Précis de Microscopie - Langeron 1913

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Mdicaux
Collection de Prcis
Volumes
i7i-S
cartonn-^, toile souple.)
Cette collection s'adresse aux tudiants pour la prparation aux examens, et tous
praticiens qui, ct des grands traits, ont besoin d'ouvrages concis, mais vrai-
les
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au courant. D'un format maniable, lgamment

anglaise souple, ces livres sont trs abondamment illustrs.
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Introduction l'tude de la Mdecine, par G.-H. Rogbr,
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seur la Facult de Paris, 4" dition xiv-780 pages. ... 10 fr.

Anatomie et Dissection, par H. Rouvire, professeur agrg la
Facult de Paris. 'J'orne I
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{Le Tome II et dernier paratra en fvrier 1913.)
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Dissection, par
P. Poirier, professeur, et A. Baumgartner, ancien

prosecteur la Facult de Paris, chirurgien des hpitaux. t^*ec?i7on,
xxiv-360 pages, avec 241 figures
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Anatomie pathologique,
par M. Letulle, professeur la Facult de

Paris et L. iNattan LARiuEii, ancien chef de Laboratoire la Facult.
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Le Tome II et dernier
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Physique biologique, par G. Weiss, professeur la Facult de Paris,
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Physiologie, par Maurice

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Artiius, professeur l'Universit de Laudition entirement refondue, 930 pages, 320 figures. 12 fr.
Chimie physiologique, par Maurice Aktuus.

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Biochimie,
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la
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la
Facult de Paris.
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Beza.non, professeur agrg

9 fr.
dition, xviii-640 pages, 148 figures
.
Microscopie, par M. LangerOiX, prparateur
la Facult de Paris.
Prface de M. le P' R. Blanchard. Technique. Exprimentation. Diagnostic, xxiii-751 pages, 270 figures.
Examens de Laboratoire employs en

professeur
l'Universit
de
Genve,
clinique, par L. Bard,

avec la collaboration de
MM. G. HuMBERTetH. MALLET.i''eV/iYion,xiv-766 pages, 162 figures. lOfr.

Diagnostic mdical, par P. Spillmann etL. Haushalter, professeurs,
et L. Spillmainn, professeur agrg la Facult
xiv-569 pages, avec 181 figures
Thrapeutique
et
Pharmacologie, par
A.
de Nancy.
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dition,
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professeur
agrg la Facult de Paris. -2" dition, xxx-984 pages ... 12 fr.
Mdecine lgale, par A. Lacassagne, professeur l'Universit de
10 fr.
Lyon. 2" dition, 866 pages, 112 figures, 2 planches
Chirurgie infantile, par E. Kirmisson, professeur la Facult de
Riciiaud,
Paris. ^^ dition, xvin-796 pages, avec 475 figures
12
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Mdecine
de Paris,
infantile, par P. NoiicouHT, professeur agrg la Facult

i""
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dition, 932 pages, 136 figures, 2 planches
.
Ophtalmologie, par V. Morax, ophtalmologiste de
sire.
dition entirement refondue
Dermatologie, par
J.
122 ligures.
l'hpital Lariboi-
{Sous presse).
Dakier, mdecin de l'hpilal Broca. xvi-708 pages,

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de Paris, et Hist, mdecin des hpitaux, ancien inspecteur gnral
des services sanitaires maritimes d'Egypte. 810 pages, 160 figures; et
Pathologie exotique, par Jeanselme, professeur agrg
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Parasitologie, par E.
Brumpt, professeur agrg
la
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Facult de
Paris. xxvi-yiO pages, 683 figures et 4 planches en couleurs.
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Pathologie chirurgicale, par MM. Bgouin, Bourgeois, Pierre Duval,

GossET, Jeambi'.au, Lecne, Lenormant, R. Proust, Tixier.
Tome I.
Patholofjie chirurijicale gnrale. Maladies gnrales des tissus,

Hachis, par P. Lecne et R. Proust, professeurs agrgs la Fac. de
Paris, et L. Tixier, prof, agrg la Fac. de Lyon. 1.028 pages, 349 fig. 10 fr.
Crne
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Tome II. Tte, Cou, TJiorax, par II. Bourgeois, oto-rhino-laryngologiste

des hpitaux de Paris, et Ch. Lenormant, professeur agrg la Facult de
Paris, xii-981 pages, 341 figures
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Glandes mammaires, Abdomen, par MM. Pierre Duval,

Tome III.
A. GossET, F. Lecne, Ch. Lenormant, professeurs agrgs la Facult de
40 fr.
Paris, xii-782 pages, 352 figures
Pour paratre en
Tome
IV.
fvrier 1913
Organes gnito-urinaires. Membres, par MM.
P. Bgouin, pro-
fesseur agrgea la Facult de Bordeaux, E. Jeanbrau, professeur agrg la

Facult de Montpellier, R. Proust, professeur agrg la Facult de Paris,
L. Tixier, professeur la Facult de Lyon.
de Technique opratoire
Prcis
PAR LES PROSECTEURS DE LA FACULT DE MDECINE DE PARIS
Chaque
vol. illustr
de plus de iOO figures,
la
plupart originales.
Pratique courante et chirurgie d'urgence,
par
Victor
fr.
50
Veau.
Troisime dition.
Tte et cou, par Ch. Lenormant. Troisime
Thorax
et
Abdomen,
membre
dition.
suprieur, par A. Sgiiwartz. Deuxime dition.
par M. Guib. Troisime dition.
Appareil urinaire et appareil gnital de l'homme, par Pierre

DuvaL. Troisime dition.
Appareil gnital de
Membre
la
femme,
par B, Proust. Troisime dition.
infrieur, par Georges Labev. Deuxime dition.
661-11.
Coulomniiers. Imp,
Paul BRODARD.
1-13.
PRCIS
DE MICROSCOPIE
PRCIS
va'^
MICROSCOPIE
.
TECHNIQUE
EXPRIMENTATION
DIAGNOSTIC
PAR
LE
D^ M.
LANGERON
Chef des travaux de parasitologie Tlnstitut de mdecine coloniale,

Prparateur la Facult de Mdecine de Paris.
PREFACE PAR M. LE PROFESSEUR R. BLANCHARD

Membre de l'Acadmie de mdecine.
270 FIGURES
DANS LE TEXTE
PARIS
MASSON ET
LIBRAIRES
DE
120,
G'%
:^---
DITEURS
l'aCADMIE
DE
MDECINE
bollevard saint-germain
1913
.^m^^
i-^
Tous droits de reproduction, de traduction
pour
et
d'adaptation reserves
tous pays.
Copyright by Masson et
C'" (1913).
PREFACE
Voil dix ans dj que
le D''
Lanêron
est entr
au
Laboratoire de Parasitologie de la Facult de Mdecine

de Paris, en qualit de prparateur; ses travaux de
botanique m'taient connus, je savais trouver en lui un

naturaliste habile et consciencieux et attacher mon
Laboratoire un prcieux auxiliaire.
Mon
attente n'a pas
trompe il est devenu un trs habile micrographe,

un technicien consomm et, lorsqu'il me devint possible
t
de
lui
confier la
de
Institut
Parasitologie
savais que les lves
plus dvou
et le
des travaux pratiques
direction
1
Mdecine coloniale,
de
trouveraient
dmonstrateur
en
lui
le
guide
de
je
le
le
plus expriment.
L'autorit qu'il a acquise dans ce rle, ainsi qu'auprs
des lves du Laboratoire, m'a depuis longtemps engag
lui suggrer l'ide d'crire
micrographique. Sur
mon
un ouvrage de technique
par en
accepter l'ide, puis en ajourna l'excution, sous prtexte de connaissances insuffisantes, en ralit par un
sentiment d'excessive
il
finit
Le
insistance,
finit
il
modestie. J'insistai
encore,
et
par entendre raison.

livre
que j'attendais de
lui, et
que
j'ai
le
grand
plaisir de prsenter au public mdical, est incorpor par
PREFACE
VIII
une bibliothque de
Prcis de mdecine,
mais je ne crains pas de dire qu'il a plutt l'importance
d'un Trait, en ce sens que, bien loin d'tre un livre
l'diteur
lmentaire,
il
aborde
et
dans
expose
toute
leur
diverses questions ou scientifiques ou praampleur

tiques qui sont de nature intresser tous ceux qui
travaillent dans les laboratoires d'histologie, de zooloi^ne,
les
de botanique, de parasitologie, en un mot et d'une faon

plus gnrale, dans les tablissements o l'on tudie
l'une
ou
l'autre
des branches multiples qui sont du
ressort de la Biologie.
Les livres de technique microscopique sont nombreux

dj, mais presque tous, et les plus prtentieux sont
ceux qui prsentent le plus ce caractre, s'obstinent

rpter, en se copiant les uns les autres, des formules
des mthodes dsutes. M. Langeron a eu
mrite de couper court avec tout ce fatras et de ne
surannes
le
s'en
tenir
lesquels
lui
il
et
qu'aux procds vraiment nouveaux, avec

est trs familiaris et dont la valeur relative
est bien
connue. Ce
lui-mme nombre de
il
l'a
fois, et l'on
ses apprciations, car
exprience. Ce que
indique,
appliqu
peut s'en rapporter
sont le fruit de sa propre
qu'il
elles
je dis
l n'est
pas seulement vrai
c'est tout aussi

pour la technique micrographique
exact en ce qui concerne la partie instrumentale et la
partie exprimentale de son ouvrage.
:
C'est donc, dans
toute la force du terme, un livre
vcu et longuement mri que j'ai mission de prsenter

aux amis des sciences mdicales et naturelles. Ce livre
double emploi avec aucun autre, parce qu'il est
conu sur un plan entirement nouveau et parce que,
dans chacun de ses chapitres, il porte l'empreinte de son
ne
fait
PREFACE
IX
va devenir indispensable dans tous les laboratoires de biologie et il sera, dans une large mesure, un
auteur.
11
instrument de progrs scientifique. En effet, grce un

tel guide, se trouvent mises la porte de chacun des
mthodes perfectionnes, souvent
dlicates,
mais d'un
rsultat certain, la condition de suivre la lettre les
prescriptions formules par l'auteur et les tours de
main
dont une longue exprience lui a dmontr les avantages. Le succs sur lequel je compte pour cet ouvrage
viendra dmontrer que je n'ai pas apprci d'une faon
trop logieuse les mrites du D"" Langeron et que j'ai eu
lui proposer d'crire un tel livre, dont
besoin se faisait depuis longtemps sentir.
raison de
R. Blanchard,
Professeur de parasitologie
la Facult de mdecine de Paris.
le
TABLE DES MATIRES
Prface
vu
Table des matires
xi
xix
Introduction
PREMIRE PARTIE
^
LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES

Chapitre premier.
II.
Principe du microscope
Partie mcanique du microscope.

I. Le pied du microscope
II.
III.
III.
La
.'
10
12
18
platine
Le tube
25
Appareil d'clairage
Sources lumineuses
Emploi de l'appareil d'clairage
Rsum de l'emploi de l'appareil d'clairage.
IV.
V.
VI.
91
93
Oculaires
Formation de l'image microscopique.

Thorie de
VIL
42
'6
88
96
Notation des oculaires
34
46
Objectifs
Classification des objectifs
Notation des objectifs
Tableaux de concordance
31
la
mise au point du microscope.
Microscopes de voyage
98
104
105
XH
TABLE DES MATIERES
CiiAP.
VllI.
IX.
X.
Loupes
et
microscopes
...
108
....
113
dissection.
Microscopes prismes redresseurs
116
Appareils dessiner
1.
11.
IIS
Appareils dessiner miroir
Chambres
claires
dites.
proprement
123
127
128
Autres appareils dessiner

IV. Emploi des appareils dessiner
III.
XI.
Choix d'un microscope
134
XII.
Entretien du microscope
140
XIII.
L'observation microscopique
I.
II.
XIV.
Conditions de
la vision
145
microscopique.
145
152
Consquences pratiques
Emploi du microscope
I.
Manire de
saisir
160
et
de
160
microscope
IL Installation du microscope-
le
transporter
.
....
161
m.
Mise au point du microscope

IV. Mise au point des objectifs immersion.
V. Causes d'erreur dans la mise au point.
VI. Manuvre de la vis micromtrique et
observation microscopique
VII. Choix des objectifs et des oculaires
.
XV.
163
164
165
169
Dtermination des constantes optiques

du microscope
1.
II.
....
Dtermination du grossissement
Vrillcation du pouvoir dfinissant.
.
Vrification du pouvoir rsolvant.
IV. Vrification de l'tendue et de la planit
III.
.
du champ et des dformations de l'image.
XVI.
Mensurations microscopiques
I. Mensurations dans un plan
1.
2.
Procd de la chambre
Procd de l'oculaire
claire.
XVII.
Procd de mensuration directe.

Mensuration des paisseurs
Emploi de
I.
II.
m.
IV.
la
170
173
175
178
179
180
microm-
3.
l'Ô
179
horizontal.
trique
II.
161
192
lumire polarise
192
196
Notions sur la lumire polarise

Appareils de polarisation
Microscope polarisant
Emploi du microscope polarisant
184
189
190
....
202
203
TABLE DES MATIERES

Chat.
XVlll.
clairage
scopie
III.
IV.
V.
Yl.
noir
XIII
et
ultramicrc208
.
IL
XIX.
fond
Principe de l'clairage fond noir

Appareils pour l'clairage fond noir.
Remarques concernant tous les appareils
fond noir
Technique de l'examen sur fond noir.
Indications de l'emploi du fond noir.
Notions sur l'ultramicroscopio
I.
209
211
214
220
221
224
Appareils accessoires
227
DEUXIEME PARTIE
MTHODES GNRALES
Chapitre premier.
II.
But de
la
III.
La prparation microscopique
Examen
I.
234
230
238
....
l'tat frais
239
Liquides d'examen
241
242
IL Mthodes d'examen
IIl. Indications de l'examen l'tat frais.
231
technique microscopique.
Nettoyage des lames et des lamelles

Altrations des lames et des lamelles
281
246
IV.
Colorations vitales
V.
Dissociation, digestion artificielle, dcal-
248
cification
234
255
258
202
Dissociation mcanique
IL Dissociation chimique
llI. Dcalcification
I.
VL
VIL
VUl.
Thorie de
Agents
IL
III.
IV.
V.
VI.
270
fixateurs
279
Mlanges fixateurs
I.
IX.
265
la fixation
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
hase d'acide osmique.
hase de chrome
base de sublim corrosif.
base d'acide pierique.
base de formol
base d'alcool
Choix d'un fixateur
279
282
282
284
286
286
287
TABLE DES MATIERES
XIV
GiiAP.
X.
Pratique de
Appendice.
XI.
la fixation
290
Mthodes spciales de
295
fixation,
Mthodes d'inclusion
298
299
313
Inclusion la paraffine
II. Inclusion au collodion
III. Inclusion mixte la parafiine et au collodion
IV. Autres masses d'inclusion
I.
Xll.
Mthodes
pour excuter les coupes.
Coupes
II. Coupes
III. Coupes
IV. Coupes
V. Coupes
1.
Appendice.
XIII.
317
318
319
main leve
325
327
329
330
339
au microtome main
par conglation
la paraffine
au collodion
Coupes par usure et polissage.
Traitement et collage des coupes
341
....
342
Coupes la paraffine
H. Coupes au collodion
342
350
Thorie des colorations
352
I.
XIV.
XV.
XVI.
Classification des colorants

Classification
des
mthodes
.356
de
colo-
ration
XVII.
XVUI.
Colorations au carmin
II.
XIX.
II.
III.
XX.
Coloration par la laque aluminique.

Coloration par la laque ferrique
Colorations par les couleurs d'aniline.

I.
369
Colorations l'hmatoxyline
I.
359
373
.
401
404
417
Colorations Fhmatoxyline
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
382
382
382
392
397
Colorants basiques
A. Colorations progressives
B. Colorations rgressives
Colorants acides
Colorants neutres
Mthode de Romanovsky
Colorations combines
I.
374
376
Hmaline-osine
Chromotropes de Hcidenhain.
Mthode de Van Gieson
Mthode de Mann
Mthode au safran de P. Masson.
Triple coloration de Prenant.
Trichromique de P. Masson ...
.
418
418
421
421
422
423
424
424
XV
TABLE DES MATIERES

II.
III.
Colorations la safranine
Colorations la fuchsine basique.
1. Maffenta-vert lumire
2.
Trichromique de Cajal
aux bleus basiques
IV. Colorations
Bleu polychrome de Unna ....

osine et bleu de toluidine.
V. Mthode de Mann au bleu de mthylc1.
2.
osine
Chap.
430
XXI. Imprgnations mtalliques

XXII. Milieux d'observation et de conservation.
XXIII. Luts et vernis
XXIV. Dpigmentation
XXV. Liquides conservateurs pour collections
XXVII.
XXVIII.
XXVI.
432
436
447
430
452
macroscopiques
425
425
426
420
427
427
429
Prhension, contention, anesth&ie.

Rsum des mthodes gnrales
Principaux insuccs des prparations.
.
Causes et remdes.
456
459
403
TROISIME PARTIE
MTHODES SPCIALES
Premire seca'on.
Chapitre premier.
407
PROTOZOAIRES
408
Amibes
1.
II.
III.
471
Rcolte des Amibes

Fixation et coloration
471
473
475
477
Exprimentation
IV. Culture
II.
'
Flagells
I.
II.
Flagells du tube digestif

Flagells sanguicoles
479
480
Trypanosomes et Trypanoplasmes.
Exprimentation
III. Diagnostic des trypanosomoses humaines.
IV. Diagnostic des leishmanioses
V. Culture des Trypanosomes et des Leishma.
,,
nia
479
481
480
491
495
500
TABLE DES MATIERES
XVI
Chap.
)ll.
Spirochtes et organismes
sijirals.
Coloration des frottis

H. Coloration des coupes
III.
IV.
Procds spciaux
518
Sporozoaires
I.
II.
III.
518
524
527
528
529
Ilmosporidies
Coccidies
Grârines
IV. Myxosporidies
V. Sarcosporidies
V.
Infusoires
531
Technique de l'tude morphologique des Chlamydozoaires
Appendice.
I.
II.
111.
Deuxime
Chapitre premier.
Vaccine
liage
Trachome
section.
MTAZOAIRES
II.
m.
545
Rcolte des Helminthes

Fixation et conservation des Helminthes.
Recherche et conservation des oeufs d'Hel-
minthes
V. Sangsues
II.
Arthropodes
574
574
578
578
579
588
592
594
613
Technique gnrale
I.
II.
Linguatulides
Acariens
Ixodids
111.
Insectes
Hmiptres
Diptres
Hymnoptres
111.
IV.
Plankton
Examen
615
des liquides organiques
621
Technique iimatologique
Numralion
621
630
644
646
647
Cytodiagnoslic
Examen des crachats
Examen des urines
V.
545
549
562
570
573
IV, Exprimentation
540
540
540
543
545
Vers
I.
502
503
509
512
I.
Technique histologique lmentaire.
651
TABLE DES MATIERES

Chap.
VI.
VII.
VIII.
IX.
Chapitre premier.
II.
III.
Troisime section.
XVII
Technique cytologique
Analyse chromatique et microchimie
Mthode des injections physiologiques.
Technique microscopique mdico-lgale.
TECHNIQUE BOTANIQUE
Technique bactriologique
664
668
677
680
688
089
Technique mycologique
702
Histologie et cytologie vgtales
721
Bibliographie gnrale
734
Table alphabtioue
735
M. Langeron.
Prcis de Microscopi.
INTRODUCTION
Multumcgerunc. quiantenos
non peregerunt;
multum adhuc restt operis
multumquc restabit, noc ulli
nato post nulla scula prcludclur occasio aliquid adhuc
fuerunt, sed
a'ijicicndi.
SNQUE, Epist.,
6i.
Le mot microscopie veut dire examen de toutes espces d'objets,

du microscope.
Dans une matire aussi complexe, il faut faire un choix, sous
peine de donner l'ouvrage une tendue dmesure et d'accabler
le novice sous la multitude des procds. Je me suis donc attach
faire ressortir les mthodes gnrales de travail et dcrire ce
l'aide
qu'on ne trouve pas dans
les autres livres
de technique microsco-
pique.
Dans
les
ouvrages de ce genre, on
laisse
gnralement de ct
tout ce qui a trait au microscope et son maniement, parce qu'on

suppose ces notions connues du travailleur ou tout au moins faciles
connatre pour lui. Or il n'en est rien; tous ceux qui sont
appels diriger des lves savent que, la plupart du temps, ceuxci ignorent
totalement les principes les plus lmentaires de
du microscope. Aussi ai-je consacr un tiers de ce prcis

du microscope et de son fonctionnement.
La seconde partie renferme l'expos des mthodes gnrales de
l'emploi
la description
la microscopie. J'ai conserv celles qui m'ont paru rellement

pratiques et d'une application sre et facile. J'ai fait table rase
des procds suranns; j'ai laiss de ct tous ceux qui m'ont
paru trop compliqus ou qui font double emploi avec les mthodes
classiques. Mais, de ce que je ne cite pas une technique, il ne

s'en suit pas que je la dsapprouve. Dans un ouvrage de ce genre,
XX
INTRODUCTION
ne peut loul dire; j'ai du, pour ne pas drouler le dbulant,

passer sous silence d'excellenls procds.
Les mthodes spciales font l'objet de la troisime partie. C'est
011
surtout que le choix s'impose il est en mme temps des plus

difficiles, cause des procds particuliers. Chaque chercheur,
ici
qui s'est spcialis dans une branche, a perfectionn la technique

de cette branche et indiqu des tours de main qui peuvent tre
trs prcieux. Je donne le plus grand nombre possible de ces
indications de dtail, surtout pour les questions qui intressent
particulirement le mdecin
et
l'exprimentateur.
Malheureuse-
ne puis tre complet et tout citer. Mon choix n'est pas

guid seulement par la valeur des mthodes, mais surtout par le
dsir d'tre avant tout pratique. Aussi, dans mes indications biblio-
ment
je
graphiques, je ne mentionne que les ouvrages
les plus rcents et
ceux qui me paraissent les plus utiles connatre. J'ai d laisser

de ct, bien regret, d'excellentes publications; le fait de ne pas
citer n'implique donc,
de
ma
part,
ni oubli, ni dsapprobation.
Je n'ai pas parl de la technique des ractions humorales (agglutination et dviation du complment), i)arce que ces procds ne
font pas partie du domaine de la niicroscopie proprement dite; ils
sont d'ailleurs exposs, d'une faon trs dtaille, dans de nom-
breux ouvrages rcents.

J'ai
que
essay
et
contrl
je dcris. J'ai eu la
moi-mme presque
bonne fortune de
ratoires trs diffrents et de faire
toutes les mthodes
travailler
dans des labo-
beaucoup de botani(|uc
et
de
systmatique, avant de devenir zoologiste et })arasitologue. J'ai

donc eu l'occasion d'tudier des objets trs varis et d'essayer
beaucoup de teclini([ues. Je sais par moi mme combien les
dbutants peuvent tre dsorients, mme dans de trs bons laboratoires, faute de certaines indications pratiques. A plus forte
raison le travailleur isol, et particulirement le colonial, peuvent
tre arrts |)ar des obstacles, en apparence insurmontables, dont
un mot
d'claircissement les aurait dlivrs, en leur permettant

de poursuivre des travaux d'un grand intrt.
La valeur des procds techniques^ mme insignifiants en
apparence, est donc trs grande. Claude Bernard a dit excellem-
ment que
sont de
dans l'investigation scientifique,
les
moindres procds
plus haute importance et que les plus grandes

vrits scientifiques ont leurs racines dans les dtails de l'investila
gation exprimentale
').
INTRODUCTION
.
Mais que
le
XXI
dbutant ne s'y mprenne pas
la
perfection des
procds techniques n'est pas la condition essentielle des dcouvertes. Dans son admirable Introduction ftude de la mdecine exprimentale, laquelle je viens d'emprunter les lignes qui
prcdent, Claude Bernard dit encore, au sujet de la dcouverte,
neuve qui surgit propos d'un
Tide
qu'elle est
fait trouv
par
mais qu' il n'y a pas de rgles donner
pour faire natre dans le cerveau une ide juste et fconde . Plus
la mthode
loin, il ajoute que
exprimentale ne donnera pas des
hasard ou autrement
ides fcondes ceux qui n'en ont pas, elle servira seulement
dans toutes les
diriger les ides chez ceux qui en ont , que
sciences, le plus grand nombre des hommes dveloppe et poursuit
nombre d'autres ; et il conclut en disant

y avoir de mthode pour faire des dcouvertes.
Pour bien montrer que la perfection des techniques n'est pas la
les ides
d'un
petit
qu'i^ ne saurait
cause des grandes dcouvertes, il suffit de rappeler la gense de

ces dernires dans le domaine de la microscopie. Les premiers
tels que Leeuwenhoek, Swammerdamm,
Mali)ighi et
d'autres, ont ouvert la voie en observant avec des lentilles
matres,
tant
rudimentaires
Pasteur,
sans l'aide d'aucun
et
fondement
effectus sans le
de
colorant.
Les travaux de
nos
connaissances actuelles, ont t

secours des mthodes de coloration. Laveran a
du paludisme par de simples examens de

Schaudinn, qui avait pourtant sa disposition
l'arsenal moderne, est arriv voir le premier le Trponme, en
examinant simplement la srosit frache des chancres. De mme
dcouvert
sang
les parasites
l'tat frais.
Trypanosomes et les Spirochtes sanguicoles ont t dcouverts

par des examens de sang l'tat frais. C'tait bien simple, dirat-on mais encore fallait-il y penser. En effet, ce qui est difticile,
les
ce n'est pas d'apercevoir des organismes trs petits, c'est de voir

ce qui na pas encore t vu par d'autres. Il faut penser
regarder, savoir voir, puis interprter ce qu'on a vu tout est l.
Les grandes dcouvertes ont presque toujours t faites avec des
;
moyens excessivement simples, compenss par une grande puisles perfectionnements de la technique sont
venus ensuite, pour permettre de retrouver facilement les nouveaux objets dcouverts et d'tudier leur structure fine.
sance d'observation
Le
travail le plus difficile,
procd d'examen
le
en microscopie,
plus simple, l'tat
c'est
frais
prcisment le
ou par les colora-
tions vitales. C'est l qu'il faut dployer tous les artifices d'clai-
INTRODUCTION
XXII
rage et savoir observer. Avec de la patience et du soin, on russit

colore el on arrive sans trop de peine
toujours une prparation
il n'en est
la lire
pas de mme pour un simple examen entre lame
;
el lamelle.
J'cris ceci
drer
la
de ses
pour
le dbutant,
prparation dfinitive,
elTorts. S'il
pense ainsi,
qui est souvent tent de consiet tiquete, comme le but
monte
il
est tout fait
dans l'erreur. Les
bonnes prparations, ne sont pas la fin

ce
sont seulement les moyejis qui lui
il
doit
tendre,
laquelle
le domaine de la microscopie, d'arriver la
dans
permettront,
mthodes techniques,
connaissance de
les
la vrit.
Les bonnes prparations sont des docu-
ments prcieux, qu'il faut conserver avec soin et accumuler en

nombre aussi grand que possible; mais, en fin de compte, ce sont
seulement des matriaux. Il faut ensuite les mettre en uvre et,
pour cela, il n"y a pas de mthode technique.
La puissance de
la
pense
et
de l'observation sont
les
dons
naturels ncessaires pour effectuer de grandes dcouvertes. Mais

s'il n'est pas donn tous d'en faire, tout observateur patient et
peut noter des faits, qui, lorsqu'ils sont bien

sont
observs,
susceptibles d'clairer singulirement des questions
mal connues. Pour s'exercer obseiver, il n'est pas de meilleur
consciencieux
rpter les observations et expriences, publies par

des matres d'une autorit reconnue, sur un point quelconque de
microscopie. On choisit ce point, suivant ses tendances person-
moyen que de
nelles et suivant le matriel dont
on dispose.
11
faut s'appliquer
minutieusement, dans les plus petits dtails, toutes les

et de biologie du sujet qu'on s'est
particularits de morphologie
la plus scrupuleuse
propos. Il est indispensable de s'astreindre
vrifier
exactitude, en dcrivant et dessinant tout ce qu'on observe. C'est

seulement ainsi qu'on arrive dvelopper son acuit visuelle et
son jugement.
En terminant cette introduction, je liens exprimer mon
excellent matre, le professeur R. Blanchard, toute ma reconnaissance pour sa prface si bienveillante, et pour la libralit avec
sa riche bibliothque". Je remercie tous ceux
laquelle il m'a ouvert
qui
m'ont donn
des renseignements
ou
des
titude
le D'"
E.
Deux
ma gra-
conseils.
excellents collgues et amis ont particulirement droit
Brumpt m'a gnreusement prodigu une

et indites, puises
foule
dans son trsor exp-
d'indications prcieuses
rimental et a eu l'obligeance de revoir toutes
mes preuves
je
INTRODUCTION
dois
au
XXIII
outre de
P.
Masson,
multiples dtails, plusieurs
mthodes ratioDuelles et sres, qui mritent de devenir classiques.
Je souhaite que ce Prcis vienne en aide aux nombreux traD'"
vailleurs de
bonne volont que suscite
le
merveilleux essor des
pathologie animale ou vgtale. Le microscope n'est plus un instrument rserv aux seules
recherches de science pure; il est devenu un moyen de diagnostic
sciences naturelles, appliques
la
permis de ngliger. A ceux qui savent l'interroger,

rvle toujours des faits intressants, et il procure, mme aux
qu'il n'est plus

il
plus modestes, des satisfactions qui compensent amplement les

petits dboires de l'apprentissage.
Paris, 31
dcembre
1912.
M. Langeron.
PRECIS
DE
MIGROSGOPIE
TECHNIQUE
EXPRIMENTATION
DIAGNOSTIC
PREMIRE PARTIE
LE MICROSCOPE
ET SES ACCESSOIRES
CHAPITRE PREMIER
PRINCIPE DU MICROSCOPE
Le microscope est un instrument (roplique qui permet de voir et
dludierdes objets que leur petitesse rend plus ou moins invisibles
il fournit de ces
Toeil nu
objets une image considrablement
;
agrandie. Ce rsultat est obtenu par des combinaisons de lentilles.

Le microscope est donc essentiellement constitu par deux sys-
tmes de lentilles qui forment la partie optique et sont portes

par un ensemble de pices reprsentant la partie mcanique. Ce
microscope correspond ce que les physiciens nomment micros-
cope compos, par opposition la loupe ou microscope simple^

constitu par une lentille ou })ar un systme de lentilles fonction-
comme lentille simple.

Un microscope, adapt aux
nant
besoins de la techni(jue moderne, se

compose d'une monture (par lie mcanique) d'un appareil d'clai,
rage, d'objectifs et d'oculaires [partie optique), et enfin d'un certain nombre d'accessoires destins aux mensurations, aux dessins, etc.
Pour
M. Langeron.
utiliser
compltement
Prcis de Microscopie.
les
ressources que fournil

1
LK MLCROSCOPE ET SES ACCESSOIRES
microscope, il est ncessaire de coaiialre

l'emploi de chacune de ses parties.
le
la
sigiiificalioii
et
Rappelons d'abord en quelques mots le principe sur lequel est

le microscope et donnons quelques dlinilions indispensables
fond
pour comprendre la construction de sa partie optique. Dans ces

notions trs sommaires, nous faisons intentionnellement abstrac-
donne mathmatique, de faon conserver cet

exclusivement pratique.
son
caractre
ouvrage
Les lentilles sont des instruments d'optique qui
Lentilles.
produisent la convergence ou la divergence des rayons lumineux.
tion de toute
Elles sont construites en verre, sauf dans des cas particuhers. Elles
sont limites soit par deux surfaces courbes, soit par une surface
plane et une surface courbe. Dans le premier cas, elles peuvent

tre biconvexes, ou encore convexes-concaves; dans le second cas,
plan-convexes ou plan-concaves. Les lentilles surfaces

convexes sont dites encore positives, convergentes, collectrices ou
elles sont
grossissantes; les lentilles surfaces concaves sont dites ngatives,

divergentes, dispersives et fournissent une image rduite. Dans le
cas des lentilles convexes-concaves, c'est la surface courbure
plus accentue qui dtermine les proprits de la lentille.

Ces proprits des lentilles sont dues aux phnomnes de rfraction que subissent les rayons lumineux qui les
la
Rfraction.
traversent. Lorsqu'un rayon lumineux, dit rayon incident, arrive

la surface d'une lame de verre faces parallles,
il n'est
pas dvi de son trajet rectiligne en passant de l'air dans
normalement
l'air. Au contraire, si ce
rayon tombe
la lame du verre, il est dvi de sa direction
sur
obliquement
rectiligne, d'abord son entre dans le verre, c'est--dire au
moment de son passage d'un milieu moins dense dans un milieu
le
verre et du verre dans
moment de sa sortie du verre et de son

nouveau passage dans un milieu de moindre densit.
Cette dviation se nomme rfraction. La nouvelle direction que
prend le rayon rfract dpend de la densit du milieu travers.
Lorsque le rayon incident passe de l'air dans le verre, il se
rapproche de la normale au point d'incidence; au contraire,
plus dense, puis au
du verre pour repasser dans l'air, il s'loigne de

normale. La figure 1 rend compte de ce phnomne. Soient
nn la normale au point d'incidence b, ob le rayon incident,
lorsqu'il sort
la
bc la direction du rayon rfract aprs passage d'un milieu

moins dense dans un milieu plus dense (bc se rapproche de la
normale nn'), cd la direction du rayon rfract aprs passage

d'un milieu plus dense dans un milieu moins dense {rd s'loigne
de la normale ??').
Rfraction dans les lentilles.

Dans
qui nous intressent, la rfrac-
les lentilles
convexes,
les seules
tion se produit suivant les mmes lois.

L'tude sommaire de ces phnomnes
est indispensable
les
pour comprendre
proprits des lentilles. Prenons d'abord
comme exemple une

vexe
a, 6,
(iig'.
c,
lentille
trois
Supposons
2).
rayons
normale
dont l'incidence est
par rapport la face plane de la lentille.

Ces rayons ne seront pas rfracts; ils
vont traverser la lentille, arriver la
Fig.
n'est
lentille,
pas rfract.
Rfraction tralanae de verre
se
Il
faces parallles, ab, rayon

incident; bcd, rayon rfract nn\ normale au point
d'incidence b.
Original.
Le rayon hn, qui concide avec l'axe

la
1.
vers une
face convexe o leur sort est diffrent.
de
&
plan-con-
comporte comme s'il sortait, au niveau

du point d'mergence, d'une facette plane,
parallle la surface
d'incidence.
Les rayons a et c sont au contraire obliques par rapport

courbe de la lentille.
.3^
Ils vont donc tre rfracts
la
surfiice
de
la
nor-
male xy, x'y' au point
d'in-
et
s'loigneront
cidence,
passent
puisqu'ils
du verre dans
l'air.
rapprochent de
l'axe
lentille et vont venir
le
rayon bn au point
Deux
Ils
se
de
la
couper
/"(lg. 2)
considrations
rsultent de ces
lois
Fig.
Rfraction,
dans
une
lentille
plan-convexe, a, ,c, rayons incidents paral-
lles; xy, x'y\

dence xc' xa',
Tout rayon passant par

centre d'une lentille n'est
1
le
2.
de la
lentille.
normales aux points

rfracts
rayons
Orifjinal.
/',
d'inci-
foyer
pas rfract
la
2 Tout rayon ne passant pas par le centre est rfract
dviation est d'autant plus grande qu'il traverse la lentille en un
point plus loign du centre. Les rayons ainsi rfracts conver;
gent tous en un point qui est
le
foyer de la lentille.
Foyer.
les
verger
Le foyer
rayons
est
donc
parallles
le
on
point
Taxe,
viennent
aprs
con-
travers
avoir
la
lentille.
On
peut facilement s'en rendre compte en recevant sur une

plan-convexe ou biconvexe les rayons provenant d'une
lentille
source lumineuse trs loigne, par exemple du
soleil.
Ces rayons
sont parallles et on les voit converger en arrire de la lentille en

un point qui est la fois trs lumineux et trs chaud, d'o le nom
de foyer. Les rayons calorifiques suivent

rayons lumineux.
La distance
Distance focale.
le foyer du centre de la lentille.
pare
En
ralit cette dfinition n'est
la
mme marche que
les
focale est la distance qui s-
pas exacte, car la distance focale est
celle qui spare les foyers des plans principaux de la lentille. Les plans
principaux sont les plans perpendiculaires l'axe de la lentille, nu
niveau desquels se coupent les rayons incidents et rfracts. Prati(iuement nous ne pouvons pas tenir compte de cette marche relle des
rayons et nous compterons la
distance focale partir du centre
de la lentille.
Nous avons, pour plus de simplicit, pris le cas dune lentille
plan-convexe. La marche des
rayons est fondamentalement la
mme
Rfraction dans une lentille

biconvexe. a,b.c, rayons incidents; /",
foyer; premire rfraction en ' et c';
deuxime rfraction en e' et '.
Fig.
3.
yexe
^g^
dans une
(fig.
jg^
3).
diffrence
ravons subissent deux
rfractions
uricniud.
bicon-
lentille
La seule
successives,
^
la
.
pre-
.-n
miere en entrant dans la lentille,

la seconde la sortie, puisque
ces rayons, sauf celui qui passe par l'axe oplique, se trouvent tre obliques par rapport aux surfaces convexes. Pourtant, dans les constructions trs simples que nous avons faire, nous ngligerons ces deux
rfractions et nous supposerons (jue les rayons incidents ne sont
rfracts qu'une seule fois, au niveau d'un plan perpendiculaire l'axe
optique et passant par
le
centre de
Formation de l'image par
la
lentille.
les lentilles convexes.
Les
phnomnes de rfraction que nous venons d'tudier vont nous

permettre d'expliquer comment les lentilles peuvent former des
images.
Prenons une
lentille
])iconvexe et
un
ohjet.
L'image de cet
ohjet variera suivant qu'il sera plus ou moins loign de la lentille.

Trois cas peuvent se prsenter
:
1"
L'objet
est trs loign
de
la
lentille,
une distance plus
grande que le double de la dislance focale. L'image sera relle^

renverse et d'autant plus petite que Tobjel sera plus loign.
C'est le cas des objectifs pliotographiques.
2 L'objet est plac un peu au del du
foyer, l'image sera

relle, renverse et d'autant plus grande que l'objet sera plus
rapproch du foyer. C'est le cas des objectifs de microscope.
le foyer. L'image sera
3''
L'objet est plac entre la lentille et
virtuelle, droite et d'autant plus petite que l'objet sera plus rapde la lentille. C'est le cas des loupes et des oculaires de
proch
microscope.
Ces
lois
sont les
mmes pour
mant un systme centr.

Lentilles concaves
les
combinaisons de
lentilles for-
Ajoutons, pour
tre complet, que les

concaves donnent toujours une image virtuelle et ren-
lentilles
verse, place entre le foyer et la lentille. Cette image est d'autant plus petite et plus rapproche
(loign
de
du foyer que
l'objet est plus
la lentille.
Les images relles sont formes par des

relle.
elles
convergents,
peuvent tre recneillies sur un cran ou
rayons
sur une plaque photographique.
Image
Les images virtuelles sont dues des

sont pas constitues comme les images
ne
rayons
relles par une vritable convergence de rayons. Ce sont des
images purement subjectives qui ne peuvent tre recueillies sur
un cran ou une plaque photographique. Nous ne les percevons
Image
virtuelle.
divergents; elles
que parce que notre il suit

gents en arrire de l'objet et
le
prolongement de ces rayons diverconverger de manire cons-
les fait
tituer l'image virtuelle. Ces images jouent un grand rle dans les
instruments d'optique.
deux
Prenons
exemples
pour
montrer comment
se
forme
l'image relle d'un objectif microscopique simple et l'image virtuelle d'une loupe.
un peu au del du foyer

(fig. 4) est plac
biconvexe. Le rayon ae, parallle l'axe optique,
est rfract au foyer f et continue son tiajet rectiligne jusqu'au
P'" cas.
f d'une
L'objet ab
lentille
point a', o
il
rencontre
le
rayon ac qui, passant par
le
centre de
rayons qui ])artent du

a
former
se
runissent
donc
a'
en
point
l'image du pointa.
pour y
Il en est de mme
b
les points qui se
et
tous
le
pour
pour
point
la lentille,
n'a pas t rfract.
trouvent entre a et
b.
Comme
le
Tous
les
point a se trouve de l'autre ct
de Taxe opli(nie par rapport au point a, il en rsulte

que Timage
est renverse. En outre c'est nne
image relle qu'on peut recevoir
sur un cran.
cas.
2*^
L'objet aO
(lig.
5) est plac en dedans
d'une
du foyer
/",
lentille bicon-
Parmi
vexe.
rayons mis par

jet, les
fracts
les
l'ob-
uns sont rviennent
et
au foyer
f. Les autres, ac
et 6c, ne sont pas rse runir
continuent
fracts,
leur trajet rectiligne

et
4.
Fig.
du
Image
relle. L'objet ab est plac

cib'
foyer, l'image
verse.
ne peuvent conavec
les
verger
est relle,
en avant
agrandie
et
ren-
Original.
rfracts
une
rayons
pour
former
image
relle.
Mais
de ces rayons qui paraissent converger en arrire

de faon former l'image virtuelle et agrandie a'b'.
l'il suit le trajet
de
l'objet,
Celle-ci se trouve toujours en arrire de l'objet et c'est elle seule
que
l'il
peroit.
Formation de
Limage dans le
microscope compos.
nous
savons
Ce que
des
proprits des lentilles va nous perFig.
5.
Image
dedans du foyer, l'image

et droite.
est ainsi
parce
L'objet ab est
plac en
a'b' est virtuelle,
agrandie
virtuelle.
microscope compos. Cet instrument
Original.
nomm
qu'il est
par opposition
mettre de comprendre le principe du
la
loupe, ou microscope simple,
form de deux svstmes de
lentilles.
Ces deux
systmes, qui doivent tre centrs, c'est--dire avoir le mme axe

optique, peuvent tre considrs chacun comme une lentille
simple.
La
lentille
qui est tourne du ct de l'objet se
nomme
objectif
possde une distance focale trs courte. Il est donc facile de

un peu au del de son foyer, de faon obtenir une
image relle, renverse et agrandie.
et
placer Tobjet
La
par laquelle regarde Tobservaleur se
lentille
Elle fonctionne
observer
comme
et
loupe
agrandir
relle fournie par Tobjectif.
tance
entre
rociilaire
nomme oculaire.
et sert
l'image
La
dis-
et
Tobjectif
doit donc tre calcule de telle sorte
que l'image
relle
lentille objective se
fournie par
la
forme en dedans
du foyer de la lentille oculaire.

Le grossissement fourni par
le
microscope compos dpendra donc

d'abord de la longueur focale de
l'objectif. Plus cette longueur sera
petite et plus l'objet sera
de
l'objectif,
rapproch
plus l'image relle sera
grande. Le grossissement dpend en

outre de la longueur focale de la
lentille oculaire qui grossira d'autant
plus l'image
relle
que son foyer
sera plus court.
Une
construction
trs
simple
rendra compte de cette marche des rayons. Soient Obj l'ob-
(fig. 6)
jectif
et
Oc
l'oculaire,
ab
6.
Principe du microscope
compos. Obj., objectif; Oc, ocu-
Fig.
laire
ab, objet.
Original.
l'objet,
le foyer de l'oculaire. La lentille

foyer de l'objectif,
fournit limage relle, renverse et agrandie a'b'.
objective
Cette image se forme en dedans du foyer
f' de la lentille oculaire.
L'il de l'observateur percevra donc, travers cette
dernire,
le
l'image virtuelle, droite et agrandie a"b" de l'image relle a'b'
CHAPITRE
II
PARTIE MCANIQUE DU MICROSCOPE

La
parlie
mcanique du microscope
nomme
se
ou
statif.
encore monture
Elle est de forme
de dimensions trs varia-
et
suivant
bles,
leur et
cunslruc-
le
le prix
de Tinslru-
menl.
On
divise gnralement
microscopes en grands
modles, moyens modles
les
et
microscopes de voyage.
Les grands modles

7, 8,
(fig.
de
tous
10) sont munis
les
perfectionne-
ments mcaniques qui assurent au travailleur le ma-
Aimum
de
rapidit,
de
prcision et de confortable
dans l'examen des prparations.
Ce sont des
ments en quelque
instru-
sorte uni-
aux
versels, qui se prtent
travaux les plus varis et
sont susceptibles de recevoir toutes les combinaisons
d'objectifs
Fig.
7.
Microscope grand modle de
Zeiss.
et
d'oculaires
quC tOUS
IcS appareils
accessoires
(polar iseurs,
ainsi
spectroseopes, cbambres pbotographiques,
elc
PARTIE MECANIQUE DU MICROSCOPE

sont dj d'un emploi plus res(fig. 9)
Sullisanls pour des examens bactriologiques rapides, ils
ne devienneni appropris tous les travaux micrographiques que
Les moyens modles
treint.
s'ils
sont
chariot.
munis d'un bon appareil d'clairage

Ce genre
et
d'une plaline
d'instrumentsest surtout pratique
pour
laboratoires
oi
vaillent de
les
tra-
nombreux
lves, auxquels il
faut fournir des mi-
croscopes plus simples et plus robustes
que
tant
ploi
grands momais permet-
les
dles,
cependant l'emdes objectifs
immersion.
Enfin
les
microscopes
dent des
])elits
rponbesoins
trs restreinls.
difficile
un
(Tv
revolver
Il
est
adapter
ou
un
appareil d'clairage;
ils
._.
ne peuvent donc
^f^jS^gfep^^^
fournir que des grossissements faibles et
moyens, jusqu' 500

ou 600 diamtres. Ce
sont des instruments
qui
Fig.
Microscope grand modle de Stiassnie.
ne conviennent
que pour des examens
trs
sommaires, des travaux
lmen-
de botanique ou des tudes de systmatique.

de leurs principaux inconvnients est leur peu de stabilit,
taires
Un
8.
de zoologie
et
qui rsulte de leur petit volume

tine est aussi trs petite el
et
de leur faible poids. La pla-
peu commode. Ces
petits microscopes
ce
peuvent rendre des services comme instruments de voyage
microsvritables
aux
de
encore
infrieurs
ils
sont
vue,
point
:
copes de voyage ou microscopes
[liants (p.
105).
10
Nous prfrons beaucoup ces petits modles les montures pour

examens sommaires telles que celle que reprsente la figure 11. Le
pied est suflisamment stable et la platine, qui est trs large,
permet de manipuler commodment. La crmaillre est d'une
9.
Microscope moyen modle
de Stiassnie. Modle pliant pouvant
servir de microscope de voyage.
Fig.
Fig.
10.
Microscope grand modle
de Leitz, platine carre.
pour permettre de mettre au point des objectifs

donnant un grossissement d'environ 300 diamtres.
Toute monture, quelle que soit sa complication, prsente considrer un pied^ une platine et un tube.
finesse suffisante
I.
Il
existe
LE
PIED DU MICROSCOPE
deux formes principales de
pied,
le
pied
en
fer
cheval et le pied anglais.
Le pied en
fer clieval est,
d'une lourde masse

cintre
supporte
une
en
comme
forme de
nom l'indique, form

cheval, dont la partie
son
fer
tige sur laquelle
repose tout
le
reste de
l'appareil.
Le pied anglais, trs variable de forme, est fondamentalement

un trpied, dont les branches sont diversement cartes, courbes,
Ce genre de
bifiirques ou vides.
comme
pied, gnralement considr
prcdent, est aussi plus lger et

malgr cela un peu plus stable, cause de Tcartement des branches.
le
lgant que
plus
Microscope inclinant.
sont
que
dits
la
moyens microscopes
suprieure du pied
charnire autour de
laquelle l'ensemble de
du tube peut
platine et
la
se dplacer
dans un
Gnralement
vertical.
plan
et
partie
une
porte
Les grands
c'est--dire
inclinants,
le
immobilis
tre
microscope peut
dans une position quelconque au
moyen d'une sorte de clef ou levier
qui
fait
modles
Dans
pression.
(fig.
et 9), la
certains
longueur
de l'axe horizontal autour duquel

tourne la partie suprieure du
microscope permet d'tablir en per-
manence un serrage
suffisant
et
dispense de l'emploi du levier.

Les avantages que procure un
:^
"
microscope inclinant sont multiples.

D'abord cette disposition est presque
11
1.
la
pour
mdiSpensable
En
tOgraphie.
effet
il
au point de vue de
de la commodit de
horizontaux.
-1
miCropho-
Il
y a avantage,
tîg-
H-
pour
{'.es
^^
^"
de
Leltz
Microscope
sommaires avec
examens
grande platine, sous laquelle

un diaphragme tournant.
se trouve
stabilit et
la
mise au point, employer les appareils

faut donc, dans ce cas, pouvoir placer le tube du
la
microscope horizontalement. D'autre part, bon nombre d'observateurs travaillent avec le microscope inclin. 11 est certain que
l'on est ainsi dans
une
position
beaucoup plus confortable
quelle
hauteur respective de la table et de la chaise, on

que
sans tre oblig de pencher pniblement la tte
observer
peut
comme lorsque le tube du microscope est vertical. Mais on ne
peut utiliser cet avantage qu'avec des prparations termines
soit
la
bien lutes, et encore, mme avec ces prparations, l'emploi

des objectifs immersion est peu agrable, parce que la goutte
d'huile de cdre, obissant la pesanteur malgr sa viscosit,
finit par couler et par dpasser les bords de la lamelle, puis de la
et
lame.
On
a bien
la
ressource de n'employer qu'une trs petite
12
mais on
goiille,
toin'DO
alors
dans un autre inconvnient
un
dplacement in'me trs })eu tendu de la prparation fait perdre

le contact entre la lentille frontale de robjeclif et la goutte d'huile
Fimage dis{>ara{t. Le travail avec le microscope inclin, quoique

beaucoup plus agrable, ne convient donc que ])Our des cas trs
limits. 11 devient tout fait impraticable lorsqu'on examine des
et
prparations extemporanes, de petits organismes vivants, et en

gnral toutes les prparations faites en milieu liquide et non
lutes.
Il
en
est
de
mme
lorsqu'on suit au microscope une colo-
une diffrenciation de frottis ou de coupes baigns par

un liquide nous verrons que cette opration est trs frquente
dans les travaux de laboratoire. Lorsqu'un dessine la chambre
ration ou
mme
on dispose d'une table spciale, il est vritablele microscope inclin. Dans

l'immense majorit des cas, le micrographe doit donc travailler
avec le microscope vertical le seul moyen d'viter une position
claire,
si
ment peu pratique de dessiner avec

:
une grande fatigue des muscles du cou,

consiste rgler la hauteur de la table de travail ou de la chaise,
de manire ce que l'oculaire du microscope arrive peu prs au
niveau de Til de l'observateur. Les tabourets sige mobile, au
incommode de
la
tte et
moyen d'un support
vis, peuvent rendre de grands services dans
ce cas.
II.
LA PLATINE
elle
La platine est destine supporter les prparations
prsente en son centre une ouverture circulaire pour le passage
des rayons lumineux fournis par l'appareil d'clairage.
Dans la plupart des grands microscopes
Platine tournante.
:
cette platine est ronde, peut tourner dans
un plan horizontal
et
de plus, au moyen de deux vis latrales, elle peut effectuer des

mouvements lents eu tous sens. Ce mcanisme est gnralement
trs prcis et fort commode pour le centrage exact de fins dtails
Malheureusement, les mouvements

et ne peuvent tre utiliss
amplitude
qu'une
pour l'examen mthodique d'une vaste surface.
Au contraire, les platines chariot ou double mouvement,
et
pour
n'ont
les
mensurations.
trs
faible
dans deux directions perpendiculaires, ont un champ beaucou})

plus tendu. Elles permettent l'examen mthodique et complet
des prparations entires et facilitent
la
recherche d'organismes
PARTIE MCANir)LE DU MICROSCOPE

les
trs dissmins, tels
Hmatozoaires dans
les
13
lames de sang.
que
Leur emploi conomise beaucoup de temps et de fatigue. Elles
sont munies de deux verniers, au moyen desquels on peut reprer
et retrouver coup sr un point quelconque d'une prparation.
Prenons quelques exemples parmi les
Platine carre.
modles de platines les plus usits. La figure 10 nous montre la
forme de platine la plus simple, qui est la platine carre. C'est
une simple plaque de mtal noirci, de verre, ou plus souvent
d'bonite, perce en son centre d'une ouverture pour le passage

des rayons lumineux. La prparation peut tre immobilise, sur
ce genre de platine, au moyen de deux valets. Ces valets sont

forms <le deux lames llexibles traverses Tune de leurs extr-
mits par deux liges rigides et cylindriques. Les deux tiges

pntrent frottement dur dans deux orifices placs droite et
gaucbe, sur le bord postrieur de la platine. Les lames tlexibles
appuient ainsi sur la prparation la manire de ressorts. Ces
valets
peuvent tre de fabrication plus ou moins com})lique. Ceux

la lame tlexible est fixe
(fig. 9) sont bien compris
de Stiassnie
la tige rigide par Fintermdiaire d'un ressort boudin; on peut

ainsi dgager la prparation en faisant basculer la lame flexible,
sans avoir toucher aux tiges rigides, enfonces frottement dur
dans
la })latine.
Platines chariot.
d'ailleurs de l'emploi
valets.
|)lalines chariot
dispense
Ces platines rpondent
un
permettre Texamen mthodique et complet de

surface des prparations: 2" faciliter le reprage des points
double but
toute la
Lemploi des
des
1*^
intressants et permettre de retrouver ces points sans difficult.

Prenons comme exemple la grande platine chariot de Zeiss,
reprsente par les figures 7
et
12. Cette platine est forme de
superposs. L'tage infrieur est constitu par une

platine tournante ordinaire, c'est--dire par une ])laque circulaire
pouvant tourner autour de l'axe du microscope et susceptible en
trois tages
outre de faibles dplacements latraux. Cet tage infrieur supporte un premier chariot destin dplacer la prparation d'avant
en arrire. Sur ce premier chariot est fix un second, fournissant

le mouvement latral Ce second chariot est fix au
{iremier sim-
plement par une vis, trs visible sur la figure il, et peut s'enlever
avec la plus grande facilit. On a alors une platine tournante ordinaire, sur laquelle on peut fixer des valets.
Pour examiner une prparation, on
carte l'querre de droite,
14
qui glisse frottemenl doux dans une rainure du cliariot suplixe, comme nous le verrons
rieur (l'querre de gauche est
plus loin, par une vis de pression). On place la prparation

bien entre dans l'querre de gauche, et on repousse
plat,
Tquerre de droite jusqu' ce que celle-ci vienne buter contre la

lame porte-objet. On peut alors dplacer la prparation de gauche
droite et d'avant en arrire au
Grande
moyen
des deux boutons qui se
a, levier servant immobiliser

platine chariot, de Zeiss.
destine arrter le mouvement de rotation.
La
lame centrer est place entre les deux querres. Elle indique la place que
Fig.
1-2.
le chariot infrieur; b, vis
doit occuper
chacun des
trois verniers
pour que
la platine soit centre.
trouvent droite de la ligure. Il est facile d'imaginer comment,

en commenant l'examen par la partie suprieure du couvre-objet
(fig. 99), puis en avanant d'arrire en avant, par fractions gales,
mesures par le vernier I, on peut explorer mthodiquement toute
la prparation. Il suffit, en effet,
chaque tape marque par le
vernier I, de parcourir, au moyen du chariot dplacement
latral, loute la largeur de la prparation. L'tendue des dpla-
cements du chariot infrieur dpendra du grossissement employ
PART[E MCANIQUE DU MICROSCOPE

el (lu
champ de
l'objectif.
Pour ne
laisser
15
chapper aucun point,
faudra donc s'assurer que chacun des champs examins recouvre

lgrement le prcdent une fois la valeur du dplacement dteril
mine, il ne reste plus qu' avancer de quantits gales, mesures

exactement au moyen du vernier I.
Le simple examen d'une prparation ne rclame pas de prcautions
si l'on veut reprer exactement des points intressants
en inscrivant les indications des verniers et tre sir de les retrouver,
il faut procder encore au centrage de la platine.
Si on dsire un centrage de prcision, pour retrouver de fins dtails
un fort grossissement, ce centrage doit tre excut pour chaque
objectif, surtout si on se sert du revolver. Avec les changeurs d'objectif
coulisse (flg. 19) on peut obtenir un centrage parfait pour toute une
spciales. Mais
en ayant soin de centrer d'abord tous les changeurs.

L'emploi d'un oculaire rticule permet d'augmenter encore la prcision du centrage.
Cette opration trs simple peut tre excute approximativement
une fois pour toutes. Pour effectuer le centrage, on prend la plaque
centrer, qui est livre dans un crin avec chaque platine et on commence par mettre les verniers sur les divisions indiques par l'tiquette
de la plaque centrer. Notamment, on immobilise, au moyen de la vis
de pression, l'querre de gauche dans la position indique pour le
vernier IL Ceci fait, on libre, en desserrant la vis b, l'tage le plus
au moyen des deux vis de centrage, non
infrieur de la platine
reprsentes sur la figure 12 mais visibles sur les figures 7 et 21, on
amne exactement au milieu du champ la croix trace sur la lame
centrer. Une fois celte opration faite, on ne touche plus aux vis latrales et on immobilise la plaline tournante en serrant de nouveau la
vis b. Les chariots sont alors centrs pour l'objectif employ et on peut
retrouver facilement les points dont on aura repr la position au
moyen des verniers.
sont de petites rgles, gradues sur une longueur de
Ces verniers
9 mm. Ces 9 mm. sont diviss en 10 parties gales, qui correspondent
chacune 9/10 de millimtre la diffrence entre les longueurs d'une
division millimtrique et d'une division du vernier est donc de un
dixime de millimtre. Cet artilice permet d'valuer les diximes de
millimtre par la simple juxtaposition d'une chelle millimtrique ordinaire et du vernier. 11 suffit pour cela de lire le chiffre de l'chelle
srie d'objectifs,
'
du vernier. Soit 12 ce
millimtrique qui est le plus rapproch du
dans le vernier I de la figure 12. Puis on suit les divisions du
vernier, partir du U, jusqu' ce que l'une d'elles se trouve concider
avec un des traits de la division millimtrique. Soit, toujours dans le
vernier I de la figure 12, la 4" division de ce vernier, la longueur ainsi
mesure correspondra 12 mm. 4. En effet, cause de la valeur de la
diffrence entre une division du vernier et une division millimtrique,
chiffre
1.
Les verniers sont ainsi nomms du nom du gomtre Pierre Vernier,
d'Ornans (Doubs), inventeur de cet artifice, dcrit dans un ouvrage imprim
Bruxelles en 1631 et intitul La construction, l'usage et les proprit<-s du cadran
:
nouveau.
16
du vprnier
0. 1, 2 et 3, qui prcdent celui pour le(|uel il y a

concidence sont distants du trait de la division millimtrique de 4, 3,
diximes de mm. Par suite, le trait 0, qui prcde de 4 divisions le
2,
trait 12, est distant de ce trait de 4 diximes de mm. On peut donc, au
moyen des verniers de cette plaline, reprer un objet, dans deux directions perpendiculaires, un dixime de millimtre prs.
les traits
Notons ds maintenant qn'en pratique

rien.
A mon
les verniers
ne servent
avis les constructeurs devraient les supprimer, de
manire diminuer un peu

le ])rix
faire
Pour
des chariots.
avancer
la
prparation
d'arrire en avant ou d'avant
en arrire, on n'a pas besoin

de vernier; on se contente
le
de
chariot
(l|tlacer
de l'tendue d'un champ.

Quant au reprage des
points
intressants,
est
il
trop long de le faire au vernier, de noter les chiffres

lus
et
la suite.
En
de
difficile
trop
remettre tout en
])lace
dans
outre, ces indi-
cations ne sont valables
que
pour un seul microscope.
Fig. 13.
Petite
Dans
avec
de Leitz
les platines
la platine
J'indique, i)age 228, des pro-
platine chariot de Leitz.
cds plus simples et plus

srs pour le reprage.
13), le chariot ne fait pas corps
(fig.
du microscope
est
donc amo-
une monture quelconque.

constitu par trois pices
1" un
collier qui
proprement
dite
il
vible et peut tre adapt sur
Le
chariot est
permet
de
ici
fixer
moyen d'une
vis
lappareil
de
pression;
et 3
vement antro-postrieur,
du microscope, au
chariot pour le mou-
colonne
la
un
un
chariot pour
le
mouvement
latral.
La prparation
est
fixe
sur ce dernic-r; elle est maintenue
l'querre de gauche, qui peut coulisser dans le chariot,

un
levier ressort. Le vernier de ce chariot est^ dans certains
par
modles, au vingtime, c'est--dire qu'il col'respond une lon-
contre

giieur de 19
mm.
divise en vingt jDarlies.
li
"7
permet donc de
reprer 1/20 de millimtre prs.
Une bonne prcaution

collier sur la
chariots,
il
consiste fixer une fois pour toutes le

Si on dsire enlever les
monture du microscope.
de dgager de sa crmaillre le chariot antropoussant en avant, sans toucher la vis de pres-
suffit
postrieur en
le
du collier. La platine du microscope devient libre ainsi pour

manipulations que l'on dsire effectuer.
Il existe d'autres platines chariot
pourvues, en outre des vis
sion
les
de commande, d'un dplacement automatique. Stiassnie fabrique
Fig-. 14.
Oculaire
champ quadrangulaire
variable.
depuis quelque temps des platines de ce genre pour ses grands

modles (fig. 8).
Le mouvement automatique est produit par un levier qui commande un cliquet. Il y a un levier pour chaque chariot et la
manuvre de chacun d'eux dplace le chariot correspondant d'une
quantit dtermine. L'emploi de ce dispositif doit tre combin
avec celui d'un oculaire champ quadrangulaire variable (fig. 14).
On
arrive ainsi dterminer, pour
mouvements du
chaque
objectif, le
nombre de
levier ncessaires
pour dplacer la prparation

d'une quantit correspondant au champ embrass par l'objectif.
Ce dispositif permet de parcourir automatiquement, et sans en
chapper un seul point, des prparations trs tendues.
Ces platines peuvent rendre des services pour l'examen du sang
ou des matires fcales et en gnral pour tous les cas o il faut
laisser
rechercher
et
compter des corpuscules dissmins dans une pr-
paration.
Nous terminerons ici notre

Nous ne saurions les numrer
pour
ainsi
dire, son
M. Langeron.
modle
description des platines chariot.

toutes, car chaque constructeur a,
particulier.
Prcis de Microscopie,
On
voit
que
toutes,
en
18
par deux chariots, placs angle droit

dont les dplacements se mesurent au moyen de verniers.
Ainsi est remjjli le double but de ces appareils qui est de perdliiiilive, sonl constitues
et
mettre d'une part l'examen mthodique des prparations, d'autre

part le reprage des points intressants.
III.
LE TUBE
Le tube supporte la partie optique proprement dite du microscope, c'est--dire les oculaires et les objectifs. 11 est form de deux
cylindres creux, concentriques, glissant frottement l'un dans
Sa longueur est donc variable. Le tube intrieur doit
une
porter
graduation millimtrique, dont Tusage sera indiqu
l'autre.
plus loin (p. 87).

Le tube est adapt, par un bras horizontal,
la tige
qui sur-
monte le pied.
Dans les grands modles, destins
la microphotographie, le
tube est trs large afin d'viter les rflexions sur les parois et de
permettre de faire des photographies sans se servir d'oculaire et
sous un grand angle.
Colonne du microscope.
Cette tige, relie au pied par
l'articulation qui sert incliner la partie suprieure de l'instru-
ment, se
nomme
la
colonne du microscope. Dans
les
modles
construits jusqu' ces dernires annes (fg. 9), cette colonne renfermait la vis micromtrique servant la mise au i)oint prcise des
objectifs.
reil
Dans
les
micromtrique
qui relie
le
tube
statifs
grands
la
est report
colonne.
Mcanisme de mise au
objectifs se fait
modernes
(fig. 7, 8, 10) cet appa l'extrmit du bras horizontal
La mise au foyer des

point.
ce mouveen dplaant verticalement le tube
:
ment
s'effectue, dans les microscopes grands et moyens, par

l'intermdiaire de deux appareils, le mouvement rapide ou cr-
maillre et le
mouvement
lent ou vis micromtrique. Les petits

le mouvement lent micromtrique.
microscopes ne possdent que
Mouvement
La crmaillre qui sert au mouverapide.

elle porte des dents
fixe au tube lui-mme
dents
avec
les
galement obliq les d'un
obliques qui engrnent
petit pignon. Le tout est dispos de faon quo deux dents soient
ment rapide
est
toujours en prise
la fois.
On
vite ainsi tout relard dans la Irans-

mission.
Le
petit
est
pignon
places de chaque ct du bras horizontal. Ce

est trs
commode pour
la
des objectifs trs faibles

s'efTectue
le
rapide
aussi pour relever rapidement le tube

les petits microscopes, ce mouve-
Dans
la main le tube dans un cylindre

Nous dconseillons absolument l'emmodles sans crmaillre un de leurs principaux
en faisant glisser
bras horizontal.
port par
ploi de ces petits
inconvnients
remploi du
mouvement
vis
mise au point grossire, pour l'emploi
et
et laisser la platine libre.
ment
19
deux grandes
actionn par
est
de ne
permettre
revolver porte-objectif et de
pas
Tclairage par condensateur.
Mouvement micromtrique.
mise au point prcise se
fait
La
encore, dans
plupart des microscopes, au moyen de

la vis micromtrique. Cette vis est place
la
dans
la
colonne et meut
et le bras qui le supporte.
un
fort ressort
tenir le
la fois
le
tube
Gnralement
antagoniste permet d'obvertical de va-et-vient.
mouvement
La tte de la vis micromtrique porte

une graduation tablie de telle sorte que
chaque division correspond un dplacement vertical de 1/100" de millimtre.
Ic?^
Ancienne vis
micromtrique des microscopes de Leitz.
Fig.
15.
Cette disposition permet d'valuer approximativement l'paisseur des objets, en

mettant au point successivement leurs parties superficielle et profonde et en reprant chaque fois la tte de la vis, au moyen de
Findex
fix
au tube.
La figure 15 reprsente le dtail de la vis micromtrique des microscopes de Leitz. iLa colonne est forme d'un prisme triangulaire sur
lequel glisse frottement doux une pice cylindrique taille, l'intrieur, exactement sur ce prisme. Celui-ci est creux et renferme un fort
ressort boudin, suffisamment puissant pour supporter le poids de toute
la partie optique du microscope. Le prisme se termine sa partie suprieure par une pice cylindrique, creuse d'un pas de vis qui sert
d'crou la vis micromtrique. Elle est en outre traverse par une
barre qui maintient la colonne creuse et limite la hauteur de son
ascension. La vis micromtrique possde une large tte, en forme
d'entonnoir, portant sur ses bords la division dont nous avons parl
plus haut. Sa partie filete est traverse par une tige d'acier qui appuie
sur la barre transversale fixe la colonne creuse et fait descendre
tout l'appareil optique. Le mouvement d'ascension se produit par
l'action antagoniste du ressort qui se trouve dans le prisme.
20
Le mouvement de
qu'une tendue
deux
arrts
par
brusques.
En outre, la prcision de ce mouvement est forcment limite,
car on ne peut dpasser une certaine finesse dans la taille du pas
cette vis micromtriqiie n'a
d'environ 5 millimtres et
de
la vis
il
est limit
micromtrique, c'est--dire environ 0,5 millimtre.
Actuellement, la plupart des grands microscopes (fig. 7, 8, 10)

munis d'un mcanisme micromtiique beaucoup plus perfectionn. Ici encore chaque
sont
constructeur a son dispositif
Tous
particulier.
reposent
mme
sur le
consiste
principe qui
agir sur la vis
non
pas
directement, comme
l'ancien modle que
dans
micromtrique,
nous
venons de dcrire, mais par

l'intermdiaire d'engrenages
faire
qui permettent de
avancer cette vis de quantits trs faibles.
dans
truits,
Fig.
16.
En
le
nouveau mouve-
ment micromtrique
Mouvement micromtrique des
microscopes de Leitz, coupe verticale.

a, axe filet; 6, coussinet renfermant un
ressort; c, coussinet; d, roue dente;/,
pice en forme de cur; g, galet; k, support du galet; r, tambour gradu dont
sans
dans
fin,
les
outre,
modles bien cons-
les
et agit
fait xis
galement
deux sens.
Les microscopes de Zeiss sont

dispositif invent par
chaque
i
Berger
(fig. 17). Ici, l'ancien
prisme est remplac par un
chariot. Ce ctiariot est m par une vis micromtrique, mais celle-ci n'est
elle porte, sa partie infrieure, une roue
pas actionne directement
dente qui engrne avec une vis sans fin, termine par deux boutons
extrieurs. Le mouvement de descente est produit par un ressort antagoniste. Tout le mcanisme est enferm dans un support en forme de
poigne (fig. 7) qui le met compltement l'abri de la poussire et
des accidents. L'un des boulons extrieurs porte une division dont
chaque degr correspond un dplacement de 2 a.
Les microscopes de Leitz possdent un mouvement micromtrique
analogue (fg. 16). Deux boutons extrieurs mettent en mouvement une
vis sans fin a, qui s'engrne avec une roue dente d. Cette roue
dente porte, fixe sur son axe, une pice /, en forme de cur.
division reprsente
munis du
;/.
1.
Zeitschrift
f.
Instrumentenkunde, XVIII,
p. 129-133, 1898.
21
un
galet g, maintenu par le support k, sur lequel

repose aussi le chariot du tube du microscope. Le poids de l'appareil
optique et l'action d'un puissant ressort assurent le contact permanent
des pices g et f, ainsi que de l'eng-renage d-a. Le ressort boudin, qui
Celle-ci
agit sur
se trouve la partie suprieure, maintient en place le galet g.
Fig. 17.
Mouvement micromtrique des microscopes de Zeiss (systme
Chacun
Berger).
des deux cts de la pice en forme de cur dessine une spirale dont la
une demi-rotation de
longueur est de 3 mm. La roue d a 60 dents
cette roue dplace le tube de 3 mm., donc chaque dent fait avancer le
mm. 1. D'autre part la roue d n'avance d'une
tube de 3/30% soit de
dent qu'aprs une rotation complte de l'axe a; comme le tambour r
que porte cet axe est divis en 100 parties, l'intervalle de chaque division correspondra donc
mm. 001, c'est--dire 1
Lorsqu'on tourne le bouton extrieur, le tube du microscope s'lve
:
ij,.
22
tant que le galet remonte d'un ct ou de l'autre de la pice en cur.

Supposons que le galet soit arriv la pointe du cur et que l'on
tourne toujours la vis dans le mme sens, il redescend de l'autre ct
jusqu' ce qu'il soit arriv dans l'encoche. A ce point, il commence
remonter.
Ce mcanisme produit donc la descente ou la monte du tube dans
tous les sens et sans arrt. Il n'y a pas se proccuper de savoir si
l'on est arriv bout de course. Le contact de l'objectif avec la
lamelle est mme rendu inoffensif, car, peine a-t-on dpass le point
le plus infrieur de la course du chariot que celui-ci remonte immdiatement, quel que soit le sens dans lequel on tourne la vis a.
Ce diposilif dilfre, on le voit, de celui de lcrger par la suppression
de la vis micromtrique et son remplacement par une pice taille
d'une faon particulire.
mouvements micromtriques, quelle que soit la

sont conus, sont trs suprieurs aux anciens. Ils
permettent une mise au point beaucoup plus exacte et beaucoup
on vite aussi une grande partie de la fatigue ocuplus prcise
Ces
iioLiveaiix
faon dont
ils
laire
qui rsulte des efforts d'accommodation ncessits par une
mise au point imparfaite.

L'appi'ciation et la mensuration des paisseurs se trouvent
grandement facilites. Enfin le paralllisme des axes du mouve-
ment rapide
et
plus
et
rapide
l'autre.
Revolver.
du mouvement micromtrique rend beaucoup

beaucoup plus commode le passage de l'un
Un
accessoire inqiortant
du tube
est le revolver,
qui permet
changement rapide des objectifs. Le revolver est
constitu essentiellement par deux calottes sphriques concenle
triques et adaptes
l'une
trs
exactement
l'autre.
rieure
La
calotte
porte
une
sur
infsrie
de bagues, sr lesquelles
se vissent les objectifs.
calotte suprieure
La
forme
couvercle
et
s'adapte
sur les bagues avec assez
Fig. 18.
sire.
La
Revolver pour
En
la calotte
calotte suprieure est fixe
autour d'un axe

cope.
de prcision pour empcher l'entre de la pous-
trois objectifs.
qui est
plac en
partant de cette dfinition,
avant du
il
est facile
infrieure tourne
tube du microsd'imaginer toutes
23
que peut prsenter le revolver. La calotte infrieure

nombre variable de bagues 2, 3 ou 4. La calotte
un
peut porter
suprieure peut tre chancre et former une srie de couvercles
les variantes
rester continue
spars, pour cliacune des bagues. Elle peut aussi
et former une vaste calotte pro-
comme
tectrice,
dans
rcents de Leitz
les
modles
Les
12).
(fig.
figures 8, 9, 10, reprsentent des

microscopes munis de cet organe
important. Ainsi, les objectifs

sont bien protgs de la poussire
et, pour passer de l'un Tautre,
il
suffit
d'un simple mouvement
de rotation.
Le choix d'un revolver

pas indilfrent.
les revolvers
Il
n'est
est certain
deux
que
ne
objectifs
conviennent que pour les microscopes de voyage ou pour ceux

qui sont destins aux sances
de travaux pratiques. En ce qui

concerne les grands microscopes,
les
constructeurs sont malheu-
reusement
trop
enclins
munir de revolvers
l
les
triples. C'est
une tendance fcheuse, car
le
revolver triple est trs insuffisant

dans la pratique. Nous verrons
loin
est
ncessaire
plus
d'avoir toujours sa disposition
trois objectifs sec de puissance
qu'il
Fig-.
r.t.
lisse,
Changeur
de Zeiss.
d'objectifs cou-
En haut
le
tube du
microscope portant la pice fixe.

En bas la pice mobile portant l'objectif,
par
l'intermdiaire
d'une
bague de serrage. A droite les deux

carrs servant au centrage, au moyen
d'une clef de montre.
un objectif immersion. Nous ne saurions donc trop

recommander de toujours choisir un revolver quadruple.
La longueur des objectifs doit tre calcule de telle faon
progressive et
qu'avec les systmes sec
il
suffise
de tourner
le
revolver pour
que l'image soit immdiatement visible. Un lger mouvement de

la vis micromtrique compltera la mise au point. Les constructeurs n'apportent pas toujours une attention suffisante ce dtail
important.
l'emploi
On
du
perd ainsi une partie des avantages que procure

puisque, au lieu d'excuter un simple
revolver,
24
mouvement de
rotation,
faut d'abord relever le tube
il
cope au moyen du mouvement rapide, puis refaire

point, aprs avoir
du microsla
mise au
chang Tobjectif.
Quelle que soit la prcision avec

Changeur d'objectifs coulisse.
laquelle les revolvers sont construits, le centrage des objectifs par
rapport au tube n'est jamais absolument rigoureux. Lorsque, pour des
recherches spciales ou pour la microphotographie, on veut obtenir un
prcis de la partie optique, on
d'objectifs coulisse de Zeiss (fig. 7 et fig. 19).
centrage trs
emploie
encore un autre avantage
Cet appareil possde

d'un nombre illimit
il
permet l'emploi
le
changeur
d'objectifs.
1 une pice fixe
d'objectifs est form de deux pices
visse sur le tube du microscope et qui y reste demeure;
pice mobile qui coulisse dans la prcdente et qui porte
Le changeur
qui
2
se
une
l'objectif.
On
doit se
munir d'autant de
pices mobiles que l'on possde
d'objectifs.
La figure 19 montre que la coulisse de la pice fixe est incline d'un

certain angle (84), par rapport l'axe optique. La coulisse de la pice
mobile possde la mme inclinaison. On peut donc enlever l'objectif
sans risquer de rayer la lentille frontale contre la prparation ou de
dplacer cette dernire. L'inclinaison de la coulisse a prcisment pour
but d'loigner l'objectif de la prparation et d'viter ces inconvnients.
Le centrage exact de chacjue objectif peut tre fait, une fois pour
toutes, par le micrographe lui-mme. Le jeu de la coulisse est limit
par un butoir qu'on peut rgler au moyen d'une cl de montre. Ce
butoir se trouve droite de la pice mobile. Une autre vis, galement
facile rgler au moyen d'une cl de montre, se trouve au-dessus du
butoir et sert au centrage dans le sens perpendiculaire.
En outre, l'objectif est fix sur la pice mobile par un pas de vis
muni d'une bague de serrage. On peut donc faire une fois pour toutes
la mise au point peu prs exacte de chaque objectif. Grce ces dis-
changer d'objectif par un mouvement trs

que la mise au point soit sensiblement
modifie et sans aucun dplacement du point de la prparation que l'on
avait mis au centre du champ.
positions combines, on peut

simple de coulissage, sans
'
CHAPITRE
III
APPAREIL D'CLAIRAGE
Son but
fix sous la platine.

L'appareil d'clairage est
clairer Tobjet par
lumire transmise. En
effet,
se
majorit des cas, l'tude des prparations
Ce
n'est
trs
que
exceptionnellement
et
fait
est d'-
dans l'immense
par transparence.
dans des cas dtermins
en clairant
qu'on observe en lumire rflchie, c'est--dire
surface de l'objet.
d'un miroir
L'appareil d'clairage se compose essentiellement
la
et
d'un diaphragme; mais ce dispositif est insuffisant pour l'emploi

des forts objectifs sec et surtout des objectifs immersion. Aussi
un microscope complet doit-il possder en outre un condensateur
un diaphragme-iris.
il devra donc
est deux faces plane et concave
tourner autour de deux axes horizontaux de manire ce qu'on
couvenablement
puisse utiliser volont les deux faces et diriger
les rayons lumineux dans l'axe optique du microscope, suivant la
condensateur rend
position de la source lumineuse. L'emploi du
inutiles des mouvements plus compliqus, qui seraient destins
modifier considrablement la direction du faisceau clairant et
obtenir, par exemple, des cnes lumineux trs obliques. Nous
et
Le miroir
verrons que ces modalits de l'clairage ne peuvent tre utiles que

dans des cas trs spciaux et qu'ils sont raliss d'une faon beaucoup plus prcise par la manuvre du diaphragme-iris et avec
du condensateur.
Le diaphragme destin tre employ avec le miroir seul doit
il doit
tre plac immdiatement sous la platine
prsenter une
srie d'ouvertures de diamtres variables de manire permettre
l'aide
d'obtenir des cnes
diaphragme
est dit
lumineux de plus en plus troits. Tantt ce

il est
alors form d'une plaque
tournant
26
mtallique circulaire ou disque, louruanl autour de son centre et

munie d'une srie d'ouvertures de plus en plus petites. Ces ouvertures viennent se placer Tune aprs Tautre au centre de l'ouverture de la platine, lorsqu'on fait tourner le disque. Leur centrage
par un cliquet ressort qui s'engage dans des crans
est assur
correspondant aux ouvertures.

Une autre forme de diaphragme est celui qui est dit cijlindre.
Ce diaphragme prsente son tour deux formes. Dans les petits
microscopes
le
cylindre est tiroir
chaque diaphragme est port

par un cylindre mtallique
qui
glisse
frottement
dur dans un chariot, fix

lui-mme par des coulisses
la face infrieure de la
Pour changer de
diaphragme on ahaisse le
platine.
Fig. 20.
cylindre et on tire
Diaphragme
le
cylindre, remplar-aut
condensateur.
Dans
hsse.
les
complets,
plus
la
cou-
microscopes
le
dia-
phragme est un cylindre proprement dit (fig. 21), qu'on introduit

dans le manchon de l'appareil d'clairage, la [lace du condensateur, et sur lequel on peut adapter une srie d'ouvertures de plus en
plus petites. Enfin, dans les microscopes modernes,
cylindre est remplac par
est fix
incommode
la tahle
de
un diaphragme-iris
le
diaphragme
coupole, qui
l'appareil d'clairage. En effet, il est

d'avoir retirer le condensateur et le dposer sur
demeure dans
travail,
il
causes de dtrioration.
cylindre du
est
11
expos
est plus
manchon chaque
poussire et toutes les
la
incommode encore de
retirer
veut changer de
diaphragme. Le diaphragme-iris coupole remdie tous ces
inconvnients. La figure 21 montre ce diaphragme. S, prt fonc-
le
fois
tionner aprs que le diaphragme-iris

t carts hors de l'axe optique.
Avec
que
l'on
et le
la
condensateur C ont
mthode d'clairage que
j'indique plus loin (p. 42), on se sert trs rarement de ce diaphragme qui, mon avis, constitue plutt une complication inutile.
Pour obtenir les grands cnes lumineux
Condensateur.
ncessaires pour l'emploi des forts grossissements, il faut avoir

recours aux appareils, dits condensateurs, forms d'une ou de
plusieurs lentilles. Ce terme de condensateur est d'ailleurs fort

impropre, car il n'y a pas en ralit une condensation des rayons
APPAREIL d'clairage
27
luniineux, mais seulement un agrandissement de la section du

cne clairant, d'o rsulte une plus grande clart de Timage.
Mais, en ralit,
la
puissance lumineuse de ce cne n'est pas sup-
'"'"""'
^^.,^^<^^'"''
La sous-platine dispose de faon montrer le porte-diaphragme et

condensateur cartes hors de l'axe; le diaphragme-iris coupole est prt
fonctionner.
D. porte-diaphragme cart hors de l'axe.
S, diaphragme-iris
en coupole servant modrer l'cclairogo fourni par le miroir, lorsque le condensateur est retir.
servant
manuvrer
le
K, tige
diaphragme-iris en
H. manivelle servant abaisser le condensaC, condensateur.
coupole.
teur.
R, bras horizontal, portant le condensateur.
Z, axe autour duquel
pivote le condensateur, lorsqu'on l'cart de l'axe optique.
L, bras horizontal
portant le diaphragme-iris en coupole;
W, bouton de la crmaillre qui
lve ou abaisse tout l'ensemble de l'appareil d'clairage.
Fig. 21.
le
Heure
celle de la source de lumire. Uuelle
que
soit la
puissance
28
du condensateur, c'est tout au plus si on peut obtenir pour

cne lumineux une clart gale celle de la source.
Le condensateur
deux (flg. 26)ou de
le
il
est form de
plus employ est celui d'Abbe
Dans le premier cas l'ouverture num1
est de 1,20, tandis que dans le second
rique
elle est de 1,40 et permet ainsi d'avoir un cne
lumineux trs large. Ces appareils sont dits con:
trois lentilles.
^^'I|f^'l'i^|j'~T*^Â
m
iL_îi-iaÛ
CondensaFig. 2-2.
teur aplantique et
achromatique de
Leitz, ouv. num. 1,40,
pour la microphoto-
ou
le
fond
densateurs ordinaires, par opposition aux condensateurs achromatiques. Ces derniers (llg-. 22 et 2.3)
construits avec des lentilles doubles plus
gQj^j.
ou moins nombreuses, d'aprs le type des
objectifs immersion. Ils sont corrigs comme
ces derniers pour les aberrations chromatique
et sphrique et pour l'aplantisme. Ils sont gnralement pourvus d'un mcanisme de centrage.
Ces condensateurs s'emploient de prfrence pour
microphotographie, car, grce leur correcils permettent d'obtenir dans le plan de

l'objet une image parfaitement nette d'une petite
source lumineuse, condition ncessaire pour avoir
une dfinition aussi parfaite que possible. Les condensateurs non
achromatiques ont une aberration de sphricit trop forte pour donner
une image contours nets d'une surface lumineuse d'tendue rduite;
pour obtenir ce rsultat, il faut s'adresser une source lumineuse
graphie
le
noir avec diaphragme

central (hg. 121).
Fig. 23.
la
tion,
Condensateur achromatique de Zeiss avec mcanisme de centrage.

dans le manchon; p, manette du dia-
vis de fixation du condensateur

phragme-iris: u et u' vis de centrage.
r,
bien plus large, telle que les nuages blancs, car alors les rayons qui
partent de divers points de cette vaste surface se runissent pour agir
sur chaque point de l'objet. Pour le travail courant les condensateurs
ordinaires sont parfaitement suffisants-.
Voir, p. 49, la dfinition de l'ouverture numrique.
Au sujet des condensateurs consulter Belles Lee, La Cellule, XIX, p. 413-419,
1902; Nelson, The substage condenser, its histor^', construction and manage1.
2.
APPAREIL D ECLAIRAGE
Le diaphragme-iris
20
complment indispensable du condensateur. Primitivement, pour rtrcir le cne lumineux, on se

est le
servait de diaphragmes circulaires. On les

du condensateur dans un porte -diaphragme
chaque
qu'on voulait changer de
fois
insrait
d'obtenir instantanment, sans autre
Les dia-
diaphragme.
iris ont remdi cet inconvnient
phragmes
au-dessous
qu'il fallait excentrer
ils
manuvre que
permettent
celle d'agir
sur un levier, une srie gradue de cnes lumineux, passant

insensiblement de l'un l'autre.
Tout diaphragme-iris
lames d'acier
en croissant
ques.
est
form d'un certain nombre de minces
tailles
et
imbri-
Chacune
de
ces lames est fixe
une extrmit par une

vis
autour de laquelle
,,
elle
(fig.
peut tourner
24),
tandis qu'
l'autre extrmit
uue des lames

Fig. 24.
du diafalciformes
elle
phragme-iris, pouvant
tourner autour d'un
point
fixe.
Original.
Fig-.
25.
rieur
Disque infdu diaphragme-
portant des encodans lesquelles

pntrent les extrmits libres des lames
mobiles. A gauche se
trouve le bouton du diairis,
ches
se termine par une

expansion rectangulaire libre. Ces lames
phragme. Original.
sont ainsi disposes sous le disque suprieur
du diaphragme
dans le disque infrieur se trouve une pice
:
mtallique circulaire (fig. 25), mue par un levier et portant une

srie d'encoches, dans lesquelles pntrent les expansions rectangulaires des lames falciformes. Le tout est compltement enferm
dans un tambour.
On comprend donc
les
qu'en appuyant sur le levier on fait tourner

lames autour de leur point fixe et ainsi on rtrcit ou on largit
l'ouverture centrale.
Dans certains cas, il peut tre utile de dplacer excentriquement le diaphragme, de manire obtenir un clairage oblique.
Ce dplacement s'effectue au moyen d'une crmaillre, visible dans
les figures 21 et 26, qui permet de faire glisser dans un plan horitambour qui renferme le diaphragme. L'clairage oblique
surtout utile pour rexamen des organismes ou corpuscules
zontal le
est
pourvus d'ornements trs fins en relief, tels que les Diatomes,

ufs d'Helminthes, les spores, etc. Nous verrons plus loin
les
ment. Journ. Roy.
microscop.
8 dit. p. 298-316, 1901.
Soc,
p.
90,
1891
Carpenter, The
microscope,
30
73) que Tclairage oblique permet, dans certaines conditions,

la puissance de rsolution des objectifs. Il est indispensable que le tambour du diapbragme puisse tourner autour
(p.
d'augmenter
d'un axe vertical, aprs avoir t excentr, de faon faire varier

Fincidence du faisceau lumi-
neux oblique
et
en vidence
les
dtails des
mettre ainsi
plus
fins
organismes qu'on
examine.
Enfin
le
porte-diaphragme
doit pouvoir tre facilement
dgag et amen sur le ct

par une simple traction, ce
mouvement
est indispensable
pour contrler l'ouverture de

l'iris ou pour introduire dans
la rainure,
dans
Ensemble de l'appareil d'clairage des microscopes do Zeiss, avec condensateur Abbe deux lentilles, diac, condensaphragme-iris et miroir.
teur; r, vis de pression servant immobiliser le condensateur dans le manchon
qui le supporte p, tige servant manuvrer le diaphragme-iris; s, bouton
de la crmaillre qui lve ou abaisse
Au milieu de
l'appareil d'clairage.
la figure, en dessous du condensateur,
on voit le bouton de la crmaillre qui
Fig. 26.
permet d'excentrer
le
diaphragme-iris
et d'obtenir l'clairage oblique.
Ce
mme
bouton permet, par une simple traction

d'amener tout le porte-diaphragme en
dehors de l'axe optique, sur le ct du
microscope.
rserve cet effet
porte-diaphragme, des
verres oolors ou dpolis, un
le
polariseur, etc.
montre
La figure 21
le
porte-diaphragme
cart de l'axe opti-
ainsi
que.
L'ouverture
doit tre
l'iris
maxima
l'angle d'ouverture
densateur. Enfin
mode
d'avoir
de
au moins gale
il
du concom-
est
des
divisions
graves sur le tambour le

long de la course du levier
:
permettent, surtout pour

microphotographie, de re-
elles
la
prer exactement la largeur du cne lumineux.

Les lentilles du condensateur rfractent les rayons lumineux
par le miroir, de manire les faire converger sur

en un cne large ouverture. Le foyer de l'appareil se
rflchis
l'objet
trouve en
mm.
mum
effet
au voisinage du plan de
au dessus de
la lentille
l'objet observ,
suprieure
(fig.
59
et 60).
environ
Le maxi-
d'clairage est obtenu quand l'objet se trouve exactement au

foyer. Pour raliser celte concidence et pour loigner dans cer-
APPAREIL D'CLAIRAGE
31
du condensateur, il est ncessaire que

puisse tre dplac dans le sens vertical.
Dans les grands microscopes, ce rsultat est obtenu au moyen
d'une crmaillre et d'un pignon (fig. 20, S; 21, W)
dans les
tains cas de l'objet le foyer
l'appareil d'clairage
modles
vis
mme
ou
mouvement
les plus petits le
la
simplement
vertical est produit par
une
main.
SOURCES LUMINEUSES
Avant d'expliquer l'emploi de
l'appareil d'clairage,
il
est nces-
sommairement les sources lumineuses les plus

employes en microscopie. Nous laisserons de ct celles qui
saire
d'tudier
servent en microphotographie, car leur tude compliquerait trop
notre expos.
Lumire du
jour.
C'est naturellement l'clairage le plus
employ. La manire la plus favorable de l'utiliser est de recevoir

sur le miroir la lumire rflchie par les nuages blancs un ciel
bleu et limpide est moins favorable l'observation. La lumire
:
du soleil ne peut tre utilise que pour la microphotograen

aucun cas elle ne peut servir l'observation directe;
phie,
cependant on pourrait la rigueur la diffuser au moyen d'une
toffe blanche et utiliser la lumire fournie par cet cran.
directe
La condition
pour avoir un bon clairage,
essentielle,
est
que
source lumineuse, quelle qu'elle soit, ait une tendue suffisante

pour couvrir toute la surface du miroir et pour remplir tout
l'angle d'ouverture du condensateur. Il sera donc ncessaire de
la
placer
la table
de travail contre
Quand on a
cerlainement celle du nord,
pas trs grande.
la fentre,
le choix, la
surtout
si
celle-ci n'est
meilleure exposition est
car on n'y est jamais gn par le
soleil.
Lumire
La lumire artificielle prsente des

artificielle.
au
considrables
point de vue de la constance et de
avantages
l'intensit. Aussi est-elle particulirement favorable pour les forts
grossissements,
avec lesquels
elle
est
souvent
prfrable la
lumire du jour. Certains observateurs l'emploient uniquement,

de manire avoir toujours un clairage uniforme. Boites Lee^
1.
Bolls Lee, L'clairage et l'emploi du condensateur dans la micrographie
histologique.
La
Cellule,
XIX,
p.
103- J33,
pi.,
1902.
32
une tude fort intressante, o on trouvera de

nombreux documents sur les divers condensateurs et sur les prin-
a publi ce
sujet
cipales sources lumineuses. Les dtails de
cette tude dpassent
malheureusement de beaucoup la porte de la pratique courante.

En effet, la plupart du temps, on achte de confiance un microscope, tel que le fournit la maison laquelle on s'adresse, sans
commander spcialement
le
condensateur.
On
a d'ailleurs raison,
car les microscopes des grandes maisons spciales sont gnralement bien compris il vaut mieux les prendre tels quels si on est
incomptent dans la matire. En outre on utilise au hasard la
;
source lumineuse dont dispose
le laboratoire
les trs intressantes indications
ment mises en
pratique.
o on
travaille.
Aussi
de Bolles Lee seront- elles rare-
Nous en rsumerons plus
loin (p. 44)
les points essentiels.
Les sources lumineuses

les conditions
artificielles sont trs variables,
se trouve l'observateur
suivant
lampes huile vgtale

ou animale, ptrole, lampes lectriques incandescence ou
arc, becs de gaz varis, mais de prfrence incandescence. Les
principes gnraux que nous allons donner permettront l'observateur d'utiliser pour
dont il disposera.
le
mieux
la
source de lumire
artificielle
La condition essentielle est toujours d'envoyer sur le miroir un

cne lumineux bien homogne et possdant un angle d'ouverture
suffisant. Lorsque la source lumineuse a une faible tendue \ il
faut qu'elle soit suffisamment rapproche du microscope. Dans le
cas contraire, il est bon d'interposer entre elle et le miroir soit une
grande lentille collectrice, soit un ballon de verre rempli d'eau
et
faisant
(p.
43
et
l'office
de
lentille.
rgle la position de ce ballon
la surface du miroir soit

bon moyen de s'en assurer
miroir un morceau de papier blanc.
bien uniformment claire.

est
On
45) de manire ce que toute
de placer sur
le
Un
trs
Pour les faibles grossissements, lorsqu'on veut obtenir un large

cne lumineux avec une source de faible tendue, on peut interposer un papier de soie ou un verre finement dpoli entre la lampe
et le miroir. On peut encore placer dans le porte-diaphragme un
1. Giltaj*, Zeitschr, f. wiss. Mikr., XXV, p. 163, 1908, fait remarquer que les
sources lumineuses trop restreintes donnent lieu des figures d'interfrence qui
troublent la vision. On les reconnat Taide de grains d'amidon de pomme de
terre, en suspension dans l'eau, qui so montrent entours de bandes lumineuses
colores.
APPAREIL D'CLAIRAGE
33
disque de verre dpoli. Mais, par ce moyen, on perd beaucoup de

lumire et on nuit la dfinition, car les images sont plates, sans
relief et sans dtails.
En
outre on ne peut user de cet artifice avec
les forts objectifs.
La couleur de la lumire artificielle est quelquefois trs gnante,

surtout pour tudier des prparations colores
le ptrole et le gaz, en
particulier, donnent des flammes trs jaunes ou rougetres. On les
amliore en introduisant un disque de verre bleu dans le portediaphragme. Quand on se sert d'un ballon comme lentille collectrice,
on peut teinter l'eau qu'il renferme avec un peu d'eau cleste (obtenue
en versant quelques gouttes d'ammoniaque dans une solution de sulfate
de cuivre). Jannsens
conseille l'emploi d'une solution de carbonate de
cuivre prpare d'aprs la formule de Ost^ et dilue de moiti, ou plus
simplement une solution de bleu de mthylne. Ces liquides interceptent une partie des radiations rouges et laissent passer tous les
rayons utiles, notamment les radiations violettes. Ces crans peuvent
aussi tre disposs dans une cuve verticale faces planes.
Nous ne dirons qu'un mot des
Lampes pour micrographie.
lampes construites spcialement pour l'clairage du microscope. La
lampe de Ranvier n'est pas autre chose qu'une lampe gaz ou huile
munie d'une lentille condensatrice. Les lampes albo-carbon, dans
lesquelles le gaz se sature de naphtaline et donne une flamme trs
blanche, n'ont plus gure de raison d'tre depuis que les brleurs
manchon genre Auer sont rpandus partout. Nanmoins elles donnaient
une (lamme trs clairante et trs propice aux observations microscopiques, cause de sa fixit et de sa puissance sous une faible tendue.
Les lampes lectriques incandescence se prtent d'autant mieux
l'observation microscopique que le filament est plus court ou, tout au
moins, enroul dans un troit espace, de faon fournir une source
lumineuse aussi puissante que possible sous un petit volume. La lampe
de Nernst (p. 217), dont le filament est remplac par une spire tours trs
:
'
rapprochs, forme d'oxydes mtalliques (zireonium et thorium), est

excellente ce point de vue. Il faut se mfier des miroirs concaves ou
des ampoules argentes sur une de leurs faces. Ces appareils donnent
des rayons lumineux non orients, avec lesquels il est trs difficile
d'tablir un clairage microscopique correct.
Des micrographes de grande valeur et d'une incontestable autorit,
comme Bulles Lee (voir p. 44), considrent que le meilleur clairage
possible pour les travaux cytologiques est celui qui est fourni par les
lampes ptrole mche plate. Une lampe quelconque de ce modle
fournit un clairage suffisant, pourvu que la mche ait environ
12 millimtres de largeur et qu'elle soit taille en pointe obtuse, de
manire fourq.ir une flamme pointue. Pourtant les lampes verres
arrondis et renfls dforment un peu l'image de la flamme. Il est donc
prfrable d'employer, lorsque cela est possible, une lampe chemine
mtallique, munie en face de la flamme d'une fentre rectangulaire
garnie d'une lame de verre plane. On doit pouvoir employer volont
1.
La
2.
Chemiker Zeitung,
Cellule,
XIX,
M. Langeron.
p. 11, 1901.
p. 1784-85, 1829-30, 1895.
34
le plat de la flamine oa son tranchant. Les constructeurs anglais, par

exemple Baker, fabriquent d'excellents modles de ces lampes, munies
ou non d'une lentille condensatrice (lampes Nelson ou Dallingerj.
EMPLOI DE L'APPAREIL D'CLAIRAGE

Rappelons brivement
les principes sur

lesquels est fond
source
des
Une
lumineuse,
microscopes.
clairage
quelle qu'elle soit, envoie sur Tobjet un faisceau de rayons convergents. L'angle d'ouverture de ce faisceau dpend de la gran-
Fappareil
de l'loignement de la source lumineuse dans le microslumineuse est en ralit le miroir plan ou concave
source
cope
ou l'ensemble form par le miroir et le condensateur.
deur
et
la
Supposons que
ra}q)areil
d'clairage
envoie
sur l'objet
des
ravons manant d'une source lumineuse d'tendue illimite, ce

qui est le cas pour la lumire du jour. L'objet est clair par un
cne lumineux convergent vers lui et divergent vers Tobjectif. La

grandeur et l'angle d'ouverture de ce cne dpendent de l'tendue
relle ou relative de la surface clairante, lentille ou miroir, quelle
que
soit la
forme de ce dernier, plan ou concave. La grandeur du

la dimension du miroir et l'angle d'ouverture de
cne dpend de
cet angle augmente en raison inverse de la

augmente aussi par l'introduction d'une lentille entre
le miroir et l'objet. La lentille agit alors comme si elle agrandissait la surface i-tlcbissante. Si on introduit un diaphragme,
on diminue l'tendue du faisceau clairant alors Tloignementdu
sa distance l'objet
dislance,
il
dimension n'ont plus d'action, pourvu que la surface

du miroir n'ait pas une tendue infrieure l'ouverture du diamiroir
et sa
phragme.
Si, au contraire,
comme
c'est
le
la
cas
source lumineuse a une tendue limite^

pour la lumire artificielle, les choses se
passent autrement. Le miroir plan se comporte par rapport au

miroir concave comme si on avait diaphragm le cne lumineux
fourni par ce dernier. Le miroir concave fournit donc, dans ce cas,
un cne lumineux beaucoup plus

reoit plus de rayons lumineux et
large que le miroir plan, car il

les rflchit par toute sa surface,
que le miroir plan reoit moins de rayons et n'claire

que par une partie de sa surface. De son ct, le condensateur, jiour une source lumineuse ou une surface de miroir relativement petites, fournit un cne lumineux trs large et pro-
tandis
l'objet
APPAREIL D'CLAIRAGE
35
porlionnel roiiverUire et la longueur locale du systme.

