con pH neutro al 0,004% (40 ppm) de Cl activo, con un amplio espectro
antimicrobiano, esto se atribuye al efecto de oxidacin de los grupos sulfhidrilos y aminocidos de la pared
bacteriana, lo que afecta el proceso de respiracin y nutricin de los microorganismos, se ha demostrado su
eficaciaparainactivarC.albicansenestudiosrealizadosinvitroenloscualesuntiempodeexposicinde30s
fuesuficienteparainactivarcompletamentetodaslasmuestras(Zengetal.,2011Iierietal.,2006).
ElobjetivofueevaluarlasusceptibilidadantifngicainvitrosobreaislamientosclnicosdeCandidaobtenidosde
lassuperficiesdelasprtesisdentalesa3sustanciasutilizadasparasudesinfeccin.
MATERIALYMTODO
Ensayo de susceptibilidad in vitro. Se evaluaron soluciones desinfectantes de AC, NaOCl y SSO. Se utilizaron
tres aislamientos de C. albicans y tres aislamientos de Candida no albicans. obtenidos previamente de las
prtesis. Para determinar si el aislamiento corresponda a C. albicans se realiz la prueba del tubo germinal.
Para la tipificacin de Candida no albicans, se utilizaron placas de CHROMagar siguiendo las especificaciones
del fabricante, como control se emplearon cepas ATCC 24433 y ATCC 90028 de C. albicans. Se prepar una
suspensin de cada una de las cepas de C. albicans y Candida no albicans a una concentracin de 0,5 de
McFarlandutilizandounnefelmetro.SehicierondilucionesdeNaOCl(5,25%)yAC(5%)comosigue:0,5,0,25,
0,125 y 0,062% en agua destilada estril. La SSO se aplic directamente sobre la placa de agar mediante una
pipetadevolumenfijo(20mLdeSSO),debidoalasinstruccionesdelfabricante.Conlasdilucionespreparadas
seimpregnarondiscosde6mmdedimetrodepapelfiltro(Whatman40,WhatmanLtd.EnglandUK)durante
5minconcadaunadelassustanciasaevaluar.CadaunadelascepasyaislamientosdeC.albicans y Candida
no albicans a evaluar se sembraron en placas de agar dextrosa sabouraud. En cada placa ya inoculada se
colocaronlosdiscosdepapelimpregnados,distribuidosenlapartecentraldecadaplaca,comocontrolnegativo
secolocarondiscosimpregnadosenaguaestril.Lasplacasseincubarona37Cyluegode48hdeincubacin
semidienmilmetroseldimetrototaldeloshalosdeinhibicinformadosalrededordecadadisco.
2/6
Se realiz anlisis descriptivo de las variables registradas utilizando medidas de tendencia central para las
variablescontinuasyproporcionesparalasvariablesnominales.
RESULTADOS
PruebasdesensibilidadinvitrodeC.albicansyCandidanoalbicansalosdiferentesdesinfectantes.
El AC y la SSO a las diferentes concentraciones utilizadas no mostraron actividad antifngica in vitro sobre los
aislamientos de C. albicans y C. no albicans, por lo que fueron considerados resistentes. El promedio de las
zonas de inhibicin (mm) que mostraron las cepas de Candida albicans, no albicans y cepas ATCC a las
diferentes concentraciones de NaOCl se muestran en las Tablas I, II, III respectivamente. El efecto antifngico
delNaOClsobrelosaislamientosdeC.albicansfuedosisdependiente,mostrandounhalodeinhibicinmayora
unaconcentracinde0,5%(27mm)elcualdisminuyconformedisminuylaconcentracin,obteniendounhalo
deinhibicinde13mmaunaconcentracinde0,062%deNaOCl.
Con respecto a las cepas ATCC se obtuvo un halo de inhibicin ligeramente mayor con respecto a C. albicans
obtenida de prtesis dentales (31,5 mm vs 27 mm) a una concentracin de 0,5% de NaOCl. Sin embargo a
concentracionesde0,125%y0,062%lascepasATCC mostraron un menor halo de inhibicin con respecto a C.
albicans(12mmvs13,3mmy10mmvs13mm).
Los halos de inhibicin observados sobre las cepas no albicans de igual manera fueron dosis dependiente,
mostrando un halo de 17,3 mm a una concentracin de 0,5% el cual disminuy a 7,3 mm a una concentracin
de0,062%.AtodaslasconcentracionesloshalosdeinhibicinmostraronunmenordimetroconrespectoaC.
albicansycepasATCC.
Lacomparacindelospromediosobtenidosdeloshalosdeinhibicindelasespeciesevaluadassemuestraen
laTablaIV.PodemosobservarqueelefectoantifngicodelNaOCl,fuemayorenlascepasATCCalasdiferentes
concentraciones excepto a una concentracin de 0,062%, a esta concentracin el mayor efecto antifngico se
obtuvo sobre las especies de C. albicans. El efecto antifngico fue medido en base al tamao de los halos de
inhibicin de tal forma que se consider al mayor halo de inhibicin que se obtuvo por cada dosis como el
efectoantifngicomseficaz.ConrespectoalasusceptibilidadquemostraronlascepasnoalbicansalNaOClse
determin que fueron las menos sensibles debido a que fueron las que obtuvieron los menores halos de
inhibicinalasdiferentesconcentraciones.
TablaI.Medidasdeloshalosdeinhibicinobtenidosdelosaislamientosde
C.albicansprovenientesdeprtesisdentalesalasdiferentesconcentracionesdeNaOCl.
TablaII.Medidasdeloshalosdeinhibicinobtenidosdelosaislamientosdecepas
ATCCprovenientesdeprtesisdentalesalasdiferentesconcentracionesdeNaOCl.
