MTODOS DE DETERMINACIN DE PROTENAS POR ADHESIN DE UN

COLORANTE
Controlando el pH y la fuerza inica del medio los grupos funcionales cidos y
bsicos de las protenas pueden interactuar con grupos orgnicos de carga
opuesta. Al realizarse la unin se presenta coloracin o bien un cambio de sta.
Comnmente se usan colorantes sulfonados los cuales reaccionan a pH cido
con el grupo e-amino de la lisina y el grupo guanidina de la arginina, el
imidazol de la histidina y un nmero limitado de a-amino terminales.
Pueden adherirse colorantes ANINICOS o Pueden adherirse colorantes
ANINICOS o CATINICOS (METODO DE BRADFORD).

ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

FUNDAMENTO
La muestra proteica se mezcla con una cantidad excesiva conocida de un
colorante aninico en una solucin buffer.
Las protenas se unen al colorante para formar un complejo insoluble.
Se mide el colorante no adherido, soluble posterior a la equilibraran de la
reaccin y la remocin del complejo insoluble por centrifugacin y filtracin.
El colorante no adherido est inversamente relacionado al contenido protico
de la muestra
Protena + exceso de colorante complejo protena-colorante Insoluble+
colorante no adherido soluble

COLORANTES UTILIZADOS EN ESTE MTODO

CIDO SULFNICO ANINICO
Naranja cido 12
Naranja g
Negro amido 10b
Unen grupos catinicos de los residuos bsicos de aminocidos (imidasol de la
histidina, guanidina de la arginina y el grupo -amino de la lisina) y el grupo
libre terminal amino de las protenas.
El mtodo con el colorante NARANJA 12 est descripto en la AOAC para
leche fluida, helados, leche en polvo descremada (=480 nm)
Algunos compuestos no proteicos como almidn o metales pueden
unirse al colorante.

VENTAJAS DEL MTODO DE ADHESIN DE COLORANTE ANINICO

Mtodo rpido (15 minutos o menos)
Barato
Relativamente exacto para el anlisis de protenas en alimentos
puede utilizarse para estimar los cambios en el contenido de lisina disponible
de los cereales durante su procesamiento.
No utiliza reactivos corrosivos
No mide nitrgeno no protico
Ms preciso que el mtodo kjeldahl
DESVENTAJAS DEL MTODO DE LA ADHESIN DEL COLORANTE ANINICO
Las protenas difieren en su contenido de aminocidos bsicos difieren en su
capacidad de adhesin del colorante
Se necesita elaborar curva de calibracin
Muchos componentes no proticos tambin se pueden adherir al colorante
(almidn), metales (ca o p) y causar errores en los resultados.