Le miroir concave et le condensateur agissent donc comme s'ils
donnaient
source
la
lumineuse une plus

grande tendue, sans
diminuer son inten-
la
comme
ou
sit,
s'ils
rapprochaient.
En rsum,
l'ap-
pareil d'clairage du
microscope a pour
but, au
moyen d'une
source
lumineuse
d'une
position
et
d'une tendue donnes,

l'objet
d'envoyer sur
un
faisceau
mme
lumineux de
mais sous
intensit,
forme de cne
ouverture.
large
doit
Il
aussi permettre
facile
gradation
une
et
tendue de l'ouverture et de
la
direction
de ce cne.
Aprs avoir
ces
principes
raux
de
la
tabli
gn-
Fis.
-27.
Valeur relative du miroir plan

concave.
-
thorie
et
du miroir
rayons utiles rflchis par le miroir plan '.

rayons utiles rflchis par le miroir
concave.
de l'clairage par la
lumire
transmise,
T'U'Il
rayons non
utiles.
nous allons tudier
la signilication et l'emploi de
parties de l'appareil d'clairage.
Emploi des miroirs.

le
miroir plan ou
le
chacune des
Gnralement on emploie au hasard
miroir concave et
le
plus souvent
tort.
Nous
donc prciser dans quelles conditions il faut choisir l'un ou

l'autre. Pour cela, nous devons examiner successivement l'emploi
allons
des miroirs seuls ou combins avec
le
condensateur.
1. Le point d'incidence des raA'ons Fp et F'p' devrait se trouver sur le miroir

plan. C'est par erreur que l'incidence se produit sur le miroir concave.
36
l*"
Emploi du miroir
nons d'abord
la
Examiseul, sans condensateur.

valeur relalive du miroir plan et du miroir con-
(fig. 27)
lorsque nous connatrons leurs proprits, nous
pourrons en dduire leur mode d'emploi.
cave
Soit FF' une source lumineuse, par exemple l'ouverture d'une fentre,
PP' un miroir plan, ce' un miroir concave et
l'objet clairer. Le
rayon central fmO sera rflchi de la mme manire par les deux
miroirs, mais il y a de grandes diirences pour les autres rayons. Les
rayons envoys par les bords de la source lumineuse et rflchis par le
miroir plan ne peuvent clairer l'objet que s'ils proviennent de points
de ce miroir situs entre p et/)'. Ainsi le rayon Fa; sera rflchi dans la
direction xa, le rayon F'j, dans la direction yb. La source lumineuse FF'
fournit donc, par rflexion sur le miroir plan PP', un cne lumineux
dont l'angle d'ouverture est pOp'.
Le miroir concave ce' fournira, avec la mme source lumineuse, un
cne beaucoup plus large dont l'angle d'ouverture sera cOc'. En efl'et,
les rayons qui partent des points F et F' sont rflchis sur l'objet,
suivant les directions eO et c'O.
la
Donc, pour une source lumineuse de mme tendue et place

mme distance, le miroir concave fournit un cne lumineux
plus large, et utilise une bien plus grande partie de la surface

de cette source. Il peut donc envoyer plus de lumire Tobjet.
Pour que
lumire,
le
il
miroir plan puisse fournir une gale quantit de

que la source lumineuse soit reprsente par
faudrait
L'avantage du miroir concave est donc de fonctionner

du miroir plan comme une source lumineuse plus tendue.
Une premire rgle dcoule de ces faits le miroir plan donne
la ligne FJ^^.
vis--vis
des cnes lumineux, troits, plus favorables Temploi des objectifs faibles; les cnes plus larges, fournis par le miroir concave,
conviennent mieux aux objectifs forts, qui demandent un faisceau
clairant grande ouverture.
Influence du diaphragme sur le miroir. ~ Le diaphragme

le miroir et
l'objet (diaphragme disque, tiroir,
cylindre, diaphragme-iris en coupole) permet de rtrcir le
cne lumineux fourni par le miroir. Un diaphragme d'ouverture
interpos entre
donne
laissera
passer
un cne d'autant plus
plac plus loin de l'objet.

le diaphragme cylindre
On
pourra donc rgler
ou
le
troit qu'il
sera
l'clairage, avec
diaphragme-iris coupole, non
seulement en changeant le diamtre de l'ouverture, mais encore

en la dplaant verticalement
on voit donc l'importance de ce
:
mouvement
vertical.
37
APPAREIL d'clairage
montre que l'usage des diaphragmes est fort

donner
plus de nettet aux images. Nous en comprenpour
drons plus loin la raison, quand nous expliquerons (p. 71) le rle
de la rgion de l'objectif dite espace obscur. C'est en effet, dans
L'exprience
utile
cette rgion, que se trouvent les faisceaux de diffraction produits

par les fins dtails de structure des objets et qui ont une si grande
la formation de l'image. Bien que celte image
d'autant plus parfaite que Tangle d'ouverture de l'objectif est
importance dans
soit
il
plus grand, on comprend que, pour mnager l'espace obscur,
souvent ncessaire de diminuer, par lusage des diaphragmes,
est
l'angle
d'ouverture
du
faisceau
clairant et de le rendre
bien
infrieur ce qu'il devrait tre pour remplir tout l'angle d'ouverture de l'objectif.
Influence du miroir sur
le cne d'clairage.
Lorsqu'on
n'emploie pas de diaphragme et que la source lumineuse est
d'tendue illimite, l'ouverture du faisceau clairant dpend de la
dimension du miroir. Dans ce

exactement
comme
le
cas,
le
miroir concave;
miroir plan se comporte

n'y a de diffrence que
il
pour une source lumineuse d'tendue limite,
comme nous
le
verrons plus loin.
Les dimensions du miroir ne peuvent, pratiquement, dpasser

On peut bien augmenter l'angle d'ouverture du
certaines limites.
faisceau en rapprochant le miroir de l'objet; mais alors la platine
du microscope empche
miroir,
si elle
rfracts par le
l'arrive
des rayons lumineux sur le
rapproche. En outre, les rayons sont

porte-objet; ceux dont l'inclinaison dpasserait le
en
est trop
double de l'angle limite (voir p. 48) pour l'air et le verre,, subiraient infailliblement la rtlexion totale (voir p. 48) or cet angle
;
est
de 4io. Ceci nous donne
la limite
de
la
puissance des miroirs.
Pour obtenir des cnes lumineux plus larges, il est ncessaire

d'avoir recours aux condensateurs.
Emploi de la lumire artificielle.
Lorsqu'on se sert de
la lumire arlificielle, ou en
d'une
source lumineuse
gnral
d'tendue hmite, il ressort de ce que nous avons dit plus haut

que le miroir concave donne toujours un faisceau de plus grande
ouverture. C'est donc surtout dans ce cas que s'applique la rgle
que nous avons formule
prendre le miroir plan pour des objecmiroir concave pour les objectifs forts. Mais,
outre la largeur du faisceau lumineux, il est une autre condition
de l'clairage qui a surtout une grande importance avec les objectifs
faibles
et
le
38
lifs
faibles, c'est
la
ralisalion d'un
champ
iiiiirormment clair
sur toute son tendue, permettant de voir toute
comprise dans ce champ.
la partie
de Tobjet
Uniformit d'clairage du champ.

Pour une source
lumineuse d'tendue illimite, cette uniformit dpend unique-
comme nous
l'avons vu, de la dimension du miroir et de la

spare de l'objet. Peu importe dans ce cas qu'il
soit plan ou concave.
Au contraire, pour une source lumineuse d'tendue limite, le
meut,
distance qui
le
miroir plan donne un champ clair plus vaste que celui foui'ui
par le miroir concave. Ce dernier projette peu prs dans le
plan de l'objet une image relle de la source lumineuse, qui se

confond avec l'image de l'objet et qui est trs gnante. D'ailleurs,
cet inconvnient est encore plus sensible avec le condensateur qui
fournit une image trs petite de la source lumineuse dans le plan
de
l'objet.
Donc, jjour avoir un chanq^ uniformment clair avec les

objectifs trs faibles, il faut employer le miroir plan seul, sa7is
condensateur.
Nous avons vu plus haut que

Emploi du condensateur.
miroir seul, mme lorsqu'il est concave, ne peut pas fournir
des cnes lumineux, ayant une ouverture suprieure 82. Or,
cet clairage est insuffisant avec les objectifs de grande ouverture
2""
le
numrique
(voir p. 49).
On
est alors oblig d'avoir recours
aux
condensateurs. Nous savons que ces appareils ont une forte ouvertui'e numrique.
L'objet est ]dac au voisinage et un peu au-dessous de leur foyer suprieur. Dans ces i*onditions, les rayons que
condensateur reoit du miroir sont peu prs parallles; il
n'est donc pas ncessaire que ce dernier ait une grande surface.
le
Pour uLiliser compltement la grande ouverture numriciue des condensateurs (1.20 et mme 1.40), il faut interposer une goutte d'huile de
cdre immersion enlre la lentille suprieure et le porte-objet, de faon
empcher une partie des rayons lumineux de subir la rflexion totale,
au moment de leur passage du verre dans l'air. Cette prcaution est,
d'ailleurs, rarement indispensable et ne saurait avoir d'importance que
pour les objectifs immersion. En effet, les objectifs sec ne peuvent
admettre, mme dans les circonstances les plus favorables, qu'un cne
lumineux ayant une ouverture gale au plus au double de l'angle
limite pour le verre et l'air; or le condensateur fournit facilement un
cne de cette ouverture sans interposition d'huile de cdre. Ajoutons
que l'immersion du condensateur n'est rellement. efficace que lorsque
l'instrument a t spcialement calcul dans ce but.
APPAREIL D'CLAIRAGE
Pour
on emploie
tion.
39
large cne lumineux fourni par le condensaleur,

diaphragme-iris dont nous avons donn la descrip-
rtrcir le
le
Ce diaphragme
est plac
en dedans du loyer infrieur du
condensateur.
L'emploi du condensateur
est
absolument indis[iensable avec
puissants et avec les objectifs immersion, qui

cne clairant trs large, dont l'ouverture puisse
les objectifs sec
exigent un
atteindre 120. Avec ces objectifs, le foyer du condensateur doit se
trouver dans le plan de l'objet ou un peu au-dessus pour que
Tappareil donne son maximum d'effet. Le mouvement vertical

en effet,
servira assurer la mise au point du condensateur
:
lorsque
la
tandis qu'il
et court,
source
source lumineuse est loigne,
lumineuse
est
le
cne projet
est large
plus troit et plus allong
est
(lumire
lorsque la
artificielle). Cette
rapproche
mise au point du condensateur assurera donc la pntration, dans
Tobjectif, d'un cne lumineux aussi large que possible.
Certains observateurs conseillent de limiter l'emploi du con-
densateur aux objectifs immersion et aux systmes sec trs

puissants. Tel n'est pas notre avis. Nous pensons qu'il y a grand
avantage employer le condensateur, mme avec les objectifs
faibles, jusqu'
25 millimtres environ de distance
focale, c'est-
-dire jusqu'aux objectifs n" 2 inclusivement. Pour une distance

focale plus grande, on ne peut obtenir un champ uniformment
clair,
mme
en abaissant
le
condensateur au maximum. Dans
ce cas, on emploiera le miroir plan seul. Pour les objectifs foyer

infrieur 25 millimtres, on abaissera le condensateur, de
manire ce que l'image de la source lumineuse ou des barreaux

la fentre ne gne pas la perception de l'image microscopique.
Ds que ce rsultat est atteint, on arrte le mouvement du con-
de
et on se sert du diaphragme-iris pour rgler l'clairage,

en diminuant l'ouverture du cne lumineux. Pour les observations
densateur
qui rclament de frquents changements d'objectifs, ce procd

est bien plus pratique que celui qui consiste carter chaque
du microscope, puis rgler de

nouveau Tclairage avec le miroir et le diaphragme de la platine.
11 suffit, en
changeant l'objectif, de modifier lgrement la posi-
instant le condensateur de l'axe
tion verticale du condensateur et l'ouverture de l'iris. Avec un

peu d'habitude, ces mouvements sont excuts presque automatiquement. En outre, en enlevant le condensateur, on se priverait
du diaphragme-iris qui permet de rgler trs commodment lclai-
40
le diaphragme-iris coupole, install sous la plaline, ne donne

jamais un rglage aussi prcis et des images aussi bien dfinies.
Gomme la grande majorit des observations courantes se font
rage
des grossissements variant de 25 800 diamtres, on pourra, dans

ces limites, ne jamais supprimer le condensateur
nous recom:
mandons vivement
beaucoup
minimum
de
manire de procder, comme conomisant

et donnant d'excellentes images avec le
cette
temps
de fatigue oculaire.
Quel miroir faul-il employer avec le condensateur ? DdLiis les

conditions ordinaires, c'est--dire avec la lumire du jour ou avec
une lumire artificielle suffisamment loigne, c'est le miroir plan
qui permet d'obtenir les cnes lumineux les plus ouverts, c'est
donc lui qu'il faudra presque toujours employer. Le miroir concave
conviendra pour les cas o la source lumineuse est trs rapproche

en effet, dans ces conditions, le miroir concave peut
clairer tout l'angle d'ouverture du condensateur avec une source
:
lumineuse bien moins tendue que celle qu'exigerait le miroir

Au contraire, pour une source lumineuse loigne, le miroir
plan.
concave exige une surface clairante plus tendue que le miroir

plan, pour illuminer tout l'angle d'ouverture du condensateur.
Influence de la largeur du cne d'clairage sur l'image

microscopique. Nous nous sommes efforcs jusqu'ici d'obtenir
les cnes lumineux les plus larges possibles dans toutes les conditions d'clairage qui peuvent se prsenter. Il nous reste voir
comment on doit utiliser ces larges faisceaux et dans quelles
conditions on doit les rduire au moyen du diaphragme. En effet
la largeur du cne d'clairage exerce une grande influence sur la
qualit de l'image microscopique. Plus ce cne est troit, plus
l'image a des contours nets au contraire, l'image produite par un
:
cne grande ouverture rsulte de la superposition d'un grand

nombre d'images, formes par des rayons dont l'inclinaison varie
par rapport l'axe. Les images fournies par ces derniers ne sont
pas identiques et l'image totale forme par la superposition de ces
images lmentaires n'a pas des contours absolument nets.
L'exprience est facile faire en clairant un objet non color avec
un cne lumineux trs large on verra alors que le champ n'est pas net
et mme, dans certains cas, l'image microscopique pourra disparatre
entirement. 11 n'en sera pas de mme pour une prparation colore,
car alors les lments ne se distinguent pas uniquement par la diff:
rence de leurs indices de rfraction, mais en outre par leur plus ou
APPAREIL d'clairage
41
moins grande facult d'absorption pour les rayons lumineux. Si on se

sert d'un objectif parfaitement corrig pour la totalit de son ouverture,
on peut clairer la prparation avec un cne lumineux trs large sans
que l'image disparaisse. Au contraire, ce sont les parties non colores
absorbantes dont l'image disparatra, ce qui constitue un
et non
avantage, par exemple pour la recherche des Bactries colores au
milieu d'lments ou de tissus non colors.
Par contre, l'troitesse du cne clairant augmente le pouvoir pntrant de l'objectif et la planil du champ. On sait, en effet, que la
plupart des objectifs microscopiques donnent un champ qui parat
il en rsulte
plus ou moins courbe
que l'image ne peut lre mise au
point en mme temps au centre et sur les bords. Plus le cne d'clairage est large, plus la zone centrale de nettet est troite. Cet inconvnient est surtout sensible pour la microphotographie
dans l'observation oculaire, le mouvement constant de la vis micromtrique supple
largement ce dfaut.
:
On peut admettre, comme rgle gnrale, que l'clairage le plus

favorable est fourni par un cne lumineux, dont l'ouverture est gale
au tiers de celle de l'objectif et qui, par consquent, n'claire que le
tiers de l'ouverture de cet objectif. On peut s'en assurer en enlevant
l'oculaire et en regardant dans le tube du microscope
on peut aussi
laisser l'oculaire en place et se servir d'une loupe pour contrler la
:
largeur du cne d'clairage.
En
pratique,
largeur du cne
manuvre, trs
il
faut,
pour toutes
clairant en
les prparations, faire varier la
manuvrant
le
diaphragme-iris. Cette
qu'on arrive en peu de temps excuter

instinctivement, permet de trouve)- pour chaque objet l'clairage
facile, et
le plus favorable et qui fournit la meilleure dfinition. En gnral,

avec les objectifs sec, on ouvre peu le diaphragme, surtout avec
les forts grossissements dont l'ouverture numrique est moindre.
Au
contraire, avec les objectifs immersion, et surtout lorsqu'on

examine des prparations intensment colores, on peut l'ouvrir
entirement et utiUser la totalit du cne lumineux.
En gnral, les prparations colores peuvent tre examines
avec un cne lumineux trs ouvert, pourvu toutefois que l'objectif

puisse fournir une image nette dans ces conditions. Dans ce cas,
les contours qui apparaissent grce la diffrence de rfringence
sont moins marqus et les colorations ressortent mieux. Au contraire, s'il s'agit d'objets non colors, c'est la diffrence de rfrin-
gence seule qui permet de distinguer

les dtails
de structure
il
plus troits. Pourtant, il

certaine limite. Nous verrons en
des objectifs
(p. 75),
les
contours
et
d'apercevoir
faut alors employer des cnes lumineux

ne faut pas descendre au-dessous d'une
effet,
en tudiant
les proprits
qu'on peut arriver, au moyen de cnes lumi-
42
(le
grande ouverture, augmenter dans certains cas la
puissance de rsolution des objectifs et distinguer de fins dtails
de structure qui restent invisibles lorsqu'ils sont clairs par un
faisceau de faible ouverture.
neux
RSUM DE
L'EMPLOI] DE L'APPAREIL D'CLAIRAGE
On emploie le miroir plan seul,

1" Emploi du miroir seul.
sans condensateur, avec les objectifs faibles long foyer (!25
40 mm.). A partir de 25 mm. de distance focale, ce qui correspond
aux objeclifs n 2 et au-dessous [aa de Zeiss); nous conseillons
vivement de se servir du condensateur.
Le miroir concave sera employ avec les objeclifs forts sec,

lorsqu'on ne disposera pas d'un condensateur et lorsque la source
lumineuse sera de
faible
tendue (lumire
artificielle,
troite).
2
le
Emploi du condensateur
condensateur toutes
toutes les fois que
mm.
Quand
et des miroirs.
fentre
On emploie
que cela est possible, c'est--dire

n'a
pas une distance focale suprieure
l'objectif
les fois
25
la
source lumineuse, quelle que soit son tendue, est

claire avec le miroir plan. Le
du condensateur, on
loigne
miroir concave ne doit tre emploij que lorsque la source

lumineuse est la fois de faible tendue et trs rapproche.
Pour obtenir un cbamp uniformment clair, on lve ou on
moyen du pignon et de la crmaillre

on rgle l'intensit de l'clairage avec le dia[ihragme-iris. Celle
on ne doit jamais chercher
remarque est trs importante
abaisse le condensateur au
et
diminuer
de l'clairage en dplaant le condensateur,

mais seulement en fermant le diaphragme-iris '. Le mouvement
l'intensit
vertical
du condensateur ne
mment
clair
le
sert qu' obtenir
un champ unifor-
pour les objectifs faibles, on sera oblig d'abaisser

condensateur au maximum; pour les objectifs moyens, on le
:
relvera, plus ou moins; pour les objectifs immersion,

tre relev au maximum ou presque au maximum.
il
devra
1. Thoriquement le diaphragme-iris ne doit, servir qu' rgler les dimensions

du cne lumineux, mais non modrer l'intensit de la lumire. Pratiquement,
dans le travail courant, ces deux oprations se trouvent confondues. Pour les
observations difficiles, il faut rgler Tinlensit lumineuse avec des verres
colors (p. 41).
APPAREIL d'clairage
43
en
obtenu
projetant l'image de la
L'clairage oplinuim
source lumineuse dans le plan de l'objet; pour la lumire du jour,
s'en assurer en amenant provisoirement dans le champ l'image
est
barreau de
d'un
la
fentre
cette
image
doit tre parfaitement
nette; pour rclairage artificiel, voir plus loin, 4^.
Je suppose le microCentrage du cne d'clairage.

ou
d'une
d'une
en
face
fentre
on peut
lampe
scope plac
chercher l'clairage optimum par ttonnements, en dplaant le
miroir pendant que l'il regarde par l'oculaire; on arrte les mouvements du miroir ds qn'on pense avoir obtenu un clairage
3
suffisant.
Voici une mthode beaucoup plus facile et plus sre

l'^ Prendre un
objectif faible n 2 ou 3 (aa ou A de Zeiss). Le
:
centrage de l'clairage est beaucoup plus facile avec

faible
qu'avec
un
un
objectif
objectif fort.
Retirer l'oculaire et regarder dans le tube du microscope,

du miroir. On voit trs nettement,
2*^
tout en faisant varier la position
une
petite distance de l'objectif,
une image de
la
source lumi-
neuse, fentre ou lampe. On dplace lentement le miroir, jusqu'

ce qu'on ait amen bien au centre l'image de la flamme ou celle
d'un carreau bien clair.
On remet
alors l'oculaire et on peut
observer.
3"
voici
Quand on emploie le condensateur et la lumire artificielle,

comment on peut procder le condensateur est remont au
:
maximum
et
le
se
fait
centrage
foculaire et on monte ou descend
oive de
comme
le
nouveau nettement l'image grossie de
manchon lumineux. On
On remet
la
flamme ou du
abaisse alors le condensateur, jusqu' ce
que l'image de la flamme disparaisse

uniformment clair. Si on passe un
le
ci-dessus.
tube, jusqu' ce qu'on aper-
condensateur autant qu'il
et
que
le
champ
objectif plus
est possible sans
fort,
soit
bien
on relve
nuire l'uniformit
d'clairage du champ. La rgle est de toujours tenir le condensateur aussi haut que possible.
Lumire
Cette
artificielle et lentille convergente.
mthode permet d'agrandir beaucoup la surface de la
source lumineu.-e et d'obtenir un clairage aussi bon que la
lumire naturelle. Prendre une lentille ou un ballon de verre
de 15 centimtres au moins de diamtre et rem})li d'eau. Colorer
l'eau avec un peu d'eau cleste ou placer un verre bleu dans le
porte-diaphragme. Disposer la lentille entre la source lumineuse
4
excellente
LE MICROSCOPE Et SES ACCESSOIRES
44
et le
microscope, 15 cenlimtres environ de chacun d'eux. On

du miroir plan (vrifier avec
arrive ainsi clairer toute la surface
un
petit carr de carton hlaiic qu'on pose sur le miroir).

Je conseille d'employer ce dispositif trs simple toutes les fois
qu'on
travaille la
lumire
artificielle.
lumire artificielle pour recherches trs

Nous avons dj mentionn
dlicates (mthode de Bolles Lee).
Bolles
Lee
mthode
de
la
pour l'clairage de prcision des
(p. 32)
Nous
allons
en rsumer les indications
cytologiques.
prparations
essentielles, car c'est certainement une des meilleures techniques
d'clairage, permettant d'obtenir une rsolution et une dfinition
5 clairage la
aussi parfaites
que
possible.
Il faut se servir d'une lampe ptrole mche plate, telle que celles
que nous avons dcrites (p. 33) et d'un condensateur achromatique et
aplantique aussi bien corrig que possible. Les becs de gaz manchon
g-enre Auer donnent une lumire excellente, mais l'image du treillis du
rendrait l'observation presque impossible. On doit s'efforcer

d'obtenir un cne lumineux bien centr, dont l'angle d'ouverture soit
le sommet de ce cne devra se
gal celui de l'objectif employ
trouver dans le plan de l'objet. Cet clairage, que Bolles Lee considre
manchon
comme
peut tre utilis qu'avec des prparations fixes et

de le modifier pour l'tude des objets non colors.
a) Placer la lampe 25 centimtres environ du microscope, en tournant le tranchant de la flamme du ct du miroir, car le plat de la
flamme ne donne pas une image assez brillante. Absorber les rayons
rouges par un cran color si cela est ncessaire (p. 33). Employer le
colores.
idal, 'ne
On
est oblig
miroir plan.
Mettre une prparation au

b) Centrage du cne lumineux.
point avec un objectif faible, puis, au moyen de la crmaillre du
condensateur, mettre au point ce dernier, de faon ce qu'on voie
l'image de la flamme aussi nette que celle de l'objet, et bien au milieu
du champ.
c)
Rglage du cne lumineux.
Prendre
l'objectif fort
qui doit
du cne d'clairage au moyen

du diaphragme-iris. Pour cela, enlever l'oculaire, regarder dans le tube
et fermer l'iris jusqu' ce que ses bords empitent lgrement sur le
petit cercle lumineux. On obtient ainsi un cne dont l'ouverture est
gale environ aux trois quarts de l'ouverture de l'objectif.
Toujours sans oculaire,
d) Mise au point du condensateur.
monter ou descendre lgrement le condensateur jusqu' ce que
l'image de la llamme soit bien nette, sans dformation et aussi grande
que possible.
e) Rglage de l'intensit de la lumire.
Uniquement avec
des verres colors qu'on place devant la flamme de la lampe, mais
servir l'observation et rgler la largeur
1. La condition essentielle est

que l'image de la source lumineuse couvre peu
prs tout le champ optique. Pour les condensateurs ordinaires, la mthode d'clairage de Bolles Lee ne peut donc tre mise en pratique qu'avec les objectifs forts.
APPAREIL D'CLAIRAGE
45
jamais en touchant au diaphragme, ni la crmaillre du condensateur. Il ne faut modifier l'ouverture du diaphragme que si on ne peut
obtenir autrement la nettet de l'image, mais le diaphragme ne doit
jamais servir modrer l'intensit de l'clairage. De mme, il ne faut
abaisser le condensateur que pour obtenir une vue d'ensemble de la
prparation, puis, pour l'tude des dtails, le remonter jusqu'au point
du maximum de nettet de l'image de la flamme.
6''
Emploi d'une lentille condensatrice devant la source
Cette lentille, fixe
lumineuse (Mthode de BoUes Lee).
lampe par un bras horizontal, le long duquel elle

doit
tre, autant que possible, un doublet bien corrig
peut glisser,
au point de vue de Taberration sphrique. Son emploi prsentera
1 Tirnage de la flamme est agrandie, donc le
deux avantages
champ clair est plus vaste; 2 Tangle d'ouverture du condensa-
demeure
la
teur est agrandi, car
il
faut
le
remonter pour mettre au point
Timage de la llamme.
la flamme de la lampe doit se
a) Mettre la lentille au point
trouver son foyer principal. Pour trouver ce foyer, mettre un
:
carton blanc la place
de
la
mche de
la
lampe
et
chercher
former sur ce carton l'image nette d'une source lumineuse loigne,

par exemple le soleil, en approchant et loignant la lentille. Une
place trouve, y fixer la lentille demeure avec
On obtiendra ainsi des rayons parallles.
b) Centrer la lentille par rapport la flamme,
le miroir pian.
c) N'employer que
fois la
pression.
la vis
de
CHAPITRE
IV
OBJECTIFS
L'objectif est un systme optique, form d'une ou plusieurs
lentilles, et, destin fournir une image relle de l'objet. Bien
les lentilles doivent former un systme centr, c'est--dire
que leurs axes optiques doivent concider exactement pour former
Taxe optique du systme. L'objectif est viss la partie infrieure
du tube, soit directement sur ce dernier, soit sur un revolver ou
entendu,
un cbangeur
L'image
coulisse tels
relle fournie
que ceux qui sont
par l'objectif
est
dcrits plus haut.
observe au
moyen de
du tube
elle est alors
agrandie et transforme en image virtuelle. La nettet de cette
dernire dpend donc essentiellement de la qualit de l'image
l'oculaire
plac
la
partie suprieure
relle projete par l'objectif.
Avant de dcrire les diffrents modles d'objectifs, il est indispensable

de dfinir certaines proprits des lentilles et des systmes de lentilles,
dont la connaissance prside h la construction des objectifs et permet
au micrographe d'en faire un emploi judicieux.
Nous avons tudi plus liaut la formation des images par les diffrentes sortes de lentilles; ces lois sont les mmes pour un systme centr,
complexe qu'il soit, que pour une seule lentille.
Notons en outre que, pour l'il humain, il existe une dislance minima
bien dtermine, laquelle il distingue nettement et sans effort de trs
petits objets, tels, par exemple, que les caractres imprims d'un livre.
C'est ce qu'on nomme distance de la vision normale
elle est en gnral
de 25 cm., mais elle est plus courte chez les myopes et plus longue chez
les hypermtropes. Pour percevoir nettement l'image fournie par une
lentille, il suflit de la regarder la distance de la vision normale. En
ralit les choses sont un peu plus compliques et une foule de conditions viennent influer sur la perception des images relles ou virtuelles,
par exemple l'angle d'ouverture de la lentille.
C'est l'angle que forment entre eux les rayons
Angle d'ouverture.
marginaux extrmes qui traversent la lentille. En d'autres termes,
si
OBJECTIFS
47
l'angle form par les rayons qui limitent le cne lumineux mis
par un point donn. On obtiendra donc l'angle d'ouverture en runissant par des lignes droites les bords de la lentille au point dont elle
doit former l'image.
c'est
L'angle d'ouverture est un facteur trs important pour la puissance

optique d'une lentille. Il est presque toujours modifi par la prsence
d'un diaphragme.
Modifications de l'angle douverture par le diaphragme.
Un
diaphragme est une plaque mtallique, perce d'une ouverture circulaire et place soit en arrire du systme de lentilles, soit entre les
groupes de lentilles. Le diaphragme sert liminer les rayons marginaux qui produisent les aberrations, il a aussi pour but de limiter le
champ, mais en mme temps il rduit l'angle d'ouverture. Pour con-
Influence du diaphragme sur l'angle d'ouverture d'une lentille.

dd\ diaphragme; /"/", foyers de la lentille; p, objet; p' image de l'objet; ee'
image virtuelle de l'ouverture du diaphragme (pupille d'entre;.
Original.
Fig. 28.
natre l'tendue de la modification apporte cet angle par un diaphragme, il suffit de construire l'image du diaphragme forme par la
lentille diaphragme. Comme le diaphragme est presque toujours situ
prs de la lentille et en dedans du foyer, cette image sera virtuelle et
agrandie.
Il
suffit,
pour avoir l'angle d'ouverture, de joindre
le
point
lumineux aux bords de l'image de l'ouverture du diaphragme.

Ainsi, dans la figure 28, soit dd' le diaphragme, / et/' les foyers de
la lentille
l'image virtuelle de l'ouverture du diaphragme sera en ee
et l'image du point p sera en p
L'angle d'ouverture de la lentille
:
sera epe
virtuelle de l'ouverture du diaphragme, fournie par la

systme de lentilles en arrire desquelles il est plac, ne
permet pas seulement de dterminer l'angle d'ouverture du systme,
elle joue encore un trs grand rle dans la thorie des instruments
d'opti([ue. C'est elle qu'Abbe a donn le nom d'EintritispupUie on pupille
Cette
lentille
image
ou
le
d'entre.
le diaphragme est plac entre les lments d'un systme de
l'image forme par les lentilles qui se trouvent en arrire de
ce diaphragme donne la mesure de l'angle d'ouverture du systme.
Lorsque
lentilles,
48
image qu'Abbe a donn le nom 'Austrittspupille ou pupille

d'mergence.
L'examen de la figure 28 montre que la grandeur de l'angle d'ouverture de la lentille dpend de Tloignement du point observer. Cet
angle est d'autant plus petit que le point est plus loign. Par contre,
la position de l'image du diaphragme n'est pas modilie. Cette image
peut donc servir dterminer l'angle d'ouverture pour un point quelconque situ sur l'axe optique ou en dehors de cet axe; elle permet aussi
de trouver l'image d'un point quelconque.
Modifications de l'angle douverture par la rfraction. Angle
limite. Rflexion totale.
L'angle que font entre eux les rayons
marginaux d'un cne lumineux est modifi par le passage de ce cne
d'un milieu donn un autre milieu, dont l'indice de rfraction est
diflerent, lorsque la surface de sparation des deux milieux est plane.
Il est possible
de calculer, par la trigonomtrie, l'angle d'ouverture
C'est cette
Fig. 29.
Rflexion totale et angle limite.
Original.
d'un faisceau lumineux pntrant dans un milieu donn quand on

connat l'angle d'ouverture du faisceau dans le premier milieu et l'indice
de rfraction des deux milieux.
Cette modification de l'angle d'ouverture est facile comprendre
d'aprs les notions lmentaires que nous avons exposes plus haut
(p. 2) sur la rfraction. Nous savons que lorsqu'un rayon lumineux
passe d'un milieu plus dense dans un milieu moins dense, par exemple
du verre dans l'air, le rayon rfract s'carte plus de la normale que
le rayon incident. Plus l'angle form par le rayon incident avec la normale est grand, plus le rayon rfract se rapproche de l'horizontale.
Il arrive un moment o ce rayon rfract devient parallle la surface
de sparation des deux milieux; le rayon incident forme alors, avec la
normale, un certain angle dont la valeur varie suivant l'indice de
rfraction du milieu. Au del de cet angle, dit angle limite, le rayon
rfract cesse d'tre horizontal et se trouve rflchi par la surface du
milieu le plus dense. Il ne peut donc passer dans le milieu moins
dense et a subi ce qu'on nomme la rflexion totale. L'angle limite est
d'autant plus grand que la difl^rence entre les indices de rfraction
des deux milieux est plus faible.
De ces donnes, nous pouvons conclure qu'un cne lumineux ne peut
passer compltement d'un milieu plus dense dans un milieu moins
dense, que si son angle d'ouverture ne dpasse pas l'angle limite pour
les milieux donns. En effet, tous les
rayons qui dpassent cet angle ne
49
OBJECTIFS
peuvent passer dans le milieu moins dense et subissent la rtlexion

totale au niveau de la surface du milieu le plus dense.
La figure 29 donne un exemple de ce phnomne. Soit p q*' q'^
l'angle d'ouverture d'un cne lumineux fourni par le point p situ dans
La moiti gauche de la figure reprsente le passage des
le verre.
rayons du verre dans l'air, la moiti droite du verre dans l'eau. L'angle
limite pour le verre et l'air est de 41, il est de 61 pour le verre et l'eau.
Aussi, voyons-nous le rayon q^^ subir la rtlexion totale en passant du
verre dans l'air, tandis que c'est seulement le rayon q'^ qui est rflchi
totalement au passage du verre dans l'eau.
La connaissance de l'angle limite a une trs grande importance pour
l'clairage du microscope. Nous y reviendrons en parlant des objectifs
immersion (p. 80). Nous pouvons cependant dire tout de suite que la
supriorit de ces objectifs sur les objectifs sec dcoule de ce qu'on
le passage des rayons lumineux du verre dans l'air, au sortir de
la prparation, et qu'on peut ainsi donner ces objectifs un angle
d'ouverture beaucoup plus grand que pour les objectifs sec.
vite
Ouverture numrique.
Pour dsigner Tangle d'ouverture
bon d'avoir une notation particulire qui soit

indpendante de la nature plus ou moins dense du milieu. Abbe
a propos pour cette notation une valeur laquelle il a donn le
des objectifs,
nom
il
est
d'ouverture numrique. Le calcul de cette valeur est bas

fait, que le produit du sinus du demi-angle d'ouverture du
sur ce
cne
lumineux, aprs rfraction, par l'indice de rfraction du
milieu, est constant pour un mme cne lumineux, quel que soit
le milieu travers. C'est ce
produit qu'Abbe a dsign sous le
nom
d'ouverture numrique, et qui est employ maintenant pour

indiquer Fangle d'ouverture d'un objectif. L'ouverture numrique
a d'un systme optique est dtermine par l'quation
a:=: nsin.u,
u tant le demi-angle d'ouverture pour un milieu d'indice n.

Dans le cas o l'objet se trouve dans l'air et o, par consquent
sin.u^ c'est--dire sera

??=:1, l'ouverture numrique sera a
au
sinus
du
d'ouverture.
gale
demi-angle
Nous reviendrons'plus
en tudiant
loin (p. 58) sur cette importante donne,

des objectifs. Mais nous pouvons dire ds
exprime trs bien leur puissance optique,
les qualits
maintenant qu'elle
puisque c'est de l'ouverture
qualits les plus essentielles.
un mme grossissement,
numrique que dpendent leurs

etlet la clart de l'image, pour
En
crot
comme
numrique. Le pouvoir rsolvant

M. liANGEROx.
et le
le
carr de l'ouverture
pouvoir dfinissant, dont

*
LK MICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES
50
l'importance est majeure, sont directement proportionnels

l'ouverture numrique. Par contre, la profondeur du foyer,
qu'on dsigne encore sous le nom de pouvoir pntrant, est
inversement
proportionnelle
cette
que ce dernier rapport
toutefois
n'est
grandeur.
vrai
Remarquons
que pour
les faibles
angles d'ouverture; avec de grands angles, le ])ouvoir pntrant

est en proportion inverse de la tangente du demi-angle d'ouverture.
Champ.
L'tendue du ctiamp d'un systme optique dpend, d'une
part du diamtre de l'ouverture des diaptiragmes qu'il renferme,

d'autre part de l'angle d'ouverture de l'il. En effet, l'il ne peroit
avec la mme intensit lumineuse qu'une partie de Vimage virtuelle
d'un objet fournie par une lentille; en dehors de ce cercle uniformment clair et dont l'intensit lumineuse est proportionnelle l'angle
d'ouverture de la lentille, l'clairement de l'image diminue progressi-
vement. Pour raliser un clairage uniforme et, par consquent, pour

limiter nettement le champ, il faut liminer par un diaphragme toute
la portion de l'image situe en dehors de la partie uniformment
claire.
outre le diaLorsqu'il s'agit d'une image relle, il en est de mme

rgler l'angle d'ouverture de la lentille, il faut
encore placer, dans le plan de l'image virtuelle, un diaphragme dit
de champ, destin liminer les parties marginales de l'image dans
:
phragme destin
diminue progressivement.
lesquelles l'clairage
Nous retrouverons
des oculaires
l'application de cette notion
quand nous parlerons
(p. 93).
C'est la distance qui spare la lentille

Distance frontale.
du couvre-objet de la prparation, lorsque
l'image est au point. Il est trs avantageux que pour un objectif
donn, cette distance frontale soit maxima. En effet, pour les
frontale de l'objectif
objectifs faibles, elle
microscope,
les
permet de pratiquer plus facilement, sous le

dilacrations. Pour les objectifs
dissections ou
puissants, elle facilite la mise au point,
profondeur
permet l'exploration en
prparations paisses, l'examen

goutte pendante et rend moins funestes les
d'paisseur des lamelles couvre-objet. Celle donne
de
coupes ou
de
d'organismes en
variations
ne doit pas tre confondue avec

elle
dpend
la
Les objectifs actuels possdent

compatible avec leur grossissement
Aberrations des lentilles.

que
les
dislanc focale
(p.
4),
dont
d'ailleurs.
images formes par
sont des points.
En
ralit,
la
frontale
ou
maxima
angle d'ouverture.
Nous avons suppos
les lentilles
il
distance
et leur
les
jusqu'ici
systmes de lentilles
n'en est rien, car toutes les lentilles
OBJECTIFS
51
et tous les syslmes de lentilles donnent des images plus ou moins

d 'fectueuses. Ces dfauls sont dus aux aberralions, c'est--dire
ringale rlVaclion que subissent les rayons lumineux, mis par
un
objet,
en traversant
les lentilles
ou
les
systmes de
lentilles.
Cette rfraction ingale influe sur les images de deux manires

diffrentes
d'une part les contours de Timage sont dpourvus de
:
nettet, parie
mme
les
que
d'autre
part,
colores dues
bords de
les
rayons rfracts ne se runissent pas en un

nomme aberration de sphricit;
ce qu'on
point, c'est
ce
que
l'image
les
lentilles
sont
entours
dcomposent
de
la
bandes
lumire
blanche, mais ne peuvent runir en un mme point les rayons

qui ont t spars et qui sont ingalement rfrangibles, c'est ce
qu'on nomme {aberration chromatique

Ces aberrations sont d'autant plus accentues que la courbure
des lentilles est plus forte. Pour y remdier on emploie diffrents
.
moyens, dont on combine gnralement l'action

1" On intercepte, au moyen de rliaphragmes,
naux qui sont

d'un emploi
les
rayons margiiMalheureusement ce procd est

cause de la grande perte de lumire qui en
les plus dvis.
trs limit
rsulte, surtout aux fortes amplifications.
En
effet la
luminosit
d'un systme de lentilles diminue proportionnellement au carr du

grossissement; on est donc oblig, pour les puissants objectifs,
d'utiliser autant
que possible toute l'ouverture de
la lentille,
ce
qui limite singulirement l'emploi des diaphragmes.

^
On remplace
les lentilles
systmes de deux ou plusieurs

ment une courbure moindre.
3"
On
simples de forte courbure par des

lentilles,
prsentant individuelle-
emploie des lentilles plan-convexes, dont l'aberration est

celle des lentilles biconvexes, surtout en ayant soin
moindre que
de diriger
la
face plane
du ct de
l'objet observer.
plus sur, s'il tait praticable, serait de remplacer les

par des lentilles tailles en hyperbole, en parabole
ou ea ellipse, suivant Ploignement de l'objet. Malheureusement la
taille de pareilles lentilles prsenterait trop de difficults. Le mieux est
donc de combiner les courbures des deux surfaces de la lentille de
manire rduire l'aberration au minimum. Pour les verres trs
rfringents, dont l'indice de rfraction dpasse 1,65, la meilleure forme
de lentille est la forme plan-convexe, mais il n'est pas indiffrent de
tourner vers l'objet l'une ou l'autre face de la lentille. Dans le cas de
l'objectif microscopique, o l'objet est trs rapproch du foyer de la
Le moyen
le
lentilles spliri(iues
lentille, celle-ci reoit
des rayons divergents; aussi l'aberration est-elle
52
au minimum lorsque la surface

rayons, c'est--dire vers l'objet.
rduite
On
manire
plane est tourne vers ces
runit des lentilles de pouvoir dispersif diffrent, de

ce que Faberralion de Tune corrige les dfauts de
l'autre.
La correction de l'aberration de sihricit

celle de l'aberration chromatique se
tisme,
tisme.
1
Aberration de sphricit.
nomme aplannomme achroma-
se
Elle consiste essentiellement
rayons, })artis d'un point situ sur l'axe optique, ne

se runissent pas de nouveau en un mme point, aprs avoir
en ce que
les
travers la lentille, mais viennent couper l'axe en des points plus

les uns des autres.
ou moins loigns
Prenons comme exemple une lentille biconvexe: si elle prsente une

courbure accentue, les rayons qui passent prs des bords sont plus
fortement rfracts que ceux qui passent au voisinage de Taxe, aussi
vont-ils couper l'axe en un point plus rapproch de ia lentille. Dans la
figure 30, nous voyons que les rayons pa et pa' sont rfracts plus fortement que les rayons pb et pb' et coupent l'axe en un point c plus
rapproch de la lentille que le point d o viennent se runir les rayons
pb et p'b'. Donc, au lieu d'avoir une image nette et punctiforme du
Cette figure montre la fois l'aberration de sphricit et la correction par dfaut. Les rayons marginaux aa et a'a' coupent l'axe plus prs de la
lentille que les rayons centraux hb et b'b'.
Original.
Fig. 30.
point p, nous obtiendrons une srie de cercles de dispersion, rpartis

entre les points c et d et dont le diamtre minimum se trouvera dans le
plan xy. C'est au niveau de ce plan que se formera l'image la plus
nette que puisse donner la lentille en question. Toutefois on ne peut
dire que ce plan soit rellement le plan de l'image puisque celle-ci se
trouve comprise en ralit dans une srie de plans situs entre les
points c et d. On voit donc qu'une telle lentille ne peut pas donner
d'images nettes. En effet il se produit, par suite de ces phnomnes,
plusieurs images places les unes derrire les autres. Comme elles sont
OBJECTIFS
53
de g-randeur diffrente, elles ne se recouvrent pas; il en rsulte que

l'image perue par l'il est courbe et indistincte sur les bords.
Nous avons
dit
que Taberratiou de sphricit

la courbure de la
forte;
mais
il
lentille est plus
un autre facteur qui
intervient
en gnral,
est,
d'aulant plus accentue que
est
l'indice
rfraction de la substance dont est forme la lentille.

focale
distance
d'une
lentille
En
de
effet la
dpend non seulement de son
rayon de courbure, mais encore de son indice de rfraction.

Donc, des lentilles de mme distance focale, mais construites en
verres diffrents, n'auront pas la mme aberration. Inversement,
Fig. 31.
pour une
focale.
l'indice
mme
que
les
Les rayons'marginaux aa et a'a' coupent

Original.
rayons centraux bb et bb'
Correction par excs.
l'axe plus loin
aberration, elles n'auront pas la mme dislance

de sphricit est d'autant plus faible que
L'aberration
de rfraction
est
focale. C'est cette proprit
plus lev pour une
qu'on
utilise
mme
longueur
pour corriger l'aberration
de sphricit, c'est--dire pour obtenir l'aplantisme.

Supposons qu'on runisse deux lentilles, l'une concave
l'autre convexe, dont les aberrations soient gales,
et
mais de sens
Pour que ce systme

suffit que l'lment
convexe,
convexe soit fait d'un verre plus dense, donc plus rfringent;
cet lment rfractera plus fortement les rayons lumineux que
l'lment concave et aura un foyer plus court. Dans ces conditions, le systme form_^ par ces deux lentilles fonctionnera comme
une lentille simple convergente et dpourvue d'aberration de
contraire, l'aplantisme se trouvera ralis.
fonctionne
comme une
lentille
il
sphricit.
Dans certaines
conditions, au lieu de rechercher un aplanlisme parfait, on ne corrige que partiellement l'aberration sphrique.
Deux
cas peuvent alors se prsenter
54
\'^
correctrice de la
L'action
lentille
concave peut tre assez
non seulement pour compenser Taberralion de la lentille

convexe, mais encore pour faire apparatre une aberration de sens
en
contraire. Un tel systme est dit corrig par excs (fig. 31)
elTet le point de convergence des rayons marginaux est plus loign
forte,
de
la lentille
2
(fig.
Dans
le point de conveigence des rayons centraux.

cas contraire, le" systme est dit corrig par dfaut
que
le
30), parce
que l'aberration de
la
lentille
convexe n'est pas
compltement corrige.
Jusqu'ici, nous n'avons considr que les points situs le long
de l'axe optique. Mais il ne suffit pas, pour obtenir de bonnes
images, de compenser l'aberration pour ces points; il faut encore,
autant que possible, supprimer Taberration pour tous les rayons
compris dans les limites de l'angle d'ouverture, quelle que soit
leur direction.
ment
On
tend ainsi raliser l'galit du grossissela condition essen-
pour tout le cbamp, ce qui est

tielle pour obtenir une image parfaite.
linaire
soit la perfection
Quelle que
des combinaisons de lentilles,
il
une correction absolument complte

au point de vue thorique. Tout ce qu'on peut arriver raliser,
c'est une compensation suffisante pour que les aberrations ne soient
n'est pas possible d'obtenir
plus sensibles l'il. En elel notre il est constitu de telle sorte,

qu'il peroit sous forme de points, les cercles dont le diamtre ne
dpasse pas certaines dimensions. Il suffit donc, pour obtenir des
images pratiquement nettes, sinon thoriquement, d'abaisser aule diamtre des cercles de dispersion pro-
dessous de cette limite
duits par les diverses aberrations.

Il faut
remarquer en outre que les combinaisons de lentilles,
employes pour remdier aux aberrations, ne donnent une image

nette que dans un plan dtermin et pour une distance dtermine de l'objet. Si celui-ci s'approche ou s'loigne, l'image se
forme dans un autre plan
ses dfauts apparaissent alors d'autant

accentus
plus
qu'elle s'loigne davantage du plan pour lequel a
:
maxima.
Aberration chromatique.
t ralise la correction
2*'
ou aberration de
sphricit,
L'aberration
rfrangibilit est due,
comme
chromatique
l'aberration de
une rfraction ingale des rayons lumineux.
JVlais
cette ingalit n'est pas produite uniquement par la courbure

de la lentille; elle est due la diffrence de rfrangibilit des difici,
frents rayons
du spectre suivant
leur longueur d'onde
plus
OBJECTIFS
55
cette dernire est courte, plus les rayons sont dvis. Les rayons
qui composent
la
lumire blanche sont donc ingalement rfracts,
que le foyer des rayons les plus rfrangibles et

courte longueur d'onde, qui sont les rayons violets, sera plus rapproch de la lentille que celui des rayons rouges qui sont les
moins rfrangibles et dont la longueur d'onde est la plus grande.
Les fovers des autres rayons sont rpartis entre ces deux fovers
c'est--dire
extrmes.
Il
forme par
en rsulte que l'image fournie par

la
la
lentille
est
superposition d'images lmentaires, en nombre
Cette figure, trs schmatise, montre la

Aberration chromatique.
dcomposition des rayons lumineux par la lentille et leur rfraction ingale.
En dedans du foyer, dans le plan ab. l'image a une bordure rouge; au del du
foyer, dans le plan a'b', elle a une bordure bleue. En outre ces images n"ont
Finr. 3-2.
pas la
mme
grandeur.
Original.
de l'image totale
gal celui des rayons du spectre. Les bords
seront donc indistincts et entours de franges colores; en dedans
du foyer l'image a une bordure rougetre, en dehors du foyer

elle prsente une bordure violette. Comme ces images lmentaires ne sont pas toutes de mme taille, ainsi que le montre la
figure 32,
elles
une image
ne se recouvrent pas compltement et forment

contours indistincts et colors. En somme la
totale
comme un prisme sur la lumire blanche, elle la

mais
ne peut en runir ensuite en un mme point les
dcompose,
lments constituants.
lentille
agit
Nous avons dit que l'aberration chromatique ne dpend pas seulement de la courbure de la lentille, mais encore de la nature du verre
56
En efTet, Taberration est d'autant plus accentue que le

pouvoir dispersif est plus grand, c'est--dire que les diffrences sont plus
grandes entre les indices de rfraction d'un verre donn pour les diffrents rayons du spectre. Mais il n'y a pas proprement parler de proportionnalit entre la rfringence et le pouvoir dispersif. Prenons en
effet comme exemple le crown-glass et le tlint-glass
la diffrence
entre les indices de rfraction pour les rayons rouges et violets est de
0,0204 pour le crown, 0,0434 pour le flint, ce qui donne pour ce dernier
un pouvoir dispersif plus de deux fois plus fort (jue celui du crown. Par
contre, la diffrence entre les indices de rfraction des deux verres pour
des rayons de mme couleur est beaucoup plus faible et ne dpasse
gure 0,1, ainsi qu'en tmoigne le tableau suivant
celte lentille.
(le
'
Indices de rfraction pour les rayons

(Rouge.)
(Orang.)
(Violet.)
Flint-glass
1,6277
1,6350
1,6711
Crown-glass
1,5243
1,5280
1,5447
Donc, de deux lentilles construites avec ces verres et possdant peu

mme longueur focale, celle de flint aura un pouvoir dispersif
beaucoup plus considrable que celle de crown. Inversement, pour un
mme pouvoir dispersif, la lentille de crown aura une longueur focale
beaucoup plus grande ({ue celle de flint.
prs la
Taberration chromatique, comme Taberralion de

deux lentilles, Tune convexe en crown,
combinant
en
sphricit,
Tautre concave en flint, calcules de telle sorte que l'aberration
Oii^ corrige
chromatique de
possible par
d'une
les propiits
dit
est
la
lentille
la lentille
convexe
soil
compense autant que
concave, tout en conservant Tensemble
lentille
convexe.
On
ralise ainsi
un systme
achromatique, c'est -dire dans lequel le spectre secondaire

supprim, au moins d'une faon approche. Ce mode de cor-
rection de Taberration chromatique a t dcouvert en 1757 par

un opticien de Londres, DoUond. C'est encore le procd qui est
employ aujourd'hui.
Pourtant cet achromatisme n'est jamais parfait. En ellet. le
mme pour
pouvoir dispersif du crown et du flint n'est pas le
toutes les longueurs d'onde, aussi un systme de lentilles pour
des silicates doubles de potassium et de calcium
pour le cristal.
de potassium et de plomb,
Le
riche en oxyde de plomb. C'est donc un verre dense et trs rfringent; il est
plus riche en plomb que le cristal ordinaire. Son pouvoir dispersif est trs grand.
Le crown-glass est, comme le verre de Bohme, un silicate de potassium et
de calcium, mais il est plus riche que ce dernier en potasse et en chaux, il est
1.
pour
On
sait
que
les verres sont
les verres ordinaires, de potassium et de plomb

flint-glass est un cristal, c'est--dire un silicate
moins rfringent
et
moins dispersif que
le flint.
OBJECTIFS
57
lequel on a obtenu la concidence exacte des rayons des deux

couleurs n'est-il pas du tout corrig pour les autres. De l rsulte
la production de ce ({u'on nomme le spectre secondaire, form
par les franges colores qui proviennent de la dviation ingale
des autres rayons.
bleue du spectre domine, l'image est entoure

et Tobjectif est dit corrig par excs; au
contraire, lorsque l'image prsente une aurole jauntre, Tobjectif
est dit corrig par dfaut. C'est cette dernire correction qui
Lorsque
la partie
d'une lueur bleutre
est toujours adopte.
Un autre obstacle l'acliromatisme parfait est l'angle d'incidence des

rayons. En effet la concidence complte des rayons de deux couleurs
ne peut tre ralise que pour une incidence donne, qu'elle soit obli(iue
ou normale; avec toute autre incidence on voit immdiatement apparatre, les franges colores, mme avec les systmes de lentilles les
mieux corrigs. C'est ce qu'Abbe a nomm diffrence chromatique de
Vaberration sphriqiie. 11 est facile de comprendre que ce dfaut sera
d'autant plus accentu que l'angle d'ouverture du systme sera plus
grand. Un moyen d'y obvier consiste raliser la correction non pour
les rayons centraux, mais pour les zones moyennes de la lentille. Remarquons d'ailleurs que ce dfaut tait beaucoup plus sensible avec les
anciens verres. Depuis l'emploi des verres spciaux d'ina ^ on arrive
bien plus facilement compenser ce genre d'aberration.
Enfin, une dernire condition de l'achromatisme est d'obtenir des
images d'gale grandeur pour toutes les couleurs du spectre. Il faut
donc compenser ce qu'on nomme diffrence chromatique du grossissement.
Grce aux verres actuels, tous ces dfauts d'achromatisme sont
devenus pratiquement ngligeables, aussi

tiques fournissent-ils d'excellentes
santes pour le travail courant.
Pourtant on
parfait
et
rayons
de
les objectifs
achroma-
images, parfaitement suffi-
cherch obtenir un achromatisme encore plus

mme point non plus seulement les
runir en un
deux couleurs, mais ceux de
trois
couleurs.
On
arrive ainsi supprimer presque compltement le spectre secondaire. Les objectifs ainsi construits sont dits apochromatiques^
Les verres gnralement employs en optique depuis une vingtaine d."anes
par Schott et C'^ d'ina prsentent deux ordres d'avantages 1*^ les
rapports entre la rfringence et la dispersion sont beaucoup plus varis, c'est
ainsi que certains crown peu dispersifs sont aussi rfringents que duHint;
'* les verres
prsentent une proportionnalit bien plus accentue de la dispersion pour les ditlrentes zones du spectre. Par suite de ces qualits, ils permettent de raliser un achromatisme beaucoup plus parfait. L'addition d'acide
phosphorique et borique en quantits dtermines est un des principaux facteurs
1.
et fabriqus
de ces amliorations.
58
nous
Nous verrons que, dans
tudierons plus loin (p. 76).
les
ces
systmes, on corrige aussi l'aberration de sphricit pour deux

couleurs diflerentes, ce qui fait disparatre la diiTrence chromatique
l'aberration sphrique. Malheureusement ces avantages ne
peuvent tre raliss, comme nous le verrons, que pour un car-
due
tement dtermin de
de l'image
l'objet et
dfauts reparaissent.
En de
et
au del
les
Nous avons dj indiqu (p. 49)

de
d'ouverture
et de l'ouverture numrique;
l'angle
rimportance
nous venons de voir la ncessit de la correction des aberrations
Qualits des objectifs.
pour la nettet des images.

La ralisation de ces deux qualits
grande ouverture numrique et correction des aberrations, donne aux objectifs les pro:
que nous devons exiger de ces

Pouvoir rsolvant ou sparateur,
prits
appareils
c'est--dire facult
de dis-
ce pouvoir
tinguer les plus fins dtails de structure des objets
dpend surtout de l'ouverture numrique et non du grossissement,
:
comme nous
le
verrons plus loin
Pouvoir dfinissant,
contours parfaitement nets

correclion des aberrations.
La
ralisation de ces
cope, qui est
(p. 63).
c'est--dire facult de fournir des

:
images
ce pouvoir dpend surtout de
deux qualits remplit
le
la
but du micros-
de nous montrer avec une nettet parfaite
les plus
de structure des objets.
On parle souvent aussi du pouvoir pntrant des objectifs
microscopiques, qualit qui est surtout recherche par les dbutants, et qui permet de voir simultanment et avec nettet plu-
fins dtails
sieurs plans d'un
qu'aux
mme
objectifs faibles;
objet. Cette qualit ne peut appartenir
comme
elle
dpend de
l'troitesse
de
l'angle d'ouverture, elle se trouve tre oppose au pouvoir rsolvant. En ralit le pouvoir pntrant n'a qu'une importance trs
secondaire, car
dans une
Nous
la
manuvre de
trs large
dirons
la vis
micromtrique
le
compense
mesure.
mme
avec Ranvier^ que
le
dfaut apparent de
plus prcieuse de l'objectif, puisqu'il permet non seulement d'tudier les contours, mais de connatre la situation relative des diffrentes parties d'un objet, de le
pntration est
la qualit
la
toucher, pour ainsi dire, l'aide de
1.
la vis
Trait technique d'histologie, 2 d., 3889, p. 24.
micromtrique
et
d'en
59
OBJECTIFS
la pense, une srie

apprcier l'paisseur . On tablit ainsi, par
de coupes optiques, dont la superposition donne une ide exacte
de la structure de l'objet.
pourtant un cas o la pntration est une qualit impor(fun objectif microscopique, c'est en microphotographie.
est
Il
tante
Dans ce
en
cas,
effet,
on ne peut y suppler, comme dans Tobserla facult d'accommodation et Tinsensibi-
valion oculaire, soit par

lit
de l'il aux petits dfauts des images,
incessante de
la vis
forts
la
manuvre
donc
un grand
par
micromtrique.
Le dfaut de pntration des

obstacle l'obtention de bonnes
ques aux
soit
grossissements et
objectifs
est
preuves microphotographiavec des prparations un peu
paisses.
Le pouvoir rsolvant et le pouvoir dfinissant dpendent encore

de conditions plus complexes que celles que nous venons d'indiquer. Aussi croyons-nous ncessaire d'entrer dans quelques
dtails sur le rle des phnomnes d'interfrence et de ditraction
dans
la
formation des images microscopiques.
Thorie de l'image secondaire d'aprs Abbe.

Rappelons en
quelques mots que les phnomnes lumineux sont expliqus par la
thorie des ondulations: la lumire est produite par un mouvement
vibratoire ou ondulatoire de rlher, perpendiculaire la direction de
propagation de la lumire. L'intensit de la lumire varie en raison
directe de l'amplitude des vibrations. Les couleurs difl'rentes des rayons
lumineux sont dues la vitesse
au
plus ou moins grande de ces vibrations
cette vitesse
parce qu'on appelle

d'onde,
par
la
est
mesure
la
longueur
qu'on dsigne
grecque a. Dans la
quantit
lettre
ligure 33, soit AB la direction suivant laquelle se propage le rayon

lumineux, ab reprsentera Tam-
plitude de la vibration et AB la
longueur d'onde, c'est--dire l'es-
Mouvement ondulatoire dun

p^^ 33
rayon lumineux se propageant dans la
direction AB.
ab, amplitude de la
vibration; AB, longueur d'onde (> du
Orujvml.
rayon lumineux.
pace correspondant la dure

d'une phase comprise entre les deux positions extrmes d'une molcule
d'ther, vibrant sous l'impulsion d'un rayon lumineux. La longueur
d'onde dpend non seulement de la couleur du rayon lumineux, mais
encore du milieu dans lequel se propage ce rayon.
Voici les principales longueurs d'onde, correspondant aux raies de
Frauenhofer et aux principales couleurs du spectre dans l'air l'unit
est le dix-millime de millimtre ou unit d'Angstrm qu'on dsigne
:
par
la lettre
A.
60
Raie
61
OBJECTIFS
Ce que nous venons de dire sur les phnomnes d'inDiffraction.

terfrence permet d"expii(|uer les phnomnes de dillraction; on nomme
ainsi les modifications qu'prouve dans sa marche un rayon lumineux
qui vient raser la surface d'un corps.
Supposons un faisceau lumineux monochromaticiue pntrant dans
une chambre noire, travers une lentille converg,ente court foyer.
Faisons raser par ce faisceau monochrome le bord d'un mince cran.
Recevons sur un autre cran Tombre ainsi produite. Celte ombre ne sera
pas l'ombre gomtrique exacte du premier cran, c'est--dire qu'il n'y
aura pas une ligne de dmarcation tranche entre la lumire et l'ombre.
Une faible lumire pntrera dans cette ombre; puis, en dehors, on
verra apparatre une srie de bandes ou franges, alternativement bril-
"A
Lb
Franges de diffraction produites

AA, paroi de la chambre
par un cran E.
noire par o pntre le rayon R; BB,
fond de la chambre noire sur lequel
s'talent les franges; O, zone d'ombre
Fig. 36.
pure.
Figf, '61.
Franges intrieures
extrieures
corps
trs
produites
mince CC.
par
et
un
Ori-
ginal.
Original.
lantes et sombres. Ce sont les franges de diffraction

un phnomne d'interfrence (fg. 36).
elles sont
dues
couleurs du spectre peuvent donner naissance ces franges,

sont d'autant plus troites que le rayon color est plus
rfrangible. En outre, si on fait pntrer dans la chambre noire un faisceau de lumire blanche, au lieu d'un faisceau monochrome, la lumire
sera dcompose par diffraction et on apercevra sur Je second cran des
franges irises. Les franges de chaque couleur seront spares cause
de leur ingalit et les spectres obtenus prsenteront le rouge en dehors
et le violet en dedans.
On obtient les mmes phnomnes en plaant, sur le trajet du rayon
lumineux, non plus un cran opaque, mais un corps trs troit, tel qu'un
cheveu. On observera alors des franges intrieures, places dans Fombre
du cheveu, et des franges extrieures en dehors de l'ombre (fig. 37,).
Toutes
mais
les
celles-ci
Cette thorie repose sur une distinction

fondamentale qu'tablit Abhe, entre Timage des corps lumineux
Thorie d'Abbe.
62
eux-mmes
mmes.
par
el
celle
des
corps
non
lumineux
Image des corps lumineux par eux-mmes.
par
En ce
eux-
qui
premiers, chacun de leurs points constitue un centre

d'branlement indpendant. Il en rsulte que seuls les rayons parlant d'un mme point produisent entre eux des phnomnes
d'interfrence. Au contraire, les ondes lumineuses qui parlent des
concerne
les
diffrents points de ces objets sont en

les unes vis--vis des autres, et leurs
vent interfrer entre
quelque sorte incohrentes

ondes lmentaires ne peu-
elles.
L'image d'un point lumineux fournie par une lentille sera donc
forme d'un point central trs lumineux, entour de cercles de
diffraction dont Tinlensit lumineuse dcrot trs rapidement.
L'tendue de ces cercles dpend de l'angle d'ouverture de la lentille et du diamtre du diaphragme. Gomme les longueurs d'onde
sont des fractions de millime de millimtre, avec
un diaphragme
de quelques millimtres de diamtre, l'image de diffraclion sera

si petite qu'elle donnera l'impression d'un point lumineux, o
ne pourra distinguer les cercles de diffraction.

s'agit d'un ohjet et non plus d'un i)oint, chaque point de
cet ohjet donnera lieu de mme une image entoure de cercles
l'il
S'il
de diffraclion excessivement petits. Nous savons que les ondes

lumineuses mises par chacun de ces points sont indpendantes et
ne peuvent interfrer entre elles. l*ar consquent, l'image de
chacun des points d'un objet se forme indpendamment, sans

que ces images lmentaires puissent influer les unes sur les
autres et donner naissance des phnomnes d'interfrence ou
de
diffraction.
Donc, d'aprs Abbe, dans le cas des corps lumineux par euxmmes, l'image se forme point pour point, suivant les lois de
l'optique gomtrique.
non lumineux par eux-mmes ou image

Ahbe nomme image ^êcondaire l'image des corps
non lumineux par eux-mmes. Ces corps, pour donner une
image, doivent tre clairs par une source lumineuse, mais ils
Image
des corps
secondaire.
agissent par absorption, rfraction et diffraction sur les rayons

fournis par cette source.
Les conditions de formation de l'image sont ici toutes diffChaque point de l'image de l'objet est form par la convergence de rayons provenant de tous les points de la source
rentes.
OBJECTIFS
63
lumineuse clairant Tobjet. Ces rayons sont indpendants Fun de

l'autre et ne peuvent, comme dans le cas prcdent, former une
image de diffraction d'un point de Tobjet. Au contraire, les rayons
qui proviennent des diffrents points de Tobjet microscopique
peuvent interfrer entre eux.
D'aprs la thorie d'Abbe l'objet agit sur les rayons parlant de
source lumineuse comme un rseau de diffraction^ et donne

d'abord de cette source une image de diffraction. De cette dernire
image partent des rayons, dont l'interfrence produit une image
Ja
de
l'objet.
donn
la
donc un phnomne secondaire, suborproduction de l'image de dilTraction, d'o le nom
Celle-ci est
d'image secondaire donn par Abbe. Cette image prsente des

dtails d'autant plus fins que l'image de diffraction pntre plus
compltement dans l'objectif. Nous pouvons dire ds maintenant
que
le
pouvoir rsolvant, ou pouvoir de rendre visibles les strucdpend en premier lieu de l'angle d'ouverture de
tures fines,
V objectif. Plus cet angle est grand, plus sera grande la portion
de l'image de diffraction, produite par la structure donne, qui
pntrera dans le microscope.
Au point de vue optique, un rseau est constitu par une srie d'espaces alternativement transparents et opaques, excessivement rapproclis les uns des autres et rg-ulirement distribus. 11 faut qu'il y ait
au moins 40 divisions par millimtre. La lumire, en traversant un tel
rseau, produit des phnomnes de diffraction caractriss par l'apparition de spectres trs purs qui prsentent un caractre particulier
en
effet le violet y est moins dvi que le rouge, aussi, ces spectres sont-ils
violets en dedans et rouges en dehors.
On peut se rendre compte d'une manire trs simple de ce qu'est un
rseau; il suffit pour cela de rapprocher les paupires de manire
entrecroiser les cils. Ces derniers forment alors un vritable rseau. Si,
dans ces conditions, on regarde la llamme d'une bougie ou d'une lampe,
on apercevra une lueur horizontale due aux rayons diffracts et on
pourra mme voir ds spectres assez nets. Un autre exemple de rseau
est fourni par le Pleiirosigma angiilatum (fig. 103), Diatome qui sert de
test-objet, dont nous aurons parler frquemment dans la suite. Si on
place une prparation de Pleurosigma entre l'il et une source lumineuse
en ayant soin de l'incliner convenablement, on voit apparatre successivement toutes les couleurs du spectre au fur et mesure qu'on loigne
oa qu'on rapproche l'il. Chacune de ces Diatomes couvertes de fines
stries fonctionne comme un rseau et fournit des spectres de diffraction.
Les irisations de la nacre et des plumes de certains Oiseaux sont dues
aussi des phnomnes de diffraction.
:
Images de
diffraction.
En
ce
qui concerne
le
micros-
cope, on peut tudier ces phnomnes d'une manire prcise en
64
se servant
titue par
de
ii
la
lame de
diffraclion d'Abbe. Cette
lame
est cons-
lamelles circulaires, dont une face est argente et
lixe sur une lame porte-objet. Dans la mince coucbe d'argent,

on a grav, au moyen d'un diamant et de la machine diviser,
des rseaux constitus par des systmes de lignes parallles. Dans
le rseau reprsent fig. 38, il y a deux systmes de ces lignes
au millimtre, Tautre en posparallles; Tun renferme 70 stries
sde
double, soit 140. Ce rseau est bien conforme la dfique nous avons donne plus haut il est form d'espaces
le
nition
38.
Reprsentation simplirie
de la lamelle centrale de la lame de
diffraction d'Abbe.
Oriyinal.
Fig.
Image de diffraction produite

par les stries parallles de la lame
de diffraction d'Abbe.
Original.
Fig. 39.
alternativement transparents et opaques, les premiers constituant

des fentes trs troites. Si on regarde une bougie travers ce
rseau, on aperoit des franges de diffraction. Pour observer au
microscope les phnomnes de diffraction produits par cette lame,

on emploie un objectif trs faible, tel que leâa ou le A de Zeiss
(donnant un grossissement de 30 diam. environ). On a soin de
choisir
un
fort clairage et
de donner au diaphragme une faible
On met
au point, comme d'habitude, avec Foculaire,

En
puis on enlve ce dernier et on regarde dans le tube (tig. 39).
examinant la partie du rseau renfermant 70 stries au milhmtre,
on aperoit au centre du champ une image blanche et circulaire
ouverture.
reprsentant l'ouverture du diaphragme. Cette image est lorme

se trouvent
par les rayons centraux non diffracts. De cliaque ct
images irises disposes perpendiculairement aux lignes du

Ces images sont des spectres trs purs, dans lesquels le rouge
test.
OBJECTIFS
65
en dehors d'aprs ce que nous avons dit plus haut, elles

prsentent tous les caractres des images par des rayons dilracts.
Si on examine de la mme faon la partie du rseau renfermant
est plac
140
stries
diffraction
au millimtre, on ne verra plus que deux spectres de

de
chaque
ct de l'image centrale
du diaphragme. Ce rseau, qui possde deux

fois
plus de lignes, donne
moins de spec-
deux
fois
tres
de diffraction
la
distance qui spare ces

spectres est en raison in-
verse de
spare
seau.
la
les
distance qui
lignes
du
r-
exprience nous
nettement la
production de l'image de
diffraction de la source luCette
montre
^'
Image de diffraction produite par le

Pleurosigma an/ulatum.
/rf, faisceau direct:
r. partie rouge des spectres
i', partie violace
de diffraction.
Oriyinal.
Fig. 40.
trs
mineuse par une structure

fine. A dfaut de la lame de
diffraction d'Abbe, on peut
tudier l'image de diffraction Taide du Pleurosigma
angiilatam
On met
(fig. 103).
au point une de ces Diatomes avec un fort objectif

sec ou avec un ob.jeclif
immersion, puis on enlve
l'ocu laire e t on regarde dans
le tube. En refilant convenablement l'ouverture du
diaphragme, on voit au
centre du
champ une image
blanche
circulaire
et,
Fig 41.
Reprsentation schmatique du faisceau direct {dd) et des faisceaux diffracts
(r, r, produits par le Pleurosigma angulatum.
Original.
priphrie du champ,
6 spectres de dilfraction dont les couleurs sont d'autant plus nettes que
l'ouverture du diaphragme est plus petite (lig. 40). Bien entendu ces
spectres sont rouges la priphrie. Les trois systmes de stries du
Pleurosigma agissent comme un rseau de diffraction; ces trois systmes,
en se coupant, donnent des figures hexagonales qui se traduisent par
la
6 spectres,
correspondant deux par deux aux
Images secondaires.
cope, est produite, d'aprs

M. L.\NGEROx.
la
trois
systmes de
L'image de Tobjet, dans

thorie
le
stries.
micros-
dWbbe, par Tinterfrence des
LE MICROSCOPE ET SES ACCESSOIIIES
66
rayons mis
par les spectres de diffraction que
Le calcul permet
nous venons
que, pour obtenir une

image exactement semblable l'objet, il faut que Tobjeclif puisse
embrasser la totalit de l'image de diffraction produite par cet
objet. Par contre, on ne percevra aucun dtail d'une structure
d'tudier.
d'tablir
ne pntre pas dans l'objectif au moins un spectre de diffracen plus de l'image blancbe directe de la source lumineuse.
s'il
tion
Reprenons l'exemple du Pleurosigma an g ula tiim ei examinons

41 qui schmatise le parcours des rayons diffracts. Le
la figure
faisceau
dd reprsente
les
centrale de la figure 40.
rayons directs, formant l'image blanche

se trouve un faisceau dif-
De chaque ct
les rayons violets v sont les moins d\is,

rayons rouges r se trouvent la priphrie. Un
objectif dont l'ouverture serait trop petite pour admettre d'autres
rayons que ceux du faisceau central ne montrerait aucun dtail de
fract,
tandis
dans lequel
que
les
structure. D'autre part, l'angle que les faisceaux dilTracts forment avec l'axe optique est d'autant plus ouvert que la structure
par consquent l'objectif devra avoir une ouverture

d'autant
plus grande pour rsoudre cette structure. Il
numrique
faut en outre que le cne clairant soit assez large pour que les
est plus fine
spectres de difraclion soient entirement compris dans le champ

c'est alors que l'image aura son maximum de nettet et de clart.
:
Un cne plus large ne fera que rendre l'image indistincte en faisant pntrer dans l'objectif des rayons autres que ceux qui prol'objet. Nous trouvons ici une nouvelle preuve de l'utidu diaphragme-iris qui permet de rduire le cne d'clairage
viennent de
lit
aux dimensions ncessaires
(p. 40).
dmontrent plus facilement au moyen des rseaux

de la plaque de diffraction d'Abbe et des diaphragmes particuliers
qui l'accompagnent. On visse entre l'objectif et le tube un anneau
spcial possdant une ouverture latrale qui permet d'introduire
Ces
lois se
diaphragmes spciaux et de les placer exactement dans le plan

de l'image de diffraction fournie par l'objectif aa de Zeiss. Cet
anneau est tournant et permet par consquent de faire tourner
les
les
diaphragmes dans un plan horizontal.
Examiner comme prcdemment la lamelle centrale

r^ exprience.
la plaque de diffraction. Insrer dans l'anneau un diaphragme en
forme de fente troite qui ne laisse passer que l'image blanche directe
de la source lumineuse. Orienter les bords du diaphragme paralllement
de
OBJECTIFS
67
aux lig-nes du rseau. L'oculaire tant enlev, on ne voit que les faisceaux centraux blancs, sans aucune trace de rayon diffract. L'oculaire
tant replac, Timaie du rseau apparat comme une surface claire, sans
qu'aucune ligne soit visible. Pour faire apparatre ces lignes, il faut
la
Premire exprience avec

lame de dirt'raction d'Abbe. Sans
Fig. 42.
oculaire.
Original.
la
Premire exprience avec

lame de diffraction d'Abbe. Avec
Fig. 43.
oculaire.
Original.
diaphragme perpendiculairement aux lignes du rseau, car

on admet ainsi les rayons diiracts.
2^ exprience.
Prendre un diaphragme form d'une fente plus large,
orienter le
la
Deuxime exprience avec

lame de diffraction d'Abbe. Sans
Fig. 44.
oculaire.
Original.
Fig. 45.
la
Deuxime exprience avec

diffraction d'Abbe. Avec
lame de
oculaire.
Original.
permettant d'admettre, entre les faisceaux centraux, les deux premiers

spectres de diffraction, correspondant au rseau de 70 stries au millimtre. On verra alors ces stries, mais la zone correspondant au rseau
68
de 140 Stries restera uniformment brillante puisque aucun des faisceaux

de diffraction qui leur correspondent n'a t admis. En faisant tourner
le diaptiragme et en l'orientant perpendiculairement aux lignes du
rseau, on admet d'autres rayons dilfracts et on voit apparatre les
deux rseaux.
Ces deux premires expriences dmontrent de
la faon la plus
des
de
plus en plus
employant
diaphragmes spciaux
troits, qui diminuent l'angle d'ouverture de l'objectif, on diminue
en mme temps le pouvoir rsolvant du microscope. Cette dimi-
nette qu'en
nution est due

rsolvant disparait
la
si
su4)pression des rayons diJTracts. Le pouvoir

on n'admet pas au moins deux faisceaux dif-
Donc, ainsi que nous le disions plus haut, le pouvoir

rsolvant dpend en premier lieu de l'angle d'ouverture de l'obfracts.
jectif.
5* exprience.
Prendre le diaphragme trois fentes rectangulaires,
et l'orienter comme plus haut, paralllement au rseau. La fente cen-
trale laisse passer l'image directe de la source lumineuse. Les fentes

latrales laissent passer le premier spectre du rseau le plus fin (140)
69
OBJECTIFS
netlel de
prendrait pour la reprsentation d'une structure relle. Cette apparence est d'ailleurs conforme la thorie et poucette imaize et la
prvue d'aprs les deux premires expriences.

Pour s'assurer de l'origine de cette image fictive, il suffit de faire
tourner l'anneau et d'orienter le diaphragme perpendiculairement aux
stries du rseau. On voit alors apparatre une image conforme la ravait tre
lit
des choses.
W- exprience.
Employer encore un diaphragme
trois fentes rec-
4 spectre du
tangulaires, mais disposes de manire laisser passer le
deux
gros rseau et le 2^ speclre du rseau fin, on verra alors apparatre
fois plus de lignes que dans l'exprience prcdente, c'est--dire que le
Quatrime exprience avec

lame de diffraction d'Abbe. Sans
Fig. 48.
la
oculaire.
rseau
fin
la
Quatrime exprience avec

lame de diffraction d'Abbe. Avec
Fig. 40
oculaire.
Ot-irjinal.
paratra doubl et
le
Oriijinal.
gros rseau quadrupl,
un champ uniformment couvert de
le tout
donnant
fines stries.
Ces deux dernires expriences nous montrent donc l'apparition

de stries
fictives, tandis
que
les
deux premires
faisaient disparatre
des stries relles. Ces deux sries s'accordent pour vrifier l'exactitude de la thorie des images de diffraction d'Abbe. La seconde
srie doit mettre
d'optique dont
micrographes en garde contre les illusions

peuvent tre victimes.
des expriences analogues avec les rseaux qui se
les
ils
On peut faire
trouvent tracs sur les deux autres lamelles de
tion.
Ces rseaux sont des rseaux
losangiques,
l'autre de
mailles
la
croiss, l'un
rectangulaires.
lame de
diffrac-
form de mailles
Au moyen
de
diaphragmes convenablement choisis, on peut faire disparatre

l'un ou l'autre des systmes de stries, modifier la forme des
mailles du rseau ou mme faire ajparaitre des stries entirement
fictives.
70
La conclusion gnrale de ton les ces expriences est que les

rayons centraux sont incapables de fournir seuls une image exacte
des structures fines. Les rayons diflracts sont absolument indispensables pour la rsolution de ces structures. Plus l'objectif
admettra de rayons diffracts, plus la structure fine en question
sera reprsente fidlement.
Des
objets dont la structure est identique peuvent donner des

images di-^semblables si on ne recueille pas le i>lus grand nombre
possible de rayons diffracts. Par contre des objets de structure

trs diffrente pourront donner des images semblables, si on ne
pas intervenir tous les rayons diffracts dans la formation de

l'image, comme le montrent bien les expriences 3 et 4.
fait
Ces considrations montrent Timporlance capitale de la thorie

et Tinterprtation des structures fines.
d'Abbe pourTtude
Il
n'en est pas de
mme
c'est--dire dpassant de
pour
les objets
beaucoup
d'onde des rayons lumineux (voir
les
p.
relativement volumineux,
dimensions de
60
la
longueur
de ces longueurs
suffisent former
la table
Dans ce cas, les rayons centraux

l'image qui est constitue suivant les lois de l'optique gomtrique. Un bon exemple de ces objets nous est fourni par les
chambres humides gradues qui servent la numration des glo-
d'onde).
bules sanguins. Le volumineux rseau qui y est trac forme une

image microscopique sans intervention des rayons diffracts. Si on
prend une structure un peu plus fine, les rayons diffracts seront
nombreux et localiss dans un troit espace autour du faisceau

un objectif de faible ouverture pourra les recevoir tous et
central
fournir une image exacte. Enfin, pour une structure trs fine, les
rayons diffracts seront moins nombreux et plus loigns les uns
:
des autres (voir p. 63 l'tude de la formation des images de difil

faudra donc que l'objectif ait un grand angle
fraction)
d'ouverture, de manire recueillir le plus possible de ces rayons
;
diffracts.
Nous n'avons
les lois
tudi jusqu'ici que des rseaux rguliers, mais

d'tablir s'appliquent aussi bien aux struc-
que nous venons
tures irrgulires, quelles qu'elles soient.
Il
peut tre difficile d'tades images ll'tendue
de
la
et
tels
pour
disposition
objets,
mentaires de ditraction; mais il subsiste toujours, comme rgle
gnrale, que le faisceau de diffraction doit faire, avec le fais-
blir,
ceau direct, un angle d'autant plus grand que la structure est

plus fine. Ces structures irrgulires ne peuvent tre rsolues.
OBJECTIFS
71
c'est--dire perues dans l'image fournie par un objectif, que si ce

dernier reoit au moins le premier des spectres de diffraction fourni
par la structure observe.
Nous sommes donc amens
noncer
une
fois
de plus
cette loi
pouvoir rsolvant d'un systme de lentilles

dpend surtout de son angle d'ouverture.
Avant la publication des travaux d'Abbe on connaissait dj
fondamentale
le
empiriquement Timportance de Tangle d'ouverture, mais on n'arrivait pas comprendre pourquoi, dans certains cas, il fallait, pour
obtenir des images plus parfaites, employer des cnes lumineux
relativement troits.
Il
semblait que, dans ce cas,
lement de l'ouverture de
une
l'objectif tait susceptible
partie seu-
de fonctionner
Ce fait paraissait en complet dsaccord avec la ncesd'un grand angle d'ouverture pour obtenir une bonne rsolution. On sait maintenant que les faisceaux de diffraction tombent
utilement.
sit
prcisment dans celte portion de l'ouverture de l'objectif dite

espace obscur (p. 37), qui n'est pas claire directement. Or ce
sont ces faisceaux de ditTraction qui jouent un rle capital dans
la
formation de l'image microscopique des structures fines. La
thorie d'Abbe explique parfaitement cette apparente anomalie.

Maintenant que nous connaissons la vritable nature du pouvoir
rsolvant, nous pouvons
comprendre sans peine que
cette qualit
indpendante du grossissement. 11 est facile de prouver exprimentalement qu'un objectif donnant un grossissement considrable
peut rsoudre moinsbienles fines stries qu'un autre objectif de grosest
sissement plus faible, mais d'une meilleure rsolution. Par exemple
avec un
bon objectif donnant 300 diamtres, on pourra mieux

distinguer une fine structure qu'avec un mauvais objectif donnant
600 diamtres. La grandeur de l'image fournie par un microscope
ne
donne donc pas
la
optiques.
mesure de
la
valeur des
combinaisons
Limites de la rsolution.
La thorie de l'image secondaire
nous amne rechercher quelle peut tre la limite du pouvoir
rsolvant, c'est--dire
la
Umite extrme au del de laquelle on ne
peut plus percevoir Tcartement de deux lignes.

Prenons le cas le plus simple, qui est celui de stries parallles. On
peut calculer la valeur du sinus de l'angle que forment les faisceaux
dilracts avec le faisceau direct. Cette valeur est gale au rapport
qui existe entre la longueur d'onde des rayons lumineux et Fcar-
tement des
stries.
On
peut donc, pour une longueur d'onde donne,
LE MlCKOSCOPh: ET SES ACCESSOIUES
72
calculer les diffrentes valeurs de l'angle pour les diverses dislances
qui sparent les raies.

Nigeli et
Schwendener ont
moyenne de 0,5
[jl
table
est
celte
qui
suivre.
CARTEMENT EN
DES STRIES A RSOUDRE
[i.
tabli
pour une longueur d'onde
valeur de cet angle. Nous reproduisons

ncessaire l'intelligence de ce qui va
la
OBJECTIFS
73
C'est ainsi ([ue la photographie permet d'employer les rayons ultraviolets, dont la longueur d'onde est de 2.750 A, et d'obtenir des dtails
que l'il ne peut percevoir avec ies rayons de g-rande longueur d'onde
auxquels il est seulement sensible (mthode de Khler i). On peut arriver
ainsi abaisser la litnile de rsolution de
5
4. lltons-nous
de dire que ce procd est plus thorique que pratique et qu'il n'est pas
sans prsenter de grandes difficults, sur lesquelles nous reviendrons
plus loin (p. 79). Mentionnons ds maintenant la ncessit de se servir
uniquement de lentilles, de lames et de lamelles en quartz, car le verre
ne laisse pas passer les rayons ultra-violets. La source lumineuse doit
tre une tincelle lectrique jaillissant entre des lectrodes de cadmium
ou de magnsium ou une lampe vapeur de mercure en quartz. La
mise au point se fait l'aide de verres fluorescents, qui rendent visibles
les ravons ultra-violets.
En outre, on ne peut employer qu'une zone dtermine du spectre
ultra-violet, car, au-dessous d'une longueur d'onde de 2.000 A, les rayons
ne peuveni traverser l'air.
[jl,
\j.,
11
y a un moyen beaucoup plus simple de diminuer la longueur
d'onde des rayons lumineux. Il consiste les faire passer, avant
leur entre dans Tobjectif, non dans Pair, mais dans un milieu plus
rfringent. Ce procd est ralis dans les objectifs immersion

dont nous aurons parler plus longuement. On sait que la longueur d'onde et la vitesse de translation des rayons lumineux sont
inversement proportionnelles Tindice de rfraction du milieu

travers. L'indice de rfraction de l'air tant gal Tunit, si, par
exemple, l'indice de rfraction du liquide d'immersion est 1,5, la
longueur d'onde des rayons qui traverseront ce liquide sera raccourcie de deux tiers. Pour des stries distantes de
u, 5 il suffira
d'un angle de 42 pour que le premier faisceau de dilraction
pntre dans l'objectif. En employant comme liquide d'inmiersion
monobromure de naphtaline, dont lindice de rfraction est trs

lev (i,H6), et en clairant la prparation avec des rayons de
4000 A (Ou., 40) de longueur d'onde, l'extrme limite de rsolution
le
sera abaisse t-Vt
'J-?
24.
On
'
pourra donc, dans ces condi'
1,DD
lions, arriver distinguer des stries distantes de
Emploi
Un bon moyen d'augmenter
d'artifices d'clairage.
a, 24.
a) clairage oblique.
puissance de rsolution des
objectifs est d'employer l'clairage oblique. Si, au moyen de la
crmaillre reprsente fig. 26, on dplace latralement le porte-
diaphragme de
1.
Zeitschrift.
f.
l'appareil
iciss.
la
d'clairage,
on peut arriver
Mikroskopie, XXI. p. 129-165, 273-304, 1904.
rgler
74
que le faisceau lumineux direct qui traverse Tobjel soit tangent au diaphragme de robjeclif aprs rfraction parla lentille. Dans ces conditions, il pntre encore dans le
microscope, et sous le mme angle, un faisceau de diffraction.
l'clairage de telle sorte
L'angle que forment entre eux la faisceau direct et le faisceau

diffract est double de ce qu'il serait avec Tclairage central.
La diffrence fondamentale entre l'clairage central et l'clairage

est donc la suivante. Avec l'clairage central, l'image
oblique
blanche du faisceau direct se trouve au milieu de l'image de diffraction et est entoure des
deux
de
cts
diffraction.
l'clairage
Au
spectres de
contraire, avec
oblique,
l'image
blanche du faisceau direct se

trouve
au
bord
du champ
spectres de diffraction qui se trouvent sur
visuel;
les
un des
cts
s'tendre sur
Fig. 50.
Aspect des spectres de diffraction fournis par le Pleurosigma angulatum
en lumirre oblique; d, faisceau direct.
fois plus grand. L'clairage

oblique double donc le pouvoir rsolvant d'un objectif.
Original.
peuvent donc
un espace deux
Il
est
d'observer
facile
phnomnes
soit
avec
de diffraction d'Abbe,
ces
la
lame
soit
avec
une prparation de Pleurosigma angulatum. On met au point comme

avec l'clairage central, puis on enlve l'oculaire, on
regarde dans le tube et on fait jouer la crmaillre de l'clairage
oblique. En faisant tourner le porte-diaphragme autour de son axe,
on voit se dplacer le spectre trs pur et trs complet que donne
l'clairage oblique. Pour une tude plus approfondie de l'inlluence de
l'clairage oblique sur le pouvoir rsolvant, un des meilleurs objets est
le Pleurosigma balticum, dont les stries transversales et longitudinales
sont relativement fortes. On choisit un objectif dont l'ouverture numd'habitude,
rique soit assez grande pour qu'avec l'clairage central le premier faisceau de diffraction tombe en dehors du champ, mais pour qu'il apparaisse
ds qu'on passe Tclairage oblique. On commence par retirer l'oculaire pour se rendre compte de l'apparition et de la disparition de l'image
de diffraction, suivant que l'clairage est oblique ou central. Ensuite on
on remet l'oculaire et, en regardant la prparation, on ne distingue aucun des deux systmes de stries. Si, maintenant, on dplace le cne lumineux, dans une direction perpendiculaire
aux stries longitudinales, de faon ce que le premier faisceau de diffraction pntre dans l'objectif, on voit immdiatement apparatre les
rtablit l'clairage central,
7o
OBJECTIFS
stries
longitudinales. Tournons maintenant
nous verrons disparatre
le
porte-diaphragme de
90,
les stries longitudinales et apparatre les stries
transversales. Ramenons le porte-diaphragme dans une position

moyenne, de faon permettre aux faisceaux de dilraction produits par
les deux systmes de stries de pntrer dans l'objectif, nous verrons
apparatre en mme temps ces deux structures.
b)
L'clairage central obtenu avec un

clairage central.
cne lumineux permet, avec des objectifs bien corrigs,
trs large
de rsoudre certains dtails de structure qui, avec un cne lumitroit, ne seraient visibles qu'en lumire oblique. En effet,
neux
dans
le
cas d'un cne trs large, les rayons
peuvent pntrer dans robjectif

image de la structure tudie.
et
marginaux
diffracts
produire par interfrence une
On peut donc, en employant un

cne lumineux qui remplit compltement l'ouverture de l'obla mme puissance de rsolution qu'avec l'clairage
jectif, obtenir
oblique.
Quelle sera l'extrme limite de rsolution qui pourra tre

au moyen de ces artifices d'clairage? Nous avons vu
qu'avec l'clairage central, l'immersion au monobromure de
atteinte
naphtaline
et la
stries distantes
lumire violette on pouvait arriver rsoudre des

de
u, 24.
Avec
l'clairage oblique, cette limite
u., 12. Ce chiffre est d'ailleurs tout thopourra tre porte

ne
tre
atteint dans les conditions ordinaires.
et
saurait
rique
D'ailleurs l'emploi d'un clairage avec des rayons de faible lon-
gueur d'onde prsente de grandes difficults pratiques.

1 11 est vident, d'aprs cette tude
Conclusions pratiques.
sommaire des phnomnes de ditraction, que les objectifs
grande ouverture numrique sont indispensables pour la rsolution

des fins dtails. Ils sont donc ncessaires non seulement pour
l'tude des Diatomes, mais encore, et surtout, pour les travaux de
protistologie et de cytologie, car ce genre de recherches eAige
le
m.aximum de rsolution
-et
de dfinition. C'est dans ces condi-
apochromats pourront rendre de rels services, en

de
voir nettement des dtails que les objectifs ordipermettant
naires feraient seulement souponner. C'est aussi dans ces cas
tions
que
les
particuliers qu'il y a intrt pousser la rsolution ses dernires

limites.
2*^ Pour le travail courant, au cours
duquel il n'est pas question
de rsoudre les plus fins dtails de structure, mais plutt de/econnalre leur forme, des lments histologiques ou des tres de trs
76
pelile
dimension,
En
ncessaires.
grandes ouvertures numriques ne sont pas
les
elTet,
un grossissement
les
faible,
fins dtails
fournis par l'objectif ne seraient pas perceptibles -lVil.
11
faut
donc rechercher plutt les objectifs grande longueur focale,

champ trs tendu et dous d'un certain pouvoir de |>nl ration,
permettant d'tudier des coupes ou des objets un peu pais. De
bons objectifs achromatiques, tels que ceux qu'on fabrique
l'heure actuelle, sont parfaitement suffisants pour ce genre de
recherches.
3
dfaut de la lame de diffraction d'Abbe,
le
IHeurosigma
de se procurer dans toutes les maisons de microscopes, fournit un moyen trs simple de contrler le
pouvoir rsolvant des objectifs puissants. Ce test devra montrer,
en enlevant l'oculaire aprs la mise au point, six spectres de difqu'il est trs facile
angulatum,
fraction correspondant
la
figure 40.
aux
Mme
trois
si
systmes de
comme
stries,
l'in-
est insuffisant ])Our
le
dique
grossissement
bien distinguer les stries, la prsence de six spectres et la rgularit de leur disposition permettront de conclure la qualit de
l'objectif.
CLASSIFICATION DES OBJECTIFS

Il
y a trois catgories d'objectifs microscopiques
les objectifs
apochromatiques et les objectifs

monochromatiques. Dans chacune de ces catgories, on distingue
encore deux groupes lesobjeclifs sec et les objectifs immersion.
achromaliques,
les
objectifs
Objectifs achromatiques et
apochromatiques. Comme
nous l'avons dj dit plus haut (p. 57), ces deux catgories d'objectifs ne diffrent que par une correction plus ou moins parfaite des
aberrations de
sphricit
cette correction est
et
de rfrangibilit. Nous savons que
obtenue au moyen de
lentilles
composes,
for-
mes de verres spciaux, possdant des pouvoirs rfringent et dispersif appropris. On arrive ainsi diminuer dans une large mesure
systmes de lentilles.
Malheureusement, ces deux ordres de correction ont une tendance
s'annuler rciproquement. Aussi est-on oblig de sacrifier un peu
l'aberration de sphricit dont les inconvnients sont moins grands
les aberrations des
si le
champ
est
par l'emploi de
chromatique
un peu trop courbe, on peut toujours y remdier

la
nuit
micromirique. Au contraire, l'aberration

beaucoup au pouvoir dfinissant, par la zone
vis
77
OBJECTIFS
irise
donc
ou spectre secondaire dont

elle
Dans
entoure
elle
les
images.
C'est
surtout qu'on s'attache corriger.
les
achromatu/ues^
objectifs
correction du spectre
la
secondaire est ralise en runissant en un
mme
point deux rayons

de couleur diffrente, choisis autant que possible dans la partie du
spectre qui renferme le plus de rayons lumineux, c'est--dire entre
D (jaune) et F (vert-bleu). De plus cette correction s'tend

difficilement toute la surface de la lentille; elle n'est gnrale-
les raies
ment
ralise que pour une seule zone de l'objectif. L'aberration

de sphricit n'est corrige que pour une seule couleur. L'emploi
des verres nouveaux (phospho et borosilicales) permet pourtant de
fabriquer ces objectifs dans des conditions de perfection qui les

rendent pratiquement gaux aux apochromatiques. Certains constructeurs y font entrer des lentilles en fluorine qui en augmentent
encore
les qualits
d'achromatisme.
Dans les objectifs apochromatiques on arrive faire converger,

en un mme point de Taxe, trois rayons de couleurs dilrenles et
,
cette correction de l'aberration
chromatique
est
uniforme pour toutes
zones de l'objectif. Ces systmes ralisent donc un achromatisme

d'ordre suprieur. En outre, l'aberration de sphricit est corrige
les
pour
deux rayons de couleur
diffrente. Les
nouveaux verres
d'acide borique ou pliosphorique ne suffisent pas pour

obtenir des corrections aussi parfaites. lia fallu pour cela employer
des lentilles de fluorine (fluorure de calcium, spath-fluor).
base
Ce minral prsente les avantages suivants 1 une grande transparence; 2^ un indice de rfraction trs faible (1,4339); 3" une
:
dispersion relative trs faible (reprsente par 97, alors que les
verres utiliss en optique n'ont pas moins de 66,5 67) ^ Il remplace donc avantageusement l'ancien crown-glass. En combinaison
le flint ordinaire, il produit une dviation secondaire exacte-
avec
ment oppose
conditions, une
celle
du spectre secondaire ordinaire. Dans ces
lentille
forme de fluorine
et
de
flint
pourra cor-
riger compltement
spectre secondaire d'un systme ordinaire
de lentilles. De plus, en associant la fluorine avec un flint trs
peu rfringent, on obtient une combinaison qui corrige trs bien
le
l'aberration de sphricit. Enfin la nature du pouvoir dispersif de

permet de l'associer des flints d'une dispersion exac-
la fluorine
tement proportionnelle.
1.
Voir pour ces chiffres Behrens, Tabellen
zum Gebrauch
Arbeitei, 4^ dit.. 1908, cf. tab. 42 et 43. p. 50 et 51.
bei mik7ôskopischen
78
C'est ainsi qu'on arrive
subsiste plus
qu'un spectre
qui ne nuit en rien
faible,
supprimer
tertiaire
la
spectre secondaire
cFun clat
il
ne
trs
nettet des images.
rsuite de cet achromatisme
Il
le
trs petit et
ces
suprieur que
objectifs
fournissent des images peu prs galement nettes pour tous les
comme toutes ces images ont pratiquement
rayons du spectre
:
mme
foyer, elles se superposent exactement et donnent

peu prs
une image gnrale d'un clat particulier. Les couleurs
naturelles des objets sont rendues trs exactement et l'image est
peu prs aussi nette sur les bords qu'au milieu du champ. En
le
ainsi
correction plus
la
outre,
parfaite
des deux aberrations permet
compltement l'ouverture de l'objectif, puisque la

il en rsulte
correction est faite pour toute l'tendue du champ
d'utiliser plus
une augmentation du pouvoir rsolvant. Ace point de vue, lesapochromals se comportent comme si leur ouverture numrique
tait
augmente. Enfin, l'image fournie par ces
un grossissement par
les objectifs
objectifs supporte
l'oculaire bien plus considrable
que pour
achromatiques.
Les apocliromats prsentent pourtant quelques inconvnients. Par

leur forte ouverture numrique et de leur grande distance
focale, le champ est toujours un peu courbe, surtout dans les objectifs
puissants. Il ne faut donc pas s'attendre, avec ces derniers, avoir une
nettet absolue sur toute l'tendue du champ. Ce dfaut est facilement
compens par l'emploi de la vis micromtrique; il a d'ailleurs peu d'importance, car on n'emploie gure ces objectifs pour avoir des vues d'ensuite de
semble.
et,
On
dans ce
En
pour l'tude des dtails difficiles rsoudre

on n'tudie jamais la fois qu'un champ trs limit.
les rserve
cas,
outre ces objectifs prsentent deux dfauts qui ne peuvent
simultanment. D'abord il subsiste toujours une

aberration de sphricit pour des longueurs d'onde autres que les
longueurs moyennes c'est ce qu'Abbe a nomm diffrence chrotre corrigs
matique de raberration de sphricit. Puis, malgr la concidence presque parfaite des rayons de diffrentes couleurs, il y a
toujours des carts entre les distances focales de ces couleurs.
Pour attnuer
rieures
et,
le
pour
On
premier dfaut,
effacer le second,
il
il
faut corriger les lentilles supfaut modifier les lentilles inf-
on conserve une
non achromatique, de manire ne pas diminuer
l'ouverture du systme. Il en rsulte que les images bleues sont
un peu plus grandes que les images rouges par consquent les
rieures.
choisit la premire alternative et
lentille frontale
OBJECTIFS
/9
champ seront un peu colors et les objets opaques paracette zone, entours d'un lisr bleu en dedans et jaune
dans
tront,
rougetre en dehors. Pour obvier cet inconvnient et compenser
ce reste d'aberration chromatique, on se sert d'oculaires particubords du
compensateurs (p. 95), qui possdent une aberration

chromatique exactement oppose, c'est--dire qui grossissent un
peu plus l'image rouge que l'image bleue. C'est ainsi qu'on arrive
obtenir un achromatisme aussi parfait que possible.
Malheureusement ces objectifs sont d'un prix trs lev, nous
dits
liers,
dirons
et
de
mme excessif,
la raret
en outre de
secondaire
de
par suite des difficults de leur construction
la tluorine
utilisable pour l'optique. Il importe

remarquer que, malgr la correction du spectre
beaut des images, ces objectifs ne possdent pas un
faire
et la
bons objectifs achromatipouvoir rsolvant suprieur celui des

bien
sont
derniers
ces
construits, ils suffisent parfaiques. Lorsque
tement pour tous les travaux courants. iMme pour la microphotoun clairage monochrographie, o on emploie presque toujours
tout
malique, les objectifs achromatiques donnent des rsultats en
courcomparables ceux qu'on obtient avec les apochromats; la
bure du champ est mme, ce point de vue, un inconvnient des
numros forts de ces derniers.