TablaIII.MedidasdeloshalosdeinhibicinobtenidosdeC.
noalbicansprovenientesdeprtesisdentalesalasdiferentesconcentracionesdeNaOCl.
3/6
TablaIV.Comparacindeloshalosdeinhibicinentre
C.albicans,C.noalbicansyCepasATCC.
DISCUSIN
Enelpresentetrabajoreportamosla susceptibilidad antifngica in vitro, que muestran aislamientos clnicos de
Candida obtenidos de prtesis dentales a 3 sustancias utilizadas como desinfectantes. En primer lugar
determinamoslasusceptibilidadantifngicainvitroalACelcualnopresentningnhalodeinhibicin,esto tal
vez debido a que las concentraciones utilizadas no fueron las adecuadas para observar el efecto, este mismo
fenmenoloobservaronPintoetal.,loscualesreportaronqueunasolucindeACal10%noeliminC. albicans
de las prtesis. Sin embargo otros estudios in vitro han demostrado que dosis bajas del cido actico son
fungicidas,yaqueinducenlaapoptosisenC.albicans,lainmersintotaldedentadurasenunasolucindeACal
10% o incluso 5% durante la noche, reduce las unidades formadoras de colonia (UFC/ml) de Candida spp. en
saliva,ascomolapresenciadeEP.ElefectoderemocindelasolucindeACal5%o10%escomparablecon
unasolucindeNaOClal1%(AliJafarietal.,2012).
PorotrapartelaSSOconpHneutroennuestroestudionomostrinhibicinalgunaenlascepasdeC.albicans
ynoalbicans,sinembargopublicacionespreviashandemostradosuefectomicrobicida(Zengetal.Iierietal.)
Por ser producto de aparicin reciente, cuenta con escasos reportes en la literatura, son necesarios ms
estudiosparademostrarsueficacia.
Finalmenteeldesinfectantereconocidocomo"Estndardeoro"paraladesinfeccindeprtesiscolonizadas por
Candida, es el NaOCl, en este estudio pudimos corroborar su eficacia, ya que mostr la mejor susceptibilidad
antifngicainvitro,estodebidoaquefueronutilizadaslasconcentracionesadecuadas,previamentereportadas
enlaliteratura,siendolaconcentracinal0,5%laquemostrlamayoreficacia,estocoincideconloreportado
previamente(Skupienetal.,2013)quienesanalizarondiversosestudiosinvitro,endondesedemostrqueest
concentracin es eficaz para desinfectar la superficies de las prtesis, por otro lado esta misma concentracin
fue evaluada in vivo por de Sousa Porta et al. (2013), quienes demostraron su eficacia en la reduccin de
microorganismos sin causar cambios significativos en el color o la rugosidad de la prtesis. En este sentido,
para demostrar el efecto que tiene el NaOCl sobre la resina acrlica de la prtesis, McNeme et al. (1991)
mostraron que no existen cambios de color en las resinas acrlicas despus del uso de NaOCl en distintas
concentraciones (0,525%, 1% y 5,25%), en un lapso de 72 h. Orsi & Andrade (2004) reportaron que no hay
afeccionesenlafuerzadeflexindelaprtesisdespusdeunainmersinenNaOClal1%,2,5%y5,25%,en
un lapso de inmersin de 10 min. Sin embargo debido al sabor y olor desagradable del NaOCl a estas
concentraciones tan elevadas, la prtesis debe enjuagarse adecuadamente para remover el producto, adems
de que existe el riesgo de quemaduras en la mucosa de soporte de la prtesis, por tal motivo es preferible
utilizarconcentracionesmsbajasdemostrandosueficaciainvitrocomoloreportadopreviamenteporDaviet
al., donde describe que concentraciones al 1% de NaOCl son desinfectantes sin embargo son suficientes para
influirenlaestabilidad,coloryfuerzadeflexindelaprtesis,porlotantonosotrosdemostramosinvitroque
concentracionesmenoresal1%tienenbuenaactividadantifngica.
Las cepas ATCC mostraron la mayor eficacia antifngica, esto debido a que son cepas de referencia las cuales
sirven de controles, no obstante los aislamientos recuperados de prtesis dentales debido a las condiciones y
4/6
edaddelasprtesisactivanfactoresdevirulenciaycapacidadesquelespermitensusupervivenciaacualquier
agente desinfectante, ms an cuando se encuentran en el biofilm (Snchez et al., 2013). Por otro lado
identificamos que las especies sobre las cuales el NaOCl mostr una menor eficacia fueron las C. no albicans,
esto es de gran relevancia ya que las especies que se aslan con mayor frecuencia de las prtesis segn el
estudiorealizadoporNayaketal.(2012)sonlasespeciesdeCandidanoalbicans.
Unadelaslimitacionesdenuestroestudiofueelnmerodecepasevaluadasylametodologautilizadaya que
al ser un mtodo cualitativo, no permite determinar las concentraciones mnima inhibitorias de las sustancias
desinfectantes, una de las expectativas del estudio es evaluar estas sustancias por el mtodo de
microdiluciones, con un mayor nmero de aislamientos y adems llevar a cabo ensayos clnicos controlados
aleatorizadosparademostrarsueficaciainvivo.ElNaOClal0,5%mostrlamejorinhibicininvitrocontraC.
albicansyCandidanoalbicans,estainhibicinfuedosisdependiente.
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DireccinparaCorrespondencia:
SarayArandaRomo
LaboratoriodeBioqumica,MicrobiologayPatologa
FacultaddeEstomatologa
UniversidadAutnomadeSanLuisPotos
SanLuisPotos
MXICO
Email:aran_sa77@hotmail.com
Recibido:07032015
Aceptado:03102015
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