Nous conseillerons donc toujours l'emploi des bons
achromatiques
trs
spciaux
comme
objectifs
parfaitement suffisant, sauf dans des
cas
*.
Les objectifs monochromatiques, calculs par Rohr et Ivhler, et fabriqus par Zeiss, sont uniquement destins la photographie en lumire
ultra-violette, avec des rayons de longueur d'onde de 2750 A (0 p., 275). Nous
avons dj indiqu (p. 72) l'emploi des rayons de faible longueur d'onde
comme un moyen de reculer les limites du pouvoir rsolvant des objectifs. Les monochromats de Zeiss possdent une ouverture numrique
maxima de 1,25, mais, grce l'emploi des rayons ultra-violets, le plus
celui
puissant de ces systmes possde un pouvoir rsolvant gal
d'un objectif ordinaire dont l'ouverture numrique serait de 2,5, chilre
d'obtenir actuellement. Ces objectifs sont dits
qu'il est impossible
monochromatiques, parce qu'ils sont corrigs pour des rayons d'une seule
moins
longueur d'onde. Ils ralisent pour ces rayons un aplantisme au
gal celui des apochromatiques.
Ces objectifs sont d'un prix excessivement lev (le plus fort systme
immersion vaut 750 francs). Les lentilles sont en quartz fondu -,
seule substance qui soit permable aux rayons ultra-violets. Les ocu1.
Se mfier des objectifs dits semi-apochromatiques ou panachromatiques
annoncs dans certains catalogues. Ces dnominations, qui n'ont rien de scientiil est bon d'tre mis en garde.
fique, ont un caractre de rclame contre lequel
'2.
On ne peut employer
le
quartz naturel cause de sa birfringence
il
est
80
du condensateur, les lamelles et les lames doivent

en quartz. Le Ii(iuide d'immersion doit tre un mlange de
glycrine et d'eau, possdant un indice de rfraction particulier.
Les rayons ultra-violets sont obtenus en dcomposant, par des prismes
de quartz, la lumire fournie par une forte tincelle lectricjue jaillissant
entre des lectrodes de cadmium ou de magnsium. Les rayons de longueur d'onde convenable sont runis par un collecteur et envoys dans
le condensateur, par l'intermdiaire d'un prisme rflexion totale.
La mise au point se fait au moyen d'un chercheur, forte loupe qui
permet d'examiner l'image rendue visible par un cran fluorescent.
L'avantage de la photographie en lumire ultra-violette est de doubler
le pouvoir rsolvant des objectifs et de rvler, sur des prparations non
colores, des difl'rences de transparence correspondant de trs fins
dtails de structure, et dues l'absorption ingale des dilrents lments
histologiques pour les rayons ultra-violets. Il en rsulte que ces prparations non colors, fraches ou fixes, se comportent exactement comme
le font, en lumire blanche, les prparations colores.
laires, les lentilles
tre aussi
2 Objectifs sec et objectifs

sec el les objectifs
interpos entre
objet.
Dans
la lenlille
l) est
immersion.
Les
dilrent par la nature
objectifs
du milieu
frontale de Tobjectif et la lamelle couvre-
milieu est Tair, dont l'indice de
les objectifs sec ce
rfraction (n
immersion
trs
dilrent de Tindice
moyen du
verre
Au
contraire, dans les objectifs dits immersion, le

milieu qui spare la lentille frontale du couvre-objet est un liquide
dont l'indice de rfraction est aussi voisin que possible de celui
(n
l,5).
du verre. Ce liquide peut tre de l'eau distille (n= 1,33) ou

mieux de l'huile de cdre, dont l'indice de rfraction (n=::: 1,515)
est presque identique celui du verre.
Dans le cas des objectifs sec, tous les rayons dont l'inclinaison
par
l'air.
rapport
l'axe
dpasse
une certaine valeur subissent
la
au moment de leur passage de la lamelle dans

Nous avons tudi plus haut (p. 48) la rflexion totale et
rflexion
totale
nous avons vu que la valeur de

l'angle limite qui la dtermine
cet angle s'oppose ce que l'angle d'ouverture de l'objectif dpasse
:
une certaine valeur
(82).
L'interposition d'eau distille entre la
lamelle permet de doubler la valeur de

l'angle limite et de porter l'angle d'ouverture 12^. Les rsultats sont encore meilleurs lorsque le liquide d'immersion a le mme
lentille
frontale et
la
indice de rfraction que le verre.

el la rfraction sont
ncessaire de
le
Dans ce
cas, la rflexion totale
entirement supprimes
rentre amorphe par
Zeitschr. fur phys. C/teHue.
XLVI.
1903).
la fusion
tous les rayons pn-
(procd de Herschkowitsch,
OBJECTIFS
treiit
celles
81
dansTobjeclif, el Tangle crouverture n'a d'autres limites que

qui sont imposes par les dilTicultes de la construction.
L'avantage des objectifs immersion est donc de diminuer ou

rfraction des rayons lumineux par Tair entre la
lamelle et l'objectif: j)ar suite, la luminosit de l'image est consi-
d'viter la
drablement augmente, tandis (|ue, dans les objectifs sec, elle

diminue en proportion du carr du grossissement. En outre, l'admission des rayons marginaux permet d'utiliser des cnes lumineux
beaucoup plus tendus et de faire pntrer dans l'objectif les
rayons obliques, dont Timporlance est si grande pour la production des images de diffraction (p. 65).
L'emploi de Timmersion
augmente donc l'angle d'ouverture de l'objectif et permet ainsi

une meilleure rsolution, par suite de l'admission d'un plus grand
nombre de rayons dilracts. Enfin, nous avons vu (p. 73) que le
passage des rayons lumineux travers un milieu trs rfringent
diminuait leur longueur d'onde et favorisait ainsi la rsolution.
Voici, d'aprs Francotte ', un moyen trs simple de dmontrer la supdes objectifs immersion sur les objectifs sec. On prend une
les
prparation dans laquelle se trouvent deux groupes de Diatomes
riorit
unes sont montes sec, dans l'air, simplement entre lame et lamelle;
les autres sont montes dans le baume. On peut ainsi passer facilement
d'un groupe Tautre. Examinons-les avec un objectif immersion: il
est clair que, pour le premier groupe, l'objectif immersion fonctionnera comme un objectif sec, puisque dans ce cas, grce la prsence
de Tair entre la lame et la lamelle, cette dernire fonctionnera en ralit,
comme
si elle tait la face infrieure de la lentille frontale. En passant

d'un groupe l'autre, nous transformerons donc notre objectif immersion en ol)jeclif sec et rcipro(iuement. Enlevons Toculnire, aprs avoir
mis au point, et examinons la pupille d'mergence, nous verrons, pour
Diatomes montes au baume, un cercle lumineux large
les
Faissons glisser la prparalion et amenons dans
montes dans
devient un
et
immdiatement
le
champ
les
et brillant.
Diatomes
pupille d'mergence se rtrcit

petit cercle entour d'une couronne obscure. Voil donc
l'air,
la
mme objectif qui reoit beaucoup plus de rayons quand

ploy avec immersion.
le
il
est
em-
La figure 51 rend parfaitement compte de la marcbe des rayons

lumineux dans l'air et dans l'huile de cdre, au sortir de la
lamelle. Elle reprsente une coupe verticale travers la lentille
frontale d'un objectif immersion homogne et d'un objectif sec
de
1.
mme
puissance.
On
a figur
deux demi-lentilles pour runir
Francotte, Manuel de technique microscopique,
M. Lan'geron.
cf. p. 46.
82
les deux cas en une mme ligure. Soil un rayon lumineux ABCD,
il est rfract, se
pntrant en B dans la prparation
rapproche
ainsi de la ligne mdiane MM' et suit dans le verre la direction BG.
:
En G
il
quitte le verre pour passer dans l'air et est de nouveau
rfract dans la direction GD. Il ne peut donc atteindre la lentille
frontale de Tobjectif sec. Le rayon EBG'FG qui possde exactement la mme incidence n'est rfract qu'une fois, son entre
dans
la
prparation, en B.
Il
continue ensuite sa marche en ligne
droite travers l'huile d'immersion et
la
lentille
frontale,
pour
Marche schmatique dos rayons lumineux dans Tair et dans l'huile

Fig. 51.
de cdre, dans le cas d'un objectif immersion homogne et d'un objectif sec
de mme puissance.
Original.
Un rayon lumineux encore

HBIJK peut encore tre recueilli par
contribuer la formation de l'image.

plus oblique, qui suit le trajet
la lentille frontale. Un rayon
rflexion totale au
On
moment
de
mme
incidence
de son passage de
la
LBM
subit la
lamelle dans
l'air.
voit donc, par cette figure
schmatique, que les objectifs

immersion peuvent admettre un cne lumineux trs large et que
leur ouverture numrique est trs suprieure celle des objectifs
sec de
mme
puissance.
L'emploi de l'immersion n'est possible qu'avec les objectifs

courte distance frontale, par consquent fort grossissement. G'esl
d'ailleurs
pour ceux-l seuls qu'elle prsente un avantage, car les

lumineux. Au del d'un gros-
faibles objectifs sont toujours assez
sissement de 700 800 diamtres, l'emploi des lentilles immer-
OBJECTIFS
sio devient absolument ncessaire
samment lumineuse
83
pour avoir une image
suffi-
car les systmes sec n'admettent

de
assez
ncessaires
plus
rayons obliques
pour une bonne rsoluet nette,
tion.
Classification des objectifs immersion.

On tablit,
parmi ces objectifs, aulantde catgories que de liquides d'immer-
Nous distinguerons donc les objectifs immersion eau,

huile de cdre et monobromure de naphtaline.
sion.
Les objectifs immersion Veau ne remplissent qirimparfaitemcnt le

but de ces instruments, cause de l'indice de rfraction de l'eau
(n=l,33) trop diirent de celui du verre (n
1,52). Nanmoins ces
objectifs, l'poque oii ils furent invents, constituaient djiin progrs considrable. Ils ne sont plus gure employs maintenant. Il est
rare qu'on puisse se permettre le luxe de cet accessoire. Pourtant ils
peuvent rendre des services pour suivre la marche de la diffrenciation,
au cours de certaines mthodes cytologiques. Dans ce cas, on peut les
employer sans lamelle. Ils peuvent aussi tre commodes pour l'examen
de petits animaux aquatiques. Le liquide d'immersion doit toujours tre
de l'eau distille, de faon ce que son vaporatioti ne laisse pas, la
surface des lentilles, de dpt susceptible de les rayer.
Les objectifs immersion

immersion homogne parce que
prs
de cdre, ayant
trs
peu
mme
indice de rfraction que le verre, les rayons lumitraversent un milieu optiquement homogne. L'indice de
le
neux
rhiiile de cdre sont dits aussi

l'huile
n
1,515; celui du verre des
de l,oi5; celui du verre des lames et lamelles
est environ de 1,520. Pourtant les huiles de cdre de diverses
rfraction de l'huile de cdre est
lentilles est aussi
provenances ne sont pas identiques; il y a toujours entre elles

quelque diffrence. Il est donc prfrable d'employer l'huile de
cdre fournie par le constructeur de l'objectif et pour laquelle les
lentilles ont t corriges
Ces
les
objectifs
immersion
sont, l'heure actuelle, de
beaucoup
plus employs.
Nous ne signalerons que pour mmoire les objectifs immersion au

monobrornure de naphtaline. L'indice de rfraction de ce corps est n^= 1,06;
il permet de porter l'ouverture numri([ue 1,63. Malheureusement ces
objectifs n'ont gure d'utilit pratique, car, outre leur prix fort lev,
Voir p. 445 Temploi de l'huile de paraffine comme liuile d'immersion. Le
Joyeux m'a indiqu, en outre qu'en cas de ncessit, il avait eu de bons
rsultats avec l'huile de Ricin officinale. Ces particularits sont intressantes pour
les voyageurs et explorateurs.
1.
D''
84
ncessitent des prcautions particulires. L'objet doit tre mont

dans un milieu* excessivement rfringent tel que le monobromure de
naphtaline, le biiodure de mercure, etc.; les lamelles doivent tre en
llint trs lourd et avoir une paisseur particulire. Le cne clairant
doit avoir une ouverture numricjue de 1,40 et tre fourni par un conls
flint. Les lames elles-mmes doivent tre en flint, alors

lames et les lamelles ordinaires sont en crown. Ces objectifs
sont donc plutt des curiosits scientifiques, servant dterminer les
limites de la visibilit microscopique au moyen de Diatomes difficiles
densateur de
que
les
rsoudre.
Emploi des
objectifs
immersion.
Nous donnerons plus
loin, en parlant de l'emploi du microscope (p. 163), quelques conseils pratiques sur la manire d'employer les objectifs immersion-
Nous devons simplement examiner
ici dans (|uels cas on doit se

immersion de prfrence aux objectifs sec.
Nous avons dj dit que pour un grossissement suprieur
oOO diamtres il tait prfrable d'employer les objectifs immersion, qui sont plus lumineux et donnent une meilleure rsolution.
servir des objectifs
o les forts objectifs sec sont plus comdispensent de l'emploi du liquide d'immersion. Un
micrograpbe exerc saura tirer parti de l'appareil d'clairage et
obtiendra, avec un bon objectif sec, d'aussi bons rsultats qu'avec
rimmersion. Nanmoins l'emploi de l'immersion est conseiller
Pourtant
il
modes, car
est des cas
ils
majorit des travailleurs et des dbutants, car il est assez diffide trouver de trs bons objectifs sec puissants et encore
plus difficile de s'en servir utilement.
la
cile
Nous devons mentionner ici un dernier avantage des objectifs

c'est de permettre Femjdoi de
immersion sur les objectifs sec
:
lamelles d'paisseur quelconque, sans ncessiter de correction-.

Ceci nous amne tudier l'intluence de l'paisseur de la lamelle
et les objectifs correction.
Pour
Influence de la lamelle. Objectifs correction.
de la lamelle a une importance beaucoup plus grande qu'on ne le croit gnralement. Ces
les objectifs sec puissants, l'paisseur
objectifs sont en effet corrigs pour une rfraction produite par

des lamelles d'une paisseur dtermine, gnralement 170 a. Si
on emploie des lamelles })lus paisses ou plus minces, l'image est
mdiocre. Voici pourquoi.
La figure 52 reprsente une bimelle deux fois plus paisse gauche

qu' droite. 00 est le plan ({ui limite la lentille frontale de l'objectif. P
est un point de l'objet d'o part un cne lumineux. Les rayons qui for-
85
OBJECTIFS
ment ce cne traversent la lamelle, puis en sortent par les plans AA et

HB pour passer de nouveau dans Tair et de l dans l'objectif 00. Tous
ces milieux font subir des rfractions aux rayons qui les traversent. Il
en rsulte que les rayons qui pntrent dans l'objectif ont tous une
direction dilfrente.
Si on vient prolonger ces rayons en arrire, aprs leur sortie du
couvre-objet, on remarque qu'ils coupent l'axe optique en des points

difTrents, et d'autant plus rapprochs de la lentille frontale que leur
inclinaison ou leur obliquit est plus forte. De plus ces rayons viennent
îg.
5-2.
Influence de
l'paisseur de
la
lamelle sur la raarclie des rayons
lumineux (d'aprs Zimmermann).
couper Taxe en des points d'autant plus loigns les uns des autres que
lamelle est plus paisse
c'est ce que montre l'vidence la comparaison des deux moitis de la (igure.
la
Il
rsulte de ceci que, pour les objectifs puissants, dont
le
foyer
court, l'image de l'objet est forme non par un point,

mais par une srie de points superposs le long d'une ligne verticale d'autant plus longue que la lamelle est plus paisse et que
est trs
Touverture de Tobjeclif
est
plus grande.
Les
rayons
externes
du point le plus lev et Teffet dfinitif est de

donner une image dpourvue de nettet, exactement cotiime si
Tobjectif tait corrig par excs pour l'aberration de sphricit.
Pour compenser cet inconvnient, on utilise la proprit que
paraissent partir
possde l'loignement des
lentilles
On
que,
de corriger l'aberration de
dans un objectif corrig par

dfaut (fig. 30) les rayons marginaux coupent l'axe optique en un
point plus rapproch de la lentille que les rayons centraux. Si,
par la pense, nous intervertissons les rles, c'est--dire si nous
sphricit.
sait
en
elfet
considrons l'image comme l'objet et l'objet comme l'image, il

devient vident que ce systme, corrig par dlaut, peut runir en
un point le faisceau de rayons superposs le long de Taxe. Il suffira
86
la dformation due Tpaisseur de la lamelle,

correction par dfaut, d'autant plus que l'paisseur
donc, pour corriger

la
d'augmenter
de la lamelle est plus grande.
munis de ce qu'on appelle

de
au
de
une bague
correction,
moyen
laquelle on peut dplacer,
d'une quantit donne, les lentilles suprieures et les loigner
ainsi des lentilles infrieures. La figure 53 reprsente un objectif
ce but, certains objectifs sont
Dans
muni de
sa bague de correction. Cette bague porte des divisions
dont chacune correspond un dplacement

d'un centime de millimtre. Un trait grav
la partie fixe de
la monture
permet
d'arrter la bague un chiffre correspondant
sur
l'paisseur de la lamelle
pour laquelle on
veut corriger l'objectif. La

tre
correction
doit
les
faite
pour
toujours
objectifs qui
[)Ossdeid la bague de correction. Une ngligence ce point de vue altrerait considrablement l'image
une
Fig. 53.
Objectif
correction de Zeiss.
En tournant
la
et ferait jierdre Tobjectif
partie de ses qualits.
.
xj
uj
n
Mensuration de 1 paisseur des lamelles.
Pour effectuer la correction, il est ncessaire de
connatre exactement l'paisseur de la lamelle.

11 existe un appareil spcial, dit calibre-cadran,
sorte de pince ressort qui saisit la lamelle,
suprieureet la paire
dont l'paisseur est indique par une aiguille
de leninfrieure
actionne par la pince et parcourant un cadran
gradu. Un autre appareil plus simple est
form d'une vis pourvue d'un tambour gradu.
Ces appareils sont gradus en centimes de millimtre.
A dfaut de ces instruments il y a plusieurs mthodes qui permettent
de trouver assez facilement l'paisseur des lamelles, mme pour des
prparations dfinitives, dont on ne peut les retirer.
Le moyen le jilus simple est de mesurer l'paisseur du paquet et de
diviser par le nombre de lamelles.
On peut aussi trier les lamelles d'aprs le son qu'elles rendent en
tombant sur une table. Toutes les lamelles qui donnent le mme son
ont peu prs la mme paisseur. On superpose les lamelles ainsi
bague de correction
on
varier lcartemcnt entre la paire

fait
tries,
on mesure l'paisseur du paquet
nombre de lamelles.
Une autre mthode consiste
par
et
on divise l'paisseur obtenue
le
employer les divisions graves sur la

micromtrique. Ces divisions, nous l'avons
vu plus haut (p. 19), permettent, au moyen d'un index, de mesurer de
trs faibles dplacements verticaux de l'appareil optique. On met successivement au point la face suprieure et la face infrieure de la lamelle,
en ayant soin de tourner la vis micromlrique dans le mme sens. Pour
tte
ou
le
tambour de
la vis
87
OBJECTIFS
mise au point, il suffit de quelques grains de poussire

sur les deux faces de la lamelle. Pour viter l'erreur due l'accommodation il est bon de se servir de l'oculaire micromtrique; grce la prsence de l'chelle dans le plan focal, on sera sr de ne pas suppler
la mise au point en accommodant. La diffrence entre les deux lectures
correspond, pour un objectif sec, l'paisseur d'une couche d'air reprsentant Tobjet. Pour connatre l'paisseur relle d'une substance autre
que l'air, il faut tenir compte de l'indice de rfraction (p. 190, fig. 114)
de l'objet qu'on mesure. La formule suivante
D
nd. donne une valuation trs approche de cette paisseur. D est l'paisseur cherche,
n l'indice de rfraction de l'objet, (/ la diffrence entre les deux lectures.
Connaissant l'indice de rfraction, on peut avoir l'paisseur relle et
inversement, connaissant l'paisseur, on peut calculer l'indice de rfraction. Pour le verre des lamelles on peut prendre 1,3 comme valeur
faciliter celte
approche de n.
Enfin Czapski
a indiqu une mthode trs prcise pour valuer
exactement l'paisseur de la lamelle d'une prparation. On prend,
comme terme de comparaison, trois ou quatre lamelles, dont on a
dtermin l'paisseur exacte au moyen du calibre. On les mesure au
moyen des divisions de la vis micromtrique, sans s'occuper de la
valeur de ces divisions, puis on divise l'paisseur relle de ces lamelles
par les chiffres obtenus pour chacune d'elles. La moyenne des quotients
donne un coefficient qui servira pour corriger toutes les mesures faites
avec la mme combinaison optique, la mme longueur de tube et le
'
mme
clairage.
on ne peut connatre l'paisseur de la lamelle, on tablit la correction par ttonnement en tournant lentement la bague dans un sens ou
dans l'autre, tout en regardant dans l'oculaire. On arrive ainsi trouver
le point ({ui donne pour
l'image le maximum de nettet.
Si
Les montures correction sont rserves aux objectifs sec ou

Peau. Les objectifs immersion homogne se font
immersion
toujours monture fixe. En effet, cause de l'homognit du

milieu que traverse la lumire (verre-huile de cdre- verre), la nettet de Timage est
peu prs indpendante de Tpaisseur de la
lamelle. D'autre part,
tilles
une modification dans rcartement des
pourrait nuire
la
len-
correction des aberrations. Si l'pais-
seur anormale du couvre-objet ncessitait une compensation, on

du tube du microscope.
Nous avons vu plus haut (p. 18)
Emploi du tube tirage.
que le tube tirage du microscope porte une division millimaurait recours au tirage
trique.
Ce
tirage n'est pas destin
comme beaucoup
de dbutants
le grossissement,
mais bien complter
augmenter
le croient,
la correction des
objectifs. Dans le cas des objectifs sec, le tirage
sert particulirement compenser l'paisseur des lamelles
on le
:
Czapslvi, Die Bestimmung von Decliglasdicken

f. wiss. Mikr., V, p. 482-484, 1888.
Zeitschr.
an
fertigen
Prparaten,
88
raccourcit dans le cas de lamelles trop paisses (lamelles de 200

250 [j.) et 011 rallonge dans le cas contraire
(lamelles de
100
120
a).
L'emploi du tirage est surtout important

avec les objectifs immersion. Ces appasont corrigs ])our une longueur de
tube dtermine, gnralement 170 mm.,
dont il faut retrancher Tpaisseur du revolver
reils
ou du changeur coulisse. Une diffrence

de 10 mm. suffit pour donner des images
mdiocres.
trs
Il
ne faut pas confondre avec
nisme des bagues

^'dc ztis7- E^Tai^sant
tourner la bague RR
on lve la paire superieure de lentilles
(Z.)
z:/
dans
la
indique
position
par
la
mcamonture
le
spciale de certains objectifs faibles, tels que

dc ZcisS (flg. 54). CcS objCCtifs SOUt
constitus par dcux Icntillcs doublcs rnrune
i
le a*
luobile
bague
les
^q^^j.
traits pointills (grand.

nat.}.
correction
^^-^
permet d'carter et de rapproaiusi une srie de u

ffros-
obtient
sissemenls varis qui, pour un

vont gnralement du
laire,
mme
ocu-
simple au
double. Ces objectifs sont trs prcieux pour les dessins qui doivent tre excuts un trs faible grossissement.
NOTATION DES OBJECTIFS

Les objectifs achromatiques sec sont gnralement dsigns
par des numros arbitraires, 1, 2, 3, ou par des lettres, A, B, C.
Les objectifs achromatiques immersion sont dsigns par leur
distance focale exprime en pouces anglais. Les chiffres 1/10,
1/12, 1/15, 1/18, que portent les montures de ces objectifs, signifient donc que leur dislance focale est de 1/12, 1/15 de pouce
anglais, etc. Le pouce anglais vaut 25 mm. 4. Les objectifs I/IO,
1/12, 1/15, 1/16, 1/18 ont donc 2 mm. 5, 1
mm. 6, 1 mm. 4 de distance focale.
mm.
9, 1
mm.
8,
Les objectifs apochromatiques sont tous dsigns par leur distance focale exprime en millimtres et fractions de millimtre.
On
dit,
1,5
mm.
par exemple, un apochromatique de 16, 8, 4, 3, 3, 2,
La connaissance de
la
distance focale permet de calculer facile-
89
OBJECTIFS
ment
le
c'est--dire ramplilicagrossissement propre de l'objectif,

employ seul, sans oculaire. On obtient ce
tion qu'il donnerait,
cbiffre 250, qui correspond

grossissement propre en divisant le
la distance de la vision distincte, parla valeur de la distance focale.
Par exemple, pour un apochromatique de 4
250
le
grossissement propre est gal ^V-
On
est quelquefois
trs
mm. de
distance focale,
^ 62,5.
embarrass pour tablir une concor-
des divers constructeurs. Voici quelques

indications ce sujet. La plupart des constructeurs franais et
des chiffres
trangers dsignent leurs objectifs achromatiques par
arbitraires, le n" 1 tant le plus faible et le plus fort tant le n 8
dance entre
ou
le
les objectifs
n 9, suivant les maisons. Les
numros d'ordre des
objectifs
franais ne correspondent pas exactement ceux des objectifs

allemands ou autrichiens, surtout pour les systmes puissants.
Ainsi
le
4 de Stiassnie et de Leitz sont peu prs identiques,
et le
correspond plutt au 6 de Stiassnie.

Les objectifs achromatiques de Zeiss sont dsigns par des
lettres minuscules et majuscules suivant leur puissance. Le a}
correspond peu prs au 2 de Stiassnie, le C au 4 et leDD au 6;
tandis
que
le
7 de Leitz
voir ce sujet la table de concordance de la p. 91.
Le
1 a toujours
les dissections
et
un
trs
long foyer:
dissociations, les
il
convient pour rentomologie,
dessins
un
faible
grossis-
sement (/j-,2(? 6îr/??2^/re6').

Le 2 a encore un long foyer nanmoins
il
peut dj tre associ
revolver des objectifs plus forts. 11 faut
;
commodment sur un
quand on passe au 3 ou au 4, mais d'une quantit qui

permet de trouver ra[)idement la mise au point. C'est un objectif
abaisser le tube
commode pour
et
qui notre avis doit
faire partie
Il
donne des grossisse-
les tudes topographiques

d'un microscope bien compris.
ments de ^0 60 diamires.
Le 3 et le 4, surtout ce dernier, allient l'tendue du champ

un grossissement suffisant [100-200 diam.) pour permettre la
recherche des ufs d'Helminthes dans les djections, l'tude
prparatoire des coupes
et,
en gnral, tous
les
travaux de topogra-
de reprage qui exigent un grossissement moyen avec un

phie
champ aussi tendu que possible.
Le 5, notre avis, ne fournit pas des images suffisamment
et
Nous prfrons beaucoup le 6 ou le 7, suivant les construcon

teurs;
[leut avec ces objectifs et un jeu d'oculaires obtenir
grossies.
90
lacilemcnl des grossissements de 300 500 diamtres qm sont

courants, pour toutes sortes de travaux zoologiques et
les plus
botaniques.
Nous ne conseillons pas remploi des numros 8 et 9. Ces objectifs sont
toujours peu lumineux et donnent souvent des images
mdiocres, quoique trs grossies. Ils supporlent mal les oculaires

forts, qui leur enlvent la plus grande partie de leur luminosit
dj trs faible.
Au del de 500 diamtres
il est
prfrable, en gnral, d'employer les objectifs immersion. Il faut cboisir un numro fort
parmi ces derniers, 1/lSJ au moins. Le 1/15 est prfrable et le
.
Objectif faible
sec de Leitz.
Fig.o.
Fig. 56.
Objectif puissant sec de Leitz.
Objectif immerFig. 57.

sion homogne de Leitz.
1/16 est encore d'un emploi trs pratique. Nous reviendrons d'ailleurs sur celte question, en traitant du choix d'un microscope.
Les figures 55 57 reprsentent la section de trois types d'objectifs achromati({ues.
Dans
sec d'un type faible ou
la
figure
moyen
il
55 nous voyons un objectif

form de lentilles doubles
est
on obtient la correction des aberrations.

La figure 56 reprsente un objectif sec puissant la lentille fron-
ou
triples par lesquelles
tale
les
hmisphrique produit presque elle seule le grossissement

deux lentilles double et triple servent aux corrections. De
:
mme, dans la
sion
figure 57 qui reprsente
homogne,
hmisphrique
entre
la
un type
d'objectif
immer-
le
grossissement
est produit par la lentille frontale
et
par
la lentille
en forme de mnisque, intercale
frontale et les lentilles de correction. Cette disposition,
invente par les Amricains Spencer et Toiles et encore employe

aujourd'hui, se nomme duplexeront. Les autres lentilles doubles et
triples sont des lentilles correctrices.
OBJECTIFS
Table de concordance
des objectifs de Zeiss, Leitz et Stiassnie.
Numro
I
Longueur
focale.
oc
a"
Ouv. numrique.
Numro
Longueur
focale.
Ouv. numrique.
Numro
Longueur
Longue
focale
91
92
Table de concordance
des oculaires de Zeiss, Leitz
et
Stiassnie.
CHAPITRE
OCULAIRES
L'oculaire du microscope est form de deux lentilles, simples
ou composes, gnralement spares par un diaphragme, et montes aux deuxextrmitsd'un tube, glissant frottement doux dans
la partie suprieure du tube du microscope.
L'oculaire sert observer l'image relle et renverse fournie

Il exerce sur cette
image une double action
par robjeclif.
1
Il
Tagrandit en
la
transformant en une image virtuelle, mais
toujours renverse;
2 Il aplanit et claircit
le
champ
optique, ou plan circulaire
clair dans lequel l'objet parat plac.

La lentille suprieure se nomme lentille oculaire; c'est elle qui
agrandit l'image relle. La lentille infrieure se nomme lentille
collectrice ou
verre de champ, c'est elle qui aplanit et claircit

en
restreignant le grossissement de la lentille oculaire.
l'image
Pour se rendre compte de l'action de cette lentille, [trenons un
champ et examinons de
nouveau l'image microscopique. Nous verrons que le grossissement est beaucoup plus fort, mais que le champ a diminu dans
les mmes proportions. On ne voit plus qu'une minime partie de
oculaire d'Huyghens, enlevons le verre de
l'objet et
du
il
champ
faut dplacer l'il pour apercevoir les diffrentes zones

primitif, fourni par l'oculaire complet. En outre,
l'aberration de sphricit dforme considrablement l'image.

Les oculaires ordinaires appartiennent deux types, l'un dit
ngatif, ou oculaire
d'Huyghens,
l'autre dit positif
ou oculaire de
oculaires compensateurs constituent un troisime

type d'oculaires.
Ce sont les oculaires em})loys
Oculaires d'Huyghens.
couramment avec les objectifs achromatiques. Ils sont forms de
Ramsden. Les
94
deux
de
lenlilles
l'objectif.
plan-convexes, dont
Ces deux
lentilles
la
convexit est tourne du ct
ne sont pas achromatiques, mais
donnent pourtant une image peu prs achromalique, parce

que leur cartement est peu prs gal la demi-somme de leurs
longueurs focales. En outre, la longueur focale de la collectrice
elles
peu prs double de celle de la lentille oculaire.

Le foyer infiieurse trouve plac entre les deux lentilles, tandis
que le foyer suprieur est un peu au-dessus de la lentille oculaire. L'image se forme donc entre les deux lentilles, d'o le nom
d'oculaire ngatif. Le diaphragme destin limiter le champ
esl
optique se trouve dans le plan de l'image.

Il rsulte de cette construction
que ces oculaires ne peuvent
servir de loupe, puisqu'on ne peut placer l'objet entre le foyer et
Par contre, on peut les faire fonctionner comme loupe

retournant et en regardant par le verre de champ; malheureusement le foyer est excessivement court. Les oculaires dits
la lentille.
en
les
aplantiques, orthoscopiques, priscopiques, etc., sont construits

avec des lentilles oculaires corriges par excs, de faon ce que
leur foyer soit plus allong aux bords qu'au centre. Grce cet
artifice,
l'image ne parait pas bombe
c'est ainsi
qu'on obtient
une plus grande planit du champ.
Dans ces oculaires, les deux lenlilles ont

Oculaires de Ramsden.
leur face plane tourne en deliors et leur face convexe tourne en
dedans. Les deux foyers se trouvent en deliors de l'oculaire, qui peut
ainsi servir de loupe sur ses deux faces. L'image se forme en avant des
deux lentilles, d'o le nom d'oculaire positif. Le diaphragme se trouve
donc aussi en avant des lentilles et non entre elles, comme dans l'oculaire
d'Huyghens.
les anciens oculaires du type Ramsden, on obtenait l'achromatisme en calculant les foyers des deux lentilles, de faon ce qu'ils
soient gaux entre eux et l'cartement des deux verres. Mais cet
achromatisme est toujours imparfait, aussi l'oculaire de Ramsden est-il
peu prs abandonn.
L'image relle de l'objectif doit se trouver en dehors de l'oculaire et
en dedans de son foyer, de telle sorte que cet oculaire fonctionne
comme loupe simple. Au contraire, dans l'oculaire d'Huyghens, l'image
relle de l'objectif doit tomber entre les deux lentilles. La pupille
d'mergence se trouve au voisinage du foyer suprieur.
Nous avons vu que le diaphragme se trouve en avant des lentilles,
dans le mme plan que l'image relle. Cette particularit permet d'utiliser l'oculaire de Ramsden comme oculaire micromtrique et lui donne
une supriorit, ce point de vue, sur l'oculaire d'Huyghens. En effet,
dans l'oculaire de Ramsden, l'chelle est place dans le diaphragme,
en avant des deux lentilles, et se trouve grossie galement par tout l'oculaire, tandis que, dans l'oculaire d'Huyghens, l'chelle est place dans
Dans
OCULAIRES
95
diaphra^-me, entre les deux lentilles, et n'est grossie que par la lentille
oculaire; il en rsulte des aberrations (jui nuisent la prcision des
le
le dispositif de Ramsden est-il gnralement adopt pour

micromtriques de prcision, tambour gradu.
mesures. Aussi
les oculaires
Oculaires compensateurs.
comme nous lavons dit })liis haut
de grossissement pour
les
Ces oculaires sont destins,
(p. 79),
compenser
l'ingalit
diverses couleurs (diffrence chroma-
tique du grossissement, p. 57) dans les objectifs apochromaliques.

Nous savons que ce dfaut est d, pour ces objectifs, la lentille
frontale non achromatique ncessaire pour augmenter Touverture
Il en rsulte
que les diverses images colores qui se
superposent pour former l'image complte de l'objet n'ont pas
exactement les mmes dimensions; Timage bleue dpasse lgrement l'image rouge. Si on regarde cette image avec un oculaire
numrique.
ordinaire,
color, qui
on
voit que les contours sont marqus d'un lisr

augmente mesure qu'on s'approche de la priphrie
du champ. D'ailleurs, les constructeurs donnent

ment leurs apochromatiques un certain degr de
intentionnelle-
ce dfaut, afin
le corriger entirement au moyen des oculaires compensateurs. Ceux-ci sont calculs pour prsenter au mme degr
le dfaut contraire, par consquent pour compenser le dfaut
d'achromatisme des objectifs. Ces oculaires donnent donc pour
de pouvoir
rayons rouges une image plus grande que pour les rayons
bleus; il est facile de s'en rendre compte en regardant travers
les
un numro fort on aperoit le diaphragme bord d'une marge rougetre. L'image microscopique totale sera aussi pure que possible,
c'est--dire exempte de contours colors jusqu'aux bords du champ.
:
Ceci ex}lique pourquoi les oculaires compensateurs donnent en

gnral de mauvais rsultats avec les objectifs achromatiques
sec; c'est parce que ces derniers ne prsentent pas la mme diffrence chromatique de grossissement. Il n'en est pas de mme des
objectifs achromatiques immersion dont la dilTrence chroma-
tique est gnralement assez forte pour leur permettre de sup-
porter les oculaires compensateurs.

La construction de ces oculaires varie suivant leur grossissement
propre. Tantt le foyer infrieur se trouve au-dessus de la col-
comme
dans
les oculaires
reconnatre, d'aprs la
d'Huyghens, tantt au-dessous,

de Ramsden. La position est facile
situation du diaphragme qui se trouve tou-
jours son voisinage.
En
lectrice,
comme
dans
les
oculaires
gnral, le type
Huyghens
est celui des
90
numros
type Ranisden celui des
faibles, le
dans ces derniers, est une
collectrice,
Dans certains numros

de
forls
la
achromatique.
suprieur est assez loign

ncessaire de marquer, par un
forts, le foyer
oculaire pour qu'il soit
la lentille
numros
lentille triple
la position de l'il de l'observateur. Ces

grandes
variations dans la hauteur du foyer infrieur auraient pour cons-
autre diaphragme,
quence de modifier considrablement la mise au point chaque

changement d'oculaire. Pour obvier cet inconvnient, on munit
la monture des numros forls d'une bague, calcule de faon que
le foyer infrieur de tous les oculaires d'une mme srie tombe
au mme point dans le tube du microscope. De cette manire, la longueur optique du tube, c'est--dire la dislance entre le foyer postrieur de l'objectif et le foyer infrieur de l'oculaire, reste constante.
L'avantage des oculaires compensateurs est de permettre de
En
grands carts de grossissement.
effet, les objectifs
apochroma-
li(}ues supportent des oculaires trs forts, sans que la nettet et la

clart des images soient intluences dans de trop grandes limites.
Nanmoins, pour le travail normal, il sera bon de s'en tenir aux

numros faibles ou moyens, par exemple le 6 ou le 9, avec lesquels la fatigue de l'il est moins grande.
NOTATION DES OCULAIRES

1
"
Oculaires d'Huyghens.
Les oculaires d'Huyghens sont
toujours dsigns par des chiires arbitraires arabes ou romains
5 ou I, II, III, lY, V, voir la table de concordance

11, 3, 4,
page 92). En effet leur grossissement propre ne peut gnralement pas tre exprim en nombres entiers, par suite des dis(0, 1,
de
la
tances focales des types courants. Dplus, leurs foyers antrieurs

ne se trouvent pas au mme niveau.
Les numros forts sont gnralement dfectueux, car ils sont

obtenus en rduisant autant que possible l'action de la lentille de
champ.
ont donc
Ils
un champ
trs troit,
une aberration sph-
rique trs accentue et une faible luminosit, car, pour diminuer

la dformation de l'image, on est oblig de rtrcir fortement le
faut
donc
diaphragme.
Il
et
n'employer
moyens
et
se limiter l'emjdoi des

les
numros
est indispensable d'obtenir l'talement
une numration ou un dessin
la
forts
maximum
chambre
numros
que dans
claire.
faibles
les cas
il
de l'image, pour
'
OCULAIRES
2^ Oculaires
compensateurs.
Il
n'en est pas de
97
mme
compensateurs, qu'on dsigne par la valeur de

leur grossissement propre pour la distance de la vision distincte,
pour
les oculaires
250 mm. Les
18 indiqueront
oculaires
est de 2, 4, 6,
de
ces
grossissement propre
c'est--dire
donc que
8, 12, 18
le
fois.
chiffres 2, 4, 6, 8, 12,
Outre que cette notation
est parfaitement rationencore l'avantage de permettre de calculer

grossissement total d'une combinaison d'oculaire et
nelle, elle prsente
rapidement
le
de multiplier le numro de l'oculaire par

grossissêment propre de l'objeclif.
G le grossissement cherch;
Soient
suffit
d'objeclif. Il
le
grossissement propre de l'objeclif;

g' le grossissement propre de l'oculaire,
Nous aurons G =: gg'
le
de diviser le nondue 250, reprsendistance de la vision normale, par la distance

focale de l'objectif exprime en millimtres. Soit /* cette distance,
Pour dterminer
7,
en millimtres
la
tant
nous aurons
il
suftt
250
g =z -j-
M. Langeron.
CHAPITRE
VI
FORMATION DE L'IMAGE
MICROSCOPIQUE
Maintenant que nous connaissons les dtails de structure de la
et de la partie optique du microscope, nous
partie mcanique
la marche des rayons dans cet instrument et nous
tudier
pouvons
rendre compte de la faon dont se produit Timage virtuelle que
nous voyons lorsque nous examinons une prparation.
Prenons d'abord le cas le plus simple (fig. 58), en supposant
que Foculaire et Tobjectif sont forms chacun d'une seule lenL'objet 00' se trouve un peu au del du foyer de l'objectif
en 0^0^ une image relle et fortement grossie
(Obj.) qui donne
Cette
cet
de
image se forme en dedans du foyer de l'ocuobjet.
tille.
laire qui fonctionne
comme
loupe et donne une image 0^0de la vision normale.
vir-
et situe la distance
agrandie
Derrire l'objectif se trouve un diaphragme DD dont l'ouverture est en dd' Nous savons que l'image de ce diaphragme reprsente la pupille d'entre du microscope et que l'angle p
p' est
tuelle,
La pupille d'mergence
du microscope correspond l'image du diaphragme DD fournie
par l'oculaire comme ce diaphragme est trs loign, son image ee'
se formera dans le plan E E, trs prs du foyer /' de l'oculaire.
On voit que le cne lumineux qui sort du microscope a son
d'ouverture de l'objectif.
gal l'angle
minimum
de largeur au niveau de
la
pupille d'mergence. Donc,
plus possible de rayons, il faut que sa

pupille d'entre vienne concider avec la pupille d'mergence du
pour que
l'il recueille le
microscope.
Supposons maintenant que

dans un microscope complet
la
(tig,
marche des rayons
se produit
avec
miroir
condenM,
plan
59),
FORMATION DE L IMAGE MICROSCOPIQUE
G G avec diaphragme D D,
sateur
objectif obj
el
99
diaphragme dd,
oculaire de Huygheiis avec lentille collectrice coll, lentille oculaire oc et diaphragme do. Pour plus de clart dans la figure, nous
ne reprsenterons qu'un demi-objet 00' de faon n'tudier
la
marche des rayons

d'un
seul
que
ct. L'image
de
relle
l'objet
serait projete par
en 0,0\
l'objectif
si
n'tait pas
elle
rfracte en 020^2,
par la collectrice
sous forme diine
image plus
petite,
qui se trouve ainsi
0,'
en dedans du foyer
de
la lentille
ocu-
laire. Gelle-ci agit
comme
donne
loupe
la
et
grande
image virtuelle
Ofl'^ la distance
la vision nor-
de
male. Gette image
perue
virtuelle,
par
vient
l'il,
former sur
la
tine la petite
image
r-
relle 0,0',.
La pupille d'entre
se
trouve,
ment, en
ee',
plifi
Marche des rayons dans un microscope sim(une seule lentille oculaire d'aprs Zimmermann).
Fig. 58.
comme prcdem-
der-
diaphragme dd de l'objectif, qui limite la pntration

des rayons lumineux. L'angle d'ouverture de l'objectif est donc
rire le
gal l'angle e
limite par l'image
La pupille d'mergence du microscope est

du diaphragme de l'objectif fournie par l'ocu-
e'.
dans la figure 39, elle concide avec la pupille d'entre de l'ceil.

Gette pupille d'mergence est beaucoup plus petite que la pupille
laire;
100
LE MlCllOSCOPE ET SES ACCESSOIRES
-VO
Fig. 59.
Marche des rayons dans
teur, objectif
une
le
lentille, oculaire
microscope compos complet (condensa deux lentilles (d'aprs Zimmermann).
FORMAXrON DE L'IMAGE MICROSCOPIQUE

A\e
crenlre,
ost
mme
plus
101
que Taugle d'ouverture
petite
(le l'il.
L'api)areil
(['clairage envoie
lumineux qui remplit

Le champ du microscope
e(jne
loculaire, exacte-
ment au
se
plan de Tobjet
00' un
est
dlimit par le diaphragme do qui
point o
forme l'image
OgO
la
le
dans
trouve
se
dans
tout l'angle d'ouverture de l'objectif.
fournie par
2,
lentille
collec-
trice.
La
ligure
reprsente
marche
m icroscope
Zeiss.
la
relle des
dans
rayons
60
un
de
Ce micros-
muni de
cope
la
nouvelle mise
est
au point micromtriqiie et de deux

objectifs,
un
ob-
jectif faible sec
(AA.)etun objeclif
immersion ho-
mogne
le
viss sur
revolver.
clairage
duit par
L'-
est
promiroir
un
un conplan
densateur deux
'
Fig. OU
Marche
et
lentilles. L'objet
est plac entre
du microscope.
La figure I montre
de l'objet situ dans
la
rayons clans un microscope

de Zeiss.
relle des
lame
et
lamelle sur la platine
marche des rayons qui traversent un point

plan focal antrieur du microscope la
le
figure II reprsente les rayons limitant le
champ.
L'image relle de l'objet forme par l'objectif tondre dans le

plan 0*, mais la lentille collectrice la reporte dans le plan du diaphragme de l'oculaire 0**. Gamme l'il est cens accommod ou
i02
corrig pour rinfini, les rayons provenant de cette image relle,

vue travers la lentille oculaire, sont parallles (fig. I). Les
limites de ce faisceau sont dtermines par l'ouverture suprieure
de Tobjectif qui joue le rle de diaphragme et dlimite Tangle
d'ouverture.
Ces rayons parallles vont former sur
l'observateur
une image
aussi, dans
relle, petite et
renverse
la
:
ils
rtine de
forment
du microscope
entier (F'),
plan
Cette
du
l'oculaire.
de
fournie
rimage
diaphragme
par
Tobjectif
image correspond au petit cercle lumineux, situ un peu au-dessus de l'oculaire et auquel nous avons donn le nom de pupille
le
focal postrieur
d'mergence on de cercle oculaire, ou encore de cercle d Diot ou

Ramsden. Tous les rayons venant de Timage microscopique
de
ont ce cercle pour base. Si

dans le plan de ce cercle
la
pupille de l'observateur est place
si elle a le mme diamtre, l'il

recevra tous les rayons provenant de l'image microscopique.
Pour comprendre la formation de cette image, suivons (lig. il)
et
rayons mans de trois points diffrents de l'objet. Ces rayons

sont d'abord parallles, puis se coupent dans le plan focal postrieur (F'I) de l'objectif. Ils passent ensuite par le diaphragme de
il en
rsulte qu'aprs avoir tral'oculaire qui limite le champ
trois
vers la lentille oculaire, les deux rayons marginaux limitent aussi

l'angle sous lequel sera vue Fimage microscopique. Or la grandeur
de cette image est prcisment dtermine par cet angle. L'image

virtuelle et renverse dfinitive fournie par l'oculaire est localise
le plan 0**\ La distance enlre ce plan et le plan focal postrieur du microscope entier est gale la distance de la vision distincte (S
250 mm.). C'est pour celte distance que sont calculs
dans
grossissements des combinaisons optiques.

La distance T, qui spare le point d'appui de l'oculaire du
point d'appui de l'objectif, reprsente la longueur relle du tube.
est de
Cette longueur varie suivant les constructeurs
elle
les
160 mm. chez Zeiss et

Dans cette longueur doit
changeur d'objectif,
la lentille oculaire.
et
Stiassnie, de
170
mm.
tre comprise l'paisseur
chez Leilz,
du
etc.
revolver, du
des appareils micromtriques qui relvent
La distance A reprsente la longueur optique du tube, c'est-dire la distance entre le foyer postrieur F'* de l'objectif et le
foyer antrieur F- de l'oculaire. Cette longueur diffre suivant les
combinaisons d'objectifs achromatiques et d'oculaires, mais

sensiblement constante pour les objectifs apochromatiques
elle est
:
aussi
FORMATION DE LIMAGE MICROSCOPIQUE
103
la mise au point n'est-elle pour ainsi dire pas modifie quand

on change d'oculaire.
Dans la figure I, les rayons provenant de la source lumineuse
se croisent, aprs rflexion sur le miroir et rfraction dans le condensateur, dans le point de Tobjet situ sur l'axe o})tique. Les
rayons provenant de
la
source lumineuse sont donc parallles, mais
ce paralllisme n'est pas ncessaire, car dans le cas o la source

lumineuse est suffisamment tendue, il n'est pas indispensable
d'en projeter une image nette dans le plan de l'objet. Les traits
pointills reprsentent les faisceaux
diffracts
extrmes qui peu-
vent pntrer dans l'objectif.
Dans
la figure II,
rflexion,
les
rayons qui, aprs
du diaphragme-iris, ce dernier
d'une source lumineuse trs loigne.
le rle
jouant
on n'a reprsent que
croisent au niveau
se
Nous pouvons concrtiser
ces notions thoriques en cherchant
voir, par l'observation directe, les
images que nous venons de
construire schmatiquement. Pour cekj il suffit de prendre une

prparation d'un objet assez gros, par exemple le test d'Abbe
(p. 173) ou, plus simplement, un micromtre objectif grav sur
verre (p. 179).
par exemple
le
On met au
un
point avec
6 de Stiassnie ou
le 7
objectif assez puissant,
de Leitz.
Pour voir V image relle fournie par V objectif (OjOY), on

dvisse les deux lentilles d'un oculaire et on place, sur le diaphragme de cet oculaire, une rondelle de papier dcalquer bien
transparent et grain aussi fin
que
d'aprs la figure 59, se forme
relle,
possible.
Comme
l'image
un peu au-dessus du
dia-
phragme de l'oculaire, il ne faut pas enfoncer compltement ce

dernier dans le tube du microscope pour apercevoir l'image qui
vient se peindre sur le papier transparent. Il faut avoir soin, en
outre, d'loigner l'il jusqu' la dislance de la vision normale. Si
on ap})liquait l'il l'orifice du tube de l'oculaire, on ne distin-
guerait rien.
Pour
voir
Vimage
relle fournie
par
la lentille collectrice
(0,0,') on visse cette lentille au tube de l'oculaire, on installe ce
dernier dans
petite
le
tube du microscope et on aperoit une image plus
que l'image
construction de
la
relle de l'objectif,
ce qui est conforme la
figure 59.
Enfin, pour se rendre compte de l'troitesse de la pupille

d'mergence^ oq visse les deux lentilles de l'oculaire et on le met
en place, puis on met au point comme d'habitude. On
prend ensuite
LE MTC1105C0PK ET SES ACCESSOIRES
lO't
uiMcrre drpoli ou un
cai'i
de papier transparent
l'oculaire.
En
grossissement de l'oculaire.
On
et
on
le lient
tlonnanl, on Huit par

trouver une position telle qu'on aperoit nn tout petit cercle lumineux trs net, c'est la pupille (rmcrgence; son diamtre varie
verticalement an-dessus
suivant
le
voyant pour
la
(le
premire
Ibis Ttroitesse
est toujours surpris
en
de ce faisceau mergent.
THORIE DE LA MISE AU POINT DU MICROSCOPE

pour obtenir une mise an point
forme
Toculaire
doit se trouver exactement
correcte, Tiniage
par
la distance de la vision distincte. Nous savons (voir p. 18) que
Il
rsulte de ce qui pri'cdeque,
au point se fait en dplaant de haut en bas Tensemble

du systme optique renferm dans le tube du microscope; on
augmente et on diminue ainsi la dislance qui spare Tobjet de la
lentille frontale du microscope. Lorsqu'on descend le tube, pour
celte mise
rapprocher
l'objectif
de Tobjel, limage de ce dernier s'loigne de
rapproche de la lentille oculaire qui donne une

image dfinitive moins grossie. De trs faibles dplacements verlicaux du tube modifient considrablement la situation et les dimenla collectrice et se
sions de l'image microscopique.
peu de chose prs
la
mme
La mise au point
est
donc
trs
pour un il normal, myope ou hyper-
mtrope.
Si on vient modifier
la longueur du tube, par exemple

mise
au
l'allonger,
point sera change et il faudra faire descendre tout l'appareil optique pour obtenir de nouveau la netlel
la
de l'image.
de
En
effet,
l'allongement du tube nous oblige loigner

par ce deinier, de faon ce
l'objectif l'image relle fournie
qu'elle
soit
projete
au
mme
niveau que prcdemment dans
l'oculaire.
Ces considrations thoriques nous amnent une fois de plus

conclure que, pendant l'observation microscopique, la vis micromtrique doit tre sans cesse en mouvement pour explorer les
divers plans de la prparation et
modation de
l'il.
mnager
le
mcanisme d'accom-
CHAPITRE VU
MICROSCOPES DE VOYAGE
L'essor de la uidecine coloniale et de la parasitologie a donn,
depuis quelques annes, une importance inattendue aux microscopes de voyage. L'absolue ncessit du microscope pour le diagnostic des maladies parasitaires, rend ces instruments indispensables
tout mdecin apjêl
exercer dans les rgions inter-
tropicales.
Pour rendre
les
services
que
Ton
doit
attendre
d'eux, les
microscopes de voyage doivent runir un certain nombre de qualits
qui sont quelquefois contradictoires. C'est ainsi que la lgdeux conditions incompatibles et qu'il faut
ret et la stabilit sont
sacrifier un peu de la premire pour donner

importance suffisante.
la
seconde une
Examinons quelles doivent tre les qualits essentielles requises

par un microscope de voyage.
Rn premier lieu, il doit se prtera l'emploi de tous les grossissements
et
en particulier des objectifs
immersion
II
faut
donc
qu'il
possde un condensateur Abbe avec diaphragme iris. Il est ncessaire qu'd ait, outre le mouvement micromtrique, une crmaillre
mouvement rapide et un revolver deux objectifs au minimum.
La platine
doit tre large et susceptible de recevoir
une platine
chariot, indispensable pour l'examen mlhodique des lames de

sang. Ces exigences excluent un volume trop restreint et un poids
minime. La partie suprieure de la monture tant assez

le pied devra tre suffisamment lourd pour assurer la
stabilit. C'est prcisment la forme du pied qui rend dfectueux
trop
charge,
un
nombre de modles de nncroscopes de voyage. Quelcherchant avant tout rduire le volume de

constructeurs,
ques
la monture, ont ado|t un pied pliant, form de deux branches
certain
106
pouvant s'carter angle aigu. Gnralement ces deux branches
Fig. 61.
Microscope
Fig.
de voyage de Stiassnie (voir
6^2.
fig. 9,
l'appareil mont).
Microscope de voyage de Leitz.
ne sont pas assez lourdes
et leur
cartement est insuffisant pour
MICROSCOPES DE VOYAGE
107
rinstrument nne parfaite stabilit. Pourtant, certains

modles rcents sont conus d'une faon plus pratique et rpondent
donner
aux desiderata que nous venons d'exprimer. Tel
est le grand
microscope de voyage de Leitz, muni de la nouvelle vis micromtrique (fig. 62). D'autres constructeurs renoncent plier les deux
--î:u;;iiii;iiiiiiiii;iii)iiiiiijui:tiii;ii
Fig. 62 bis.
Microscope de voyage de Zeiss.
branches du pied, redresser la platine verticalement et loger

ainsi Finstrument dans une boite trs plate. Ils
plient le microscope, par divers dispositifs, au niveau de sa charnire dinclinaison.
Un des meilleurs modles est celui de Stiassnie, qui est reprsent par la ligure 61.
Une
fois
pli,
il
tient
avec son revolver,
ses oculaires et ses objectifs dans une caissette cubique qu'il est
facile de loger dans une valise ou une cantine.
Le microscope
trs portative
62 bis) se loge dans une bote

rien dmonter, ce qui est une
tabli par Zeiss (fig.
sans
<{u'il
ait
excellente garantie pour la dure
du centrage de
toutes les pices.
CHAPITRE
LOUPES
ET.
VIII
MICROSCOPES
A DISSECTION
Les modles de microscopes que nous venons d'Uidier ne peuvent gnralement convenir que pour Fexamen d'objets }trpars,
c'est--dire dissocis dans un liquide, rduits en coupes minces, etc.
Ces objets sont monts dans un liquide conservateur, entre lame

puis ports sur la platine du microscope pour tre
et lamelle,
observs un grossissement appropri.
Pour
ces prparations, pour la manipulation et

objets,
faible.
il
est
la
la
confection de
dissection de petits
souvent ncessaire d'oprer un grossissement trs

la dilacration sous le microscope est gn-
La dissection ou
ralement une opration difficile, car

une grande habitude pour
exige
aiguilles ou scalpels. De plus,

trs courte des objectifs est
un
le
le
renversement des images
maniement
correct
des
distance frontale gnralement

obstacle qu'il est difficile de sur-
la
monter. Enfin les mains de l'oprateur ne trouvent pas, sur

platine, l'appui ncessaire pour la sret de leurs mouvements.
la
existe des instruments qui rpondent ce besoin. Ce sont les

loupes dissection, loupes montes ou microscopes simples et
Il
les microscopes binoculaires primes redresseurs. 11 existe un

grand nombre de modles de microscopes simples, de construction
plus ou moins conq^lique et perfectionne. Nous ne saurions les
dcrire
ici.
Qu'il nous suffise de dire que ces instruments doi-
vent possder une bonne loupe, susceptible d'tre mise au point

cominodment, une lai'ge platine et des appuie-bras confortables.
Les loupes qu'on adapte ces instruments sont des loupes de

il en existe
toute une
Sleinheil ou des doublets achromatiques;
LOUPES ET MICaOSCOPES A DISSECTION
109
6 40 diamtres. L'emploi des numros forts

srie, grossissant de
n'est pas conseill, cause de l'troitesse du champ e( de la
Au del de 20 diamtres, il est

bien prfrable d'employer le microscope binoculaire. D'ailleurs,
ce dernier instrument, les microscopes
depuis la cration de
brivet de la distance frontale.
et de leur utilit.
simples ont perdu beaucoup de leur impoilance
il
diffrence
avons
Nous
dj indiqu (}). 1) quelle
y a, au
de vue optique, entre le microscope compos et la loupe ou
point
microscope simple. Nous savons que le premier est compos de

deux svslmes de lenlilles, tandis que le second ne com|)rcnd
lentille ou une combinaison de lentilles fonctionnant
([u'une
comme
lentille
simple.
Nous savons
aussi (voir p.
4)
que
la
positive, biconvexe ou plan-convexe, qui

loupe
donne une image virtuelle d'un objet plac
_
Si
entre la lentille el un de ses foyers (fig. 5).
est
une
lentille
Les loupes sont alTectes des
mmes
aberrations
L'aberration de sphricit
est surtout accentue dans des loupes formes d'une
simple lentille biconvexe. Aussi est-il prfrable,
pour avoir des images bien planes et non dformes, de prendre une lentille plan-convexe, dont
que
les autres lentilles.
Fig. 63.
Loupe
dissection de Leitz.
l'objet la face plane (voir p. .d1).

peut aussi construire de bonnes loupes en montant deux lentilles
plan-convexes aux deux extrmits
d'un tube; un diaphragme limine les
on tourne vers
On
rayons marginaux. Les deux faces

le
planes tant tournes vers l'objet,
est trs plan. La figure 63
1
2
3
reprsente une excellente loupe de ce
64. 1, Loupe cylindrique
construite
fois
et
10
Fig.
genre grossissant
2; loupe de Brewster; 3, loupe de
par Leitz; son champ trs large
Coddington. Oriyinal.
(20 mm.) et son long; foyer permettent
de dissquer facilement.
Pour obtenir des grossissements plus considrables, on a recours aux
de
loupes dites cylindri(iues, tailles dans un bloc
la loupe cylindrique ordinaire
verre. Ce sont
dont les extrmits n'ont pas la mme
(tig-. 64, t)
champ
courbure, la loupe de Coddington (fig. 64, 3) et la

loupe de Brewster (fig-. 64, 2) toutes deux chancres dans leur portion mdiane pour liminer les
rayons marginaux. L'inconvnient de ces trois
formes de loupe est d'avoir un foyer trs court et
un champ trs troit. Elles ne peuvent donc convenir que comme loupes main, pour l'examen
sommaire de
section.
petits objets,
Fig. 65.
Lo-upe dti
type de Steinheil.
mais ne se prtent pas aux travaux de
dis
HO
Le meilleur procd pour construire des loupes aplantiques et achromatiques consiste employer des lentilles composes de deux ou trois
lentilles concaves et convexes. On obtient ainsi la loupe dite de Steinheil, gnralement forme d'une lentille biconvexe de crown-glass et
de deux lentilles concaves-convexes de llint-glass (tig. 65). La correction
ainsi obtenue est presque parfaite. Ces loupes peuvent grossir jusqu'
40 diamtres.
On nomme doublets des loupes formes de deux lentilles

doubles, comprenant un lment biconvexe et un lment planconcave. Tantt ces loupes sont construites sur le type de
_J
Fig. 66.
Doublet de Leitz mont en loupe

main.
Fig.
Doublet de
du type Ramsden.
67.
Leitz
Toculaire de Ramsden (fig. 67), avec les deux faces planes

tournes en dehors, tantt les deux faces planes sont tournes en
dedans
(fig.
La loupe
66).
dite
(type oculaire de
de Briicke est d'une construction tout fait diffrente

Ramsden). Ce n'est ni un microscope compos ni une
loupe, mais bien une vritable lunette de Galile distance focale raccourcie. Elle est constitue par un tube, portant une extrmit un
objectif form d'une lentille biconvexe et l'autre extrmit une lentille
biconcave fonctionnant comme oculaire. L'objet doit tre plac au del

du foyer de l'oculaire, qui donnerait ainsi une image relle de l'objet,
si la lentille divergente ne coupait pas ces faisceaux convergents, de
manire les rendre divergents et former une image virtuelle et agrandie de l'objet. L'avantage de la loupe de Briicke est d'avoir une grande
distance frontale et de se prter ainsi aux dissections et dissociations.
Depuis que Temploides microscopes binoculaires
s'est rpandu
que leur fabrication s'est perfectionne, l'importance des
microscopes simples a beaucoup diminu en tant que loupes
montes ou instruments de dissection. Par contre, leur utilit en
tant que loupes main ou loupes de poche est reste la mme.
La loupe sera toujours la fidle compagne du naturaliste sur la
table du laboratoire, en excursion, la loupe doit toujours tre
et
porte de la main; c'est elle qu'on consulte
la
premire,
mme
LOUPES ET MICROSCOPES A DISSECTION
111
pour examiner certaines coupes. Dans les travaux de systmatique,

chacun sait que la loupe a une importance capitale et
qu'elle
seule permet de reconnatre commodment
les
caractres
dlicats.
Il
est
bien
rare
pas toujours une

loupe dans sa poche.
Le meilleur grossissement, pour une
naturaliste
qu'un
n'ait
loupe de poche, est 12 ou 15 diamtres. On

un instrument de petite dimension,
permettant d'tudier de fins dtails. La
a ainsi
Fig.
68.
de
Loupe
poche.
plupart des constructeurs montent dans ce

but des loupes de Steinheil telles que celle que reprsente les
figures 68 et 69 bis. On tablit aussi des biloupes de poche, trs
commodes parce
qu'elles
donnent
deux grossissements diffrents.

Pour le laboratoire, on fait des
manches
tant
trs
d'utiliser
maintes
pratiques permetcomme loupe
des microscopes
simples. Enfin, pour les travaux
qui exigent des observations prolentilles
longes, on emploie des pieds

porte-loupe, munis de bras permettant toutes les inclinaisons.
Il
nous
est impossible
de d-
crire toutes les loupes et tous les
pieds porte-loupe.
i-
Fig. 69.
COG
Bras porte-loupe de Gogit.
Nous ne pou-
vons cependant passer sous silence un bras porte-loupe qui nous a

rendu de grands services (fig. 69). Cet instrument est construit par
Gogit (Paris)
il
est
en aluminium et trs
lger. C'est un simple bras form d'une
barre aplatie, fixe
l'une de ses extrmits, par
une
vis,
une pice courbe,

calcule pour em-
Fig. 69 bis.
Loupes achromatiques de Leitz,

modles de poche.
brasser la circonfrence du tube d'un microscope et pouvant tre

fixe solidement ce tube au moyen dune vis de pression. La
112
barre peiil s'lever ou s'abaissera voloiil, eu louiuaiil aulour de

son autre extrmit, elle supporte un anneau
soupoiut d'allache
porte-loupe qui, lui aussi, peut tourner aulour d'nn axe horizoutal
Ce porte-loupe peut recevoir la loupe de la fig. 63, une loupe de
Steinheil ou un doublet. Le grand avantage de ce porte-loupe est
de permettre d'utiliser,
pour
la
mise au point,
le
mouvement
rapide du microscope. On incline plus ou moius le bras, suivant

la hauteur o se trouve Tobjet examiuer; on place la loupe bien
horizonlalemeut, grce rarliculation de l'anneau porte-loupe, et
on achve
la
Pour ceux
mise au point avec la crmaillre du microscoi)e.

(jui ne possdent pas de uiicroscope binoculaire, cet
trs lger et }eu encombraut remplace

microscopes dissection et les pieds porteloupe souvent trs dfectueux. Il permet mme de dessiner la
chambre claire, avec ou sans grossissement.
appareil
trs
siuiple,
avantageusemeut
les
CHAPITRE
IX
MICROSCOPES
A PRISMES REDRESSEURS
e
Ces
sont
caractriss par Finterposition, entre

d\in
Toculaire,
systme de prismes qui redressent
mme temps, la monture de ces microscopes est
microscopes
l'objectif et
l'image. En
construite spcialement en vue de la dissection ou
du dessin
ces
instruments ne donnent que de faibles grossissements, qui ne

dpassent gnralement pas 70 diamtres.
Les microscopes prismes redresseurs se divisent en deux
catgories, suivant qu'ils sont monoculaires
ou binoculaires.
Les premiers conviennent surtout pour dessiner de grandes

prparations la chambre claire, de trs faibles grossissements.
Pour
les
travaux
de
dissection,
leur
emploi est bien
moins
commode que
donnent
celui des microscopes redresseurs binoculaires, qui

la vision stroscopique et qui sont en outre beaucoup
plus clairs.
Il
ne faut pas confondre
les
microscopes binoculaires avec
les
un microscope
quelconque. Dans ces derniers, Fimage est produite par un seul
objectif. Le faisceau lumineux est alors partag entre deux oculaires, par rflexion partielle sur une mince couche d'air place
Fune des deux portions est ensuite reprise
entre deux prismes
par un prisme rflexion totale.
Dans les microscopes binoculaires dissection (fig. 70), deux
images distinctes sont produites par deux microscopes redresseurs distincts. Dans le modle que nous figurons, les objectifs
sont monts par paires sur un patin commun qui glisse dans
une coulisse porte par le double tube. Celui-ci est surmont par
dispositifs binoculaires
que
l'on peut adapter sur
M. Langeron.
114
deuv tambours J"enfermanl les prismes redresseurs, ou i)rismes de

Porro. Les tambours peuvent tourner autour d'un axe vertical,
ce qui permet de rgler la position des oculaires qui les surmontent
pour tous les cartements des veux. Ce rglage est tout fait
indispensable pour obtenir retet stroscopique. La mise au point

se fait au moyen de la crmaillre. Une autre mise au point est
==
X.*
>
.lfA
Contre le pied du microscope on

Microscope binoculaire de Zeiss.
Fig. "70.
voit la paire d'objectifs immersion l'eau; droite so trouve le fer cheval
en bonite qui sert monter le dermatoscope qu'on voit droite en haut.
quelquefois ncessaire, lorsque les deux yeux de Tobservateur

n'ont pas la mme accommodation. Dans ce cas, on visse ou on
un des deux
un pas devis dans ce but.

deux images, on
qu'on
immobilise l'objectif au moyen d'une bague de pression. La
platine de ces microscopes porte simplement une ouverture
dvisse
Une
fois
objectifs qui porte
obtenu
la
nettet parfaite des
centrale sous laquelle on peut amener, par la rotation d'un boulon,

mtallique mi-partie noire et blancbe. L'clairage
.une plaque
MICROSCOPES A PRISMES REDRESSEURS

))ar
transmission s'obtient au
moyen d'un
115
miroir deux faces,
peuvent tre recouvertes d'un carton Liane

une lumire trs diffuse. Ce miroir est trs
})lanc et convexe, qui

et rflcliir
aiiisi
La platine peut tre munie latralement

sont
d'appuie-mains qui
indispensables pour les dissections Unes.
L'clairage }ar rtlcxion s'obtient au moyen d'une lentille qui
concentre un faisceau sur l'objet.
mobile en
tons sens.
Cet appareil est susceptible de recevoir cinq paires diffrentes
combins avec deux paires d'oculaires, donnent

(maximum 70 diam.). Le plus
d'objectifs, qui,
toute
une
de grossissements
srie
puissant de ces objectifs est destin observer des objets immergs

dans l'eau. C'est un objectif immersion l'eau, long foyer,
trs
commode pour
les jietils
les
recberches sur
le
plankton
et
pour tudier
animaux aquatiques.
Non seulement
beaucoup
les
ce microscope binoculaire stroscopique facilite
dissections
fines,
mais
encore
il
rend
les
plus
grands services pour l'tude des Insectes, des Champignons microscopiques et, en gnral, de tous les objets qui devaient autrefois
examins
En un mot,
le binoculaire est devenu le

du
complment indispensable
microscope.
Si Ton dvisse les deux boulons qui se trouvent en arrire de la
potence, au-dessus de la platine, on spare facilement de cette
platine, l'appareil optique du microscope binoculaire. Cette partie
tre
la
loupe.
tre tenue la
main
explorer des objets

des surfaces cutanes, on
visse la place de la platine une pice en bonite en forme de fer
cheval (fig. 70). On transforme ainsi le microscope en un der-
peut
alors
volumineux. Pour
faciliter
et servir
l'examen
matoscope.
On jteut encore se servir du binoculaire sans monture, en tenant
la main la partie optique. On peut suivre ainsi des parasites trs
mobiles (Puces, etc.) dans le pelage des animaux, condition de
ne pas prendre un trop fort grossissement. Avec un peu d'habitude, on devient trs adroit.
CHAPITRE X
APPAREILS A DESSINER
Quels que soient
phie,
la seule
les
progrs accomplis par la microphotogra-
dessin des prparations microscopiques restera toujours
le
mthode qui })ermette de reprsenter un ohjet d'une faon

et prcise. La microphotographie fournit des documents
complte
irrfutahles,
compltement indpendants de toute interprtation
si parfaites que soient les photographies, elles

ne peuvent reprsenter qu'un seul aspect d'un objet, qu'un seul
plan d'une coupe. Les limites de la nettet sont trs troites, tant
en profondeur qu'en surface
aussi la confection de bons clichs
personnelle. Mais,
photographiques exige-t-elle des prparations trs minces et parfaitement planes. Plus le grossissement augmente, plus le champ
de nettet diminue la fois en tendue et en profondeur. En
outre, en raison des difticults techniques et du temps ncessit
par les manipulations, la microphotographie ne saurait tre d'un
emploi constant au cours du travail micrographique.
l'heure actuelle, nous devons donc considrer les microphotographies comme insuffisantes, elles seules, pour illustrer un travail scientifique. Elles sont indispensables,
en tant que documents,
pour montrer
l'aspect rel de la prparation, la place des dtails

et la faon dont ils se prsentent l'observateur. Mais ces docu-
ments doivent
un dessin
Ce dessin montrera
tre complts par
scrupuleusement
fidle.
les objets tels que

comprend il mettra en lumire les
que les montrent la transparence de la
l'observateur les voit et les

dtails
de structure
tels
interprt, quoique
prparation et les variations infiniment dlicates de la mise au

point. Le dessin fera la somme de la multitude de coupes optiques
que l'observateur fait chaque instant et qui, seules, dans la
vision microscopique, arrivent
de
la profondeur.
Ceci expliquera
microscopique
donner
la
117
sensation du relief et
que nous attachons au dessin

dveloppement que nous donnons la des-
l'importance
et le
Aucun exercice n'est plus utile

on peut dire qu'on
dessin pour le micrographe dbutant
n'a pas bien vu une prparation tant qu'on ne l'a pas dessine.
Une quantit de fins dtails, que le dessin oblige rendre,
passent souvent inaperus, mme pendant une observation
cription des appareils dessiner.
que
le
attentive.
Sans parler du croquis ordinaire, qui, pour lre exact, exige une ducation de dessinateur, on peut arriver dessiner rigoureusement les
objets microscopiques sans l'aide d'aucun instrument. Il suffit pour cela
de regarder d'un il dans le microscope et de l'autre la surface sur
laquelle on dessine.
On
arrive ainsi suivre les contours du l'image
microscopique avec la pointe du crayon. Malgr sa simplicit, cette

mthode est rarement employe, car elle exige beaucoup d'exercice et
produit gnralement une grande fatigue. Outre une galit parfaite
dans la puissance et l'accoutumance des deux yeux, il faut encore que
l'image microscopiijue et le papier dessin soient clairs avec la mme
intensit. L'avantage que pourrait prsenter cette mthode consiste en
ce que l'il n'est nullement gn pour regarder l'image microscopique
et qu'il peroit cette image sans aucun intermdiaire.
Nous ne mentionnons
cette
mthode que pour mmoire, car on
pour dessiner les objets microscopiques,

aux appareils dessiner, ou chambres claires.
Le but de ces appareils est de faire concider sur la rtine les
a gnralement recours,
rayons mans de l'image microscopique et du plan sur lequel

on doit dessiner. Ce rsultat est obtenu par des combinaisons de
et de miroirs,
L'il peroit donc en
prismes
qui agissent par rflexion ou rfraction.
mme
temps l'image de la prparation et

de la feuille de papier. Il est facile de suivre sur cette dernire, avec la pointe d'un crayon, les contours des dtails les
celle
plus dKcats on peut obtenir ainsi un croquis trs exact, avec la

mise en place de tous les points importants; on peut complter
ensuite ce premier dessin en enlevant la chambre claire et en
;
regardant directement l'image microscopique.

Les appareils dessiner se divisent en deux groupes, suivant
qu'ils utilisent une moiti du faisceau lumineux mergeant du
microscope ou ce faisceau tout entier. Les premiers se nomment de

prfrence chambres claires, les seconds reprsentent les appareils
118
dessiner piopremenl dils.
Ce
sont ces derniers que nous allons
tudier tout d'abord.
Signalons auparavant deux autres catgories un peu diffrentes

ce sont d'abord la chambre claire d'Oberd'appareils dessiner
:
hauser dont
la
construction est exactement inverse de celle des
appareils prcdents, puis d'autres appareils, destins uniquement
aux
dans
trs faibles grossissements, et qui projettent,
le
plan de
de papier, une image relle de l'objet dessiner. Ces

derniers appareils ne sont d'ailleurs pas destins tre adapts
la
feuille
au microscope compos.
APPAREILS
I.
DESSINER
Prenons pour exemple lappareil
MIROIR
dessiner d'Abbe construit
^
par Zeiss (fig. 71) il est constitu essentiellement par un miroir
fix l'extrmit d'un bras horizontal et par un petit appareil
;
plac au-dessus de l'oculaire et
nomm
form de deux prismes isocles angle
cube d'Abbe. Ce cube

droit.
est
La face hypotnuse
\\
Fig. 71.
A, cube d'Abbe; B,
Principe de l'appareil dessiner d'Abbe.
miroir; xy, rayon lumineux provenant du microscope; abcci, rayon lumineux
de
b
la
c.
surface
du
et
rtichi
en
et
dessin
provenant
Orif/inal.
du prisme suprieur
mdian, de 1 ou 2
est argente, l'exception
d'un petit cercle
mm.
de diamtre, travers lequel l'image

microscopique est perue, presque sans subir aucune perle de
lumire. Pour cela, cette ouverture doit concider avec la pupille
d'mergence du microscope, point au niveau duquel
les
rayons
Czapski, Ueber einen neuen Zeichenapparat und die Construction von

Zeichenapparaten im allgemeinen. Zcitschrift f. viss. Jlikr., XI, p. '?89-i?98,
1.
18'J4.
119
un trs petit espace (p. 102).

pupille d'mergence tant variable avec les ocuest indispensable de rgler la hauteur laquelle se trouve
issus de roculaire sont condenss dans
La position de
il
laires,
la
cube d'Abbe, de manire utiliser tous les rayons lumineux et avoir un champ aussi vaste et aussi clair que possible.
Ce rglage se fait en lixant tout Tappareil une hauteur convenable sur le tube du microscope, au moyen de la bague de
le
plac
serrage K
Les rayons provenant du papier sont rflchis par le grand

miroir sur la face hypotnuse argente du prisme suprieur, puis
rflchis de nouveau par cette surface dans la direction de Fil.
Ces rayons viennent former sur la rtine une image qui se superpose celle de Timage microscopique. Comme la face argente
du prisme est incline de 45, il est indispensable que le miroir
mme
inclinaison pour qu'on puisse dessiner sans dformaune surface horizontale.

La longueur du bras varie suivant Tlendue de Timage dessiner. Ce bras doit loigner le miroir une certaine distance du
microscope, car le centre du miroir doit tre perpendiculaire au
ait la
tion sur
centre du
champ du dessin, puisque le rayon axial ou droit qui

centre du miroir au centre du dessin est vertical. En effet
joint le
plan du dessin doit toujours tre })erpendiculaire cette droite,

aprs la doubic rllexion des rayons lumineux. Or la direction de cette droite dpend de Tangle que font entre elles les deux
le
mme
surfaces rtlchissantes; en
jdan du dessin doit

que
de celui que ces surfaces
le
il
on dmontre gomlriquement
avecThorizontale, un angle double
effet,
faire,
font entre elles.
Lorsque
celles-ci sont
doit tre horizon lai. ce qui est le cas
pour Tappareil
dessiner d'Abbe. La direction du plan du dessin est donc tout
fait
indpendante de Fangle que les surfaces rllchissanles
peuvent faire avec la verticale.
parallles,
Outre ces raisons d'ordre gomtrique,

doit
tre d'autant
plus
la
longueur du bras
champ embrasser est

pouvoir excuter un dessin sans modifier
grande que
le
plus vaste, de manire

la position du miroir et par
consquent sans dformer l'image.
Dans ce cas, on dplace le miroir le long du bras, au moyen d'une
glissire
1.
En
dont
il
est
quelquefois muni, ou bien
ou emploie un
principe, l'appareil dessiner d'Alil)e est tabli pour un seul oculaire,

est-il prfrable, autant que possible,
gnralement l'oculaire n" 2 ou n 3. Aussi

de ne remployer qu'avec cet oculaire.
120
oculaires grand chanip,

appareil spcialement construit pour les
avec bras de 125 mm. de longueur (Zeiss).
Il
ment
que Tinclinaison du miroir soit assure exacteun arrt automatique ou par un trait de repre
est ncessaire
45 par
tout fait essengrav sur Taxe de rotation. Cette condition est

tielle pour viter la dformation de Timage. Il faudra donc rejeter
ou modifier les appareils dans lesquels on ne peut contrler Fin-
clinaison
du miroir.
Nous
figurons, titre d'exemple, le grand appareil dessiner

de Zeiss (fig. 72). On le fixe sur le tube du microscope, la hau-
teur voulue, au
l'oculaire,
moyen d'une bague de
on place
la
serrage.
bague, puis on carte
On
le
enlve d'abord
cube d'Abbe, de
Grand appareil dessiner d'Abbe.

A, miroir destin envoyer
Fig. 12.
l'image du papier et du crajôn sur la surface rflchissante du prisme B, disque
portant les verres fums destins rgler l'clairage de l'image microscopique
G, bouton permettant de faire varier l'inclinaison du miroir; II, vis de centrage
;
du cube d'Abbe pour
le
dplacement antro-postrieur; K, bague pour
la fixa-
tion de l'appareil dessiner sur le tube du microscope; L, vis de centrage du

cube d'Abbe pour le dplacement latral; R, bonnette portant les verres fums
destins rgler l'clairage du papier dessin S, vis de serrage de la bague
:
axe autour duquel tourne l'ensemble du cube d'Abbe, du disque et de

bonnette; P, cube d'Abbe interchangeable.
Z,
faon replacer l'oculaire dans
le
tube.
la
Le centre de l'ouverture
ronde, pratique dans l'argenture du prisme, doit concider avec
Taxe optique du microscope. Dans certains modles simples, cette

concidence a lieu automatiquement. Dans le modle que nous
le centrage exact est assur par les deux vis L et H,
dans deux directions perpendiculaires. Le miroir se
dcrivons,
agissant
trouve plac droite du microscope. Le papier est dispos sur une

surface horizontale, sous le miroir, ct du pied du microscope.
Plusieurs
conditions
doivent
tre
121
ralises
pour assurer
la
deux images. Nous avons dj vu que

la direction du plan du dessin avait une grande influence sur la
dformation de Timage. La distance de ce plan l'il de l'observateur et YgaUt d^clairage des deux images n'ont pas moins
nettet et la visibilit des
d'importance pour leur
Pour
visibilit.
tre perus nettement, l'image
du dessin doivent
distincte,
microscopique et le plan
normale de la vision
se trouver la distance
c'est--dire
environ 250
mm.
de
l'il.
Bien qu'on
puisse dessiner sur la table qiii supporte le microscope, il est prfrable d'lever le papier dessin au niveau de la platine ou
mme un peu au-dessus, la distance de 25 cm. environ de
chambre claire, de faon viter que l'il soit

de
faire
des
efforts d'accommodation. Il existe pour cela de
oblig
nombreux dispositifs, depuis la pile de livres jusqu'aux tables
l'ouverture de la
dessiner que nous dcrirons plus loin (fig. 84 et 85). Les myopes
devront dessiner avec des lunettes ou intercaler un verre correc-
teur sur le trajet des rayons lumineux, de faon n'tre pas obligs
d'approcher le plan du dessin trop prs de l'teil.
L'gaht d clairage de l'image microscopique et du plan du

dessin a aussi une importance capitale. C'est l un des cueils sur
lesquels les dbutants chouent le plus frquemment, car les
conditions raliser sont trs variables, suivant la puissance des
objectifs et la nature de la prparation. L'image microscopique est
d'autant plus lumineuse que le grossissement est plus faible. Il
faudra donc, avec les objectifs faibles, diminuer l'clat de l'image
le jeu du diaphragme-iris ou l'emploi de verres
contraire, avec les objectifs forts, on donnera au
microscope le maximum d'intensit lumineuse compatible avec la
dlinition, et on rduira la luminosit du plan du dessin par des
microscopique par
fums;
au
verres fums ou des crans convenablement disposs.

Les appareils dessiner d'Abbe sont toujours munis de verres
fums, au moins sur
Dans
le
modle
trs
rayons rflchis parle miroir.

la
de
complet
figure 72, il y a deux sries de
le
trajet des
ces verres fums. La srie suprieure, destine rgler l'intensit

lumineuse de l'image du papier, est dispose autour d'une bonnette R, place sur le cube d'Abbe. Cette bonnette porte six
ouvertures circulaires, dont cinq sont garnies de verres fums
1. Les myopes doivent travailler au microscope sans lorgnon, sauf lorsqu'ils
dessinent la chambre claire.
LE MICKOSGUP ET SES AGCESSOIUES
122
plus OU moins opaques. On place Tune ou l'autre de ces ouvertures

sur le trajet des rayons rllchis par le miroir; elle y est maintenue par un cran qui pntre dans une encoche correspondant
chaque ouverture. L'clat de Timage microscopique peut tre

modifi au moyen du disque tournant B, qui porte six ouvertures
semblables celles de
la
bonnette.
Ce modle possde aussi deux cubes d'Abbe interchangeables,

dont les ouvertures sont respectivement de 1 et 2 mm. Le cube de
2
mm.
est destin
aux
-Ai
faibles grossissements;
il
permet
(l'iilihser
%..23^
Grand appareil dessiner d'Abbe.

Figure montrant la manire
Fig. 7o.
d'carter du champ optique l'ensemble form par lo cube d'Abbe et les deux
systmes do verre fums. Mmes lettres que pour la figure 73.
toute rtendue du faisceau mergent.
Le changement des cubes
se fait trs facilement, en enlevant la bonnette i)ortant les verres
fums
la monture du cube dans ses rainures

Le
du cube est efteclu ensuite au moyen
exact
(fig. 72).
centrage
des deux vis H et L dont nous avons ])ari pour qu'il soit parfait,
il faut
que le petit cercle lumineux, correspondant Timage de
l'ouverture de l'objectif donne par Toculaire (pupille d'mergence),
et
en faisant glisser
concide avec l'ouverture circulaire du prisme.

Pour carter du champ le cube d'Abbe et rendre libre l'oculaire,
il
sufhl de faire tourner
la
partie suprieure de l'appareil
autour de l'axe Z. L'image en pointill

velle position
que
l'on obtient ])ar ce
(fig.
73) reprsente
la
nou-
mouvement.
L'appareil dessiner de lieichert (fig. 74) tient le iniliou entre celui

d'Albe et les ctiambres claires ordinaire-^. Il possde le grand miroir
du premier et a un pelit prisme triangulaire la place du cube d'Abbe.
Goinine
123
face rtlchissante dp ce petit prisme est incline de 45",
la
le
Principe de Tapparcil dessiner de Reichcrt. P, prisme rflexion

M, miroir; xy. rayon lumineux provenant du microscope; abcd, rayon
lumineux provenant de la surface du dessin et rflchi en 6 et f
Original.
Fig. 71.
totale;
miroir devra avoir la rnme direction elle dessin sera excut sur une
surface horizontale.
CHAMBRES CLAIRES PROPREMENT DITES
II.
La chambre claire angle variable de Malasscz

coiistraite par Sliassiiie, est
constiUie essentiellement
(fig.
75),
})ar
deux
prismes, renferms dans une bote mtallique portant sa face

suprieure une ouverture dont une moiti est
couverte par Tangle d'un des prismes.

Cette ouverture doit concider avec
la
pu[)ille
pour ce l'aire, on
tube du microsle
du
dplace rajipareil
long
il est iix
une
cope, auquel
|ar
bague ressort.
d'mergence du
microscope
L'image microscopique est vue directement,

travers la moiti de l'ouverture qui n'est pas couverte
est
jiar
l'arte
perue
deux
du prisme. L'image du papier
travers
cette
arte,
aprs
Fig. 75.
claire
Chambre
variable de
angle
Ma-
lasscz.
avoir
des prismes.
Cet appareil est construit sur le principe de l'ancienne chambre
il est form de deux prismes
claire de Doyre et Milne-Edwards
suivi
rflexions
totales
sur
les
faces
77)
(fig.
1.
C.
Iriangulaires,
B. Soc.
biol..
XXVir,
angle droit.
p. 277--279, 1885.
Le
pelil ]>risme
est plac
124
au-dessus de
1
oculaire, le grand prisme est fix lalralement.
La figure 77 montre que les surfaces rflchissantes de ces
prismes ne sont pas parallles; il est donc ncessaire, pour viter
une dformation de l'image, que le plan
du dessin soit inclin suivant un certain
angle.
Les deux principaux inconvnients de

ce dispositif sont
1^ Tobligation de dessiner sur un plan dune inclinaison
:
2" Tingalit d'clairage

diffrentes zones des deux images,
des
donne;
Manire de desFig. 76.

siner avec la chambre
claire
galit
due
ce
que
la
in-
moiti de la pupille
est couverte par Farte
d'mergence
du
de
Malassez, le
grand prisme et le microtant
inclins
45.
scope
prisme.
Cette
chambre
ploye
claire
avec
ou avec
le
peut lre em-
microscope
ver-
microscope inclin.
Il suffit
pour cela de faire varier
l'angle que forme son axe optique
tical
JC
II
i^:
le
avec celui du microscope, en tournant un bouton dont l'axe porte
un index, indiquant deux
\
'3/
positions
extrmes du grand prisme, 18

et 45. Lorsqu'on dessine avec
le microscope vertical, on donne
au prisme Tinclinaison de IS'^. La
chambre
^
\
Fig. 77
Principe de la chambre
claire de Malassez.
O, prisme
-
oculaire; P, grand prisme; xy,

rayon lumineux provenant du miabcd, rayon lumineux
croscope
provenant de la surface du dessin.
;
Original.
claire
doit
alors
tre
tourne du ct droit du micros-
cope
du
papier dessin plac
et le
mme
ct.
Pour
viter
les
dformations, il est indispensable

que ce papier repose sur une
planchette
exemple
incline
la
de Malassez
de 18, par
planchette dessiner
qui convient parti-
culirement pour l'emploi de cette chambre claire. Le sommet

de l'angle d'inchnaison doit tre dirig du ct du microscope.
Lorsque la nature de la prparation permet d'incliner le microscope,
il
est
beaucoup plus commode de donner au prisme un angle

la chambre claire en arrire du
de 45. Dans ce cas, on tourne
microscope
et,
scope 45.
au lieu crincliner
On
le
25
papier, on incline le micro-
commodment
peut ainsi dessiner
dans une situation analogue celle qui
est
sur
la table,
reprsente par
la
figure 76.
Si on veut interrompre le dessin pour examiner l'image microscopique, il suffit de rabattre la chauibre claire qui tourne autour
d'une
charnire
horizontale.
L'instrument
autant de fois qu'il est ncessaire,
il
peut
tre
dplac
reprend toujours sa position
primitive.
L'emploi de cette chambre claire est agrable, car
d'mergence du microscope arrive directement
lopil,
le faisceau
sans avoir
subi ni rflexion, ni rfraction; l'image microscopique n'est donc

ni dforme, ni obscurcie. L'image du papier et du crayon ne
prsente pas de double contour. Grce au petit volume du prisme

plac au-dessus de l'oculaire, on peut apercevoir tout le champ
du microscope.
ISanmoins, il faut une certaine habitude pour bien se servir
de cet appareil. Gomme le faisceau d'mergence est divis par
l'angle du petit prisme, il est ncessaire, pour voir nettement la
fois l'image microscopique et la pointe du crayon, que le centre
de l'ouverture pupillaire de l'observateur concide avec l'arte
du
petit
prisme. Si
la
pupille dvie tant soit peu droite ou
que
prparation ou que la pointe du crayon.
grave dfaut de cet appareil est de ne possder aucun dispositif permettant de raliser
l'galit d'clairage des deux champs.
gauche, on ne
voit
la
Un
La chambre claire de Dumaige ne
diffre
de celle de Malassez
que par la prsence d'un miroir la place du grand prisme P.

Elle donne un champ remarquablement tendu et bien clair.
G'est un des meilleurs appareils qui existent pour dessiner de
faibles grossissements
ou
mme
directement.
La chambre claire de Nachet

79) R, auquel
est
forme d'un prisme rbom-
est coll latralement, par sa face
hypoprisme triangulaire angle droit P. G'est ce

petit prisme qui est plac au-dessous de l'oculaire, auquel il prsente un des cts de son angle droit. Le faisceau mergent du
bique
(fig.
tnuse,
un
petit
microscope traverse donc ce petit prisme, ainsi que l'arte du

prisme rhombique. Les rayons mis par la surface du dessin sont
rflchis en b et en c et suivent alors la
mme
direction
que
le
faisceau xy.
Ces deux prismes sont enferms dans une
bote
mtallique
126
78j.
(fig.
Deux
orifices
correspondent aux points d'entre
et
de
du rayon xy; une partie de la lace infrieure du prisme

rliombique est libre pour laisser pntrer les rayons mis par le
dessin. Un verre fum, port par un anneau mobile autour d'un
sortie
Principe de la chambre claire

de Nachet.
R. grand prisme rhom-
Fig. 79.
Fijj;.
IS.
Chambre
bique; P, petit prisme triangulaire. Les

antres lettres comme dans la figure "77.
claire
de Nachet.
Original.
axe excentrique, peut obscurcir volont le cbamp du microscope

on ralise ainsi Tgalil d'clairage de ces
ou celui du dessin
:
deux cbamps.
Lorsque les deux faces rilcbissantes du prisme rbombique
sont parallles, on peut dessiner sur
une surface borizontale. Cet appareil

son
deux inconvnients
:
prsente
sa
est troil et
cliamp
cause de
faible
la
luminosit est
perle de lumire
qui se produit, par rflexion,
le
au
rayon xy pntre dans
prisme rbombique.
h'oculaire dessiner de
appartient
il
truments;
Fig. 80.
des rayons
oculaire
l'arte
Zeitschrift
f.
^.\^^yq
cet
Leitz
catgorie d'ins-
quelques
nous allons tudier.
une simple cbambre

oculairc
cst uu
appareil
^
^
combmc
dessiner de Leitz.
coup par
mme
grand
se distingue par
particularits que
Au lieu d'tre
- Marche
lumineux dans
la
moment
le
avcc
11
prismc rboiubique
Le faisceau mergent est

fig. 80).
du prisme, comme dans les appareils prc-
wiss. Mikr.,
XIL
P- 289, 1895.
dnis, mais
comme
ici
dans
la
127
l'image du papier est rHcliie par ce seul prisme,

chambre claire de Nachel.
Cet oculaire est fabriqu en deux modles, suivant qu'il doit

servir avec le microscope vertical
ou avec le microscope inclin
45".
L'oculaire
avec
est
deslin
dessiner
microscope vertical (fig. 8)

tourn du ct droit du microsle
papier est plac du

cot, sur une planchette
incline de 12, car les deux faces
le
cope;
mme
du prisme rhomhique ne sont pas parallles. Au

contraire, avec l'oculaire deslin
rflchissantes
dessiner au microscope inclin

45, le papier doit tre plac
horizontalement, derrire le pied

ilu
microscope. L'oculaire est
tourn dans cette direction, ainsi
lit
montre
figure 76. L'gadeux champs

des
d^clairage
(juc le
la
Oculaire dessiner do
Fig. SI.
Leitz. Modle destin servir avec
le microscope vertical. A gaucho
vis de pression, droite la Lote
et les deux bras articuls
portant des verres fums.
du prisme
peut tre ralise, dans les deux

modles, au moyen de disques de verre fum, fixs au-dessous
du prisme deux bras mobiles (lig. 81).
III.
AUTRES APPAREILS
DESSINER
Nous ne mentionnerons que pour mmoire la chambre claire d'Obercet instrument a t trs employ autre.'"ois, mais il a d cder
la place aux appareils miroir cause de son incommodit. Il est construit sur un principe exactement inverse de celui des autres chambres
claires
le plan du dessin est vu directement, tandis que l'image
microscopique subit deux rflexions avant de parvenir Til de l'obhauser
servateur.
La chambre claire d'Oberhauser est forme de deux cylindres placs

angle droit. Le cylindre vertical pntre dans le tube du microscope,
la place de l'oculaire qui doit tre enlev. Les rayons qui proviennent
de l'objectif sont rflchis par un premier prisme et envoys dans un
oculaire plac dans le cylindre horizontal (fig. 82), puis ils sont rflchis
une seconde fois par un petit prisme qui les envoie dans la direction
de l'il de l'observateur. Ce petit prisme est fix au centre d'un anneau
128
mtallique travers lequel Tobservateur voit en

du dessin.
Comme
mme
temps
le
plan
deux surfaces rflchissantes sont parallles et inclines

de 45", le plan du dessin doit tre horizontal.
L'appareil d'Edinger ne saurait tre dcrit ici, car il n'est pas destin
tre install sur un microscope. Cet instrument est destin projeter
les
dessiner de grandes prparations un faible grossissement. La

prparation est fortement claire par une lampe et un systme de
et
P, grand prisme p,
Principe de la chambre claire d'Oberhauser.
petit prisme; O,- oculaire; T, tube vertical a:'?/, faisceau mergent rflchi en
P et p; ab, faisceau provenant du plan du dessin.
Original.
Fig. 82.
miroirs et de lentilles. L'objectif projette son image sur

ou au foyer d'une chambre noire photographique.
IV
EMPLOI DES APPAREILS
le
plan du dessin
DESSINER
La seule difficult du dessin la chambre claire consiste

un clairage gal de la prparation et du papier sur lequel
obtenir
on dessine, de manire ce que les deux pupilles soient galement

En effet, avec les objectifs faibles, l'image microscopique
dilates.
le papier et rend la pointe du crayon

tandis qu'avec les objectifs forls le papier est
et les contours de l'image microscopique sont
est plus
claire
presque
invisible,
trop
lumineux
que
peine perceptibles.
On
le
arrive raliser cette galit d'clairage en intercalant, sur

des rayons mans de Tune ou de l'autre source, des
trajet
verres plus ou moins colors.
En
ce qui concerne l'image micros-
copique, on a encore la ressource du diaphragme-iris. Une fois

qu'on a obtenu l'galit des deux clairages, on doit voir avec
une gale nettet la pointe du crayon et l'image de la prparation.
Lorsqu'on a dtermiu le point de la prparation qui doit tre

dessin, on installe la chambre claire sur le tube du microscope,
puis on dispose
la
suivant
le
arrire,
129
de papier ct du microscope ou en
modle de Tappareil dessiner. Le plan du
feuille
dessin doit se trouver la distance de la vision normale, c'est-dire environ
250 mm. de
ne
celui-ci
que
hypermtrope.
soit
ne
Il
ni
l'il
myope,
de l'observateur, en supposant
ni
a.
pas, en
soient ga-
.O/
suffit
c^fT
que les deux champs

lement clairs, pour qu'on peroive
nettement et sans fatigue l'image de
effet,
prparation et celle du crayon. Il

que ces deux images se
la
faut encore
trouvent
la
ta
mme
distance, de faon
deux yeux n'aient pas

que
effectuer des efforts d'accommodation
ce
les
pour deux distances diffrentes. Or le

microscope est construit de telle faon
102) que l'image microscopique
forme un peu au-dessous
(p.
0"
dfinitive se
b'
platine (lig. 60), 250 mm. de

la rtine. Le plan du dessin sera donc
de
la
tabli la
mme
faut
hauteur.
encore
En
ra-
obtenir
images,
la
superposition exacte des

que la distance de l'il
l'image
la
microscopique
longueur a' cd b'.
donc, par ttonnements,

plan du dessin, de
du
mieux
le
soit
On
la
gale
rglera
hauteur
il
Schma
du dessin 0"0"'
et de l'image
00', assurant
superposition exacte de
l'image du crayon et de l'image
de l'objet; ab, distance de l'il
l'image de l'objet; a'cdb',
distance de l'il au plan du
microscopique
la
dessin.
Original.
manire
jiossible cette
des efforts d'accommodation. Si
normale,
d'un microscope muni de Tappareil dessiner

d'Abbe, montrant les
rapports de hauteur du plan
Fig. 83.
faut
il
assurer
tenir
compte
du trajet effectu par les rayons
lumineux dans la chambre claire. La
figure 83 montre en effet que, pour
lit,
il
concidence et pargner l'il

la vue de l'observateur n'est pas
faudra se servir de verres correcteurs.
Les pupitres dessiner, tel (jue celui que reprsente la figure 84, sont
parliculircment commodes pour raliser ce dispositif. Ce pupitre, dit
pupitre de Bernhard i, peut tre lev volont jusqu' la hauteur de
1.
Bernhard, Ein Zeichentisch fur mikroskopische Zwecke. Zeitschr.
Mikr., IX,
p. 439-445, 1892, et
M. Langeron.
XI, p. 298-301, 1894.
f.
tciss
130
17
cm. au-dessus du plan de
la table.
La
tablette suprieure peut tre
incline jusqu' 35", lorsqu'on emploie des chambres claires sans miroirs.
En outre, la planche qui supporte le pupitre et le microscope peut s'incliner aussi vers l'observateur, pour lui permettre de dessiner commodment avec le microscope inclin en arrire. Aucune dformation du
dessin n'est craindre, puisque le microscope et le plan du dessin sont
dplacs
solidairement. Enfin un
appuie-bras
permet
d'viter
toute
fatigue. La figure 84 montre l'appareil de Bernhard dispos avec le microscope inclin en arrire et la planchette dessiner incline par rapport
Fig. 84.
Pupitre dessiner de Bernhard (Zeiss).
l'horizontale. En effet, bien que la chambre claire d'Abbe permette

de dessiner sur un plan horizontal, condition que le miroir soit inclin
45, il arrive, dans ce cas, qu'une partie de l'image n'est pas projete
sur le papier, surtout si on dessine au niveau de la table, ct du pied
du microscope. Pour pouvoir dessiner toute l'tendue du champ, il faut
modifier l'inclinaison du miroir; mais alors, pour viter la distorsion
de l'image, il faut incliner aussi le plan du dessin. C'est ce cas particulier que reprsente la figure 84. La planchette doit tre incline de telle
sorte que, pour une position donne du miroir, la droite (jui joint le
centre du miroir au centre du champ dessiner soit perpendiculaire au
plan du papier.
Il
y a plusieurs moyens de s'assurer que rinclinaison
dessin est correcte et que l'image est exempte de distorsion.
du
Le
131
plus simple consiste dessiner le contour du champ du microson doit obtenir un cercle parfait, ce dont on s'assure en
cope
:
mesurant deux diamtres perpendiculaires. Si on trouve une

ellipse c'est que Tinclinaison est mauvaise; il faut la modifier
jusqu' ce qu'on obtienne un cercle. Une mthode plus prcise
consiste employer le micromtre objectif (p. 179); on en dessine
les divisions en plaant successivement l'chelle
gradue dans deux
directions perpendiculaires. Les traits
tre quidistants sur toute la surface du
tifier
que
l'on dessine
champ, sinon
doivent
faut rec-
il
l'inclinaison de la planchette. Cette opration doit tre faite
avec un grossissement assez fort (au moins 200 diam.), afin que
les traits soient spars
Fig. 85.
par une distance suffisante.
Comme
ces
Pupitres dessiner de Leitz.
traits ont une certaine paisseur, il faut suivre avec le

crayon soit
leur partie mdiane, soit un des bords.
La figure 8.0 reprsente d'autres pupitres dessiner plus simples, dont

l'un est inclin de 12" et est destin dessiner avec l'oculaire-chambre
claire de Leitz; l'autre, tabli d'aprs Giesenhagen, est susceptible de
fournir toutes les hauteurs et toutes les combinaisons.
Si on ne possde pas de table dessiner spciale, rglable
tous
sens,
livres, etc.,
on
installe
une
tablette,
une
au moyen desquels on rgle
la
boite,
une
hauteur
pile
et
en
de
l'incli-
naison du papier dessin. Le tout doit avoir la plus grande fixit

possible, car le moindre dplacement et mme les vibrations nuisent Texactitude du dessin. Le papier devra donc tre
dement au support, par exemple au moyen de punaises.
On doit employer du papier blanc, pais, grain
fix soli-
trs
fin,
supportant bien la gomme effacer (papier bristol et papier Whatman). Les crayons seront de la meilleure quaht, de prfrence
en graphite, mais, en ce qui concerne leur duret, les avis sont
132
numros les plus durs, d'autres

des
mines
cela dpend surtout de la
tendres
plus
prfrent
lgret de la main. Personnellement, je prfre les crayons trs
durs, tels que le 6 H de Faber ou de Hardtmuth, taills en pointe
partags. Les uns emploient les
fine et
trs
allonge; je reproche aux numros plus tendres de

vite, de ncessiter un taillage trop frquent et de
s'mousser trop
trait plus tal et moins prcis. Pour aiguiser la pointe

du crayon, le mieux est d'employer une lime spciale ou encore
du papier de verre ou d'meri trs fin. On trouve dans le commerce
donner un
des petits blocs de papier de verre trs commodes pour cet usage.
Les meilleures gommes effacer sont celles qui sont souples et
molles, par exemple la gomme lphant de Hardtmuth. Il existe
une gomme, dite gomme mie de pain, qu'on peut

de forme quelconque; nous recommandons
lettes
qui ne tache jamais le papier, n'attnue pas les

permet de faire des boulettes pointues, trs
corriger de petits dtails.
Lorsque
les
ptrir
en bou-
celte
gomme
traits l'encre et
commodes pour
contours doivent tre suivis avec une grande exactitude,
est prfrable de dessiner la plume, dont la pointe ne s'mousse

pas comme celle du crayon. Le trait Tencre est plus visible que le
il
de crayon, travers l'image microscopique, parce qu'il laisse une

trace noire et mate. Ce procd n'est pas la porte de tout le monde;
il faut une main trs sre et trs exerce pour dessiner directement
trait
la
plume.
Les meilleures plumes dessin sont les plumes Brandauer (de Birmingham) n 518 on peut employer aussi les plumes Joseph Gillott
n" 291. L'encre sera toujours de l'encre de Chine liquide.
:
Dans certains
cas, lorsqu'il s'agit de prparations trs fonces,
il
y a
avantage dessiner sur du bristol noir, avec un crayon jaune ou blanc,

dont on peut suivre plus facilement la pointe. Il est plus simple encore
de placer sur le papier dessin une feuille de papier noir dcalquer,
immobilise par un poids ou par des punaises. On suit alors les contours de l'image microscopique avec une fine pointe blanche, par exemple
une grosse aiguille mousse sur une pierre aiguiser et emmanche sur
une tige de bois. On dessine lgrement les contours et les principaux
on enlve
manire ordinaire.
dtails, puis
la
le
papier dcalquer
et
on achve
le
dessin
Quelle que soit l'habilet du micrographe, la chambre claire

ne peut donner que le contour de l'image et la mise en place des
principaux dtails. L'achvement dfinitif ne peut tre fait la
chambre
claire;
tivement
la
la
on terminera donc
le dessin en regardant alternaen s'efforant de rendre, avec

et
papier
prparation
plus scrupuleuse exactitude, l'as^êct de l'image microscopique.
et le
133
dessins excuts la cliambre claire constituent

des documents prcieusement conservs. Lorsque le dessin doit tre
reproduit pour une publication scientifique, il est prfrable de le calquer sur papier transparent avec un crayon demi-tendre. On reporte
ensuite ce calque sur bristol, en intercalant une feuille de papier bleu
dcalquer, ou simplement une feuille de papier pralablement frotte
de crayon bleu. Le tout est bien immobilis au moyen de poids ou de
punaises. On passe alors sur les traits du calque une pointe fine et bien
lisse en mtal, en buis ou en ivoire. Lorsque le dcalque est termin,
on enlve les deux papiers minces et on excute le dessin la plume.
Les traits bleus ont l'avantage d'tre invisibles sur la reproduction photographique en zincographie, c'est pourquoi nous conseillons de dcal-
Gnralement,
les
quer en bleu. Bien entendu, un gommage sôigneux doit

grande partie de ces traits '.
faire disparatre
la plus
La lumire du jour est celle qui est la plus favorable au dessin

chambre claire, du moins pour les grossissements faibles el
la
moyens.
Lorsqu'il s'agit de dessiner des objets trs fortement

que des Protozoaires, des Bactries avec flagelles, etc.,
grossis, tels
souvent avantage clairer le microscope la lumire artificielle, de manire galiser plus facilement l'clairage des deux
il
champs. Quel que soit le mode d'clairage, il faut disposer des

abat-jour ou des crans (fig. 95 et 98) de telle sorte que les yeux
reoivent aussi peu que possible de lumire trangre, c'est--dire
autre que celle qui ])rovient du microscope et du papier. Dans
certains cas,
il
est ulile
de diminuer considrablement
manire gale lclairage des deux champs.
On
et
d'une
obtient ainsi
meilleure dfinition des objets et un largissement de

qui facilite la perception des lins dtails.
la
une
pupille
La mensuration des dessins et la dtermination du grossisseseront tudies au chapitre des mensurations microscopiques.
ment
Notons simplement ici l'impoiiance de cette dtermination qu'on

ne devra jamais ngliger, sons peine d'avoir des documents de peu
de valeur. 7'out dessin doit tre accompagn d'une chelle
reprsentant la valeur de 4
(p. 179).
;jl
1. Le cadre de cet
ouvrage ne nous permet pas de nous tendre sur le dessin
micrographique; on consultera avec fruit sur ce sujet Husnot, Le dessin d'histob'e naturelle, in-8 de 19 p., 6 pi., 1900. Chez Tauteur Cahan, par Athis, Orne.
Extrait du Bull. Soc. linnenne de Normandie, 5" srie, III, 1900.
:
CHAPITRE
XI
CHOIX D'UN MICROSCOPE

Nous ne pouvons donner ici que des indications trs gnrales
en ce qui concerne le choix d'un microscope. 11 serait beaucoup
trop long d'numrer tous les modles des maisons srieuses
Les exemples que nous avons choisis
du microscope, pourront donner
franaises et trangres.
dans
la partie
descriptive, traitant
une bonne ide des modles les plus appropris aux divers genres
de travaux micrographiques.
Pour le travail de haute ])rcision et pour les recherches sur
des groupes difficiles, tels que les Protozoaires, ou sur des questions de cytologie fine,
monture
munie
il
est hors
de doute qu'il faut choisir une
des
perfectionnements les plus complets et

pourvue d'objectifs, dont un au moins, immersion, doit tre
apochromatique. En effet, pour ces observations trs dlicates,

de petites diffrences dans la correction des objectifs, dans leur
pouvoir dfinissant et
de temps et de fatigue
rsolvant,
peuvent pargner
beaucoup
permettre de voir nettement des dtails

qu'on ne saurait prciser avec des instruments moins parfaits. Ces
petites diffrences, dont l'avantage est insensible pour le travail
et
courant, peuvent favoriser considrablement le chercheur et lui

permettre "des dcouvertes et des interprtations impossibles avec
des objectifs mdiocres. De mme, pour

perfection de la partie mcanique et de
la
microphotographie,
la partie
la
optique est une
condition indispensable de russite.
Nous avons dit que, pour le travail courant, les objectifs achromatiques sont parfaitement suffisants. Nous allons donc indiquer
quels sont les grossissements qui, notre avis, sont les plus favorables et dcrire le modle
qui nous parat le plus pratique pour
tous les travaux.
CHOIX d'un microscope
135
Il
faut d'abord se procurer une
Choix d'un modle.
monture qui permette l'emploi de tous les objectifs et de tous les
Mme si on dispose de fonds limits et si on
appareils accessoires.
que de combinaisons optiques
n'a besoin d'abord
On
travaux.
tous les
la
trs simples,
un modle grand ou moyen, permettant
faut acheter
il
d'effectuer
pourra toujours, dans l'avenir, complter

et mesure des besoins, tandis
que si
au fur
partie opti(|ue,
on achte un
petit microscope, on se trouve, au bout de quelques

annes, possesseur d'un instrument insuffisant et quelquefois inutilisable. De l double dpense et perte d'une somme qu'on aurait
mieux employe complter les combinaisons optiques. On choisira donc un grand modle ou un moyen modle, qui devra satisfaire aux conditions que nous allons numrer.
Il faut choisir, autant que possible, un microscope inclinant.
Bien qu'on soit oblig, la plupart du temps, de travailler avec le
microscope vertical, il est bon de disposer du mouvement d'inclinaison pour effectuer sans fatigue des examens prolongs.
La platine devra tre fixe; sa forme ronde ou carre a peu
d'importance, pourvu qu'elle soit de grandes dimensions et munie
vraiment pas pourquoi les constructeurs
des platines tournantes, mcanisme de
centrage m par deux vis de rappel. La platine tournante a sa
raison d'tre dans les statifs destins la microphotographie et
d'un chariot. Je ne
sais
fabriquer
s'obstinent
plus encore dans les
minralogiques. Pour le travail couEn effet, on ne se sert pour ainsi
statifs
rant elle est trs insuffisante.
du mouvement tournant quant au mcanisme de

est videmment trs commode pour pratiquer des
centrage,
mensurations ou pour amener au centre du champ un dtail par-
dire jamais
il
Mais
ticulier.
mme
trs
arrt par le
dplacer
cement
on tente de
de
la
l'utiliser
pour explorer une surface,

on est tout de suite
prparation,
peu d'amplitude du mouvement. On ne peut en effet

que dans deux directions obliques, et ce dpla-
la platine
est limit
par
la
trs faible
longueur des
vis.
En
ralit,
prparation des arcs de cercle qui se coupent

au hasard, sans qu'il soit possible de parcourir mthodiquement
une rgion, si peu tendue qu'elle soit, ni de pouvoir retrouver un
on
si
restreinte,
fait
dcrire
la
point dj vu. Je considre donc la platine tournante comme une

complication tout fait superflue, dont un des multiples incon-
vnients est d'augmenter inutilement le prix du microscope.
La vraie
platine microscopique est la platine chariot,
deux
LE MICKOSCOl'E ET SES ACCESSOIUES
136
mouvements
rectangulaires, permettant d'explorer compltement

mthodiquement toute la surface d'une lame porte-objet.
Quelques constructeurs en ont enfin compris la ncessit et se
sont dcids crer des modles grands ou moyens avec platine
chariot, fixe ou amovible. Sans parler de la grande platine
et
chariot de Zeiss, dcrite et figure plus haut (p. 13), je citerai le

grand modle platine exploratrice de Stiassnie (fig. 8), puis, du
mme constructeur, le microscope n IV (modle Calmelte), platine exploratrice et le
microscope moyen (modle Malassez),
}>la-
line carre chariot.
dfaut d'un de ces modles, on devra choisir un statif platine

fixe, sur laquelle on fera adapter un chariot amovible. Tous les bons constructeurs ont un ou deux modles de
carre et
ces chariots, qu'on peut mme adapter aprs coup au microscope platine carre, si on n'a pu faire de suite la dpense d'un
L'conomie qu'on ralise en supprimant la platine tournante reprsente une partie du prix du chariot; le supplment
de dpense occasionn par ce dernier est amplement compens
chariot.
par les services rendus.

prix trs abordable, par
dont
le prix est
On
trouve d'ailleurs des chariots d'un
exemple
le petit
modle de Leitz
(fig.
13),
de 63 francs.
Vappare'd d'clairage
est
d'une inq>ortance capitale.
Il est
indispensable de possder un condensateur Abbe

grand modle, avec diaphragme-iris. Par contre, les dispositifs
comi)liqus des constructeurs allemands, comprenant la crmail-
absolument
lre
pour l'clairage oblique,
le
condensateur charnire
diaphragme-iris coupole, sont
mouvements indispensables sont

mise au point du condensateur
le
peu prs
inutiles.
et le
Les seuls
dplacement vertical pour la

le dplacement latral pour
condensateur hors de l'axe optique, au
carter
et
rapidement le
de l'emploi des objectifs trs faibles. Ces mouvements
peuvent tre excuts au moyen d'une crmaillre, d'une vis
d'Archimde ou mme d'un levier bascule (Stiassnie). Le dia-
moment
phragme-iris coupole, destin rgler Tclairage par

seul,
est
un organe coteux
et superflu.
D'aprs
nous avons poses pour l'clairage du microscope,
employ seul qu'avec
les
l'emploi d'un diaphragme
objectifs trs faibles,

iris ou cylindre est
le
miroir
les rgles
le
que
miroir n'est
pour lesquels
compltement
inutile.
Quel que
soit le dispositif
du condensateur,
il
doit permettre

d'installer facilement
un condensateur
de polarisation. C'est
137
fond noir
ou un
ai)pareil
une condition indispensable.
La mise au point devra, de toute nfcessit, possder le mouvement rapide par crmaillre et le mouvement lent par vis micromtrique. Un des avantages les plus srieux de la nouvelle mise
au point avec axe horizontal, mouvement dmultipli et vis sans
fin, est de permettre de saisir le microscope par la potence, sans
exposer la vis micromtrique une usure rapide comme dans les

anciens modles. En effet lorsqu'on saisit par la potence un ancien
microscope, tout le poids de la portion infrieure de 1 instrument
vis micromtrique, par l'intermdiaire de la colonne
creuse.
C'est principalement cette considration (|ui
prismatique
porte sur
la
nouveau mouvement micromtrique.

Le tube devra tre tirage et ])orter une graduation millimtrique; nous avons ai)pris en connatre la ncessit pour corriger
fera prfrer le
l'paisseur des lamelles.
Le revolver porte-objectifs est de la plus absolue ncessit.

Nous conseillons vivement de prendre un revolver pour quatre
objectifs. Une longue exprience nous a appris que le revolver

trois, qui a mallieureusement la prfrence des constructeurs, est
})ratiquement insuffisant. Mme si on n'achte au dbut que deux
c'est l une
objectifs, il faut prendre un revolver (juatre places
:
prcaution que nous ne saurions assez recommander. On a toujours se repentir de faire adapter a}rs coup un autre revolver
sur un ancien
stalif.
La composition optique noimale d'un microscope doit comprendre, notre avis, quatre objectifs et au moins deux oculaires.
Un microscope complet doit possder quatre

dont
trois
sec et un immersion. Ce dernier sera choisi

objectifs,
suffisamment })uissant, il faut viter les immersions 1/10 ou 1/12,
Les objectifs.
qui peuvent suflire pour la bactriologie, mais qui ne permettent

pas les recherches de protozoologie et ncessitent presque toujours
l'emploi de trs forts oculaires. La puissance de ces objectifs varie
du reste, suivant les constructeurs, pour une mme distance focale.
C'est ainsi que le 1/12 achromatique de Zeiss correspond peu prs

au 1/15 de Stiassnie et au 1/16 deLeitz (p. 91) ces trois types sont
de bons exemples d'objectifs immersion propres tous les travaux.
:
Les objectifs sec devront comprendre un numro faible, un

moyen et un fort. Les grossissements qui, notre avis, sont les
plus avantageux, corres[)ondent 40, 125,
300 diamtres (pour
138
un
oculaire faible)
voici trois
susceptibles de les fournir
exemples de combinaisons optiques
objectifs 2, 4, 6, de Stiassnie, 2, 4, 7,
de Leitz, A, G, E de Zeiss. Avec un oculaire moyen, le plus fort

objectif sec de ces trois combinaisons donne un grossissement
suprieur 500 diamtres, parfaitement suffisant pour toutes les
observations qui n'exigent pas l'emploi des objectifs immersion.
Je ne conseille pas l'emploi courant d'objectifs sec plus forts,
surtout pour les dbutants. En effet les systmes sec trs puissants sont gnralement peu lumineux, ce qui ncessite un
ti's habile de l'appareil d'clairage. De plus le choix de
ces objectifs doit tre trs svre, car ils sont souvent mdiocres,
emploi
mme
dans
les
meilleures maisons.
Deux oculaires suffisent pour le travail ordiLes oculaires.

ou 1 et
naire. Dans les oculaires d'Huyghens, on choisira un n*^
un
no 3.
Certaines
maisons, par exemple Stiassnie, fabriquent

achromatiques des oculaires d'une construction plus soigne, dont la lentille oculaire, au lieu d'tre simple,
est forme d'un systme de lentilles destin corriger la diff-
pour leurs
objectifs
rence chromatique du grossissement
(p. 57). Ces oculaires sont

oculaires compensateurs, car les
vritables oculaires compensateurs sont construits exclusivement
dnomms un peu improprement
pour
les objectifs
apochromatiques
(p. 95).
Quoi
qu'il
en
soit, les
meilleurs numros des oculaires compensateurs sont le 6 et le 9.

Les oculaires trs forts tels que le type Huyghens n 5 ou le
type compensateur n 18 peuvent tre utiles dans certains cas,

pour faire des numrations et grossir un dlail, mais ne sauraient
convenir pour le travail courant, cause de leur faible luminosit

de la fatigue oculaire produite par le peu de nettet de l'image.
L'oculaire micromtrique, du type
Appareils accessoires.
et
reprsent figure 108, ou au moins un micromtre oculaire amovible (fig. 109), est indispensable pour les mensurations. Il devra
un micromtre objectif grav sur verre, ncestalonner

l'oculaire micrometrique et pour tablir le
pour
grossissement des dessins.
tre complt par
saire
La chambre claire devra tre prise chez le mme constructeur

le microscope. Tous les modles de chambre claire que j'ai
que
dcrits sont bons
je les ai tous
expriments longuement
et je suis
certain qu'un oprateur, bien exerc au maniement d'un de ces

appareils, obtiendra toujours des dessins trs exacts. Le point le
plus important est d'avoir une chambre claire
bien adapte au
139
microscope, c'est pourquoi je conseille vivement de

chez le mme constructeur.
la
prendre
Pour prciser ces indications, je vais donner la composition de quelques types de microscopes, appropris divers ordres de recherches
microg-raphiques. Chacun de ces types est simplifi autant que possible
et reprsente le minimum indispensable pour chaque genre de travail.
1
Microscope permettant tous
les
travaux,
mme
les
plus dlicats.
Monture grand modle ou moyen modle inclinante platine

Platine chariot adhrente au microscope ou amovible;
Appareil d'clairage d'Abbe grand modle;
Revolver 4 objectifs
Objectifs
fixe.
numros sec et un immersion homogne;

trois numros dont un trs fort;
trois
Oculaires
Oculaire micromlrique;
:
Micromtre objectif;
Chambre
claire.
2 Microscope plus simple,
mais permettant encore d'aborder tous
les
travaux.
Monture moyen modle, inclinante, platine fixe;

Revolver 3 objectifs;
deux numros sec et un immersion homogne;
Objectifs
deux numros;
Oculaires
Oculaire micromtrique;
:
Micromtre objectif;
Chambre
claire.
Microscope pour travaux de systmatique, ne permettant pas la bactriologie, et peine la protozoologie et la mycologie.
Monture moyen modle, platine fixe;
Appareil d'clairage d'Abbe;
Revolver 2 (ou 3) objectifs;
deux (ou trois) numros sec;
Objectifs
Oculaires deux numros;
Accessoires comme plus haut.

4 Microscope de voyage pour naturalistes et mdecins.
Monture aussi peu complique que possible;
Platine chariot amovible;
3"

Revolver 4 objectifs;
trois numros sec et un immersion
Objectifs
Oculaires
deux numros
Oculaire micromtrique;
:
homogne;
Micromtre objectif;
Chambre
claire.
que ces devis d'appareils, combins avec les descriptions que

j'ai donnes de chacun des organes du microscope, suffiront pour guider
le choix du dbutant. Il existe trop de bonnes maisons de microscopes
pour qu'il me soit possible de citer tous les modles qu'on peut conseiller
je prfre donc n'en indiquer aucun. Toutes ces maisons envoient leurs
en rapprochant les donnes du catalogue des
catalogues sur demande
Je crois
indications que je viens de fournir,
il
sera facile de rdiger la
commande.
CHAPITRE
XII
ENTRETIEN DU MICROSCOPE
L'eiilrelien du microscope consiste le prserver de la poussire
des vapeurs acides et du contact des ractifs.
Pour le prserver de la poussire, il faut, lorsqu'on travaille
par intermittences, le remettre dans son armoire aprs chaque

sance. Les armoires, dans lesquelles sont livrs les microscopes
grands
et
moyens, sont construites de
introduire Tinstrument tout mont,
telle
muni de
sorte qu'on
peut y
ses objectifs et de sa
platine chariot. Rien n'est donc plus facile que de y ranger

on le retrouve prt servir lorsqu'on en a besoin.
Un trs bon procd consiste recouviir le microscope d'une
:
cloche de verre, mais
il
l'entre de la poussire,
une paisse plaque de
faut alors, pour empcher compltement

que rinsliumenl et la cloche reposent sur
feutre.
Les vapeurs acides sont encore plus dangereuses que la poussire; il

minier des ractifs pouvant dgager
ces vapeurs au voisinage du microscope et mme dans la salle o il se
trouve. H ne faut jamais i)lacer le microscope, mme enferm dans son
armoire, dans un placard o se trouvent des ractifs pouvant dgager des
vapeurs acides ou ammoniacales. Cette prcaution est trs importante,
car les dgts causs par ces manations ne se rvlent gnralement
que lorsqu'ils sont devenus irrmdiables.
faut donc viter absolument de
Un peu
de soin suffit pour prserver le microscope, et particuliredu contact direct des ractifs liquides. Lorsqu'on
elTectue des ractions microchimiijues, il faut se servir de larges lamelles
22 mm) et n'employer qu'une faible quantit de ractifs. On ab(22
sorbe l'excs de liquide avec des bandelettes de buvard pais qu'on doit
toujours avoir sa disposition sur la table de travail. Si, malgr toutes
les prcautions, l'objectif vient tre souill, il faut l'essuyer immdiatement avec un linge fin ou un peu de papier Joseph. Au besoin, laver
l'eau distille, avec le linge ou le papier buvard, puis scher avec soin.
Je crois inutile d'ajouter qu'il ne faut jamais toucher le microscope
ment
les
objectifs,
141
avec les doigts souills de colorants ou de ractifs, ni dvisser ou dmonter

aucun de ses organes. A part les cas que nous allons indiquer, il faut
s'adresser au constructeur ds qu'on constate une dfectuosit dans le
fonctionnement de la partie mcanique ou de la partie optique.
Nous allons passer en revue les soins que ncessite chacune des parties
du microscope.
Oculaires.
Un
point essentiel est de laisser toujours un

du microscope, surtout lorsque les objectifs
tube ou sur le revolver. On comprend en effet
oculaire dans le tube

sont visss sur le
qu'en Tabsence d'oculaire,

viendra souiller
la
poussire tombera dans le tube et

de l'objectif. Or cette len-
la
lentille postrieure
tille est
gnralement assez difficile nettoyer. Mme lorsque le
tube ne porte pas d'objeclil, il est essentiel de le prserver de la
poussire, car celle-ci s'altacbe la paroi interne et peut ensuite
donner lieu des jeux de lumire ou tomber sur l'objectif. Adop-
tons donc pour rgle de laisser

toujours
tube
un oculaire
datis le
du microscope.
Le nettoyage des lentilles de l'oculaire doit tre fait avec un

vieux linge trs doux et autant que possible non pelucheux. La
lentille oculaire est trs souvent salie
par la poussire et le contact
cils ou des
doigts; elle exige donc un nettoyage frquent.
Les poussires qui peuvent se trouver sur la face infrieure de
lentille oculaire ou sur la collectrice
apparaissent dans le
des
la
champ du microscope. Pour

il
suftit
de faire
aussi, dvisser et
laire. Si
on dvisse
marquer
quelle extrmit
Objectifs.
ment
peut
salie
par
mme
le
s'assurer qu'elles sont dans l'oculaire
tourner ce dernier. Si les poussires tournent

nettoyer la lentille collectrice ou la lentille ocu-
La
lentille frontale des objectifs
baume,
dire que,
deux lentilles, avoir bien soin de

du tube doit se trouver la collectrice.
la fois les
la
l'huile
de cdre,
plupart du temps,
l'image microscopique est cause par

frontale.
Nous engageons donc
est trs facile-
les luts liquides, etc.
la
la
on
mauvaise qualit de
souillure de la lentille
dbutant porter son attention

mauvaise qualit du microscope, de
le
sur ce point, avant d'accuser la

ou de la prparation. Lorsque la prparation est simplement monte dans un milieu liquide et n'est pas lute, il peut
arriver que ce liquide dborde la lamelle et vienne mouiller la
l'clairage
lentille frontale.
L'image devient immdiatement indistincte
et
il
faut se hter de nettoyer l'objectif, surtout

lorsqu'il est souill
par une solution acide ou alcaline. Le mme accident peut se
142
produire avec riiuile de cdre, lorsqu'on reprend avec un objectif

faible une prparation qui a t examine avec un
objectif
On enlvera Thuile de cdre comme il est indiqu

164.
p.
Les avis sont trs partags sur la manire dont on doit nettoyer
les lentilles des objectifs. Ranvier recommande la surface d'une
immersion.
cassure frache d'un morceau de moelle de sureau. Dans les labo-
o on n'emploie pas cet objet, on pourra se contenter d'un

vieux linge trs doux. Pour enlever les taches, on humectera ce
linge avec un dissolvant appropri (eau, alcool, tolune), en ayant
ratoires*
bien soin de ne pas inonder les lentilles et d'essuyer immdiatement aprs avec un autre linge bien sec. Souvent, il suffit de projeter l'haleine la surface de la lentille, puis d'essuyer
Pour enlever
les
pousires qui ont pu tomber sur
trieure de l'objectif, on emploiera soit
un pinceau
un morceau de moelle de sureau frachement

une allumette l'extrmit de laquelle on
tampon de vieux
Quel que soit
doucement.
la
face pos-
trs
taill
doux,
en pointe,
a attach
un
soit
soit
petit
linge.
le
procd de nettoyage adopt, deux prcau-
tions sont indispensables

1" Eviter de rayer les
:
lentilles,
pour cela n'employer
ni
linges neufs, ni peaux, mme les peaux de chamois, ni chiffons

souills de poussire. Pour enlever les poussires, employer de
prfrence un pinceau doux avec lequel on a moins de chance de

produire des raies.
2 viter de mouiller les lentilles, lorsqu'on emploie un dissolvant pour enlever les taches. Celte prcaution est surtout importante pour les hydrocarbures (benzne, tolune, xylol) qui, en
pntrant dans
la
baume du Canada
rsulterait
monture de
l'objectif,
peuvent dissoudre
qui colle les lments de ces lentilles.
une grave dtrioration. Voir page 164
les
Il
le
en
prcautions
spciales prendre pour enlever l'huile des objectifs immersion.

3'^
Ne jamais
dvisser les
lentilles.
Celte recommandation
demande tre bien comprise. Ce qu'il ne faut dvisser sous

aucun prtexte, c'est l'assemblage des lentilles des objectifs moyens
cet assemblage est d'ailleurs viss de telle sorte qu'il est
presque impossible d'y toucher, car il n'y a pas de molettes et le
nickelage a gnralement t fait aprs le montage. Mais on remar-
et forts
quera
parties
que
:
la
les
objectifs
moyens et forts sont diviss en deux

munie d'une molette, renferme le
partie infrieure,
143
systme optique; la partie suprieure est un simple tube, garni ou

non de diaphragmes, destin donner l'objectif la longueur
voulue. On peut sparer sans danger ces deux parties, de manire
nettoyer la face postrieure de l'objectif.

les objectifs faibles,
pour
ou les
lentilles
pour
Il
en
est
de
mme
dont on peut gnralement dvisser
la
les nettoyer.
Une rgle trs simple

munies de molettes. On
consiste ne dvisser
que
les
parties
sera sr ainsi de ne rien dtriorer.
Un
dvissage intempestif peut modifier le centrage des objectifs et les
endommager irrmdiablement.
Conservation des objectifs.

Lorsqu'on ne doit pas se servir des objecpendant un certain temps, il faut les enfermer dans leurs botes de
laiton. C'est le seul moyen de les prserver de la poussire et de l'humidit. On a renonc peu prs dfinitivement aux crinsqui les garantissaient trs incompltement. Si, au cours du travail, on a besoin d'un
nombre d'objectifs suprieur au nombre de places du revolver, on contifs
servera, sous
une
de verre, ceux qui ne servent pas
petite cloche
momen-
tanment.
Eviter avec soin
les chutes et les chocs qui dcentrent les lentilles et

dtriorent gravement les objectifs.
Altrations des lentilles.
Ces altrations, qui se manifestent par l'apparition d'un trouble ou d'une opacit, ne surviennent gure que sous les
tropiques et sont dues trois causes
1" Altration du verre des lentilles (jui se tache et se dpolit sous l'influence d'une atmosphre chaude et humide;
2 Vitrification duhaume du Canada qui unit les lentilles, sous l'influence
d'une temprature trop leve
3 Condensation de fines gouttelettes d'eau entre les lentilles. Ce dernier
accident est rare avec les objectifs bien monts. Il se rduit gnralement une bue qui recouvre les faces accessibles des lentilles. Cet
accident se produit aussi en hiver dans les pays temprs, lorsqu'on

passe le microscope d'une pice froide dans une pice chauffe, ou simplement par condensation de l'haleine au contact d'un microscope froid.
Les altrations dues aux climats tropicaux sont de moins en moins
craindre, car les objectifs modernes sont construits de manire tre
peu sensibles la chaleur humide. J'ai vu un certain nombre de microscopes revenir intacts aprs une longue campagne, par exemple en Afrique occidentale. D'ailleurs les maisons srieuses rparent toujours gratuitement les lentilles qui viennent se troubler par l'effet du climat.
Appareil d'clairage.
Le miroir
et les lentilles
du condensa-
teur seront nettoys, comme les autres lentilles, avec un vieux linge
bien propre et imbib au besoin d'un peu d'alcool ou de tolune.
Une propret
pour
la
parfaite de l'appareil d'clairage est indispensable

la bonne dfinition des images. Quelquefois,
luminosit et
14i
dans les micioscopes munis d'un condensateur indpendant du

miroir, on voit apparatre, dans le cliamp optique, des poussires
qui ne tournent pas avec l'oculaire et qui ne proviennent pas de
un lger dplacement vertical

Tobjeclif
sont
qu'elles
dposes sur le miroir.
:
du condensateur montre
On peut essuyer les

Entretien de la partie mcanique.
une peau, mais jamais avec un linge mouill
parties ternies avec
d'alcool ou de tolune qui dissoudraient le vernis et feraient des

taches indlbiles. La platine se nettoie avec une trace de vaseline.
ou la vis micromtrique ont besoin d'tre

une
trace de vaseline bien neutre ou mieux
graisses, employer
encore une trace d'huile d'os sans acide.
Lorsque
les crmaillres
CHAPITRE
XIII
L'OBSERVATION MICROSCOPIQUE
Les chapitres qui prcdent nous ont fait connatre la structure
et la manire d'employer chacun de ses organes. Il
du microscope
tait
ncessaire d'tablir ces notions fondamentales, car elles co-
nomisent beaucoup de temps et de ttonnements. Certains auteurs

affirment qu'on ne peut fixer de rgles pour l'emploi du microscope
que l'habitude seule doit enseigner la manire de disposer

l'clairage et de mettre en valeur les dtails des prparations. Je
et
ttonn mes
j'ai moi-mme longtemps
de
dcouvrir
des procds
beaucoup
temps
pass
d'observation que je ne trouvais dans aucun livre. J'estime donc,
au contraire, qu'il faut tracer le plus possible de rgles prcises,
ayant pour bases scientifiques les proprits physiques du micro-
ne suis pas de cet avis
dbuts
et
scope et de ses divers organes. L'application correcte de ces rgles

est bien une affaire d'exercice et de pratique mais leur connaissance est indispensable au micrographe. Si elles font dfaut
de refaire toute la srie d'expriences,
souvent infructueuses, qui ont permis ses prdcesseurs de tirer
l'lve, celui-ci est oblig
du microscope tous
les services qu'on est en droit d'en attendre.

Aussi allons-nous traiter maintenant de l'ob&ervation microsco-
la perception oculaire des images fournies

microscope, de la manire de raliser cette perception sans
fatigue et dans les meilleures conditions, enfin des erreurs et
pique, c'est--dire de
par
le
illusions d'optique auxquelles elle peut
I.
CONDITIONS
il
lieu.
DE LA VISION MICROSCOPIQUE
Pour interprter correctement

scope,
donner
les
images fournies par
le
micro-
faut bien connatre la nature de la vision microscopique.
M. Langeron.
Prcis de Microsopie.
10
146
Si on se rend bien compte que c'est une vision spciale, une

manire d'apercevoir les objets toute diffrente de celle laquelle
nous sommes habitus, on s'pargnera beaucoup de difficults et
d'erreurs.
une vision binoculaire qui nous donne la

du relief. Cette sensation est due la
superposition des deux images rtiniennes et la fusion des deux
perceptions correspondantes. Ces deux images ne sont pas
La
normale
vision
est
sensation de la distance et
identiques, elles diffrent d'autant plus que l'objet est plus que
rapproch; aussi la sensation de relief diminue-t-elle au fur et
mesure de Tloignement de cet objet. Au contraire, la vision

microscopique est une vision monoculaire nous devons donc, en
regardant au microscope, faire abstraction de l'ducation primitive
de
l'il et
apprcier par d'aulres moyens
le relief et l'paisseur
des corps.
Dans
la vision
le
normale,
mcanisme de l'accommodation nous
permet de voir nettement, l'un aprs l'autre, mais non simultanment, des objets situs diverses distances. Dans la vision microscopique, le 772cr/7?7e de V accommodation n entre pas en jeu^
nous ne percevons la fois qu'un seul plan trs mince de l'objet
examiner et, pour voir les autres plans, nous devons faire
varier la mise au point du systme oplique. Nous ne voyons donc
jamais qu'un seul de ces plans la fois et, pour nous faire une
ide
exacte de l'objet,
nous devons superposer par la pense

chacun de ces plans.
toutes les images lmentaires fournies sur
le grossissement du microscope est fort, plus grand est le

nombre de plans que nous devons mettre au point successivement,
Plus
et le relief d'un corps.

autre diffrence importante entre la vision ordinaire et la
vision microscopique rsulte de la nature de V clairage. Les objets
qui nous entourent sont vus par rflexion, grce la lumire
pour apprcier l'paisseur
Une
qu'ils
rations
diffusent.
est
transparence;
jouent un
Au
microscope, l'immense majorit des prpaen lumire transmise, c'est--dire par
examine
il
en
rsulte
que
les
rle bien plus considrable
phnomnes de rfraction
que dans la vision l'il nu.
ce point de vue, nous devons diviser les images microsco))iques

en deux groupes. Les unes sont fournies par des prparations
colores^ (jui agissent sur les rayons lumineux par absorption^
ces images ne montrent que la couleur et les contours des objets.
Les autres sont fournies par des prparations incolores-^ c'est le
l'observation microscopique
cas. des organismes
examins
l'tat trais, sans
147
coloration.
Ces
rayons lumineux par rflexion el

montrent non seulement les contours des objets,
prparations agissent sur les
rfracLion\ elles
mais encore les dtails de leur structure, simplement par des diffrences de rfringence ou par des contrastes de lumire et d'ombre.
La
vision microscopique diffre encore de la vision normale par

Touverture considrable du cne qui sert Fclairage
suite de
des prparations. Les dimensions de ce cne lumineux intluent

beaucoup sur la nature des phnomnes de rfraction.
Enfin
microscopique diffre essentiellement de la vision

nature du milieu dans lequel Laignenl les objets.
la vision
iiormale par
la
Nous sommes habitus
voir
autour de nous des corps plongs
dansFair: au contraire, au microscope, les prparations doivent

presque toujours tre montes en milieu liquide. En effet, d'une
part, le montage dans l'air est gnralement impossible, cause
des phnomnes de dessiccation et de racornissement qui l'accompagnent; d'autre part. Tinlroduction de l'air dans les interstices
des objets ou des tissus produirait des phnomnes de rfraction

tels qu'aucune structure ne serait discernable. Il faut donc monter
les objets
dans un milieu liquide, qui

de rfraction soit
tion et dont l'indice
les plus tins dtails.

Mais l'aspect des objets
les
prserve de
tel (ju'il
la
dessicca-
permette de distin-
guer
rfraction
du milieu. Si
milieu dans lequel
le
est plus rfringent
trs diffrent
est plong,
il
le
que
milieu,
suivant
l'indice
de
mme
l'objet a le
il
il
indice de rfraction que

devient invisible. Si l'objet
prsente les caractres d'un
moins rfringent que le milieu, il prend

apparences d'un corps creux. Ranvier a propos un excellent
corps solide; enfin,

les
est
s'il
est
On prend trois flacons

renfermant lespectivement de l'eau, du sulfure de
carbone et du baume du Canada; on plonge une baguette de
verre dans chacun de ces trois flacons. Dans le premier, la baguette
exemple pour concrtiser ces phnomnes.
semblables,
parat solide, parce

le
second,
gent que
que
le
verre est plus rfringent que l'eau dans

parce que le verre est moins rfrin;
elle parait creuse,

le
sulfure de
disparat, car le
de rfraction.
Voici donc
un
carbone; enfin,
baume du Canada
et le
dans
le
verre ont
troisime, elle
le
mme
indice
[premier exemple, trs grossier, qui nous montre
jusqu' quel point l'apparence des corps peut tre modifie par
la rfringence du milieu qui les baigne. Pour mieux
comprendre
148
les
se produisent
phnomnes qui
dans
la vision
microscopique,
nous allons tudier deux corps d'une forme bien dtermine, trs
il faut
frquents dans les prparations microscopiques et dont
bien connatre les proprits optiques. Ce sont les bulles d'air et
les
globules graisseux.
1
Bulle d'air dans eau.
On emprisonne quelques bulles d'air entre lame et lamelle

dans une gouttelette d'eau ou de salive. On choisit une bulle assez
soit pas comprime et qu'elle garde bien
petite pour qu'elle ne
On
forme sphrique.
condensateur.
sa
a soin de diaphragmer assez fortement le
l'objectif au point, de faon ce que la circonbulle soit bien nette (tig. 86, B) nous verrons alors
centre form d'un cercle trs brillant, entour d'une zone
Mettons d'abord
frence de
le
la
concengristre, puis d'un large anneau noir zbr d'anneaux

diffraction.
de
des
clairs
et
minces,
correspondant
franges
triques
Si on enfonce l'objectif, de faon mettre au point la partie
infrieure de la bulle, le cercle blanc central devient plus petit et
plus clair; il est aussi plus net et a perdu sa bordure grise.
L'anneau noir qui l'entoure est plus large, flou au bord et pourvu
la priphrie de plusieurs
Enlin,
anneaux de
voit le cercle blanc central
diffraction (fig. 86, A).
suprieure de la bulle, on
augmenter d'tendue. En mme temps
on met au point
si
la partie
apparaissent autour de lui de larges cercles gris, entours d'un

noir beaucoup plus troit que prcdemment. Cet
anneau
anneau noir
est travers, sur son
bord externe, par de nombreux
cercles de diffraction (fig. 86, G).
Ces apparences s'expliquent ( part les anneaux de diffraction)

le phnomne de la rflexion totale (p. 48). Le faisceau
par
lumineux qui traverse la bulle d'air peut tre considr comme

form de rayons parallles. Parmi ces rayons, ne pntreront
dans
le
microscope
que ceux dont l'inclinaison par rapport

ne dpassera pas, d'une part, la valeur de
l'axe, aprs rfraction,
l'angle limite
part,
la
pour
le
passage de l'eau dans l'air (48^^) et, d'autre

d'ouverture de l'objectif, mesur par
moiti de l'angle
rapport l'eau. Tous les autres subiront la rflexion totale; c'est

pourquoi les bords de la bulle d'air paraissent obscurs. La
figure 87 rend compte de ce phnomne, en mme temps qu'elle
L'OBSERA'ATION mtcroscopioue
les
variations
149
de dimension de Panneau obscur.
Les
explique
rayons a el a" pntreront seuls dans l'objectif, dont l'angle
d'ouverture n'est pas suffisant pour recueillir le rayon a'". Quant
au rayon a"\ il subit la rflexion totale, car il dpasse l'angle
E^J^KlNAUDj^m
E.
SALLE
1. Bulle d'air dans l'eau. Mise au

A. sur la partie profonde;
Fig. 86.
point
-2.
Bulle d'air dans le
B, sur la partie moyenne; C, sur la partie suprieure.
du
baume
Canada. Mme signification pour les lettres.
3. Globule-e graisse
dans
l'eau.
limite.
Mme
signification pour les lettres (d'aprs Ranvier).
Supposons maintenant que nous mettions
l'objectif
au
plan a?f/, passant par l'quateur de la bulle dair; le

cercle clair central aura pour diamtre G a".,, puisque Toeil peroit
point sur
le
le
rayon a" dans la direction suivant laquelle il est rfract. Au

si nous mettons au
point sur la partie infrieure de la
contraire,
150
nous ne percevons plus qu'un troit cercle clair, ayant

pour diamtre C, ",. Enfin, en mettant au point sur la partie
suprieure de la bulle, le cercle clair sera beaucoup jdus large
bulle,
(G, a\).
Pour cbacune de ces
positions
de Tobjectir,
la
zone
obscure correspondra la partie de la bulle situe en dehors du

rayon a". En un mot, la bulle d'air agit comme une lentille biconcave et transforme le faisceau parallle en un faisceau divergent.
En comparant
thoriques
Fig. 87.
86
les figures
correspondent
Marche des
le
on verra que ces donnes

peu prs exactement aux rsultats
et 87,
ra3'ons lumineux dans une bulle d'air examine

dans l'eau.
OrirjinaL
fournis par l'exprience.
nous voyons que
En
effet,
en examinant
la
bulle d'air,
bord n'est pas absolument obscur; cela tient
les rayons qui subissent une rfraction trop grande pour

vers l'intrieur de
dans
pntrer
l'objectif, sont en partie rflchis
la bulle et sont ainsi en
partie perus par l'il de l'observateur.
ce
que
C'est ce
phnomne supplmentaire qui explique pourquoi
la
zone
zone obscure ne sont pas toujours exactement limites.

nous
avons constat la prsence de nombreux anneaux de
Enfin,
diffraction. Ceux-ci sont dus ce que la zone obscure de la bulle
claire et la
agit sur le faisceau
lumineux comme un diaphragme et produit

Ces anneaux seront d'autant plus
ainsi des
franges de diffraction.
nombreux que
le
diaphragme, c'est--dire
le
cercle clair, sera
151
leur nombre augmente donc au fur et mesure qu'on

met au point sur une partie plus profonde de la bulle. Ils sont
d'autant plus distincts que l'angle d'ouverture du faisceau clairant
plus troit
est plus petit.
Il
il
Bulle d'air dans le
trs facile
est
suffit
pour
Nous savons
baume du Canada.
d'emprisonner des bulles d'air dans
diffrence entre l'indice de rfraction des
Par
grand.
le
baume
cela de l'agiter avec une petite baguette de verre.

que l'angle limite est d'autant plus petit que la
consquent, dans
le
deux milieux
est plus
baume du Canada,
beaucoup plus rfringent que l'eau,

tombant trs prs du ple de la bulle
il
qui est
n'y aura que les rayons
d'air qui
pourront parvenir
l'il de l'observateur.
La figure 86 montre en effet, en A', que le cercle clair, aperu

en mettant au point le fond de la bulle, est beaucoup plus petit
qu'en A. Il en est de mme pour les figures B' et G', l'une
correspondant la mise au point sur le plan mdian et l'autre
la
mise au point sur
On
de
agite,
la
partie suprieure de la bulle.
Globule de graisse dans l'eau.
daus un flacon, une goutte d'huile avec une dizaine

cubes d'eau. On prlve une goutte de cette
centimtres
mulsion
choisir
et
on l'examine entre lame
un globule assez
en ayant soin de
pas dtorm par la
et lamelle,
petit pour qu'il ne
soit
pression.
En
la partie infrieure du globule, on

86, A") une masse gristre trs floue, prsentant
trois zones concentriques une extrieure plus claire, une moyenne
mettant au point sur
aperoit
(fig.
une centrale grise.

En mettant au point le centre du globule, on voit ce dernier
limit par un troit anneau noir trs net, zbr de cercles de
diffraction. Le reste du globule apparat en gris clair.
Enfin, en mettant au point sur la partie suprieure, on voit
fonce
et
l'anneau noir s'largir et devenir flou et gristre sa priphrie.
Au
centre, apparat
un cercle
Ces apparences sont, on
trs brillant et
le voit,
nettement dUmit.
exactement opposes celles
152
que donne une
l)iille
crair
dans Teaii ou dans
le
baume
obscure
au
la zone
diminue
lieu
d'aug-
menter, lorsqu'on
abaisse peu peu
robjectif.
La figure
montre que
rayons a
sont
88
les
a\ a
en
dvis
sens inverse de
de
Tobservaleur
donc
verra
les
dans
a\,
la
Lil
87.
figure
1'/
direction
la
On
a"\.
a'\,
comprend immdiatement
le
quoi
clair
Fig. 88.
Marche des rayons lumineux dans une goutde graisse examine dans l'eau. Original.
telette
pourcercle
diminue
lors-
m et
au
qu'on
point
le
ple su-
prieur du globule de graisse Celui-ci agit comme une lentille biconvexe et

transforme le faisceau parallle en un faisceau convergent.
H.
CONSQUENCES PRATIQUES
1
Ces
trois
Phnomnes de
rfraction.
expriences nous ont appris connatre les bulles

ne pas les confondre avec des
d'air et les globules graisseux et
lments histologiques, dorigine animale ou vgtale. Elles nous

montrent aussi la diffrence qui existe entre les corps plus rfringents
ou moins rfringents que
le
milieu dans lequel
ils
sont
plongs.
Les corps jo/ms rfringents que le milieu (gouttes d'huile dans

une partie centrale d'autant plus claire et plus
l'eau) prsentent
troite,
entoure d'un anneau obscur d'autant plus large, qu'on
153
L OBSERVATION MICROSCOPIQUE
examine un point plus rapproch de leur surface suprieure.

se comportent
Au
comme
Ils
des lentilles biconvexes.
les corps moins rfringents que le milieu

dans l'eau) prsentent une partie centrale d'autant
plus troite, entoure d'un anneau obscur d'autant
contraire,
d'air
(bulles
plus claire
et
plus large, qu'on examine un point plus rapproch de leur surface infrieure. L'effet est d'autant plus accentu que la diff-
rence entre
d'air
dans
comme
les
deux indices de rfraction

ou dans
l'eau
comportent
la
comme
comme
lumire
concaves
les objets
comportent
second cas
objets conveaxs et plus rfringents que
les
Inversement,
grande (bulle
se
des lentilles biconcaves
milieu agissent sur

l'eau
est plus
baume). Ces corps
le
les globules graisseux
le
dans
moins rfringents que le milieu se

dans Teau. Un bon exemple du
et
les bulles d'air
nous
fourni
est
Mammifres, examins
Nous savons que
les globules
sanguins
entre lame et lamelle.
par
l'tat frais,
des
ces globules sont des disques biconcaves leur

d'un rebord convexe. Si on met au point
partie centrale et bords

la
face infrieure de la partie centrale, on apercevra un disque

entour d'un anneau gristre. Si on met au point la face
clair,
suprieure, le
centre parat
gris
fonc,
entour
d'un anneau
clair.
Ces phnomnes ont une grande importance pour l'interprmicroscopique des corps cylindriques pleins ou creux et
tation
des ornements qui peuvent exister
pourvu
objets,
considrablement
la
la
surface ou l'intrieur des
dimension de ces lments dpasse

que
d'onde
de la lumire employe.
longueur
toutefois
Nous savons, par
la
des
l'tude
bulles
d'air
et
des
globules
qu'un corps sphriquc, plong dans un milieu plus

rfringent, agit comme une lentille concave, tandis que, dans un
milieu moins rfringent, il agit comme une lentille convexe.
graisseux,
Donc, pour apprcier

lorsqu'on
s'agit
peroit
le relief
un aspect
d'une surface convexe;
l'objectif
des objets,
brillant,
si,
pour percevoir cet aspect
au
il
suffit
de savoir que
en
relevant l'objectif, il
contraire, il faut abaisser
brillant,
il
s'agit
d'une surface
que nous venons d'apprendre

les
distinguer
gouttelettes graisseuses, qui peuvent tre considres
comme des corps sphriques pleins, des bulles d'air qui se comconcave.
portent
Pour
C'est
comme
l'tude
d'ailleurs
ainsi
des corps sphriques creux.

des proprits des corps cylindriques (fibres).
154
prenons
comme exemple
de trs
fins filaments
creux.
1
Filaments pleins
rfringent
(air
on eau),
(fig.
ils
89).
de verre pleins
et
Dans un milieu rnoim
prsentent une large surface brillante

quand on met au point
^p-..
sur la partie mdiane,
brillante
une
surface
troite quand on relve
Tobjectif et une surface
obscure uniforme quand

on l'abaisse. Au contraire,
CL
tude d'un filament plein, en lumire

Fig. 89
centrale.
a, mise au point sur le plan
mdian; 6, sur la face suprieure; c, sur la
iace infrieure (d'aprs Dippel).
Enfin, dans
un milieu de
mme
dans un
milieu
plus rfringent (monobromonaphtaline ou biiodure de mercure), les

apparences sont inverses
et le filament plein parat
comme un
corps creux
le liquide.
dans
immerg
rfringence (baume du Canada),

le
filament
plein prend
d'une
Taspect
bande
aplatie.
est
Il
donc
connatre
capital de
diffrence
la
de rfringence du milieu
elde l'objet, pour pouvoir
une ide exacte
se faire
de
forme
sa
relle.
Il
faut souvent aussi exaCL
miner
tude d'un filament creux en lumire

Fig. 90.
centrale.
, mise au point sur le plan
mdian; 6, sur la surface suprieure; c, sur
la surface infrieure (d'aprs Dippel).
fine pipette
de verre remplie
nous obtenons
de
dans des
rfringence
diffrente.
2
(fig.
une
l'objet
milieux
d'air. Si
Filaments creux
Examinons
90).
nous mettons au point
le mme aspect que pour un

tube plein, avec cette diffrence que nous voyons en plus le double
contour des deux parois. Mais en mettant au point successivement les
sur
la
partie mdiane,
deux surfaces, nous observons des phnomnes inverses du cas
en relevant
le
tube
155
la raie brillante
disparait,
puis elle
tube pour mettre au point la concavit infrieure. Ces apparences se retrouvent dans les
poils creux,
les fibres creuses, les canalicules creuss dans une substance
prcdent
reparat
quand on abaisse
le
sillons ou cannelures demi-cylindriques

fig. 93) agissent
des lentilles concaves, quel que soit le ct par lequel on
les observe. Si la concavit est dirige du ct de l'observateur, il
Les
solide.
comme
faut relever le tube pour voir la raie brillante et l'abaisser dans le
cas contraire.
Si le filament est
rempli de liquide, deux'cas peuvent se prun indice de rfraction gal ou suprieur
senter. Si le liquide a
du milieu environnant,
celui
quement comme
(ilament creux se comporte opti-
le
filament plein; on ne peut le distinguer de

ce dernier que par la prsence du double contour. Au contraire,
si le liquide qui rem])lit le filament est moins
rfringent que le
le
milieu environnant, ce filament se comporte peu prs comme

s'il tait
rempli d'air. Mais ici, il faut encore tenir compte de la
rfringence des parois du tube capillaire;
rfringent que
les
dans
le
creuse
deu\ liquides,
si
celui-ci est
la paroi fait l'effet
muins
d'une cavit,
milieu le plus r-,

fringent.
En
lumire
oblique^ les rsul-
obtenus
tats
ne
pas en
principe; les raies
lumineuses
sont
diffrent
seulement dplaces suivant l'inci-
dence
du
cne
Pour les
clairant.
filaments
pleins
91), la ligne
brillante est dvie
(fig.
du ct d'o vient
la
lumire,
lors-
CL
Fig. 91.
tude d'un
ment
plein en lumire
oblique, dirige de droite
gauche.
92),
il
, taise
au
point sur la surface suprieure; b, sur le plan

mdian (d'aprs Dippel).
qu'on relve l'objectif; au contraire, pour

(fig.
les
tude d'un nia

ment creux en lumire
Fig. 92.
oblique, dirige de droite
gauche.
, mise au
point sur la surface suprieure
6,
sur
le.
plan
mdian (d'aprs Dippel).
filaments creux
faut abaisser l'objectif,
eu
lla
et
les
rainures
pour obtenir cette apparence
156
du ct oppos
celui d'o vieut la lumire.
En
relevant ou en
un
peu plus Tobjectif, l'objet prsente une moiti

une moiti claire, places inversement suivant que le
filament est plein ou creux.
abaissant
sombre
et
Ornements en creux ou en relief.

Les rainures demicylindriques creuses dans une membrane (fig. 93) se comportent
comme des lentilles concaves et paraissent brillantes quand on
3
abaisse l'objectif. Des paississemeuts de mme forme produisent

Teffet inverse -et paraissent brillants quand on
relve l'objectif. Enfin, lorsque des paississemeuts alternent avec des

i
llili'
dpressions,en formant une

surface ondule (fig. 94),
il
les
est facile
parties
de distinguer
concaves des
parties convexes d'aprs les
mmes
Fig.
93.
pais-
Fig.
94. paississe-
sissements ou
ments
et
dpressions demicylindriques (d'aprs Dippel).
sions
demi
driques
dprescylinalternants
(d'aprs Dippel).
rgles
les
unes
sont obscures pendant que

les autres sont brillantes ou
inversement, suivant
de la mise
variations
les
au
point.
Dans
le
cas o une mince
membrane, d'paisseur uniforme,
prsente une surface ondule, il est plus difficile de distinguer

concaves des parties convexes, puisque toutes agissent
sur la lumire comme des lentilles concaves. Pourtant, on distinles parties
guera les dernires l'abaissement plus considrable de l'objectif,

ncessaire pour les faire apparatre brillantes.
Les parties plus ou moins paisses
4 paisseur des objets.
des parois des olqets se comportent comme les ornements que

nous venons d'tudier. Pour bien apprcier ces diffrences d'pais-
seur
et les distinguer
ornements,
il
srement des structures produites par des

Dans le
faut se servir de liquides trs rfringents.
premier cas, on aperoit les mmes apparences qu'en examinant

dans l'eau; dans le second cas, l'image est trs diffrente. Si
l'image parat plus brillante quand on abaisse l'objectif, il y a un
paississement dans le cas contraire, il y a une dpression.
;
L'OBSERVATION MICROSCOPIQUE
Phnomnes de
157
diffraction.
Les stines de diffraction peiivenl tre la source d'une illusion

d'optique et tre prises par Tobservateur pour une structure vritable.
Il
nature
a plusieurs moyens de reconnatre leur vritable

tous se ramnent voir si ces stries peuvent tre exa-
on peut modifier leur cartement. En cas de rsultat

bien des stries de ditraction. Pour cela on rduit,
au moyen d'un diaphragme, la section du cne clairant, ou bien
on observe la prpaiation en lumire monochromatique jaune.
gres et
si
positif, ce sont
Dans
le premier cas, les stries sont d'autant plus distinctes

que le
diaphragme est plus petit dans le second, ralis au moyen d'une
lampe sodium ou, plus simplement, en intercalant un cran de
verre jaune dans le porte-diaphragme, les stries de diffraction sont
;
exagres
et.
cartes.
Nous avons
tabli,
fondamentale entre
au dbut de ce chapitre, une distinction
images des objets colors, produites par

d'absorption, et les images des objets non
colors, dues des phnomnes de rflexion et de rfraction.
Ces dernires sont, comme on vient de le voir, trs compliques
les
des phnomnes
et leur interprtation
peut tre excessivement
difficile; les
zones
claires et fonces et les franges de diffraction
pour des membranes ou des
stries
peuvent en imposer
vritables. Il faut donc tre mis
Au contraire, les images

sont
fidles
et reprsentent exactebeaucoup plus
par absorption
en garde contre ces illusions d'optique.
ment
les
contours des objets. Leur interprtation est donc beausujette des erreurs, car on n'est pas oblig de tenir
coup moins
compte des phnomnes de rfraction ou de
3
1 Obscurit
diffraction.
Causes d'insuccs.
du champ.
Elle provient d'un mauvais centrage
du miroir, la hauteur du condendu diaphragme-iris qui peut tre trop ferm ou

dcentr, surtout dans les montures qui permettent l'clairage
oblique. Se reporter (p. 34) aux rgles concernant l'clairage du
de l'clairage. Vrifier
la position
sateur, la position
microscope.
Une obscurit partielle du champ peut tre due au revolver,
qu'on n'a pas tourn jusqu'au cran d'arrt ou qui a t pouss
158
au
del. L'objectif n'est centr
que lorsqu'on
de ce cran d'arrt.
2
Manque de
persiste, aprs
le
point attentive,
il
a)
La
nettet de
Vimage.
Si
ce
a senti la rsistance
manque de
nettet
mise au
rglage soigneux de l'clairage et une
faut en rechercher mthodiquement la cause.
prparation. Elle peut tre
salie sur
une de
ses
deux
faces; on le reconnat ce que les stries et les ombres se dplacent

en mme temps que la prparation. Nettoyer avec un linge fin,
imbib d'alcool ou de xylol. Enlever notamment avec soin les traces
d'huile de cdre, de baume ou de lut. Ce nettoyage doit tre fait
avec prcaution, de manire ne pas comprimer l'objet plac sous

la lamelle. viter de poser les doigts sur la lamelle, car il reste
l'observation. Ne pas
toujours des traces graisseuses qui Iroublenl
oublier que la prparation peut tre retourne par mgarde et que
lamelle peut tre trop paisse. Dans ces deux cas, on ne peut
mettre au point les objectifs forts (voir plus loin, p. 165).
on s'en assure en le faisant tourner, on
est sali
h) L'oculaire
la
doit voir les
comme
il
corps trangers tourner en
a t dit plus
haut
mme
temps. Nettoyer
(p. 111).
sont
Objectif lorsque l'clairage, la prparation et l'oculaire

La
corrects, la cause d'insuccs vient gnralement de l'objectif.
lentille frontale peut tre souille de baume, d'huile de cdre ou
:
c)
d'un autre liquide; la lentille postrieure peut tre couverte de

manire d'y remdier.
poussire. Voir plus haut (p. 142) la
Lorsqu'on se sert des objectifs immersion, l'huile peut tre
ou trop paisse. Dans le premier cas, les corps trangers font
ombre; dans le second, la lamelle peut adhrer fortement la
sale
lentille frontale. Elle se soulve lorsqu'on relve l'objectif, ce
Il
qui
mise au point impossible et peut dtriorer la prparation.

faut se servir d'huile suffisamment fluide et ne jamais la laisser
rend
la
scher sur l'objectif ou sur les prparations.

d) Appareil d'clairage. Le trouble peut provenir de l'appareil
lui-mme dfaut de centrage, poussires ou taches sur le miroir
et les lentilles du condensateur. Il peut provenir d'objets ext:
rieurs
sur
barreaux de fentres, objets interposs accidentellement

des rayons lumineux.
le trajet
Dans
les
deux
cas,
dplaant lgrement
on
voit
le
immdiatement
vient le mal.
on s'assure de
la
condensateur, au
nature du trouble en
moyen de
l'clairage s'amliorer et
la
crmaillre
on reconnat d'o
L'OBSERVATION MICKOSGOPIQUE
lo9
Ils sont dus ce

qiroii nomme les
Ce sont des images de corpuscules incolores, arrondis, en chapelet ou en forme de filaments, qui paraissent
se dplacer dans le champ du microscope. Avec un peu d'habitude,
en dplaant lgrement la prparation ou en modifiant la mise
3" Troubles subjectifs.
mouches volantes
au point, on voit que ces formations sont indpendantes de l'objet

examin et du microscope. Ce sont gnralement des dbris cellulaires qui flottent dans le corps vitr et projettent leur ombre
sur
Les images auxquelles ils donnent lieu ont donc leur

dans
Til de l'observateur. Ces mouches volantes sont
origine
on n'arrive s'en dbarrasser, au
quehjuefois trs gnantes
la rtine.
moins momentanment, que par

4'^
Courants
et
mouvement
le
repos.
broivnien.
Les courants
se }ro-
duisent surtout dans les prparations non montes ils sont dus soit
la position incline du microscope, soit la dessiccation
progres:
sive, soit Taddition de liquides sur les bords de la lamelle. Ils

sont particulirement gnants dans les examens de sang l'tat
frais, entre lame et lamelle. On y obvie en lutant les prparations
et
en ayant soin de les faire aussi minces que possible; en

il
y a de liquide, moins les courants sont sensibles.
effet,
moins
Le mouvement brownien ou mouvemement molculaire
est
une
sorte de
trpidation qui agite sans cesse les corps de trs petites

dimensions. Il faut viter de le confondre, notamment lorsqu'il
s'agit
de Bactries, avec des mouvements
n'est pas toujours facile et
actifs.
Cette distinction
rclame une attention minutieuse.
CHAPITRE XIV
EMPLOI DU MICROSCOPE
Les conseils que nous allons donner succinctement pour l'emploi du microscope ne sont point superflus. Les rgles les plus
lmentaires du maniement du microscope sont souvent ignores,
mme par des travailleurs dj exercs, qui, par des manuvres
imprudentes, compromettent la dure de leur instrument ou se

privent de ressources qu'il est capable de fournir.
MANIERE
DE SAISIR
ET DE TRANSPORTER LE MICROSCOPE
I.
Ce point
est trs
la vis micrommunis du nouveau mouvement microm-
important pour ne pas lser
trique. Les nncroscopes,
trique horizontal, doivent tre pris par la potence en forme de

poigne. Les anciens modles, mouvement micromlrique vertical et
prisme, doivent tre
personnes
les
prennent par
la
saisis
par
le
Beaucoup de
pied.
potence qui supporte
le
tube
c'est
une pratique dplorable, qui amne tt ou tard la dtrioration de

la vis micromtrique. En effet, en saisissant ainsi le microscope,
tout le poids de l'appareil repose sur la vis, dont les
filets
sont
peu
mousss. Certains constructeurs, par exemple Reichert,

ont eu la bonne ide de munir ces anciens modles d'une poigne.
peu
Il
y a longtemps que ce petit perfectionnement devrait tre gn-
ralis,
on conserverait
cale toute sa
douceur
ainsi l'ancienne vis
micromtrique
verti-
et toute sa prcision.
Je crois inutile de dire qu'un microscope ne doit jamais tre

pris par la platine, ni plus forte raison par le tube.
II.
461
INSTALLATION DU MICROSCOPE
Le microscope, tant saisi correctement, est sorti de son armoire

sur une table en face d'une fentre. Pour assurer sa stabilit et empcber qu'il ne glisse, il est bon de le poser sur une
plaque de feutre ou sur un cahier de papier Joseph. On visse
et plac
alors les objectifs sur le revolver, en ayant soin de les placer suivant l'ordre de leurs puissances. Il est bon de visser de suite
tous les objectifs, de faon les avoir sa disposition suivant les

besoins de l'observation Ceci fait, amener dans l'axe optique un
.
objectif faible.
Avant de placer
l'oculaire, rgler l'clairage,
comme
il
a t dit
plus haut (p. 42), en dirigeant le miroir vers la source lumineuse

et en mettant au point le condensateur. Complter l'clairage
aprs avoir introduit dans
le
tube un oculaire faible.
une fentre, de prfrence e?.'posê au nord, soit devant une lampe, avec ou sans
interposition d'une lentille condensatrice. viter avec soin les
Le microscope
doit tre install soit devant
rayons solaires directs qui sont dangereux pour la vue pourtant,

dans les pays temprs, on pourra tamiser les rayons solaires par
:
un rideau de cretonne blanche tissu trs serr; on obtient

une lumire diffuse qui peut remplacer celle des nuages.
LU.
ainsi
MISE AU POINT DU MICROSCOPE
Aprs avoir choisi un sige de hauteur convenable, permettant

de regarder sans fatigue dans le microscope vertical, on met une
prparation sur la platine. On doit avoir, au dbut, devant les
yeux, un petit tableau donnant les dislances frontales et le grossissement des objectifs. Avant de placer la prparation sur la
le tube du microscope, avec la
une
hauteur
crmaillre,
plus grande que la distance frontale
de l'objectif faible. Ceci fait et une portion bien visible l'il nu
de la prparation tant mise au centre de l'ouverture de la platine,
on applique l'il l'oculaire et on abaisse trs lentement le tube
au moyen de la crmaillre mouvement rapide. Ds que l'image
platine,
on a donc soin de relever
apparat,
mme
confuse, on quitte la crmaillre pour prendre le

lequel on parfait la mise au poinl.
mouvement micromtrique, avec

M. Langeron.
It
62
Il
faut avoir bien soin, lorsque la vis inicrom 'trique, ancienne
ou nouvelle, n'est pas vis sans fin, de toujours la tenir peu prs
au milieu de sa course' et de ne lui faire subir que des dplacements peu tendus. Si on la laisse arriver fond de course, on
s'expose soit ne pouvoir mettre au point, soit, en insistant,
arracher les filets, ce qui serait un grave dommage.
Si rimage n'apparat pas, le dbutant doit agir avec une grande
prudence pour ne pas heurter

le
exagrant
amener
l'objectif contre la prparation,
mouvement de descente du
le bris
de
la
prparation et
en
tube. Cet accident peut
endommager srieusement
la
rien n'apparat, s'assurer, en regardant

le microscope de ct, qu'on n'a pas dpass la limite de la distance fi'onlale. Si c'est le cas, il faut remonter le tube, pour
lentille frontale.
Donc,
recommencer ensuite
si
le
mouvement de
descente. Si rien n'appa-
faut dplacer lgrement la prparation,

pour l'amener exactement dans Taxe optique. Si la prparation ne
renferme que de rares lments trs loigns les uns des autres,
rat encore,
c'est qu'il
on peut chercher mettre au point, soit sur une bulle d"air, soit
le bord de la lamelle. On arrive ainsi trouver la distance
frontale de l'objectif faible et, en dplaant mthodiquement la
sur
tarde pas amener un des lments au milieu

prparation, on ne
du champ. En combinant ces mouvements, on arrive prompte-
ment
mettre au point avec l'objectif faible.
Grce au revolver, rien n'est plus
un
objectif plus puissant.
suffit
de tourner
le
Lorsqu?
revolver
et
le
facile alors
microscope
que de passer
est bien rgl,
de modifier lgrement
la
il
mise au
point avec la vis micromtrique.

En suivant ces indications, le dbutant est sr de ne jamais
endommager
ni ses prparations, ni ses objectifs. C'est d'ailleurs
marche que devrait suivre tout micrographe digne de ce nom.

Ds qu'on a un peu d'habitude, ces mouvements se font trs
la
vite
c'est
seulement en s'astreignant, des
le
dbut, les effec-
tuer qu'on apprendra faire l'examen mthodique d'une prparation. Combien de fois n'ai-je pas vu commencer examiner une
coupe avec un grossissement de 300 ou 400 diamtres, ou mme
avec l'objectif immersion! C'est ce manque de mthode
que sont dues les erreurs grossires qui tent certains toute
confiance dans les donnes du microscope.

1.
Pour
les
Au
contraire, en
com-
anciens microscopes, la vis micromtriquo est au milieu de sa course
lorsqu'on voit le prisme la base de la colonne sur une hauteur de 3
mm.
'
environ.
163
la prparation avec un grossissement faible,

mise au point, on prend une vue d'ensemble de la
topograpbie de robjet et on centre sans difficult les points intressants. C'est alors qu'on entreprend l'examen de ces derniers
menanl rexamen de
on
la
facilite
avec
IV.
des objectifs plus puissants.
la srie
MISE AU POINT DES OBJECTIFS A IMMERSION
L'emploi de ces objectifs demande quelques mots d'explication,

car, pour les mettre au foyer, il ne suffit pas de tourner le
revolver. Il faut lout d'abord s'assurer, avec un objectif faible^
quil y a quelque chose dans

indispensable, car
il
immersion
objectifs
le
champ;
est trs difficile
cette prcaution est
de chercher
l'objet
avec les
cause de leur faible distance frontale
et
de l'troitesse de leur champ. L'objectif faible est d'ailleurs indispensable pour rgler l'clairage.
Donc, une
fois l'clairage et
l'objet
examiner bien centrs,
amener l'objeclif immersion dans l'axe optique,

puis dposer une goutte d'huile de cdre au milieu de la prparation. Cette huile sera autant que possible celle qui est fournie
relever le tube,
par le fabricant de l'objectif et dont l'indice de rfraction est calcul pour la correction des lentilles ^
Ceci
on abaisse
fait,
le
mouvement
tube avec le
rapide, en
microscope de ct, de manire amener la lentille

frontale en contact avec la goutte d'huile. Celle-ci doit avoir conregardant
le
ne faut donc pas attendre qu'elle se soit

prparation, sinon en remettre un peu. Ds que le
tabli, ce dont on s'aperroit immdiatement au chan-
serv sa convexit;
il
tale sur la
contact est
la goutte, on relve lgrement le tube, sans

cependant perdre le contact. On met alors l'il l'oculaire et on
abaisse trs lentement le tube avec le mouvement rapide; ds que
gement de forme de
l'image apparat,
mme
confuse, on achve
la
mise au point avec
la vis
micromtrique.
Lorsque l'observation
est
termine,
il
est
indispensable
de
mouvement
rapide, de manire loigner

la lentille frontale de la prparation. C'est seulement alors qu'on
relever
le
tube avec
le
pourra retirer cette dernire, sans craindre d'endommager Tob1.
p. 445 l'emploi de l'huile de paraffine et p. 83 celui de l'huile de ricin

huiles d'immersion.
Voir
comme
164
joclif par frottement contre la lamelle. Celte prcaution est tout

aussi ncessaire avec les forts objectifs sec.
Nettoyage des objectifs immersion.

vation est termine,
une
il
Ds que Fobser-
faut enlever Tluiile adhrente la lentille
mauvaise pratique que de laisser celte

huile se desscher d'un jour l'autre; on risque, en voulant l'esfrontale.
C'est
trs
suyer, de rayer la lentille ou de faire pntrer dans l'objectif une

du dissolvant qu'on est oblig d'employer en excs. 11 faut
donc essuyer doucement l'huile avec un peu de papier Joseph,
partie
puis achever le nettoyage avec un vieux linge trs lgrement

imbib de xylol ou de tolune. Ne jamais tremper l'extrmit de
c'est une pratique trs dangereuse,
l'objectif dans ces liquides
:
qui peut amener le dcollement des lentilles.

Je ne sais par suite de quelle aberration certaines personnes conseillent d'enlever l'huile de cdre avec de l'alcool. Ce liquide ne
dissout pas l'huile de cdre jiaissie, avec laquelle il forme un
pais prcipit blanc. Donc ne jamais employer d'alcool, mme
absolu, pour
V.
le
nettoyage des objectifs immersion.
CAUSES D'ERREUR DANS
LA MISE AU POINT
malgr toutes les prcautions, on

mettre l'image au point; cet accident se produit
surtout avec les objectifs forts et peut tre d deux causes (voir
Il
arrive quelquefois que,
n'arrive pas
plus haut, p. 157, les autres causes d'insuccs).

1 Le revolver est mal centr.
Dans ce cas on ne peut retrouver, au fort grossissement, un objet (jui avait t mis au milieu du
champ avec un grossissement
faible.
Cet accident se produit sur-
examine de trs petits organismes pars dans une

Dans
ce cas, pour obvier au dfaut de centrage, inhprparation.
rent aux revolvers les mieux construits, il faut reprer l'objet par
tout lorsqu'on
des centrages successifs, d'abord avec un objectif trs faible, puis

avec un moyen; on a bien des chances alors pour le retrouver
avec un objectif puissant. Ces centrages successifs permettent

aussi de voir de quelle quantit il faut dplacer la prparation pour
la
centrer dfinitivement, aprs le })assage d'un objectif faible un

fort. Les changeurs d'objectifs coulisse (p. 24) ont })our
numro
but d'obvier cet inconvnient.

2
La prparation
est retourne.
Ce
petit accident arrive
beaucoup plus souvent qu'on ne
exercs;
il
croit et
se produit surtout avec les
rations au
baume bien
s'aperoit pas
sches.
de Terreur
et
Au
mme
165
des micrograplies
lames de sang
faible
on est tout
et les prpagrossissement on ne
tonn de ne pouvoir
mettre au point avec robjectif immersion ou mme avec un fort

En etel, partir d'un grossissement de 300 diaobjectif sec.
mtres environ, la distance fi'onlale des objectifs est trop courte

pour qu'on puisse mettre au point un objet plac sous une lame
mais on doit
porte-objet. Dans ce cas, il ne faut jamais insister,
relever de suite le tube et s'assurer que la prparation est bien
en-dessus. Gnralement, on constate alors qu'elle est
face
retourne. Pour viter ce dsagrment,
de vrifier avec
le
faut prendre l'habitude
il
doigt la saillie de la lamelle avant de poser la
en
prparation sur la platine. Pour les lames de sang, on s'assure,
regardant
en haut.
la
prparation par rflexion, que le ct mat est dirig
Il se
produit alors le mme
prparation est retourne. La lentille
frontale vient buter contre la lamelle et l'image n'apparat pas ou
La lamelle
est trop paisse.
phnomne que lorsque
la
reste confuse.
Cet accident est beaucoup moins frquent qu'autrefois, car les

frontale suffisante
objectifs, mme puissants, ont une dislance
pour empcher cet inconvnient. Les lamelles qu'on trouve actuellement dans le commerce ont aussi une paisseur plus rgulire.
Toutefois, lorsque la prparation est trs paisse,
qu'on ne puisse mettre au point

les objectifs actuels.
nuer abaisser
le
Il
les plans
il
profonds,
peut arriver
mme avec
faut bien se garder d'insister et de conti-
tube, car on serait certain de faire clater la
lamelle, d'craser l'objet et peut-tre de dtriorer irrmdiablement la lentille frontale. x\joulons qu'avec les nouveaux mouvements micromtriques le bris de la lamelle est beaucoup moins
craindre, car la vis cesse gnralement d'agir sur

l'objectif entre en contact avec la lamelle.
le
tube ds que
VI. MAN'UVRE DE LA VIS M C R O M ET R QU

ET OBSERVATION MICROSCOPIQUE
I
Pendant l'observation au microscope, un il

une main manuvre continuellement
l'oculaire,
est
appliqu
inicrom-
la vis
166
trique et l'autre dplace lentement

commande du chariot.
prparation au
la
moyen des
pignons de
Examinons successivement
rle
le
de
l'il
mains.
1
De quel il doit-on regarder au microscope?
et
le
Les
rle
des
avis sont
partags ce sujet la majorit des thoriciens pose en principe qu'on doit observerde Til gauche. On donne, comme raison
trs
de cette prfrence, que l'il droit doit rester

avec ou sans chambre claire.
libre
pour dessiner
En
pratique celte rgle est rarement observe. D'abord beaude

coup
personnes prouvent une grande difficult regarder au
microscope de l'il gauche plutt que de s'imposer la gne d'une
:
rducation, pnible surtout au dbut des tudes microscopiques,

on prfre naturellement observer avec l'il droit. Personnelle-
ment je suis dans ce cas et j'ai toujours travaill de l'il droit

j'estime donc qu'on peut observer indiffremment avec l'un ou
l'autre il, suivant la convenance personnelle. Ceux qui peuvent
:
travailler allernativement avec les
avantage qui leur permet d'viter

culaire.
deux yeux possdent un grand

de l'observation mono-
la fatigue
Je suis d'accord avec la plupart des

fermer un il ?
auteurs pour recommander d'observer au microscope avec les
deux yeux ouverts. Il est trs fatigant, pour une observation un
peu prolonge, de tenir un il ferm la contraction des muscles
2 Doit-on
pression exerce sur le globe de l'il d'autre part,

produisent promptement de la fatigue et mme de la douleur oculaire et de la cphalalgie. On peut trs bien s'habituer observer
d'une part,
la
avec les deux yeux ouverts; au bout de peu de temps on arrive

ne percevoir que les images fournies par l'il appliqu au microscope. Il est pourtant une condition essentielle, c'est que la table sur
laquelle repose l'instrument ne soit pas plus claire que le champ
optique; si donc cette table est blanche (lave maille) ou de couleur claire, il faudra la recouvrir d'un papier fonc ou noir. De
cette manire,
faible quantit
Filquine sert pas l'observation ne reoit qu'une

de rayons lumineux et fournit des images trop peu
claires pour pouvoir troubler la perception de l'autre il.
Ecrans oculaires.
Lorsqu'on doil faire des observations prolonges,
de forts grossissements, il est trs avantageux de protger les deux
yeux contre les rayons lumineux trangers, c'est--dire autres que ceux
qui proviennent du microscope. C'est dans ce but qu'ont t invents
167
les crans oculaires S destins la fois empcher des images de se

former dans l'il qui n'observe pas et protger i'uil (jui observe contre
les rayons rflchis par la monture du microscope, ou provenant directement de la source lumineuse.
Le plus simple de ces crans peut tre excut avec une mince feuille
de carton noirci dcoupe suivant la forme indique par la figure 95. On
le
tube du microspasse
cope dans l'orifice circulaire.
L'chancrure sert introduire
le
nez.
Avec celte forme
d'cran trs simple on peut
dessiner
la
chambre
claire,
Fig,
95.
cran
Fig.
96.
Ecran
oculaire anglais.
oculaire. - Oripuisque tout un ct du microsginal.
cope reste libre
On trouve dans le commerce
des crans oculaires simples ou doubles. La figure 96 reprsente un cran
oculaire simple fabriqu par divers constructeurs anglais (Baker, Flatters
and Garnett, etc.); il est form
de deux pices mtalliques
"-.
un anneau qui emtube du microscope

et une paletle dont on rgle
la position suivant l'cartement des yeux.
Stiassnie fabrique un cran
double (fig. 97) recouvert de
peluche verte. Cet appareil
noircies
brasse
le
rv^/~y
Fig.
97.
cran oculaire
de
Stiassnie.
Original.
est trs commode et permet de regarder avec l'un ou l'autre il; son
seul dfaut est d'empcher le dessin la chambre claire, car il occupe
la fois les deux cts du microscope. On le fixe
au moyen de la bague sur le tube du microscope.
Ces crans oculaires, pour protger suffisamment

de la lumire trangre, ont besoin d'tre complts par un grand cran en carton noirci mont
sur un pied. Un moyen trs simple de fabriquer ces
crans consiste prendre un petit support entonnoirs en fer. Sur un des anneaux, qu'on a soin de
Grand
tourner verticalement, on fixe au moyen de fil de
Fig. 98.
cran mont sur
laiton une grande feuille de carton noirci ou recousupport en fer.
vert de papier noir 3. En dplaant l'anneau le long
Original.
de la tige verticale du support on rgle volont la
hauteur de l'cran. Je recommande vivement l'emune lumire
ploi d'un cran de ce genre, surtout lorsqu'on travaille avec
artificielle intense. 11 permet aussi, lorsqu'on dessine la chambre claire,
de rgler plus facilement l'clairage du papier. Des crans de ce genre,
surface plus ou moins courbe, existent dans le commerce.
Peisor, Ein Mikroskopierschirm. Ztschr. f. wiss. Mikr., XXI, p. 467, 1901.

Voici les dimensions de l'cran que j'emploie 16 cm. de longueur sur 9 cm. 5
de largeur. L'chancrure nasale a 2 cm. de largeur dans sa portion profonde,
elle s'vase ensuite progressivement. L'orifice circulaire est 5 mm. du bord
1.
2.
ne pas gner la chambre claire.

Dimensions de l'cran 30 sur 25 cent.
droit, de faon
3.
168
Li:
Manuvre
MICdOSCOPK ET SES ACCESSOIRES
de la vis micromtriqiie.
Nous avons
dj
mainles reprises que, pendant l'observation microscopique,

niain droite devait mouvoir conlinuellemenl la vis microm-
dit
la
Nous savons en effet que le microscope ne i)eut nous monnettement qu'un seul plan des objets, et mme, cause de
Tinvitable courbure du champ, nous ne pouvons pas voir avec
trique.
trer
nettet,
au
mme
solides
coupe,
les
instant,
toute
la
surface
de ce plan.
Or,
si
que nous examinons sont des corps

trois dimensions; mme lorsque nous tudions une
lments figurs qui la constituent prsentent une cer-
petits qu'ils soient,
les
objets
paisseur. Nous ne pouvons donc prendre connaissance de

et des rapports de ces
objets qu'en superposant, par la
toute
une
srie
de
])ense,
coupes oj>tiques que nous aurons perues
taine
la
forme
successivement en manuvrant
La
nettet
de celte
la vis
micromtrique.
perception peut tre assure
moyens la mise au point du systme optique

commodation de Wv'. Disons tout de suite que
par deux
pouvoir d'acce dernier ne doit

et le
absolument pas entrer en jeu dans l'observation microscopi^pie.

En effet, si la mise au point est insuffisante et si, par voie rflexe,
l'il s'efforce
d'y remdier par des modifications de sa courbure,
en rsulte rapidement une fatigue intense des muscles accommodateurs. Au contraire, en modifiant continuellement la mise au
il
point par la manceuvre de la vis micromtrique, l'il fonctionne

comme s'il tait au point sur l'infini, c'est--dire ({u'il donne sur
une image nette de l'objet, sans que son mcanisme

accommodateur soit mis en action.
Nous voyons donc que la manaûvre continuelle de la vis
microm trique est ncessite par deux raisons
la rtine
au point successivement les diffrents plans de l'objet

de prendre connaissance de sa forme par la superposition de
1 Mettre
afin
coupes optiques infiniment minces;

2 Assurer la nettet de ces images rtiniennes successives,
sans que le mcanisme d'accommodation ait entrer enjeu.
Aussi ne saurait-on assez recommander aux dbutants la
manuvre
correcte
de
la
vis
micromtrique, car
c'est le
seul
d'observer sans fatigue, sans danger pour l'il et d'viter

les erreurs provenant d'une exploration insuffisante des
plans
moyen
successifs des objets.

4 Manuvre de la
platine mobile.
l'observateur, aprs avoir rgl l'clairage
La
main gauche de
au moyen de la cr-
niaillre et
du diaphragme-iris, dplace
du double chariot de
la
platine mobile.
la
En
prparation, par fractions successives, d'avant en arrire
chaque fraction
69
prparation au moyen
principe on dplace la
(p. 14)
est tu-
die sur toute sa largeur
au moyen du
ment
latral.
dplacedfaut de
platine mobile, la prparation est saisie par ses
deux grands
cts, entre
pouce et l'index reposant sur la platine fixe,
le
le
Marche suivre pour parcourir mthodiqucmenl une prparation avec la platine
Fig. 99.
ciiariot.
mdius prenant un point
Original.
d'aipui
sous
la
On peut
en explorer
platine.
ainsi faire glisser la prparation sans trop d'-coups et
toute rtendue.
VII.
CHOIX DES OBJECTIFS ET DES OCULAIRES
Nous avons dit qu'on doit toujours examiner une prparation

avec une srie de grossissements d'abord faibles, puis de plus en
plus forts. Nous savons que l'image perd en tendue et en
mesure que le grossissement augmente. Cette
du
augmentation
grossissement doit tre obtenue au moyen
il est mauvais, en
principe,
d'objectifs dplus en plus puissants
clart au fur et
de chercher l'obtenir au moyen des oculaires. En effet l'oculaire

ne fait qu'agrandir l'image fournie par l'objectif plus l'oculaire
est fort, plus cette image perd en nettet, en clart et en tendue.
:
On
devra donc, pour
faibles et
moyens
et
courant, se contenter des oculaires

ne chercher augmenter le grossissement
le travail
qu'en employant des objectifs puissants. Les oculaires forts seront

rservs pour des cas particuliers il faut bien avoir prsent l'esprit ce fait qu'ils diminuent la dfinition et qu'ils n'augmentent pas
;
Nous avons dj dit plus haut (p. 71) que la grandeur de l'image fournie par une combinaison optique n'est pas une
preuve de sa valeur au point des pouvoirs rsolvant et dfinissant.
la rsolution.
CHAPITRE XV
DTERMINATION DES CONSTANTES

OPTIQUES DU MICROSCOPE
Sous
le
nom
de constantes optiques, on comprend
le grossisse-
distance frontale, la position des plans

d'ouverture
et enfin les pouvoirs dfinissant et
focaux, l'angle
rsolvant.
ment,
la distance focale, la
Nous
laisserons de ct la dtermination des distances focale et
frontale, des plans focaux et de l'angle d'ouverture, car il est trs

rare que le micrographe ait les effectuer. D'ailleurs, dans les
catalogues actuels des bonnes maisons de microscopes, ces donnes sont indiques avec prcision pour chaque objectif. Nous
nous contenterons donc d'tudier la dtermination pratique du
grossissement, ainsi que
la vrification
des pouvoirs dfinissant et
rsolvant.
I.
DTERMINATION DU GROSSISSEMENT
Le grossissement du microscope, pour un observateur donn,

exprim par le rapport entre le diamtre de Tobjet et le diamtre de l'image microscopique la distance minima de la vision
est
250 mm. Il est ncessaire de prciser ces

conditions car, de toute vidence, le grossissement dpend de la
distance laquelle est vue l'image virtuelle. Si cette image est
distincte, c'est--dire
recueillie sur l'oculaire
mme,
elle est trs petite; si elle est prise
au niveau de la table, elle est beaucoup plus tendue. On s'accorde

donc aujourd'hui pour a]>prcier le grossissement peu prs au
niveau de la platine du microscope, c'est - dire la distance de la
vision distincte, soit
250 mm.
Il
faut bien savoir
que
c'est seule-
DTERMINATION DES CONSTANTES OPTIQUES
171
ment dans ces conditions que les grossissements sont comparables.

Ce qui nous intresse, ce n'est pas le grossissement propre de
Tobjeclif, mais le grossissement total de la
combinaison
oculaire, afin de savoir dans quelles conditions
Ce grossissement
objectif-
nous travaillons.
donn par les constructeurs, dont

une
table indiquant, pour chaque
catalogues
objectif, le grossissement obtenu avec les divers oculaires. Mais
est toujours
renferment
les
ces chiffres sont forcment approximatifs, surtout en ce

qui concerne les objectifs forts, car ces derniers ne sont
jamais absolument identiques. Nous allons donc indiquer des procds simples
et rapides
pour dterminer le grossissement total du microscope.

il est bien entendu
que le grossissement doit tou-
Auparavant,
jours tre calcul pour une mme longueur de tube, 160 mm*, ou
170 mm. suivant les constructeurs. C'est une condition absolu-
ment indispensable pour que
les rsultats soient
comparables.
Pour les objectifs apochromatiques, combins avec les oculaires compensateurs, le grosisseraent est facile calculer; en effet le foyer infrieur de ces derniers tombe toujours au mme niveau, dans le tube du
microscope. Il en rsulte qu'avec les divers oculaires, l'image donne
par l'objectif a toujours les mmes dimensions. Il suffit donc, pour connatre le grossissement total, de multiplier le chiffre indiquant le grossissement propre de l'objectif par le numro de l'oculaire qui correspond
toujours au grossissement propre de ce dernier. Or le grossissement
propre d'un objectif est gal au quotient de la distance de la vision normale (250 mm) par la distance focale de cet objectif, calcule en millimlres. Soit un apochromat de 4 mm.; son grossissement propre sera
250
4 == 62,5. Si on combine cet objectif avec un oculaire compensa:
teur n
6, c'est--dire
binaison sera de 62,5
grossissant 6
fois, le
grossissement total de
X 6 = 375. Le mme calcul peut tre
la
com-
effectu avec
les objectifs achromatiques et les nouveaux oculaires

d'Huyghens, construits de manire ce que les foyers infrieurs soient tous la
mme
hauteur.
Ce procd trs simple ne peut tre employ pour les combinaisons

achromatiques et des anciens oculaires d'Huyghens. En effet,
le foyer infrieur de ces derniers ne tombe jamais au mme
point;
d'objectifs
aussi l'image relle fournie par l'objectif varie de dimensions, suivant

l'oculaire employ, ce qui rend le calcul beaucoup plus compliqu.
Nous
allons indiquer maintenant les procds empiriques qui

permettent, dans tous les cas, de connatre rapidement le grossis-
sement du microscope, pourvu qu'on opre toujours avec

longueur de tube.
1" Procd de
chambre
la
claire l'image
chambre
claire.
d'un micromtre-objectif
On
(p.
la
mme
dessine
179),
la
la dis-
172
250 mm. On
lance exacte de
a soin de tenir
tnalion de celte distance entre
11
d'il
et
la
la
chambre
claire,
comme
il
compte, dans Fvade papier, du
feuille
par les rayons lumineux entre
electu;''
trajet
chissantes de
les
surfaces rtl-
a t dit p.
129
(fig.
83).
va sans dire qu'on a eu soin de s'assurer, par une inclinaison
convenable dn plan du dessin, que le trac obtenu ne sera pas

dform. On dessine ainsi uncertain nombre de divisions du microobjectif, jiuis on mesure leur cartement sur le dessin avec
une rgle gradue en millimtres. Le rapport entre le chiffre ainsi
obtenu et Tcartement rel donne immdiatement le grossissement.
Au cas o la longuenr occupe par une division du micromtre ne
correspondrait pas un nombre entier de millimtres, il faudrait
mesurer un certain nombre de divisions, 2, 3, 4, jusqu' ce qu'on
trouve un nombre entier de millimtres. Alors, par une rgle de
mtre
trois,
on connatra
la
longueur exacte d'une division.
On
dtermi-
grossissement en mnllipliant par 100 le chiffre obtenu,

puisque les divisions reprsentent des centimes de millimtre.
Su})posons, par exemple, que 5 divisions micromtriques dessi-
nera
le
nes correspondent exactement 16 mm. une division mesurera

5
3 mm. 2 et le grossissement sera de 320. Si on
trouve immdiatement un nombre entier de millimtres pour
16
une
division,
lorsque, sur
est de 600.
il
le
suffira
de multiplier ce nombre par 100. Ainsi,

division vaut 6 mm. le grossissement
dessin, une
Pour les grossissements trs faibles, on peut se contenter de

dessiner une chelle ordinaire divise en millimtres ou en demimillimtres. Quelle que soit l'chelle employe, il faut avoir soin,
lorsque les traits sont fortement grossis, de dessiner le milieu de
ces traits ou
un de
leurs bords choisi toujours
du
mme
ct.
2 Procd du micromtre oculaire.

Ce procd, beaucoup moins prcis,
ne peut tre employ qu'avec le micromtre oculaire nmbile, dcrit
p. 184 (lig-. 109). 11 faut, en elet, que le grossissement puisse tre apprci
avec tous les oculaires et non pas seulement avec l'oculaire micromtrique, du type reprsent par la figure 108. On superpose les images des
deux divisions et on cherche combien une division du micromtre objectif recouvre de divisions du micromtre oculaire. Supposons que rchelle
de ce dernier reprsente des diximes de millimtre et soit grossie 10 fois,
ce qui est le cas des oculaires micromtriques courants. Une division

vue travers cet oculaire vaudra 1 mm. Pour connatre le grossissement, il suffira donc, dans ce cas, de multiplier par 100 le nombre de
divisions couvertes par une division du micromtre objectif. Je ne conseille pas cette mthode, car elle ncessite remploi de deux chelles et
DETERMINATION DES CONSTANTES OPTIOUES
173
connaissance exacte du grossissement du micromtre. Or cette dernii^re ne peut (Hre dtermine commodment qu' la chambre claire. Le
rsultat n'est ({u'approximatif et ne donne que des chiffres ronds, car il
est difficile d'valuer exactement une fraction de division du micromtre oculaire.
Ja
II.
VRIFICATION DU POUVOIR DFINISSANT
Nous savons que
le
pouvoir dfinissant, ou facult de fournir
des images parfaitement nettes, dpend en trs grande partie de

rdijectif, parce qu'il r.jsulte de la concidence plus ou moins
exacte des rayons lumineux qui ont travers ce dernier. La dfinilion est donc sous la dpendance troite de la correction des aberrations sphrique et chromatique. Aussi, la vrification
cope ce point de vue se ramne la vrification des
du micros-
objectifs.
En
pratique on se sert, pour cette vrification, soit du test

(PAbbe, soit de prparations repres et bien connues de l'observateur
l-^
Le test d'Abbe est un porte-objet sur lequel
Emploi du test d'Abbe.
sont colles une ou plusieurs lamelles argentes leur face infrieure;
dans
couche d'argent on a grav des groupes de lignes parallles

Comme la couche d'argent est extrmement mince, les bords
des traits constituent un test trs dlicat, mme pour les objectifs les
plus puissants. En effet la couche d'argent est compltement opaque,
aussi les stries paraissent-elles excessivement nettes, avec des bords
finement dentels qui permettent une mise au point
la
trs fines.
trs exacte.
Dans les tests plusieurs

lamelles (fig. 100), celles-ci
sont au nombre de six et
d'paisseur dilTrente,
me-
surant respectivement 90,

J20, loO, 180, 210 et 240 [x-
Dans
FifT.
100.
une seule lamelle
Test d'Abbe six lamelles.
celle-ci est longue et

son paisseur augmente
lgrement et progressivement d'une extrmit l'autre. Les deux faces
ne sont donc pas parallles, mais forment entre elles un angle trs aigu.
La valeur de l'paisseur est indiciue, en centimes de millimtre, par
une chelle trace sur la lame porte-objet. Cette chelle, qui varie
ncessairement un peu pour chaque test, commence aux environs de
Dans les deux sortes de tests, on
90 a et se termine au del de 200
les
tests
troite; elle
est
taille
de
telle
(fig.
sorte
101),
({ue
(j,.
trouve donc toutes les paisseurs correspondant aux lamelles du commerce et aux corrections des objectifs.
Examinons d'abord un objectif de y rande ouverture, muni d'un oculaire
fort, au point de vue de la correction sphrique. Il suflit de le mettre au
174
point sur les dilrentes parties du test et d'examiner, dans la partie cendu champ, la qualit des images, en se servant alternativement
de l'clairage central et de l'clairage oblique. Nous avons vu, en tudiant l'appareil d'clairage (p. 29), qu'on produit l'clairage oblique en
trale
dcentrant le porte-diaphragme au moyen d'un pignon particulier ce

dplacement doit tre fait perpendiculairement aux lignes du test. On
s'assure de la direction des rayons lumineux et de l'ouverture du cne
clairant, en enlevant l'oculaire et en examinant dans le tube la rpartition de la lumire. Toute l'ouverture de robjectii' doit d'abord tre
claire; on diaphragme un peu ensuite, si c'est ncessaire.
Si l'aberration sphricjue est parfaitement corrige, pour une paisseur
de lamelle correspondant un endroit donn du test, les stries doivent
rester parfaitement nettes, dans la partie centrale du champ, sans bords
:
Abk's
Test-Platte
175
ne dpend plus uniquement de la correction des aberrations. Elle est

alors influence par les diffrences de grossissement entre les difrentes
zones de l'objectif. C'est ce qu'on a dsign, bien tort, sous le nom de
dfauts de courbure. Nous avons vu plus haut (p. 57) que les meilleurs
objectifs ne peuvent tre exempts de ces dfauts lorsque leur ouverture
est grande.
Ces expriences dmontrent de
numrique
de la dfinition
la
faon la plus nette que la qualit

valeur des corrections.
est proportionnelle la
dWbbe, on pourra se servir, pour apprcier

des objectifs, de prparations prsentant des dtails
Chacun les choisira suivant les tudes particulires
dfaut des tests
la dfinition
trs
fins.
les poils de Souris,

Citons par exemple
vaisseaux
des
les traches des
des
Conifres,
ponctuations
Insectes, les fibres musculaires stries des Insectes ou des Vert-
auxquelles
se livre.
il
les
ailes des Moustiques, les cailles des ailes

carapaces de Diatomes ornements bien
dfinis, les granulations des leucocytes, les Trypanosomes ou les
brs, les cailles des
de Papillons ou
parasites
les
du paludisme colors au Romanovsky, les Infusoires

le formol, etc. Personnellement, pour prouver la
conservs dans
dfinition des objectifs, j'examine successivement les cailles des

ailes du Ciilex pipiens, les traches du siphon des larves de
Culex^le tout mont au baume, puis un 7'n/panosoma Lewisi ou

Brucei et un Plasmocliumvivax colors au Romanovsky, et enfin
un Infusoire,de prfrence
le
Balanlidium
coli,
conserv dans
le
formol.
On
doit distinguer avec la plus
grande nettet les stries des

de Culex; les tours de spires des traches du
cailles des ailes
siphon de
la
larve
le
blpharoplaste, le noyau et
de
les
Schffner du
granulations
Trypanosome,
vivax, les stries longitudinales hrisses de
cils
le
flagelle
du
Plasmodium
du Balantidium.
m. VRIFICATION DU POUVOIR RSOLVANT

Nous savons
(p.
58) que
les objectifs
le pouvoir rsolvant est la proprit

de montrer les dtaifs des fines struc-
que possdent
tures, par exemple de permettre de distinguer nettement les unes
des autres des stries trs dlicates. Nous avons vu que ce pouvoir
tait directement proportionnel l'ouverture numrique; mais,
bien entendu,
il
dpend aussi de
aussi faut-il savoir
exclusivement
la
le
la
perfection des corrections,

sans s'en rapporter
vrifier pratiquement,
valeur de l'ouverture.
17f>
On se sert pourcela, soil

soit
(le
d'un
en res})ce les plaques

gnralement une Dialome de
prsentant des stries d'une grande finesse.
truii tesl artificiel,
test naturel,
Nobert,
structure trs dlicate et
Les plaques de Nobert sont des porte-objets sur lesquels le constructeur traait 19 systmes de raies, distantes, pour le premier systme, de
un millime de ligne (2 [x 23) et, pour le dernier, un dix-millime de
ligne (0 [X 22). Dans les derniers systmes, les raies sont donc si rapproches qu'on n'arrive pas les distinguer nettement, mme avec les plus
forts objectifs. Nous n'insisterons pas sur ce genre de
test dont l'emploi ne saurait tre courant.
Les
tests naturels les
plus faciles se procurer
plus frquemment employs sont les cailles

des ailes de V Epinephele janira et surtout,
parmi les Diatomes, Pleurosigma angidatum
et Surirelln gemma. Il est rare que les constructeurs ne livrent pas avec le microscope une pret les
paration
de
Pleurosigma
suivant
la
ou
puissance
de
Surirella^
des
objectifs.
1" Epinephele janira.

On choisit de
prfrence des cailles de la femelle,
qui conviennent pour prouver peu
prs tous les grossissements. A 50 diamtres, on doit percevoir des stries
longitudinales (fig. 102, i) dont l'cartement est d'environ 2 a; 300 diamtres,
ticaille de l'aile de
ces stries sont devenues de larges lignes,
Fig. 10-2.
V Epinephele jftnira. 1, xÔ;
entre
on voit apparatre
lesquelles
300
1000.
X
X
3,
2,
(fig. 102, 2) de trs fines stries transversales distantes de 1
environ;
800 ou lOJO diamtres, les stries longitudinales forment de larges bandes
obscures, sur lesciuelles se dtachent des corpuscules arrondis; les stries
transversales apparaissent comme des lignes doubles, spares par des
ranges de corpuscules arrondis aux angles et contigus (fig. 102, 3). En
lumire oblique, ces derniers corpuscules donnent l'impression d'autres
stries longitudinales. Les stries longitudinales correspondent au premier
groupe de Nobert et les stries transversales au quatrime.
\).
Ce
test, qui correspond au huitime

groupe de Nobert, convient pour les grossissements de 200 diamtres et au-dessus. On doit voir trois systmes de stries (fig. 103).
Le premier systme est perpendiculaire la nervure mdiane
2" Pleurosigma angulatum.
les
deux autres sont obliques par rapport
verses
TuR par rapport
Tautre
et
se
cette nervure, in-
croisent sous
un angle

d'environ 08. Ces stries sont distantes d'environ
;j.,
177
Avec un
3.
donnant 500 diamtres, on ne voit bien ces trois systmes qu'en employant l'clairage oblique. Avec un bon objectif
immersion, on doit arriver
objectif sec
les rsoudre avec l'clai-
rage central.
En ralit, la carapace
de ces Diatomes parat,
un
trs
fort
grossisse-
ment, couverte de perles

rondes et brillantes, qui
correspondent probablement des cavits. C'est
l'ordonnance rgulire de
ces perles qui
donne aux
les
sparent
l'apparence de stries. Les
espaces qui
perles paraissent brillantes

ou obscures suivant qu'on
relve
ou
abaisse
qu'on
rol)jectif.
3 Surirella
Cette
gemma.
dont
la
Diatome,
structure est extrmement

dlicate, ne convient
que
pour l'examen des objectifs immersion. A un faible
grossissement
(fig.
104),
on aperoit une nervure

mdiane, de chaque ct
de laquelle partent des nervures
transversales
irrFig.
gulirement disposes.
Entre ces nervures et
elles
103.
Pleuro-
Fig.
104.
Surirella
gemma.
sigma
angiclatum.
Original.
se
paralllement
trouvent de trs fines lignes transversales, distantes d'environ
a 44. Avec les plus forts objectifs, ces stries se rsolvent
en ranges de perles ovales, mesurant
lumire
oblique,
mdiane, on
dirige
voit apparatre,
M. Langeron.
[x
perpendiculairement
en outre, de trs fines
a 38. En
44 sur
la
nervure
stries longi-
12
178
liulinales assez irrgulircs.
Cette apparence est due ce que les
perles sont ordonnes suivant le sens transversal, mais non suivant

le sens longitudinal. Le Surlrella gemma correspond, comme
difficult de rsolution,
au dixime groupe des plaques de Nobert.

(jue les objectifs forts ne doivent
Remarquons, pour terminer,

pas tre apprcis au
Pour
mme
point de vue que les objectifs faibles.
au pouvoir rsolvant,
par consquent cboisir parmi les objectifs grande ouverture
numrique. On peut dire en quebjue sorte Tinverse des objectifs
les
premiers,
il
faut surtout s'attacber
leur ouverture
numrique est trop considrable, lesavons

nous
que
signals p. 57 pour la zone marginale
deviennent trs apparents. D'ailleurs, pour ces objectifs de faible
faibles
si
dfauts
puissance, le pouvoir rsolvant a beaucoup moins d'importance.

Certains constructeurs, par exemple Zeiss, fabriquent deux sries
d'objectifs sec possdant des ouvertures numriques diffrentes
(A et AA, D et DD); il y a quelquefois avantage, pour le travail

courant, choisir ceux dont l'ouverture numrique est plus faible.
IV. VRIFICATION DE L'TENDUE

ET DE LA PLANIT DU CHAMP ET DES
DFORMATIONS DE L'IMAGE
L'tendue du champ dpend en grande partie de l'oculaire. La

courbure du champ ne peut pas tre totalement supprime tant
que ce dfaut ne dpasse pas certaines limites, il prsente peu
:
d'inconvnients; il suffit, pour y remdier, de faire varier la mise

au point. Un dfaut beaucoup plus grave est la dformation de
l'image dans la zone marginale pour vrifier un microscope ce
point de vue, il faut examiner, avec les divers objectifs, un micro:
mtre quadrill ou un micromtre ordinaire. Les traits doivent

on est oblig de
rester parallles sur toute l'tendue du champ
mettre au point successivement la zone centrale et la zone mar:
ginale, mais le paralllisme ne doit pas tre altr. Si on constate

une dformation, celle-ci peut tre due soit l'objectif, soit l'oculaire, soit tous
deux.
CHAPITRE XVI
MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
Les mensurations microscopifjues peuvent s'appliquer aux trois
dimensions des objets et Tvaluation de leurs angles. Nous n'tudierons ici que la dtermination des trois dimensions des objets,
c'est--dire les mensurations dans un plan horizontal et dans les
plans parallles Taxe du microscope. Nous laisserons compltement de ct la mesure des angles, qui est exceptionnelle au cours
des recherches biologiques et qui ncessite des appareils parti-
culiers.
I.
MENSURATION DANS UN PLAN HORIZONTAL
mensurations microscopiques ne
directement, c'est--dire en superposant une
rgle gradue l'objet mesurer. On les pratique d'une manire
indirecte, en comparant une chelle type l'objet, par l'interm11
est
bien vident que les
peuvent tre
faites
diaire d'un dessin
ou d'une autre chelle
est variable suivant le grossissement.
arbitraire, dont la valeur
Nous
allons tudier succes-
sivement ces diverses mthodes de mensuration.

L'talon-type, qui est la base de toutes les mesures microscopiques, est le micromtre objectif. C'est une lame de verre de la
dimension d'un porte-obje-t, sur laquelle une longueur de 1 mm.
a t divise en
100
parties,
graphis. Ces traits sont
centime de
au moyen de
traits
gravs ou photo-
donc spars par un espace gal un
mm. ou 10
millimes de
mm. Comme
l'unit de
micron ou millime de mm.,

la
lettre
qu'on dsigne par
grecque a, l'intervalle qui spare deux
divisions est donc ofal 10 microns ou 10 a.
mesure, en micrographie,
est le
180
Les micromtres gravs au diamant sur verre prsentent plus

de garanties d'exactitude que les micromtres pliotographis,
mais ils ont l'inconvnient d'tre presque invisibles sous l'huile
d'immersion, lorsque
matire colore.
les
divisions
ne sont pas remplies d'une
A dfaut de micromtre, on peut employer les chambres gradues des compte-globules, dont les divisions sont gnralement
distantes de un dixime de millimtre ou 100 a. On peut aussi
comme
prendre
connues
et
talon
invariables,
l'Homme, dont
le
un
tel
objet
que
microscopique de dimensions
globule rouge du sang de
le
diamtre est de 7 8 a, mais
obtenues sont toujours approximatives.
mesures
les
ainsi
1 Procd de la chambre claire.

L'objet mesurer est
dessin autant que possible un fort grossissement, de manire
rendre l'approximation plus exacte. On a soin de prendre toutes
prcautions indiques p. 130, de manire ce que le dessin ne

pas dform. Une fois celui-ci effectu, on remplace la prparation par le micromtre objectif dont on dessine quelques divi-
les
soit
sions, aussi
exactement
exactement que possible, en s'attachant relever bien

milieu des traits ou un de leurs cts, toujours le
le
mme.
Pour
effectuer la
mensuration,
il
suffit
de comparer l'chelle
dessine au dessin de l'objet, soit par superposition directe, soit au
moyen d'un compas.

Le procd par superposition ncessite
la confection pralable
les combinaisons
toutes
correspondant
d'objectifs et d'oculaires. On les dessine sur le bord d'une lan-
d'une
srie d'chelles,
guette de bristol fort ou on les reporte sur verre, soit l'aide d'encre
de Chine silicate, soit, ce qui est beaucoup mieux, avec un dia crire. On remplit les traits du diamant avec de l'encre et
recouvre d'une goutte de baume et d'un couvre- objet. En
employant les chelles sur verre, il faut avoir soin de superposer
mant
on
au dessin
la
le ct
du couvre-objet,
afin d'viter les erreurs
dues
rfraction.
Le procd du compas ne ncessite pas absolument

de ces chelles, puisqu'il suffit de prendre
l'objet dessin et de comparer ce diamtre
tion
le
la
confec-
diamtre de
l'chelle
des-
sine.
Dans
qu'
l'un et l'autre cas, les divisions obtenues ne

correspondent
Pour obtenir la valeur en
des centimes de millimtre.
microns,
faut
il
se servir d'une
181
formule ou d'une chelle frac-
tionne.
de
La formule ncessite la dtermination du grossissement par la mthode

la chambre claire (p. 171) et la confeclion du dessin la mme hau-
mme tirage de tube. Connaissant le grossissement de

combinaison optique et le diamtre en millimtres du dessin obtenu,
suffit de diviser ce diamtre par le grossissement pour connatre le
teur et avec le
la
il
(^
50
10
100
150
250
200
300
Exemple d'chelle pour un grossissement de 300 diamtres.

et mesure 3 mm.
Oriyinal.
Chajue division vaut 10
Fig. 105.
;jl
diamtre rel. Supposons qu'un lment, dessin un grossissement

de 500 diamtres, ait un diamtre de 6 mm., son diamtre rel sera
6
500
mm.
012
= 12
u..
Vchelle fractionne permet, au moyeu du compas, de dterminer directement le diamtre rel, avec une approximation qui
dpend de la consti'uction de Tchelle. Voici comment on peut
construire cette chelle fractionne.
lo
sion
On prend pour ordonne (fig. 106) ox, la longueur d'une dividu micromtre dessine avec une comhinaison optique donne.
JS-"
Fig. 106.
chelle fractionne pour un grossissement de 1000 diamtres.

ox et o'a ont un centimtre et valent 10 ;a.
ax sera d'autant plus longue que l'approximation

cherche sera plus exacte. Prenons une abscisse de 10 cm., divise
en centimtres et en millimtres, puis traons la diagonale o'x.
L'abscisse
Gomme
l'ordonne ox correspond un centime de millimtre ou
l'chelle, correspondant un centimtre,

permettra d'valuer sur le dessin une longueur correspondant
1 [K et chaque millimtre une longueur correspondant i dixime
de a (0 ai). Supposons, par exemple, que le diamtre d'un l-
10
(x,
chaque division de
ment, mesur au compas, concide exactement avec la hauteur de

coordonne n*^ 7, cet objet aura un diamtre de 7 ;x; si le dia-
la
mtre
est
compris entre
les
coordonnes 7
et 8,
on peut l'valuer
LE MICllOSCUPE ET SES ACCESSOIRES
182
moyen d'nne
chelle millimtriqne,
sur notre chelle, d'valner
une appro.ximalion de un demi-micron. En doublant la longueur
de Tabscisse, on aurait une a}tproximation encore plus prcise.
Pour effectuer une mesure, on suit Tabscisse ax avec une des
en diximes de micron, an
mais il snlil gnralemeni,
comme
compas et on s'arrte lorsque Tantre pointe concide

exactement avec un point de la diagonale; il suffit alors de lire le
chiffre de la coordonne la plus voisine.
2 l*our les trs forts grossissements on peut dessiner une
pointes du
chelle
(tig.
107), permettant de mesurer jusqu' l'approximation
9
8
7
6
5
3
2
1
.
au
ce
o.c et
Echelle fractionne pour un grossissement de 2000 diamtres.
Fig. 107.
a ont deux centimtres et valent 10 ;a. Les fractions de ox et de o a valent
1
;x; les fractions de ax et de oo' valent
;/,l.
mm. OOOUo), sans

05 ou
une abscisse Iroj) longue. Pour cela, au lieu de tracer une
seule diagonale, on divise les ordonnes ox et o', reprsentant
mm. 01, en 10 parties, correspondant chacune nn micron, puis
on trace les 10 diagonales. L'abscisse sera divise en centimtres
de un demi-dixime de micron (0
;j.
avoir
ou en demi-centimtres de faron permettre d'valuer commodment la moiti de rintcrvalle entre deux coordonnes. Pour effectuer une mesure, on relve au compas le diamtre de l'lment
dessin, puis, comme prcdemment, on applique une des pointes
du compas au
point as*; la position de Taulre pointe, sur l'ordonne

ox^ donne immdiatement le nombre de microns. Pour connatre
les
fractions
s'arrter
de micron,
quand
il
l'autre })ointe
On lit alors le
comme prcdemment, que
de
la
diagonale.
suffit
de
suivre l'abscisse
ax
et
de
du comj)as concide avec un point

chiffre
la
de
i)oinle
la
coordonne. Su}q30sons,
du compas tombe sur
la
183
entre les divisions 7 et 8. Nous suivons Fabscisseavec
Ja
ligne o.r,
pointe infrieure et nous nous arrtons quand la pointe suprieure
rencontre la diagonale n 7. Si cette rencontre a lieu au niveau
de
la
coordonne n"
diamtre rel est de 7 a 6; si la renle diamtre rel est de
6, le
contre a lieu entre les coordonnes 6 et 7,

7
[X
65.
Dans
divisions de
la
ox correspond 10 a et chacune des

ax est divise en 10 parties, cora 1 la moiti de chacune de ces divi-
figure 107,
oxk
1 a; Tabscisse
respondant chacune
u. 05
sions vau t
Quelle que
rations
soit la
dpend de
la
mthode employe, Texactitude des mensuprcision avec laquelle le dessin de l'objet

Il faut donc avoir soin
d'employer
de Tchelle aura t excut.
et
un crayon
tracer
trs
que des
dur,
traits
taill
en pointe
de manire ne
trs fine,
dhcats.
Lorsqu'on a beaucoup de mesures effectuer,

tous les dessins avec la
mme
faudra excuter
il
longueur de tube
hauteur; on pourra alors se servir avec avantage,
et
la
soit
du
mme
calcul,
des chelles fractionnes. Toutefois il suffit, sans autre prcaution, de reproduire, au coin de chaque dessin, quelques divisions du micromtre pour pouvoir ultrieurement mesurer les
soit
objets et dterminer le grossissement
du dessin, sans qu'on
ait
s'occuper de la longueur (hi lubc et de la hauteur laquelle le

dessin a t pris. Le grossissement obtenu dans ce cas n'est pas
celui
du microscope,
tel
([ue
nous l'avons
dfini p. 170, mais sim-
plement celui du dessin, pour une longueur de tube
et
une hau-
teur quelconque, puisqu'on n'a pas pris les prcautions que nous
avons indiques, en traitant de
au moyen de
la
chambre
la
dterminalion du grossissement
claire.
Pour viter Tcnnui de ritrer exactement

250 mm. chaque fois (ju'on excute un dessin,
la
il
dislance
est
de
beaucoup
plus simple de dessiner une hauteur quelconque et toujours la
mme, par exemple au niveau de
la platine ou de la table, et de
relever chaque fois l'chelle micromlrique. Cette opration ne
prend que quelques instants et donne toute garantie pour l'appr-
ciation de la dimension des objets dessins. De mme, tout dessin

publi devrait tre accompagn d'une chelle, indiquant au moins
la
longueur correspondant 10 u.. Beaucoup d'auteurs croient

en indiquant les numros de la combinaison optique
tre prcis
employe pour excuter le dessin. En ralit ce renseignement

aucune valeur
non seulement il oblige le lecteur, s'il veut
n'a
184
connatre le grossissement, se reporter au catalogue du construcsont tout fait

teur, mais encore les indications ainsi obtenues
des catalogues sont gnralement

approximatives, car les tables
leur
En
supposant mme une exactitude suffisante,
peu prcises.
on n'a pas dessin avec la lonpeuvent tre inutilisables si

et la hauteur voulue. Combien de fois n'arrive-t-il
le tube ou que, faute de temps et de
pas qu'on oublie de tirer
on
dessine
matriel,
simplement au niveau de la table. Le plus sr
elles
gueur du tube
est
donc, pour viter tout calcul et aussi toute indication insuffisante, de figurer une portion du micromtre
sur
to.us les
Le procd de menchambre claire est le seul
dessins.
suration la
qui donne des rsultats prcis, lorsqu'il

mesurer des lignes courbes ou
s'agit de
des corps filiformes et enrouls.

luation de la longueur se fera au
L'va-
moyen
d'un compas ou d'un bon curvimlre,

que ceux qui servent mesurer les
tels
dis-
tances sur les caries lopographiques.

2 Procd de rociilaire microm-
trique.
Fiff.
Oculaire
108.
La mthode de
plus simple
et
la
mensuration
la
plus rapide consiste
employer l'oculaire micromlrique. Cet instrument (fig. 108) est un oculaire d'Hiiyghens ou un oculaire compensateur dans lequel, la place du diaphragme, se trouve une chelle gradue. Nous savons qu'en ce point
se forme l'image fournie par la lentille collectrice (p. 94 et fig. 59)
micromtiique.
l'image de l'objet
mme temps sur
et
du micromtre se projettent donc en
celle
la rtine
de l'observateur, mais avec des gros-
sissements diffrents. Les divisions de l'chelle mesurent gnralement un dixime de millimtre. La lentille oculaire est monte
un tube frotteaient, de manire

ment au point sur l'chelle.
sui"
pouvoir tre mise exacte-
L'oculaire micromtrique peut encore tre ralis d'une faon

plus simple on se sert pour cela du micromtre oculaire (fig. 109),
petite lame de verre ronde, portant la division micromtrique. On
:
introduit cette lame, face en dessous, dans l'oculaire, aprs avoir

dviss la lentille suprieure. Elle vient reposer sur le diaphragme.
Au
cas
l'chelle
ne
serait
pas vue distinctement, on peut

nombre de tours.
dvisser la lentille oculaire d'un certain
185
Il
avons-nous dit, de tourner vers l'objectif le

du micromtre. Autrement, les stries pourraient paratre
est ncessaire,
ct grav
doubles, par suite de rflexions la surface de

lame. En outre, la rfraction travers celte
lame n'aurait plus la mme valeur pour les
la
rayons qui forment Timage de Tobjet et celle

du micromtre, ce qui nuirait l'exactitude
Il faut donc, lors de Tusage
de ce micromtre ou lors du dmontage d'un
des mensurations.
soit
Quel que
le
micromtre employ,
objectif, la va-
chaque
109.
Fig.
Micro-
mtre oculaire.
oculaire micromtrique, avoir bien soin de placer

le ct grav du micromtre face en dessous.
faut tablir,
il
M^
sif-<>s*i*f>n>**'t'?-5
>
>
pour
bi<<K;M*:.i.l jA. ^slg*'
leur en microns d'une

-4VAÂwW'tvvi^jt*.>+<-*>*ff^^*r**''***^*>-MV'**^
division
de
l'chelle.
Si on se sert
*Wj V -^<^!^^^>^^M-
^tefW^^^M!^^V^^'^ î
du
petit
micromtre amovible,
il faut dterminer cette
aBTfjW-HJliC''^
tnavVff<i>W>S^'<*t>>*<*<* rr i it W fc:.>< *
valeur
pour chaque
combinaison d'oculaires et d'objectifs. Pour
!.<'/H-'>VlWt<W<!fiJ^fri<|J- < ?> Ji V' M h ijag;;;^

'
Fig.
ce faire, on installe le
micromtre objectif sur

la
platine
cope et on
110.
Aspect des
deux chelles microm-
triques superposes, un grossissement de

700 diara. 7 divisions du micromtre oculaire correspondent ? divisions (20 x) du micromtre
du microsmet au point
objectif.
Le
coefficient sera 2
857.
;ji.
de manire superposer les images des deux chelles

et 111). On cherche
7^j.yf^'^tjft%^
Original.
(fig.
110
zz^z
combien de divisions
du micromtre objectif
'!/tîe^K*}^<^*^'^^^^^^M^t
sont recouvertes exac-
tement par une ou pludu mi-
^^jîft^fîii^j^zî^
sieurs divisions
cromtre oculaire.
doit
On
Fig. 111.
Aspect des deux chelles micromgrossissement de
triques superposes, un
1200 diam. 6 divisions du micromtre oculaire
correspondent 1 division (10 ;x) du micromtre
tablir la conci-
dence
des
traits
du
micromtre oculaire
avec
le
milieu des
du micromtre objectif
ou avec un de leurs
plus
le
grossissement
666. Remarquer
Le coefficient sera
concidence de l'chelle oculaire avec le milieu
des traits de l'chelle objective.
Original.
1
objectif.
la
traits
bords,
est
;j.
toujours
considrable,
le
mme.
plus ces
En
traits
effet,
parais-
LE MICIIOSCOI'E ET SES ACCESSOIRES
186
seul rpais. Il
oculaire (|ui
des
rails
objectif
du
n"
5,
l'aiil
donc
choisir ceux
des
exactement
concident
micromtre
Si,
objectif.
micromtre oculau-e vaudra
sions
pour chaque
des objets
relles
du micromtre
mm.
divis en 100 par01), une division du
=0 mm.
^
rA"
UUo
inkromtrique. La
par
le
le
=o
"
a.
Le
dimensions
nombre de
coefficient
r*
table de ces
calculer les
de multiplier
oculaire
moyenne
exemple, avec un
oculaire recouvrent
jry
objectif sert
suffit
il
microiulre
partie
objectif,
mm. Do
chiffre constitue le coefficient
coeflicienls
la
par
10 divisions du micromtre
exactement 5 divisions du micromtre

lies de 1 centime de millimtre (0
du
traits
avec
de
divi-
l'objectif
employ.
On peut encore se servir du grossissement des diverses combinaisons

suffit alors
optiques, lorsque celui-ci a t dtermin avec prcision. 11
de dterminer la valeur d'une division au moyen du micromtre objectif
pour un seul objectif. On calcule les coefficients des autres objectifs en
sachant qu'ils sont inverses du grossissement. Soit 4 y. 8 le coefficient
trouv pour un objectif. Pour un autre systme grossissant 2,5 fois
autant que
le
premier,
le
coefficient micromtn(iue sera .t^
1
[j.
90.
mthode est moins sre que la prcdente.

Ces coefficients sont utilisables pour un observateur quelconque, car
le dplacement de la lentille oculaire, ncessaire pour mettre au point
de
l'image de l'chelle, ne modifie pas le rapport entre le grossissement
de
l'objet et celui du micromtre. En effet, ce rapport ne dpend que
la longueur du tube du microscope, pourvu que la dislance entre la
collectrice et Tchelle reste constante. Aussi faut-il rejeter tout systme
de mise au point de Tchelle bas sur le dplacement vertical de celte
dernire, car on aurait alors des variations continuelles dans le rapport
des grossissements du microscope et du micromtre.
Cette
Pour
])ar
faire
une mensuration, on remplace l'oculaire ordinaire
Foculaire micromlrique et on cherche combien de divisions
correspond la longueur, la largeur ou le diamtre de Tobjel

mesurer. Il ne reste })lus qu' multiplier ce nombre de divisions
par le coefficient micromtrique trouv pour l'objectif employ.

Bien entendu, il faut toujours oprer avec la mme longueur de
tube.
Pour
faciliter les calculs, je
recommande
d'tablir
une
fois
pour toutes une table donnant, pour chaque objectif, les valeurs
de 1 10 divisions du micromtre oculaire. Si on fait les mensurations au moyen du micromtre oculaire amovible, on fera autant
de tables qu'on possdera d'oculaires.
MEXSURATIONS MICROSCOPIQUES
Exemple d'un tableau donnant les valeurs
micromtriques pour 1 9 divisions du micromtre
187
oculaire.
LE xMICROSCOPE ET SES ACCESSOIRES
188
avons indique, car les

des diffrences inditoujours
prsentent
viduelles qui intluent sur la valeur micromtrique.
suivant la mthode que nous
objectif,
objectifs et les oculaires
La mtliode du micromtre oculaire o.sL rapide et commode; elle

fournit des rsultats trs exacts, pourvu qu'on ait soin de se conformer
aux prescriptions que nous venons de formuler, do ne pratiquer les
mensurations qu'au milieu du champ et de surveiller rig-oureusement
la mise au point des objets, ainsi que le contact de leurs bords avec les
a propos
divisions de l'chelle. Pour faciliter ce contact, Gebhardt
les traits sont reml'emploi d'chelles micromtriques dans lesquelles
manire se toucher par leurs
placs par de petits carrs, placs de
angles
AAA
AA.A.A
A.A.A.
^^^^^^^P^^^P^^^P^r^^
Fig.
chelle micromtrique
de Gebliardt.
11-2.
(flg.
112).
Cet
permet d'valuer sans
artifice
difficult
valeur d'un demi-intervalle

entre deux divisions. 11 double
donc la prcision du microla
mtre. En outre, lorsqu'il s'agit

de mesurer des objets incolores
ou de dterminer l'cartemenl de stries trs dlicates, cette chelle est
beaucoup plus visible que celles (jui sont formes de traits parallles
Ces micromtres sont fabriqus par Zeiss.
L'exactitude des mensurations est proportionnelle au grossisdu microscope. En effet, plus Fimage de Tobjet est grande,
de faire concider exactement les divisions du
il est facile
plus
micromtre avec les bords de cette image et plus les erreurs de
seliient
lecture deviennent petites.

laire
amovible prsente
d'oculaires
Tobjet
et,
trs
forts
ce point de vue, le micromtre ocu-
grand avantage de permettre l'emploi

qui, d'une part, grossissent l'image de
d'autre pari,
le
augmentent l'tendue des divisions de
On
peut alors apprcier plus facilement les fractions

de ces divisions. Il est mme possible, dans ce cas, d'tablir la
l'chelle.
chambre claire des chelles fractionnes, analogues celles que

nous avons conseilles pour l'emploi du micromtre objectif.
la lecture directe les subdivisions de
vient de proposer tout rcemment un oculaire micromtrique vernier intrieur. C'est, comme toujours, un vernier au 10",
grav sur la face infrieure d'une lame glissant sur celle de l'chelle
Pour permettre d'apprcier
l'chelle, Vls
Le mouvement se produit au moyen d'une vis de commande et

d'un ressort antagoniste. D'aprs l'auteur, cet instrument est plus prcis
que les oculaires tambour et son maniement est beaucoup plus rapide.
fixe.
1. Gebhardt, Ueber neue leicht sichtbare Mikromotcrteilungen, Ztschr. f. wiss.

Mikr., XXIV, p. 366-369, 1907.
2. F. Vls, Sur un micromtre oculaire vernier intrieur. C. B. Soc. bioL,
LXXVII,
p. 537-538, 1909.
189
La mthode du
micromtre oculaire, quand elle est applique

avec soin et avec un bon instrument, est certainement une des
plus
prcises, mais elle ne convient que pour mesurer les diamtres
ou des objets recliligaes. Des corps de forme irrgulire ou complique, tels que des Pilaires ou d'autres Nmatodes, ne peuvent
tre mesurs avec rapidit et
le
de la
prcision
que par
chambre
claire et
du curvimlre
Oculaires microratriques
mesurer avec prcision des
procd
(p. 184).
tambour
Ces oculaires sont destins
images trs tendues, occupant

une grande partie du champ.
Le principe de ces appareils
faire concider un
index avec une des extrmits
de l'objet mesurer, puis
dplacer cet index, au moyen
d'une vis micromtrique mise
consiste
en mouvement par un tambour

gradu,
atteint
jusqu' ce qu'on
extrmit
l'autre
ait
de
Le tambour porte, par

exemple, 100 divisions, comme
dans le micromtre de Leitz
(flg. 113), et chaque rvolution
l'objet
complte dplace l'index d'une

Oculaire micromtrique
Fif?. 113.
longueur de un demi-millimtre
tambour.
qu'on peut lire sur une chelle
divise en millimtres et demimillimtres, place entre les deux lentilles de l'oculaire. Dans ce cas,
une division de tambour correspond un dplacement de l'index sur
une longueur de 5
Bien entendu, il faut tablir, au moyen du micromtre objectif, la valeur micromtrique absolue d'une division du
tambour pour chaque objectif.
Nous ne ferons que mentionner la platine micromtrique, destine
mesurer avec prcision les objets trop grands pour entrer dans le champ
du microscope. L'objet est dplac par un chariot command par une
vis micromtrique tambour divis. On peut ainsi mesurer des objets
ayant environ 1 cm.
3" Procd de mensuration directe.
Ce procd est trs simple,
mais trs fatigant; il consiste regarder d'un il l'image microscopique
et la projeter de l'autre sur la platine du microscope, o on la mesure
au moyen d'un compas.
Pour obtenir des rsultats prcis, il faut, d'aprs Harting, observer les
on donne la platine une plus grande surface
prcautions suivantes
en y plaant un carton recouvert de papier blanc, de manire pouvoir
poser commodment les pointes du compas et les apercevoir nettement. L'il doit tre tenu parfaitement immobile. Enfin il faut que
l'paisseur du carton soit gale celle du porte-objet et la distance de
\)..
ces objets l'il de l'observateur doit tre toujours la
mme.
190
Celte mlhode
est trs prcise,
prcautions minutieuses et
malheureusement
ncessite des
elle
occasionne une grande fatigue. Aussi,

rarement employe car, pour donner de
elle
malgr sa simplicit, est-elle

bons rsultats, elle exige un long exercice.
11.
Pour
MENSURATION DES PAISSEURS
effectuer cette mesure,
au point successivement
la
il
suffit,
en apparence, de mettre
surface suprieure et la surface infrieure de l'objet et
de
sur
lire,
duation
la tte
la gra-
que
de
porte
la vis
mi-
dans
cromtrique,
les
grands
statifs,
les
chiffres
corres-
aux deux
pondant
de
positions
En
jectif.
Topration
l'ob-
ralit
est
un
peu plus complique. D'abord il est

assez
difficile
dterminer
Fig.
ment le plan suprieur et le plan infrieur d'une coupe
Mesure de l'paisseur d'une lamelle.

Correction ncessite par la rfraction.
114.
de
exacte-
d'un objet microscopique. On en comprendra la raison

se reportant ce que nous avons dit plus haut (p. 58) du pouvoir pntrant des objectifs. Les mesures dans un plan vertical
sont donc beaucoup plus difficiles effectuer que dans un plan
en
ou
En
horizontal.
outre,
il
faut tenir
compte de phnomnes de
rfraction lorsqu'on se sert d'objectifs sec

tte
de
la vis
entre les deux plans que si

faisait en milieu
homogne.
le
les chiffres lus

la
sur la
distance relle
parcours des rayons lumineux se

le cas contraire, Terreur due
Dans
la rfraction est d'autant

plus
pose entre
micromtrique ne reprsenteraient
grande que
la
couche
d'air inter-
lamelle et l'objectif est plus paisse.

Supposons par exemple, lig. 114, que nous voulions dterminer
l'paisseur d'une lamelle avec un objectif sec. La partie gauche
la
191
de la figiHv nous montre Tobjeclif mis an {loinl sur E, dans le

plan suprieur de la lamelle. Pour mettre ensuite au point sur le
plan infrieur, il semblerait qu'on doive l'abaisser de la quantit
dplacer de
la
quantit ED' car,
paraissent suivre le trajet
BD'. Pour connatre Ppaisseur rellede la lamelle (p. 187), il faut
multiplier la diffrence des deux chiffres lus sur la vis micromdu verre de cette lamelle. Dans
Irique par Pindice de rfraction
ED, mais en
ralit
il
suffit
de
le
aprs rfraction, les rayons partis de
immersion homogne, l'paisseur est gale

si le
liquide d'immersion a un
indice de rfraction (n') dilTrent de celui du verre (/?), il faudra
le
au
cas d'un objectif

chiffre primitif;
au contraire,
11
multiplier le chiffre primitif par
CHAPITRE XVII
EMPLOI DE LA LUMIRE POLARISEE

Nous ne nous occuperons, dans ce chapitre, que des appareils
de polarisation qu'on peut adapter aux microscopes ordinaires
pour tudier en lumire polarise des objets ou des tissus animaux
ou vgtaux. Nous laissons compltement de ct les microscopes
des minraux
polarisants, construits spcialement pour Ftude
en lumire polarise convergente et pour Tobservation des anneaux
d'interfrence.
I.
NOTIONS SUR
LA
LUMIRE POLARISE
comme
et
point de dpart la thorie des ondulations
un
mouvedus
sont
lumineux
admettons que les phnomnes
ment ondulatoire de Tther, milieu hypothtique qui remplirait
Prenons
tout l'espace et pntrerait tous les corps.
d'onde de ces vibrations
On
elle oscille entre
connat
0,4
et
la
longueur
0,7 a.
On
sait
vibrations par
rapidit est de 450 700 billions de
seconde. Les vibrations de Fther sont perpendiculaires la direcaussi
que leur
tion de propagation
naire
ou naturelle
du rayon lumineux; dans la lumire ordiproduisent uniformment dans tous
elles se
les sens.
Au
contraire, dans la lumire polarise, les vibrations ne sont

pas gales dans Ions les sens, les plus fortes se produisent dans
une direction dtermine
et
les
plus
faibles
dans une autre
direction, ou bien encore toutes se produisent dans le
mme
sens.
La lumire polarise est donc un mouvement ondulatoire bien

plus simple que la lumire ordinaire. C'est ce que montre la
EMPLOI DE LA LUMIRE POLARISE

figure 115 emprunte Rinoe ^
Soil
R un
193
rayon lumineux
ordinaire, les diamtres de l'anneau D, D..., vu en

perspective,
reprsenteront une infinit de plans, suivant lesquels s'effectuent
les vibrations. Au contraire,
pour le rayon polaris R', les vibrations n'ont lieu que dans le
plan D'D'.
On
peut produire de la lumire polarise par rtlexion d'un

de
lumire naturelle, sur une lame de verre convenablement
rayon
oriente. Mais la polarisation
i
2
ainsi
obtenue
incom-
est
plte et insufllsante
les
pour
^R
ludes microscopiques; les

corps birfringents produisent
une polarisation beau-
coup plus parfaite.

Pour bien comprendre
polarisation
par
birfringents
la
>-'
les
corps
considrons
un ravon de lumire naturelie, se
propageant travers
un milieu qui
prsente, dans
tous les sens, la mme rsistance au cheminement des

particules d'tlier.
Nous
Schma reprsentant la direction

Fig. 115.
de vibration d'un rayon de lumire naturelle
et d'un rayon de lumire polarise R' R'. Dans la lig. 1, le rayon est
RR
le plan du papier. Dans la lig. -2,

rayon est perpendiculaire au plan du
dans
le
papier. D'aprs Rinne.
di-
rons que ce milieu possde une lasticit optique gale dans toutes
directions. Suivant la nature de celte lasticit, la lumire
les
naturelle
se
modifie.
Au
dans tous
propagera plus ou moins

contraire,
si
les sens, les vibrations
plus gales
et la
vile,
mais ne sera pas

uniforme
cette lasticit optique n'est pas
des particules d'ther ne seront
lumire sera polarise.
Corps isotropes et anisotropes.
Les corps dont
l'lasticit
optique est gale dans tous les sens sont dits isotropes ou monorfringents. En traversant ces corps, les rayons lumineux peuvent
subir le phnomne de la rfraction (p. 2), qui traduit simplement un changement dans la vitesse de propagation, lorsque la
lumire passe dans un milieu de densit diffrente. Ces corps ne
polarisent pas la lumire. Tous les corps amorphes, non comprims,
sont isotropes. Il en est de mme des cristaux du systme
1.
Le microscope polarisant. Trad. Perviiiquire, Paris, 1904. Voir

Ambronn, Bcnutzung des Polarisationsmikroskop bei hisiologischen Untersu-
F. Rinne,
aussi
chungen, Leipzig, in-S de 59
M. LAXGF.nox.
p..
pi., 1892.
194
culique, parce
que leur symtrie optique
une
est reprsente par
sphre.
On nomme
ticit
optique
Fig. 116.
anisolropes ou birfringents
est
ingale.
les corps
dont
Prenons couime exemple
l'las-
le
spath
A, monorfringence; B, birfringence; n, normale au point

dence; /, rayon incident; i% ?', rayons rfracts. Original.
d'inci-
si on
regarde travers un mince prisme de cette
substance une petite ouverture ronde lumineuse, on verra deux
d'Islande^;
cercles
Le rayon
clairs.
incident unique a t rem-
deux
par
plac
rayons
rfracts distincts, chemi-
nant
avec
des
La
ingales.
montre qu'
ce corps,
le
s'est divis
rfracts.
de
Triage des rayons lumineux par

birfringents d aprs Rinne.
R, R' rayon de lumire naturelle vibrant en
R dans toutes les directions. En R' on ne
retrouve que les vibrations parallles aux
fils tendus suivant AB et CD.
Fig. 117.
les corps
ces
î^^-^^^^
vitesses
116
figure
la
rayon incident
en deux rayons
En
liminant un
deux rayons, on
^^.^^
p^^^^,g
^^^
et
1^
lumire Compltement po,^^:^^^_

^
j^^^jg^^^ ^^^
^
tropcs Comprennent
autres
cristaux
les
ceux du systme cubique
de
sortie
un certain nombre de corps
tous
que
iso-
tropes ayant subi des efforts mcaniques (traction, compression).

1. Le spath d'Islande est une varit
trs pure de calcite (carbonate de
calcium rhombodrique), remarquable par l'nergie de sa double rfraction, visible
l'il nu.

Suivant
la
comparaison
195
de Rinne, ces corps se
trs ingnieuse
comme un tamis, dont les fils seraient placs angle

ce tamis opre le triage des rayons et ne laisse passer que
ceux qui sont parallles aux deux systmes de fils perpendicucomportent
droit
laires (fig. 117).
La notion de VelHpse
d'lasticit sert figurer, dans
un
plan,
d'isotropie et d'anisotropie. Supposons un point

l'intrieur d'an corps et rayonnant dans toutes
les
phnomnes
lumineux plac
corps est isotrope, c'est--dire si son lasticit

optique est gale dans tous les sens, les rayons rencontreront
partout la mme rsistance et arriveront tous au mme instant
les directions. Si le
la
surface d'une sphre, dont le centre sera le point lumineux.
C'est le cas des cristaux

Si,
au contraire,
le
treront pas partout la

le
mme
du systme cubique.
corps est anisotrope, les rayons ne rencon-
mme
rsistance; aussi [)arcoureront-ils dans
temps des chemins
droites perpendiculaires, le
optique. Le point o
d'une
Reprsentons, par deux
diffrents.
maximum
et le
se rencontrent ces
ellipse, dite ellipse d'lasticit',
minimum
d'lasticit
deux droites sera le centre

les deux droites seront les
axes de cette ellipse ou oxes d'lasticit.
L'exprience du cube de glatine permet de concrtiser ces

notions thoriques. Un cube dcoup dans une masse de glatine
solidifie est isotrope; sa surface d'lasticit est une sphre. Si on
vient
comprimer deux faces opposes,
sphre, inscrite dans le cube, deviendra
il
un
vident que la
ellipsode de rvoluest
tion. En effet, la masse de glatine manifeste alors, dans certaines

conditions, les proprits d'un corps birfringent. On obtient les
mmes effets en exerant une traction sur une lame de glatine.
On
distingue plusieurs sortes de

rectihgne, elliptique, circulaire, suivant la nature
polarisation
des vibrations des particules d'lher.
Polarisation rectiligne.
:
ISous ne nous occuperons
dans laquelle
mme
ici
que de
la polarisation rectiligne,
rayon lumineux reste toujours dans un seul et

plan de polarisation, les vibrations de l'ther ayant
le
plan, dit
toujours lieu dans le mme sens.

Le meilleur moyen d'obtenir de
la lumire polarise en
ligne
un rayon de lumire naturelle un
prisme de spath d'Islande. Nous savons qu'aprs ce passage le
rayon naturel est dcompos en deux rayons polariss, vibrant
dans deux directions perpendiculaires. En effet, tout rayon qui
droite, est de faire traverser par
196
pntre dans
nn
cristal
parallle l'axe optique
birfringent,
du
cristal, se
dans une direction non

trouve, par suite de Tin-
de Tlasticit optique, divis en deux rayons polariss en

anims de vitesses ditrentes. En outre, les vibra-
galit
ligne droite et
de ces deux rayons se produisent dans deux plans perpendiTun l'autre. Pour obtenir de la lumire polarise dans
tions
culaires
un
il suffit de
supprimer un de ces deux rayons on
gnralement ce rsultat l'aide des prismes dits de
seul plan,
obtient
Nicol.
APPAREILS DE POLARISATION
II.
Un prisme de Nicol est construit avec un

Prismes de Nicol.
rhombodre de spath d'Islande, choisi de manire ce que sa
longueur soit environ le triple de son paisseur. Les faces terminales sont uses, de
faon leur donner une forme losangique et
un angle de 68, par rapport aux angles des
grands cts; puis on coupe ce prisme en
deux
moitis, suivant la direction de son axe
longitudinal. Les
sont polies, puis
deux surfaces de section

recolles au baume du
Canada.
Nous savons qu'un rayon lumineux, pntrant dans
ce prisme par une des petites

118), est dcompos en deux rayons
qui ne se propagent pas avec la mme vitesse.
Ils n'ont donc
pas le mme indice de rfracfaces
(fig.
tion et leur vitesse est en

la
prisme de Nicol.
Ijc,
plan de section
occup par une couche de baume du
Canada
ordinaire (RO,
ment
rayon
sur
(v.
le
p.
et n'a
ordinaire.
Original.
baume
48).
Il
rfract
L'autre est dit
RE, rayon
RO.
extraordinaire;
O'
raison inverse de
donc
le
plus fortement
rfract est celui qui se dplace le

plus lentement. L\in de ces rayons est le
rayon
Marche
des rayons dans un
Fis:.
valeur de cet indice
fig, 118), toujours unifoi-msuivant la loi de Descartes.
rayon extraordinaire (RE)
pas un indice de rfraction constant.
Dans le cas qui nous occupe, le rayon

ordinaire est plus fortement dvi et arrive
sous un angle suprieur l'angle limite
subit
donc
la rflexion
totale
et
est
absorb par
EMPLOI DE LA LUMIKRE POLARISE

moulure noire du prisme. Le rayon
la
rfrangible,
ment
traverse
baume
le
et
sort
197
extraordinaire,
moins
du prisme complte-
11 vibre dans la direction de la

petite diagonale de
terminale losangique du prisme. Le plan de polarisation
est toujours perpendiculaire au plus petit diamtre de la section
polaris.
la lace
du prisme. Il est ncessaire de connatre la position de ce plan,

aussi est-elle toujours indique sur la monture des prismes de
Nicol. On peut, avec Rinne, comparer le prisme de Nicol un
tamis en grillage
(fig.
119), form de
fils
jiarallles,
ne laissant
rayons dont le plan de vibration est parallle ces fils.

passer que
Nous voici donc en possession
Polariseur et analyseur.
les
le prisme
d'un faisceau de lumire polarise dans un seul plan
qui nous la fournit se nomme polariseur. Dans le microscope, ce
:
prisme est fix entre le miroir et la platine, la place ou au-dessous du condensateur ^ Mais cet appareil, employ seul, ne nous
donnerait que des renseignements trs incomplets, sur la faon
dont les objets microscopiques agissent sur la lumire polarise.
C/est tout au plus si on peut observer le plochrosme, c'est-dire la pro])rit des cristaux d'absorber la lumire d'une faon
diffrente suivant les directions.
Pour reconnatre
si
un corps
principal de notre tude,

et voir s'il polarise
il
est birfringent, ce qui est le but

faut placer ce corps entre deux niois
lui-mme
la
lumire.
Eludions donc ce qui va se passer lorsque nous superposons

deux niois. Le second nicol, nomm analyseur^ se place, dans le
microscope, au-dessus de l'oculaire: il est dispos dans une bague
molete (lig. 120), de faon pouvoir tourner autour de l'axe
optique. Le polariseur tant mis en place et le miroir orient, faisons tourner l'analyseur d'un tour com])let, soit de 360. Nous
remarquerons que l'clairage du champ est modifi quatre fois;

passe deux fois par un maximum d'clairage et deux fois par un
il
maximum
d'obscurit. Lorsque les plans de polarisation des deux

il
y a clairement, lorsqu'ils sont croiss il y
niois sont parallles

a obscurit.
En
sort
effet, le
rayon extraordinaire polaris en ligne droite, qui
du polariseur, traverse l'analyseur sans

Pour
tre modifi, lorsque
observations avec des grossissements faibles et moyens, il faut

enlever le condensateur, de faon avoir des rayons bien parallles. Pour les
trs forts grossissements, si l'clairage est trop insuffisant, on peut intercaler le
condensateur entre le polarisateur et la prparation. Pratiquement, le rsultat
est le mme qu'avec des rayons rellement parallles.
1.
les
198
deux prismes sont parallles. Mais si Tanalyseiir est lgrement

tourne par rapport au polariseur, le rayon est dcompos en deux
le second nicol. Si
rayons, dont un seul, Textraordinaire, traverse
les
Tangle des deux prismes atteint 90" les deux rayons sont compltement rfracts et n'arrivent plus Til de l'observateur.
On voit donc qu'en tournant l'analyseur de 360, on passe deux
fois par une position o les plans de polarisation des deux niois
sont parallles (clairement maximum), et deux fois par une position o ces plans sont croiss angle droit (obscurit complte).
Pour concrtiser ces
reprenons
faits,
comparaison de Rinne
la
sont
lages
mme
sens
second
p
Fig.
119.
l'analj'seui'
Relations du polariseur et de
1.
niois
d'aprs Rinne.
parallles; 5, niois croiss.

seur; P, polariseur.
deux niois
reprsents par deux grillages forms chacun de fils
parallles. Si ces deux grilles
supposons
A, analy-
orients dans
le
le
119, 1),
(fig.
laissera
passer
les
rayons polariss, tamiss par

le premier et orients dans
le
sens
les
des
grillages
fils.
sont
Mais
si
croiss
119, 2), la lumire sera

teinte par le second grillage, dont les fils se trouvent dirigs
perpendiculairement au plan de vibration des rayons polariss.
(fig.
Examen en lumire
objet transparent sur
les niois
champ
croiss.
la
Pour tudier Faction d'un

polarise.
lumire polarise, il faut l'examiner entre
Deux
cas peuvent se prsenter
reste obscur ou bien
il
s'claire plus
ou bien
le
ou moins.
le champ reste obscur, il faut faire tourner l'objet dans

plan de la platine. Si l'obscurit persiste pour toutes les posi-
Lorsque
le
que l'objet est isotrope ou monorfringent. Si, en faisant tourner l'objet, on voit reparatre la lumire c'est qu'on a affaire
un corps anisotrope ou birfringente En effet, l'interposition de
tions, c'est
ce corps modifie le rayon extraordinaire issu du polariseur; il le

partage en deux rayons, dont l'un donne, dans l'analyseur, un
rajôn extraordinaire qui rtablit l'clairement. En faisant tourner
l'objet,
on
doit le voir s'teindre et 5'c/aire?" quatre fois.
Chacune
1. Il ne faut pas oublier

que si un corps birfringent est orient de telle sorte
qu'un de ses axes optiques concide avec celui du microscope, il reste obscur
dans toutes les positions.
199
de ces quatre extinctions correspond au moment o les axes d'lasticit de Tobjel sont parallles aux plans de polarisation des niois.
Les quatre phases (Fclairement maximum correspondent aux
moments o
ces axes sont exactement perpendiculaires aux plans
de polarisation des niois.

Couleurs d'interfrence.
Les objets birfringents, examins

la lumire blanche, entre les niois croiss, ne sont pas seule-
ment
clairs mais prsentent encore de vives colorations, dont les
sont
teintes
les
mmes que
celles des bulles
de savon ou des
minces. Ces teintes ne sont pas autre chose

que des couleurs d'interfrence, appartenant Tchelle de NeAvton.
Voici comment elles se produisent. Nous venons de voir que le
couches d'huile
trs
corps birfringent agit sur la lumire polarise, en dcomposant de

le rayon extraordinaire polaris en deux autres
rayons.
nouveau
Si le corps est trs mince, ces deux rayons ne se sparent pas la

l'un d'eux est moins ra})ide que l'autre et se trouve en
retard d'une certaine quantit. Ce retard se nomme diffrence de
sortie
marche
produit linterfi-ence. Nous savons (v. p. 60 et fig. 34

que lorsque deux rayons lumineux suivent le mme chemin,
peut reconnatre leur prsence, par suite des phnomnes
et
et 35)
on
d'interfrence qui se manifestent par le renforcement, Taffaiblissement ou mme l'extinction totale de la lumire. Lorsque ces deux
rayons ont une diffrence de marche gale leur longueur d'onde,

se renforcent rciproquement (tig. 34); au contraire, lorsque la
ils
diffrence de
marche
est
d'une demi-longueur d'onde,
les
deux
vibrations s'annulent (fig. 33). Les couleurs
pour lesquelles cette

diffrence quivaut aune demi-longueur d'onde sont donc teintes
par l'analyseur, qui ne laisse passer que le rayon extraordinaire.
Les
autres
mme
couleurs
compltement
subsistent
incolore,
l'tat
de mlange
et l'objet,
sera vivement color de teintes,
d'autant plus intenses que l'angle form par le plan de vibration

de l'objet et celui du nicol sera plus voisin de 45. En outre, les
couleurs que prend l'objet entre les niois parallles sont compl-
mentaires de celles qu'on aperoit lorsqu'on l'examine entre les

niois croiss. Bien entendu, en faisant tourner l'objet de 360,
dans le plan de la platine, les couleurs apparaissent quatre fois et
lame de gypse donnant le

deux fois rouge, deux fois
vert clair et quatre fois obscur, pendant une rotation complte de
l'analyseur ou de la lame de gypse.
s'teignent quatre fois. x\insi, avec la
rouge de
l'^''
ordre, le
champ
parat
LE MICllOSCOPE ET SES ACCESSOIRES
200
Entre
les
niois
croiss,
cliaqne couleu;- aura
un maximum
d'inlensit, dans les conditions indiques, lorsque la diffrence de
marche sera un multiple
pair de la
demi-longueur d'onde
et
un
maximum
d'obscurit lorsque cette diffrence sera un multiple

de
la
demi -longueur d'onde. Entre les niois parallles les
impair
conditions sont inverses.
Ces couleurs peuvent, jusqu' un certain point, servir la

dtermination des objets, surtout lorsqu'il s'agit de minraux ou
de corps
En effet, elles dpendent de la valeur de la

de l'paisseur du corps examin. Donc, paiscorps les plus birfringents s'illumineront des cou-
cristalliss.
birfringence et
seur gale, les

leurs les jdus vives. D'autre part, rfringence gale, plus la
lamelle est mince, plus les colorations sont vives; plus elle est
paisse, pins les couleurs plissent et s'eflacent,
dans une luminosit blanche.
pour
se fondre
En
tudiant, en lumire polarise,

des lamelles de gypse d'paisseur croissante, on constate que les
couleurs se succdent par groupes, qui commencent par un ton

du rouge. Les pre-
violac ou bleutre et se terminent tous par
miers groupes vont du bleu lavande ou du pourpre au rouge, en

passant par tout<^ une gamme de verts et de jaunes. Dans les derniers groupes, on ne trouve jjIus qu'une alternance de jaune verdtre et de rouge ple. Ce sont ces groupes ou ordres, au nombre
de six, qui servent distinguer les couleurs de polarisation. On
dira rouge de
1"
ordre, rouge de
2*^
ordre, etc.
Usage des couleurs d'interfrence. Le rouge de i" ordre a une

grande importance, cause de la sensibilit avec laquelle il passe soit
au bleu, soit au jaune. Il existe, dans le commerce, des plaques de
gypse qui donnent les ronges des divers ordres. Plaons, entre l'analyseur et Tobjet (soit sous l'analyseur, soit au-dessus de l'objectif), une de
ces plaques donnant le rouge de 1" ordre
entre les niois croiss.
Gomme les couleurs d'interfrence varient suivant l'paisseur du corps
examin, il est vident que l'interposition d'un objet birfringent va
modifier la coloration fournie par la lame de gypse.
Plusieurs cas peuvent se prsenter. Si les deux rayons, issus de l'objet
birfringent, sont parallles ceux qui sortent de la lame de gypse et
orients de telle sorte que la diffrence de marche de ces rayons soit la
mme pour l'objet que pour le gTPse, il est vident que l'ensemble se
comportera comme une lame de gypse augmente de l'paisseur de
l'objet. Le rouge se transformera donc en une couleur d'ordre supi
rieur,
correspondant cette paisseur nouvelle. La coloration ainsi
1. Ces
plaques sont montes de telle faon que leurs axes d'lasticit sont
dirigs 45" du plan de polarisation des niois croiss.
EMPLOI DE LA LUMIERE POLARISEE
201
obtenue sera dite addltive ou d'addition, ou bien encore on dira que la

teinte monte.
Au contraire, si les deux rayons mis par l'objet, tout en restant parallles ceux de la plaque de gypse, sont orients de telle sorte que leur
de marche soit inverse, le rouge se transformera en une
coloration d'ordre infrieur, car, au point de vue optique, tout se passe
comme si la lame de gypse, avait diminu d'paisseur. La teinte obtenue
baissera, descendra ou. bien encore sera dite soustractive ou de soustraction.
Enfin, si les rayons sont orients 45'' la coloration n'est pas modifie.
difTrence
La connaissance de ces phnomnes est trs utile pour les examens

en lumire polarise. Un corps birfringent, plac entre les niois
croiss, au-dessus d'une lame de gypse donnant le rouge de l'"' ordre,
prsentera les aspects suivants, pendant la dure d'une rotation de 360".
On verra apparatre 4 fois le rouge de T' ordre et, entre ces quatre
apparitions, on verra deux fois une couleur d'addition (par exemple le
violet ou le bleu de 2^ ordre) et deux fois une couleur de soustraction
(par exemple l'orange ou le jaune de T'' ordre).
Cet examen avec la lame de gypse sert deux fins d'abord dterminer la direction des axes d'lasticit. Quand la teinte monte, l'axe de
plus petite lasticit de l'objet correspond l'axe de plus grande lasticit de la lame de gypse
c'est l'inverse lorsque la teinte descend.
Plus l'objet est mince, plus les teintes sont basses et plus le changement est facile apprcier. En outre, la lame de gypse sert dceler
les faibles birfringences (p. 205); en elTet, le changement de teinte
:
est plus facile reconnatre que les alternatives d'clairement et d'extinction qui, pour les corps faiblement birfringents, sont peine perceptibles.
mica,
On peut encore employer dans ce but des lames

comme nous le verrons plus loin (p. 200).
de quartz ou de
Voici, titre de document, la succession des couleurs d'aprs les six

ordres de l'chelle de Newton, avec les teintes complmentaires entre
les niois parallles.
202
G ordres,
le 5* et le
quera aussi que, dans
les couleurs sont trs
peu distinctes. On remar-
ordre les jaunes dominent, dans le 2* ordre

le spectre est complet, dans le 3* ordre les verts sont en majorit et
enfin, dans le 4* ordre, que les teintes commencent se fondre dans le
gris. Dans les ordres suivants, le blanc gristre efface de plus en plus
les couleurs et on arrive ainsi au blanc dit d'ordre suprieur.
le P'
m. MICROSCOPE POLARISANT
Il n'est
question ici que du microscope ordinaire, transform
en microsco]x; polarisant par l'addition de deux niois; nous lais-
Fig. 120.
Appareil de polarisation de Leitz.
A, analyseur; P, polariseur.
sons compltement de ct la description des microscopes minralogiques. Pour transformer un microscope ordinaire en micros-
cope polarisant,
analyseur.
il
suffit
donc de
le
munir d'un polariseur
et
d'un
Lepolariseur(fig. 120, P) est form d'un nicol dont les faces terminales sont obliques par rapport Taxe optique il est serti dans
une monture qui se place gnralement dans le porte-diaphragme
;
de Tiris de l'clairage Abbe. Il faut avoir soin de retirer auparale condensateur ou de l'carter hors de l'axe, suivant la con-
vant
du microscope.
L'analyseur est un nicol dont les faces terminales sont normales
Taxe. C'est gnralement un prisme du type Hartnack-Prazmowski. Il est mont de telle sorte qu'il puisse se placer sur l'ocustruction
laire; la
(fig.
monture est donc gnralement divise en deux parties

Tune qui se fixe sur le tube du microscope et dans
120, A)
203
laquelle on introduit rociilaire, cette partie porte aussi

fixe; l'autre partie s'applique
et porte,
frottement doux sur
outre le nicol analyseur,
un
un index
la
premire
cercle gradu en
360\ En
saisissant Fanalyseur par la bague moletle, on peut le faire tourner autour de Taxe du microscope et observer les alternatives
d'clairements et d'extinctions que nous venons de dcrire. On
rserve gnralement, dans la monture de ranalyseur, une chancrure dans laquelle on peut introduire la lame de gypse donnant
le
rouge de
IV.
1'"''
ordre.
EMPLOI DU MICROSCOPE POLARISANT
Le microscope polarisant renseigne sur les proprits optiques

des corps, au point de vue de la birfringence. Il peut donc servir,
soit dterminer la nature de ces proprits optiques, soit, celles-ci
tant connues, dterminer ou vrifier la nature de l'objet. Le
microscope polarisant trouve un de ses principaux emplois dans
Tlude des rocbes dbites en plaques minces dans ces coupes, on
reconnat la nature des minraux constituants, par la forme des
:
cristaux et par les couleurs brillantes dont ils s'illuminent entre

les niois croiss. Cette tude n"est pas de notre domaine, mais
nous pouvons en
tirer d'utiles
enseignements, pour l'application du
microscope polarisant l'bistologie animale ou vgtale.

Il est certain
que ce moyen de recherche est malheureusement
trop peu employ. Il est pourtant susceptible de mettre en vidence certains lments des tissus, avec une nettet qu'aucune
mthode de coloration ou d'imprgnation
n'est capable
de fournir.
mme
rvler des dtails de structure qui n'apparapourrait

traient autrement, ni par leur rfringence particulire, ni par
Il
absorption de radiations colores, ni par aucune mthode de coloration.
Prcautions prendre.
Par
suite des phnomnes de

deux niois, il est vident
qu'il y a une grande perte de lumire. Nous avons vu en effet que
les rayons lumineux sont ddoubls deux fois, lorsqu'on examine
un corps birfringent entre les niois croiss; il ne parvient donc
gure l'observateur qu'un quart des rayons lumineux rflchis
rfraction qui se produisent dans les
par le miroir. Aussi est-il ncessaire, pendant les observations en

lumire polarise, de se garantir contre toute lumire trangre.
204
Nous ne saurions donc trop recommander l'emploi des crans

dont nous avons parl page 167. Le meilleur cran sera une grande
feuille de carton noir, assez haute pour cacher toute la tte de
l'ohservateur et prsentant sa partie infrieure une chancrure,
par laquelle les rayons de
source lumineuse parviendront au
la
miroir.
En outre, pour les recherches trs dlicates, sur des corps trs
faiblement birfringents, il faut s'assurer que les lames et les
lamelles ne prsentent aucune trace de birfringence. Pour cela,
on
les
examine avec
sensible.
Il
la
la lame de quartz
birfringence des ocu-
lame de gypse ou avec
est plus rare d'tre
gn par
la
laires et des objectifs.
Pour Texamen des

saire
d'en examiner
prcipits cristallins desschs, il est ncesune partie sec et l'autre partie dans le
baume du Canada, qui

rence. Zimmermanu
lamelle avec une trs
fait
mieux
ressortir les couleurs d'interf-
dans ce cas, de mouler sous

quantit de baume, de faon ce
conseille,
jietite
qu'une partie des cristaux soient dans l'air.

Recherche de la birfringence entre les niois croiss.
Installer le {)olariseur et orienter le miroir com.me d"ha])itude
placer Tobjel sur la platine, puis mettre l'analyseur sur l'oculaire.

S'assurer de la mise au point exacte entre les niois parallles,
puis tourner l'analyseur de 90, de faon ce que les niois soient

11 est
plus commode que, dans cette position, le plan de
vibration de l'analyseur concide avec le jdan sagittal du microscope; celui du polariseur, tant perpendiculaire, se trouvera paral-
croiss.
au plan frontal du microscope.

Les niois tant croiss, faire tourner lentement Tobjet dans le
plan de la platine, autour de l'axe optique du microscope. Ici deux
lle
cas peuvent se prsenter si le microscope est muni d'une platine

tournante, celle-ci doit tre centre trs exactement (p. 15) c'est
:
cette seule condition qu'elle pourra tre utilise; autrement, pendant la rotation de la i)latine, l'objet sortira du champ optique. Si
le
microscope n'a pas de platine tournante, on
ration la
et
avec un
main sur
la platine,
})eu d'habitude,
ce
({ui,
aux
fait
tourner
la
prpa-
faibles grossissements
ne prsente pas de grandes difficults.

dites centrables, sont en
La plupart des platines tournantes,

ralit trs difficiles centrer.
trage approximatif au
Il
faut d'abord effectuer
un cen-
moyen des vis de rappel; puis, prenant

d'abord un trs faible grossissement, examiner un porte-objet sur
EMPLOI DE LA LUiMIRE POLARISE
205
lequel ou a trac, Tencre ou au diamant, une croix ou un petit

cercle de 1 millimtre de diamlre. Amener cet objet bien au
milieu du
ment
et le fixer avec les valets, puis lourner lenteInvitablement l'objet sort du champ; il faut Ty
champ
la platine.
maintenir en
le
dplaant la main et en combinant ces mouvevis de rappel. En ttonnant, on arrive faire
ments avec ceux des

accomplira
la platine
une
rotation complte, .sans
que Tobjet
sorte
un grossissement plus fort qui permet,

au moyen des mmes manuvres, de parachever le centrage. A
partir de ce moment, ne plus toucher aux vis de rappel.
La platine tant centre et l'objet tournant entre les niois
croiss, sous Til de l'observateur, deux cas peuvent se prsenter.
du chanqj. Passer
alors
Si l'objet s'teint quatre fois et s'claire quatre fois, dans des positions qui sont 45 l'une de l'autre (ce
qu'on peut vrifier au
moyen du cercle gradu de
il
l'analyseur),
est
videmment bir-
ne faut pas oublier que, pour des objets trs minces

ou trs peu anisotropes, l'clairement peut tre excessivement
fringent.
Il
reste obscur
pendant toute la dure d'une rotanous devons ensivager trois hypothses.

Le corps est pourtant birfringent, mais mal orient. En
faible. Si le
champ
tion complte de la platine,

1*^
effet, si
son axe concide avec celui du microscope,
comme un
corps isotrope. Dans ce cas,

soit faire une autre prparation.
2
duire
il
il
se
comporte
faut, soit dplacer l'objet,
Le corps est birfringent, mais trop faiblement pour proun clairement. Dans ce cas, passer l'examen avec la lame
de gypse ou de quartz sensible.

3 Enfin le corps est bien isotrope
tion et la plaque de
dans toutes
gypse laissent
le
le
changement
d'orienta-
champ compltement obscur
les positions.
Recherche d'une trs

assurer rclairage
faible
maximum
de
la
Il
faut d'abord
birfringence.
prparation, en employant une source
lumineuse intense. En outre, on s'aide soit de la plaque de gypse donnant le rouge de i" ordre, soit de la plaque de quartz teinte sensible,
donnant le violet sensible n" 2 de 3" ordre. Des corps birfringence
trs faible, peu ou pas visible entre les niois croiss, exercent pourtant
une action sur

cause de
les couleurs fournies par ces lamelles, dites sensibles,
la facilit
avec laquelle
les
corps birfringents modifient leur
teinte de polarisation. On place les lames sensibles sous l'analyseur,

dont la monture doit porter une chancrure spciale. On fait tourner
on observe le changement de teinte; avec la lame de gypse,

soit au bleu, soit au jaune; avec la lame du quartz, le
passe soit au rouge, soit l'indigo.
l'objet et
le
rouge passe
violet
206
On peut encore employer une plaque de mica, dite mica quart d'onde,
c'est--dire taille de telle sorte que les deux rayons polariss sortent
de cette lame avec une dilTrence de marche d'un quart d'onde. Les
didreuces do marche, produites par l'objet et le mica, s'ajoutent ou se
retranchent, comme pour les autres lames sensibles, et la teinte monte
ou descend.
Avec toutes ces lames sensibles et pendant la dure d'une rotation
complte, un corps birfringent apparat quatre fois de la couleur de la
plaque, deux fois avec une couleur plus haute et deux fois avec une
couleur plus basse.
11 est bien entendu que, pour obtenir la teinte que doivent fournir les
lames sensibles, celles-ci doivent tre orientes en diagonale par rapport aux niois croiss, de telle sorte que l'axe de plus faible lasticit,
c'est--dire correspondant l'indice de rfraction maximum, soit 45"
des plans de polarisation des niois. Gnralement cette direction est
marque sur la monture des lames sensibles. Par exemple, pour la lame
de gypse, il faut qu'entre les niois croiss on obtienne un rouge bien
franc, qui se change en vert entre les niois parallles.
Nous bornerons l nos tudes sur la polarisation au microscope. Nous
laissons intentionnellement de ct la dtermination des axes d'lasticit, des corps uniaxes et biaxes, des corps positifs et ngatifs. Nous
renvoyons pour ces recherches aux ouvrages spciaux.
Examen
des grains d'amidon en lumire polarise.

grains d'amidon sont certainement ceux qui se prtent le mieux aux tudes en lumire
Parmi
les objets d'origine vgtale, les
Ce mode d'clairage constitue mme un trs bon procd de diagnostic spcifique des diverses sortes d'amidon.
Entre les niois croiss, les grains d'amidon se comportent
comme des sphro-cristaux ils prsentent une croix noire sur
polarise.
fond clair. Les bras de
la
croix concident avec les plans de
vibration des niois et leur point d'intersection
marque
le bile
du
grain d'amidon. Par consquent, dans les grains d'amidon de

Pomme de terre, la croix sera trs excentrique; avec l'amidon de
Bl ou de Lgumineuses, on apercevra une belle croix noire dont
les bras partent
du
bile central.
Si on glisse dans Tanalyseur la plaque de gypse donnant le

rouge de l*"'" ordre, les espaces clairs se colorent immdiatement
deux d'entre eux prennent une couleur complmentaire de

deux autres. La croix devient rouge ou verte, suivant la
et
celle des
situation des
niois
et
les
espaces
clairs
sont
alternativement
bleus et jaunes.
Les grains d'amidon sont donc birfringents.

fait
par leur nature cristalline.
Ils
se
On
explique ce
comportent comme des
sphro-cristaux, composs d'aiguilles cristallines (trichites), dispo-
207
ses en sries radiales, formant des couches concentriques. Dans

rgne vgtal, les grains d'amidon sont seuls prsenter cette
le
structure
les
sphro-cristaux d'inuline et de phosphate de calles mmes phnomnes, mais ces forma-
cium produisent bien

tions
ne prennent naissance qu'aprs
le
sjour dans Talcool de
certains tubercules (Dahlia).
Examen des ufs d'Helminthes en lumire polarise.

Voir ce sujet p. 568 o on trouvera indiqus les lments birfringents des matires fcales (certains dbris alimentaires et
certains
ufs d'Helminthes).
Recherche du pigment paluden.

Plochrosme.
On
dsigne, sous
Voir
le
nom
p.
521.
de plochrosme,
des variations de coloration particulires aux corps birfringents

colors et produites, non plus par interfrence, mais par absorption ingale des rayons polariss, suivant diverses directions
dpendant de
la
constitution optique de l'objet.
Pour observer le plochrosme, on retire l'analyseur et on ne

se sert que du polariseur. (3n fait tourner l'objet comme il a t
pri'-cdemment indiqu et on note les changements de coloration.
Parmi les objets qui permettent d'tudier le plus facilement le
les cristaux colors de la carotte qui, pendant
une rotation complte, paraissent deux fois presque incolores et
deux fois colors en rouge intense. En effet, ces cristaux de Caroline laissent passer, dans une direction, presque tout le spectre et
plochrosme, citons
dans l'autre seulement des rayons rouges. Les membranes cellulosiques, colores en violet par le chlorure de zinc iod (p. 726),
prsentent aussi de trs beaux phnomnes de plochrosme.
CHAPITRE XVIII
CLAIRAGE A FOND NOIR

ET ULTRAMICROSCOPIE
L'clairage normal
du microscope
est
produit
par
lumire
rayons mis par la source lumineuse pntrent directement dans Tappareil, aprs avoir travers
Tobjet qui agit sur eux par absorption, rfraction et diffraction.
Au contraire, dans les appareils fond noir^ aucun rayon lumi-
transmise
autrement
dit, les
neux lie jjntre directement dans le microscope; ils

trent indirectement aprs avoir t rflchis, rfracts
fracts par Tobjet.
Il
s'est tabli
une certaine confusion dans
les esprits
y pnou difau sujet
de Tclairage fond noir et de Tultramicroscopie. On a pris la

mauvaise habitude, notamment dans le monde mdical, d'appliquer
tous les appareils fond noir, indistinctement, le nom d'ultramicroscope. Bien que tous ces instruments soient bass sur le
mme
})rincipe,
il
y a pourtant quelque diffrence entre
le
fond
noir et l'ultramicroscope. Tout ultramicroscope ncessite un fond

noir, mais tout appareil fond noir n'est pas un ultramicroscope.
h'
ultramicroscope est destin rendre visibles des corps rellement ullramicroscopiques,' c'est--dire dont les dimensions sont
au-dessous des limites du pouvoir rsolvant du microscope et de
la visibilit
maniement
de
l'il
dlicat,
humain. C'est un inslrument compliqu, d'un

ncessitant
presque
toujours l'emploi d'un
clairage lectrique trs intense.

1. Voici
quelques dfinitions qu'il est bon de connatre pour bien comprendre
ce qui suit
ultramicvoscopique s'applique seulement aux corps dont les dimensions sont au-dessous du pouvoir rsolvant maximum des objectifs microscopiques (0 lA. 23 environ). Ces corpuscules sont dits submiaôscopiques, quand on
peut arriver les clairer et les rendre visibles, amicroscopiques dans le cas
contraire.
:
CLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAMICROSCOPIE

Il
en
est tout
209
autrement de Yclairage fond noir. C'est un
permet de voir sans coloration, sans manipulations

des
objets de dimensions microscopiques, c'est--dire
chimiques,
susceptibles d'tre vus aussi avec les microscopes ordinaires. Le
dispositif qui
Tond noir permet simplement de les trouver et de les observer

commodment. Ce procd de recherche est entr dans la
plus
pratique courante, parce qu'il est d'application trs simple, facile

de tous les travailleurs.
installer, la porte
PRINCIPE DE L'CLAIRAGE
I.
FOND NOIR
L'clairage fond noir n'est pas une nouveaut, comme cerC'est une mthode connue depuis longtemps
sans remonter plus loin qu'une vingtaine d'antains le croient.
nes, tous les grands microscopes des maisons

srieuses possdaient dj, parmi leurs acces-
un diajjhragme fond noir. C'tait une

diaphragme toile (fig. 121) qu'on
plaait au-dessous du condensateur, au niveau
de l'iris. Le rsultat ainsi obtenu tait assez
soires,
sorte de
.,
P
m pariait.
^
L'essor qu'a pris
d'examen
est
rcemment
cette
mthode
Fig. 121. Diaphragme pour fond

noir.
des causes multiples, dont
perfectionnement des sources lumineuses,

dcouverte du Trponme et enfin les travaux sur les vritables
les principales sont le

la
objets ullramicroscopiques.
L'clairage fond noir ncessite
une source lumineuse intense.
Aussi, tant qu'on en a t rduit l'emploi des grosses lampes

arc, celte mthode de recherches ne pouvait rellement entrer
la pratique courante. L'apparition des petites lampes arc
surtout de la lampe de Nernst, ainsi que des brleurs gaz
dans
et
manchon
(type droit ou renvers), donnant une lumire clatante,
a permis d'installer, commodment et sans grands frais,

rage trs suffisant pour les observations fond noir.
un
clai-
a provoqu la recherche d'un

de
diagnostic facile, rapide et sr. Il faut, pour colorer
procd
convenablement ce parasite et le dcouvrir dans une prparation,
La dcouverte du Trponme
une ducation technique que n'ont malheureusement pas tous les

Pour un oprateur un peu exerc et avec les mthodes
praticiens.
M. Langeron.
14
210
plus de cinq minnles pour colorer un

encore trop long lorsqu'on a de nombreux
malades examiner. L'emploi du fond noir est beaucoup plus
frottis
ne
il
actuelles,
iaiil
nanmoins
])as
c'est
rapide et tout aussi sr. Aussi l'usage universel qui en a t fait

jiour le diagnostic de la syphilis a-t-il grandement influ sur le
perfectionnement
et la simplificalion
des appareils. D'ailleurs tous
perfectionnements taient corrlatifs des progrs accomplis

dans le domaine de l'ultramicroscopie pure, qui est du ressort
de la physique et de la chimie. Les sciences biologiques ont
ces
profit des
lement
perfectionnements raliss dans l'tude des objets rel-
invisibles.
Dans
l'clairage fond noir, les objets api)araissent
sur
points brillants
comme
des
ciel constell
par une nuit claire et sans lune. On conoit que des

petits, trs difficiles colorer ou peu rfringents,
d'toiles
objets
un fond obscur, comme un
trs
deviennent
Voici
trs
facilement visibles grce cet
comment on
arrive le raliser.
arrter tous les rayons
On
ai tifice.
s'arrange de manire
lumineux qui pourraient pntrer direc-
On y
l'objectif.
parvient au moyen d'un diaphragme,
diamtre correspond l'ouverture de l'objectif et qui est
interpos, sous le condensateur, sur le trajet des rayons lumi-
tement dans
dont
le
neux. Par contre, l'objet examiner est clair viveuient par les
rayons qui traversent la zone annulaire entourant le prcdent
diaphragme. Cette zone est situe au del des limites de l'angle
d'ouverture de l'objectif.
Il
ne parvient donc, dans ce dernier,
aucun rayon lumineux direct; aussi le champ est-il parfaitement

obscur. De son ct, l'objet est clair par des rayons latraux
trs obliques qui subissent la rflexion totale (p. 48);
marche de ces rayons en
la
les
fait
les rfractant et
en
il
modifie
les dilractant et
pntrer ainsi dans l'objectif; cet objet parat donc brilclair sur le fond obscur. Le phnomne est analogue
lamment
celui qui se produit, lorsqu'un rayon de soleil pntre dans une

et illumine les poussires invisibles qui flottent
chambre obscure
dans
l'air.
faut donc, pour obtenir

les deux conditions suivantes
Il
dans
un bon clairage
fond noir, raliser
Empocher qu'aucun rayon du
faisceau clairant ne pntre
l'objectif;
2 Eclairer l'objet par des rayons latraux aussi intenses

que
possible.
ECLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAMICROSCOPIE
214
Ces deux conditions sont ralises grce au phnomne de la

fondement de la mthode du
rflexion totale, qui se trouve tre le

fond noir.
II.
AP^PAREILS POUR L'CLAIRAGE A FOND NOIR
Nous n'tudierons
la
pratique
Toutefois,
complet,
ici
que
les appareils
fond noir applicables
courante.
tre
pour
nous dirons
nn mot des ullramicroscopes.

1
Diaphragme
fond noir.
Le plus
simple de tous ces appareils
est le
qui
se
diaphragme
place
condensateur
et
sous
le
qui
est
un perfectionnement de
l'ancien
diaphragme que
nous venons de dcrire
121). Le diaphragme
(fig.
fond noir de Zeiss est
construit exclusivement
Fig. 122.
pour tre associ des

condensateurs dont Tou-
Diaphragme fond noir de Zeiss avec

condensateur ordinaire de 1,10.
verture numrique n'est pas infrieure

appareil sur l'iris compltement ouvert
On
place
cet
installe d'abord
un
1,40.
on
disque toile, dont le bouton central doit tre tourn vers le

puis, sur ce premier disque, on centre un second disque de
plus grand diamtre. Ce centrage est le point dlicat de l'emploi
de l'appareil s'il n'est pas fait trs exactement, le fond noir ne se
haut
produit pas, parce qu'il arrive dans l'objectif des rayons lumineux
directs.
2"
Condensateur parabolique de Siedentopf
fig.
123):
Cet instrument, construit par Zeiss, est form d'une

(P) de verre, i)lan-convexe, dont la courbure est un parabolode de rvolution et dont le foyer se trouve en 0, au niveau
paisse len-
tille
du
porte-objet. Le
diaphragme B intercepte tous
les
rayons dont
LE MICUOSCOPE ET SES ACCESSOIRES
Cl
rouverUire numrique est infrieure 1,1- On obtient ainsi un

le fond noir par rflexion
clairage latral annulaire qui produit
totale des
rayons lumineux sur
celle des
l'air,
condensateurs
s})liriques,
Condensateur
I,
carts de
est plus
facile
manier que
les
parce qu'il supporte plus facilement des
P, parabolode
parabolique (Zeiss).
huile de cdre; O, prparation.
B, diaphragme
mise au point, c'est--dire des prparations plus ou
moins paisses.
Ce condensateur
place
du couvre-objet. La
rayons diffracts par Tobjet est reprsente en pointill.
Le condensateur parabolique
Fig. 123.
la sortie
clairants est indique par des traits pleins,
marcbe des rayons
s'introduit,
du condensateur ordinaire.
dans l'appareil d'clairage, la

doit tre remont au maximum,
Il
reli la face infrieure du porte-objet par

une goutte d'huile de cdre, condition indispensable pour que
de manire tre
l'clairage fond noir se produise.
En
effet,
dans
le
cas contraire,
rayons subiraient la rflexion totale avant de pntrer dans la

prparation et ne pourraient clairer les objets Cette couche de
les
liquide d'immersion est indique par la lettre I dans la fig. 123.

Les autres prcautions sont les mmes que pour le diaphragme
fond noir.
Les objectifs
leurs rsultats,
interceptant les
forts,
sec ou immersion, donneront de meil-
lorsqu'ils seront
munis d'un diaphragme
rayons marginaux.
central
ECLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAM[CROSCOPIE

3
Ce
Condensateur miroirs concentriques de Jentzch.
condensateur est construit par Leitz.
rflchissantes,
(fig.
convexe
une interne
Il
et
possde deux surfaces

une externe concave
126).
Cet appareil s'emploie

forts, soit avec des
immer-
munis
d" un dia-
objectifs
sion
213
phragme
spcial
soit
avec des objectifs sec moyens ou
intrieur
(fig. 1^27),
de
faon arrter les
rayon marginaux
di-
rects et ne laisser
pntrer dans l'il

de l'observateur que
les
rayons
diffracl es.
Le condensateur
de Leitz existe sous
Fig.
1-2-4.
(Leitz).
Coudensateur miroirs concentriques

Grand modle pour la sous-platine.
deux formes. L'une

(fig.
124) s'introduit sous la platine, dans l'appareil d'clairage,

du condensateur ordinaire. Elle est munie de vis de
la place
centrage qui permettent un rglage parfait. L'autre
Fig.
1-25.
Condensateur
miroirs concentriques (Leitz).

sur la platine.
Petit
125)
est
modle, se
fixe
(fig.
monte sur une plaque qui se pose simplement sur la platine du

microscope, o on la fixe au moyen des valets. Le centrage se fait
la main; il est facilit par deux petits cercles
gravs la surface du condensateur (fig. 129). On met au point ces
petits cercles
avec des objectifs de |)lus en plus forts et on arrive ainsi, par ttonnements, un centrage suffisant. Un levier permet d'lever ou
244
(rabaisser lgrement le condensateur et ^ramener ainsi le

foyer au
centre de la prparation, pour les diffrentes
de
lames.
paisseurs
Chacune de ces deux formes
condensateur prsente des

avantages particuliers. Le grand
condensateur convient pour les
de
microscopes grands
peut
tre
centr
et
moyens;
facilement
il
et
avec prcision, grce aux trois vis

de rappel. Il permet, en outre, de
grands dplacements de la prparation et ne s'oppose pas Tusage

des platines chariot. Le petit condensateur
peut
tre
plac
sur
un microscope quelconque, mme

ne })Ossdant pas l'clairage Abbe.
Il
est plus diflicile centrer exac-
tement
et
on a de
Marclie des l'ayons dans

Fig. l'26.
le condensateur miroirs concentriques de Leitz.
dplacer, sans modifier
la prparation maintenue
des
valets et par Fadhrence
par
de rhuile de cdre. Nanmoins
trage,
ce condensateur peut rendre de grands services
de voyage
et
pour
peine
ce cen-
la
comme
appareil
les diagnostics rapides.
RElViRQUES CONCERNANT
TOUS LES APPAREILS A FOND NOIR
lit.
Dans tous ces appareils, sans

1 Production du fond noir.
aucune exception, le fond noir est produit par rflexion totale
des rayons, au moment o ils sortent de la lamelle pour passer dans
Tair. Ce phnomne est d ce que les rayons qui ont travers l'espace annulaire entourant le diaphragme ont pris, par
suite des rtlexions ou des rfractions, un angle suprieur l'angle
limite (v. p. 48).
2" Ncessit de
l'immersion du condensateur.
De
rsulte la ncessit absolue de relier la face infrieure de la

et la face
lame
suprieure du condensateur par une goutte d'huile de
cdre. Si on nglige cette prcaution,
la
rtlexion totale se produit
CLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTR AMICROSCOPIE

la sortie
ration,
du condensateur
l/huile d'immersion
et
il
n\v a plus clairage de
doit tre
la
21
">
prpa-
trs fluide,
parfaitement
limpide et exemple de bulles d'air. On peut trs bien employer,
au lieu (rhuile de cdre, de Ihuile de paraffine, de la glycrine
mme
de Teau. Avec les condensateurs placs sous la idatine, il

pour viter les bulles d'air, d'abaisser le condensateur, de
mettre une goutte de liquide sur la lentille suprieure, une autre
sous la prparation, puis de remonter le condensateur avec la cr-
ou
suffit,
maillre, de faon obtenir
le
contact des deux gouttes.
Les appareils fond noir sont

paisseur des lames.
calculs de telle sorte que leur foyer se trouve 1 mm. environ
au-dessus de leur surface suprieure. Cette distance correspond
rpaisseur moyenne d'une lame. Il est donc ncessaire, pour
3"
obtenir des images parfaitement nettes, de se servir de lames dont

rpaisseur ne s'loigne pas trop de celle pour laquelle a t construit l'appareil.
Avec
condensateurs fond noir qui se placent
les
on peut remdier aux diffrences d'paisseur des

ou abaissant lgrement le condensateur, au
en
remontant
lames
la crmaillre. Parmi les condensateurs qui se fixent
de
moyen
sous
la
platine,
la platine, le }>etit modle de Leitz possde le grand avantage d'avoir un levier, permettant ces lgers dplacements verticaux. Avec tous ces appareils, on peut donc se servir de lames
sur
quelconques d'{)aisseur moyenne.

Au contraire, avec des modles plats,
tels
que ceux de Reichert,
qui ne peuvent se dplacer verticalement, il est indispensable de

n'employer que les lames calibres, livres avec l'appareil.
4
Minceur des prparations.
de dire dcoule
la
ncessit de ne faire
De ce que nous venons

que des prparations trs
minces. Si elles sont trop paisses, les parties qui se trouvent en

la zone focale ne peuvent tre mises au point et donnent
dehors de
lieu des reflets qui
gnent l'observation.
paisseur des lamelles.
Elle a
la
dans l'observation microscopique ordinaire

se sert de prfrence d'objectifs assez forts,
mme
importance que
84). Comme on
ne faut pas ngliger
(p.
il
compltement ces variations d'paisseur qui peuvent nuire la

nettet des images'. Il faut donc employer, autant que possible,
des lamelles de 170 a d'paisseur.
1. Ou trouvera des r^jles prcises pour dceler et
compenser les ditfrenccs
Siedentopf, Ueber mikroskopische Beobachtungen
d'paisseur des lamelles dans
bel Dunkelfeldbeleuclitung. Zeitschr. f. iviss. Miki:, XXY, p. -T/S-SS, 1908.
:
216
Les objets
6^ Milieu de montage des prparations.
examiner doivent tre monts dans l'eau ou Thuile de cdre, mais
jamais dans Vair,
ni
dans un milieu optiquement trouble; cette
ncessit dcoule des rgles prcdentes. Si Tobjet est mont

sec, dans Fair, il est clair que la rflexion totale aura lieu avant
d'arriver Tobjet et qu'on n'obtiendra
aucune image.
Si le milieu
optiquement trouble, les particules en suspension s'illumineront et masqueront la prparation.

est
et
Mentionnons ce propos Tinfluence perturbatrice des poussires

des bulles d'air. Il faut donc s'assurer de la propret mticu-
leuse des lames et lamelles, qui doivent avoir t laves Talcool

et soigneusement essuyes avec un cbiffon non pelucbeux.
Les petits grains de poussire, inclus dans la prparation, forment

autant de points lumineux qui peuvent tre une source d'erreurs.
Il en est de mme des bulles d'air. Dans la prparation elles s'illuminent; au contraire, lorsqu'elles se trouvent dans le liquide
d'immersion qui runit la lame au condensateur, elles causent des
voiles plus
ou moins notables, en dviant une partie des rayons
lumineux.
7o
Choix des objectifs.
Il
ressort des considrations tho-
riques sur l'clairage fond noir que les meilleurs objectifs

employer pour ces observations sont les sys-
tmes
sec
numrique
moyens ou
forts,
dont l'ouverture
n'est pas trop grande. Plus cette
ouverture est leve, moins
le
fond est noir,
parce que l'objectif admet alors un certain

nombre de rayons qui n'ont pas subi la
rflexion totale. Aussi, avec les objectifs
numimmer-
sec trs puissants grande ouverture

rique, et surtout
avec
les objectifs
sion, est-il ncessaire d'liminer les rayons
marginaux, en introduisant un diaphragme

particulier dans la monture de l'objectif
Fig. 127.
Diaphragme
intrieur pour objectif
immersion.
rants,
intrieurs doivent
(fig. 127). Ces diaphragmes
gnralement tre ajusts par le constructeur; ils sont amovibles ou non suivant
les cas.
Pratiquement, et pour les travaux couon emploiera donc les objectifs sec, associs des ocu-
laires trs puissants,
pour augmenter
le
plus possible
le
grossis-
CLAIRA.GE A FOND NOR ET ULTRAMIGROSCOPIE

sment. Si on veut employer les objectifs immersion,
dans leur tube un diaphragme amovible.
217
il
faut
faire placer
En outre, pour chaque appareil, on aura soin de se conformer

aux indications donnes par le constructeur, en notant bien que
l'emploi des apochromats est rserv aux recherches tout fait
dlicates.
8'^
Choix des oculaires.
Pour rgler l'clairage
mettre au
et
mais, pour observer, on devra

recourir aux oculaires les plus puissants, de manire compenser
le grossissement insuffisant des
objectifs.
point, on se sert docalaires faibles
90
Choix de
rants,
source lumineuse.
la
arc
les
lampes
d'ailleurs maintenant de
nent avec
les
Pour
les
ne sont pas indispensables

petites
lampes
travaux cou-
on construit
main qui fonction220 volts. Nanmoins
arc
courants ordinaires de 110 et
sources lumineuses les plus pratiques, au laboratoire, sont les
les
lampes de Nernst et les brleurs gaz intensifs manchons'. La

lampe de Nernst est une lampe lectrique, filament form
d'oxyde de zirconium et de thorium, donnant une lumire blanche
trs intense et trs fixe.
Il
faut savoir
que
cette
lampe ne s'allume
pas immdiatement; il est ncessaire que le fil de platine soit

d'abord port au rouge avant que lincandescence se produise.
Aprs un usage plus ou moins prolong, il peut mme arriver que

lampe ne s'allume plus seule dans ce cas, on dvisse le globe
la
avec prcaution,
rement
et,
le filament
aprs avoir tabli
dans
le
courant, on chauffe lg-
flamme d'un bec Bunsen l'incandesproduire et on remet de nouveau la lampe

la
cence ne tarde pas se

dans son globe. Toutes ces manipulations doivent tre excutes
avec beaucoup de soin, car cette lampe est trs fragile les secousses
:
dsagrgent rapidement les oxydes, font

poussire et la lampe devient inutilisable.
ne faut
tomber
Pour
la
fonctionner cet appareil que pendant

tement ncessaire pour ces oprations.
faire
Cette lampe est
le
filament en
mme
le
assez coteuse (20 fr.), mais elle
raison,
temps
il
stric-
consomme
relativement peu d'lectricit. Elle se fait en plusieurs modles,

suivant la nature et le voltage du courant (110 ou 220 volts).
Les brleurs gaz peuvent tre du type droit (genre Auer) ou

Ce dernier esl le plus commode, car il donne une source
renvers.
lumineuse plus intense

1.
La lumire
branche sur
le
troide
et
plus condense.
de Dussaud est conomique et pratique. L'appareil se
secteur lectrique.
218
En
du laboratoire
dehors
notamment en voyage, on
el
procds de iorlnne que Fingniosil de chacun lui

Je
vais pourlaul en signaler quelques-uns, dont j'ai pu
suggrera.
emploiera
les
exprimenter
l'efficacit.
Un bon modle de hrleur
incandescence
est la petite
lampe
de projection
elle
marche au moyen d'une soufflerie en caoutchouc, genre thermocautre. Le manchon est petit, mais trs lumineux et en donnant
alcool qui est
au moyen de
employe pour
la
poire
une
les appareils
facilement transporlable
on arrive obtenir une
forte pression,
incandescence parfaite. Ce manchon,

il
sufft
mme
usag, peut devenir
pour cela de
le
tremper dans
nomm
un
soline qui lui reml sa rigidit et sa solidit

liquide
Les
premires.
lampes actylne de tous modles sont encore
plus })ratiques et donnent une excellente lumire. Notamment, les
lanternes de bicyclettes donnent de trs bons rsultats, elles sont

surtout recommander en plein air ou sous la tente. Pour l'intrieur des maisons,
portatifs,
il
est prfrable
moins sujets aux
de choisir d'autres modles
fuites.
A dfaut de ces appareils, on peut trs bien faire fonctionner le

fond noir avec une lampe ptrole ordinaire, pourvu quon se
place Vobsv.urit. Une grosse loupe ou un petit ballon rempli
d'eau suffit pour clairer le miroir. Avec ce dispositif trs simple,
on peut faire d'excellentes observations dans une chambre
obscure.
10''
Installation et centrage de la source lumineuse.
Ces oprations sont de premire importance, car le meilleur clairage donnera des rsultats trs mdiocres s'il n'est pas soigneuse-
ment centr.
Le centrage
s'effectue en
deux temps
on centre d'abord
rage, puis le condensateur fond noir.

a. Centrage de la source lumineuse.
de
lentille condensalrice, le
ne se sert pas
soumis aux mmes rgles

commence donc par centrer avec
centrage est
que pour le microscope. On

ou sans condensateur ordinaire, comme
il
a t dit p. 43. Puis,
microscope, ni la source lumineuse, on installe

condensateur fond noir. Employer le miroir plan.
sans dplacer
le
Si on
l'clai-
Si
on se sert d'une
lentille
condensalrice (ou d'une boule rem-
faut rgler les positions de la lam]>e, de la lentille et

microscope, de manire ce que toute la surface du miroir
plie d'eau)
du
le
plan
soit
il
parfaitement claire.
Il
est
notamment indispensable

les
que
219
bords du miroir soient clairs trs uniformment. Pour
la lentille ou la boule de verre 15 ou 20 centimtres

du microscope. Le miroir de ce dernier tant inclin 45", il est
ncessaire que la lentille lui soit parallle et soit
place peu prs au niveau de la platine. La
-j
cela
on place
lumineuse
source
de
environ
Fig. 128.
la
est
:20
place
lentille,
centimtres
exactement son fover
clairage du condensateur fond noir avec une lampe de Nernst et

une lentille condensatrice.
juincipal (p. 45). Elle est place
un peu haut, de
telle sorte
que
lumineux soit dirig, de la lampe au miroir,

trajet des rayons
suivant une ligne droite, faisant un angle de 45" environ avec le
le
plan de
la
table (fig. 128).
boule d'eau de Zeiss ou celle qu'on peut raliser plus

simplement avec un gros ballon de verre de un
Avec
la
ou deux
colore
litres,
en bleu
rempli d'eau trs lgrement

par une petite quantit de
sulfate de cuivre,
une hauteur
il
vienne se former sur
le
suffit d'lever la
suffisante
le
pour que
lampe
son image
miroir plan.
Pour contrler l'clairement du miroir on

recouvre d'un morceau de carton blanc. On
approche ou on loigne
le
Fig. 129.
Aspect
des cercles de re-
pre des condensateurs fond noir.
microscope, jusqu'
surface du papier, correspondant au
miroir, soit exactement couverte d'un cercle lumineux bien uniformment brillant. Par quelques ttonnements on rgle ensuite
ce
la
que
la
du miroir.
Centrage du condensateur fond noir.
position dfinitive
h.
La plupart des
condensateurs portent, gravs sur leur face suprieure, un ou
deux
petits cercles (fig. 129).
Il suffit,
aprs avoir rgl l'clai-
220
rage, d'amener ces cercles bien au milieu du champ
^,
d'abord
avec un objeclif faible, puis de parfaire ce cenlrage avec des

on s'efforce, avec un
objectifs plus forts. A dfaut de cercle grav,
objectif trs faible, de mettre au milieu
du champ l'espace circu-
obscur qui correspond au diaphragme de l'appareil. Lorsqu'il

sur les vis de centrage
s'agit d'un condensateur conique, on agit
avec un condensateur platine, on fait subir cette platine de
laire
dplacements antro-postrieurs
du centrage.
petits
tion
IV.
et latraux
jusqu' obten-
TECHNIQUE DE L'EXAMEN SUR FOND NOIR
Cette technique est des plus simples. L'objet examiner est

gnralement une srosit ou un liquide de l'organisme, dans
lequel on recherche des lments figurs, parasitaires ou non.
L'examen sera donc toujours fait dans un liquide, de manire
empcher
la
rflexion totale des rayons avant
que ceux-ci n'ar-
rivent l'objet. Si le prlvement du liquide organique est insuffisant, on diluera donc avec de l'eau distille, de la solution
physiologique ou du srum naturel. Dans d'autres cas, l'objet sera

plong dans un milieu plus rfringent (huile de cdre, baume du
Canada,
etc.).
soit le hquide employ, la prparation devra tre

mince, de manire viter autant que possible les reflets
Quel que
trs
qui peuvent gner l'observation.
Mise au point.
La prparation tant acheve et au besoin

convenablement lute, on la porte sur la platine. On a eu soin de
mettre une gouttelette d'huile de cdre bien fluide au milieu de
la
face
infrieure de
la
lame
une autre gouttelette sur
et
le
condensateur. Le contact de ces deux gouttes assure la continuit optique et, grce cet arlifice, on vite la formation de
(voir plus liant p. 215). On met alors au point
d'abord avec un objectif faible (obj. 3 et oculaire 0). Si le miroir
est bien orient, on doit apercevoir une tache au milieu du
bulles d'air
champ. Cette tache, qui correspond l'image de la source lumineuse, doit tre rendue aussi petite que possible par de lgers
mouvements verticaux du condensateur. On remplace alors l'ob1. Ces cercles ne sont visibles
que
recouverte d'huile de cdre.
si
la
surface du condensateur n"cst pas

par un objectif puissant, combin avec
jectif faible
laire. Si le contraste n'est
un
fort
221
ocu-
on ramliore par de lgers

miroir, verticaux pour le condenclairs uniformment, sans fais-
pas parfait,
mouvements, latraux pour
le
sateur. Les objets doivent tre

ceaux dvis, ni franges colores.
Lorsque
Aspect du champ.
sont corrects, on aperoit, sur

points
ou
le
centrage et la mise au point

noir, des taches et des
un fond
lumineux mobiles
immobiles.
faut
Il
savoir reconnatre,
parmi
ces taches, celles qui sont

dues aux dfauts du verre
aux grains de pouspour cela, on examine une prparation faite

et
sire
simplement en mettant
une goutte d'huile de
cdre entre lame et lamelle.
Parmi
biles,
les
les
lments mo-
uns sont sim-
plement entrans par des

courants dus la capillarit et la dessiccation
les
autres
progressive
sont rellement anims de
,
mouvements
propres.
Il
Fig. 130.
Aspect de la srosit d'un chancre
syphilitique, examine avec l'clairage fond
noir.
faut alors savoir distinguer le
mouvement
brownien de certaines particules des mouvements vritables des

organismes mobiles.
Nous indiquerons, en traitant des mthodes spciales, la
manire d'examiner sur fond noir les divers lments figurs.
V.
INDICATIONS
DE L'EMPLOI DU FOND NOIR
L'clairage fond noir est trs sduisant par son apparente

simpheit, aussi a-t-il donn lieu, particulirement dans le monde
mdical, un vritable emballement. Ce procd rend videm-
ment de grand
courante,
il
services; mais, en
doit rester
ce qui concerne la pratique

une mthode de diagnostic et ne peut sup-
222
mthodes de recherche. En
planter les autres
ce
effet,
mode
d'clairage ne produit pas une augmentation du pouvoir rsolvant

(p. 58), mais seulement une amlioration de la visibilit^ par
suite
du contraste entre
obscur.
En
outre,
les ohjets
fortement clairs
pour interprter correctement
et le
les
fond
images
faut connatre dâvance la strucmthode, loin de dtrner les

anciens procds optiques, suppose au contraire une connaissance
parfaite du microscope et notamment une longue pratique de
donnes par le fond noir,

ture de Vobjet tudi
il
cette
l'examen
hou
l'tat frais,
sans coloration, en lumire ordinaire.
d'insister sur ce point, car des observateurs
un peu
11
est
superfi-
ont une tendance prconiser l'examen sur fond noir au

lieu et place de toute autre mthode. Entre des mains habiles, le
ciels
fond noir est apjtel rendre des services importants et montre

des dtails que l'clairage central ordinaire est impuissant
rvler.
i\lais le
dbutant doit tre mis en garde contre
les
sources
d'erreur trs nombreuses, caches sous la sim})licit trompeuse

de cet artifice d'clairage. Meyer a publi rcemment ', sur ce
sujet,
une critique svre, mais
juste, dont la lecture est
recom-
mander.
Ces rserves
faites,
tique du fond noir
disons que
est la
la
principale application pra-
recherche, dans les liquides organi-
ques, d'lments trs petits, peu rfringents et trs dissmins,

qui seraient peu distincts ou mme invisibles avec l'clairage ordinaire et qui deviennent facilement visibles lorsqu'ils sont vivement
clairs sur fond obscur.
Le type de
sent par le diagnostic de
la
cette
syphilis,
recherche est repr-
que nous dcrivons en
dtail p. 513.
Pour tout le reste, il faut user du fond noir avec circonspection,

s'exercer d'abord avec des objets parfaitement connus, bien dcrits
dans les livres et dont on a tudi soigneusement la structure en
lumire centrale. C'est alors seulement qu'on pourra se risquer
examiner des objets plus difficiles on arrive ainsi aux confins d'un
:
domaine accessible seulement une
lite, et dans lequel le fond

noir est certainement ap}el rsoudre beaucou}) de difficults et
tendre notablement les hmites de la visibilit.
Un
ment
1.
des cueils de cette mthode est
Meyer, Aussehen der Bakterien
Uuhde,
la
part qui revient forc-
l'interprtation jtersonnelle dans l'tude
XXIV,
p. 76, 1911.
iiu
de prparations
Ullramikroskop. Avchiv
f.
Prolisten-
CLAIRAGE A FOiND NOIR ET ULTRAMICROSCOIME
223
vivantes et mobiles, dont il ne reste rien lorsque Tobservatioa est

termine. Ces conditions rendent le contrle et la critique des
de
particulirement difficiles, puisque rien
de
document
servir
ne
subsiste,
justificatif
qui puisse
permanent
et de matriel de comparaison.
obtenus
rsultats
prudent en interprtant les rsultats

obtenus par ce genre d'examen, et n'accueillir qu'avec beaucoup
de rserves les publications qui ne se prsentent pas avec la
11
faut
donc
tre
trs
garantie d'une comptence indiscutable.

Pour })rouver combien sont difficiles les recherches qui sortent
de la pratique du diagnostic, je mentionnerai, par exemple, outre
cits plus haut, ceux de K. Reichert sur les
les travaux de
Meyer
Bactries
cilies
En
montrent que ce sujet dpasse dj la

chercheurs bien
Ils
technique courante
n'est accessible qu' des
et
de ces cils ne dpend ni des prodes proprits osmotiques du liquide dans

des
lequel on les examine, mais bien des proprits chimiques
renmilieu
Il
faut
le
dissolution.
tient
en
substances qu'il
que
entrans.
la visibilit
effet,
prits optiques,
ni
une substance collode qui favorise la coarende ainsi plus visibles. Les non-lectrocils invisibles, tandis que les acides
lytes et les bases rendent les
et les sels sont les corps les plus favorables. Le meilleur milieu
ferme un leclrolyte
lescence des
et
cils et les
pour l'observation des
cils
des Bactries se trouve tre Teau de
glose ou la glatine nutritive, dilue avec son

volume de bouillon. Les mordants, tels que le liquide de Zeltnow,
trs visibles et aussi
produisent le curieux effet de rendre les cils
condensation de
nets
que dans
concerne
la
les
meilleures prparations colores. P^n ce qui

Duboscq estime que l'clairage fond
les Protozoaires,
noir peut rendre des services considrables, par exemple pour la

la nature des mouvesystmatique des Spirochtes, chez lesquels
ments fournit de bons caractres dislinctifs. Certains dtails des
ne peuflagelles, cils, pseudopodes, etc.,

vent tre rvls par le fond noir. Mais, ici encore, nous touchons
des questions trs dlicates, accessibles seulement aux cher-
membranes, myonmes,
cheurs
1.
trs spcialiss.
und die GeisselCentralblatt fur Bakteriologie, Orig., LU, p. 14-94, 1909.
K. Reichert, Ueber die Sichtbarmachung der Geisseln
bewcgung dor Baktericn.
224
VI.
NOTIONS SUR
L'
U LT R AM C R
I
OSC O P
L'ultramicroscope est destin rendre visibles les objets trop petits

pour lre vus avec les grossissements microscopiques dont nous disposons actuellement. C'est donc un instrument bien diffrent du fond
noir, qui sert observer des objets dj visibles au microscope. Michaelis i a montr en effet que rultramicroscope donne, avec ces objets, des
images dont les contours ne sont pas nets, mais entours de nombreux
anneaux de diffraction. 11 donne comme exemple les leucocytes et les
hmaties. Gaidukov insiste sur le mme inconvnient et dclare que
l'ullramicroscope ne peut convenir pour le travail courant.
Pour dfinir l'objet ultramicroscopiques, il faut connatre la limite
de visibilit des objets microscopiques. Cette limite dpend, d'une part,
du pouvoir rsolvant du microscope, d'autre part de la constitution de
il est vident
l'il humain. Parlons de ce dernier
que, pour apprcier
:
qui spare deux points, il faut que cette distance soit plus
grande que l'espace qui spare deux lments sensibles de la rtine.
Nous ne pourrons donc pas distinguer les limites d'un objet, si ces
limites sont comprises dans un espace d'tendue infrieure cette
donne anatomique. En ce qui concerne le microscope, nous avons dit
(p. 71) que ce qui importe n'est pas le grossissement linaire, mais le
pouvoir rsolvant, et nous avons tabli les limites de la rsolution des
meilleurs objectifs. Nous savons que, praliquement, celte limite est de
5 et que, dans certaines conditions particulires, elle peut tre diminue de moiti et porte
25, soit un quart de micron. Ce dernier
chiffre ne peut tre obtenu qu'avec l'clairage monochromatique ultraviolet et l'image ne peut tre vue que par l'intermdiaire de la plaque
photographique (p. 73 et 79).
Il faut
non seulement envisager ces conditions, mais encore la
la distance
[j,
ij.
manire dont se forment les images microscopiques. Nous avons vu

que l'optique gomtrique n'en donne pas une explication complte. Il faut encore tenir compte du mouvement ondulatoire des rayons
lumineux, mouvement (jui se traduit par des phnomnes de diffraction.
En effet, pour un point suppos lumineux par lui-mme, l'image obtenue
n'est pas un point, mais une tache circulaire, forme par les cercles de
diffraction. Lorsque le point est trs petit, l'image devient une petite
tache ple et diffuse, dont la nettet n'augmente pas avec le grossissement du microscope. De plus, au-dessus de la limite de rsolution que
nous avons indique (0 25), la tache cesse compltement d'tre visible.
Or les objectifs actuels ont t tellement perfectionns, qu'on est arriv
atteindre la limite thoricjue impose par la constitution mme de la
(p. 62)
[j,
lumire, quelles que soient les radiations employes. Aussi, pour voir
ultramicroscopiques, c'est--dire celles dont les dimensions sont une fraction de micron, qui peut mme descendre au millionime de millimtre, a-t-il fallu chercher un procd dtourn.
On est arriv rendre visibles ces particules au moyen de l'clairage
les particules
1.
Michaelis, Ultramikroskopische Untersucliungen. Virchow's Archiv,
p. 195-208, 1905.
. Cf. p. 208, note 1.
CLXXIX,
CLAIRAGE A FOND NOIR ET ULTRAMICROSCOPIE
225
par un procd analogue celui du fond noir. Mais il faut Lien

savoir que cette visibilil est d'une nature toute spciale et qu'elle
exclut absolument toute lude morpliolog-ique. C'est l ce qui constitue la
latral,
diffrence fondamentale entre le fond noir et l'ulirainicroscope. Dans le premier, l'objet est encore dfini morphologiquement, on peut le recon-
Dans le second, l'objet n'est

pas dfini; son existence nous est simplement rvle par illumination, sans que nous ayons aucune notion de sa forme. Nous ne voyons
pas l'objet qui est et restera toujours au del de notre visibilit, mais
nous percevons les rayons difi^racts par lui. Ce phnomne est tout
fait analogue celui qui nous permet de voir facilement, l'il nu, des
toiles dont les plus puissants tlescopes ne nous pernieltent pas de
dterminer la forme et les dimensions. Il suffit que ces toiles mettent
une quantit de lumire capable d'impressionner la rtine. Elles sont
d'autant plus visibles que le fond du ciel est plus obscur.
Il ne peut tre question de dcrire ici les ultramicroscopes. Nous nous
contenterons de mentionner les principaux dispositifs.
Le condensateur cardiode i
Ultramicroscope cardiode de Zeiss.
ressemble beaucoup au condensateur splirique de Leitz; on l'emploie
avec l'arc lectrique, pour l'tude des mouvements browniens et des collodes liquides. L'avantage de cet appareil rside dans sa simplicit
relative. Les prparations sont faites entre lame et lamelle. L'inconvnient rsulte des attractions exerces par la lame et la lamelle sur les
natre et l'tudier, quoique imparfaitement.
particules ultramicroscopi([ues, ce qui trouble la fois Tclairage et la

concentration du collode. On obvie ce dernier inconvnient par
l'emploi de chambres en quartz.
Le condensateur est remUltramicroscope de Cotton et Mouton -.

plac par un bloc de verre de forme paralllipipdique. La lumire
pntre dans ce bloc par une face oblique, normale la direction des
rayons, puis est rflchie totalement par la face infrieure. Une nouvelle
rflexion totale se produit la face suprieure de la lamelle, de telle
qu'aucun rayon lumineux ne peut pntrer dans l'objectif. Cet
appareil a l'avantage d'une grande simplicit. Mais il prsente, ou point
de vue de la prparation, les mmes inconvnients que le cardiode. Le
faisceau dilTract n'est ni dans l'axe du faisceau clairant, comme dans
sorte
les
condensateurs sphriques, ni perpendiculaire cet axe,
les appareils fente.
comme dans
Dans cet
Ultramicroscope fente de Siedentopf et Zsigmondy.
appareil, le liquide examiner n'est plus enferm entre lame et lamelle,
mais dans une cellule de forme particulire. Cette cellule est claire
par un faisceau lumineux qui traverse d'abord une fente rglable, puis
un objectif qui projette une image trs rduite de celte fente. On arrive
ainsi raliser, dans les liquides ou les solides, des coupes optiques
trs
minces. Cet appareil est
le
seul qui permette l'examen des collodes
solides.
Les ultramicroscopes proprement dits n'ont encore rendu que bien

peu de services aux sciences biologiques, du moins au point de vue
1. La surface rUcchissaule concave de ce condensateur devrait tre, tlioriquement, une courjjc cardiode, d'o le nom donn cet instrument pour le distinguer
des autres condensateurs sphri([ues.
2. Cotton et Mouton. Les uliranncroscopes, Paris, Masson, 1906.
M. Langehox.
15
226
La cause en
est surtout dans l'impossibilit de dterminer la

observs. Ce grave inconvnient est irrmdiable,
puiscju'il rsulte du principe mme de la mthode. Il s'opposera toujours l'tude approfondie des ])arasites, dits invisibles, dont le rle
apparat dj comme trs considrable en pathologie Par contre,, l'ultramicroscope a fait faire quelques progrs nos connaissances sur la
structure du protoplasme, en nous rvlant la constitution des collodes
inorgani(jues et en nous permettant ainsi d'aborder l'tude de la matire
collodale vivante. L'ultramicroscope nous a difi aussi sur la nature des
particules animes du mouvement brownien; il nous a appris que ces
corpuscules sont de dimensions ullramicroscopiques. Si nous les apercevons quelquefois, dans les prparations claires par un faisceau central ordinaire, c'est qu'elles sont illumines par des rayons obliques et
deviennent visibles par diffraction, sans que nous percevions leur forme
vritable. Il faut bien connatre la nature de ces particules, animes
parfois d'une trpidation intense et de vritables mouvements de loco-
pratique.
forme des objets
motion
il
ne faut pas
figurs vivants, dont les

les agents fixateurs.
Quoi
qu'il
en
soit,
les
les
confondre avec de vritables organismes

arrts par
mouvements sont immdiatement
ultramicroscopes sont encore en dehors du
domaine pratique des travaux de microscopie.
Si nous en avons parl

avec ({uelques dtails, c'est pour bien montrer quelle diifrence il y a
entre ces appareils et les systmes fond noir et remdier aux confusions qui se sont produites ce sujet.
CHAPITRE XIX
APPAREILS ACCESSOIRES
la
Je serai trs bref au sujet de ces appareils, car je considre

que
}luparl d'entre eux sont superflus, surtout pour le travail
courant.
Je signale, sans le dcrire, V opak-illuminator C'est un
dispoqui permet d'examiner des objets opaques en lumire rtlchie,
.
sitif
mme
avec de puissants objectifs court foyer;

moyen d'un prisme rflexion
il
consiste
clairer l'objet au
qui se trouve dans la monture de l'obau-dessus des lentilles. Ce prisme reoit

latralement l'clairage de la source lumineuse.
totale
jectif
Cet appareil est surtout employ dans
la
mtal-
lographie microscopique.
Un accessoire trs important, pour les micrograplies qui sont obligs de se livrer l'ensei-
gnement, est oculaire indicateur (fig. 131)

Le principe en est trs simple c'est un oculaire
:
Oculaire
Fig. 131.
indicateur.
ordinaire, dans lequel se trouve, dans le plan

du diaphragme, une aiguille indicatrice. Avec cette aiguille,
on
peut montrer l'lve un point prcis d'une prparation. Grce

cet accessoire, on peut pargner un temps considrable dans les
l'lve a compris, en lui
sur
point
lequel on l'interroge.
Le plus simple de ces oculaires est celui de van Walsem
le construit, au moyen d'un oculaire quelconque, en perant un
dmonstrations
faisant
et
on peut s'assurer
montrer avec
si
l'aiguille le
Ôn
petit orifice
cetorihce on
1.
dans
fait
Van Walsem,
Zeitschr.
du diaphragme. Dans
une
passer
pingle qu'on peut enfoncer plus ou
le
tube, juste au-dessus
Uebcr
eiu
cint'aehstes
wiss. iMilcr.^XXl, p. 171,
1904.
fakultalives
Demonstratiousokular.
228
moins. R. de Sinty
place au-dessus du diaphragme un mince
anneau de lige, dans lequel il pique une trs fine aiguille.
Les conslrucleurs fabriquent presque tous des oculaires indica'
leurs plus ou moins conqdiqiis. Les meilleurs sont naturellement

est mobile, ce qui pei'uiet d'atteindre tous les
ceux dont Taiguille

points
du cbamp optique, en combinant
avec un
Leitz
mouvement de
la
manuvre de Taiguille
Nous figurons celui de
rotation de l'oculaire.
131), dont on man(puvre Taiguille au moyen d'un levier.

est destin reprer exactement la position des
(fig.
Le marqueur
objets dans une prparation. Nous savons

dj effectuer ce reprage au moyen des
verniers de la platine chariot, mais nous
avons fait remarquer (p. 16) que ce procd
n'tait
pas toujours fidle et ne pouvait
que pour un seul microscope. Le

marqueur permet de tracer sur la prparation elle-mme un petit cercle visible
servir
y a beaucoup de ujoiJles de
marqueurs un des meilleurs est celui qui
possde une pointe de diamant (fig. 132).
l'il
nu.
11
v^
Marqueur
Fig. 1.3'2.
pointe de diamant.
On
On le visse la place de Tobjeclif, dont il

a la forme, et, en faisant tourner la pointe,
on trace un petit cercle sur la prparation.
du champ optique.
dfaut de marqueur, ou aura recours, pour retrouver un
a eu soin de mettre l'objet bien au centre
point dans
une
pri)aration,
aux
petits
moyens
trs simjdes
que
on
suggrera. En voici quelques-uns
sur
la
tracer
un
cercle
avec
une
et
de
l'encre
lamelle,
peut
plume
indlbile (p. 455), en se servant d'un ol)jectif faible. Pour les
l'ingniosit de
chacun
lui
frottis, on peut tracer ce cercle sous la lame ou, plus sim[dement

encore, dans le frottis lui-mme, avec un crayon trs dur ou une
On peut aussi faire une marque l'encre, sur

lame, en face du point intressant. Pour faciliter
aiguille.
de
la
le
le
bord
trac
exact et l'utilisation conscutive de ces signes, on peut graver, avec

une pointe d'acier, un ou plusieurs traits de repre sur la platine
et faire
la
ploi,
1.
.
concider avec ces traits les signes inscrits sur le bord de

la platine carre et fixe dont
je recommande l'em-
lame. Avec
on
trace
une ligne mdiane, antro-postrieure, ou deux
Strasburger. Das botanische Practicum. .Tona.
684.
Fischer.
4''
cdit.,
1902.
cl'.
229
APPAREILS ACCESSOIRES
mieux encore quatre lignes se coupant 45,

mthode de Vesco\ . Pour tracer exactement ces lignes,
Ciirreri- conseille de les dessiner d'abord sur un carr de papier
de la dimension de la platine. Pour centrer le papier, on perce au
oy
lignes eu croix
suivant
la
milieu un trou avec une fine aiguille et on centre avec un objectif

moyen. On marque alors, sur la platine, des points correspondant
aux extrmits des lignes; il ne reste plus qu' runir ces points.
Pour centrer
la jdatine
Fig. 133.
On
de nouveau, on emploie
le
mme
artifice.
Platins chauffante de Malassez.
repre les prparations au
moyen de
trois points
correspondant
trois lignes contigus.
Enfin, rap}areil dit chercheur Mallawod et les appareils simipourront rendre des services. Thoriquement les verniers
laires
des platines chariot devraient suffire au reprage. Malheureusement, comme il a t dit (p. 16), leur emploi est peu pratique et
les indications qu'elles donnent n'ont de valeur que pour un seul
microscope. On })eut faire de mme avec les platines tournantes,

mais il faut les centrer soigneusement chaque fois, si on veut
utiliser les repres.
11
est vident que, sans cette prcaution,
on
n'arrivera pas retrouver le point cherch.
Les platini's chauffantes peuvent rendre de rels services dans

examens l'tat frais, aussi je ne puis les [)asser sous silence.
les
1. De Vcsoovi, Un
semplicissimo marcatoro goomctrico per micrografia. Zool.
Anzeiyer, XV, p. 203, 180-2.
2. Curreri, Metodi vecchi e uuovi por dctcrniinare e ritrovare la posizione di
uno o pi piuiti iateressanti di jircparati microscopici. Richcrche lahor. anat. noi-m.
Roma, XII, p. 53-85. pi. III, 1906. Trs important mmoire o tous les appareils
de l'eprage sont passes en revue. Bibliographie trs complte.
230
La plus simple est celle de Malassez ((ig. 133). Elle se compose

d'une plaque mlalliijue surmonte (Tune petite chambre, mtallique aussi. On introduit la prparation latralement et on la fixe
'
au moyen de deux petites portes coulisse. On peut aussi glisser

un thermomtre dans !a chambre. Le chauffage se fait par conau moyen d'une lamelle mtallique articule, qu'on
chauffe directement et dont on peut modifier la longueur suivant
la temprature dsire. La source de chaleur sera une
lam[)e-
ductibilit,
alcool ou
un bec Bunsen
petite
flamme.
La platine de Schullze est base sur le mme principe, mais elle

est un peu moins pratique. La jjrparation n'est pas enferme
dans une cham])re, aussi
Parmi
celles de Pfeiffer,
1.
le
chauffage est-il moins rgulier.

me bornerai citer
les platines circulation d'eau, je
de Strickcr
et
de Ranvier.
C. n. Soc. biol, 7 juillet 1886; Arch. de physiol., p. 271-273, 1886.
DEUXIME PARTIE
r
METHODES GENERALES
CHAPITRE PREMIER
BUT DE LA TECHNIQUE
MICROSCOPIQUE
L'tude du microscope nous a montr que les objets, observs
avec cet instrument, doivent tre trs minces et trs transparents.
Nous savons, en efet. que. dans l'immense majorit des cas, ces
objets sont examins en lumire transmise. L'emploi de la lumire
rflchie est trs rare; il ne s'applique gure qu' Ttude des
Arthropodes, pour laquelle on se sert de prfrence de loupes ou

de microscopes binoculaires.
On
ne peut donc observer au microscope, en lumire transmise,

des
que
prparations suffisamment minces pour permettre la
lumire de les traverser et aussi pour ne pas empcher l'emploi
d'objectifs puissants, courte distance frontale.
La plupart des objets ne pourront donc tre observs tels

si on les examine l'tat frais, il faudra
qu'ils soient
Mme
quels.
disso-
ou rduits en tranches minces, pour permettre de les enferet lamelle.

Nous devrons donc tudier tout
d'abord les procds cVexamen Vtat frais^ soit des objets tels
cis,
mer
entre lame
quels, soit aprs dissociation ou dilacration.

Mais cet examen ne saurait nous donner des prpai'ations dfi-
MKTIIODES (JKNIIALES
232
nilives, susce|li!)les
(r^lrc conserves on eoUeclion
il
esl
lmi
outre insuffisaiU pour nous montrer tous les dtails de Forganisalion. Nous savons (juc la })lu|)arL des objets doivent tre
colors,
de faon
donner une image par absorption, beau-
coup moins sujette aux

rfraction et
diffraction
vitales, qui rentrent
illusions d'optique
(p.
157).
dans Texamen
tudier les diverses mthodes de
que
les
Aussi, outre les

l'tal frais,
images par
colorations
devrons-nous
coloration qui constituent
base de la technique microscopique moderne.

Ces colorations ne peuvent tre faites que
la
sur du matriel
convenablement tu, fix, et ventuellement rduit en tranches

ou coupes t's minces. Nous devrons donc tudier successivement
maniire de tuer les animaux, les procds de fixation, la

mthode des coupes et les mthodes de coloration, auquelles se
joignent les mthodes d'imprgnations mtalliques. L'objet, une
fois color, doit tre plong, pour l'observation, dans un milieu
la
qui l'imprgne compltement et dont l'indice de rfraction soit tel

de voirie plus possible
qu'il permette, sans nuire la transparence,
de dtails de structure. Nous devrons donc consacrer un chapitre

particulier
aux
mthodes de montage
et
aux divers milieux
ou mdiums.
La technique microscopique est donc l'ensemble des procds

permettent d'tudier un organisme vivant, d'examiner des
(jui
tissus frais, puis de les fixer, de les rduire en
tranches minces,
monter en ])rparations dtnitives. Chacune

de ces oprations s'effectue grce des mthodes physiques ou
chimiques, dont l'ensemble constitue la technique moderne. Ainsi
que nous l'avons dit dans l'introduction, nous tudierons d'abord
les mthodes gnrales, qui peuvent convenir la
grande majorit
de
les colorer et
des cas
Dans
la
de
les
et avec lesquelles l'lve devra d'abord se familiariser.

troisime partie, nous dcrirons les mthodes spciales
chaque groupe d'tres organiss. Ds maintenant, nous pouvons

dire que les mthodes gnrales sont applicables la fois aux
vgtaux et aux animaux. Il n'y a pas, en ralit, une technique
botanique et une technique zoologique; les mmes procds gnraux de technique microscopique peuvent tre appliqus ces
deux groupes
d'tres. 11 n'y a de diffrences que pour les procds

spciaux dont nous traiterons sparment.
Nous ne saurions trop rpter ici ce que nous avons dit dans
notre introduction, savoir que la
technique est un moyen et non
BLT DE LA TECHNIQUE iMICIlOSCOPlQUE

une
lin.
La
lin, c'est
avant tout
la
connaissance exacte de
233
la
struc-
ture intime de Fobjet tudi, en tant que cette structure nous

permet de connatre et de comprendre les phnomnes biologiques.
La prparation,
soit, n'est que
bien excute et
si
agrable regarder qu'elle
de
parvenir cette lin. Voil ce qu'il
moyen
ne faut pas oublier, si on veut faire de bonne besogne scien-
tifique.
si
le
CHAPITRE
II
LA PRPARATION MICROSCOPIQUE
Faire une prparation microscopique consiste, le plus souvent,

l'o])jet examiner entre deux lames de verre \ De ces
enfermer
deux lames, Fune

plus simplement
sert supporter
l'objet,
la
lame
c'est
ce
c'est le porte-objet
dernier vocable
emploierons toujours. L'autre sert couvrir l'objet, elle

trs mince et se nomme
couvre-objet ou lamelle nous
ou
qne nous
est en verre
la dsignerons toujours par ce der:
LA PRPARATION MICROSCOPIQUE
23^
dernires sont plus lgantes et permettent d'employer la tournette pour faire des bordures bien rgulires. Pourtant, j'ai
toujours vu la majorit des travailleurs employer des lamelles

ce sont celles dont je me sers toujours el dont je recomcarres
:
On proportionne les dimensions de la lamelle la

surface de Tobjet recouvrir. Les deux formats carrs conviennent
pour des objets isols ou des lments en suspension dans un
mande
l'usage.
liquide. Les grandes lamelles rectangulaires s'emploient surtout

les
pour
coupes.
Un
point important est l'paisseur des lames et des lamelles.

fera bien de s'en tenir, pour les unes et les
autres,
un
cliiffre
moyen. Une paisseur
On
trop
sans grand bnfice

augmente
au point de vue optique. Pour les lamelles, il
faut se rapprocher autant que possible du chiffre
faible
la fragilit,
moyen pour
corrigs.
lequel les objectifs puissants sont

avons vu (p. 84) rintluence
Nous
^-^-^-^^,^.,
fcheuse que des lamelles trop paisses ou trop

minces peuvent
exercer sur la nettet des
'
.
,.
pig. 135.
mme
temps
^^"^^ raicooi.
principaux procds permettant de mesurer

l'paisseur des lamelles (p. 86).
les
Nous indiquons plus

lames
el
loin (p.
236)
les
des lamelles. Notons bien
ici
ne
Bocaux
pour eonserver les lames

et
les
lamelles
images. Nous avons nidique en
^^'î^s
procds de nettoyage des
mme
que,
neuves, elles
quelles. Toujours elles sont

peuvent
employes
il est donc indissouilles de poussires et de matires grasses
pensable de leur faire subir au inoins une immersion pralable
tre
telles
dans
l'alcool.
Lames
d'o on les sort au
el lamelles seront
moment de
conserves dans ce liquide

on les essuie alors
s'en servir
avec un linge propre, doux et non pelucheux. On placera donc,

sur la table de travail, les lames et les lamelles dans une srie de
bocaux droits (hg. 135), bouchs Fmeri

bocaux au fur et mesure des besoins.
on puise dans ces
L'objet peut tre mont entre lame et lamelle, soit dans l'air, ce qui
cas le plus rare, soit presque toujours dans un milieu liquide.
Parmi ces derniers, les uns sont solidifiables, soit par refroidissement,
soit par vaporation, les autres sont des solutions aqueuses. Dans le
est le
cas, il suffit de laisser refroidir ou scher la prparation; dans

second, il faut que la prparation soit ferme hermtiquement, pour
viter Tvaporation du liquide et la dessiccation de l'objet. Cette fermeture s'excute en runissant la lamelle la lame au moven d\m
premier
le
METHODES GENERALES
236
cimeiil ou
lui.
Nous tudierons en
ces procds
dtail
de fermeture
(p. 447).
La prparation, une
termine, doit tre tiquete. Vtiquetle sera

la prparation. Si celte tiquette ne
suffit pas pour consigner tous les renseignements, on en collera une
autre droite. Ces tiquettes porteront le nom de Tanimal ou de la
plante, celui de Torgane, Tindication ventuelle du mode de fixation,
de coloration et de montage, et enfin la date de la prparation.
Nous ne pouvons numrer ici toutes les variantes des prparations
microscopiques nous les tudierons mthodiquement et compllement
dans les chapitres (jui vont suivre.
colle de prfrence
fois
gauche de
Ajoutons quelques mois sur la ncessit dr la lamelle. Les

dbutants sont quelquefois tents de ngliger son emploi, surtout
dans les examens Ttat frais, et sont tout tonns de ne pouvoir
obtenir une image distincte, mme avec les objectifs faibles. Il n'y
a qu'un cas dans lequel la lamelle ne soit pas indispensable, c'est
pour l'examen des
frottis dessclis,
mais
il
faut avoir soin de les
de cdre, non seulement pour l'emploi des

objectifs immersion, mais encore pour donner la prparation
recouvrir d'huile
une transparence suffisante et une homogr^nil optique ncessaire

la bonne marche des ravons lumineux.
tous les autres cas, l'objet doit lre mis entre lame et lamelle
la prparation ait une planit suriisanlc et pour que la lentille frontale des objectifs forts ne plonge pas dans le liquide. La planit de la prparation a une grande importance, tant au point de vue
de la facilit de la mise au point (|ue de la qualit des images. On Sfiil
une goutte de licjuide, place sur
^([ue, par suite des actions ca|)illaires,
Dans
pour que
verre, peut s'taler rapidement ou former une calotte sphrique, suivant (|ue le verre est mouill ou non. Dans le premier cas, le
liquide s'tale et l'objet n'est plus couvert; dans le second, il y aura
des jeux de lumire dus des ingalits de rfraction et de rilexion.
nne lame de
La lamelle a pour elfel de retenir le liijuide, sous forme de tranche

d'paisseur convenable, surfaces planes et entourant compltemenl
l'objet. Il faut, autant que possible, que la lamelle soit bien horizontale
et parallle la lame. Pour les objets un peu pais ou irrguliers, on
obtient cette horizontalit au moyen de cales de diverse natur^ (p. 242).
Lamelles en glatine.
Pranter
eu
l'ide
ingnieuse de
substituer, dans certains cas, des feuilles de glatine aux lamelles

de verre. 11 utilise les feuilles trs minces et parfaitement trans-
parentes dont on se sert pour envelopper certaines denres alimentaires (pain d'pices, etc.). Ce procd ne peut convenir que pour
des coupes deshydrates

1.
et
Pranter, Ein billigcr Ersatz
p. 159, 1901.
montes au baume ou
fiir
Dcckglascr. Ztsclir.
f.
la trbenthine
wiss.
Mikr., XVIII,
LA PUPARATION MICROSCOPIQUE
237
de Venise, car les feuilles de glatine se dissolvent dans Teau, la

le laclophnol el tous les milieux aqueux. En outre,
glycrine,
les prparations ainsi montes n'ont pas une dure absolument
indfinie. Pourtant le bon march de ces lamelles peut les rendre
les travaux pratiques d'lves
prcieuses pour renseignement, pour
de
Elles supportent trs
surface.
les
et pour
grande
prparations
bien riiuile dimmersion, ainsi que le nettoyage au tolune, mais

elles craignent la chaleur et riuimidit, qui les font plisser.
Nettoyage des lames et des lamelles.

1.
pour
Lames neuves.
les froUis
Pour
de sang,
Pour
il
travaux dlicats
les
est prfrable
el
notamment
d'employer des lames
qui ncessitent des lames sches, on

dgraisse ces lames neuves dans dePalcool ammoniacal 5 p. 100
et, au sortir de ce liquide, on les essuie avec un linge fin. non
neuves.
les
frottis,
On peut, avant l'essuyage, les passer dans un second

bain d'alcool pur. Lorsqu'on fait ce nettoyage Favance, il faut
envelop]ier les lames, par paquets, dans du papier blanc ou du
pelucheux.
On les garde ainsi Fabri de la poussire et

paquets qu'au moment de s'en servir.
Pour coller les coupes, on peut employer des lames sortant de
papier dit hyginique.
on n'ouvre
les
l'eau et
supprimer
toujours un peu
ainsi les inconvnients de l'essuyage, qui graisse

le verre et jtrend du temps. Voici comment
on plonge les lames neuves

dans un mlange parties gales d'alcool 90 et d'acide chlorhydrique, puis on les lave plusieurs eaux. Finalement, on les
plonge dans l'eau distille et on ne les en sort qu'au moment de coller
P. Masson conseille de procder
les
coupes. Le dgraissage est parfait et l'adhrence remarquable.

faciliter l'talement des liquides destins coller les
Pour
coupes, rappelons la faciht avec laquelle les liquides s'talent sur

le verre pralablement naml) (p. :244). Ce qui est un inconvnient pour les cultures cellulaires devient ici
flambage peut donc servir l'occasion pour
un avantage. Le
le
nettoyage
des
une flamme non fumeuse.

Leur nettoyage est plus difficile. On y
2. Lames usages.
arrive assez facilement avec de l'eau chaude et du savon, pour les
lames
il
doit tre fait dans
et lamelles sur lesquelles il n'y a ni liaume, ni rsine, ni

huile de cdre. Pour les prparations au baume, surtout anciennes,
lames
il
est souvent jdus
conomique de
jeter les lames plutt
que de
les
METHODES GNRALES
238
nettoyer, car le temps qu'on y passe et les ractifs ncessaires

cotent plus cher que le verre. Pourtant, lorsqu'on dsire les faire
on
resservir,
les fera
mlange suivant
tremper pendant plusieurs jours dans
100 gr.
100
1000
Bicliromate de potassium
Acide sulfurique
Eau
puis on les lavera grande eau
dans Falcool.
que ponr
les
et,
finalement, on les conservera
Les procd's de nettoyage sont les mmes

lames, mais il faut tenir compte de leur fragilit,
Lamelles.
3.
le
aussi faut-il prendre des prcautions particulires pour Tessuyage.

Quelques auteurs recommandent de les essuyer d'une seule main,
entre le pouce et l'index; je trouve qu'on peut, sans inconvnient,

essuyer deux mains, en les tenant par la tranche entre le
les
pouce
et l'index
gauche.
est plus ncessaire encore que pour les lames de les laver
l'alcool acide, car elles sont souvent recouvertes d'un enduit blanIl
chtre adhrent.
On
jusqu'au moment de
les
conserve ensuite dans l'alcool ordinaire,
l'emploi.
Altrations des lames et des lamelles.
En Europe,
les
lames
et
lamelles se conservent assez bien, pour-
tant ces dernires se dpolissent quelquefois au point de devenir

inutihsables, lorsqu'on les conserve dans leurs botes d'origine.
Dans
pays tropicaux ces altrations sont beaucoup plus

au contact de l'atmosphre chaude et humide, la dvitrification peut tre assez intense pour rendre la surface du verre
les
rapides
les lamelles,
opalescente et mettre hors d'usage non seulement
les lames.
mais encore
Il
vnients
peu de moyens pratiques pour lutter contre ces inconil faut d'abord choisir des lames et lamelles en verre de
premire qualit, aussi peu altrable que possible. On peut aussi

enduire les lamelles d'essence de girolle ou d'huile de paraffine.
mais il ncessite un nettoyage ultrieur
de
quelquefois impossible, si on ne dispose pas
dissolvants appropris. La conservation en botes mtalliques
hermtifjues donne de bons rsultats.
Ce moyen
trs
est trs efficace
soigneux
et
CHAPITRE
III
EXAMEN A L'ETAT FRAIS

L'examen
Tlat frais est la
mthode
liistologique la fois la
plus ancienne; c'est aussi une de celles qui ont

donn lieu aux plus grandes dcouvertes.
plus simple et
la
Sans parler des organismes des fermentations trouvs par Pasteur au

cette simple mthode nous pouvons citer, comme acquisitions
capitales de la science, la Bactridie charbonneuse, le Bacille de la
fivre typhode, le Spirochte de la fivre rcurrente, les Plasmodies du
paludisme, les Pilaires du sang-, les Champignons des teignes, les Trypanosomes qui, tous, ont t dcouverts sans l'aide d'aucun colorant, par
l'examen l'tat frais du sang- ou des produits pathologiques.
Une mthode qui a fourni des dcouvertes aussi capitales, ayant vritablement rvolutionn les sciences mdicales, ne saurait tre nglige,
quels que soient par ailleurs les perfectionnements de la technique histologique moderne. Cette mthode est absolument indique toutes les
fois qu'il faut rechercher, dans un liquide organique, la prsence d'un
organisme parasitaire ou d'un corps figur, ou qu'il faut mettre en vidence une manifestation de la vie telle que les mouvements, contrac-
moyen de
courants protoplasmiques, phnomnes de digestion intracelluOn emploiera l'examen l'tat frais, non seulement pour ces
divers ordres de recherches, mais encore pour l'examen prliminaire
du sang et des autres liquides organiques, la recherche de certaines
Bactries, des Champignons microscopiques et parasites, et enfin, d'un
bon nombre de parasites animaux.
tions,
laire, etc.
Cette
mthode
a pour elle l'avantage d'une extrme simplicit;

donc gnralement d'un emploi trs facile et, en outre,
ne produit aucune modification dans les objets examins. Notamment elle nous montre, avec une parfaite exactitude, la forme et les
elle
est
mouvements des organismes. Malheureusement son emploi

restreint par d'troites limites. Elle
trs
minces
et
est
ne s'applique qu' des objets
transparents; elle ne permet pas des observations
trs prolonges, et
enOn
elle
ne dmontre qu'une trs faible partie
METHODES GENEIULES
240
des
(l('lails
de
slriictiire. Poiirlant,
on peut arriver
lescenlrosomes Bresslau
:
en choisissant convenablement
voir des dtails cytologi([ues tels
les objets,
les
observe Ttat
frais,
dans
les
que
ufs
de Mf'sosloma Ehrenbergi, Turbellari qui vit dans les marcages peu profonds (20 30 cm.), fond d'humus et de feuilles
mortes, de prfrence dans les endroits ombrags.
L'examen Ttai frais ncessite certaines prcautions. Etudions
sont d'ordre optique. Comme il s'agit de pr[)ase reportera ce qui a t dit ce sujet
clairera la prparation avec des faisceaux aussi troits
d'abord celles
rations
146.
p.
fjui
non colores, on
On
possible, qu'on obtient en rtrcissant convenablement l'ouverture du diaphragme iris, de manire ne pas noyer les dtails
que
dans une lumire trop intense. L'clairage joue ici un rle considrable car il s'agit le plus souvent d'objets dont l'indice de
rfraction
dilre
peu
de
du milieu dans lequel on
celui
les
examine.
L'emploi du fond noir'
examens
les
(p.
des lments figurs de petite
I.
taille et trs
dissmins.
LIQUIDES D'EXAMEN
y a deux catgories de liquides pour l'examen
Il
uns servent
les
208) peut rendre des services dans
l'tat frais, surtout lorsqu'il s'agit de rechercher
examiner
les
organismes
l'tat
l'tat frais
vivant, les
autres sont destins rendre ces organismes plus visibles, grce

leur rfringence, mais sans respecter leur vitalit.
Nous dsignons ainsi les

les organismes
conservent
liquides,
qui
vivants et dans des conditions aussi rapproches que possible de
1"
Liquides physiologiques.
naturels ou artificiels,
l'tat
naturel.
On
les
nomme
encore liquides indiffrents, parce
pour ainsi dire aucune action modificatrice sur

lments figurs. Le plus facile obtenir et conserver est la
qu'ils n'exercent
les
solution de chlorure de sodium 9 p.
000,
dite solution
physiologique"^.
1.
Bresslau, Uelicr die Sichtbarkeit der t'eiitrosomen iu lebeiiden Zellen. Ein
Hinweis auf Mesostoma Ehrenberf/i als Ohjekt zu cj^tologischen Untersuchungen.

Zool. Anz., XXXV, p. 141-145, 1900.
2. La vritable solution isotonique pour l'IIonimc et les autres Mammifres
doit renfermer
gr. 9 p. 100 de chlorure de sodium. Cf. Engelmann, Einiges ber
die sogenannto physiologische Kochsalzlsung. llcnlsche med. Woch., XXIV,
p. 64-65, 193.
EXAMEN A L'TAT FRAIS

Elle suffit la plupart du
241
temps mais, pour des recherches trs dlicates,

il est prfrable d'employer les milieux naturels o vivent les cellules.
Ces milieux naturels sont le srum sanguin, olilenu par coagulation ou
centrifugation, le liquide d'ascilc, le liquide amnioliciue, l'humeur
aqueuse. Les meilleurs rsultats seront obtenus avec un liquide provenant de ranimai sur le({uel les lments examiner ont t prlevs.
Pour avoir du liquide amniotique, il faut se procurer un utrus gravide,
l'abattoir ou chez le boucher. Le mieux est de le ponctionner avec
un trocart. S'il faut inciser, on aura soin de bien laver la paroi utrine
avant d'ouvrir les membranes, de manire viter le mlange avec
;
le sang-.
Vhuineur aqueuse, sera extraite d'yeux de Lapin ou de Buf.

dfaut de ces liquides naturels, on pourra encore employer
le
srum
de Frey, ainsi compos.
Eau
135
distille
Blanc d'uf
Chlorure de sodium
Pour
pour
cm^
15 gr.
0,20 gr.
on prendra du liquide de la cavit gnrale

animaux marins, simplement de l'eau de mer.
les Invertbrs
les
et,
Ces liquides produisent gnra2 Liquides additionnels.

lement la mort des organismes qu'on y plonge, mais ils peuvent
rendre de grands services, en rendant visibles certaines parties des
Leur emploi constitue un procd interm-
objets non colors.

diaire entre Texamen
aprs fixation;
il
l'tat
frais
consiste traiter
proprement dit et l'examen

extemporanment les objets
par un liquide qui modifie leurs proprits optiques et
les
rend
plus apparents.
Ces liquides sont des solutions alcalines, acides, ou des liquides

rfringents et claircissants miscibles avec l'eau. Comme exemples,
solution de potasse qui dtruit la plupart des
je citerai la
lments anatomiques
tiques,
les
et
permet de reconnatre
les fibres
Facide
Champignons (p. 714), etc.,

met le noyau en vidence
claircit les cellules et
las-
actique qui
milieux de
les
Amann
(p. 575) qui fixent, gonflent, claircissent et font trs

bien ressortir certaines structures. L'emploi de ces ractifs se fait
extemporanment il suffit gnralement d'en dposer une goutte

sur une lame, d'y plonger l'objet et de recouvrir d'une lamelle;
on chauffe lgrement s'il y a lieu, puis on examine immdiate:
ment.
Nous pouvons mentionner ici l'emploi de Vencre de Chine que nous
tudierons plus fond en parlant des prparations sches (p. 7U0). On
M.
IîANGERON.
16
METHODES GENERALES
242
Chine liquide trs fine, de prfrence celle qui est

vendue spcialement pour ce genre d'examens. Les lments ligures
choisira de Tencre
dty
y sont plongs api)araissent comme des taches claires sur le fond

noir de l'encre et leurs contours sont particulirement nets. C'est un
bon moyen de rendre jtlus visibles des organismes incolores et trs peu
rfringents, qui seraient invisibles ou trs diffu:ilcs apercevoir sur les
milieux ordinaires. L'cuicre de Chine n'tant pas une teinture, mais une
([ui
suspension de particules charbonneuses trs fines, ne pntre pas dans

on
les objets. On emploiera l'encre dilue comme il est dit page 700
mlange cette encre une goutte du liquide renfermant les lments
tudier et on recouvre d'une lamelle.
:
11.
MTHODES D'EXAMEN
Le principe de celte
Examen entre lame et lamelle.
mlhode consiste examiner l'objet vivant enli-e lame et lamelle,
dans des conditions qui se rapprochent autant que possible de
celles de son milieu naturel. Le i)rocd le plus simple se rduit
un peu du liquide renlermanl en suspension les objels qu'on veul tudier. On dpose celte
et on recouvre d'une lamelle bien
goutte sur une lame propre
d'une pipette effile,
prlever, Taide
la gouile ne soit trop volumineuse,

essuye, il faut viter que
autrement une partie des organismes serait chasse en dehors de
la prpaiâlion. S'il y a trop de liquide, il faut donc, avant de
recouvrir d'une lamelle, en aspirer une partie avec une eftilure
de pipette ou avec du papier Joseph.

Pour viter que des objets trs dlicats ne soient crass soit par le
d'actions capillaires, appliquant fortepoids de la lamelle, soit par suite
ment la lamelle sur la lame, on a soin d'interposer, entre ces deux dernires, des corps dont l'paisseur sera proportionne celle des objets
examiner. Les Allemands emploient beaucoup l'artifice qui consiste
soutenir les quatre angles de la lamelle par quatre gouttelettes de cire.
On emploie le mlange suivant (ju'on fait fondre sur un feu trs doux
:
Cire (blanche de prfrence)

Trbenthine de Venise
...
2 parties
1
en poids.
partie.
Cette masse doit s'amollir facilement entre les doigts et se ptrir en

boulettes de formes varies.
Sur une lame bien propre on fixe, en des points convenables, quatre
petites masses pralablement ptries entre les doigts. On installe l'objet
avec une goutte de liquide et on applique la lamelle, garnie en dessous

d'une goutte du mme liquide, de manire viter les bulles d'air.
Cette lamelle doit reposer par ses angles sur les quatre boulettes de
cire. On rgle alors l'paisseur de la prparation par des pressions
243
mtliodiques exerces sur les angles de la lamelle, eu ayant soin

d'appuyer successivemenlsur deux angles placs en diagonale. S'il y a un
excs de liquide, on l'absorbe progressivement avec des bandes de buvard.
Grce cet artifice, on arrive non seulement rgler l'paisseur de
encore
la prparation, de manire ne pas craser l'objet, mais
excercer au besoin sur ce dernier une pression constante et modre et
l'immobiliser pour qu'il ne puisse sortir du cbamp. C'est donc un procd employer, toutes les fois qu'on voudra observer l'tat vivant de
petits organismes trs mobiles.
11 y a encore d'autres moyens d'empcher l'crasement de l'objet. Ils
consistent introduire, entre la lame et la lamelle, des corps solides
poils, cheveux, filaments de verre
d'paisseur convenablement choisie
tir, fragments de lamelles, bandelettes de carton.
:
soit
quelque lemps, il faut Lorder

pour l'empcher de se desscher. On recouvre donc
avec de la vaseline applique au pinceau, soit avec de
fine
ou du
Si robservalion doit durer

i-alion
lui solide
appliqu au fer chaud,
comme
il
la
prpabords
les
la paraf-
est dit p.
448.
- Dans d'autres cas, il faut au contraire

Compresseurs.
exercer sur Tobjet une compression plus ou moins forte, de
manire l'aplatir suffisamment pour le rendre transparent, mais
sans
ni
l'craser
le
tuer.
On
em[doi8 dans ce but des instruments iiarticuliers, dits compresseurs, il en existe beaucoup de
modles, donl les uns agissent
par des ressorts, les autres par
des vis de pression. Certains appa'
reils
trs
,..
,.,..
r ly. lob.
'
_,
compliqus,
tels
^
,^
Gompresseui' de tourment
modifi par Brumpt.
que
permettent d'tablir une circulation d'eau. Un

modle trs simple et trs pratique est le compresseur de Fourmenl
celui de Ziegler,
modifi par Brumpt (fig. 136 1. Il a t calcul pour servir avec des
lamelles carres de 22 mm. sur lesquelles il exerce une pression
trs
uniforme
Examen
et facile rgler.
des
animaux
En choisissant des animaux
vivants.
transparents et, autant que possible, aquatiques, on peut arriver

aussi voir admirablement la circulation, la contraction des
muscles somatiques ou intestinaux,

(emploi
des colorations
vitales).
la
Citons
digestion et
l'excrtion
comme exemples
les
certains petits Trmatodes (flammes

petites espces de Sangsues,
cilies de l'appareil excrteur) les petits Crustacs aquatiques, les
Rotifres, les Ttards
Nous aurons
peu pigments,
etc.
l'occasion de revenir sur l'examen l'tat frais en
METHODES GENERALES
244
Irailant des techniques spciales, notaminenl en ce qui concerne

les Protozoaires (p. 468) et le
sang p. 623.
Examen en chambre huPour une observation

mide.
un peu prolonge, ce procd
Lame concavit
l'examen en goutte pendante.
Fig.
137.
pour
Ori-
r/inal.
suprieur au
trs
est
prc-
on nomme examen en goutte pendante.

On peut employer une cellule forme d'un porte-objet creus
dent. C'est encore ce qu
en son milieu d'une concavit
sur
137),
(iig.
laquelle on renverse une lamelle charge d'une

goutte du liquide examiner. Il faut avoir soin
An138.
neau de verre
Fig.
pour
cellule.
que
la
vient en
goutte soit trs petite, autrement elle

contacl avec un point de la cavit et
alors elle
s'tale
immdiatement. En outre,
si la
goutte est trop grosse, les organismes tombent

sa partie infrieure et on ne peut les apercevoir un fort grossissement. Notons enfin, comme l'a dj fait remarquer M. Nicolle
et
comme nous
l'avons souvent
observ, que le flambage des

lamelles favorise singulire-
ment l'talement de
Cellule
en verre pour examen

en goutte pendante.
Original.
Fig. 139.
11
donc
faut
ment
la goutte.
les laver simple-
l'alcool.
Une
fois
la
goutte pendante correctement

installe,
Un
on lute
la vaseline
ou
la paraffine.
autre genre de cellule, encore plus simple, est celle qu'on

- rahse en collant sur
1
anneau
une lame
un
de
Ces anneaux
vei^re.
se
(fig.
138)
tout
prpars
commerce. On
trouvent
dans
le
les fixe
au moyen de baume du
Canada, de lut solide
ou simplement de paraffine. On vaseline le bord

suprieur, sur lequel on
lame charge d'une goutte de liquide (Iig. 139). Si cette

goutte est assez petite, on ])eutobserver aux plus forts grossissements.
renverse
la
EXAMEN A L'TAT FRAIS
245
A dfaut d'anneau de verre, on peut dcouper, dans une feuille de

carton un peu paisse, un fragment carr, de la dimension de la lamelle.
On le perce en son centre d'une ouverture circulaire ou carre, on imbibe
142.
Fig.
Chambre humide de Ranvier.

central;
6,
c, cellule
rigole circulaire.
en verre;
s,
disque
d'eau cette cellule de carton (flg. 141). Au besoin on la strilise par bulli11 suffit de la maintenir humide
pendant la dure de l'observation.
tion.
y a une autre catgorie de chambres humides, dont l'emploi

un peu plus dlicat, mais se prte mieux Tusage des forts
grossissements, c'est la chambre humide de /Janvier. Elle est
constitue par une forte lame de verre (fig. 142), creuse en son
Il
est
centre d'une rigole circulaire, limitant un disque
dont l'paisseur est infrieure de un dixime de

millimtre celle de
la
,.,,..,
..:.. ........,
.
...._.
143. Coupe mdiane de

humide de Ranvier, montrant
Fig,
d'paisseur entre le
lule.
Original.
la
la
chambre
diffrence
disque central et la cel-
lame. C'est sur ce plateau
qu'on dpose la
goutte de liquide, on
recouvre ensuite d'une
lamelle qu'on lute
la
vaseline ou la paraffine.
La goutte
se trouve
prisonne entre
la
em-
Schma de la chambre humide de

Ranvier. Le disque central est ligure en poin-
Fig. 144.
till.
Original.
face
suprieure du plateau et la face infrieure de la lamelle. Elle forme

donc une couche de liquide de un dixime de millimtre d'paisseur, prsentant deux faces parallles. On conoit que l'observation,
un fort grossissement ne sera pas trouble par les phnomnes
de rilexion
la
surface
et
dune
de rfraction qui se produisent invitablement

goutte sphriqne^.
p. 519 la mthode de Biti qui permet aussi les

en couche trs mince de trs forts grossissements.
1.
Voir
examens
l'tat frais
M KTIODES
240
KNKRALES
Ce genre de prparation, pour oti'o irnssi, exige certaines prcanlions. La goutte doit tre assez petite pour ne ])as dborder le
plateau aprs application de la lamelle. Dans le cas contraire, elle
rpand dans
se
rigole ou
la
mrne sur
la
lame
et les
organismes
du champ. Pour a|}di(]uer correctement la lamelle,

on la saisit avec une pince par un bord et on met le bord oppos
en contact avec la lame, puis on abaisse d'un seul coup. La gouttelette doit s'tendre uniformment la'surface du plateau, sans le
disparaissent
dpasser. La rigole doit rester pleine d'air, destin h entretenir

quelque temps la vie des organismes.
Aux clTambres liumides, se rattaclieiit les appapeut tre construit

microaquariums. Celui de Schaudinn
en taillant, sur le grand ct
d'une lame, une chancrure
=S(i
.i^!
Microaquariums.
reils
nomms
'
rectangulaire dei820 mm.

de ct. Sur les deux faces
de la lame on colle des
lamelles de 22 mm. Dans
'^1
</
Fig. 145.
-/i
compris entre ces

deux lamelles, on introduit
l'espace
Micro-aquarium
le
Sciiaudinn.
l'eau et les animaux exapeut encore, plus simplement, coller sur une lame des bandes
dcoupes dans une autre lame et limiter ainsi un espace carr, ferm
sur 3 cots (fig-. 145); on recouvre cet espace avec une lomelle colle sur
les bandes de verre. Ces aquariums restent ouverts sur un ct, mais
l'eau ne se rpand pas, car elle est retenue par la capillarit. On peut
introduire avec les animaux quelques filaments de Spirogyres qui servent arer l'eau. Pour coller les pices de ces aquariums on emploiera
soit du baume du Canada, soit du lut la colophane (p. 447).
miner.
On
Examen sur la platine ctiauffaute.

Lorsqu'il s'agit d'organismes
parasites des Vertbrs sang chaud, il peut tre indispensable, pour
les conserver vivants, de les maintenir, pendant la dure de l'examen,
la temprature de leur hte. Un procd imparfait consiste placer
les prparations dans une tuve rgle la temprature voulue et les
sortir au moment de les examiner. 11 est prfrable d'employer les
platines chaulantes. Voir p. 229 la description de ces appareils.
en
III.
INDICATIONS
On
trouvera, au
DE L'EXAMEN
L'TAT FRAIS
cours de l'tude des mthodes spciales, de

l'tat frais. Je mentionnerai
nombreuses indications de l'examen

seulement
1.
F.
ici
les principales.
En
gnral, on examinera par ce
Schaudinn, Ein Mikroaquarium, welches auch zur Paraffineinbettung

/. mas. Mikr., XI, p. 3-2G-0-29, 1891.
kleiner Objeckte benutzt werden kann. Zlschr.
247
procd, tous les lments cellulaires isols l'tal vivant, que ce

soient des Prolozaires ou des cellules isoles des Mtazoaires (sang
leucocytes, etc.). Celte mthode esl particulirement
indique jionr la recherche des parasites du sang, Texamen des
urines, des matires fcales, des pulpes d'organes, le diagnostic
lymphe,
et
Ftude des Champignons para-ites,
esl indispensable toutes les
l'ois
etc.
L'examen Ttai frais

un organisme
qu'il s'agit d'tudier
ou un lment figur mobile. Ajoutons enfin qu'en botanique celle

mthode esl encore plus employe qu"en zoologie et qu'elle
s'applique tous les vgtaux microscopiques, aux spores, aux
grains de pollens et
mme
aux coupes d'organes.
CHAPITRE
IV
COLORATIONS VITALES
Nous avons reproch la technique d'examen Ttat frais de
ne pas nous montrer les dtails des ohjets. La mthode des coloun procd intermdiaire entre cette
des
colorations
aprs fixation. Elle a pour but
technique
de faire apparatre certaines parties de la cellule, telles que le
rations
vitales
constitue
et celle
novau ou
les
inclusions, sans toutefois causer de modifications
physiques ou chimiques pouvant amener la dformation, Taltralion et finalement la mort de Flment examin. Celui-ci finit
bien par mourir, mais non pas uniquement du
fait
de
la coloration.
Les colorations vitales permettent de dmontrer la ralit de l'existence de certaines inclusions cellulaires qui pourraient tre prises pour
des prcipits colors, autrement dit pour des artifices de prparation.
Cette existence relle ne sera prouve qu'autant que la coloration aura
eu lieu sans que la vie de la cellule soit arrte. C'est ainsi qu' l'aide
du roug-e neutre, on a dmontr le rle digestif des granulations et des
vacuoles de beaucoup de Protozoaires. On a dcouvert, grce cette
mthode, des phnomnes intra-cellulaires d'oxydation et de rduction
qu'on met eu vidence par la dcoloration de certains ractifs (p. 2.52). Il
faut savoir en outre que, parmi les inclusions cellulaires, tout ce qui se
colore n'est pas vivant des pigments divers et des cadavres de Bactries
se colorent souvent trs intensment. Enfin, dans beaucoup de cellules,
surtout chez les Protozoaires, les noyaux sont bien plus difficiles
:
colorer que les inclusions.

La valeur des colorations vitales est trs contestable et trs conteste.
Des techniciens de premier ordre, comme Galeotti, Lee, Mayer, arrivent
conclure que les rsultats obtenus ne constituent pas de vritables
colorations. Le colorant peut diffuser dans la cellule vivante, mais ne

produit pas une vritable teinture. Gnralement le noyau et, particulire-
ment
chromatine, ne se colorent pas si la coloration se produit, c'est

est morte. Les meilleures colorations vitales sont celles
des granulations du protoplasma
mais justement ceux de ces corps
qui se colorent le mieux ne font pas partie intgrante du cytoplasme. Ce
sont gnralement des matriaux nutritifs ou des produits d'changes.
que
la
la cellule
249
COLORATIONS VITALES
la coloration est compas'agil donc de savoir si le phnomne de

tible avec la vie, si un lment vivant peut rellement se colorer ou si la
teiniure ne se produit qu'aprs sa mort. Un fait est certain, c'est que
les lments vivants peuvent ragir chimiquement sur les matires
colorantes. On sait, en ce qui concerne le bleu de mthylne, que ce
Il
corps peut tre fix par certains lments (terminaisons nerveuses,

cylindres-axes) et rduit par d'autres lments (parenchyme rnal). Ces
deux ractions sont videmment compatibles avec la vitalit de la cellule. D'autre part, les travaux de Przesmycki ', pour ne citer qu'un
exemple, ont montr que, chez certains Infusoires, Rotifres, Vers et
Crustacs, le noyau peut fixer des matires colorantes et continuer
ensuite vivre et se diviser.
On pourrait citer beaucoup d'autres exemples, car cette question com-
une littrature trs toulTue 2. Contentons-nous de remarquer que,

parmi toutes ces observations, aucune ne se rapporte un vritable
phnomne de teinture. Il ne s'agit en ralit que de phnomnes d'imbibition. Les animalcules de Przesmycki, transports dans de l'eau pure,
se dcolorent rapidement; leur mort amne aussi leur dcoloration.
Chez les animaux qui ont reu du bleu de mthylne dans la circulation, il faut se hter de mettre le systme nerveux nu et en contact
avec l'oxygne atmosphrique, si on ne veut pas voir la coloration disparatre par suite des phnomnes de rduction. Pour conserver ces
porte
colorations,
Il y a donc
il
faut les fixer par des liquides oxydants (procd de Bethe).
une vritable dfense cellulaire, qui se manifeste par des

phnomnes de rduction tels, que les auteurs recommandent toujours
d'oprer le plus possible au contact de l'air.

Les colorations, dites vitales, se rduisent donc gnralement la succession des phnomnes suivants coloration des inclusions non vivantes,
action rductrice de la matire vivante, insuffisante cependant pour
empcher d'abord Vimbibition progressive, puis la mort de la cellule qui
subit alors la vritable teinture.
:
Je ne
ci'ois
pas que, sauf dans des cas parliculiers, la coloration

une mthode de travail courante. Je pas-
vitale puisse constituer
serai
donc sous silence
la plus grande partie de ces expriences,

description dans les ouvrages spciaux de
hislologique. A mon avis, les coloralions vitales ne
dont on trouvera
la
technique
peuvent trouver un emploi journalier que dans Ttude des Protozoaires et du sang, etdans certaines ractions microchimiques. On
trouvera dans les chapitres qui y sont consacrs (p.
indications suffisantes.
Colorants vitaux proprement dits.
469
et
624) des
Les colorants, dits
L Przesmycki. Ueber iutravitale Frbung des Zellkcrns. Silzungsber. Gesell. f.

Morphol. und Pliysiol. Mimchen, 1899.
2.
Par exemple A Fischel, Untersucliungen bcr vitale Frbung. Anat. Hefte,
1 Abt., XVI,
De Beaucliamp, Les colorations vitales. Anne biop. 417, 1901.
Article Colorations
logique, XI, p. 1906, 1909 et Tlise doct. se, Paris, 1909.
vitales, dans Encyklopdie d. mikr. Technik, 2'= d., 1910.
:
250
MKTIIODES liNKRALES
Vitaux^ ne devront
(les
en
})as
tre quelconques. Ils seront choisis
parmi
sul)slances peu on pas toxiques et seront toujours employs

solntions trs dilues. Ce sonten gnral les colorants basiques
qui conviennent
le
mieux. Les couleurs acides sont bien moins
favorables. D'ailleurs, cette rgle n'est pas absolue, car des corps
trs voisins et de mme raction peuvent produire des effets trs
diflerenls, sans qu'on puisse expliquer celte lection particulire
des tissus. Parmi les thories qui tentent de rendre compte de ces
phnomnes, nous ne mentionnerons que celle d'Overton \ pour

qui la facult de se prter aux colorations vitales dpend de la
solubilit des couleurs
dans
sderaient cette solubilit,
Les colorants vitaux pos-
les lipodes.
notamment
vis--vis de la cholestrine
de la lcilhine qui, d'aprs Overton, imprgnent la pellicule

protoplasmique externe des cellules.^
Les couleurs acides seraient prcisment trs peu solubles dans
et
les lipodes. C'est
pourquoi, part quelques exceptions, elles sont
peu propres aux colorations vitales.

Liste des colorants vitaux.
Les
j^lus usits
sont
Bleu de mthylne chimiquement pur de Hochst ou de Merck,

eu solution
1 p. 500,
p.
1000,
1 p.
10 000.
Bleu de Nil (sulfate ou chlorhydrate 1 p. 1000).

Bleu de crsyl brillant (Brillantkresvlblau)
(p. -469 et
p.
1000
624).
Azur I ii[ II
(i^.
Rouge neutre
389).
(p.
251, -469
Colorants indicateurs
et
625).
252).
des colorations vitales.
(p.
Technique
cipaux moyens d'employer
les
colorants
H y
vitaux.
deux prinbien on
Ou
mlange une gouttelette de la solution trs tendue, avec une

goutte de liquide renfermant les lments tudier, ou bien on
prpare des lames, en y dposant une goutte de solution colorante
qu'on laisse scher avec ou sans talement pralable (mthode de
Pappenheim, p. 624). Sur cette couche dessche, on dpose

une goutte de liquide examiner, on recouvre d'une lamelle et
on
lute
Les
pour
viter la dessiccation.
colorants
vitaux
s'emploient
toujours en solutions
trs
au mitlime pour l'examen entre lame et lamelle, au

dix-miUieme et au cent-millime pour les colorations par immer-
tendues
1. Overton, Studicn ber die Aufnahmo

der Aiiilinfarbcii
ZeUe. Jnfir/j. ivis\s. Bot.XXXW. p. CIO. 1910.
diircli
die lebcnde
COLORATIONS VITALES
251
au ceiilirnu- jioui' les injections. Ces i)iO|)oilions varient

d'ailleurs suivant les cas" parliculiers.
Le dissolvant sera de Teau pure, lorsqu'il s'agit de colorer des
sion,
hnerlbrs aquatiques. Pour les injections, on prendra toujours

de Teau physiologique et on chauffera le liquide la temprature
de l'animal.
La coloration dite posl-vitale, d'aprs Arnold, se fait en dtachant des fragments d'organes, des lambeaux de membranes ou
mme en raclant des lments cellulaires la surface des
muqueuses. Ces bhnents sont plongs dans
le
bain colorant trs
dilu et rendu soigneusement

isotoniaue.
'^
Entin, lorsque Texanien par transparence n'est pas possible, il
un temps jug suftisant, fixer la coloration par une
faut, aprs
mthode approprie (p. 658, note 1) et pratiquer des coupes.

Les deux principaux colorants vitaux sont le bleu de mthylne
rouge neutre.
Le bleu de mt/njlne
et le
(p. ^^84)
doit
tre
chimiquement pur.
On
pourra prendre indiffremment celui de Merck, de Hochst ou

de Griibler. On en fait des solutions 1 p. 500, 1 p. 1000,
1 p. 10 000, dans Teau distille \
pour l'examen entre lame et
lamelle, par exemple pour la coloration vitale des Protozoaires et
coloration post-vitale de lambeaux de membranes ou de cellules
la
isoles par raclage
d'une muqueuse. Les solutions Ip. 100 dans
solution physiologique conviennent pour certaines injections,

on
par exemple l'tude des sacs lymphatiques des Batraciens
la
peut l'administrer aussi par
la
voie digestive, raison de 10 cen-
tigrammes par kilogramme d'animal pendant une semaine.

Chez les Mtazoaires, la coloration vitale par le bleu de mthylne est surtout employe pour la recherche des terminaisons nerveuses et des cyUndres-axes.
Le rouge neutre a t dcouvert par Witt en 1879 et introduit
dans la technique microscopique par Ehrhch. C'est une poudre
de couleur fonce l'etlets verdtres, facilement soluble dans Teau
distille,
avec une couleur rouge tirant un peu sur
le violac.
On
des solutions 1 p. 1000, 1 p. iOOOO et 1 p. 100 000. Il

possde la prcieuse proprit de virer sous Tiidluence des ractifs
en
fait
acides ou alcalins.
la liqueur
Une
faible
belle couleur
trace d'un acide organique donne

rouge cerise ou l'ouge fuchsine.
Voir p. 6-^5 rexcelloiitc mTliodo de Sabrazs pour

des Protozoaires.
1.
et
une
la coloration vitalo
du sanp:
METHODES GENERALES
252
Une
trs faible alcalinit, telle
virer au jaune
que
celle
de l'eau de source, fait

et au brun rougetre
bruntre les solutions faibles
les solutions plus concentres. Ces phnomnes permettent d'tudier les ractions du cytoplasme et de ses inclusions, particulire-
ment chez
En
les Infusoires (p.
solution alcoolique,
535).
le
rouge neutre
est
brun rouge en
liqueur concentre et brun jauntre en liqueur tendue.
Ce corps
est trs
propre fournir des colorations vitales, parce qu'il
peu toxique. On peut l'administrer aux animaux par la

voie sous-cutane ou mme intraveineuse et par la voie digestive. Pour
les animaux aciuatiques, il suffit souvent de les plonger dans une solution trs dilue (Mollusques, larves de Batraciens). Pour les injections,
on emploie des solutions plus concentres (i 2 p. 100) et on peut en
inoculer chaque jour plusieurs centimtres cubes. La rsistance des
Mammifres est assez variable. Les Lapins et les Cobayes supportent
est relativement
longtemps ces injections, tandis que
trs
les Souris
meurent gnrale-
rsultats obtenus sont mdiocres. La

peau, les muqueuses, l'urine, les fces prennent bien une coloration
rouge, mais, l'examen microscopique, on trouve que le colorant n'a
ment au bout d'une semaine. Les
pntr que dans les espaces intercellulaires. Les cellules ne se colorent

dans leur noyau, ni dans leur cytoplasme, et la coloration produite par
le rouge neutre est trs fugace. Pour pratiquer des coupes sur les tissus
ainsi colors, il faut fixer la coloration par la mthode de Golovine '.
ni
Colorants indicateurs.
Les proprits indicatrices du rouge
neutre nous amnent parler d'une srie de colorants qui, sans
fournir des colorations vitales proprement dites, peuvent tre utiavantageusement, dans les examens l'tat frais, pour dter-
liss
miner la raction acide ou alcaline de certains organismes ou

lments figurs. L'tude de ces corps touche de prs la microchimie au sujet de laquelle on trouvera p. 669 des renseignements
complmentaires.
Le rouge Congo se ]rsente sous forme de poudre brun rougetre, facilement soluble dans l'eau. C'est surtout un bon ractif
indicateur qui vire au bleu avec les acides. Scholz s'en est servi le
premier pour colorer vitalement les Piotifres et mettre en vidence la raction acide du tube digestif, qui tranche en bleu sur
fond rouge de l'animal. Il est bon de savoir que ces ractions
ne sont pas toujours fidles le virage au bleu ne se produit pas
en prsence de l'ammoniaque, ou d'un coagulum albumineux
le
en outre
L
l'acide
Zeitschrift
f.
carbonique
wiss Mikr.,
est sans action.
XIX,
p.
176-185, 1902.
COLORATIONS VITALES
Les iropolines 00 (orange
de
Gasêlla)
eL II
de
Le Sudan III
tains
HiJclisl) et
rougissent immdiatement
d'alcali. Elles sont insensibles l'acide
253
avec
000 (orange .IV
la
moindre
trace
carbonique.
colore lectivemenl les graisses (p. 656) et certels que la cire, la culine et la subrine
lments vgtaux
le dimthylamidoazobenzol, s'emploie
(p. 729). Un colorant voisin,
aussi en solution alcoolique (0,4 p. 100) il colore le protoplasma
les graisses et certaines vacuoles en rouge.
en
;
jaune,
L'orang de dhntliylaniline (Goldorange, hlianthine) peut

pour l'tude de la raction du cytoplasme, au moins chez les
vgtaux. La solution aqueuse 0,01 p. 100 est d'un jaune
orang. Les acides, mmes organiques, la font passer au brun
servir
rouge d'une manire trs nette.

Le vert diazine convient pour l'tude des rductions, au cours
en deux leuco-composs (incolores), dont
desquelles il se ddouble
l'un redevient rouge par oxydation.
rgnre.
Injections intravitales.
mthylne, destines l'tude
La couleur verte
n'est jamais
Outre les injections de bleu de

du systme nerveux, je mention-
nerai les injections de poudres colores, ncessaires pour les travaux sur les cellules ou les organes phagocytaires les substances
:
les plus
employes sont l'encre de chine et le carmin pulvris.
Pour Ttude de appareil excrteur, on emploie le carminate

d'ammoniaque et le carmin d'indigo: cette dernire substance n'est
d'ailleurs pas un colorant vital proprement dit. Le carmin et
l'encre de chine servent aussi pour l'tude de la nutrition des
Amibes et des Infusoires.
On trouvera l'expos de cet important sujet au chapitre consacr

l'tude des injections physiologiques (p. 677).
CHAPITRE
DISSOCIATION.
DIGESTION ARTIFICIELLE
DCALCIFICATION
Je vais insister assez longiiemeiil sur
la
dissocialion el sur tous
procds qui s'y rattachent, parce que les dbutants sont trop
enclins aujourdMiui ngliger ces mtliodes. Sduits par la facilit
les
avec laquelle on arrive pratiquer des coupes, dans la majorit des

tissus et des organismes, ils ngligent Ttude individuelle des
lments histologiques.
On
trs fausse de la forme vritable de ces lconnat que sous l'aspect qu'ils revtent dans les
sections minces. Si on prsente l'lve la mme cellule, isole ou simplement coupe dans un sens auquel il n'est pas habitu, il ne la reconnat plus. On oublie trop que l'il humain est fait pour prendre connaissance des objets extrieurs suivant trois dimensions et que nos
thories sur les rapports et les fonctions des organismes sont bases
sur la reprsentation que nous nous faisons de ces objets dans l'espace.
Gomment comprendre la complexit des mouvements nuclaires qui
prsident la mitose ou les rapports multiples que prsentent entre eux
les lments si varis d'un organe parenchymateux, si nous en sommes
rduits nous les reprsenter sur un plan, nu moyen de coupes optiques? C'est grce une longue habitude que les micrographes exercs
se fait ainsi
ments car on ne
une ide
les
arrivent, comme nous l'avons expliqu (p. 168), superposer ces coupes
optiques, pour reconstituer loljjet entier dans l'espace. Le dbutant en
aussi n'aura-t-il qu'une connaissance incomplte et une
est incapable
ide fausse de la forme des lments cellulaires, s'il ne s'astreint pas
d'abord les tudier isolment, les faire tourner en quelque sorte
sous ses yeux, pour les voir sous toutes leurs faces. La mthode des
:
coupes lui montrera ensuite les diverses modalits d'association de ces

lments, en mme temps que, par les fixations trs parfaites qu'elle
permet, elle lui rvlera des dtails de structure qu'on ne peut dceler
sur les cellules isoles.
DISSOCIATION. DIGESTION AU TIFICIELLE. DCALCIFICATION
une base
255
par des faits bien oliservs,

Ayant acqiii:?
contrls par des dessins, il pourra leur appliquer ses facults imaii'inatives, reconstruire dans son
esprit la structure des org-anes et
l'ag-encemcnt de leurs lments, leur prter au besoin les dimensions
normales des objets qui nous environnent et arriver ainsi comprendre
leurs relations physiologiques. L lve atteindra ainsi le but de toute
bonne morphologie histologique, qui est de servir de base la physiosolide, constitue
logie et la pathologie cellulaires.
La
consisie
dissociation
isoler les lments constitutifs des
peut tre simplement mcanique^ c'est--dire pratique

d'aiguilles; elle peut tre chimique, en ce sens que la
tissus. Elle
au moyen
dissociation
mcanique
solvent les substances
de Taction de ractifs qui diset mettent en libert les
intercellulaires
Les procds mcaniques
lments.
alors
est })rcde
miques peut
mme
'agilalion interviennent
sparation. L'action des ractifs chitre plus profonde, tout en restant lective, et
pour en parfaire
la
dtruire certains lments des tissus, pour mettre les autres en

tels sont les procds de digestion artificielle et de
vidence
:
dcalcification.
DiSSOCITION MCANIQUE
I.
On
peut l'exercer soit sur des tissus
frais, soit
sur du matriel
masse. Cette opration, quoique trs simple,

dj fix et color en
elle est
demande beaucoup de soin, de jiatience et d'attention
:
excellente pour
atermir
la
main
et
lui
donner
riiabilet
qui
manque gnralement aux dbutants.

d'aiguilles.
lancole.
ils
La dissociation mcanique se pratique l'aide

Lesdeux formes utiles sont l'aiguille droite et l'aiguille
11 faut avoir une petite provision de ces instruments car
Aiguilles.
s'moussent assez vite
et,
pour obtenir de bonnes dissociations,
faut qu'ils soient toujours en parfait tat. Non seulement il faut

que les pointes soient trs aigus, mais encore il est ncessaire
il
que
la
surface en
soit
parfaitement polie.
Beaucoup d'auteurs conseillent de
emmanche dans
des |)orte-aiguilles
se servir d'aiguilles coudre, qu'on

mon avis, ces aiguilles ne valent
emmanches. D'abord la pointe n'en est pas assez fine,

conique et non longuement efllle, comme dans les aiguilles
emmanches. Ensuite elles sont trop flexibles si, pour remdier cet
inconvnient, on prend des numros un peu forts, les pointes dviennent
beaucoup trop grosses. On a bien la ressource de les user sur la pierre,
pas
les aiguilles
elle est
MTHODES GNRALES
256
puis de les polir sur un cuir, mais ces oprations sont assez longues et
on ne russit pas toujours trs bien. Je conseille donc de prfrence
l'emploi de bonnes aiguilles emmanches pointe trs effile et base
solide, non Ilexible, ou, leur dfaut, d'pingles Insectes de premire
qualit, qu'on {\xe dans un porte-aiguilles.
Pour manipuler de trs petits objets (Infusoires, Diatomes, etc.), on
peut employer, comme les anciens, une soie de Porc, ou mieux un cil de
Porc, qu'on fixe avec un peu de lut la cire (p. 447) l'extrmit d'un
petit bton.
Manuvre des aiguilles.

chaque main
gauche, une
:
droite,
une
Il
faut
deux
aiguilles,
une pour
aiguille droite qui spare les lments,
aiguille lancole qui peut fixer les fragments par le
plat et les diviser par la pointe et le tranchant.
On peut
dissocier Til nu, sous la loupe monte,
ou sous
le
binoculaire. Si on peut disposer de ce dernier, on travaillera sans

fatigue dans des conditions excellentes. A dfaut d'autre appareil,
on pourra employer le bras porte-loupe dcrit p. 111 (fig. 69), ou

encore une petite loupe trois pieds d'un modle trs courant dans
le
commerce. Qu'on
tant
que
travaille la
soit
la
loupe ou l'il nu,
convenablement
claire.
il
est
impor-
Pour cela il
on le
228)
prparation
faut disposer d'un fond mi-parlie noir et blanc (fig.
ralise au moyen d'une plaque de verre sous une moiti de laquelle
on colle du papier blanc et sous l'autre du papier noir. On peut ainsi
:
passer d'un fond l'autre, suivant la teinte de l'objet dissocier.

Il faut, en outre, que la lame sur laquelle on dissocie ne repose pas
immdiatement sur
le
fond, de manire ce
ne vienne pas obscurcir l'image de

la
l'objet.
que l'ombre projete

fera donc reposer
On
lame sur un support quelconque,' de manire
claire par rflexion.

Ptri,
ment
On
peut employer
un couvercle de cylindre Borrel ou

d'agitateur courb
deux
fois
ce qu'elle soit
une bote de
un fragdment
simj
cet effet
angle droit, de manire
former un U. Lorsqu'on dissocie sous le binoculaire, on dispose

de fonds blancs et noirs ainsi que d'un miroir (p. 113). Je ne conpas la dissociation sous le microscope cause du renversement des images et de l'absence d'ajipuie-bras.
Pour manuvrer correctement les aiguilles, il faut avoir
quelques notions sur la structure du tissu dissocier, savoir si
seille
ses lments sont parallles
ou entre-croiss.
En
effet, si
on dila-
cre au hasard, on dchire les lments au lieu de les sparer et

on les rend mconnaissables. Supposons que nous voulions obtenir
des fibres nuisculaires
nous savons que ces
fibres sont parallles,
DISSOCIATION. DIGKSTION ARTIFICIELLE. DCALCIFICATION
257
nous prendrons donc un })etit IVagment, cou}) dans le sens des

nous le sparerons d'abord en deux, puis, mellanl de ct
fibres;
une moili, nous diviserons l'autre, et nous rpterons cette oprade manire obtenir des filaments de plus en plus fins. Dans
ce cas, on dissocie dans le sens de la longueur, en appliquant les
tion,
aiguilles
une extrmit des fragments, toujours
la
mme, pour
limiter les traumatismes, et en cartant progressivement les

moitis pour les sparer.
Emploi des liquides.
deux
est vident
que cette opration ne

peine d'altrer irrmdiablement les
tissus. Les fragments dissocier seront donc maintenus en suspension dans un liquide, mais en quantit juste suffisante pour
peut se
faire
sec,
II
sous
empcher les lments de se desscher et d'adhrer la lame.

Pour les tissus frais, on emploiera la solution physiologique ou un
des liquides indiffrents indiqus p. 240.
La
imagine par Ranvier, s'applique au tissu conform d'lments entre-croiss de telle sorte qu'il s'tire en tous
sens sans se dclnrer. En talant ce tissu sur une lame de verre et en
lui faisant subir un commencement de dessiccation, on arrive faire
demi-dessiccation,
jonctif,
adlirer certaines parties
la
lame
et
obtenir
la
sparation des
lments.
Vagilation de fragments ou de tranclies d'organes avec une petite
quantit de liquide, dans un tube essai bouch, donne quel([uefois de
bons rsultats'.
Le raclage ou grattage avec un scalpel permet d'isoler facilement les
lments superficiels d'une mu({ueuse ou d'une tumeur.
Le brossage avec un petit pinceau trs fin convient pour les organes
lympboides on chasse ainsi les leucocytes et on peut tudier plus facilement les cellules fixes et la trame conjonctive. Ce brossage s'opre
sur des tranches minces, dans une goutte d'eau physioloi:i(iue.
La compression ou lcrasement modrs peuvent faciliter la dissociatrs
tion des cellules nerveuses. Un fragment de substance grise d'une corne

antrieure de la moelle, trs lgrement cras dans un peu d'eau
physiologique entre lame et lamelle [)eut montrer de beaux lments
(p. 659). Signalons ici un petit tour de main inditju par Ranvier et ([ui
consiste laisser tomber une goutte d'eau sur les objets dissocis et
sparer ainsi des lments (ju'on dchirerait infailliblement avec les
aiguilles.
Le procde du tapotement sera tudi page 20 1.

Mentionnons enfm la mtliode des injections interstitielles, qui, lorsqu'elle est bien excute, donne de bons renseignements sur le tissu
conjonctif. Ce procd, imagin par Ranvier, consiste produire une
boule d'dme en injectant de la solution physiologique dans le tissu
1. .Te
ne puis
(jue mentionner le ti's cui'icux procd

cf. CR. Soc. bioL, V, p. 797, 1888.
du diapason lectrique de
Bovier-Lapierre;
M. Langeron.
17
METHODES GENERALES
258
sous-cutiu; on sectionne rapidement une tranche de cet

lnie et on l'enferme entre lame et lamelle. La russite de cette opration exige une grande dextrit. On opre soit sur l'animal lui-mme,
soit sur un morceau de pe:iu prlev par biopsie.
cellulaire
IL
DISSOCIATION CHIMIQUE
Nous dislhiguerons
sant la dissociation.
trois catgories d'agents
Ce sont
les dissocialeurs
ferments solubles produisant

dcalcificaleurs.
la
chimiques produi-
proprement
dits,
les
digestion arliilcielle et enfin les
Il est
impossible de citer tous les
la dissociation ou macration. Je
de
produire
corps susceptibles
me contente d'indiquer les plus usuels et les plus faciles
Agents dissocialeurs.
employer.
eau chaude
ou bouillante, applique pendant dix quinze

des rsultats pour la dissociation de la peau,
donner
minutes, peut
des muscles et des tendons. On peut oprer par bullition directe
ou mieux au baiLi-marie.
Valcool au
tiers,
imagin par Ranvier, convient surtout pour
l'tude despithliums.
cils vibratiles.
On
le
Il
permet d'tudier
prpare en mlangeant
trs bien les cellules

:
Alcool 90
Eau
distille
vol.
Les objets qu'on y plonge doivent tre trs petits et on les y

au moins vingt-quatre heures. On peut l'employer aussi
les cellules ganglionnaires de la moelle pinire, et
isoler
pour
laisse
pour l'tude des lments des organes glandulaires. Pour ces derniers, on prolonge l'action du ractif pendant plusieurs jours.
Mann recommande vivement rem|)loi de l'alcool au tiers, modifi
selon Flix en
le
saturant d'acide salicylique.
On
double
d'immersion indiqu par Ranvier. Ce liquide est

l'tude du systme musculaire de la Grenouille
le
temps
pour
muscles
parfait
:
les
deviennent blancs, tandis que les tendons restent transparents.

Les alcalis caustiques (potasse et soude), en solution concentre,
n'allrent pas les cellules et dissolvent bien le ciment intercelluAu contraire, en solutions faibles, ils dtruisent les lments
laire.
On emploiera donc des solutions 30 ou 40 p. 100, frachement prpares avec de la potasse ou de la soude en pastilles,.
figurs.
DISSOCIATION. DIGESTION ARTIFICIELLE. DCALCIFICATION

qui sont faciies peser et se conservent
Tmeri bien boucbs.
trs
2o9
bien en (laons
On
emploie ces liquides pour l'lude des

muscles stris du cur et des muscles lisses qui rsistent trs
bien; on s'en sert aussi pour Tisolement des fibres lastiques, qui
sont respectes tandis que les autres lments
conjonctifs dispa-
bon d'oprer sur le

porte-objet ou dans un verre de montre. On examine les lments
dans le liquide dissociateur ou dans du formol 10 p. 100
mais
raissent. L'action est trs rapide, aussi est-il
faut bien se garder d'ajouter de l'eau

qui, en abaissant la concentration, amnerait la dissolution immdiate des lments figurs.
Le traitement par le formol permet de laver l'eau et de colorer.
il
Les solutions alcalines
faibles
ne peuvent convenir que pour
l'tude des lments corns, poils et ongles.
Les
minraux les plus employs sont l'acide chlorhydrique et

chlorhydrique pur isole bien les canalicules urinifres en quinze vingt heures. L'acide azotique trs fort, 40 p. 100,
produit le mme efet, en trois quatre heures; en solution 20 p. 100,
il est excellent
pour dissocier les muscles qu'on y laisse vingt-quatre
heures et qu'on agite ensuite dans l'eau.
Aprs les acides, on peut sans inconvnient laver les lments
grande eau pour les examiner dans la glycrine.
acides
l'acide azotique. L'acide
Les agents fixateurs^ convenablement modifis^ peuvent produire d'excellentes macrations. On peut donc, en combinant les
concentrations, les faire agir isolment ou successivement comme
fixateurs
et
comme
ncessaire de n
car,
employer qu'une
mme aux
Dans ce dernier
volume
est
cas,
il
est
trs petite quantit de liquide^
faibles concentrations,
fixateurs, lorsque leur
de
dissociateurs.
ils
peuvent agir
comme
considrable par rapport celui
la pice.
Vacide osmique
dissocie de 0,05 0,20 p.
100
et fixe partir
de 0,5 p. 100.
Le sublim dissocie jusqu' 0,15 p. 100 et

0,25 p. 100.
Les bichromates alcalins dissocient de 0,1 1
partir de 1 p. 100.
fixe
p.
partir de
100
et fixent
Vacide chromique
0,25 0,50
p.
dissocie de 0,01 0,20 p. 100, fixe de

100, dissocie de nouveau aux environs de 1 p. 100
puis devient destructeur partir de 2 3 p. 100.
L'acide azotique se comporte inversement,

puisqu'il dissocie
p. 100 et fixe de 1,5 3 p. 100,
de 3 40
METHODES GENERALES
260
Les liquides chromi(|ues conviennent jiailicnliremenl pour

systme nerveux.
le
Cette mtliode difi're de la dissoDigestion artificielle.

ciation simple en ce qu'elle est capable de dtruire certains
lments pour en mettre d'autres en vidence. On opre avec la
pepsine ou avec
la
pancratine.
On peut
employer
Pepsine.
une fistule gastrique, ou
par
(1 })artie
la
suc gastrique naturel, extrait

macration d'estomac de Porc
le
en poids pour 20 parties d'HCl (),i p. 100). Il est plus

de la pepsine en paillettes qu'on dissout
commode de prendre
dans de l'acide chlorliydrique 0,2 p. 100. [,e litre de cette solution de pepsine peut varier de 0,1 0,5 p. 100, suivant la puissance du produit et l'effet qu'on veut obtenir. On opre la
temprature de 37^ ou mieux de 40 et on surveille attentivement,
pour arrter l'opration au moment o le rsultat dsir est obtenu.
On })eut ajouter un cristal de

tions bactriennes.
Une bonne formule de suc
celle
de Jousset
(p.
thymol pour empcher
les pullula-
gastrique artificiel antiseptique est
695).
Ce ferment agit en solution alcaline. On en

une solution de 0,2 0,5 p. 100 dans de la soude caustique
0,2 p. 100, on fait agir 37-40 en ayant soin d'ajouter un
Pancratine.
fait
cristal
de thymol.
La digestion peptique convient pour Ttude des muscles et du

tissu lastique. Elle est excellente pour isoler les parties chitineuses et pour obtenir, l'tat de libert, certains parasites animaux
(Gysticerques p. 551, Trichines p. 558, etc.)
La digestion pancratique
est employe en histologie pour isoler

rseaux collagnes et, en gnral, pour l'tude du
tissu conjonctif. Elle convient trs bien pour la prparation des
lments calcaires ou chitineux des animaux.
les fibrilles et les
Pour les recherches histologiques, il est bon d'prouver la

puissance des solutions, au moyen d'albumine cuite ou de (ibrine
frachement extraite du sang, avant de soumettre les objets de
recherche leur action.
la
digestion artilicielle se rattachent les mthodes de recherche
du
bacille de la
(p.
694).
tuberculose par finoscopie, l'anliformine, etc.
Traitement des objets dissocis et digrs.

Ces objets
doivent subir encore un traitement mcanique, destin achever
2G1
DISSOCIATION. DIGESTION ARTIFICIELLE. DCALCIFICATION

la
sparalioa des lmeiils. LfiyiUiti/i dans
uii
petit tube,
aux
deux tiers rempli du dissocialeur, donne un liquide trouble dont

on prlve une goutte avec une }iipette. On peut encore, lorsqu'il
les saisir avec une pince pour les agiter
s'agit de membranes,
dans
liquide, soit dans le tube, soit
le
simplement sur
la
lame.
L'emploi du pinceau peut rendre de grands services. La dilacration proprement dite avec les aiguilles est quelquefois ncessaire. Enfin la percussion ou le tapotement entre lame et lamelle
donnent souvent de meilleurs rsultats que toutes les autres
mtbodes. Ce procd demande beaucoup de lgret de main
et
ne doit pas tre confondu avec l'crasement des tissus sous
la
lamelle. Cette dernire doit donc tre soutenue par une cellule en
les
papier dcoup ou par quatre boulettes de cire places sous
de
242). L'objet est plac sur la lame avec un peu
On
sur
ses
recouvert
la
lamelle
supports.
par
pose
liquide
ou
tapote alors doucement au-dessus de l'objet avec une aiguille
angles
(p.
et
une
petite tige
de verre ou de bois.
les pitbliums,
une sparation
On
obtient ainsi, surtout pour
trs parfaite des lments.
sparation des lments a t suffisante dans le liquide

peut tre ncessaire de les runir de nouveau pour les
laver, les colorer et les monter en prparations dfinitives. Cette runion
peut tre ed'ectue par sdimentation naturelle ou par centrifugaiion. La
sdimentation se lait de prfrence dans de petits tubes bouchs
on dcante le liquide clair qu'on remplace par de l'eau ou de
(fig-. 205)
l'alcool, puis par le colorant et enfin pnr les liquides intermdiaires et
le milieu de conservation dfinitif. La ccnlrifugation (p. 647) donne les
mmes rsullals avec une grande conomie de temps.
Lorsque
la
(lissociateur,
il
Les lments
trs dlicats, isols par tapotement sur la lamelle,

de
grandes prcautions pour tre monts en prparation
exigent
dlinitive. Toutes les oprations doivent tre effectues sous la
lamelle. Celle-ci est supporte aux quatre angles par des boulettes
et on fait passer sous elle tous les liquides successifs des-
de cire
la fixation, la coloration, au montage, etc. Ces

sont
introduits
d'un ct avec une pipette (tig. 146), tandis
liquides
Tautre
de
ct le liquide prcdent, au moyen de
aspire
qu'on
tins
au lavage,
bandelettes de papier buvard.
Pour ne pas dranger
l'objet et
ne pas dplacer
la lamelle,
il
ne
faut pas introduire plus de liquide qu'on n'en relire. Les bandelettes de buvard, pour agir efficacement, ne doivent pas tre
dchires au
ciseaux.
Il
hasard,
faut leur
mais
donner
dcoupes
la
rgulirement avec
largeur du petit ct de
la
des
lamelle
METHODES GENERALES
262
et
une longueur peu prs double.
On
doit les tenir inclines et
mettre leur tranche seule en contact avec
on
dpose sur
le
bord de
la
lamelle.
lame, celle-ci se trouve mouille par le

ce
entre
autres
inconvnients, produit des phnoqui,
liquide,
mnes de capillarit qui peuvent tre gnants. Le liquide aspir
Si
doit
les
la
monter lentement dans rjjaisseur du buvard. 11 faut aussi

un nouveau liquide qu'aprs avoir aspir
avoir soin de n'ajouter
une partie du prcdent, surtout lorsqu'il y a entre eux une diffrence de densit. Autrement le nouveau liquide, au lieu de pn-
Fig. 146.
Manire de traiter un objet par des liquides successifs, sans dranger

la lamelle.
Irer sous la lamelle, se
rpandra tout autour. Lorsque l'objet est

il faut,
pour ne pas le dplacer,
parliculirement dlicat et mobile,
l'entraner et le perdre, aspirer mthodiquement sur les quatre

cts de la lamelle et procder avec beaucoup de prudence.
La pntration des liquides s'electue facilement avec les j)etiLs objels,

que des Protozoaires ou des cellules dissocies. Elle est beaucoup
plus lente avec les objets larges et plats comme les Trmatodes, les
fragments de membranes, etc. en effet, les liquides ne sont en contact
avec ces objels que par une trancbc trs mince et passent autour d'eux
sans les pntrer autrement que sur leurs bords. 11 faudra donc prolonger leur action et la suivre au microscope. Si des liquides trs
mobiles et trs peu denses, tels que Talcool ou le xylol, viennent mouiller
tels
la face
suprieure de
avant de continuer
la lamelle,
les
il
faut avoir soin de bien les essuyer
oprations.
va sans dire que cette mthode, longue et dlicate, n'est

employer que dans des cas exceptionnels. On l'vite la ])lupart
du temps par l'emploi des frottis secs ou humides (p. 626 et 628).
Il
III.
Cette
opration
imprgnent
DCALCIFICATION
consiste
les os, les dents et,
dissoudre
les
en gnral, tous
sels
calcaires
qui
les tissus calcifis.
DISSOCIATION. DIGESTION ARTIFICIELLE. DECALCIFICATION
263
mthode des coupes.

qui
possdent tous la
Chimiquement,
fonction acide, dplacent les sels de chaux unis la substance
manire pouvoir
de
les
les
tudier par
la
liquides dcalcilianls,
combinent k eux pour les transcollagne du tissu osseux, et se

former en
sels solubles.
Du
cut
du
une neutralisation progressive par
il se
produit donc
bases terreuses.
dcalcifiant,
les
ce qui concerne la composition de la solution acide, il faut viter

une dissolution trop lente des sels calcaires et une altration des lments figurs du tissu dcalcifier. Aussi la dcalcification
En
deux cueils
ncessile-t-elle les prcautions suivantes

1 Ne dcalcifier que du matriel pralablement bien fix,
:
du matriel
mais jamais
on emploiera un liquide trs pn liminer tel que le picroformol de Bouin (p. 284), ou
formol 5 p. 100, surtout s'il s'agit de grosses pices.
Comme
frais.
trant et facile
fixateur,
simplement le
2" Ne jamais employer
les acides minraux forts (except l'acide azotique), sans addition d'une substance destine empcher le gonflement
du collagne.
plus possible la dissolution des sels calcaires et, pour
cela, employer un trs grand volume de dcalcifiant, suspendre l'objet
dcalcifier au milieu du liquide et changer frquemment ce liquide si
ou
la gliflcation
Acclrer
l'os est
le
volumineux.
aprs la dcalcification, de neutraliser les tisssus,

par action chimique ou par lavage.
4
Il
est indispensable,
On
comme
dcalcifiants, un grand
ceux
qui forment des sels
parmi
solubles avec les bases alcalino-terreuses. Remarquons que tous
les fixateurs acides agissent plus ou moins comme dcalcifiants,
Dcalcifiants.
nombre de corps
mais celte action
Le meilleur
l'emploie,
(Mayer),
a propos,
acides, choisis
est trs lente et insuffisante.
dcalcifiant est certainement
V acide azotique.
On
pur, en solution aqueuse (Schaffer) ou alcoolique

additionn de substances qui empchent son action
soit
soit
la phlorogonflante et parmi lesquelles la plus importante est
glucine.
i Solution aqueuse (F acide azotique 2-15 p. JQO d'aprs
Schaffer. Cette solution se prpare en ajoutant 3-23 volumes
d'acide azotique concentr, de densit J,4, la quantit d'eau
distille ncessaire pour faire 100 volumes. Ses avantages sont les
elle dcalcifie plus vite que tous les
suivants d'airs Schaffer *
autres acides (12-24 heures) et elle ne gonfle pas le collagne,
:
l. Schaffer, Article Knoclien

v.nd Ziihne in Encyclopadie der mikroskopischen
Technik; pour les mthodes de Retterer, cf. Journal de V Anatomie et de la physioSoc.
de
logie, XLI. Ifi05 et C\R.
biologie, janvier 1906.
2G4
MCTIIODRS GENKRALES
condilioii
(le
pas mettre
jias descendre au-dessous de 1,6 p. 100 el de ne

(issu en contact avec de l'eau pure, pour liminer
110
le
l'acide aprs dcalcification.
SchalTer conseille de ne rien ajouler pour empcher
ment
nient
le fonfle-
toutes les formules proposes ont, d'aprs lui, Tinconvde relarder beaucoup la dcalcification i (sauf la phloro-
glucine-).
L'limination de l acide ne doit jamais se faire par immersion

dans l'eau pure. Il faut commencer par un lavage de vingt-quatre
heures dans l'alun de potasse 5 p. 100. On peut ensuite laver
dans l'eau sans inconvnient.
2 Solution d'acide azotique 5 p. 100 dans l'alcool 90" (Maycr). D'aprs
Mayer, contrairement ce que dit Schaier, Talcool azoti({ue ne produit
jamais d'altration ou de gondement sur les os pralablement bien
fixs. Ce liquide agit beaucoup plus lentement que la solution aqueuse
(2 3 semaines). On lave, d'aprs Thoma, pendant huit quinze jours,
dans de l'alcool tenant en suspension un excs de carbonate de calcium
prcipit (ol)tenu en prcipitant une solution de chlorure de calcium
par une solution de bicarbonate de sodium et lavant bien le prcipit),
jusqu' ce que le liquide resle neutre au papier de tournesol.
L'acide sulfureux
aussi ra]nde
est aussi
un
excellent dcalcifiant, presque

moins nuisible au collagne
l'acide azotique et
que
mlanges la phloroglucine. Son emploi a t rgl jâr
Ziegler, dont la mthode est recommande par Schaffer, Mayer et
Mann.
On hxe d'abord les fragments dans le formol, puis on les plonge
dans une solution aqueuse d'acide sulfureux commercial
5 p. 100. Le phosphate Iricalcique insoluble est converti en mono-
que
les
phosphate
trs soluble,
de
telle
sorte
qu'un humrus de Cobaye
adulte peut tre dcalcifi en douze heures
humains en une semaine (Mann). On

courante
fine
et
-f-
3o et de gros os
longuement l'eau
on dshydrate graduellement pour inclure la paraflave
ou au collodion.
1. Pourtant Malassez obtenait de trs bons rsultats avec une sohition aqueuse
sature d'acide picrique, additionne de -2 p. 100 d'acide azotique.
2. D"aprcs xVndecr et
Haug, la phloroglucine prserve les tissus de l'action destructive des acides et permet de les employer en solutions concentres. Haug
dissout 1 gr. de phloroglucine dans 10 gr. d'acide azotique pur, en chautiant lgrement, puis ajoute 50 gr. d'eau. On complte le volume de 300 cm^ avec de
l'acide 20 p. 100 ou moins fort. L'action est trs rapide. Ensuite on lave deux
jours l'eau courante.
GIlAl>ITHi-:
VI
THORIE DE LA FIXATION
Les mlhodes (rexamen rtal irais ne donnenl que des renseignements insnllisanlssnr la cellule vivante, parce que les lments
qui la constituent possdent tous peu prs le mme indice de
rfraction. La nature des rayons auxquels Til humain est sensible ne permet pas de surmonter cet obstacle par des procds
optiques et d'arriver ainsi distinguer nettement les dtails de
structure du noyau et du cytoplasme. Nous avons vu (p. 80) que
l'emploi des rayons ultra-violets permet, jusqu' un certain point,
de rvler ces dtails sans colorations, mais c'est une mthode
})urement photographique, sans intrt pratique. Il faut donc,

pour tudier la structure de la cellule, la colorer, afin de suppler
aux diffrences de rfringence par des diffrences de coloration.
Nous savons que
celte coloration est peu prs impossible k Tlal

vivant et que, pour la prali(iuer avec succs, il faut tuer la cellule.
C'est l le rle de la fixation.
La
cellules,
en
Dfinition de la fixation.
lion
destine tuer les
po&sible, dans
bonne
l'tal
fixation doit, en
elles se
quelque
donc une opraconservant, autant que
fixation est
les
trouvaient pendant
sorte,
immobiliser
la
Une
vie.
la cellule,
con-
server exactement toutes ses parties constituantes et ne pas faire

apparatre artificiellement de nouveaux dtails de structure. Cette
fixation exacte est impossible raliser avec les procds actuels.
Une
action prompte et nergique du ractif
empche bien
les
modifie aussi plus

ou moins profondment la structure cellulaire. Les meilleurs de
nos fixateurs sont ceux qui, tout en agissant raiiidemenl, |roduialtrations spontanes jôst
morlem, mais
elle
le moins possible de modifications secondaires ou artifices,

susceptibles de nous donner une ide trs fausse de la morphologie interne des cellules.
sent
MTHODES GNRALES
266
En
quoi consiste donc essentiellement la fixation
? Il
est certain
masse
cellulaire, forme cralbuminodes, ne peut tre

que
conserve exactement que par un procd qui la solidifie. Or, en
la
mettant part
la
la dessiccation, cette solidification
conglation et
ne peut tre obtenue que par coagulation ou prcipitation.
Mann
a trs bien fait ressortir la diiTrence qui existe entre ces deux
la coagulalion (bien distincte de la solidification par le
refroidissemenL), est produite par les agents physiques, tandis que la
prcipitation, toujours accompagne de modifications chimiiiues, est produite par les agents chimiques. Le vritable but de la fixation est donc
de produire une coagulalion ou une prcipitation aussi compltes que
possible de tous les albuminodes cellulaires, en leur conservant un
aspect correspondant leur nature amorphe (cytoplasme), granuleuse
phnomnes
(grains de scrtion, mitochondrics), filamenteuse (ergastoplasme, appareil rticulaire),
etc.
Ces rserves faites sur Timperfection thorique de la fixation et sur

sa nature, nous pouvons envisager pratiquement en quoi elle consiste.
Elle a d'abord pour but de tuer les lments anatomiques, avec une rapidit suffisante pour qu'ils n'aient pas le temps de modifier leur forme
et leur structure.
Elle doit les durcir suffisamment pour leur permettre de rsister, sans
dformation, toutes les manipulations subsquentes (dshydratation,
inclusion, coupes, etc.). il faut bien savoir que le durcissement est une
la plupart des fixateurs actuels duropration distincte de la fixation
:
cissent suffisamment les tissus, mais la rciproque n'est pas vraie et les
anciens liquides durcissants ne sont pas pour cela des fixateurs. C'est
que leur usage tombe de plus en plus en dsutude.

peut tre ncessaire, dans certains cas, de faire suivre la
fixation par un durcissement conscutif.
La fixation doit produire, en mme temps, V insolnbilisation des lments
constitutifs des cellules et des tissus. Il est, en effet, de toute ncessit
que les dtails de structure, conservs par le fixateur, ne soient pas
dtruits ensuite par l'action des liquides de lavage ou les solutions
pour
cette raison
Pourtant,
il
colorantes. Celte insolubilisation peut tre produite par dshydratation,

coagulation et surtout par combinaison chimique du ractif fixateur
les albuminodes cellulaires.
Le lavage des pices, aprs la
avec
fixation, devra tre rgl suivant la

nature de ces combinaisons, d'ailleurs trs mal connues, mais dont la
stabilit et l'insolubilit varient avec les fixateurs.
Certaines de ces combinaisons jouissent aussi de la proprit de se
coml)iner avec certaines matires colorantes. Elles peuvent donc mordancer les tissus et permettre des coloralions caractristiques, qu'un ne
pourrait raliser autrement. Mais elles peuvent aussi tre rfractaires
d'autres colorations.
De ces diffrentes ractions peut rsulter aussi
une vritable
diffren-
ciation optique. En effet, la coagulalion ou la prcipitation du

de la cellule amne des modifications plus ou moins grandes
contenu
dans la
rfrangibilit de ses diverses parties. Il en rsulte que des dtails, invisibles l'tat vivant, parce que leur indice de rfraction tait trs
voisin de celui de l'eau, apparaissent nettement aprs que l'action des
fixateurs a notablement lev cet indice,
suivant la nature de chacun d'eux.
267
mais de (juantils variables
Un tissu bien fix montrera donc des cellules pleines, non

vacuolises, ni gonfles, ni ratatines, mais prsentant beaucoup
de dtails de slructure fine.
Ncessit de la fixation.
nous venons de
pour en
faire
morlem,
jjost
Il
est
superflu, aprs ce
que
dire, d'insister sur la ncessit de fixer les tissus
l'tude microscopique.
la difficult
La rapidit des
des examens
l'tat frais et
altrations
de la colo-
non fixs, en sont des preuves suffisantes.

peut donc dire que la fixation est la jjierre angulaire,
fondement de toute bonne histologie.
ration des objets
On
La valeur des faits observs au microscope

tire dpend entirement des procds de
en
et
le
des conclusions qu'on
fixation.
Si ces
mthodes
ont rellement pour rsultat d'immobiliser la cellule telle qu'elle est

l'tat vivant ou, au moins, d'une fagon adquate et de mettre en vidence
ses parties constitutives, nous pourrons acqurir des notions exactes sur
la structure des tissus et de leurs lments. Si, au contraire, l'action des
fixateurs fait apparatre des prcipits dans le noyau et le cytoplasme,
ces formations artificielles pourront tre confondues avec de vritables
org-ancs cellulaires.
Valeur de la fixation.
qu'il faut faire
Quelle est donc, dans la fixation, la part

artificielles? A la suite d'expriences
sur difi'rents albuminodes, Fischer est arriv
aux productions
excutes in vitro,
admettre que la coagulation du protoplasma est toujours due un phnomne de prcipitation. Chaque albuminoide cellulaire aurait sa figure
de prcipitation et chaque fixateur produirait sa fig-ure de fixation. Les
prcipits obtenus peuvent tre plus ou moins loigns de l'aspect vital
dans certains cas, ils peuvent tre purement artificiels
des lments
et constituent alors des artifices de prparation, dont il faut toujours se
:
dfier.
Les recherches de Fischer ont eu une grande influence et une porte

considrable, mais on peut leur adresser beaucoup de critiques.
Celles-ci ont t trs heureusement prsentes par Mann dans son
admirable ouvrage i. Nous ne saurions trop en recommander la lecture
ceux qui dsirent se documenter sur les phnomnes physico-chimiques qui prsident aux manipulations histologiques.
D'abord, il ne faut pas conclure de ce qu'on observe in vitro ce qui
se passe dans l'intimit des cellules vivantes. Ensuite, la plupart des
lments de la cellule (noyau, centrosome, grains de scrtion, protoplasmes spcialiss) peuvent tre vus l'tat frais, dans certaines conditions, et leur existence ne saurait tre rvoque en doute.
Pour les autres dtails, qui ne nous sont rvls que parles fixateurs,
le meilleur moyen d'en apprcier la valeur est de soumettre les cellules
1,
d.e
histolGQxj, inelhods and theory, Oxford, Clarendon Press,

Voir aussi ce sujet Boites Lee et Henneguy, Trait des mcthodes techniques
Mann, Physiological
190-2.
Vanatoinie microscopique, o" dit., Paris, Doin, 1002.
268
MTHODES GKNKI'.ALES
rnclion de
une
toule
srie de ractifs.
Si le
lsullal est iderili(|ue
dans tous les cas, il est corlain (|ue l'objet rvl prexistait rellement
et ne nous tait invisible qu' cause de ses
proprits optiques. Il reste
savoir si la fixation nous montre cet objet dans son tat naturel ou si
nous ne le voyons jamais que modifi. L'emploi des fixations convergentes, suivant l'expression de Henaut, c'est--dire du plus grand nomltre
de fixateurs possibles, appliqus au mme objet, peut seul permettre de
formuler une opinion sur l'aspect morpbologique rel le plus probable.
Dans
l'emploi des lixalions convergentes il faut, avec Apathy, distingnraux qui permettent d'obtenir une fixation peu
prs homogne de tous les lments et les fixateurs diffrentiels qui
mettent en vidence certains dtails au dtriment des autres.
Remarquons enfin, que le pouvoir de prcipitation n'est pas proportionnel
guer
\es fixateurs
au pouvoir fixateur
l'acide osmi({ue, qui est un fixateur trs puissant
(p. 272) a un indice de prcipitation trs faible. D'autre part, le tannin,
qui prcipite nergiquement tous les albuminodes, n'a aucune proprit
fixatrice. Les fixateurs ne produisent pas tons des prcipits; il y en a
qui donnent des congulations homognes. Nous aurons occasion de
revenir sur ces particularits en tudiant les diffrents agents fixateurs.
Nous pouvons donc conclure la haute valeur de la fixation, pourvu
qu'elle soit accomplie dans certaines conditions bien dfinies, au
moyen d'agents possdant des qualits parliculires.
:
Qualits des fixateurs.

conservei'ait la cellule clans
un
Le lixaleur idal
serait celui
lal identique Tlat
(jtii
vivant, en
gardant ses lments conslitutifs Tintgiîl de leui^s caractres

morphologiques. Nous savons que ce fixateur idal n'existe pas
encore
et que les meilleurs

agents que nous possdons doivent
runir un ensemble de (|ualits ncessaires pour rduire autant
que possible les artifices de prparation.
La
premire qualit d'un bon fixateur

pntration^ au moins en ce qui concerne
est
la
puissance de
de manire
les tissus,
ce
la
que le liquide puisse fixer aussi bien les zones profondes que
couche sujieriicielle. Le tannin est un fixateur di)lorable,
tnalgr son remarquable pouvoir de prcipitation, parce que son

pouvoir de diffusion est trs faible; les cellules ont le temps de se
ncroser avant d'tre atteintes par
Le fixateur
doit produire
le ractif.
une coagulation totale des albumi-
nodes, mais cela ne veut pas dire que la coagulation doive tre
Il faut, au contraire,
que la coagulation soit
en quelque sorte fractionne afin d'viter les contractions. Von
Tellyesniczky a bien montr que, dans les mlanges base d'acide
violente et instantane.
acticiue, qu'il considre
comme
les
meilleurs fixateurs, ce ractif
coagulation totale, en acidifiant les protoplasmes et en

les prcipitant en
partie. Les autres agents qui fout partie du
prpare
la
269
mlauge (acide osmi(|ue, bichromale de potassium, elc.), dilusent

plus lentemenl et n'arrivent au contact des cellules que lorsque
celles-ci ont t tues et en i)arlie prcipites par Tacide actique.
La rapidit d'action d'un fixateur doit donc avoir pour objet de
la prcipitation totale, au
le plus vite possible les cellules
contraire, doit se produire secondairement, de faon ne pas produire de contractions. Pour rsumer d'un mot ces proprits, nous
dirons que la mort des cellules doit tre immdiate et que leur
tuer
coagulation doit tre mdiate. 11 ne faut pourtant pas que la diffusion soit trop leule, sous peine de caus5r des altrations dans
des parties profondes.
L'acidit du fixateur est donc une qualit indispensable. L'acide
la plupart des fixateurs en
actique est l'acide le ])kis employ
les cellules
p. 100. Ce cori)S agit non seulement comme

cliromaline, mais surtout en neutralisant ou acidifiant
renferment de
fixateur de la
En effet, la puissance de coagulation ou de prcipitation

plupart des fixateurs no peut s'exercer qu'en milieu neutre
ou acide; un milieu alcalin la paralyse presque compltement ^
les tissus.
de
la
Uona
et
Golodetz- ont montr que tous
les
bons fixateurs sont des
oxydants acides, qu'ils neutralisent b's proprits rductrices des

tissus,' et qu'ils favorisent ainsi les colorations (}). 271).
Visotonie est une qualit plus discutable. 11 semble que son
importance, invoque
}tar
Sjobring, soit plutt tborique.
En
eiet
liquide, isotonique pour un tissu donn, cessera de l'tre ds le

premier contact et n'atteindra les couclies profondes ([u'aprs
un
11 ne faut pas oublier non

plus qu'une
ou
une
diminution
de concentration peuvent i)roaugmentation
duire une surfixalion de la priphrie des objets, ou nuire la
avoir perdu son isotonie.
rapidit de la diffusion. L'emploi des liquides isoioniques a t

repris un autre point de vue par Dekhuyzen (p. 297) et par
Rubenthaler
(p.
296).
Notons enfin qu'un bon fixateur ne doit pas ratatiner les tissus,
ne pas les noircir ni les rendre cassants et friables, enfin ne pas
gner
les colorations ultrieures.
Pourlaul V.
Bariial.io aurait obtenu de trs bous rsultats liistologiques et

cytologiques (systme nerveux, testicule), avec des fixateurs ulcalvts renfermant
parties gales de chlorure de sodium et de sublim et alcaliuiss par le bicarbonate de soude. Pour obtenir des fixations encore plus fines on ajoute du formol.
1.
Bull, dlia Soc. zool. ital., XIII, p. 198-v>00, 1904 et
Je
XIV,
pas essay ces mthodes.

Unna et Golodetz, Die Bedeutung des Saucrstoll'es
p. 139-1419
205-i>ll, 1905.
n'ai
2.
Studien, XXII,
191-2.
in
der Frbcrei. iJcrmat.
GHAPITHE
VII
AGENTS FIXATEURS
Les agents fixateurs peuvent tre d'ordre physique ou d'ordre
chimique. Nous allons tudier sparment les uns et les autres.
Le froid ne peut exercer une action fixatrice.

durcit les tissus et suspend les altrations cellulaires dues la ncrose
et l'auto digestion. Aux tempratures ne dpassant pas 0, cet agent
ne saurait donc tre qu'un adjuvant, par exemple dans la mthode de
Borrel (p. 281). La conglation des tissus frais parat tre, a priori, un
Agents physiques.
Il
l'augmentation de volume des liquides

qui remplissent les lments et la formation d'aiguilles cristallines ne
peuvent manquer de produire de vritables dlabrements. Son seul
dtestable procd iiislologique
est
avantage
Nous aurons
de ne pas prcipiter les albumines et de ne pas les altrer.

revenir sur cette question propos des procds de
coupes par conglation (p. 329).

La chaleur exerce une action bien diffrente, suivant qu'elle est applique des objets humides ou secs. La fixation par l'eau bouillante peut
rendre des services pour les Invertbrs et pour les recherchs microchimiques. Von Tellyesniczky pense que l'action successive de l'acide
acli(iue et de l'eau bouillante peut donner de bons rsultats, mais cette
mthode ne parat pas devoir se gnraliser. La chaleur sche est un
elle ne peut s'appliquer qu'aux frottis
agent fixateur 1res important
desschs (p. 630).
:
Ceci nous
amne
parler de la dessiccation dont le rle est
et de beaucoup de Protozoaires, Nous

capital dans l'tude du sang
V reviendrons propos de la mthode des frottis desschs (p. 626).
Au point de vue microchimique, cette mthode serait trs pr-
cieuse
si
elle
pouvait tre applique pratiquement aux tissus

elle prsente de grandes difficults tech;
malheureusemement
niques
(p.
365).
ici l'emploi de la narcotisation comme adjuvant de
Ce procd a t employ par Rubenthaler (p. 296) pour les
est d'usage courant (p. 537 et 619) pour les petits animaux
Nous mentionnerons
la fixation.
tissus et
il
aquatiques.
AGENTS FIXATEURS
271
Pour Tlude des lissus, les fixateurs

/igents chimiques.
chimiques so:il prfrables tous les autres. Nousallojis passer en
revue les principaux agents, puis nous tudierons les mlanges
fixateurs les plus employs.
Cristaux rouges trs dliquesAcide chromique (CrO^).

cents, conserver en flacons bien bouchs Tmeri, ou mieux
en solution
100 dans Teau
1 p.
distille.
Son action
fixatrice
ne
solutions trs dilues (0,1 1 p. 100) car, en

solutions plus concentres, c'est un dissociateur puissant (p. 259)
quoiqu'il fixe bien les noyaux. Ce corps est rarement employ
il
seul cause de ses nombreux inconvnients
manque de pn-
s'exerce
qu'en
tration et
produit, dans
il
cytoplasme, des rseaux
le
quelquefois trs rguliers et trs trompeurs;
donne lieu
protoplasmes. Par contre
il
certaines colorations, parce qu'il
la
de chrome dans
il
les
artificiels,
empche en outre
formation d'oxyde
partie de nom-
fait
breux mlanges, dont le type est le liquide de Flemming et dans

lesquels il joue un rle trs important. D'aprs Unna et Golodetz,
il cde facilement de
l'oxygne et, employ avec d'autres acides
qui forment des chromtes solubles avec l'oxyde de chrome mis
en libert par rduction, il augmente la colorabilit des tissus.
Acide actique cristallisable.
Liquide incolore,
cristalli-
sant au
dessous de-f-17. Ractif des plus importants, faisant

tant que fixateur
partie de presque tons les mlanges fixateurs en
de la chromaline et lment acide trs pntrant. D'aprs Unna
et
Golodetz,
il
augmente
des oxydes mtalliques
augmente
la colorabilit
les
et,
empche
contrastes,
la
sparation
mlang avec des acides oxydants,
de tous
les tissus.
Employ
seul (en solu-
100), il met en vidence le noyau des Proau

des examens extemporans, mais ne peut
cours
tozoaires,
servir de fixateur proprement dit, car il conserve trs mal le
tion
aqueuse
cytoplasme
1 p.
et ses
enclaves.
Acide picrique ou trinitrophno.
Petits cristaux jaunes,
qu'on emploie en solution aqueuse sature ou en solution alcoo0,6 p. 100, beaucoup plus
lique ^ Solubilit froid dans l'eau
:
soluble chaud.
Pour prparer
la
solution sature froid, mettre
1. L'acide picrique fait des taches indlbiles sur la laine et la soie. Sur le
linge les taches s"effacent au lavage. Les taches des doigts s'enlvent trs facilement avec une solution de carbonate de lithium. .Jellinek (Z^sc/ir. f. wiss. M'ikr.,
XI, p. 243, 189-2i a montr que ce sel forme avec l'acide picrique une combinaison
trs soluble. On peut proliter ventuellement de cette proprit pour dcolorer
rapidement
les tissus jaunis
par les fixateurs picriques
(p. 348).
272
MTHODES GNRALES
au Tond (un gvimd llacon, bouclu' an lige ou
IVuiicri,
uue
paisseur de un cenlimlre d'acide picrique; verser par-dessus
Teau
d(^
chaude, agiter et laisser reposer au moins douze

heures. Quand on prlve une partie de ce liquide, on la remilace
distille
un gal volume d'eau distille, de manire avoir toujours

une provision de solution sature. Ce liquide est inaltrable.
Eviter de chauffer feu nu les cristaux avec l'eau, cause des
par
proprits explosives de l'acide picrique.

Ne s'en)|tloie seul qu'en histologie vgtale.
En
histologie ani-
male, l'acide picrifjue, qui est un des ractifs les plus pntrants,
fait partie de
mlanges dont le type est le liquide de Bouin (p. 284).
Bichromates.
L'action de ces sels est bien connue grce aux
recherches de Burchardl^ Cet auteur
de strontium
les
noyaux.
de
et
Au
de zinc fixent bien
le
en deux groupes
AzH', Mg) et mme ceux
cytoplasme, mais dtruisent
les divise
certains bichromates alcalins (K, Na,
contraire les bichromates de
baryum, de calcium
bien les mitoses, mais non le cytoplasme.

Burchardt et von Tellyesniczky ([). 282) ont montr qu'on peut
et
cuivre
fixent
corriger ce dfaut par l'addition d'acide actique
et
(ju'on obtient
ainsi d'excellents fixateurs.
Le plus employ de ces sels est le bichromate de potassium

(K-Cr-0'), gios cristaux d'une belle couleur rouge orang, facilement solubles dans l'eau (12,4 |). 100). Celte solution se conserve
bien, de prfrence en flacons l'meri.
Bichlorure de mercure ou Sublim corrosif

Petits ci'islaux blancs trs toxiques, solubles dans
p. 100, l'biillition 54 p. 100), trs solubles
(llgCl-j.
eau ( froid
dans
l'alcool
(33 i>. 100). Pour prparer la solution aqueuse sature froid, on

dissout chaud 10 p. 100 de ce sel et on laisse refroidir. Il se
dpose do belles aiguilles cristallines

au fur et mesure des besoins.
et
on dcante
le liquide clair
Ce corps est un fixateur de premier ordre, mais il est ncessaire

de l'liminer compltement des tissus, ds que la fixation est termine, pour viter la formation de cristaux. Il est bien entendu
qu'aucun objet mtallique ne
doit entrer
en contact avec
les solu-
tions de sublim, sous peine de prcipitation immdiate.

Acide osmique (Os 0'').
Ce corjis devrait tre nomm plus
exactement ttroxyde d'osmium, parce

1.
qu'il
ne possde pas en
Burchardt, Bichromate und Zellkcrn. La Cellule, XII.
p.
.'537,
1897.
AGENTS FIXATEURS
273
de proprits acides et ne fait pas virer le tournesol. Il se

On le vend dans de
prsente sous forme de cristaux jauntres.
renfermant des quantits variant de
petits tubes de verre scells,
ralit
gr. 1
La manipulation
des diflicults [)articuliies. Il est
met sans cesse des vapeurs extrmement irritantes;
gr.
se mfier des erreurs de pesage).
de ce corps prsente en
trs volatil et
il
effet
faut bien se garder de respirer ces vapeurs et de
sV
exposer, car
peuvent dterminer des conjonctivites trs graves ^ Ce corps

est d'ailleurs un oxydant trs nergique; aussi est-il trs rapidement rduit par des traces de matire organique. De ces partielles
ncessit de prendre des prcautions sppour prparer la solution. Le titre babituel est de 1 ou
cularits
ciales
dcoule
2 p. 100;
1 p. lO'O.
mieux
elle
peut tre
comme
encore,
la
faite
dans de Teau
distille
l'indique Bolles Lee, dans de l'acide
Sous
celle dernire
et se prte
on mieux
cbromique
conserve beaucoup
fixation par les vapeurs osmielle se
forme,
parfaitement la
des mlanges chromo-actiques.
On peut
encore, d'aprs Gori, ajouter la solution aqueuse une trs petite
quantit de permanganate de potassium, sufiisante pour produire
ques
et la fabrication
une coloration
On
renouvelle cette quantit si la solution

peut enfin, d'aprs Pintner et Mayer, ajouter
100 cm^ de solution aqueuse 10 gouttes de solution de sublim
se dcolore.
rose.
On
5 p. 100.
On
peut employer sans inconvnient un flacon en verre blanc, pourvu

bien boucli Tmeri, 3olles Lee a montr que la lumire
ne rduit pas la solution, pourvu qu'on la tienne l'abri de la poussire.
L'essentiel est de nettoyer le flacon avec le plus grand soin, d'abord
avec une solution de permanganate de potassium, puis avec de l'acide
azotique et enfln de l'eau distille. On nettoie aussi le petit tube qui
renferme l'acide osmique en enlve l'tiquette et toute trace de colle
par un lavage minutieux. On donne alors un trait de lime sur le tube,
on le laisse tomber dans le flacon, on bouche et on agite pour briser
le tube. Ds que ce rsultat est obtenu, on ajoute la quantit de liquide
les dbris du tube restent au fond du flacon. L'acide osmique
voulue
se dissout assez lentement froid, mais il faut bien se garder d'employer de l'eau cliuude qui pourrait le dissocier.
qu'il
soit
Les solutions d'acide osmique doivent tre manipules avec des

Non seulement les vapeurs qu'elles mettent
soins particuliers.
1. Les avis sont

partages ce sujet. Mais, tout en tenant compte des idiosyncrasies, on fera bien de prendre des prcautions, parce que l"aition de ce rcactit'
sur les yeux ne se fait pas sentir immdiatement, comme pour d"autrcs substances,
telles f[ue le formol
M. Laxgeron.
ou l'ammoniaque, dont
les
vapeurs sont intolrables.
18
MTHODES GNRALES
274
sonl dangereuses, mais il laut les prserver avec soin de la poussire qui les rduit trs rapidement, avec formation d'un
prcipit
noir. Comme c'est un prodiii[ 1res coteux, on a intrt
emp-
cher autant que possible cette rduction qui rend les solutions
inutilisables. Il faut donc essuyer avec soin le pourtour du bouchon et du goulot avant d'ouvrir la bouteille, ne jamais y reverser
un liquide dj employ,
mme
})our fixer par les vapeurs, et
ne
jamais y puiser avec une pipette.
osmique ne forme pas de
L'acitle
sels,
mais seutement des composs
d'addition ou d'oxydation. Ce n'est pas un lectrolyte et les composs

d'addition (ju'il forme avec les tissus, ne sont pas lectrolysables; aussi
peut-on dire avec Mann que ce corps tient, parmi les composs mtal-
mme place que l'aldhyde formique parmi les composs orgaGomme lui,
fixe sans prcipiter, c'est--dire d'une toute autre
liques, la
niques.
manire
il
({uo les sels mtalliques.
11
lue rapidement les cellules et lixe
cytoplasme, mais moins bien le noyau. Il donne aux lments

une apparence homogne, qui nuit la bonne diffrenciation optique
des lns dtails de structure. De plus, il a grande tendance se rduire
dans les tissus et les noircir, surtout Iors([u'iIs renferment beaucoup
de cellules adipeuses. Son plus grand dfaut est d'tre trs peu dilfusiblc, et par consquent trs peu pntrant, de sorte que les couches
superficielles des pices sont surflxes (p. 280) bien avant que le ractif
n'ait pntr dans la profondeur. La surllxalion donne aux lments
des couches superficielles une grande fria!)ilit et une apparence
bien
le
homogne.
Ces inconvnients se prsentent surtout avec la solution aqueuse,
aussi l'emploie-t-on trs rarement isolment. On l'associe gnralement
aux acides chromique et actique dans les mlanges du Ivpe Flemming
(p. 280).
Au contraire, Ttat de vapeurs, c'est un llxateur parfait, mais

ne convient qne pour des objets trs petits ou trs minces, tels
que les Protozoaires ou les frottis de sang. Pour le faire agir sous
il
cette forme, le
col,
bouch
mieux
Tmeri
est
(fig.
de prparer un bocal large goulot sans

135), dont on garnit le fond de billes de
verre, pour augmenter la surface d'vaporalion. Sur ces billes, on

verse quelques centimtres cubes de solution 2 p. 100. Pour
des Protozoaires en suspension dans une goutte d'eau, on pose
pendant 30 40 secondes la lame renverse sur l'orifice du bocal.
Pour
les
frottis
humides ou desschs, on procde plus simplela lame tout entire dans le bocal qu'on
L'exposition dure de 30 secondes
ment, en introduisant
ferme immdiatement
1 minute.
Alcool thyliqiie.
Ce corps ne peut
servir
de fixateur
AGENTS FIXATEURS
275
l'lat isol que sous orme d' alcool absolu K Aux autres concentratious, l'action dshydratanle Temporle sur raction fixatrice et pro-
duit des contractions nergiques. Au contraire, Talcool bien absolu

peut donner des fixations excellentes, surtout pour le systme
nerveux.
Dans
l'alcool
siste
Il fixe
aussi trs bien les frottis desschs (p. 630).
bonnes maisons de produits chimiques, on trouve de

suffisamment absolu. Un bon moyen de s'en assurer conles
verser quelques gouttes de cet alcool dans
demi plein de tolune ou de xylol;
louche,
ne
mme
s'il
trs lger, Talcool est absolu.
signifierait rien car le xylol se
mlange
un tube
essai
ne se produit aucun
L'preuve contraire
avec un excs
trs bien
On peut encore employer

carbure de calcium, qui dgage de l'actylne au contact de la
d'alcool 90, sans produire de trouble.

le
moindre trace d'eau.
On peut arriver dshydrater de l'alcool insufPisamment absolu, en

l'additionnant d'une certaine quantit de sulfate de cuivre calcin. Ce
dernier existe aussi dans le commerce, mais il est bon de le calciner
de nouveau, au rouge, dans une capsule de porcelaine ou un tt de
brassant avec un fil de fer ou de cuivre, jusqu' ce
poudre bien blanche. Sous cette forme, le sulfate de
extrmement avide d'eau, dont il s'empare en bleuissant. On rptera donc le traitement de l'alcool, par addition de poudre
calcine et dcantations successives, jusqu' ce que le sulfate de cuivre
ne bleuisse plus.
terre poreuse,
en
le
(|u'on obtienne une

cuivre est un corps
On ne
saurait trop rpter
que
la fixation })ar l'alcool
seul est
d'un emploi dlicat sauf pour la grosse anatomie vgtale. L'oubli

de ce principe est trop souvent la cause de trs mauvaises fixations.
On
ne tient pas compte de ce que

or.
p. 100 d'eau
ferment environ 80
la
plupart des tissus ren-
on n'emploie pas une

grande quantit d'alcool, le titre de ce dernier baisse immdiatement et, au lieu d'une fixation vritable, on obtient simplement
une dshydratation, plus ou moins complique de macration.
:
si
Lorsqu'on emploie l'alcool bouillant, il tant opi'er au bainmarie (l'alcool thylique bout 4- 785) et avec prcaution,
cause de l'infiammabilil des vapeurs.
D'aprs Kittsteiner-, on pourrait employer l'alcool dnatur par
1. iâ fixation par des alcools de concenlratiou croissante, trs
employe par les
anciens liistologistes, est tout au plus bonne pour conserver leur forme aux objets
destins aux recherches de systmatique.
2.
Kittsteiner. Untersuchungen ber die Einwirkuug
des denaturierten
Alkohols auf tierische Organe und seine Vorwendbarkeit in der mikroskopischer
Technik. Zlschr. f. miss. Mikr., XXVI. p. 191-192. 1909.
MTHODES GNRALES
76
la pyridine, dans les ninies conditions que Falcool 90'\ c'est-dire comme constituant de mlanges fixateurs et comme liquide
de lavage, mais jamais comme fixateur unique, parce que les bases
pyridiques contractent les noyaux et en dissolvent certaines parties. L'acide actique neutralise cette action.
Alcool mthyliqiie.
des
frottis
desschs
Actone.
{\).
Ractif
trs
important dans
la
technique
-411 et 630).
Ce corps
i)eut
constituer, dans certains cas,
un
fixateur assez passable pour les frottis desschs (p. 411) mais il
n'est pas recommander pour les tissus, car il cause encore plus
de contractions que
tation (p. 303).
nom
un agent de dshydra-
Ce corps est un gaz, dont la solution aqueuse

de formaline ou de formol. Toutes les fois que nous
Formaldhyde.
porte le
l'alcool. C'est surtout
parlerons de formol pur, nous aurons en vue

ciale 40 p. 100.
la
solution
commer-
Le formol a pris en technique une importance considrable

cause de son prix peu lev et de la facilit de son emploi. 11 a
mme t Tobjet d'un vritable engouement, dont on tend d'ailleurs revenir.
On
notamment abus de
ce produit
comme
liquide conservateur, mais on n'a pas tard s'apercevoir qu'il

prsente, dans certains cas, les plus graves inconvnients (p. 432).
Comme
fixateur,
il
joue un rle important cause de son pou-
voir coagulant et de sa remarquable puissance de pntration. 11

importe de dire que ces proprits ont t signales pour la pre-
par un Franais, rillat, en 1892^ et non par Blum,

publication est postiieure d'une anne ^. Ce corps a fait
depuis Tobjel d'un grand nombre de travaux, parmi lesquels il
convient de citer ceux de Hermann" et de Sjobring'.
mire
dont
fois
la
Le formol du commerce
est
un
liquide incolore, mettant des
mais
vapeurs
beaucoup moins dangereuses que
celles de l'acide osmique. 11 est fort dsagrable de manipuler des
pices imbibes de formol, cause des violents picotements qu'on
trs
irritantes
ne tarde pas ressentir dans, les yeux l'action sur la muqueuse

pituitaire est peut-tre moins sensible, mais ])lus durable, et l'olfac:
tion peut finir par se trouver sensiblement diminue.

Acud. des Se, CXIV,
1.
C.
2.
Ztschr.f.
3.
Anot. An::., p.
li.
Il
faut viter
p. 1278, 1802.
"
4.
Sjobrins:,
p. 273, 1900.^^
loiss.
Mikr., X, p. 313, 1893.

112, 1893.
Ueber das Formol,
als
Fixirungs Flussigkcit. Anat.
An:;.,
XVII,
277
AGENTS FIXATEURS
aussi de mellre les doigts en contact avec les solutions renfermant
du formol, car lpiderme se trouve rapidement fix

manire fort dsagr^âble.
Il faut
adopter une convention pour formuler le
et
durci d'une
titre
des dilu-
pour nous, le pourcentage visera toujours la solution commerciale 40 p. 100. Ainsi on prparera une solution 5 p. 100
tions
en mlangeant o cm-^ de formol avec 95 cm"^ d'eau. Quand on relve

une formule dans un mmoire, il faut avoir soin de s'assurer si la
teneur est indique en formol commercial ou en aldhyde formique. Exemple
formol 4 p. 100 veut dire mlange de 4 cm-^
de formol avec 96 cm-^ d'eau, tandis que formaldhyde 4 p. 100

veut dire mlange de 10 cm^ de formol avec 90 cm=^ d'eau. Dans
le
premier cas on prend
p.
2i de formol, dans
le
second cas
1 p. 9.
!.a
solution commerciale prsenle quelquefois une altralion particumanifesle par une apparence laileuse et par la formation
lire, qui se
d'un prcipit blanc, plus ou moins abondant, de paraformol. Le froid

semble jouer un grand rle dans ce phnomne. J'ai vu des flacons
entiers, rapports par Nevcu-Lemaire de son exploration des hauts plateaux de Bolivie, compltement transforms en une masse blanche
glatineuse. Personnellement, j'ai observ que, pour une mme solution, des portions exposes aux froids assez considrables des hivers
jurassiens taient partiellement transformes en paraformol, tandis que
d'autres portions, conserves dans une cave, restaient inaltres.
Thoriquement, la formaldhyde est un non-lectrolyte, par consquent incapable de former des sels, mais pouvant donner des composs d'addition. Elle agirait comme rducteur. En pratique les choses
se passent autrement, parce que les solutions renferment toujours de
Pacide formique, si bien que Sjbring considre en dlinitive le formol
comme un oxydant, car son action est trs semblable celle de l'acide
osmi(iue.
Le formol seul, pur ou dilu, est un mauvais fixateur cytologique il

produit un certain gonllement des tissus et vacuolise les cellules ou
l)ien leur donne l'aspect surfix, homogne, vitreux, qu'on observe la
priphrie des objets traits par l'acide osmique. EnOn, il rend trs
difhcile la coloration par Posine des lments acidophiles et il diminue
beaucoup les contrastes colorants entre le noyau et le cytoplasme.
Pour attnuer ces inconvnients, on peut, d'aprs Mann, neutraliser
:
sodium (employer le
papier de tournesol comme indicateur), et surtout employer, comme
lifiuide de dilution, la solution physiologique (sauf pour les yeux entiers
qui exigent la dilution dans l'eau pure, sous peine de se contracter).
l'acide formicjue par des traces de carbonate de
Pratiquement, le formol, mme dilu dans Teau ordinaire, peut

rendre d'immenses services en voyage ou en exploration, lorsqu'on
n'a pas d'autres fixateurs sous la main. Il conserve suffisamment
MTHODES GNRALES
278
pour ])ei'iietlre de bonnes tudes lopographiques, ainsi

recherche des Protozoaires parasites. Les pices conserves
les tissus
la
que
dans
l'alcool,
dans
mmes conditions, sont gnralement macLa meilleure dilution est 5 p. 100, c'est-partie de formol pour 20 jtarties d'eau pure ou
les
res et inutilisables.
dire renfermant 1
physiologique.
Dans
les
organes
souvent des pren imposer pour du pigment.

de traiter les coupes par la
trs vasculariss, le formol produit
cipits noirtres trs gnants, qui peuvent

Pour s'en dbarasser, Verocay^ conseille
potasse alcoolique trs dilue
Potasse (en pastilles)

Alcool 80
p.
100
1
.
25
cm-^
pendant 10 minutes. Laver deux fois dans Peau, cin([ minutes chaque
passer dans Palcool 80" pendant cinq minutes, puis laver de
nouveau. Aprs ce traitement, les hmaties se colorent trs bien par
fois,
Posine.
Le formol fait partie d'un grand nombre de mlanges fixateurs.

ces divers titres, c'est un des ractifs les plus importants de la
technique moderne. Nous tudierons plus loin
comme
1.
J.
(p.
452) son rle
liquide conservateur.
Verocay
Beseitigung der Formol-Niederschlage aus
Schnitten, Centralbl.
f.
aihj.
Pathol.
u.
pathol. Anat.,
XIX,
mikroskopisclieii
p. 769-774, 1908.
CHAPITRE
VIII
MLANGES FIXATEURS
Le bref
ex)3os de la thorie de la iixalioii et des proprits des
principaux agents fixateurs, nous a montr qu'aucun de ces derniers n'est capable de runir k lui seul les qualits que doit possder un bon fixateur (p. 268). Dans la technique moderne, il est
les tissus, d'employer un agent
presque exclusivement de mlanges,
combins de manire complter l'action d'un fixateur par un
donc
trs
du moins pour
rare,
fixateur unique.
On
se sert
autre, ou contrebalancer les actions nuisibles.

diffrentes
les
cellules
cellules d'un
tissu
et
De
les divers
cette manire,
lments de ces
peuvent tre conservs aussi parfaitement que
iossible.
Je crois prfrable de classer ces mlanges par grou})es, caractriss par l'lment le plus actif.
1.
FIXATEURS
BASE D'ACIDE OSMIQUE
Pour obvier aux inconvnients des solutions d'acide osmique,

on
en compltent et en
Les principaux sont les acides actique et
chromique el le chlorure de platine. Il faut en exclure a priori les
agents rducteurs tels que l'alcool. L'acide actique ralise l'acia tent d'y adjoindre d'autres ractifs qui
modrent
l'action.
du milieu, ncessaire pour une bonne fixation fp. 269): il

augmente la })nlration, lixe la chromatine nuclaire et attnue
la surfixation du cyto}lasme, tout en amliorant la diffrenciation
dit
optique. L'acide chromique contribue la fixation de la chromatine

et diminue le noircissement des tissus. Le chlorure de j)latinc
possde un pouvoir
comme mordant
safranine et
le
coagulant considrable
nergique pour
bleu de toluidine.
et,
en outre,
les colorants basiques, tels
agit
que
la
.METHODES G KNEIIALKS
280
nombreux mlanges qui ont t proposs, nous ne

retiendrons que ceux de Flemming, d'Hermann et de Lindsay
Parmi
les
Johnson.
Mlange de Flemming ou chromo-aclo-osmique.

deux formules,
existe
Il
Nous ne
donnerons que
dites
celle
mlange fort
du mlange
comme
d'excellents rsultais. D'ailleurs,
l'a
et
faible.
mlange
fort^
qui
fournit
montr Carnoy,
les
proportions peuvent varier un peu sans inconvnient. Pour viter

la rduction de l'acide osmique ])ar l'acide actique, on fait
part
les deux solutions suivantes
:
Solution A. Acide ctiromi(iue
Eau
\).
100
11
distille
Acide aelique cristallisable

Solution B. Acide cliromique
p. 100
Acide osmique cristallis
100 cm^.
2 gT.
Au moment de
Si
vol.
l'emploi, on mlange 4 parties de A avec une partie de B

on dsire un fixateur plus faible, on ajoute 4 y parties d'eau distille.
Le mlange de Flemming est un lixateur cylologique de premier

un ractif universel. Aussi ne convient-il pas
ordre, mais non

le travail
pour
courant des recherches topographiques ou patho-
logiques.
ne peut tre emplov que pour de trs petits objets ou de

fragments d'organes. En effet, son pouvoir de pntra-
Il
trs [tetits
osmique, qui en est l'agent fixateur le

gure sentir son influence au del de 5
G couches de cellules. Aussi les fragments doivent-ils avoir au
plus 2 3 millimtres d'paisseur. Malgr ces prcautions, la partie
tion est trs faible
actif,
plus
ne
l'acide
fait
vraiment utilisable
et
bien fixe est trs faible, cause des phno-
mues de surfixation ou action priphrique qui
se produisent
couches superficielles Ceux-ci se manifestent, comme

nous l'avons dit p. 274, par une apparence homogne et vitreuse du
contenu cellulaire, trs nuisible la bonne diffrenciation optique.
dans
les
Les opinions sont encore partages sur la cause de cette surtixation

nous ne pouvons discuter ici cette question qui est traite
:
fond dans les ])ublications de
Fischer^, lAiann-, von Tellyes-
niczky ^ etc.
1.
Bau
2.
3.
Anat.
Anzc'ifjcr, IX, p. &l, 1891 et X, p. 769, 1895.

Fixierung, Fiirbung nnd
des Proloplnsmas, 1899.
methods
and
Physiological hislology,
theonj, Oxford, Clarendon Press, 1902.
EncyklopCidie der mikroskopischen Tec/inik, 2'- dit., 1910; article Fixation.
MLANGES FIXATEURS
Le volume du
menls
et
et la
281
liquide doit tre environ 4 fois celui des tiagla fixation de vingt-quatre heures au moins,
dure de
de quaranle-liuil heures au plus. Pour
le
lavage des pices ainsi
fixes voir p. 294.
Le mlange de Flemming ne permet pas de bonnes colorations

par les laques d'hmaloxyline. Par contre, il se prte trs bien
la safranine et des couleurs d'aniline, par exemple le
remploi de
Irichromique de Cajal
Mlange de
Ce mlange
(p.
126).
Hermann
on plalino-acto-osmiqae.
de celui de Flemming- en ce que l'acide ctiromiqiic est reinplac par du clilorurc de plaline. On prend par exemple
dilTre
Ghlonire de plaline a 1 p. 100

Acide actique cristallisable
Acide osmique 2 p. 100
15 vol.
1
Il
est bon de ne pas prparer la fois de grandes quantits de ce
mlange. Le mode d'emploi est le mme que pour le Flemming.
La valeur de ce liquide a t trs conteste par certains auteurs.
ses deux principaux drivs sont les
Aussi a-t il l souvent modifi
mlanges de Borrel et de Lindsay Johnson.
:
Mlange de Borrel.
Acide osmique
Chlorure de plaline
Acide chromique
Eau
On
fixe
heures.
2 gT.
2
3
20
350
distille
de trs petits fragments la g:lacire, pendant vingt-quatre

colore au trichromique de Cajal.
On
Mlange de Lindsay Johnson.

Bichromate de potassium 2,5
Chlorure de platine 1 p. 100
Acide actique ou formique
p.
100
....
70 vol.
10
15
5
On n'ajoute ce dernier ractif qu'au moment de l'emploi, pour viter la

rduction de l'acide osmique.
Ce dernier mlange est trs vant par Lee et Henneguy. Ce serait un
des meilleurs ractifs pour lixer le cytoplasme et ses inclusions.
Pour
fixer, la
tous les fixateurs de ce groupe, le
dure de
des pices fixes sont
volume des
mode de lavage,
exactement les mmes.
la fixation, le
objets
la colorabilit
MTHODES GNRALES
282
II.
FIXATEURS
BASE DE CHROME
Nous savons que Tacide cliromiquc
et les bichromates, emjiloys

ne constituent pas (Je bons fixateurs ;p. 271 et 272). Mlangs
avec Tacide actique, Facide osmique ou le bichlorure de mer-
seuls,
cui'e, ils
on ne
donnent
la facilit
Tous
les
meilleurs ractifs que Ton connaisse. Jamuis

substances rductrices, cause de
doit leur adjoindie de
les
lesquels
il
avec laquelle ils cdent une partie de leur oxygne.

mlanges d'acide chromique et de bichromates dans
entre de Talcool ou du formol (liquide de Perenyi ', de
Graf, etc.) doivent tre proscrits
comme
irrationnels.
Mlange bichromate de von Tellyesniczky.

seul qu'il soit utile de signaler
Ijichromate de potassium
Acide acti({ue cristallisable
Eau
constitue
Il
gr.
cm
100
un
conserve
la fois le
actique).
On
C'est le
'
excellent fixateur trs ralionnel (p. 268) qui
cytoplasme (bichromate) et les noyaux (acide

peut y plonger des objets petits ou moyens, mais ne
on
dpassant pas autant que possible 5 millimtres d'paisseur
les y laisse un ou deux jours ou mme plus longtemps sans incon:
On lave Teau courante pendant

et
on passe lentement par les alcools
heures
(p. 29i)
vingt-(|ua[re
en commenant })ar rab'ool 15 p. 100. Les rsultats sont anavnient, suivant leur volume.
logues ceux du liquide d^ Zenker. Les objets supportent peu

de vue, les fixateurs chromoprs toutes les colorations ce point
actiques tiennent le milieu entre les mlanges osmis et les
:
ce sont ces derniers

liquides base de sublim ou de formol
les plus belles et les plus faciles.
les
colorations
qui permettent
:
III.
FIXATEURS
BASE DE SUBLIM CORROSIF
On
em}loie rarement la solution aqueuse pure. 11 est prfrable

d'y ajouter au moins une certaine quantit d'acide actique.
Je rappellerai, pour mmoire, que le mlange de Perenyi doit tre rang
les formules surannes et irrationnelles. Il tait en effet compos d'alcool,
d'acide nitrique et d'acide chromique
ces corps ragissent entre eux. do telle
sorte que, tinalement, on n"a plus qu'un mlange d'ther azotique, d'oxyde de
chrome, d'alcool et d'acide d'azotique. Autrement dit, c'est un alcool nitrique, trs
1.
parmi
mdiocre fixateur (Mayer).
MLANGES FIXATEURS
283
Sublim actique.
Solution aqueuse satare de sublim
Sous
celle
forme
le
^,
subiim
est
95
o
un excellenl
cni-^
lixaleiir
peu
prs universel, convenant trs bien pour tons les travaux courants.
Il
pntre vite
et
ne gne pas
les colorations,
mais
il
ne faut
longtemps, sous peine de rendre les objets

friables
il faut donc les retirer ds
qu'ils ont pris jusqu'au
centre une teinte blanchtre opaque, indiquant qu'ils sont
pas
le laisser
agir trop
:
pntrs.
Sublim alcoolique de Schaudinn.

Solution aqueuse sature de sublim
Alcool absolu
vol.
'Ce ractif joue un rle trs important dans l'tude des Protozoaires.
l'emploi froid, ou chauff 60"-7.
Je ferai deux remarques son sujet
on peut le prparer avec de
Tacool 90, les rsultats sont exactement les mmes. En outre, ce
On
allemande, n'est pas suprieur, aucun

point de vue, aux mlanges de Bouin et de Duboscq-Brasil (p. 284 et 285).
fixateur, trs vant par l'ccole
1. C'est dessein
que je n'indique pas, dans le texte, la formule du ml-oif/e
de Dorainici au sublim iod et formol. Ce lxateur a donn d'excellents rsultats
entre les mains de Dominici et de ses lves. Personnellement je ne le trouve
pas suprieur aux formules courantes et je lui fais le grand reproche d'tre
et instable, puisqu'il est constitu par deux corps chimiquement

incompatibles, incapables de donner naissance des composs stables et dfinis.
Aussi, sans nier la valeur do ce mlange, je n'eu conseille l'emploi ni pour les
dbutants, ni pour le travail courant. D'aprs Doiniiiici et son lve Rubens
Duval voici comment ce liquide doit tre prpar
une solution de sublim
sature 40 (obtenue en refroidissant 40", puis dcantant la solution sature
aux environs de 60'') on ajoute goutte goutte, et en agitant, de la teinture d'iode,
jusqu' teinte jaune orang, sans toutefois produire ni un prcipit, ni une teinte
rouge. Il se forme ainsi, d'aprs les auteurs, de l'iodo-chlorure de mercure iode.
On ajoute alors, 100 volumes de cette solution. 12 volumes de formol 40 p. 100.
Au besoin verser quelques gouttes de teinture d'iode si le liquide a trop pli ce
mlange ne se conserve pas, il faut le prparer au moment de l'emploi. Les
pices y restent de 2 4 ou 1-2 heures. On peut acidifier par p. 100 d'acide
irrationnel
actique. Laver l'alcool ou l'eau et inclure le plus tt possible.

Au fond, on ne connat pas la composition du mlange et je doute qu'il y reste
du sublim, car ce corps, sous l'action de l'iode, donne du biodure de mercure,
soluble dans un excs de ractif, de l'iodochlorure de mercure, compos mat dfini,
et du chlorure d'iode, soluble dans l'eau en la colorant en jaune. Peut-tre ce
dernier corps joue-t-il une rle dans la fixation.
Consulter ce sujet
Doniinici, Sur un i)rocd de technique histologique
appliqu l'tude des cellules conjonctives. Folia hxmatoloi/ica, II, p. 219-226,
1905.
Rubens Duval, Cytologie des inflammations cutanes. Thse de la Fac. de
:
rad. de Paris, lOOS. Cf. p. 15-18.
METHODES GENERALES
284
Mlange de Gilson.
On
dissout du sublim saturation dans
le-
mlange suivant
Alcool absolu

Chloroforme
Ce fixateur
des objets
est
trs
un dos plus pntrants

difficiles
fixer
',
(cls
([ui
vol.
existent et convient pour

les
que
ufs de Nmatodes
{Ascaris, p. G06,\
Mlange de Zenker.
Bichlorure de mercure
Bichromate de potassium
Sulfate de sodium
Eau
5 gr.
100 cm-^
5
2,5
1
distille
Acide acliiiue (ajouter au
moment
de l'emploi).
Ce ractif, trs vant, convient assez bien pour le travail courant.

Personnellement, je ne le trouve pas suprieur au Bouin ou au Tellyesniczky et il prsente, en outre, l'inconvnient d'exiger un lavage soigneux et prolong, d'abord l'eau pour liminer le bichromate, puis
l'alcool iod pour liminer le sublim.
Sa vogue est probablement due ce qu'il est une anilioralion du
vieux liquide de MiUer, devenu par trop insuffisant et dmod, mais
dont l'emploi est extraordinairement enracin.
Pour
le
mode d'emploi de
fixation, se reporler
lY.
ces mlanges
aux pages 288 el 29i.
FIXATEURS
et
pour
le
lavage aprs
BASE D'ACIDE PICRIQUE
Nous savons que Tacide picrique seul, en solution sature,

aqueuse ou alcoolique, n'est pas uu bon fixateur des tissus animaux, bieu qu'il possde une grande puissance de pntration et
de prcipilatiou. Aussi l'emploie-t-on toujours enmlauge.
Picroformol de Bouin.
Solution aqueuse sature d'acide picrique.
Formol 40 p. 100
30 vol.
10
liquide, extrmement ])ntrant, peut tre considr comme

fixateur universel. A mon avis, il peut convenir ])our toutes
Ce
un
1. Dans ce but, on peut employer le mlange de Carnoy ou de van Geliuchten,

qui est galement un fixateur, des plus pntrants
:
Chloroforme
Alcool absolu
3 vol.
6
1
Ml'XANGES FIXATEURS
mme
sortes de travaux,
emploi
pour
est des plus faciles
les
285
recherclies de cytologie.
Son
parce qu'on peut y plonger des objets
un temps quelconque (3 jours

au moins, 8 jours au plus d'aprs P. Massonj. En outre, il ne
ncessite pas de lavage particulier aprs la fixation (voir p. 271,
assez volumineux et les y laisser
note 1, et p. 348, procd rapide de Jellinek pour Flimination).

Il suffit de
transporter les pices dans Talcool 90" qu'on change
deux ou trois fois (p. 295). C'est le fixateur que je recommande le

plus chaudement pour Tusage courant. Avec lui, les dbutants
n'auront jamais d'insuccs.
Mlange de Duboscq-Brasil.
Ce mlange
nomme
se
encore Bouin alcoolique, hquide de
Bouin-Duboscq, ou de Brasil.
On peut dire que ce mlange complte heureusement celui de

Bouin, en lui donnant des qualits encore plus pntrantes. Aussi
convient-il parfaitement, d'une part pour les frottis humides
(p.
173). d'autre part
pour
les objets difficiles fixer, tels
que
les
Arthropodes ^
150 cm'.
00
Alcool 80
Formol 40 p. 100
Acide ocliquc cristallisablc
Acide picrique
Mlanges au sublim
15
t
gr-
et l'acida picrique.
Ces mlanges, prconiss d'abord par Mann et RabI, puis par Branca,
Bouin, etc., sont aussi d'excellents fixateurs universels.
Mlange de Mann.
Bichlorure de mercure
Eau
2,5 gr.
100 cm^
bouillante
Aprs dissolution, ajouter acide picrique.
Au moment
de l'usage, ajouter formol.
...
gr.
20 cm-'
On
peut lxer dans ce liquide des objets assez volumineux, pourvu

ne soient pas trop pais ils peuvent y rester plusieurs jours. On
lave ensuite l'alcool iod (p. 294) pour liminer la fois Facide picrique
et le sublim.
qu'ils
Mlange picronitique de Mayer.
Eau
distille
Acide azotique 25
Acide picrique
p.
100
100
5
q.
cm3
s.
pour saturer.
1. Pour
les travaux trs dlicats, Bouin et Duboscq recommandent d'viter
l'emploi de l'alcool absolu. On passe de l'alcool 00" d'un mlange parties
absolu et do chloroforme, puis au chloroforme pur. On imprgne
d'alcool
gales
de paraffine basse temprature et on enrobe dfinitivement dans la paraffine dure.
286
MKTHODES GNRALES
Ce mlange
est destin
remplacer Tancien mlange picro-sulfurique

rsultats au moins aussi beaux et possde
l'avantage de ne pas former de ciistaux de sulfate de calcium, dans les
organismes renfermant du carhonale de calcium. Il convient surtout
pour les Arthropodes, mais, ninie ce point de vue, ne prsente pas de
supriorit sur le mlange de l)u!)osc(i-Brasil. Ce dernier, grce la
prsence de l'acide picrique pntre trs bien la chitine.
<le
11
Kleinenberg.
donne des
FIXATEURS
V.
Le formol
est
BASE DE FORMOL
rarement employ seul,
comme
fixateur hislolo-
gique, car il gonfle et vacuolise les cellules. Pourtant il convient

trs bien pour Ttude du systme nerveux central, sous forme de
solution 10 p. 100.
Comme ce corps est
un puissant rducteur, il ne faut jamais le

oxydants tels que l'acide chromique. Les
principaux mlanges au formol ne sont autre chose que des
mlanges picriques (liquides de Bouin, de Duboscq-Brasil, de
Manu, etc.). Mentionnons encore lalcool-formol (|ui convient trs
mlanger
des corps
bien pour
le
systme nerveux
Alcool
Formol
Vl.
9U vol.
100
FIXATEURS
Nous savons que
la
658)
Oi)
a 40 p.
10
BASE D'ALCOOL
l'alcool diffrencie
trs
mal
le
noyau
et le
274) parce qu'il se comporte comme rducil

prsente l'avantage de ne pas agir chimiquecellule, mais seulement comme dshydratant; il
cytoplasme (voir
teur. Par contre,
ment sur
(p.
p.
ne modifie donc pas
la colorabilit
des lments cellulaires.
Il
se
comporte ce point de vue comme l'alcool mthylique, l'actone

et l'ther. Ces deux derniers ne constituent pas proprement
parler des fixateurs.
Nous savons que
l'actone n'est qu'un agent

dshydratant. Quant l'ther, on ne peut l'employer seul cause
de sa trs faible solubilit da:;s l'eau. Associ l'alcool (alcool-
ther)
(p.
il
630),
beaucoup.
peut convenir pour la fixation des frottis desschs

mais non pour celle des lments frais qu'il contracte
CHAPITRE
IX
CHOIX D UN FIXATEUR
Je m'efforcerai, dans ce chapilre, de guider le choix du dbuLe travailleur exerc counal les fixa leurs qui conviennent
lant.
le mieux chaque cas, mais le dbutant est toujours dsorient

au milieu de ces multiples formules. Bien que j'en aie rduit
considrablement le nombre, j'ai t oblig de mentionner certains mlanges clbres, dont Temploi est conseill dans beaucoup
d'ouvrages
et
Aucun de
qui doivent (igurer dans un prcis de technique.

ces mlanijês ne fixe iâlement bien toutes sortes
Le liquide de Bouin lui-mme, qui
d'objets.
est
pourtant
le
type
du
fixateur universel, ne convient gure pour l'histologie vgtale et fixe assez mal le rein et le testicule des Mammifres. Le
choix du fixateur dpendra donc de la nature de

qu'on se propose.
Le dbutant, qui veut se familiariser avec
l'objet et
la
du but
mthode des
coupes et tudier topographiquement toutes sortes d'organes,

devra se servir uniquement du mlange de Bouin. Par ce moyen,
il
sera sr de n'avoir
aucun insuccs
et d'obtenir des pices tou-
jours suffisamment fixes pour y retrouver
les dtails histologi-
ques essentiels.
En
cas \irrjence ou en voyage, si on n'a pas de liquide fixala main, il faut employer le formol 5 p. 100, dans
teur sous
lequel on peut laisser indfiniment les pices, mais jamais l'alcool.

En effet, le formol donne toujours des rsultats utilisables tandis
que
1.
s'il n'est
pas em])loy en grande quantit, macre
rend toute tude histologique impossible ^
l'alcool,
tissus et
C'est tout le contraire
systmalique.
formol
et
s'il
s'agit de la conservation morpholofji^jue pour l'tude

loin (p. 152) qu'il faut alors rejeter absolument le
Nous verrons plus
n'employer que
les
l'alcool.
MKTHODES GENERALES
288
Lorsqu'on esl un peu familiaris avec la mlliode des coupes,

on peut employer tous les fixateurs en les adaptant aux divers
genres de tissus et de recherches. Nous pouvons diviser ces
recherches en
trois
groupes.
d'histologie gnrale, (pion peut encore nommer
travaux topographiques. On employera le mlange de Tellyesniczky (p. 282), le sublim actique (p. 283), le mlange de Zenker
1.
mManges au sublim-formol-acide picrique (p. 285)

mlange de Houin (p. 284).
11 faut
Travaux cytologiques.
distinguer ici les tissus
284), les
(p.
et
Travaux
surtout
2.
le
parenchymateux ou facilement pntrables (glandes, testicules, etc.)

et les matriaux difficiles fixer, tels que certains ufs [Ascaris).
Dans le premier cas, on peut employer les mlanges osmis,
appliqus de trs petites pices (mlange de Flemming, p. 280)
ou les fixateurs base d'acide picrique (picroformol deBouin,p.284,
ou mlanges au picroformol-sublim, p. 285). Ce sont ces deux

catgories de fixateurs qui se prtent le mieux l'emploi des
colorations dites cytologiques (trichromique de Cajal,
mthode de
Prenant, hmaloxyline ferrique).

Dans le second cas, il faut avoir recours des fixateurs excessi-
vement puissants
et dous d'un grand ])ouvoir de pntration.

C'est alors qu'on utilisera les mlanges de Gilson (p. 284) et de
Carnoy
3.
(p.
284, note
1).
Recherches microchimiques.
Dans
cet ordre de tra-
vaux,
que dans l'analyse chromatique proprement dite,
c'est--dire dans la recherche de l'affinit des lments pour les
colorants acides, basiques ou neutres, il faut modifier le moins
ainsi
possible les proprits des cellules. Aussi, dans ce cas, faut-il

avoir recours aux fixateurs chimiquement indiffrents \ dont le
type est l'alcool absolu, ou, lorsque cela est possible, aux agents
phvsiques tels que le froid (p. 329), la chaleur et la dessiccation.
(p.^270).
Bien entendu, ces indications n'ont qu'un caractre trs gnral elles
nous servent simplement classer les fixateurs en grands groupes et
orienter le dbutant dans le ddale des formules. En ralit, il faut,
pour chaque cas particulier, choisir le fixateur le mieux appropri;
;
Pourtant, d'aprs les rocliorches de M"*' Asvadourova, la recherche du fer

les cellules pigmentaircs des Amphibiens a donn des rsultats beaucoup
plus prcis aprs fixation dans le Flemming ou le Bouin. Cf. Prenant, Mthodes
et rsultats de la raicrochimie, Journ. de l'anat. et pinjs., XLVI. p. 395, 1910.
1.
dans
CHOIX
d'l'N
fixateur
289
quo le Bouiii donne des rsultats imparfaits avec le testicule

Pour le premier, le sublim actique est prfrable, tandis
second est trs bien fix par le mlange de Carnoy (p. 284).
c'est ainsi
et le rein.
que
le
A un
autre point de vue, l'inclusion la paraffine exige des fixations

une des raisons pour lesquelles les mlanges
fixateurs trs puissants ont pris une importance prpondrante.
Il faut tenir compte aussi de la coloration qui sera employe. Nous
savons que les fixateurs pnent certaines colorations et en favorisent
d'autres. Ainsi les mlanges osmis rendent difficile l'emploi de l'bmatotyline et du carmin, tandis (|u'ils s'allient trs bien la safranine et
trs solides. Aussi est-ce
aux couleurs d'aniline. Les mlanges picriqus prparent admirableles colorations l'hmatoxyline. Le sublim se prle toutes les
ment
teintures.
11 sera donc ncessaire de complter plus loin ces indications, dans le
chapitre des mthodes spciales, et d'indiquer, pour chaque catgorie
d'objets, le fixateur qui convient le mieux.
M.
ii.vx.-iERON.
Prcis do îicrosc<5pii
10
CHAPITRE?X
PRATIQUE DE LA FIXATION
Aprs avoir
fait
choix d'un lixaleur, nous devons dlerminer de
quelle manire il doit tre appliqu aux tissus, pour donner les
meilleurs rsultats. Nous laissons de cl les procds physiques
(dessiccation, chaleur), dont Ttude sera mieux place dans les
mthodes spciales. Nous ne nous occuperons que du traitement
des tissus par les mlanges fixateurs.
Nous devons examiner successivement
le
mode de prlvement
des pices, le volume de fixateur empjoyer, la dure et la temprature de la fixation et enfin le traitement conscutif au lavage.
Prlvement des pices.

rence ou tu par
comme
ici
il
L'animal est saign de prfgaz d'clairage ou par le chloroforme et lix

^
le
est expliqu
ranimai ouvert
pour
les autopsies (p. 545).
et l'organe
Nous supposons
tudier mis nu. L'essentiel est
d'extraire cet organe, sans lui faire suLir de traumatisme qui puisse
Pour le librer de ses attaches conjonctives.,
altrer sa structure.
on se servira de prfrence d'un bistouri bien tranchant et on

vitera de le saisir avec les pinces dissection. Celles-ci ne sont
gaine conjonctive ou graisseuse qui entoure
l'organe isol, le traitement variera, suivant
tissu est contractile ou non contractile.
appliques que sur

l'organe.
Une
la
fois
que le
Organes non contractiles.
le
systme nerveux,
la rate,
le
rein.
les
Pour
mlange de Bouin,
Premier temps.
la
Ce sont par exemple
organes parenchymateux
travail
le
courant,
fixation doit tre faite
On coupe
tels
les glandes,
que
le foie,
notamment avec
en deux temps.
le
d'abord dans ces organes des
1.
Dans un bocal ou sous une cloche pour les petits anioiaux. dans le four
Pasteur pour les gros animaux on fait arriver le gaz par une des tubulures du
:
couvercle.
291
une noix ou une noisette

fragments assez volumineux, gros comme
et on les jette dans le fixateur. Celui-ci sera contenu dans un
bocal large ouverture, garni au fond d'une couche d'ouate pas
trop paisse. Les
toucher.
morceaux seront disposs de faon
Deuxime temps.
c'est--dire au bout
Ds
qu'ils
ne pas se
sont suffisamment durcis,
d'une heure ou deux, on
les retire
un
un,
pour procder au second temps de la fixation. Celui-ci consiste

dbiter les morceaux en fragments dfinitifs, ayant au maximum
5 mm. d'paisseur, et les plonger dans du mlange fixateur neuf.
Ce procd en deux temps a pour luit d'obtenir des morceaux bien
rguliers et convenablement orients. En eiet, les organes frais sont
trs mous et trs difficiles couper correctement en tranches minces
:
on risque d'obtenir des fragments informes, qui se recroquevillent dans

le fixateur. Au contraire, en ayant soin de durcir la priphrie de morceaux
un peu volumineux, on peut les rduire ensuite en tranches de l'paisseur voulue. Pendant la fin de la fixation, ces tranches conservent leur
forme.
Pour couper les organes, il faut prendre une lame la fois large,
mince et bien tranchante, telle qu'un couteau cerveau. A son dfaut,
on se servira d'un rasoir rserv cet usage, cause de l'action du
fixateur sur la lame. 11 est ncessaire de poser l'organe sur une plaque
de lige, afin que les sections puissent tre compltes, franches, et que
le tranchant du couteau puisse pntrer lgrement dans le support,
sans toutefois s'mousser. Pour pratiquer les sections, il ne faut pas
appuyer la lame mais la tirer soi d'avant en arrire, de manire
diviser les tissus sans les craser. On comprend qu'un scalpel ou bistouri, mme trs affil, a une lame trop troite et trop lgre pour effectuer correctement ces mouvements.
Lorsque les tranches dfinitives sont dbites, on les porte dans un
nouveau liquide fixateur frais, sur une lgre couche d'ouate. On laisse
ainsi s'achever la fixation.
Cette mthode ne peut tre pratique avec les fixateurs base de

sublim, car il faut viter absolument le contact des instruments mtalliques avec les pices et avec le liquide.
Organes contractiles.
le
tube digestif et
sion,
afin
que
Dans
cette catgorie,
la vessie. Il est essentiel
les
de
couches musculaires ne
nous rangeons
en exten-
les fixer
dforment pas
la
muqueuse en se contractant irrgulirement.

Intestin.
On isole une anse intestinale ou une portion du
gros intestin. On ligature une des extrmits et, par l'autre, on
injecte, avec une pipette ou une seringue de verre, une quantit

de liquide fixateur suffisante pour distendre modrment la cavit
On achve de her l'extrmit par laquelle on a pratiqu finjeclion
MTHODES GNRALES
292
et
on plonge
dans
le loul
pendue par un des
le fixaleur,
en maintenant
la
pice S!is-
de ligature. Aprs fixation complte, on
fils
en rondelles.
l)eut dbiter
Estomac.
Pour
les
estomacs de petite dimension, procder
comme pour
fixer
que
Tintestin; pour les grands estomacs, dont on ne peut

des portions, voici comment il faut s'y prendre. On pr-
pare une lame de lige de la dimension convenable (4 cent, de

ct environ), de prfrence perce en son centre d'une large
ouverture (de 2 cm. de ct environ). On a soin de la tremper
dans de
paraffine dure
la
(60"),
fortement chauffe (80), de
bien imbibe. Cette prcaution est indispensable pour empcher le liijuide fixateur de mouiller le lige et
de faire diffuser le tannin dans la pice fixer.
manire ce qu'elle
soit
On dcoupe rapidement une portion de la paroi stomacale et on

retend sur le lige, sans l'tirer, en la fixant au moyen de fines
pingles mtalliques ou d'aiguillons de Hrisson, suivant la nature
du fixateur. On fait fiotter le tout sur le fixateur, en ayant soin
que
la
membrane
soit
en dessous. Si on
s'est
d'une lame
strvi
perce d'un orifice, on a soin de remplir cet espace de fixateur.

Au bout de quelques heures, la membrane est suffisamment fixe
pour qu'on puisse enlever les pingles et dbiter en tranches.

Les vessies de petite dimension seront distendues
Vessie.
modrment avee
lies
au col
liquide fixateur inject la seringue, puis
le
dans
et
le fixaleur.
plonges
Oprer
comme pour l'estomac, en ayant
normal.
pas distendre plus qu'
Poumon. y deux cas distinguer. Lorsque
Peau.
soin de ne
l'tal
Il
les
poumons
forment de vritables sacs, comme chez les Amphibiens

Reptiles, on les traite comme les anses intestinales ou les
estomacs. Pour
les
poumons des grands Mammifres,
si
et les
petits
on ne
remplir de fixateur en
les injectant par la trache, le

fragments qu'on jette dans un fixateur
alcoolique trs pntrant, de prfrence le mlange de DuboscqBrasil. En effet, dans les mlanges aqueux, les fragments sur-
peut
les
mieux
nagent
le
est d'en prlever des
incompltement. Pour l'tude fine du poumon,

de noyer dans le fixateur des ftus de petits Mammi-
et se iixent
mieux
est
fres ayant respir.
Volume des
Nous avons dj dit, propos des

pices.
osmis
trs
li(juides
peu pntrants, que les objets fixer ne devaient
pas avoir une paisseur suprieure 1 ou 2 mm. Cette rgle est
293
commune
lous les
pntranls,
il
mme
fixateurs;
bonde
n'est pas
avec les liquides les plus

dont l'paisseur
faire des tranches
de 1 cm. d'paisseur, la fixadpasse 5 mm. Avec des morceaux

On proportionnera donc
insuffisante.
est
tion des parties centrales
des pices la puissance de pntration du fixateur
:
paisseur
Flemming, 2 mm. au maximum avec le Bouin, 5 6 mm.

au maximum. Il n'en est pas de mme pour la surface des trancelle-ci pourra tre au?si considrable qu'on le dsire.
ches
Pour les travaux topographiques, on pourra trs bien faire de
avec
le
belles liânches ayant 2
cm. sur 3 cm., dont les coupes tiendront

32. Par contre, pour les tudes
sous une grande lamelle 22
cytologiques, on ne prendra que des fragments

manire favoriser autant que possible la fixation
la dure des manipulations.
Volume du
fixateur.
est ncessaire
Il
trs
petits,
de
et raccourcir
que
la
composi-
du fixateur demeuie aussi constante que
tion
possible, pendant
les actions osmotiques et
toute la dure de la fixation, malgr

chimiques exerces par les pices fixer.
Il
faut
donc employer
un volume de fixateur trs grand par rapport celui des pices.

Le chiffre classique est de cinquante fois, mais il pourra tre
diminu beaucoup pour les fixateurs osmis (p. 281).
Pour faciliter la pntration du fixateur et les courants de diffusion l'intrieur de l'objet fixer, il est ncessaire que ce dernier
soit suspendu dans le liquide. On y arrive, soit au moyen d'un fil
pour
les
organes ligaturs (intestin), soit en faisant flotter imemsur lige), soit en mettant une couche d'ouate
liranes piques
au fond du rcipient,
soit enfin
nouet de mousseline.
Dure de
chaque mlange
la fixation,
la fixation.
fixateur.
En
en suspendant l'organe dans un
Nous
l'avons dfinie propos de
principe,
il
vaut mieux prolonger
surtout avec les mlanges picroformols, dans lesquels
peuvent rester longtemps. Par contre, il ne faut laisser

pices dans les fixateurs osmis et dans le subhni actique
les pices
les
temps ncessaire la fixation, car ces liquides rendent

Pour le sublim, on compte une heure par
millimtre d'paisseur. Enfin cette dure est fonction de la temprature; on peut la diminuer de moiti en fixant l'tuve 40.
que juste
les
le
objets cassants.
Temprature de
on
fixe la
la fixation.
temprature ordinaire
osmis, cause de
la
trs
grande
Dans
la
volatilit
majorit des cas,
pour les mlanges

de Tacide osmiqne,
c'est la rgle
294
METHODES GENERALES
Pour les autres liquides, il y a intrt fixer

au maximum. Les courants ascendants, qui
l'luve 37"
se produisent
ou 40
dans
le
liquide chaud, mettent chaque instant des nouvelles portions

de fixateur en contact avec Tobjet. En outre, le pouvoir pntrant
augment par l'lvation de la tem})rature. Il faut avoir soin

de boucher hermtiquement les flacons, afin d'viter la dperdition
des produils volatils (formol, alcool, acide actique).
est
Les liquides bouillants ne doivent tre employs que pour des

objets trs difficiles pntrer, tels que les Arthropodes. Nous
reviendrons sur ce sujet propos des mthodes spciales (p. 555).
Le froid retarde la fixation. Son emploi n'est indiqu que dans

des cas trs particuliers, par exemple pour viter Tauto-digestion
des cellules grains de scrtion. C'est ainsi (]ue Borrel fixe la
un mlange d'Hermann modifi fp. 281).

Cette opration, souvent trop
Lavage aprs fixation.
est
d'une
les
dbutants,
importance capitale. En
nglige par
glacire avec
principe, ds que
la fixation est termine, il faut liminer le plus

substances fixatrices, parce que ces corps nuisent
coloration ultrieure et la conservation des coupes. Le dissol-
tt possible les
la
vant employ varie avec
la
nature du fixateur.
Les pices fixes par les mlanges osmis et bichromates, doivent tre
laves Veau courante ou au moins souvent renouvele. Il est essentiel que celte eau ne soit ni trop calcaire, ni slniteuse, de fagon
ne pas former de dpts adhrents la surface des pices. La dure de
ce lavage sera peu prs gale celle de la fixation. On ne transportera les pices dans l'alcool 70" qu'aprs ce lavage, de manire
viter la foimation des prcipits. Pour les pices fixes au Tellyesniczky
(p. 282) il faut d'abord passer par l'alcool 15, et n'employer l'alcool
que lorsqu'il ne donne plus de prcipits.

Les pices fixes au sublim doivent tre laves Valcool iod. En effet
l'alcool dissout le sublim beaucoup mieux que l'eau; l'iode contribue
encore rliminaliun de ce sel, en le transformant en iodure de mercure. On met donc les pices, au sortir du sublim, dans de l'alcool
70", auquel on ajoute une quantit de teinture d'iode suffisante pour
lui donner une lgre teinte brune. Au bout de quelque temps, l'alcool
se dcolore et on ajoute de nouveau de la teinture d'iode. On continue
ainsi, par additions successives et en surNcillant, jusqu' ce que l'alcool
ne se dcolore plus. On a soin de renouveler aussi l'alcool deux ou trois
fois, suivant le nombre et le volume des pices, car il faut viter la
formation, leur surface, de cristaux d'iodure de mercure.
70",
Ce lavage a une trs grande importance pour faciliter la coloration

des coupes, et pour viter la formation, dans les tissus, de fins prcipits, sous forme de poussires, d'aiguilles ou de granulations. Ces
prcipits sont dus non seulement au sublim, mais encore aux combinaisons que forme ce sel avec les phosphates alcalins des tissus ou
295
ses transformations en sels basiques insolubles. L'emploi de l'iode a

la formation
pour but de solubiliser tous ces produits et d'empcher
des prcipits
'.
Les pices fixes dans
mlanges picriqiis doivent toujours tre

seulement une raison de plus grande
l'acide picrique ne forme pas avec les lments des tissus,
solubilit
comme les sels des mtaux lourds, des combinaisons insolubles dans
l'eau. Bien au contraire, les prcipits forms par l'acide picrique avec
les albuminoides sont facilement dtruits par l'eau et doivent tre
d'abord durcis par l'action de l'alcool. 11 ne faut pas non plus effectuer
le lavage chaud, mme avec de l'alcool (voir p. 271, note 1, et p. 348
laves Valcool.
Il
les
n'y a pas
procd de lavage de Jellinek).

L'limination de l'acide picrique n'a pas besoin d'tre complte pour
fixes au
pratiquer la dshydratation et l'inclusion. Pour les pices
Bouin et au Duboscq-Brasil, on pourra dshydrater de suite par l'alcool
90" et l'alcool absolu.
Lorsque les liquides picriques renferment du sublim, on lave d'abord
rapidement 1 alcool 70" ordinaire, pour liminer la plus grande
iod comme il a t
partie de l'acide picrique, puis on passe l'alcool
le
dit plus haut.
Conservation des pices fixes.
Aprs le lavage, les

tre gards longtemps dans ralcool 70.
objets fixs peuvent
Mais il faut bien savoir que dans ce liquide^ et plus encore dans
Talcool 90'^ les tissus deviennent friables et perdent assez rapide-
ment leur
colorabilit
notamment, par
suite de Thydrolyse des
composs phosphores de noyau, la coloration de ce dernier devient

bien moins lective. La conservation dans Talcool n'est donc qu'un
il faut, ds
qu'on le i>eut, procder sans tarder Tinclupis aller et
siondansla paraffine. Sous cette forme, les tissus peuvent se conserver indfiniment, sans aucune altration.
APIÊNDIGE
MTHODES SPCIALES DE FIXATION

Nous ne pouvons passer sous silence deux mthodes particulires de
pour but une conservation des lments
fixation, qui ont l'une et l'autre
1. Les avis sont partags sur la question de savoir si on peut employer aussi la
solution aqueuse criode dans l'iodure de potassium. En tout cas, l'addition d'un
peu d'iodure de potassium l'alcool de lavage ne peut que favoriser la solubilisation des prcipits mercuriques. Mais il ne faut jamais employer l'iodure de
se dcomseul, car il donne naissance du protoiodurc de mercure qui
potassium
pose en biiodure et mercure mtalli<|uc.

et insolubles (Mayer).
Ce dernier forme des prcipits opaques
METHODES GENERALES
296
beaucoup plus parluile que celle que peut donner l'ablation des organes
immersion pure et simple dans le liquide fixateur. Nous devons
aussi dire un mot de la fixation des animaux marins.
Fixation par injection.
On trouvera dans Fouvrage de Mann la
description complte de celte mthode. Les principaux avantages sont
la rapidit de la lixation (toutes les cellules sont tues en 50 secondes),
et leur
'
la lixation parfaite des organes les plus dlicats, l'uniformit complte

de la fixation dans toute l'paisseur des organes, la conservation de la
forme de tous les organes creux.
L'appareil injection pourra tre un simple entonnoir de un ou
deux litres muni d'un long tube de caoutchouc. On emploie comme fixateur le Bouin ou le Mann, chauffs 38\ Ou commence par insensibiliser l'animal par le gaz d'clairage qui dilate les vaisseaux et relarde
la coagulation du sang. On lave d'abord les vaisseaux en y faisant passer
de la solution physiologique, puis on injecte le fixateur.
Nous ne pouvons donner ici qu'un
Mthode rationnelle de Rabenthaler.
aperu de celte mlliode. Les cylologistes dsireux de l'exprimenter
pourront trouver des dtails trs complets dans les publications de l'au-
teur
2.
Rubenthaler trouve que l'immersion pure et simple de l'objet fixer

dans le fixateur est un procd brutal, dont l'action est assez violente
pour produire de nombreux artilices sans tre a^sez puissante pour
effectuer une fixation instantane. Son procd a pour but d'attnuer
la raction cellaluire, au moment du contact avec le fixateur. On y
arrive, d'une part, en produisant l'anesthsie des cellules, d'autre part
en graduant, par des dilutions successives, l'action du liquide fixateur.
Toutes les oprations sont pratiques la temprnture .du corps de
l'animal auîuel est emprunt l'organe fixer
pour les ^Mammifres,
on doit donc oprer l'luve 37' ou 38''.
1. Anesthsie des cellules.
L'objet, trs petit, est plac dans cent fois
son volume d'un liquide isotonique, variable avec sa nature (srum
:
sanguin pour les muscles, liquide cphalo-rachidien pour le cerveau,

liquide amniotique pour les embryons, sve ou sucs de plantes, etc.). On
a prpar, d'autre part, une solution de chlorhydrate de cocane
p. 100
dans le mme liquide. L'anesthsie est produite peu peu, en rem1
tiers le liquide isotonique par la solution de cocane, avec des

intervalles de 10 minutes.
plaant par
Opre avec trois dilutions du fixateur avec

quarts d'eau. Ces trois dilutions doivent de
mme remplacer par tiers le liquide anesthsique, avec des intervalles
de 10 minutes. On laisse ensuite le temps voulu dans le fixateur pur,
froid ou chaud.
L'anesthsie demande 30 minutes et la fixation progressive 2 heures.
2.
un
Fixation progressive.
quart,
un demi,
trois
Fixation des animaux marins.
Celle fixation exige des

teneur
leve de ces orgaprcaulions parliciilires,
nismes en substances salines; leurs liquides intrieurs doivent en
effet tre isotoniques avec Feau de mer. Il faut donc viter
Temploi
l\
1.
2.
Mann,
cause de
la
Plujsioloyical histolofj)/, p. 111-146.

Mthode gnrale de lixation
Rubentlialcr,
artefacts. Ztschr.
f.
uss. Mikr..
XXIV,
ayant pour but de restreindre
p. 133-13^,
1907.
les
297
de fixateurs qui produiraient des prcipits, soit leur surface,

soit dans Tintimit des tissus et gneraient les manipulations.
La premire prcaution jtrendrc est de bien goulter les ani})our cela, on les dpose sur
maux, quand on ne peut les ouvrir
un linge ou sur plusieurs doubles de papier Joseph. En effet, s'ils
:
sont imprgns et mouills d'eau de mer, il peut se produire k

leur prii)hrie des prcipits qui empcheront la pntration ultrieure des liquides.
que l'alcool acidul

ou azotique, ou encore le mlange picronilriquede Mayer. Les mlanges picriqus et formols conviennent
Il
faut employer des fixateurs acides, tels
par les acides actique
aussi trs bien pour le travail courant.

Les animaux trs contractiles doivent tre d'abord anesthsis
on y arrive en mlangeant l'eau dans laquelle ils se trouvent du

chloroforme, de Thydratc de chloral (mthodes de Rubenthaler,
de l'alcool, du chlortone
p. 296, et de de Beauchamp, p. 019),
(Randolph'), de l'eugnol (l^chlegel -). Ces produits sont ajouts
peu peu par petites quantits, de manire immobiliser les ani-
maux en
extension.
a
Dekhuysen
marins calcaires
On
les fixe
propos deux
et
ds que ce rsultat est obtenu.
liquides isotoniques pour les
non calcaires
animaux
3.
Liquide A, pour tous les tanimaux sauf les Tlostens, bas sur le fait
la pression osmolique des Invertbrs et des Slaciens est gale
que
celle
de l'eau de mer.
Bichromale de polassium
2.
p. 100.
Acide azotique 6,3 p. 100

Liquide B,
non
acide, pour les objets dont on
250 cm'^
25
54
veut conserver les for-
mations calcaires.
On
d'abord une solution de 12 gr. 5 de bichromate de potassium

fondu dans 500 cm^ d'eau de mer. On mlange 17.3 cm'^ 1
de cette solution avec 26 cm-^ 9 d'acide osmique 2 p. 100. Pour avoir
tout TefTet de ce mlange, il faut fixer la glacire et encore on
fait
recristallis et
n'arrive pas
et
compltement viter
l'acidit
qui rsulte de l'hydrolyse
de la mise en libert d'ions H.
Quel que soit le fixateur employ, les lavages doivent tre trs
comsoigns et excuts avec de l'alcool faible, de manire liminer

pltement les sels et empcher leur dpt la surface des objets.
1.
2.
3.
Zool. Anzeiger, XXIII, p. 136, 1900.

Bull. Soc. zool. de France, XXXV, p. IIG, 1910.
Dekhiivzen, Liquides fixateurs isotoniques avec l'eau de mer. C.
Se, CXXXVII,
p. lir,-117;
115-117. 1903.
/?.
Acad. des
CHAPITRE
XI
MTHODES D'INCLUSION
La grande majorit des objets fixs doivent tre traits par la
mthode des coupes; c'est le cas des organes et tissus qui font
Tobjet du travail courant. Que ces pices soient colores en masse,
avant Tinclusion, ou sur coupes aprs inclusion, la mthode est
la
mme.
lames
Aussi,
comme
la
mthode de coloration des coupes sur
est la plus habituelle, traiterons-nous d'abord
Vinclusion
est
une opration qui
dans une masse plastique qui le

la
profondeur des lments
On
deTinclusion.
pour but d'enfermer l'objet

pntre intimement, jusque dans
a
cellulaires
les
plus
dlicats.
obtient ainsi des blocs facilement maniables, renfermant des
mmes
trs petites,
parfaitement orientes pour tre
un
dans
dtermin.
De plus, les tissus acquirent
sens
coupes
une consistance (|ui permet de les dbiter en tranches d'une
pices,
extrme minceur, sans modifier en rien la forme et les rapports

des organes et des lments cellulaires.
L'inclusion se distingue de Y enrobage simple en ce que ce
fait qu'englober la pice dans une matire plastique qui
soutient de tous cts, mais sans la pntrer ou l'intiltrer.
dernier ne
la
Il
est inutile d'insister
sur rulililet
la
ncessit de l'inclusion.
C'est le seul procd qui permette d'obtenir de coupes suffisam-
ment fines, pour les travaux d'histologie animale et de cytologie, et

de conserver les rapports des parties, dans les tissus non homognes
ou
les
animaux
entiers.
Il
y a pourtant deux autres procds qui
sont encore employs l'heure actuelle et rendent de grands services dans des cas particuliers. Ce sont la mllwde des coupes par
conglation pour les tissus animaux et la mthode des coupes

leve ou au microtome main pour l'histologie vgtale.
les dcrirons dans des chapitres spciaux.
main
Nous
iMETHODES D'INCLUSION
299
Les substances employes pour l'inclusion se nomment masses dlnckision. Pour pntrer les objets, elles doivent tre Ttat de fusion ou de
dissolution. Aprs refroidissement ou vaporation, elles doivent avoir
une consistance approprie la faJ)rication des coupes. Il y a deux

grands groupes de musses d'inclusion, les masses aqueuses et les
masses anhydres. Les masses aqueuses permettent d'infiltrer les objets
tels sont le savon, la gomme arabique, la glasans les dshydrater
tine. Leur emploi est actuellement limit des reclierches spciales de
physiologie et de microchimie.
Les masses anhydres ncessitent la dshydratation pralable des objets
et leur imprgnation par un dissolvant de la masse choisie. Il y a deuxl'inclusion la paraffine et Tinclusion au collodion ou la
procds
cellodine. Ces deux procds sont d'importance gale et rpondent l'un
et l'autre des besoins particuliers. Pourtant, la mthode la paraffine
doit tre considre comme la mclhode gnrale d'inclusion. En eifet,
cette substance permet d'obtenir des coupes de toutes les paisseurs,
avec toutes espces d'objets. Elle est facile manier, elle permet des
manipulations trs rapides et enfin elle assure la conservation indfinie
des objets.
La mthode au collodion rpond des exigences plus particulires elle
permet d'excuter des coupes de trs grand diamtre, sans aucun risque
de les voir se tasser ou se fendiller, comme il arrive quelquefois avec
la paraffine. Le collodion convient aussi pour les objets peu homognes
ou prsentant de grandes cavits; pour les matriaux durs ou fibreux
:
(x\rthropodes, os dcalcifis, fibromes); pour les tissus qui supportent

mal la temprature de l'inclusion la paraffine (tissu nerveux). Enfin le
collodion prsente des avantages dans les pays chauds, o il est quel-
quefois difficile de faire de bonnes coupes la paraffine.

Un procd mixte, collodion et paraffine est quelquefois trs utile.
I.
La
INCLUSION
paraffine, dont le
(parurii affinis), est
nom
LA PARAFFINE
indique les faibles
affiiiils
chimiques
un mlange d'hydrocarbuiTS saturs
solides,
extraits par refroidissement des huiles lourdes de ptrole
ils
des paraln\v a pas une paraffine, mais
sont dissous. Eii ralit, il

iines constituant des mlanges trs varis, caractriss par leur
65. Les
point de fusion. Celui-ci varie gnralement de 35
de
fusion
lev
sont
dites
dures,
par
paraffines
point
parafilnes
opposition aux paraffines tendres dont
le
est bas.
point de fusion
Ces corps se prsentent, dans le commerce, sous la forme de

pains ou plaques d'une substance blanche, inodore, obscurment
cristalline. On peut reconnatre approximativement la duret de
le
par le contact du doigt, par la trace de Tongle et par
son que rendent les plaques, lorsqu'on les laisse tomber sur une
la paraffine
METHODES GENERALES
300
table
les paraffines dures donnent un son clair et lev, les
paraffines tendres un son sourd et bas.
Il fanl savoir
que le i)oint (rbuUition des paraffines est aux
environs de 300 et que leurs vapeurs s'enflamincnt facilement,
:
pour brler avec une ilamuie trs clairante.

Pendant la fusion, la paraffine ne suit pas du tout
la loi
pby-
sique qui veut que tant qu'il reste une portion non fondue, la
temprature ne s'lve pas au-dessus du point de fusion. Cette
loi n'est
que pour les corps homognes, mais non pour les

donc prendre de grandes prcautions et bien
temprature, si on est oblig de faire refondre de la
vraie
mlanges.
Il
surveiller la
faut
paraffine renfermant des pices.
La
le
paraffine est insolulile dans l'eau, trs peu solublc dans Talcool
dans Tactone, beaucoup plus soluble dans
100 environ), peu solulile
(i p.
chloroforme
p. 100), le
tolune (10 p. 100),

d'inclusion
le xylol (17 p.
100), etc.
plus parfait, cause

de sa structure molculaire qui permet l'excution de coupes exlraordinairemcnt Unes. L'emploi de ce procd est absolument indispensable
pour les recherches d'histologie fine et de cytologie. C'est aussi le seul
qui permette d'obtenir facilement et rapidement des rubans de coupes
sries, indispensables pour les ludes topographiques et embryoloC'est incontestablement le milieu
le
giques.
Les inconvnients reprociis au procd la paraffine (altrations des
tissus et du contenu des cellules) proviennent presque toujours d'une
mauvaise technique. On les vitera srement en suivant la marche que
nous allons indiquer.
La paraffine tant insoluble dans Peau et dans Talcool, il faut,

pour en imprgner un objet, que celui-ci soit d'abord dshydrat,
puis pntr par un dissolvant de la paraffine destin chasser
Talcool.
Nous devrons donc
effectuer successivement
1 La dshydratation par la srie des alcools

2 L'imprgnation par un dissolvant de la paraffine
;
3 L'imprgnation par la paraffine
^
;
4 L'inclusion dfinitive.
Dshydratation.
L'objet, fix et lav, est port successivement dans des alcools de concentration croissante et finalement
dans l'alcool absolu. Pratiquement, pour les objets courants, on
1.
n'emploie que les alcools 70", 90 et 100". Ainsi, les pices

au Bouin et au Duboscq-Brasil sont laves rapidement dans
fixes
].
Ces doux premires oprations peuvent tre remplaces par un traitement
l'actone
("p.
303).
METHODES D INXLUSION
30i
Talcool 90', chang deux ou Irois fois, puis plonges dans

Talcool absolu. Le matriel conserv dans l'alcool 70" ou 90 peut
dans Talcool absolu.

passer directement
da
Valcool absolu doit Ttrc rellement. 11 est

dans les bonnes maisons de produits
chimiques ou de micrographie. Nous avons indiqu p. 275 la manire de
vrifier pratiquement sa qualit i. 1! est conseiller de ne se faire livrer
ce produit que par llacons de 230 grammes au maximum. Si on tait
Prparation
alcools.
d'ailleurs facile de s'en procurer
d'entamer un litre entier, il faudrait rpartir de suite cette quandans des petits fiacons de 100 200 grammes, bien bouchs avec
uu lige fin et souple. 11 ne faut jamais laisser en vidange un flacon de
grande contenance, sous peine de voir le titre baisser, par suite de
l'absorption de la vapeur d'eau atmosphrique. Bien entendu, il ne faut
jamais laisser dbouch un flacon renfermant de l'alcool absolu.
L'alcool 90' se trouve tel que dans le commerce. Pratiquement, il
remplace les alcools 91, 93", 90" indiqus dans certaines formules.
C'est cet alcool qui sert prparer les dilutions plus faibles. Il ne faut
jamais diluer de l'alcool absolu qui cote au moins deux fois plus cher
oblig-
tit
que
l'alcool 90".
Alcools faibles.
On les
prpare en diluant avec de l'eau de l'alcool
00, suivant les indications de la table suivante
Table de dilution de
l'alcool.
02
METHODES GENERALES
Voici comment on se sert de cette table. Nous voulons faire de l'alcool,

nous cherchons dans la colonne verticale
70 avec de l'alcool 90
correspondant au titre 90 le chifre correspondant la ligne horizontale du titre 70 obtenir. Soit 31,03 ce chilTre. Donc 100 volumes
d'alcool 90, il faut ajouter 3 1,05 volumes d'eau pour obtenir de l'alcool 70:
Pour l'usage courant, voici une table donnant, en chiffres ronds, les
dilutions faire pour l'alcool 90.
Alcool obtenir
303
MTHODES d'inclusion
Elle varie suivant le volume

Dure de la dshi/di'alation.
des pices. Vingt trente minutes suffisent pour chaque bain
avec des pices de dimensions moyennes (1 cm. carr sur 5 mm.
90 et trois bains d'alcool
d'paisseur) avec deux bains d'alcool
absolu, la dshydratation durera en moyenne deux heures et
;
demie
trois
heures.
reconnat qu'une pice est dshydrate en versant du xylol

dans le tube, aprs avoir bien goutt le dernier alcool absolu. Si
On
le
Si le moindre
xylol reste limpide, la dshydratation est bonne.
il faut effectuer un nouveau passage par Falcool
louche apparat,
absolu.
Les anatomo-pathologistes tendent

Dshydratation par l'actone.
de plus en plus remplacer l'alcool absolu par Vactone pour la dshydratation des pices. Thoriquement, l'actone prsente sur l'alcool de
l'eau et
grands avantages en eiet ce corps est miscible la fois avec
avec la paraffine, il dispense donc de l'emploi de liquides intermon passe directement de l'actone la paraffine.
diaires
:
indispensable que l'aclone soit anliydre. On s'en assure,

l'alcool absolu (p. 275), en versant (juclques gouttes d'actone dans un tube essai bien sec, - demi plein de xylol. Pour que
Si on
l'preuve soit dcisive, il faut qu'il y ail un grand excs de xylol.
voit apparatre un louche, mme trs lger, l'actone ne peut servir
est
Il
comme pour
pour l'inclusion.
la valeur exacte de ce procd.
11 est difficile de se prononcer sur
L'actone parait donner de bons rsultats et ne pas altrer les tissus.
Nanmoins, pour des recherches trs dlicates, la dshydratation classique par l'alcool absolu reste la mthode de choix.
i^'rsonnellement, je ne vois ce procd que l'avantage de Tconomie.
est certain que l'actone dissout mal la paraffine; comme, d'autre
Il
dans les
part, sa volatilit est extrme, il doit se produire des dgts
tissus au moment de l'immersion dans le bain de paraffine, par suite du
dpart brusque de l'actone, non compens par une pntration quivalente de la paraffine.
Pavlov i conseille, aprs fixation
Dshydratation par la crosote.
et lavage l'eau, de dshydrater par un sjour de 4 24 heures dans
la crosote de Htre, suivant les dimensions de la pice. Aprs un
second bain de 2 3 heures, on essuie au buvard, et on passe au bain
de paraffine, soit directement,

pas essay cette mtliode.
2.
soit
aprs
un bain de
tolune. Je
n'ai
Imprgnation par un dissolvant de la paraffine.

un dissolvant de la paraf-
Celte opration consiste chasser, par

fine,
Talcoolqui imprgne l'objet dshydrat. Beaucoup d'auteurs

temps de l'inclusion le nom cV claircissement,
donnent ce
1.
Ztschr.
f.
iciss. iVik,-.,
XXII,
p.
ISG-IS":.
195.
METHODES GiNERALES
304
parce que les liquides euij)loys sont gnralement des hydrocarbures ou des essences aromatiques, dous d'une haute rfrin-
gence et qui rendent

Les dissolvants de
le
le
les tissus transparents.
paraftine les plus employs sont le benzol,

de bois de cdre ^ Le benzol et le
la
xylol cl l'essence
loluae,
sont les plus volatils, par consquent les plus faciles
liminer; ce sont aussi les moins chers. Le xylol ne prsente pas
lolun.',
il
d'avautage particulier,
normment
est
beaucoup plus cher
les objets, aussi je
jours conseill. On trouvera les

le tableau suivant
dans
et
il
durcit
ne vois pas pourquoi il est toupoints d'bullition de ces corps
Points d'bullition en degrs centigrades.

Etlier
34"
lenzol
46
Actone
oG"
Tolune
Acide actique.
Gliloroforme
Alcool mtliylique
Alcool tliylique
01"
Xylol
Sulfure de carlone.
80"
111"
...
66"
Essence de cdre.
78"
Glycrine
119"
140"
.
237"
290"
L'essence de bois de cdre est, d'aprs Bolles Lee, le meilleur

intermdiaire. Elle pntre rapidement, conserve les structures
les plus dlicates et ne rend jamais les objets cassants. Un autre
avantage prcieux est de ne pas gner la confection des coupes,

lorsqu'elle n'a pas t compltement limine par le bain de paraffine.
Enfin
elle
supporte que
la
dshydratation soit faite avec de

de grands avantages.
l'alcool 95, ce qui prsente quelquefois

Il
ne faut pas confondre l'essence de bois de cdre avec l'huile

immersion. Cette dernire ne
de cdre paisse pour objectifs
peut convenir, parce qu'elle produit avec l'alcool absolu un abondant ])rcipil blanc. Au contraire, l'essence fluide deboisde cdre
est
parfaitement
miscible,
en toutes proportions,
avec l'alcool
absolu.
Je ne dirai qu'un mot du chloroforme et du sulfure de carbone. Le
il pntre difficilement les objets
premier prsente deux inconvnients
et, lorsqu'il en reste des traces dans la paraffine, celle-ci devient friable
et se coupe 1res mal (voir cependant p. 285, note 1). Quant au sulfure
de carbone, trs vant par Ileidenbain, sou odeur dsagrable et son
inflammabilit ne sont pas compenses par des avantages suffisants
:
pour qu'on puisse conseiller son emploi.

1.
Lorsqu'on veut conserver la graisse dans les tissus fixs par les mlanges
il faut
employer le chloroforme ou mieux l'lher de ptrole (voir p. 656).
osmis,
MTHODES D INCLUSION
Pour
travail coiiraiil
le
On
tolune.
rservera
le
j('
conseille donc
procd
trs petites pices.
305
d'imprgner par
-le
l'essence de cdre pour les
Je considre,
Technique de l'imprgnation.
plupart des histologistes, les mlanges successifs
la suite de la
d'alcool absolu
d'hydrocarbures comme des complications inutiles. Pour la

grande majorit des pices, il suffit de dcanter le dernier alcool
absolu et de verser sur la pice une petite quantit de tolune,
et
suffisante
c'est
que
pour
la
la
bien recouvrir. Si ce liquide ne se trouble pas,

a t bien faite.
dshydratation
En employant
les i)elits tubes
bouchs que nous recommandons,
on n"a pas craindre de dtriorer les pices avec les pinces, ni

de les voir surnager daus l'hydrocarbure et se desscher la surface. Aussi dconseillons-nous compltement l'ancien procd, qui
consistait transporter les pices
fermant
dans des verres de montre ren-
les liquides successifs.
Pour l'essence de cdre il est prfrable d'employer le procd suivant,

d Maycr et Giesbrcclit. On verse au fond d'un tube une quantit
d'essence de cdre proportionne au volume de l'objet, soit un ou deux
centimtres de hauteui". Sur cette essence, on dpose, au moyen d'une
pipette, un volume gal d'alcool absolu. En oprant avec prcaution, la
diffrence de densit des deux li([uides suffit pour les empcbcr de se
de
mlang-er '. On introduit doucement l'objet dans l'alcool absolu
cette manire, il pntre peu peu dans la couclie d'essence de cdre,
en se dbarrassant progressivement de son alcool. Lorsqu'il est tomb
au fond du tube, l'imprgnation est termine. On retire alors, avec une
pipette, l'alcool et le mlange d'alcool et d'essence qui surmontent
l'objet. Au besoin, on traite encore ce dernier par un bain d'essence de
:
cdre pure.
Dure de t imprgnation.
On n"a pas s'en proccuper
avec l'essence de cdre, car les objets }ieuvenl y sjourner presque
iudfiniment sans s'altrer. 11 n'en est pas de mme pour les
hydrocarbures qui durcissent beaucoup
les pices et les
rendent
cassantes.
Avec l'essence de cdre, l'imprgnation est finie lorsque la pice

tombe au fond du tube et parat bien transparente. Avec le
est
tolune,
il
doit devenir transparent
1.
On peut
chaque bain doit

volume de l'objet. 'Celui-ci
faut renouveler trois fois le liquide et
durer de 10 30 minutes suivant
le
ou au moins translucide.
aussi introduire rcsseiicc sous l'alcool, au
M. Langerox.
Prcis de Microseopic.
moyeu
d'une pipette.
-0
METHODES GENERALES
306
La meilleure paraffine esl celle qui

Je conseille de Teinployer toujours parce qu'elle
la rendent propre tous les
prsente un ensemble de qualits qui
3.
fiul
Bain de paraffine.
ô"
'.
de faire de bonnes
usages. VAle permet, dans les pays temprs,
coupes de toutes les paisseurs et n'a pas rinconvnient de sou-'
mettre les pices une temprature trop levje. La paraffine
trs fines (de 6
trop tendre ne permet pas d'obtenir des coupes
[/.),
tandis que la paraffine trop dure risque de cuire les pices
coupes en rubans. Pourtant, dans les

pays chauds, on peut tre oblig de se servir de paraffine 60;
mais, l encore, on peut tourner la difficult en faisant l'imprgnation 53 et en ne prenant la paraffine 60'' que pour Tincluet fournit difficilement des
sion dfinitive.
Quelques auteurs conseillent l'emploi de la paraffine surchauITe qui

donnerait une masse plus liomogne, sans tendance la crislallisalion.
Je ne vois pas d'avantage particulier remploi de celte parafdne.
Les pains de paraffine renferment quelquefois de l"oau emprisonne
mcaniquement. Il faut absolument liminer cette eau qui est trs nuisible aux pices et aussi la paraffine. En effet, celle-ci, chauffe au
contact de l'eau, finit par en absorber une petite quantit, prend une
odeur dsagrable et forme, en se solidifiant, une masse molle et blanchtre, absolument impropre faire des coupes. Pour liminer l'eau, il
l'eau se rassemble au fond
suffit de faire fondre lentement la paraffine
en grosses gouttes et on dcante la paraffine pure. Pour la fillralion voir
:
p. 309.
Chauffage de
doit
la
paraffine
fusion. Cette
Pendant toute
la dure du bain,
exactement son point de
absolument indispensable pour
la paraffine.
tre maintenue
prcaution
est
viter la cuisson des pices et leur dtrioration dfinitive. Pour

assurer la constance de celte temprature, on ne peut cbauffer la
paraffine feu nu.
11
faut se servir d'une luve ou d'une plaque
mtallique.
L'tuve sera d'un trs petit modle
On trouve
commerce des
2,
car
il
suffit
que ses
trois
dimen-
paraffines fondant tontes les tempratures comprises entre 35 et 75". Les points de fusion vont gnralement de 10 en
10'\ Pour vrifier le point de fusion d'une paraffine, en aspirer un
peu dans un
fragment d'effilure de pipette et laisser solidifier; attacher ce tube capillaire au
rservoir d'un thermomtre, plonger le tout dans un vase rempli d'eau et chauffer
lentement. Faire la lecture au moment exact o la paraffine commence couler
du tube capillaire.
2. U existe dans le commerce un grand nombre de modles d'tuves
paraffine'
plus ou moins compliques. Une des plus pratiques est le bain-marie dit deiS'aples. Bien entendu, il faut proscrire absolument les bains-marie ordinaires,
car la paraffine ne doit jamais tre en co,:it ict. avec de Veau, ou de la vapeur d'edu1.
clans le
METHODES D INCLUSION
307
on se sert gnralement de
sioas intrieures soient de 15 20 cent.
petites tuves en cuivre, douille paroi remplie d'eau. Il est indispenceux qui sont
sable que cette tuve soit munie d'un thermomtre
:
suspendus dans l'tuve indiquent souvent une temprature infrieure

la temprature relle de la paraftine, aussi est-il prfrable de faire
tremper le rservoir dans un des rcipients paraffine. L'tuve sera
chauffe par un moyen quelconque
lectricit, gaz, lampe essence
de ptrole, veilleuse huile, etc. Quelle que soit la source de chaleur
:
(sauf l'lectricit), il n'est pas indispensable d'avoir un rgulateur de

temprature, car ces derniers fonctionnent gnralement trs mal. Les
rgulateurs mercure, en verre, du type Ghancel, ne valent rien, car

ils donnent facilement des carts de plusieurs degrs. Les rgulateurs
mtalliques, du type Roux, sont thoriquement parfaits; pratiquement
les grands modles seuls donnent des rsultats satisfaisants et encore
faut-il qu'ils soient construits par une maison srieuse. A dfaut d'un
bon rgulateur, on obtiendra un rglage suffisant en combinant le
volume de la flamme et sa distance au fond de l'tuve. Les pieds de
cette dernire seront donc assez levs pour permettre de caler le
brleur la hauteur convenable. L'tuve paraffine ne doit servir
qu' cet usage. Ne jamais y introduire ni eau ni solutions aqueuses.
Celte tuve n'est pas indispensable.

en chauffant la paraffine
inclusions
On
peut l'aire d'excellentes

par Tintermdiaire d'une
plaque mtallique, de cuivre

ou de laiton. Celte plaque
sera de prfrence courbe
en S
(fig.
147), de manire
fournir toute
une
gamme
de tempratures. Le chauffage se fera,
comme
}rc-
demment, avec une veilleuse

"
gaz, essence
ou
Pour contrler
la
lure de la
l'huile.
^.
Fig.
,.
14
tempraparaffine, on dis-
^
Etagre ou platine chautfante
de Maassez.
,-,
pose d'un signe infaillible lorsque la paraftine fondue est recouverte en partie dune pellicule solidifie, on est sr de ne pas
:
avoir dpass le point de fusion.
Il
faut donc, lorsqu'on opre
une
platine chauffante, rgler la temprature de

manire avoir cette pellicule ou au moins un anneau solidifi
l'air
libre sur
bord du rcipient.
existe des modles perfectionns de platine chauffante, tels que
la platine de Radais et celle de Gatin. Ces instruments ne sont
sur
le
Il
pas indispensables.
Rcipients pour Vindusion.
On
peut
faire fondre la paraffine
dans un
308
MTHODES GNKIALES
rcipient (|uelcon(iue, en porcelaine, en verre ou en mtal. Je ne conseille pas l'emploi des verres de montre (jui man({Lient de profondeur
et se renversent trop facilement. Les petites botes de Ptri et les petits
cristallisoirs en verre de Bohme ou, encore, les couvercles de cylindres
Borrel (fiii'. 107) conviennent trs bien pour l'tuve. Pour la platine
chaulante, je prfre les petits rcipients mtalliques, meilleurs conducteurs de la chaleur et ncessitant par consquent une temprature
moins leve pour produire la fusion de la paraffine, ce qui diminue les
chances de dpasser ensuite
le point de fusion. Les capsules d"lain,

couvrir les eoulots des bouteilles, sont excellentes pour cet
usage. On peut prendre aussi de petites casseroles en fer-blancs.
Les capsules de porcelaine prsentent d'assez graves inconvnients
elles sont mauvaises conductrices, peu stables, mme avec un fond plat,
et se brisent 1res facilement, lorsqu'on les rchauffe sans prcautions
pour fondre la paraffine qu'elles renferment.
servant
Dure du bain de paraffine.

ce sujet,
mais
les
opinions
les
Les
avis sont
plus auloi'ises
li-s
partags
s'accordent sur
deux points 1 la dure du bain doit tre aussi courte que possible pour les objets faciles pntrer et couper, ou qui durcissent ("acilement (centres nerveux, l'oie); 2 il n'y a aucun inconvnient prolonger la dure du bain pour les objets peu permables,
:
tels
que
Dans
la
peau.
le
])reniier
30 minutes
et la
cas,
dure du bain de
la
heure ou 2 heures, suivant
tendance qu'il peut avoir durcir.

le second cas, on pourra laisser
Dans
la
le
iâralline sera
volume de
pice dans la parat'line
pendant 10 12 heures ou mme plus, pourvu que

lure ne dpasse pas le point de fusion.
Technique du bain de paraffine.

comme absolument superllus
considrer
de
l'objet
Ici
les
la
tetnpra-
encore, nous devons

bains pralables dans
des mlanges de paraffine et de dissolvant ou dans une paraffine

molle. On doit transporter directement les objets du liquide
d'imprgnation (tolune ou essence de cdre) dans la ])araffine
en
fusion.
Il
n'y
pas
mme
craindre d'altrations,
pour
plus dlicats, surtout quand ces derniers sortent

ol)jets
de l'essence de cdre. Bien entendu, ce transport sera fait avec
les
les
prcaution,
})our ne
pas
endommager
contenu du tube sera vid dans un
les
petit
pices
dlicates.
Le
ciistallisoir et l'objet
sera saisi avec des pinces ou transport avec une spatule de mtal
ou de carton lger. Il faut avoir bien soin que l'objet baigne imm-
diatement dans
rait
des
la
dommages
paiâfiine,
sans surnager, accident
irrparables par suite de
la
(jui
amne-
dessiccation. L'ti-
309
MTHODES D'INCLUSION
quelle,
crite
objets dans
au crayon ou
l'encre
les divers liquides, doil les
de Chine,
(jui
a suivi les
accompagner eucore dans
la
paraffine.
Pour assurer
l'liniinalion
Tessence de cdre,
il
faut
complte du dissolvant, surlout aprs
employer deux baius successifs. Suppo-
le
sons un objet qui doive resler une heure dans la paraffine
de
la paraffine ayant dj servi, durera trente
dans
bain,
premier
:
minutes. Pendant
de
la
seconde demi-heure, Fobjet sjournera dans
paraffine neuve.
Avec les dissolvants
la
la
mme paraffine peut servir
bain
la rigueur, on pourra mme

longtemps pour
premier
ne donner que ce seul bain. Au contraire, avec l'essence de cdre,
il faudra
jeter la paraffine qui a servi deux fois.
volatils,
le
L'objet est sorti du dernier bain

un moule rempli de paraffine
paraffine et transport
fair, puis sous feau.
d'abord
le
tout
est
refroidi
fondue;
4.
Inclusion dfinitive.
dans
de
La paraffine qui sert l'inclusion dfinitive ne doit jamais

avoir servi pour les bains et ne renfermer aucune Irace de dissolvant. Dans le cas contraire, elle forme en se solidiliant une masse
pteuse et blanchtre, avec laquelle il est impossible d'obtenir des
coupes. 11 en est de mme, lorsqu'elle a t chauffe longtemps en
contact avec de Peau ou de la vapeur d'eau.
Par contre, la paraffine provenant d'anciens blocs ou de rognures de

blocs est excellente pour l'inclusion dfinilive. Il sufllt seulement de la
purifier par filtration, de fa(;on ce qu'elle ne renferme en suspension
ni corps trang'ers, ni poussires qui pourraient brchcr le rasoir. Cette
fillralion se fait sur papier fillrer ordinaire et de prfrence Ttuve
paraffine ou encore dans un entonnoir double paroi, dit filtrations

Un autre procd, plus simple mais moins bon, consiste
laisser la paraffine en fusion sjourner quelque temps la surface d'une
certaine quantit d'eau
les impuret'^s tombent au fond de l'eau et le
refroidissement fournit un disque de paraffine propre. Si on a soin de
ne pas trop chautTer, la parafllne n'absorbe pas d'eau.
chaudes.
Il
y a diverses sortes de moules. Les verres de montre fond
plat sont
les
commodes pour
les trs petites pices,
faire flotter la surface
de l'eau.
Il
en
capsules cVtain. Pour inclure de grandes

de se servir des barres de Leuckart ou
est
parce qu'on ])eut

de mmo pour les
])ices,
il
est prfrable
d'un moule analogue
(lig. 148). Ces moules sont constitus par deux pices mtalliques
rectangulaires, qu'on pose sur une lame de verre et qu'on rapproche plus ou moins, suivant la dimension du bloc obtenir, lis don-
MTHODES GNRALES
3iO
lient
de trs beaux blocs cubiques,
Fi"-. 118.
faciles
manipuler
et
ranger.
Barres de Leuckart.
Enfin on peul se servir de botes en papier ou en feuilles d'lain qu'on

fabrique facilement soi-mme d'aprs les schmas suivants. On prend
une feuille de fort papier mesurant 10 cent,
3
sur 0,3 cent, pour les g'randes boites et 5 cent,
sur 3 pour les petites. On plie d'abord (fi^. 149)
suivant 1 et 2, 3 et 4. On dplie et on plie de
nouveau suivant 5 et 6, 7 et 8. Ensuite (fig. 150)
on abat les angles A B G D, en ayant soin
,
Fabrication
149.
d'une bote en papier
ou en tain. Trac des
lignes de pliage.
Fig.
Original.
Fabrication
Fig. 150.
on en tain. Premier
pliage et abattage des

Original.
angles.
de bien plier angle droit.

dehors les cts 5, G, 7, S.
Il
En
Fabrication
ou en tain. Rabattement des cts.
Fig. 151.
Original.
ne reste plus
(fig. 151) qu' rabattre en

tirant sur ces cts, la bote se forme
toute seule et prend l'aspect de la
fig.
152.
Certains auteurs recommandent
de glycriner lgrement le moule.

Je trouve que c'est une. complicalion inutile. Les barres de Leu-
Bote en papier ou en
Fig. 152.
tain termine.
Oriyi)iul.
paraffine.
Quand aux
dtachent toujours trs

facilement; les capsules d'tain se
dchirent pour mettre nu la
ckart se
objets en verre,
lgrement pour en dtacher
il
suflit
la paraffine
si
de
elle
les chauffer trs
est adhrente.
MTHODES d'inclusion
On remplit
Technique de l'inclusion.
311
le
moule de paraffine
fondne au point de fusion el tenue en rserve dans une casserole,

on sort la pice du bain de paraffine
puis, sans perdre de temps,
et
on la porte dans le moule. Celte
chaule
une
avec
pince
manuvre demande une
certaine
dextrit,
ou Tobjet, ce dernier
masse du bloc.
trop refroidir la paraffine
si
car,
est
on
laisse
mal inclus
et
pas corps avec la

11 ne suffit pas de dposer Tobjet dans le moule, il faut encore
Vorienter, c'est--dire le disposer de telle sorte que la surface
ne
fait
du moule.
qui doit tre coupe concide avec un ct dtermin
Pour cela on se sert encore de la pince chauffe. L'objet est facile
immobiliser dans une bonne position, car la paraffine se solidifie
rapidement sur
le
fond
et les faces
du moule, formant une masse
^
pteuse, dans laquelle on enfonce l'objet en bonne place
L'orientation termine, il faut refroidir la paraffine. La
trs
majorit des auteurs recommande d'oprer ce refroidissement
rapidement, de manire viter
la cristallisation
de
la paraffine.
Il
semble, en eiet, que cette substance, refroidie trop lentement,
forme des masses lamelleuses, cristallines, non homognes, de couleur
blanchtre, irrgulirement rparties dans le bloc. Personnellement, il
m'est arriv d'obtenir d'excellents blocs, en les laissant refroidir sur la
table et d'avoir de trs mauvaises inclusions malgr un refroidissement
rapide dans l'eau. La cristallisation et le dfaut d'homognit de la
paraffine sont donc dus d'autres causes.
La premire est la prsence, dans la masse, de traces du dissolvant.
Ces traces suffisent provoquer la formation de zones molles et blan-
chtres remplies d'aiguilles cristallines. Une autre a t rcemment

lucide par les recherches de Carozzi 2, c'est le refroidissement lent
l'air. Sous cette influence, il se produit non des cristaux, mais de petites
cavits entre les sphrites ou godes qui constituent la paraffine solide.
Le bloc est alors form d'une masse blanchtre (|ui se coupe mal et se
comporte comme si elle tait souille de dissolvant.
1. Il est souvent
avantageux do disposer ensemble plusieurs fragments du mme
on
objet qui seront coups en mme temps. Pour les orienter convenablement,
rchauffe la pince plusieurs reprises, de manire entretenir la fusion de la
de
Il
existe
paraffine et empcclier la formation d'une pellicule la surface.
nombreuses mthodes d'orientation pour les petits objets. Nous ne pouvons les
ncessiindiquer, parce qu'elles ne sont pas en usage dans le travail courant et
teraient de longs dveloppements. On trouvera quelques indications ce sujet,
propos des cas particuliers d'inclusion et p. 539 propos des coupes

Mentionnons seulement la mthode de Patten modifie par Hoffmann,
Ztsckr. f. wiss. Mikv., XV, p. 314, 1899, la mthode de Woodwurth, Bull. Mus.
compar. Zool. Harvard Collge, XXV, p. 16-47, 1893 et celle de Lcaillon, Thse
sciences Paris, 1898, cf. p. 44.
wiss. Mikr., XXVI,
9. Carazzi, Zur Abkiihlung des Paraftins. Zeitschr.
f.
p. 31-2,
d'Infusoires.
p. 530, 1909.
312
MlhllOD!:S GKNKIALI-S
Au
contraire, lorsque la masse de paraffine est refroidie sous l'eau,

tide ou froide, il se forme des sphrites trs petits et trs serrs, dont
les intervalles sont remplis par des feuillets, sans (|u'il existe aucune
cavit.
On
obtient ainsi des blocs parfaits, mme; dans de l'eau oO ou
35". D'ailleurs la
temprature de l'eau importe peu.
Voici donc comment on devra piâliquer le refroidissement de

la paraffine. On pri)are nn cristallisoir plein d'eau et, ds que
Toi-ienlalion est termine, on lait flotter le moule, si sa forme et
son
j)oids le
permet (en t. C'est
Dans
facile
avec
les verres
de montre et
on attend simplement
la
d'une
assez
surface
soit
couverte
que
paisse, dont on
pellicule
acclre Tappariiion en ventant le moule. Ds que ce rsultat est
les capsules d'lain.
le cas contraire,
obtenu, on immerge doucement. Cette immersion demande quelques prcautions, autrement la paraffine, encore liquide, pourrait
tre
}rojele
travers la pellicule, accident qui amneiâit la
formation, dans le bloc, de cavits remplies d'eau. On laisse les

pices dans Teau de vingt minutes une demi-beure, plus encore
pour les blocs volumineux. Aprs refroidissement complet, on
dmoule comme il a t dit plus liant.

Au cas o le bloc prsenterait des bulles ou de:? cavits, on
pourrait les faire disparatre avec un fil de fer cliauff. Cette
opration doit tre effectue avec prcaution et pour peu que le
bloc paraisse dfectueux, il vaut mieux recommencer Finclusion.
La mtbode que nous venons de dcrire ne

fragments assez volumineux pour tre manis commodment. Pour de trs petits objets on procde autrement on les sort
du bain de paraffine, on les goulte et on les laisse refroidir sur une
lame. On a prpar, d'autre part, au moyen d'un moule, un bloc rectangulaire. Sur un des petits cts de ce bloc, on creuse une cavit suffisante pour recevoir l'objet qu'on oriente convenablerncnl. 11 ne reste
plus (ju' faire fondre la parafline tout autour, au moyen d'une aiguille
cbaulTe, de manire complter l'inclusion sans rien dranger. On
Cas
particuliers.
s'api)lique qu'aux
refroidit sous l'eau et le bloc est prt couper.

petits, tels que des Infusoires, on procde
oprations de fixation, coloration, dsbydratation,
imprgnation, ayant t ell'ectues au moyen du centrifugeur, on inclut
le culot dans le tube mme qui a servi centrifuger et, aprs refroidissement, on casse le tube. On peut aussi verser le culot dans un petit
tube fond rond ou dans un verre de montre; de manire rassembler
les objets dans le plus petit espace possible. On casse le tube pour avoir
le cylindre de paraffine: pour dtacber plus facilement du verre de
montre la lentille de paraffine, on a eu soin, avant d'y couler cette dernire, de l'enduire trs lgrement de glycrine ou d'essence de girolle
(pour des dtails plus complets voir p. 530, technique des coupes d'Infu-
Pour des objets encore plus
autrement. Toutes
soires).
les
313
MTHODES D'INCLUSION
5.
Insuccs.
1.
Paraffine molle
et
blanche. Cet accident
arrive lorsqu'on emploie de la paraffine souille de dissolvant.

Recommencer Finclusion dlinilive avec de la }aratTme neuve.
2. Cavits remplies de paraffine molle et blanche. Cet accident est produit, soit par des traces de dissolvanl, soit par un refroidissement trop lent Tair. Recommencer Tinclusion dfinitive.
3. Cavits remplies cVeaii. Le bloc a t immicrg trop tt et
trop rapidement daus feau. Aspirer feau au buvard et remplir
les cavits au fer cbaud (fig. 181).
4. Cavits remplies cfair.
Bloc refroidi troj vile. Remplir
ces cavits avec le

6.
fil
de
fer
chaud
Conservation des blocs.
paraffine,
procd
se
(\\\\
181).
(fig.
Les
tissus, bien
imprgns de
conservent indfiniment sans altrations. C'est ce

est
de beaucoup
le
meilleur ponr constituer une
collection de rserve de pices histologiques. Nous avons dit. en

effet (p. 295), qu'aucun liquide n'est rellement conservateur, au
point de vue de la colorabilit du cytoplasme et du noyau. L'alcool

absolu rend les tissus cassants, au point d'empcher compltement
la
confection des coupes. Dans l'alcool 60' ou 70 ou dans les

foi'moles, il se produit assez rapidement des phno-
solutions
mnes d'hydrolyse qui modifient
les
lments cellulaires
et les
rendent difficilement colorables. Rien de tout cela n'a lieu avec
une inclusion bien
faite.
Les blocs de paraffine prsentent encore d'autres avantages

ils ne sont
pas fragiles et ils ne craignent rien de la dessiccation.
Toutefois, pour plus de prcaution, il faut plonger rapidement dans
:
la
de
paraffine fondue la surface de section des blocs entams, afin
mettre les tissus l'abri de
On
l'air.
dans de petites boites de carton, |)ar

exemple des botes lamelles, en ayant soin d'y joindre une
tiquette. On peut, avec une pointe dure, graver sur chaque
bloc un numro correspondant l'tiquette. 11 existe dans le
conserve
commerce des
les blocs
botes compartiments, trs
mthodiquement
II.
les collections
INCLUSION
L'inclusion au collodion ou
commodes pour ranger
de blocs.
la
AU COLLODION
celluidine,
par certains auteurs, perd de jour en jour
du
quoique
terrain.
trs
vante
A mon
avis,
METHODES GENERALES
314
elle
lre
prsente plus crinconvnienis que (Favanlages rels el ne doit

employe qu'en cas d'absolue ncessit.
d'abord
incontestable
qu'elle est beaucoup plus longue et

ne peut donner des coupes minces, car,
il ne faut plus compter avoir des sections rgulires.
au-dessous de 10
Enfin, elle se prte trs mal la prparation des coupes sries et
exige alors des manipulations interminables et trs dlicates.
Ce sont l des inconvnients dont il est difficile d'attnuer la gravit.
Passons nux prtendus avantages de la mthode. On a soutenu qu'il
tait impossible de couper correctement la paraffine des pices de
c'tait peut-tre vrai autrefois, mais, avec les
grandes dimensions
microtomes et les rasoirs actuels, on peut dbiter, en tranches de moins
de 10
des blocs rectangulaires mesurant 2 cm. sur 4 5 cm., ce qui
est dj une jolie taille. Cette linute, qui est celle des lames de format
courant, peut trs bien tre dpasse. La difficult d'inclusion de ces
grosses pices est illusoire; on la tourne en diminuant l'paisseur, sans
est
11
beaucoup plus
dlicate. Elle
;j.,
rj,,
rien retrancher la surface.

On a prtendu aussi que certains tissus, tels que les centres nerveux,
le foie, la peau, durcissaient dans la paraffine au point de ne pouvoir
exprience personnelle me permet d'affirm.er le concerveau, le cervelet bien inclus se coupent admirail suffit
blement
de prparer des tranches minces et de raccourcir
autant que possible le bain de paraffine. Pour la peau, on doit prolonger
la dure de ce dernier (p. 662).
tre coups.
traire.
Le
Mon
foie,
le
On
a enfin reproch l'inclusion la paraffine d'altrer les tissus

vue l'inclusion au collodion. L'ensemble des travaux cytologiques modernes, tous effectus avec des
matriaux inclus dans la paraffine, est l pour faire justice de cette
dlicats et prconis ce point de
allgation.
Nous devons donc considrer finclusion au collodion comme

un procd de secours, utile dans des cas trs particuliers
:
Pour couper des objets prsentant dans leur intrieur de

grandes cavits ou lacunes, qui pourraient s'effondrer avec la
1'^
paraffine
2' Pour les objets renfermant des parties de consistance trs
;
que les Arthropodes.

Dans ces cas, l'avantage du collodion
diffrente, tels
est
de
donner une
On n'est
masse transparente, permable tous les colorants
donc pas oblig de Tliminer comme la paraffine et on arrive ainsi
.
conserver toutes les parties

rapi)orts
de
l'objet
avec l'intgrit de leurs
Pour couper des
des cerveaux entiers
objets de trs grande dimension, tels
que
4 Lorsque les conditions

ploi de la paraffine, par
du milieu rendent
exemple dans
les
trs difficile l'em-
pays chauds.
MTHODES d'inclusion
La cellodine (de Schering)
se trouve
3lb
dans
le
commerce eu
renfermes dans des botes de fer-blanc. Chaque tablette

pse environ 200 grammes et correspond 40 grammes de cellodine sche. Ce produit n'est pas autre chose que du coUodion trs
tablettes
masses plus transparentes que le collodion

ordinaire; aussi a-t-on peu prs abandonn ce dernier, bien qu'il
puisse fournir d'aussi bonnes inclusions ^ On dissout la cellodine,
pur, qui donne des
comme
le
fulmicolon, dans un mlange parties gales d'alcool
On
peut employer la cellodine telle quelle,

d'eau
mais, suivant x\pathy, il est prfrable,
charge
dcouper d'abord en lanires qu'on fait scher et qu'on
absolu et d'lher.
c'est--dire
de
la
On obtient ainsi un liquide parfaitement priv

d'eau qui donne une masse d'inclusion plus transparente. Par
contre, la cellodine sche a rinconvnienl de se dissoudre len-
dissout ensuite.
tement.
Technique de rincliision au collodion.
Cette inclusion
Les objets, bien dshydrats, sont pntrs d'abord

forte.
par une solution faible de cellodine, puis par une solution
Ds que la pntration est acheve, la masse et l'objet sont verss
se fait froid.
et on procde au durcissement du bloc, qui peut

ensuite tre conp. Nous allons tudier chacune de ces oprations.
On peut les faire sans peser,
1. Solutions de cellodine.
en dissolvant la cellodine non sche dans le mlange parties
dans un moule
d'un liquide
gales d'alcool absolu et d'ther, jusqu' obtention
la solution forte qu'on tend de deux
C'est
et
sirupeux.
pais
la solution faible.
cellodine sche suivant Apathy, on peut procder
et la
par pese. La solution faible sera, par exemple, 4 p. 100
volumes dalcool-ther pour avoir
Avec
la
solution forte 10
2.
on
p.
Prparation de
le
100.
l'objet.
Aprs dshydratation
pntre pendant quelques heures par
le
absolu-ther.
3.
complte,
mlange alcool
Imprgnation par la mthode ordinaire.
L'objet
pendant une semaine, et dans

la solution forte pendant une autre semaine, au moins, car,
pour les pices volumineuses, il faut quelquefois des mois de
sjourne dans
la
sohilion faible
pntration.
1
On
a prconis
rcemment
remplacer le collodion et
p. 28*, 1" juillet 1911.
l'emploi du cellulod dissous dans l'actone, pour

Secheyron, Aixli. md. de Toulouse, XVIII,
la cellodine.
MTHODES GNUALES
316
va sans
Il
diic
que ces
elTecLues clans des
sont
oi)ratioiis
Uibes bien bouchs.
Mthode de choix, imprgnation par
A.
(d'aprs Gilson et HollesLee).

d'alcool-lher, est
ordinaire avec de
mthode rapide
la
L'objet,
dshydrat et imprgn
mis dans un tube essai ou nn tube fond plat
la
cellodine trs claire.
On
plonge
le
Inbe dans
un bain de paraffine fondue, de manire produire TbuUition

du mlange et son vaporation rapide. Celte bnllition est sans
inconvnient puisqu'elle se produit basse temprature. Ds que
le mlange est devenu sirupeux, on procde
au durcissement par le chloroforme.
5.
Enrobage.
On verse
la
cellodine paisse
dans un moule de papier (fig. 152) de forme rectangulaire ou mieux de forme ronde (fig. 153).
on
Ces derniers sont trs faciles faire
:
prend un bouchon de lige de forme cylindrique et de taille approprie celle de l'objet.

Fig. 153.
Support
en lige et bote on
papier pour inclusion au collodion.
On
l'entoure d'une collerette de papier fort,

(ju'on fixe avec une pingle. Ce procd, d
BoUes Lee,
est trs
commode,
est facile fixer sur le
soin de couvrir le
car le bouchon
microlome.
bouchon
et
couche de cellodine qu'on
le
11
faut avoir
papier d'une
ceci pour
laisse scher com})llement
des
bulles
la
d'air
dans
cellodine.
ne
viennent
se
que
loger
peut aussi prendre comme moules les petits tubes de verre
;
viter
On
fond ]dat qui servent
la
dshydratation.
Quel que soit le procd employ, on a soin d'orienter l'objet

dans une direction dtermine et d'liminer les bulles d'air avec
une aiguille, ou par l'exposition aux vapeurs d'lher dans un vase
bien clos.
Durcissement.
Mthode
Valcool.
Lorsque la surmoule a pris, par vaporalion, une consistance un peu ferme, on transporte le tout avec
prcaution dans de l'alcool 80". Lorsque la masse est compltement durcie, ce qui est assez long, le bloc est retir du moule. Si
on s'est servi du procd du bouchon (fig. 153), il suffit de drouler
6.
face de la cellodine contenue dans le
papier et la pice est prte couper. Les blocs sont conservs

dfinitivement dans l'alcool 70''. Le procd l'alcool convient
le
les objets volumineux. Si on a

pris un moule impermable,
faut en retirer la masse ds qu'elle est assez ferme, de manire
pour
il
317
MTHODES D'INCLUSION
ce qu'elle soit pntre de toutes parts. Pour
la retirer
facilement,
on glisse un scalpel le long des parois du moule.

Mthode de choix au chloroforme et l'essence de cdre,
La masse contenue dans le moule est
d'aprs Bolles Lee.
est
expose, eu vase clos, aux vapeurs de chloroforme. Ds qu'elle
devenue assez rsistante, on la sort du moule (si c'est un moule en
papier on le dveloppe) pour faciliter l'action des vapeurs. Aprs

durcissement, on claircit dans un mlange de une partie de chloroforme pour deux parties d'essence de cdre'. Lorsque l'objel
on laisse vaporer le chloroforme, en ajoutant de

un
en
temps
peu d'essence de cdre. Les blocs deviennent
temps
du verre; on peut les conserver sec, dans
comme
transparents
est bien pntr,
un
flacon bien bouch, et les couper sec, ce qui est
un avantage
considrable.
LA
III. INCLUSION MIXTE

PARAFFINE ET AU COLLODION
Getlr mtliodc no rentre pas dans le cadre du travail courant, mais il

faut la connatre, puisqu'elle peut rendre de grands services pour ltude
des Arthropodes, uotanirni'nt dans les recherches parasitologiques sur
les Diptres piqueurs. Elle periuet en eiet d'ohlenir des coupes trs
avec des objets trop fragiles et de consislance trop ingale pour

se prter l'inclusion la parafline pure. Les blocs ainsi obtenus se
coupent comme les blocs de paraffine et donnent des coupes en rubans.
Quel que soit le procd, la marche est toujours la mme l'objet est
fiaes,
d'abord imprgn de cellodine, puis inclus la paraffine. Le bloc

couper est donc en paraffine et donne des rubans comme la mthode
ordinaire la paraffine.
De nombreux procds ont t proposs. Nous n'en retiendrons qu'un
nombre.
Breckuer- emploie un
petit
[)roc{''d driv de ceux de Kultschitzky et de

de l'alcool absolu, les pices sont plonges dans une
solution de 5 gr. de cellodine (sche) pour 200 gr. de mlange alcoolther. On durcit dans le chloroforme pendant cini[ dix heures, on
passe au benzol, puis dans une solution de paraffine dans le benzol,
Ryder.
Au
sortir
puis dans la paraffine 43" et enfin dans la paraffine .32". Dans le

traitement ultrieur des coupes, viter l'emploi de l'alcool absolu, ([ui
dissout le collodion et le remplacer, soit par un mlange parties gales
d'alcool et de chloroforme, soit par du xylol phniqu I p. 3.
l'our les petits animaux et le plankton, durcir par le chloroforme
dans une masse de cellodine ([u'on inclut ensuite la paraffin. Le
1. Comme pour l'imprgnation avant la paraffine fp. 304), il faut })rcudre l'essence
de cdre et non 1 huile d'immersion, qui donne avec le chloroforme un mlange
trouble.
2.
iciss.
Breckner, Zur doppelten Einbettung in Cellodin und Parafriu. Ztschr.

Mikr.,
XXV,
p. 29, 1909.
f.
MTHODES GNRALES
318
])lanklon se manipule de prfrence dans un tube de 10 inillini. de

diamtre, ferm par de la soie bluter.
GandoKi dsliydrale par l'alcool absolu, imprgne dans un mlange
parties gales d'alcool al)Sohi et de tolune, el passe dans une solution
un peu paisse de cellodine dans ce mme mlange (consistance
d'huile immersion). Aprs trois h sept jours d'imprgnation, durcir
'
dans du chloroforme, au((uel on ajoute quelques gouttes d'lhcr et un

peu de paraffine. Au bout de (juinze minutes (pas plus), porter dans la
paraffine 50".
oprent encore plus simplement. Aprs

Stephens et (Ihristoi)hers
dshydratation, les objets restent un jour ou deux dans la cellodine
dans la cellodine 3 p. 100. On porte
1 p. 100 et un jour ou deux
ensuite dans l'huile de cdre et on imprgne une heure dans la paraffine.
Cette dernire mthode convient surtout pour les Moustiques; voir ce
2
sujet d'autres procds (p. 578).
mthode de Fidd et Marlin'^ (j[ui est un peu

une inclusion simultane et non combine. On passe
dans un mlange parties gales d'alcool absolu et de tolune, puis on
imprgne dans une solution de cellodine dans ce mme liquide (consistance d'essence de girofle), sature de paraffine en copeaux une
temprature qui ne doit pas dpasser 20 23"C. Ds que l'objet est bien
pntr (ce qui est assez rapide), durcir par une solution sature de paraffine dans le chloroforme ou le tolune et inclure finalement la paraffine
Nous devons
diierente
citer aussi la
c'est
pure.
lY
AUTRES MASSES D'INCLUSION
Je ne mentionnerai d'autres mthodes d'inclusion ((u' titre de renseignement, car elles ne sont pas d'usage courant. La gomme glycrine est
un mlange de trois parties de solution sirupeuse de gomme aral)ique et
elle sert inclure froid des objets trs
de une partie de glycrine
:
durs, tels que des poils ou des organes chitineux. On laisse paissir
en couche mince, renfermant l'objet, justiu' consistance suffisante.
La glatine glycrine (mthode de Nicolas '^) peut rendre des services
pour l'tude d'organes ou d'organismes trs dlicats et trs riches en

eau, car elle permet d'inclure des objets non dshydrats. On trempe
d'abord les pices, pendant un ou deux jours, dans de la glatine 3 ou
4 p. 100 maintenue 25", puis, pendant le mme temps, d'abord dans
une solution 10 p. 100 et finalement dans une solution 20 ou
25 p. 100, additionne de 8 10 p. 100 de glycrine et maintenue 35".
ds que la masse a
L'inclusion dfinitive se fait en botes de papier
fait prise, on la porte dans du formol 1 p. 7 d'eau. On peut couper
aprs durcissement suffisant ou conserver dans le formol faible. Cette
masse se coupe comme la cellodine, mais i)rend les colorants plasmatiques. Les coupes se montent trs bien la glycrine, mais plus diffici:
lement dans le baume le mieux

et de les taler dans du crsylol.
:
1.
Gandolfi,
XXV,
2.
3.
4.
Ueber
cin
est de les
dshydrater avec prcaution
kombinicrtc Einbettungsmethode. Ztschr.
f.
uiss. Mikr.,
p. 4-21, 1908.
Stephens et Christophers, Practical Study of Malaria,

Bull. Soc. Zool. France, XIX, p. 48, 1894.
Bibliographie anatomique, p. 274, .1896.
3*^
dit., p. 115.
1908.
CHAPITRE
XII
MTHODES POUR EXCUTER

LES COUPES
La mthode des coupes a pour but de rendre les objets et les
eu les rduisant en tran-
tissus propres l'tude microsco])ique,
ches assez minces yiour tre examines par transparence.

Il
y a plusieurs mthodes pour excuter les coupes. La plus
simple consiste couper Tobjel tel quel, frais ou durci dans
l'alcool
c'est la
mthode des coupes main leve. Ces mmes

un microtome mcmi^ qui permet
objets peuvent tre fixs dans
dj d'excuter des coupes plus rgulires et d'une plus large

surface. Avec la mthode de la conglation, des coupes peuvent
tre faites, sans inclusion })ralable, dans des objets frais ou fixs.
les mthodes des
coupes la paraffine et au collodion
Enfin
vritables procds histologiques. Nous allons tudier

successivement ces diverses mthodes.
sont les
La plupart d'entre
elles ncessitent l'emploi d'instruments sprnicrotomes, destins rgler plus ou moins automatiquement l'paisseur des coupes et guider la marche du
rasoir. Nous tudierons ces microtomes au fur et mesure, car
ciaux,
ils
nomms
sont gnralement adapts des emplois particuliers.

est au contraire un instrument, })lus important encore
Il
que
microtome, souvent trop nglig, et sans lequel il n'est pas de
bonne coupe possible. C'est le rasoir. Sans qu'il soit besoin d'inle
sister,
on comprendra que, mme avec le meilleur microtome, il

de bonnes coupes si le rasoir ne coupe pas
est impossible d'avoir
bien.
Toute
la
mthode des coupes repose donc sur
l'entretien des rasoirs.

1.
Forme du
rasoir.
Elle diffre
suivant
la
la
qualit et
nature des
METHODES GENERALES
320
coupes excuter.
Pour
les
coupes main leve, nu rasoir
barbe ordinaire peut suffire; mais il est prfral)le d'employer

une lame vide seulement du cat suprieur et plane sur le ct
qui est en contact avec Tobjet (fig. loo x). Il y a avantage prendre
un
rasoir
un
|)eu
et
Rasoir de ^Valb pour coupos
Fig. 151.
lourd
volumineux, qui
mieux en main que
modles lo-ers Pour
est
les
les
coupes au microtome
main et au microtome
paratiuc.
Rocking, les mmes rasoirs peuvent servir; mais, pour les grands
microtomes, il faut des rasoirs si)ciaux. Les microtomes glissire du type Jung sont toujours accompagns de leurs couteaux
de grande
particuliers,
dimension. Le choix est
difficile
pour les
microtomes genre Minot,
plus
Les deux principaux types do lames

Fig. 155.
de rasoirs; a^, pour objets mous, y, pour paraffine et objets durs.
l'orme est, notre avis, celle
sent par
la figure
la
figure loi. (Test
il existe un
nombre
de types
grand
de lames. La meilleure
du rasoir de Walb (jui est lepr-
une
forte
pour lesquels
lame
faces planes,
doid
loo [y) reprsente une seclion elle est munie, chaque

extrmit, d'une jôigne trs commode |)Our laigui:
sage. Avec une lame de ce genre, on peut couper

toutes espces d'objets, aussi bien dans la }araffine
que dans
Fig.
15G.
Schma du
tjiseau fa-
cettes
des
le collodion.
En ce (jui concorne l'paisseur de la lame et du tranchant, on peut i;uider son clioix sur les considrations
suivantes. Les lames du type x (lig-. 155), Irau-liant trs
uiince, conviennent pour les objets tendres et dlicats,
tandis que les lajiies du type j (lig. 155), plus paisses,
(ranchant en forme de triangle isocle, sont ncessaires
rasoirs
pour couper les objets durs et rsistants. Les lames du

premier type sont trs lionnes pour les coupes main
leve ou au microlone main, tandis (jue les solides
lames, dos trs larg-e, du second type sont les meilleures pour les
coupes la paraffine et, en gnral, pour tous les travaux courants.
La forme du tranchant peut varier aussi. Ou bien les deux faces de
la lame se rapprochent, en formant un angle plus ou moins aigu,
comme dans les couteaux ordinaires, ou bien le tranchant forme un
paraffine.
biseau facettes, comuK^ la fig'ure 156 le reprsente sch('mati(juemenl.

Cette dernire disposition est la plus 'commode pour le repassage; on
321
MTHODES POUR EXCUTER LES COUPES

comprend de
forme,
faut
il
second cas,
lite
il
beaucoup
suite que, pour entretenir la rgularit de la premire

user toute la surface de la lame, tandis que, dans le
suffit de repasser les deux facettes du biseau, ce ([ui faciles oprations.
2. Repassage du rasoir. Nous venons (p. 325), eu tudiant

mode dâclion du rasoir, qu'on peut le considrer comme un coin
le
seront d'autant
pntrant dans les tissus pour les diviser. Les coupes
le tissu moins altr que ce coin sera plus mince et
minces
et
plus
et l'paisseur de la lame, il fau t
plus poli Quelles que soient la forme
donc que le tranchant, biseaut ou non, prsente un poli parfait.
Moins il y aura de stries miciôscopiques, plus le coin pntrera
facilement dans les tissus et moins il y causera de lsions. En
.
que laisse dans Tacier un repassage imparde pntrer et se terminent par des
tranchant
empchent
dents et des crans microscopiques qui dchirent les cellules et
effet, les petites stries
le
fait
des rayures qui peuvent

produisent, dans les rubans de coupes,
bandelettes
en
longitudinales.
complte
aller jusqu' la section

'
Pendant la confection des coupes, le tranchant du rasoir

s'mousse, s'brche ou se recourbe s'il est trop mince. Ce dernier accident est rare avec les rasoirs paralTme dont nous recommandons l'emploi, mais l'angle que forment les deux biseaux du
de moins en moins aigu, des crans
a
microscopiques apparaissent et le poli diminue. Le repassage
but de rendre au tranchant sa forme et son poli primitif.
tranchant
tend
devenir
pour
Il
faut
donc enlever d'abord une mince couche d'acier, de manire
rectilier la
forme des
facettes, puis les polir aussi parfaitement
que possible.
Le repassage a cess
Nouvelles mthodes de polissage.
d'tre une pratique empirique, exerce par certains professionnels. Il est devenu un procd scientifique et tout micrographe
doit pouvoir maintenir ses rasoirs dans un tat de poli suffisant.
Disons tout de suite que les anciens procds de repassage sur

cuir ont fait leur temps et ne sont qu'un pis aller. Un aiguisage
rationnel doit tre calqu snr les mthodes de polissage usites
on arrive ainsi
en
et en mtallographie microscopique
:
optique
obtenir des surfaces assez parfaites,
pour qu' 750 diamtres on
ne distingue aucune strie.

Le repassage idal est donc celui qui est pratiqu suivant les
mthodes optiques et mlallographiques. Comme ces procds ne
sont pas la i)orte de la majorit des micrographes, il sera prfM. Langehon,
î
MTHODES GNRALES
322
rable d'envoyer ses rasoirs une maison spciale d'optique ou de

niicrotomes. Il faut bien savoir que le poli parfait et le tranchant
rigoureusement rectiligne ain-i obtenus sont trs durables. En

mnageant le rasoir et en ayant soin de ne pas Tbrcher sur des
objets durs on pourra le conserver trs longtem})s en bon tat. 11
aprs usage, de l'essuyer avec un linge fin, imbib de tolune
d'alcool, suivant la nature des objets coups
pour entretenir
on
trs
sur
un
cuir
trs
fin
et trs doux
poli,
passe
lgrement
suflit,
ou
le
en
se
gardant bien d'employer aucune pte^
Anciennes mthodes d'afftage.
Nous devons
dcrire ces
mthodes, car, toutes itnparfaites qu'elles sont, elles seront long-
temps encore en usage chez
les
micrographes qui ne savent o
faire
aiguiser scientifiquement leurs rasoirs, et qui sont obligs de se
contenter des instruments de repassage qu'on trouve dans
le
com-
merce.
L'afftage
pierre et le
ordinaire- consiste employer successivement la

La pierre sert enlever les brchures et
cuir.
redresser un tranchant trop arrondi le cuir sert parfaire l'aiguisage obtenu sur la pierre et raviver le tranchant lorsqu'il est
;
mouss, mais non brch.
Appareils d'afftage.
Quel (jLie soit le mode de repassage, pierre ou
condition essentielle raliser est de conserver au rasoir la
cuir, la
forme et l'inclinaison de
son tranchant. Pour cela,
il
faut que ce tranchant
pendant le repassage,
une inclinaison convenable
ait,
par
rapport
la
surface
polissante. Avec les rasoirs

dos trcs large, comme
ceux dont je recommande

Tcuiploi i)Our les coupes
Appareil cVafftagc
Fig.
de
araffine (rasoirs
^^
a faces planes.
-,^ ,,
,.,..,
Walb, hg. i54j, aucuneprecaulion n'est ncessaire. 11
suffit d'appuyer le rasoir bien plat, en le tenant appliqu sur la pierre ou
le cuir. Pour les rasoirs ordinaires dos troit, il faut tenir le dos du rasoir un
157.
1.
On trouvera dans
pour rasoirs
le
mmoire de Funck, A propos de
l'aiguisage des ra-
soirs mici'otome {Coviptes rendus Assoc. des Anatovtistes, Run. 10, p. 294, 1009)
des renseignements trs complets sur la manire de pratiquer soi-mme l'afftage
d'Arkansas et d'une dalle do
scientifique, par l'emploi successif de la pierre
glace, combin avec une pte d'alumine calcine et lvige.
2.
Cette mthode est longuement dcrite par W. Ssobolow. Thorie und Praxis
1909.
f. miss, Mikr., XXV, p. 05-79,
des Schleifens. Zlschr.
MTHODES POUR EXECUTER LES COUPES

aigu.
Comme
323
manire ne pas donner au tranchant un
peu relev, de
il
est difficile d'obtenir la
main
anile trop
cette inclinaison, on se
Ces appareils sont de deux sortes

pour les
conglation, dont le tranchant forme un angle
sert d'appareils d'afftage.
rasoirs paraffine et
assez ouvert, on doit
augmenter l'paisseur du dos. On emploie alors

une sorte de cylindre creux (fig. 157) portant une rainure dans laquelle
on engage le dos du rasoir. L'paisseur de ce cylindre donne au rasoir
il suffit de repasser en appllcjuant sur la pierre le

tranchant et le cylindre. Pour les rasoirs plans sur une face et concaves
sur l'autre face, on relve le ct plat avec un appareil form d'une
l'inclinaison voulue;
tringle mtallique.
Pierres aiguiser.
L'tude prcise des pierres aiguiser est assez

parce que les dnominations vulgaires s'accordent mal avec la
nomenclature ptrographique et minralogique. Aussi n'en dirons-nous
que quelques mots. En principe, une bonne pierre aiguiser doit avoir
des grains trs fins (de 1 3 \j), bien ciments, trs uniformes et aussi
durs que l'acier. Les grains trop gros ou ceux qui se dtachent produisent dans le tranchant des crans ou cbrchures. Par suite, la pierre
lithographique est mauvaise, car son grain est calcaire, trop tendre et se
dtache du ciment, d'o usure rapide et ingale. La pierre du Levant, ou
pierre l'huile, est mauvaise aussi, parce que son grain est trop dur. La
meilleure pierre est la pierre d'Arkausas, sorte de phyllade de couleur
jaune ambr, grains trs fins (l [i environ) et bien ciments.
Il ne faut jamais repasser sur une pierre
sche,
Liquide employer.
parce ({ue les particules d'acier ne tardent pas remplir les espaces
difficile,
qui sparent les grains et ceux-ci n'agissent plus qu'imparfaitement et

irrgulirement. Le liquide sert donc tenir en suspension les particules
d'acier et les dbris de la pierre.
Les liquides les plus employs sont l'eau, l'eau de savon, l'huile de
ptrole, riiuiie de vaseline, l'huile d'olive. Plus le liquide est pais,
adhre la pierre, qu'il rend plus fine en s'insinuant entre les

en diminuant leur, paisseur. Une mme pierre peut donc
donner deux elfets, suivant qu'on la recouvre d'eau ou d'huile. Les
rasoirs de microtome seront de prfrence repasss avec de l'huile.
Les pierres l'eau doivent tre bien essuyes aprs l'usage et prserves de la poussire et des taches de graisse. Ces dernires s'enlvent
avec du savon. Les pierres l'huile doivent rester lgrement imbibes
on les prserve soigneusement des poussires et on les
de ce liquide
essuie avant l'usage.
mieux
grains
il
et
Sur la pierre, le tranchant du

Repassage sur la pierre.
On saisit donc le
rasoir doit toujours tre dirig en avant.
rasoir par son manche ou par ses deux extrmils, suivant sa
forme. On applique sur la pierre d'abord le dos du rasoir, puis le
tranchant, pour tre sr de ne pas mousser ce dernier par un

mouvement imprudent. On tire alors obliquement la lame vers
soi, le
de
la
tranchant en avant, de manire utiliser toute la longueur

une face du rasoir. Arriv l'extrmit, on
pierre pour
retourne
la
lame, on l'applique sur
la
pierre avec les
mmes pr-
METHODES GENERALES
324
pousse le tranchant en avant. Pour les rasoirs

on
manche,
repasse toujours de la hase rextrmit de la lanic;
rasoirs
extrmits symtriques, on commence par l'une
les
pour
caillions, el
on
la
de ces extrmits, toujours

Il
la
mme.
faut appu^êr trs lgrement et
mineux,
le
poids de
la
lame
suffit
mme, avec
assurer
important de passer les deux cts de

de fois sur la pierre.
trs
Morftl.
Il
la
le
les rasoirs volu-
repassage.
lame
11
est
mme nomhre
le
faut arrter l'action de la pierre avant l'apparition
on nomme ainsi une trs mince plaque d'acier qui

du morfil
se forme des deux cts du tranchant. Ce morfil est impossihle
:
enlever sur
la pierre,
cause de son lasticit
ferait
qu'augmenter. Pourtant, lorsqu'il y

paratre, on ne s'occuj)e pas du morfil.
Polissage sur le cuir.
Ce polissage
en insistant,
il
ne
a des dents faire dis-
est indispensahle, car le
pierre prsente toujours un peu de morfil,

stries
et
des
des
dentelures microscopiques. Ces dlauts
que
disparaissent avec le cuir.
tranchant ohtenu sur
la
ainsi
Sur
le
cuir,
avant.
jtart cela, les
le
dos du rasoir doit toujours tre dirig en

prcautions sont
les
mmes que pour
pierre; on se sert des apj)areils d'afftage et on

longueur du cuir pour chaque ct de la lame.
utilise
On
la
toute la
appuie trs
peu et on passe rapi(h:;ment. Les couteaux lourds seront retourns

en les faisant hasculer sur le dos, afin de ne pas ahmer le tranchant ni
le cuir.
L'action du cuir rsulte de son lasticit;
il
se
dprime sous
le
poids du couteau, ce qui permet au morfil de se hriser et de disparatre. En outre le tranchant devient uni, poli et durahle.
y a ijeaucoup de modles de cuirs rasoirs. Un des meilleurs est
cuir carr quatre faces de Zimmer (fig-. 158). Une des faces sert de
pierre, deux autres sont enduites de ptes Fmeri, noire grain
11
le
Fig. 158.
Cuir qiiatro faces de Zimmer.
Fis. 159.
Cuir de Wall).
moyen, rouge grain trs lin. Le quatrime ct est un cuir propre,

doit servir au polissage dtinitif. Certains cuirs deux faces
possdent une face en moelle de sureau trs commode pour enlever le
([ui
morfil; l'autre face sert au polissage. Enfin les cuirs de
sont
commodes pour
les
grands rasoirs.
Walb
(fig. I.i9)

Quel que
soit le
modle de
il
cuir,
faut bien savoir
325
que
le polis-
sage dfinitif ne peut se faire que sur un cuir non enduit de pte
en effet ces dernires agissent exactement comme la pierre et ser:
vent enlever les dents el asprits du tranctiant. Aussi faut-il

avoir bien soin, en passant de la pierre au cuir et d'une face
Tautre du cuir, d'essuyer soigneusement le rasoir.

Ne jamais passer sur le cuir une lame brche, sous peine de
dchirer irrmdiablement.
le
Aprs le repassage sur li pierre, il faut essayer

tranchant il y a pour cela beaucoup de procds. D'aprs Ssobolew,
le meilleur consiste poser le dos de la lame sur quatre doigts de la
main gauche et passer lg;rement la pulpe du pouce sur le tranchant.
On peut aussi le poser plat sur la paume de la main, sans appuyer,
ef voir s'il coupe les saillies pidermi(jues. Un bon moyen consiste
aussi, en tenant le dos de la main devant le joui', a essayer de couper
un i)oil de cette rgion.
Essai du tranchant.
le
3.
Mode
d'action du rasoir.
diffrentes, snivant qu'on

-dire lastiques
ou non,
Le
rasoir agit de
deux faons
coupe des objets humides ou secs,
suivant qu'on opre

Pour excuter les coupes
et
la
c'est-
main ou au
la main ou
microlome mcanique.
dans des objets lastiques (Idocs de cellodine), le rasoir est tir

obliquement, tandis que, dans les microlomes paraffine, il agit
perpendiculairement
pntre
comme un
d'allonger
et
coin
la
:
d'amincir
surface couper.
Dans
les
deux
cas,
il
oblique a seulement pour but

section de ce coin. La plupart des
la position
la
auteurs sont d'accord maintenant pour admettre que le rasoir agit

toujours comme un coin et non comme une scie, quelle que soit son
obliquit. En effet chaque point de
que par un point du tranchant du
l'objet
rasoir.
n'est
jamais attaqu
En
plaant le rasoir
obliquement, on augmente simplement la distance de la base au
tranchant, ce qui donne en ralit ce dernier un angle plus aigu.
Avec les objets lastiques, susceptibles de se courber sous la
pression du rasoir, celui-ci doit agir obliquement, de manire

pntrer dans l'objet plus facilement et sans le courber. Au contraire,
avec les objets durs, on
une de
})eut
attaquer
le
bloc normalement
ses faces.
I.
COUPES
MAIN LEVE
Cette mthode n'est plus gure employe que pour l'histologie

vgtale, car les tissus animaux sont gnralement trop mous i)our
326
METHODES GENERALES
tre coups
Les inslrumenls ncessaires sont
ainsi.
une
un bon
des baguettes de moelle de

Sureau, pralablement prives de leur cuticule qui renferme des
particules 1res dures.
rasoir, possdant
l'ace
})]ane,
et
Suivant sa consistance, Tobjet est coup tel quel, Ftat frais,

ou seulement aprs fixation (alcool pour les tissus vgtaux). On
en prlve une trancbe d'paisseur convenable. On coupe un
fragment de baguette de moelle de Sureau

entre les
la
et
on
le divise longitu-
compltement, soit simplement par une feule,

deux lvres de laquelle on insinue Tobjet. Pour couper
dinalement,
soit
moelle de Sureau, on prend un scalpel lame trs large et bien

ou mieux un vieux rasoir, ou encore une petite scie
affile,
Fig. 160.
Tenue du
rasoir et de l'objet pour les coupes
main leve.
dcouper 1res fine. Si l'objet est cubique ou cylindrique, on creuse

une petite cavit dans les deux moitis du fragment de moelle de
Sureau, ou bien on dprime simplement la moelle avec le manche
d'une aiguille.
On
peut couper en comprimant le tout entre les doigls, mais il

encore plus commode d'assurer cette compression, soit par
quelques tours de fil, soil avec une pince linge en bois, une
est
pince de Bunsen pour tuyaux de caoutchouc, etc.

Une fois la pice incluse dans la moelle de Sureau, on saisit
tout entre le pouce et l'index de la main gauche et on prend
le
le
l'indique la figure 160. Ou peut

couper d'avant en arrire (tranchant du rasoir tourn contre soi)
ou d'arrire en avant le premier mouvement parait plus naturel,
rasoir de la
main
comme
droite,
mais
second permet de mieux voir
le
et aussi
couper
Quoi qu'il en
l'objet el
il
d'appuyer
soil,
le
faut utiliser
la
le
tranchant
el
l'objet
lame du rasoir sur l'ongle du pouce.
rasoir doit
la
toujours attaquer obliquement

plus grande longueur possible du tran-
chant pour chaque coupe. Le rasoir doit donc avancer
chaque

fois
de gauche droite, de
secousses et
la
d\m mouvement
base l'extrmit de
uniforme.
On
la
peut
si
de
l'objet.
le tailler
Pour
faciliter l'attaque
lame, sans
s'efforce d'obtenir les
tranches les plus minces possibles, tout en intressant

totale
327
la
surface
du cylindre de moelle, on
pralablement en biseau.
Si l'objet est de bonne consistance, on peut couper sec; mais

ce sont des tissus dlicats, ou si l'objet menace de se desscher
rapidement, on doit tremper frquemment le bloc de moelle de

Sureau dans de l'alcool 70 et mouiller chaque coupe la lame
du rasoir, avec ce liquide qu'on tient s porte dans une soucoupe.
cas, les coupes doivent tre recueillies dans un
rempli d'alcool. On s'aide d'une aiguille ou d'une
pince pour les dtacber du rasoir sous le liquide, de manire ne
pas les dchirer. En posant le cristallisoir sur un carton ou une
Dans
les
deux
petit cristallisoir
fond mi-partie noir et blanc (fig. 228), il

sera facile d'liminer les fragments de moelle de Sureau et de
choisir les coupes les moins paisses pour les colorer et les
plaque de verre
monter.
La moelle de Sureau ne convient pas toujours pour l'enrobage on

peut employer aussi du foie pralablement durci ou du lige. Le foie
employer sera du foie amylode ou simplement du foie de Buf ou de
Veau durci dansTalcool; on en dcoupe des lames plus ou moins
paisses, entre lesquelles on enrobe l'objet, aprs creusement d'une
cavit si c'est ncessaire. Le lige convient pour les objets trs durs,
on choisit un bouchon de lige trs fln, on le divise
qu'on coupe sec
en deux avec un vieux rasoir ou une petite scie dcouper et on enrobe
comme avec la moelle de Sureau.
:
La mthode des coupes
main leve donne d'excellents
rsultats
entre des mains exerces, mais elle ncessite beaucoup d'habilet

et de sret. Son principal avantage est sa grande simplicit. Elle
tait
trs
employe autrefois
certains botanistes clbres pou-
vaient dbiter ainsi un sac embryonnaire en tranches presque aussi

belles
que
celles
11.
que donnent
les
microtomes automatiques.
COUPES AU MICROTOME
MAIN
Les microtomes main donnent les mmes rsultats que la

mthode des coupes mainleve, mais ils permettent de faire trs
METHODES GENERALES
328
facilement des coupes rgulires. Le type de ces appareils est le

microtome de Rauvier. Cet instrument com])rend essentiellement
un cylindre surmont d'une

dans
le
cylindre, aprs l'avoir
large plate-forme; on place l'objet
enrob dans
la
vis micromtrique,
piston, actionn par une
petites quantits.
Le
rasoir
la
que
finesse
fait
Un
monter robjet de
coupe tout ce qui dpasse
forme. Avec ces instruments,

limites
moelle de Sureau.
la
la platefinesse des coupes n'a pas d'autres
du tranchant
cl
la
perfection
de
la
vis
micromtrique. Le modle primitif de Ranvier, dans lequel

fallait caler l'objet avec de la moelle de Sureau et faire gontler
il
le
tout dans l'alcool faible, ou encore
pratiquer un enrobage
la
paraf-
heureusement modifi.
microlome main de Leitz,
fine,
a t
Dans
le
par exemple (lig. 161), le cylindre

de moelle de Sureau est maintenu
par une |)ince intrieure;
Ficr.
161.
!\Iicrotome
main
de Leitz.
la tte
de
la
vis
et
porte 50 divisions, dont chacune
micromtrique
est trs large
correspond un centime de millimlre. On peut donc, avec un bon

rasoir, faire des coupes de 10 a et
mme
de 5 a, car
les divisions sont
assez larges pour qu'on puisse en apprcier la moiti avec prcision. Comme les coupes sont trs rgulires, on peut trs bien
leur donner jusqu' 15 mm. de diamtre ^
Pour
se servir de cet instrument,
rasoir plan sur u;i
gauche,
tenu de
le
tire
la
la
ct.
il
un
main
faut absolument avoir
Le microtome
est saisi pleine
plate-forme reposant sur le pouce et l'index; le rasoir,

droite, est pos bien plat sur la plate-forme. On
main
trs
obliquement en appuyant lgrement avec
le
pouce
Pour obtenir un mouvement bien rgulier, sans saccades, l'avant-bras et la main doivent
former un ensemble rigide et le dplacement du rasoir doit tre
produit uniquement par des mouvements du bras.
droit pos sur la face suprieure de la lame.
On coupe
sec
ou en mouillant
le rasoir et
l'objet,
suivant la
nature du tissu. Dans les deux cas, on recueille les coupes dans un
cristallisoir plein d'eau ou d'alcool. On peut, auparavant, li1. Le microtoinc main de Peltrisot, serrage central,
bonne modification du microtome Ranvier.
est aussi
une
trs
329

miner sur
rasoir les
le
dbris de moelle de
Sureau avec une
aiguille.
Aux microlomes
main
se rallache
un excellent inslrnment qui
microtome du type Lelong (iig. 162). Cet appareil, trs

d'un louid bloc rectangulaire
simple et trs solide, se compose
un
plan inclin, sur lequel glisse le chariot
mtallique renfermant
Ce
chariot, qui pouse exactement la forme du plan
porte-objet.
on disest
inclin,
pourvu d'une pince, entre les mors de laquelle
est
le
pose l'objet dans
la
moelle de Sureau. Le tout est dplac, sur
Fig. 162.
Microtome
le
de Lelong.
plan inclin, par une vis micromtrique dont
la tte
porte un
Le rasoir est guid par deux glissires de verre

tambour
bords du bloc mtallique. On coupe, comme
les
qui garnissent
avec le microtome main, en appuyant lgrement le rasoir sur
les glissires par sa face plane. Grce son poids, ce microtome a
divis.
beaucoup de
pas besoin d'tre tenu.
stabilit et n'a
Il est,
mon
avis, trs suprieur aux microtomes main pour les coupes dans
on peut trs bien couper aussi dans le collola moelle de Sureau
dion. Au besoin, on inonde d"eau ou d'alcool la pice et le rasoir
:
et,
une
fois les
coupes termines, on essuie soigneusement
l'ins-
trument.
III.
COUPES
Je ne mentionnerai que
PAR CONGLATION
pour mmoire ce procd qui donne
d'excellents rsultats, dans des cas i)articuliers, et peut
mme
tre
METHODES GNRALES
330
indispensable pour certaines recherches de microchimie, mais qui,

mon avis, ne saurait constituer une mthode courante de travail.
Ces coupes peuvent tre obtenues avec un microtome quelconque,
pourvu qu'il possde un porte-objet creux spcial. Dans la cavit de cet
instrument, on fait vaporer un li(iuide trs* volatil tel (|ue l'tber, le
clilorure d'tliyle, ou bien encore on fait dtendre un gaz liqufi comme
l'acide carjjonicjue.
On
peut congeler des tissus frais, en collant la pice sur le portemoyen d'un peu d'eai. Ce procd, trs expditif et (jui dispense de toute fixation ou inclusion, est quebiuefois employ dans les
services de chirurgie pour le diagnostic rapide des tumeurs. Naturellement, le rsultat ainsi obtenu ne peut lre que trs mdiocre, car le
froid ne constitue pas une mthode de fixation. La conglation rapide et
bratale des tissus dtermine la formation d'aiguilles de glace et produit
des dchirures cellulaires.
Il est gnralement prfrable de congeler des tissus dj fixs. C'est
sous cette forme que la mthode peut rendre le plus de services. Pourtant,
je crois (ju'il faut la rserver pour des cas trs limits, car l'avantage de
la rapidit et de la simplicit est fcheusement compens par des
altrations invitables et par la difficult de manipulation des coupes.
Celles-ci peuvent tre transportes une une, la spalule, de li(iuide
en liquide, dans des verres de montre, ou mieux encore colles sur
lames. On emploie pour cela le procd d'Anilschkov i. Les coupes,
durcies dans de l'alcool 50% sont tales sur la lame enduite d'albumine de Mayer (p. 345). On appuie avec du buvard, pais on porte dans
objet au
les alcools 95" et 70", puis dans l'eau. Pour colorer les graisses, on
plongera d'abord dans de l'alcool-formol (alcool 50, 50 cm^ et formol
7,5 cm^j, puis dans de l'eau.
Le procd la paraffine donne des coupes bien plus lisibles et,

quand on sait s'arranger, on peut obtenir d'excellentes prparations en
peu d"heures. Pour une pice prleve le matin, on peut donner un diagnostic le soir mme ou, au plus tard, le lendemain matin et aprs un
examen autrement complet que celui que permettent les coupes la
conglation.
IV.
COUPES
LA PARAFFINE
Pour excuter ces coupes, il est indispensable de possder un

microtome automatique. Les microtomes main ne conviennent
ce genre de li:avail, car ils ne fournissent que
pas du tout pour
des coupes fortement enroules, trs difficiles manipuler. Quant
aux instruments bon march, du type microlome d'tudiant, le
mieux
est
de
les
passer sous silence. Pour faire de bonnes coupes
la paraffine et au collodion, il faut un microlome srieux et

bien construit, lien est de cet instrument comme du microscope :
1.
Anitschkov, Ueber die Methoden zur Aufklebung von Gefrierschoitten auf
die Objekttrager. Ztschr.
f.
loiss.
Mikr.,
XXVII,
p. 71, 1910.
METHODES POUR EXECUTER LES COUPES

c'est
une dpense qu'on
fait
une
fois
331
pour toutes, aussi
faut-il
acheter un objet de premire qualit. Pour 200 250 francs, on

peut avoir un excellent microlome genre Minot, avec lequel on
excute du travail parfait.
appris considrer la mthode la paraffine comme
hislologique fondamental, aussi nous tendrons-nous
Nous avons
le
procd
particulirement sur
blocs de pai'affine ^
Rasoirs.
la
manire d'obtenir des coupes avec
Nous avons donn
p.
320,
fig.
134,
le
les
type des
pour coupes la paraffine. Ce rasoir doit avoir un dos trs

une lame formant un angle assez ouvert, de manire
et
pais
diminuer autant que possible les vibrations.
Les microtomes qui se prtent le mieux aux
Micro tomes.
rasoirs
coupes la paraffine sont ceux dans lesquels

bile et solidement fix
le rasoir est
immo-
au bti de l'appareil,
par ses deux extr-
mo-
mits. L'objet est

bile
rencontre
et
rasoir
taine vitesse qui,
bine
la
le
une cer-
avec
com-
masse du
chariot et du
volant,
produit une force vive

suffisante pour pro-
facilement
duire trs
la
section
du
bloc.
Ce
type de microtome est

exactement l'inverse
Fig. 163.
Microtome de Minot, modle de
Leitz.
de celui qui est ralis

par les microtomes dits cellodine. Les meilleurs modles de
microtome paraffine sont le xMinot, le Radais et le rocking; tous
trois sont
automatiques. C'est au Minot que nous donnons la prconstitue, pour nous, le type du microtome destin
au travail courant de micrographie.
frence;
il
Le microtome du type Minot est faljriqu par un grand nombre de

maisons. La figure 163 reprsente le type adopt par Leitz
cet instru:
1. Bien entendu les blocs mixtes au

collodion et la paraffine doivent tre
coups d'aprs ce procd et fournissent d'excellents rubans, exactement comme
les blocs la paraffine pure.
METHODES GNRALES
332
ment unit la prcision la simplicit et la solidit, c'est celui dont

nous nous servons actuellement et qui nous donne toute satisfaction. Le
principe du microtome de Minot consiste faire mouvoir et avancer l'objet,
|)ar le jeu combint' de deux coulisses perpendiculaires. Le volant, bien
quilibr, agit, par l'intermdiaire d'un axe horizontal, sur une bielle
qui produit le mouvement de va-et-vient d'un chariot glissant dans une
coulisse verticale, taille dans un fort pilier. Ce mouvement de bas en
iiaut
fait
actionne le mcanisme qui, par l'intermdiaire d'une roue dente,

avancer le chariot porte-objet dans la coulisse horizontale. Voici
comment
avancement le chariot vertical porte un levier

un excentrique. Suivant la position de cet excenti-ique, un autre levier, portant un crochet son extrmit, entrane un
plus ou moins grand nombre de dents de la grande roue dente. Celle-ci
(jui
se produit cet
vient buter sur
micromtrique qui fait avancer le chariot horizontal. Tel

du microtome de Minot
les modles des divers consd'une
tructeurs varient trs peu. On peut les classer en doux groupes
part, le modle Zimmermann possde deux leviers commandant la vis
actionne
la vis
est le principe
micromtri([ue, ce qui permet d'avoir 10 paisseurs de coupes diflerentes; d'autre part, les autres modles ne possdent qu'un seul levier,
ce (jui limite le nombre des paisseurs possibles 6. Mais la maison
lgamment tourn la difficult en adojjtant l'excentrique,

ce qui porte 18 le nombre des ])aisseurs de coupes qu'on peut
obtenir. Ces paisseurs varient, pour le Zimmermann, de un demi-i;.
20 [X et pour le Litz de 1
25 [x.
Leitz a trs
[j.
fabriqu par Stiassnie, est un instrument parfait, dont le seul dfaut est son prix lev. Il cote en elfet 500 francs,
alors qu'un bon Minot ne vaut que 200 250 francs. Dans le Radais, le
porte-objet n'a qu'un seul mouvement vertical; le mouvement micromtrique horizontal est report sur le cluiriot du rasoir. On peut couper
indiffremment le collodion ou la parafline, en modillant l'inclinaison
du rasoir. Nous verrons (jue le Minot possde le mme avantage.
Le microtome Radais
',
Le microtome rocking, du type Cambridge, est fabriqu par un grand

nombre de constructeurs. C'est avant tout un instrument lger, utilisant
ne pouvant couper que de petites pices. En
de coulisses comme dans le Minot le bras porteobjet oscille autour d'un axe (jui tourne dans une gorge demi-cylindrique. Cet axe est maintenu en ])lace par un ressort boudin; on
comprend donc que, si la rsistance de l'objet dpasse celle du ressort,
le bras est repouss en arrire et les coupes ne se font plus, f^n outre,
|)ar suite de la nature du mouvement du bras porte-objet, la
pice
les rasoirs ordinaires et
effet,
il
n'y a pas
ici
une trajectoire, d'o il rsulte que les coupes sont des calottes
sphriques trs faible courbure, au lieu d'tre planes comme avec le
Minot ou le Radais. Malgr ces inconvnients, le rocking est un excellent instrument, trs srieux et bien moins cher que le Minot ou le
Radais. Il est iiulispensable qu'il soit muni d'un porte-objet trois
axes indpendants, permettant une orientation parfaite de l'objet.
A la rigueur, on peut faire des coupes la parafline avec les microtomes celloidine des types Jung ou Thonia, mais les rsultats ne sont
pas aussi bons et il est notamment difliril(> d'obtenir des coupes en
dcrit
1.
M. Radais, Microtonie
expcr. et yen.
(4), I,
cliariot
notes et revue,
verlicat
sans
p. 65-75, 1903.
glissire.
Arch.
de zool.
333
est d ce que le rasoir est mobile et ce qu'il peut

vibrer trop facilement, puisqu'il n'est fix que par une extrmit.
rubans. Ceci
Emploi du microtome de Minot.
Cel
emi)loi ncessile les
pi'paralioii de l'objet, orientation du rasoir,

oprations suivantes
confection des coupes'.
:
Prparation de
1.
l'objet.
aprs l'inclusion, est taill la
Le bloc de paraffine, obtenu
forme convenable
et fix sur
le
plateau porte-objet. Lorsqu'on s'est servi des barres de Leuckart

ou des botes en papier, on obtient des blocs prisiuatiques, dont
on doit retrancher l'excdent de paraffine. 11 suffit que l'objet soit
entour de tous cots par un mur trs mince d'environ 1 2 mm.

d'paisseur. Le bloc ne sera pas trop haut, 10 15 mm. suffisent
largement pour les pices de dimension moyenne. Lorsqu'on a

inclus dans un verre de montre ou dans une capsule, on taille la
masse de paraffine en forme de prisme rectangulaire. La paraffine doit tre dbite par petits copeaux, avec une lame bien tranchante. Il ne faut jamais essayer de couper un bloc en deux ou
d'enlever une portion paisse, car on risque de voir la masse se
fendre irrgulirement et de dtriorer l'objet. Les rognures de
paraffine sont soigneusement mises part pour tre refondues,
filtres
au besoin
et
poiu'
servir
confectionner de nouveaux
blocs.
Pour fixer
le
vrir ce dernier
cette substance fondue, soit
Au moment
commence par recoude paraffine, soit en le trempant dans

au moyen d'un fer luter (fig. 181).
bloc sur le porte-objet, on
dune couche
de fixer
le bloc,
on
fait
fondre cette couche de paraf-
on ap])lique rapidement le bloc. Pour assurer

une adhsion parfaite, il faut encore, avec le fer chaud, faire
fondre la paraffine autour des quatre cts et, au besoin, en ajouter
fine
avec
le fer et
un peu, de manire former un bourrelet. Le tout est refroidi

sous un robinet d'eau.
On
procde alors
la
du bloc. En effet, peu

une direction quelconque,
taille dfinitive
les faces latrales aient
importe que
mais il est essentiel que les faces suprieure et infrieure soient
parallles, au moins dans le plan de section. S'il en est autrement,
1. Il va sans dire
que le microtome doit tre solidement tix la table avec
des vis ou avec deux presses vis. Pourtant, avec les modles lourds comme
celui de Leitz, il suffit de poser l'instrument sur une main de papier jo=eph pour
lui assurer une stabilit suffisante.
MTHODES GNRALES
334
on obtient nn ruban courbe,
difficile taler et coller correcte-
les ])rparations ainsi
obtenues ont gnralement un aspect

le bloc avec un scalpel ou un vieux
ment;
trs
disgracieux.
On
taille
rasoir.
Il existe des appareils (|ui facilitent beaucoup cette opration et permettent de donner aux blocs de paraffine une forme gomtrique. Un
des plus pratiques est reprsent par la figure 164. C'est celui de Zimmermann de Leipzig. Le porte-objet est fix dans une coulisse, termine
on peut couper les quatre faces exactement

par un tambour divis
angle droit, en amenant successivement en face de Tiiidex les extrmits
de deux diamtres perpendiculaires.
La vis S sert avancer et reculer
l'objet. Le couteau est guid par les
:
deux
tiges verticales.
La
face
tre
doit
suprieure
rendue bien plane, en grattant
la
paraffine avec le scalpel, jusqu' ce

que la surface de Tobjet soit visible.
164.
Fig.
Appareil pour
de parafnne.
Lorsque le bloc est coll

on fixe le porte-objet sur
tailler
taill,
les blocs
chariot et, au
indpendants, ou de
la
exactement
pour
l'objet,
axe et paralllement
trois
le
axes
genouillre, suivant le modle, on oriente

le couper perpendiculairement son
face qui a t repre au
la
l'inclusion.
2.
moyen de
et
Orientation du rasoir.
Le
moment de
rasoir est fixe et plac per-
pendiculairement au bloc couper, mais le tranchant peut tre

plus ou moins inclin vers ce bloc. Cette inclinaison doit tre
suffisante })Our
vertical,
que
l'objet,
ne puisse toucher
dans son mouvement de va-et-vient

le
dos largi du couteau.
Une
incli-
naison insuffisante se reconnat aussi au son mtallique mis jiar

le rasoir, lorsque l'objet repasse devant lui, avant d'avoir t
avanc par la vis micromtrique. Au moment o se fait la coupe,

on entend un bruit sourd, qui rsulte de l'crasement de l'objet
par
on arrte alors
le rasoir. Si
trique et
si
on
fait faire
l'objet
le
mouvement de
une course
la vis
microm-
verticale, on constate
une deuxime coupe, bien que l'objet n'ait pas

t avanc. En effet, le bloc, comprim lors de la premire coupe,
reprend sa longueur par lasticit. Par suite de cette compression,
qu'il se produit
les
coupes sont
})lisses et
d'paisseur ingale.

Une
cou})e, la
lame vibre
et
met un son sec
et lev.
coupes ont tendance s'enrouler, mais
les
335
inclinaison trop forte est tout aussi prjudiciable.
chaque
Non seulement
elles sont
ondules,
c'est--dire que, par suite des vibrations de la lame, elles prsentent
des portions alternativement paisses
et
minces.
En
outre,
de temps
Tluclinaison
est
Si
des
autre,
par trop accencoupes manquent.
un racloir,
un
mais
comme
comme
le
rasoir
coin,
tue,
n'agit plus
elles
peuvent tre fragmentes longitudinalement
et,
arrache des portions de tissus.

L'inclinaison se rgle au moyen des vis de pression qui servent
fixer le rasoir. Ces vis sont gnralement au nombre de quatre,
disposes par paires de chaque ct du porte-rasoir. On peut
et
comme
adopter,
que la facette qui fait face

dans lequel Tobjet se meut.
Le rasoir tant concoupes.
rgle pratique,
l'objet doit tre parallle au plan

3. Confection des rubans de
venablement inclin
on libre
l'arrt
et le porte- objet fix la
du microtome
et,
pince d'orientation,
saisissant le volant,
on amne
le placer
l'objet au-dessus du rasoir, de manire
bien paralllement au tranchant. Il est trs important que, pendant celle opration, l'objet ne touche pas le tranchant; il faut
avec prcaution
bien se garder d'en enlever une tranche paisse, sous prtexte

d'entamer le bloc. On risquerait de dcoller l'objet et de dt-
gravement le rasoir. Il faut, au contraire, fixer l'objet une

un quart de millimtre, et
petite distance du rasoir, un demi ou
l'amener au contact de la lame par le jeu du chariot micromriorer
trique.
Il est
prfrable, pour chaque nouveau bloc, de ramener la vis
micromlrique son point de dpart. Avec le Minot de Leilz,
cette
manuvre
ciale qui
du
s'excute instantanment, grce une pince sp-
permet de dsembrayer
la vis.
Les positions respectives
pour chacun d'eux, soit

en avanant ou reculant le porte-
rasoir el de l'objet se rglent ensuite
avec
la
coulisse
objet, suivant la
du
rasoir, soit
hauteur du bloc.
Avant de commencer couper, il faut aussi rgler Vpaisseur

des coupes, au moyen du disque gradu ou de l'excentrique, suivant les modles. On peut commencer couper 10 ou 12 [x,
puis passer ensuite 5 ou 6 a, qui est l'paisseur normale des
bonnes coupes histologiques.
faire des
coupes plus paisses,
particulire
du
rasoir,
car
Si,
il
pour entamer
faut rserver
la partie
le bloc,
on veut
pour cela une zone
du tranchaut ayant servi
METHODES GKNERALES
336
coupes paisses ne peut plus donner de bonnes coupes

minces, sans avoir t affte de nouveau.
Tout tant l)ien en place, on tourne la manivelle du microtome
faire des
avec une vitesse modre. Si
le
bloc a t bien inclus, le rasoir
temprature est convenable, les coupes se

collent automatiquement les unes aux autres, de manire former
une chane ou ruban. Cbacune s'attache par son bord antrieur
bien afft et
la
qui
de
coupe qui
si
la
la
prcde
et
par son bord postrieur
la
coupe
la suit.
Les rubans de coupes constituent un des principaux avantages

ces rubans sont trs faciles manila mthode la parafline
:
puler et coller sur les lames. Pour les coupes en srie, on est
absolument sr de Tintgrit de la srie et de la conservation de
Tordre des coupes, sans qu'il
dranger sans s'en apercevoir.

Il est conseiller de ne pas
soit
possible d'en perdre ou d'en
faire
de rubans trop longs.
On
premires coupes glisser sur la lame et, ds que le ruban

a dpass celle-ci, on le saisit par son extrmit avec une pince
fine, au moyen de laquelle on le soutient sans exercer de traction,
laisse les
On peut en
coupes se font bien. Pour
couper le ruban, on prend un bon scalpel, au moyen duquel,
sans lcher la pince, on recueille l'autre extrmit du ruban sur
tout en
tournant
la
manivelle de l'autre main ^
drouler ainsi 20 30 centimtres
si les
lame du rasoir, en ayant bien soin de ne pas rayer le tranchant.

Le ruban est ainsi transport, avec la pince et le scalpel, sur une
feuille de papier o on l'tal.
Il est bon de savoir que le moindre courant d'air peut dchirer
le ruban et disperser les coupes. Il faut mme viter de parler en
la
manipulant les rubans. Un autre accident provient de l'lectrisation du ruban, qui se tord et ondule dans l'air et vient souvent
toucher une pice du microtome laquelle il se colle. Pour
viter cet ennui, on ne dbitera que de courtes portions
la fois.
Ils consistent bien

Soins donner au microtome.
bonne huile de vaseline. Il
graisser les coulisses au moyen de
4.
que ces coulisses soient serres juste point, sans jeu

Ce rglage se fait, pour chaque coulisse, au
vis. La vis micromtrique doit tre
ou
deux
de
quatre
moyen
faut aussi
ni excs de serrage.
1. Je considre comme superflus les appareils spciaux destins drouler

rubans de coupes sur une bande de papier ou de toile.
les
METHODES POUR EXCUTER LES COUPES
337
serre suffisamment, autrement la roue dente n'est pas entrane

par le levier et le chariot n'avance plus.
Ds qu'on a fini de couper, il faut enlever le rasoir et le

remettre dans sa bote. Cette prcaution a non seulement pour
but de mnager le tranchant, mais encore d'viter des accidents
Rien n'est dangereux comme de laisser un rasoir sur
un microtome paraffine; le tranchant dirig en haut peut, la
moindre inattention, produire des coupures terribles.
trs graves.
va sans dire que
plus minutieuse propret est de rigueur.

un chiffon imbib de tolune,
de la paraffine adhrente, provenant des dbris de coupes. Cette
opration doit tre rpte, pendant la confection des coupes, autant
Il
Le rasoir
de
la
doit tre dbarrass, avec
fois qu'il est ncessaire, car le
blement
si le
Lorsque
ruban ne peut glisser convena-
rasoir n'est pas parfaitement propre.
microtome ne
le
sert pas,
il
doit tre recouvert
d'une
cloche, d'un cadre vitr ou au moins d'une bote de bois ou de

carton, de manire le prserver de la poussire.
iMinot,
qui
le
1.
la
et remdes.
Malgi la perfection du mcanisme
dbutant est souvent aux prises avec des difficults
Insuccs
5.
du
le
rebutent, lorsqu'il n'en connat
t)as la
cause
et le
remde.
ou bien le chariot n'avance pas parce que

Les coupes ne se font pas
micromtrique est fond de course, et alors il faut la ramener au
:
vis
point de dpart, ou bien a du jeu, et alors il faut serrer la vis de rglage

il arrive aussi que le rasoir n'a pas t serr dans sa pince et qu'il se dplace
;
devant
l'objet.
entend un bruit mtallique, dont il faut chercher la cause. Normamicrotome est silencieux, on ne doit entendre que le bruit du
levier qui rencontre l'excentrique et celui de l'encliquetage. Les autres
bruits proviennent toujours du rasoir, dont l'inclinaison est mauvaise;
2.
On
lement
le
faut donc vrifier cette inclinaison. 11 peut arriver aussi, avec les
il
blocs trs bas et trs plats, qu'une des vis d'orientation vienne buter
sur une des pices du chariot porte-rasoir. Dans ce cas, on modifie
latralement la position de ce chariot, ou bien on avance le porte-objet,

de manire pouvoir reculer un peu le chariot micromtrique horizontal.
3. Les coupes s'enroulent et le ruban ne se fait pas. Il y a cela plusieurs
causes gnralement, cet accident est d ce que la parafline est trop
dure ou le laboratoire trop froid. On y remdie de plusieurs faons
1" couper plus mince, 2 chauffer le laboratoire, 3 refaire l'inclusion
dfinitive avec une paraffine plus tendre. Souvent le premier remde
:
suffit.
4.
Les coupes se font bien, mais ne se collent pas
mmes remdes que
})0ur le
n 3.
En
outre,
il
mmes
suffit
causes et
quelquefois de
vite pour faire adhrer les coupes.

Les coupes se plissent exagrment et le ruban colle au rasoir.
la paraffine est trop tendre ou le
C'est le dfaut contraire du prcdent
tourner un peu plus

5.
M. Langeron.
Prcis de Microscopi,
-^^
iMETHODES GENERALES
338
comment on peut y remdier i" couper

plus pais; 2" couper dans un endroit plus froid (cave, courant d'air, etc.);
3" refroidir le bloc et le rasoir dans l'eau glace et se hter d'obtenir
laboratoire trop chaud. Voici
(juelques coupes; 4 refaire l'inclusion dfinitive avec
une paraffine plus
dure.
Ces
inconvnients se font surtout sentir dans la saison chaude et

pays tropicaux. Pourtant, avec de la (taraffine 55 et en coupant du grand matin, on peut arriver tourner la diflicult.
6. Le ruban est courb dans un plan horizontal. 11 a t dit (p. .333) que,
pour empcher cet accident, il fallait que les bords suprieur et infrieur
dans
les
du bloc soient exactement
parallles.
Les coupes sont stries ou dchires. Cet accident provient souvent

les petites dents et
d'un polissag(^ insuftisant des facettes du biseau
stries microscopiques suffisent pour dilacrer les coupes. Des dbris de
tissus, qui restent adhrents au tranidiant et se dressent au-dessus de
son arte, suffisent aussi pour pioduire des stries et des dcliirures.
Dans ce cas, on y remdie en passant sur les deux faces du rasoir un
7.
linge imbib de tolune ou simplement la pulpe du doigt.

8. Les coupes se dtachent du ruban et ce dernier est trou de perforations rgulires correspondant l'objet. Cet insuccs se produit lorsque
l'inclusion dTinitivc a t faite dans une paraffine trop froide
l'objet
n'a pas pu faire corps avec elle. Le seul remde consiste recommencer
:
l'inclusion.
9. Les coupes sont la fois plisses et ondules: leur paisseur n'est pas
uniforme. Cet accident se produit avec un rasoir trop inclin ou avec
des objets trs durs. Dans le premier cas, le rasoir vibre avec un bruit
sec; dans le second les tissus crient sous le couteau et se coupent jiar
saccades, il faut alors bien alfter le rasoir et couper trs lentement,
en recueillant au besoin les coupes une une.
10. Les coupes se pulvrisent. Ccl accident arrive avec des tissus trs
durcis, cuits ou mal pntrs par la paraffine. Il n'y a aucun remde, si
ce n'est de collodionner la surface de section. Pour cela on se sert d'un
petit pinceau et de cellodine fluide, mais schant en deux ou trois
secondes, sans laisser de traces luisantes la surface de la paraffine.
On passe ce pinceau trs lgrement sur la surface de section avant
chaque coupe. Il faut avoir bien soin de ne pas mouiller les grands
cts du bloc, car les coupes adhreraient au rasoir. Pour couper, on
attend que la pellicule de collodion soit sche. Les coupes sont recueillies une une et colles au Schllibaum (p. 350).
Les coupes ne sont pas toutes de la mme paisseur, (juelquefois

elles alternent rgulirement^. 11 peut y avoir plusieurs causes
le rasoir n'est pas bien immobilis, il n'est i)as assez inclin, ou bien
enfin la vis micromtrique est mal rgle ou use.
Les prcautions prendre sont
Emploi du microtome rocking.
les mmes (lue pour le Minol. L'orientation du rasoir est automati({ue,
car le porte-rasoir est trs troit et il suffit de bien serrer la lame avec
11.
mme
1. Il ne faut pas confondre cet accident avec un autre phnomne qui rsulte
de l'lasticit de la paraffine. Quand on cesse pendant quelques instants de
manuvrer le microtome. le bloc, qui a t comprim par suite des cliocs successifs contre le tranchant du rasoir, reprend sa longueur primitive. Aussi la
premire coupe qui se dtache, quand on recommence un autre ruban, est-elle
toujours plus paisse, mais les suivantes reprennent l'paisseur primitive.
339
METHODES POUK EXCUTER LES COUPES
les deux vis de pression. L"oI)jcl doit tre petit el pas trop dur. Aux
causes d'insuccs dj numres, s'ajoutent celles provenant de la
rsistance de l'objet qui peut dpasser la puissance du ressort antagoniste.
V.
COUPES
AU COLLODION
Contrairement aux coupes la paraffine,

matiques rapides ne conviennent pas pour
leur faire subir une transformation et
lent.
place
microtomes auto-
coUodion; il faut
leur donner un dbit plus
mais le Radais
[leut convenir pour cet usage,
Minot s'y adaptent trs bien. Pour ce dernier, on rem-
Le rocking ne
le
et
les
le
le
et on prend
porte-rasoir horizontal par une pince oblique
les meilleurs microtomes

porte- objet sj)cial. Bien entendu,
glissire, des types
horizontaux
microtomes
sont
les
collodion
un
Thoma
ou Jung. Mais, pour
travailleur habitu la
le
marche
des microtomes automatiques, il est

rapide, silencieuse et propre
bien dsagrable de travailler avec un instrument qu'il faut inonder
d'huile sur les glissires et d'alcool sur le rasoir. Aprs chaque
il faut effectuer un
nettoyage complet, sous peine de voir
sance,
les glissires
encrasses ou rouilles
ment compromis. Aussi
et le
fonctionnement graveaux fervents de la
conseillerai plutt
je
ne coupent qu'exce})tionne!lement au collodion, de

paraffine, qui
conserver leur Radais ou leur Minot, en les modiiiant pour la circonstance.
Uuel que
soit le
1.
un
Prparation de
l'objet.
lige entour de papier
n'a qu' fixer le
la
microtome,
mme.
(p.
la
Lorsque
est la
l'objet a t inclus sur
coup. nO
pince porte-objet. Mais ce moyeu
316),
bouchon dans
technique fondamentale
il
est tout prt tre
ne convient que pour des objets petits et tendres, car le lige se

dforme facilement sous la pression du rasoir et on risque d'obtenir
des coupes en forme de calotte, trs difficiles taler entre lame
et lamelle. Pour viter cet inconvnient, on doit coller les blocs de
cellodine sur des petits blocs cubiques de bois blanc, de 2 cent,
de ct environ, ou sur des blocs de stabilit. On emploie pour
cela de la cellodine trs paisse;
dans
le
chloroforme ou
de cellodine doit tre trs hsse
Le porte-objet
on
laisse scher, puis
l'alcool faible.
est orient
de
et
La
on durcit
face infrieure
du bloc
mouille d'alcool-ther.
telle sorte
que
le
bloc de cellodine
METHODES GENERALES
340
prsente un de ses angles au Iranchanl du rasoir. 11 va sans dire

cette opration
que Tobjel est orient au moyen des trois axes
:
transparence du bloc.
Le rasoir doit tre plac trs
2. Orientation du rnsoir.
la
pice, de manire utiliser la plus
obliquement par rapport
de
la lame pour cba(jue coupe. 11 est
grande longueur possible
est facile
bon
grce
d'avoir,
la
pour
le
collodion,
un
rasoir particulier, dos
moins
large et lame plan-concave beaucoup plus mince. Les coupes se

feront bien mieux qu'avec les pais couteaux paraffine. Il n'est
plus question
ici
du
d'inclinaison, le biseau infrieur
rasoir doit
tre parallle la surface de section.
Confection des coupes.
3.
celles-ci doivent tre
que
le
chariot
Avec
les
microlomes
glissires,
inondes d'huile de vaseline, de
porte-rasoir glisse sans
chariot pleine main et on lire soi

bien franc, sans lenteur, ui hsitation.
telle sorte
On
difficult.
saisit
ce
mouvement
Le mouvement microm-
le
rasoir d'un
fait monter la pice aprs chaque coupe est

automatique
q:ii
ou non, suivant le type.
Avec le Radais ou le Minot modifis, il faut tourner le volant
beaucoup moins vile que pour les coupes la paraffine, d'autant
trique
plus que l'objet est mobile et qu'il est peut-tre un peu plus difficile
couper correctement qu'avec

20 a environ.
les
microtomes
glissires.
On
coujie
Lorsque
la
cellodine a t durcie par les
mthodes ordinaires,
faut arroser d'alcool 70 le rasoir et l'objet, pour

ne se desschent pas et glissent bien sur le rasoir.
l'alcool
la
un
installer
que
On
il
les
coupes
peut verser
main, avec un flacon compte -gouttes (fig. 166), ou

au moyen duquel l'alcool tombe goutte
dispositif,
goutte automatiquement.
Aprs traitement par le mlange de chloroforme et d'essence de
cdre, on peut couper sec, ce qui est beaucoup }dus propre et
plus commode. Je recommande particulirement celte mthode
ceux qui ont l'habitude de la paraffine

complications apparentes du collodion.
Quel que
dans de
soit
le
et
qui reculent devant les
procd adopt, les coupes seront recueillies

o on les conserve en attendant le traitement
l'alcool 70,
K
Pour empcher l'enroulement des coupes au collodion,
ultrieur
1.
Les coupes la glatine et

le coupes au collodion.
comme
la ijomnio
g-lycrines se font
le
exactement

meilleur
tailler
moyen
consiste attaquer le bloc par
en forme de prisme triangulaire,
341
un angle ou
le
qu'on attaque par
le
sommet.
APPENDICE
COUPES PAR USURE ET POLISSAGE

Lorsqu'on veut obtenir des sections minces d'organismes ou d'organes
calcaires ou siliceux, sans dissoudre prablement les parties solides, il
faut employer des mthodes d'usure et de polissage, analogues celles
roches et les fossiles.

qui servent tailler des plaques minces dans les
Ce genre de prparation s'applique aux os et aux organismes incrusts,
tels que les Coraux, les coquilles de Mollusques, etc. Comme ces oprations sortent
du domaine du
travail courant, je serai trs
bref leur
sujet.
scier, avec une petite scie dcouper, un disque
Ce disque est d'abord poli sur une face, puis coll au
baume sec sur une lame et eniin us et poli sur l'autre face. Il ne r^ste
plus qu' monter en prparation.
Le polissage se fait successivement sur une pierre fine aiguiser,
puis sur un verre finement dpoli. On n'emploie ni meri, ni aucune
poudre polir, mais seulement de l'eau; on use en dcrivant des cercles
la surface de la pierre polir. Pour coller la prparation sur la lame,
on se sert de baume pais naturel, non dissous, dont on dessche une
flamme.
goutt sur lame, en chauffant avec attention sur une trs petite
viter avec soin la production de bulles. Par refroidissement, le [baume
doit former une masse dure. On peut employer aussi la glycrine glatine (formule de Deane, p. 337, note 1).
Quand l'objet est devenu assez mince i)Our tre transparent, on mont
sec ou mieux dans le baume fondu (ou la glycrine glatine); on peut
On commence par
de l'objet
polir.
bien observer ainsi les canalicules rem])lis d'air.

scier et polir des objets renfermant des parties molles, on commence par les colorer in Loto au carmin ou Thmatoxyline, puis on les
imprgne de baume dissous dans le tolune. On fait vai)orer le tout
l'luve, de manire obtenir une sorte d'inclusion dans le baume.
Lorsque celui-ci est assez dense pour se solidifier par le refroidissement,
on retire l'objet, puis on le scie et polit comme plus haut et puis on le
monte dans le baume dissous dans le tolune ou le xylol.
trs
Pour
CHAPITRE
XII
TRAITEMENT ET COLLAGE
DES COUPES
I.
COUPES
LA PARAFFINE
Les coupes la paraffine sont colles sur lames, sches, puis

colores et montes an baume. Un des grands avantages de la
mthode la paraffine est donc la possibilit d'effectuer toutes les

oprations sur lames, procd beaucoup plus facile, ]lus rapide et
plus sr que celui qui consiste transporter chaque coupe de
liquide en liquide.
Les rubans de paraffine

Collage des coupes sur lames.
nous
avons
obtenus
ont
t
que
transports sur une feuille de
papier et tenus Tabri des courants d'air.
On
peut conserver
longtemps ces rubans dans un tiroir, ou mieux dans des botes

plates en carton, ayant environ 25 millimtres de hauteur et IS
sur 24 centimtres pour la longueur et la largeur. Ce procd est
commode pour conserver provisoirement des provisions de

rubans dbits, destins tre colls ultrieurement, si la pice
est intressante, ou tre distribus aux lves, dans les laboratrs
o on
de l'enseignement.
coupes sur lames, on prlve, avec un bon
ou
une
scalpel,
plusieurs coupes et on les dpose sur une lame
bien propre, c'est--dire lave pralablement l'alcool (p. 236). Ce
toires
Pour
fait
coller les
prlvement exige plusieurs prcautions. La longueur du ruban

coller sera proportionne la dimension des lamelles. Lorsqu'il
de coupes en sries, on en met le plus grand nombre posdans un espace correspondant la surface d'une ou de deux
lamelles. On range les rubans cte cte, en sries disposes en
s'agit
sible
largeur
(lig.
165, 1) ou en hauteur
(fig.
165,
2]
TRAITEMENT ET COLLAGE DES COUPES
343
Il faut, en
compte de la dilatalion qu'prouvera le ruban, une fois qu'il sera sectionn dans
rinlervalle qui spare deux coupes. Cette opration ne prsente
aucune difticult avec les objets volumineux ou de teinte fonce
calculaiil les
dimensions, tenir
(pices fixes aux mlanges osmiques ou picriques), mais elle

peut tre dlicate avec des pices trs petites ou incolores. Dans
ce cas, un bon moyen est de prvoir la difficult avant de faire les
coupes
et
de donner au bloc une forme trapzodale, en coupant les

non parallles. Il en rsulte une srie de crans, cor-
petits cts
respondant chacun
spare
la
ligne qui
deux coupes successives.
On
peut encore incliner lgrement le bloc sur Thorizonlale, de
manire ce que les grands cts

ne soient pas tout fait parallles
au rasoir; on obtient encore une
srie
de
crans,
dlimitant
les
>
i
j
MTHODES GNRALES
344
diffiCLill
pour que
de l'talement consiste clianffer

les
coupes
les
lames juste assez
s'talent sur le liquide tide, sans toutefois
il est facile
d'y
paraffine fonde. Avec un peu d'attention,
arriver, en choisissant sur l'tagre l'endroit o la temprature
que
la
est la plus favorable.
Il
faut aussi
que
les
coupes
flottent
librement
sur une couche paisse de liquide. On voit alors les coupes se

ce moment, on relire
dplisser et devenir d'une planit parfaite
;
lame de l'tagre et on procde au schage.

Avant d'tudier cette seconde opInsuccs et remdes.
revue les divers insuccs qui peuen
nous
devons
ration,
passer
la
vent se produire.
Les coupes ne se dplissent pas, mme en levant la temprature. Cet
le plus frquent, car si les coupes fronces s'talent d'ellesmmes, les plis vritables sont beaucoup plus difficiles faire disparatre. Dans ce cas il faut, avant de chauffer, dplisser les coupes sur la
1"
accident est
du
goutte de liquide avec des aiguilles. Pour cela, on coupe les bords
ruban de paraffine en face des plis et on exerce de lgres tractions
sur
longitudinales. On fera bien, pour les coupes incolores, d'oprer
fond noir (fig. 228). Il est inutile de tenter le dplissement aprs chauiage
et commencement d'talement, car alors les plis sont irrmdiablement
'
colls.
il
est ncessaire
2 Il peut y avoir des huiles d'air sous les coupes
de les enlever avant de chauffer. Pour cela on dplace lgrement les
coupes la surface du liquide. En cas de bulles particulirement
tenaces, la dernire ressource est de piquer la bulle, travers la coupe,
avec une aiguille.
:
3"
cet accident est limit aux l>ords du

de retirer promptement la lame de la
la dposer sur un corps froid. On peut encore
les coupes pour hter le refroidissement. Mais
La paraffine fond. Tant
ruban, rien n'est perdu.

plaque chauffante et de
souffler dlicatement sur
Il
ijue
suffit
la paraffine qui soutient la coupe a fondu, il n'y a plus aucun

remde, car les lments cellulaires seront srement dissocis et rendus
mconnaissables. Weber2 a montr que, mme avant la fusion, il se
produit une dislocation de l'difice cristallin de la paraffine. Ce phnomne, qui dforme la coupe et modifie les rapports des lments, nous
est rvl par l'aspect transparent que prend le ruban de paraffine.
4 Il n'y a pa? asse: de liquide, alors les coupes ne peuvent s'taler
librement, elles se plissent et se desschent sur les bords. Quand on
si
temps de ce dfaut, il est facile d'y remdier.

Le ruban se courbe. Quehjuefois, en effet, la courbure du ruban ne
se manifeste qu' l'talement. videmment cet accident n'est pas grave
en soi et ne compromet pas la qualit des coupes. Il faut pourtant
s'aperoit
5
1. Cette opration est d'autant plus facile que les murs latraux du bloc (p. 333)
sont moins pais.
2.
Weber, Notes critiques sur l'talement et les dformations des coupes la
paraffine. C. B. Assoc. des anatomistes, 3" session, p. 72-77, 1901.
34;j
y porter remde, car des prparations qu'on

laisse en cet tat dnotent, chez l'oprateur, un manque de soin reg-rettable, qui peut se manifester par des ngligences plus graves. Sans
attacher aux dtails d'esthtique une im|iorlance qu'ils n'ont pas, je prs'efforcer
de l'viter
et
tends que ces petits dfauts des prparations sont d'un fcheux augure,
car un travailleur qui ne sait pas s'astreindre les viter, manquera
peu prs srement une prparation difficile. C'est en s'habituant travailler proprement et minutieusement qu'on arrive excuter des
techniques dlicates et voir ce que les autres n'ont pas encore vu. II
faut donc remdier la courbure du ruban et aligner correctement les
coupes. Pour cela, aprs talement, on coupe, avec un bon scapel, de
petits triangles de paraffine, entre chaque coupe, de manire rtablir la rectitude de l'alignement.
Liquides pour rtalement et le collage des coupes.

nous l'avons dit plus haut, dans le procd que nous
recommandons, rtalement et le collage des coupes sur lames ne
sont que deux temps d'une mme opration. Il nous reste donc
Gomme
tudier les liquides employs dans ce but.

Les mthodes recommander sont celles de l'eau distille, de
Teau albumineuse
et
de
la glatine.
Nous tudierons
ensuite les
procds de collage sans talement pralable.

1.
Eau
distille.
Cette mthode repose sur
la
proprit que
possde le verre parfaitement propre de retenir fortement, par

adhsion molculaire, les coupes qui sont mises en contact intime
avec lui.
Deux
conditions sont ncessaires pour russir cette mthode

propres et des coupes parfaitement
:
des lames rigoureusement

tales.
Pour avoir des lames propres, P. Masson conseille (p. 237) de

par un mlange parties gales d'alcool 90 et d'acide
les traiter
chlorhydrique, ou lave ensuite plusieurs eaux et on se sert de ces
lames sans
les
essuyer.
La mthode l'eau
distille est la plus lgante, puisqu'elle
ne
coupes, aucune trace de colle. Mais

elle ne donne pas une scurit absolue et ne convient tout fait
que pour les coupes d'organes parenchymateux, sans cavits ni
laisse,
entre
la
lame
et les
portions chitineuses ou sclroses.

2. Eau albumineuse.
C'est
l'eau
mthode de choix pour
les
fixs
En outre, on gagne de la place et du temps avec des coupes bien alignes

on peut en mettre un plus grand nombre sur une lame.
1.
et
la
dans des liquides non chroms. On prpare

albumineuse au moyen de l'albumine de Mayerqui se trouve
matriaux
MTHODES GNRALES
346
dans
commerce
le
((Triibler).
On
peut,
la
faire
soi-mme en
mlangeant poids gaux de blanc d'uf et de glycrine et filtrant

le mlange. Il faut avoir soin de couper le blanc d'uf en tous sens
avec des ciseaux et de bien le battre avec la glycrine. On ajoute
gramme de
La
fiUralion
sodium dissous dans un peu d'eau.
salicylate de
est
extrmement lente;
il
faut couvrir Tentonnoir
On
poussire.
peut encore liltrer part
blanc d'uf pralablement coup ou battu et le mlanger ensuite
avec la glycrine.
pour
prserver de
le
la
le
XV
A 50
centimtres cubes d'eau distille^ on ajoute

gouttes
et on se sert de ce liquide pour taler
et coller. On peut encore, plus simplement, dissoudre extempora-
de solution albumineuse
nment un peu d'albumine scbe dans de Teau distille et filtrer.

Ce procd convient
3. Glatine. Mthode de P. Masson.
la fois pour les pices chromes ou yion chromes. Faire dissoudre dans un tube essai d'eau distille 1 centimtre carr de
glatine blancbe. Se servir de ce liquide pour taler les coupes.

Scber comme d'habitude. liminer la paraffine par le tolune, laver
l'alcool, puis,
de formol
la glatine., passer dans un mlange

Laver l'eau et colorer.
(1 partie) et d'alcool (4 parties).
Ce procd
mlanger
pour tanner
est bien plus rationnel
que ceux qui consistent
la glatine liquide la substance insolubilisante.
Schage des coupes.
Quel que
soit le liquide
employ,
faut, ds que les coupes sont tales, faire couler avec prcaution l'excs de ce liquide et placer les lames sur un goutloir, de
sans
prfrence l'tuve 37. Pour se dbarrasser du liquide,
il
les coupes, on maintient celles-ci avec la pointe d'une

pendant qu"on incline doucement la lame. Quand on
emploie le procd de l'goultoir, il est inutile d'essuyer la lame.
Ds qu'on est assur que les coupes ne se drangeront plus, on
dranger
aiguille,
les dispose
une dernire
fois
avec l'aiguille et on pose
la
lame sur
s'coule
goutloir plaques photographiques. L'excs d'eau
trs bien et l'adhrence devient parfaite.
un
Les coupes doivent tre parfaitement dessches avant d'tre

la paraffine. 11 faut donc les scher la temprature ordinaire au moins pendant douze heures ou l'tuve 37**
dbarrasses de
au moins iiendanl trois ou quatre heures. Pour cela on

sur l'gouttoir ou dans une bote en bois rainures.
P.
Masson
tale la
les laisse
temprature de 46, goutte le liquide,
papier mousseline, sche l'tuve
essore les coupes avec du
347

42-45 en 15 minutes.
obtient ainsi des coupes transparentes
Il
et trs adlirentes.
limination de la paraffine.
est bien
Il
vident que les
coupes ne peuvent tre colorc'cs correctement*, si elles ne sont

pas dbarrasses de la couche de parafllne qui les imprgne.
Mme
le
si
matriel a t color en masse avant les coupes,
monter au baume.
commence par chauffer modrment la lame, de manire
il
faut encore enlever la paraffine avant de
On
faire fondre la paraffine.
Cette fusion
n'est d'ailleurs indispen-
sable qu'avec le procd Talbumine, car il a alors pour but de

coaguler la mince couche de colle et de rendre l'adhsion dfinitive plus parfaite.
En
oprant ce chauffage, il faut prendre l)ien soin de ne pas

dpasser trop le point de fusion de la paraffine, sous peine de dt-
gravement les coupes. Je signale cet cueil parce que j'ai

vu souvent les dbutants y chouer. Il est commode d'oprer en
posant la lame sur une portion convenablement choisie de l'tagre
riorer
de Malassez
147); on surveille mieux
(fig.
la
fusion qu'avec la
flamme du bec Bunsen et on obtient un chauffage plus gal.

Ds que la paraffine a fondu, on n'a plus qu' plonger la lame
dans un cylindre Borrel plein de tolune. Il est indiffrent que la
paraffine se soit solidifie de nouveau aprs fusion.
Lorsqu'on ne traite qu'une lame la fois, on peut se contenter
de verser sa surface du tolune pour dissoudre la paraffine, puis
de Talcool 90 pour chasser le tolune et enfin de plonger
lame dans l'eau. Les flacons compte-gouttes,
analogues celui que reprsente la fig. 160,
sont trs
commodes pour
la
ces oprations..
on colore de nombreuses lames, il

a
intrt
installer une batterie de cyhndres
y
Borrel, de manire dparaffiner rapidement
Mais
les
si
coupes.
me
Je
sers
d'un
bloc
de bois
167) ou d'une tagre en fil de fer (fig. 168)

contenant cinqi cylindres Borrel"-. Les deux premiers sont remplis de tolune et servent dis(fig.
'
Fig. i66.
Flacon
compte-gouttes
tolune
pour
ei
aicooi.
la paraffine, les trois autres sont pleins

d'alcool 90 et destins liminer le tolune paraffin.
soudre
1.
2.
Nous verrons page 415 une exception

On peut prendre aussi des tubes JoUy
quantit do liquide.
cette rgle (procd

i
Gg. 1701
qui exigent
En
sor-
de Scliillingi.
une moindre
MTHODES GNRALES
348
tant
du troisime
Fi;?. 167.
alcool,
coupes peuvent tre plonges dans
les
Batterie
de cylindres Borrel
dans un bloc de bois.
Batterie de cylindres Borrel

dans nue tagre en fil de fer.
Fig. 168.
de Feau contenue dans une bote rainures
(fig.
169} en verre ou
en porcelaine.
On
croit
gnralement
quîl faut
laver les coupes l'alcool absolu en

les sortant du tolune.
C'est une
erreur. Je
Fig.
Je
169.
Cuve rainures en
verre o en porcelaine.
recommande
90
et
me
ce
sers toujours d'alcool

ne se trouble
liquide
'
jamais.
tout particulirement l'emploi des batteries de tubes,
parce que ce procd est trs conomique i. On peut passer dans

mme liquide une trs grande quantit de coupes. Il faut changer
le
le
tolune ds qu'on voit des cristaux de

paraffine se former au-dessus du liquide
sur la paroi du tube. On jette alors le
contenu du premier tube; le second tube
devient le premier et peut servir longtemps
encore. 11 faut changer l'alcool ds que
les coupes, au sortir de cet alcool, donnent
une teinte laiteuse. On rejette

deux premiers tubes et on fait
passer le troisime la place du premier.
l'eau
alors les
170.
Batterie de tubes
Jolly dans une tagre en fil
Fig.
de
Ds
tes,
fer.
({ue les coupes sont bien hydrafaut les colorer, car il est trs
il
mauvais de
les garder longtemps dans

ont t fixes au Bouin, il est nceslimin avant la coloration. Pendant
le collage des coupes, une grande quantit de ce corps s'est dj dissoute dans l'eau tide qui a servi l'talement et, si les cou|)es sont
minces, elles sont peu j>rs dcolores. Avec des coupes plus paisses,
il
faut prolonger le sjour dans les alcools, au besoin l'tuve, jusqu'
disparition complte de toute coloration jaune.
l'eau. Pourtant, lors([ue les pices
saire que tout l'acide picrique soit
Un bon moyen
d'activer V limination de l'acide picrique est d'employer
procd de Jellinek, dj mentionn p. 271, note 1. On ajoute l'alcool

quelques gouttes de solution aqueuse sature de carbonate de lithium;
le
1. En mettant dans
chaque cylindre un prisme de Borrel (fig. "245, p. 630) on
diminue la quantit de liquide et on peut traiter trois lames la fois ou mme
six en les plaant dos dos.

On
349
y plonge
coupes on voit alors le trouble
disparatre et l'alcool jaunir. On ajoute peu peu la solution de carbonate de lithium, jusqu' ce que le prcipit ne se dissolve plus. A ce
moment les coupes sont dcolores et il ne reste plus qu' les laver
dans un dernier alcool.
l'alcool se trouble.
les
Les coupes, colles

Conservation des coupes colles.
par un des procds que nous venons d'indiquer et bien sches,
peuveul tre conserves indliuiment, pourvn qu'elles soient
Tabri de la poussire. On peut constituer ainsi des rserves prcieuses, destines soit des travaux futurs, soit renseignement.
A mon
avis, le
meilleur procd pour conserver
est de les garder dans des boites rainures
les coupes colles

fermant bien. Mais il
ne faut pas oublier de bien tiqueter les coupes, car, au bout de

(juelques mois ou de quelques annes, on peut ne plus les reconnatre et alors on n'a plus qu'un matriel inutilisable. L'encre de
silicat.'e (p. 455), bien sche, rsiste tous les liquides. Les
des crayons gras pour le verre s'effacent sous le doigt et
dans le tolune. On peut aussi graver un numro d'ordre, soit avec
Chine
traits
un
petit
de
silex.
diamant crire sur

Voir
p.
455
le
le
verre, soit
moyen
mme
avec un fragment
d'crire sur le verre avec
une
pointe d'aluminium.
Ces procds, qui suppriProcds rapides de collage.
ment l'talement des coupes, ne peuvent tre employs qu'avec
des coupes non plisses, ni com])rimes. Or il est bien rare,

moins de coupes trs paisses, que la parafline ne soit pas un peu
tass'e et que les coupes aient exactement la mme surface que le
bloc. L"em}loi des procds rapides est
De
plus, i! ne
coupes colles et non colores.
cette
condition.
Albumine de Mayer.
On
donc dj
permet pas
tend sur
la
la
trs limit par

conservation des
lame, avec un pin-
ceau, une trs mince couche d'albumine glycrine, suivant la

formule donne plus haut. Appliquer les coupes sur la lame ainsi
enduite, appuyer lgrement avec un pinceau sec. Passer la

flamme pour coaguler l'albumine et fondre la paraffine. Dparaffiner et colorer.
Ce procd est excellent et donne une adhsion parfaite.

Malheureusement, il ne convient que pour des coupes sans plis.
Henneguy combine ce procd avec celui de l'eau. Il verse de
l'eau distille sur la lame enduite d'albumine et tale comme il a
t dit plus haut (p. 343).
MTHODES GENERALES
350
On le prpare en mlangeant une partie

coUodion avec 3 ou 4 parties d'essence de girofle. On tale en
couche trs mince sur la lame avec un petit [)inceau. et on appliciue les
coupes en les talant avec un pinceau sec. On peut scher pendant
dix minutes Ttuve 37'' ou mme faire fondre de suite la paraffine
et dparaffiner, de i)rfrence par l'ther de ptrole (Field et Martin) qui
ne dissout pas le coUodion comme le tolune.
Ce procd est heaucoup moins sur que le prcdent. 11 n'est
recommander que pour ohtenir trs rapidement une prparation ou
pour certaines manipulations d'lves avec des coupes paisses et non
Collodion de Schllibauia.
(le
plisses.
Le seul insuccs qui puisse se produire, dans le traides coupes avant coloration, est le dcollement. Cet accident
lames mal nettoyes, coupes mal
peut tre d diverses causes
sches, tissus trs sclreux, etc. 11 n"v a (|u'un remde, applicable seuInsuccs.
leuKMit
lement aux coupes paisses, c'est de recueillir la coupe qui se dcolle,

de la colorer sur lame ou dans un verre de montre et de lui faire subir
sur ce support toute la srie des oprations. Gnralement il est prfrable d'abandonner la prparation et d'en faire d'autres. Il faut savoir
(lue certains tissus trs sclross sont rebelles au collage.
Ce procd, conseill par Regaud ',

Collodionnage des coupes.
peut remdier, dans une certaine mesure, au dcollement des couiies
la paraffine. Il ne s'applique qu'aux coupes dj dparafflnes par le
tolune. On prpare la solution suivante
:
CoUodion ordinaire non ricin

ther
Alcool absolu
20
40
40
Au sortir de l'alcool 90' on y plonge les coupes pendant une

deux minutes, on goutte avec soin et, sans scher, on plonge dans
l'alcool 70. Le coUodion est immdiatement prcipit sous forme de
tout dcollement, et
pellicule transparente qui prserve les coupes de
ne gne en rien la coloration. On lave ensuite l'eau et on colore.
II.
COUPES
AU COLLODION
des coupes au coUodion est de ne pas ncesgi-aiid avantage

l'enlvement de la masse d'inclusion. Le coUodion est parfaitement transparent et ne se colore pas avec la majorit des teintures usuelles. On est donc sr, avec les objets fragiles, de con-
Le
siler
server parfaitement Tintgrit des tissus et les rapports exacts de

leurs parties.
devaient tre recueillies au fur et
les
Nous avons dit
coupes
que
Zimmermann {Die botanische Mikiôtechnik, 1892), qui

1. Voir aussi ce sujet
recouvre de coUodion 5 p. 100 les coupes colles avec une solution de glose
1 p. 1000 d'aprs Gravis {Bull. soc. behje de micr., XV, p. 7-2, 1888,i.
:
mesure dans
l'alcool
70".
y a
Il
351
deux uilhodes
})Our
les
On
peut colorer les coupes isolment, en les

passant de godet en godet avec une spatule, chaque godet renfermant un liquide particulier. La dshydratation ne peut tre faite
traiter
ensuite.
avec Talcool
absolu, qui
d'alcool 95", suivi
dun
dissout le coUodion.
ou de bergamote, ou encore par

(xylol 3, acide
phniqu
On
se
contente
claircissement par Tessence d'origan

crist. 1)
phniqu de Weigert
ou aniline (ne dissout pas les
le x\}lol
couleurs d'aniline basiques, mme proportions). Ne pas employer

l'essence de girolle qui dissout le collodion. On n a [dus alors
qu' porter la coui)e sur une lame pour la monter au baume. Le
transport des coupes se fait avec une spatule.
On
peut aussi procder comme i)Our les coupes

sur lames, isolment ou en sries.
la paraffine
et les coller
Je ne mentionnerai que deux mthodes trs simples
mine de Mayer
l'albu-
et la cellodine.
L'emploi de l'albumine de iMayer, conseill par Belles Lee, est

on l'leud sur la lame avec un pinceau, en couche
simple
trs mince, et on dpose la coupe, qu'on fait adhrer
par une lgre
pression; on porte ensuite dansl'alcooi, puis dans l'eau.
trs
Pour pratiquer l'autre mthode, on commence par recouvrir les

lames d'une solution faible de cellodine. Ds que ce collodion a
on dpose
couche de cellodine
fait prise,
l'alcool 80, puis
prserve
le
mieux
les
coupes, qu'on recouvre d'une nouvelle

Aprs vaporation, on plonge dans
faible.
dans l'eau. Cette dernire mthode est celle qui

les coupes, au cours des
manipulations ult-
au fond, le procd qu'emploie Weigert })Our coller

sur une lame des coupes sries la cellodine. Pour empcher
la srie de se desscher, on la
dpose, an fur et mesure, sur une
feuille de papier mince et rsistant,
pose sur un coussin de
rieures. C'est,
buvard imbib
d'alcool.
Quand uue
verse sur la lame collodionne.
srie est complte,
on
la
ren-
CHAPITRE XIV
THORIE DES COLORATIONS

Les procds de coloration jouent un rle considrable dans
technique hislologique moderne, si bien que le dbutant se
trouve rellement perdu, au milieu des innombrables formules
la
prconises par les auteurs. Aussi, avant de commencer Fexpos

des mthodes que nous considrons comme fondamentales,
croyons-nous bon de donner un aperu thorique sur la valeur et

ncessit des colorations, sur la nature des phnomnes de
la
teinture et sur la classification des colorants.
que, dans
cet
ouvrage, nous
no
pouvons
Il
est bien
tudier
entendu
toutes
les
matires colorantes employes en microscopie, mais nous nous

efforcerons de fournir au dbutant des mthodes prouves, qui
le fond de son ducation
technique, et le mettront
de faire un choix judicieux parmi les procds rationnels
constitueront
mine
ou empiri({ues qui sont proposs chaque jour.

Ncessit de la coloration.
Nous savons que les images
produites })ar absorption, dans les prparations colores, sont bien
plus faciles interprter que les images de diffraction donnes par

les prparations incolores (p. 157).
D'autre part, nous avons tabli
lments des tissus possdent tous peu prs le

mme indice de rfraction, ce qui rend leur diffrenciation ojdique
particulirement ardue.
que
les divers
Ces deux arguments nous font cou) prendre de suite
la
ncessit
des colorations, pour Ttude morphologique des cellules et des

tissus.
Nous verrons de
lectives,
plus, en tudiant la nature des colorations dites
que certains colorants prsentent une
affinit
particu-
pour des lments dtermins et que, dans quelques cas, ils

peuvent, jusqu' un certain point., tre compars des ractifs
lire
353
chimiques, qui niellent en vidence certaines portions des cellules

ou des tissus. Ceci nous rvle la ncessit des colorations, pour
Vanali/se chromatique ei microchimique.
Valeur des mthodes de coloration.
sionner sur
et
montr,
ont
est
il
Il
ne faut pas
valeur des mthodes de coloration.
la
bon de
le rpter,
que
Mann
s'illu-
a bien
les anciens liistologistes
d'admirables dcouvertes sans Taide des colorants ou avec
fait
des mthodes rudimentaires. A ce sujet on peut se reporter ce

que nous avons dit (p. 239) de l'importance de l'examen l'tat
frais, sans coloration. Mann fait remarquer aussi que la facilit
avec laquelle on arrive diffrencier beaucoup de structures, par
le moyen des colorants, amne souvent une regrettable lgret
dans
la
manire d'tudier
les
coupes.
Il
est certain
que
la
science
n'a pas progress proportionnellement au nombre

de ractifs colorants qui ont t mis sa disposition. Il
histologique
norme
donc bien savoir que
faut
logie et
que
le
les colorations ne sont pas toute l'histodu micrographe n'est pas d'tre un
devoir
premier
mais de savoir regarder au microscope. C'est l un art

anciens maitres possdaient fond et qu'il serait dsirer
teinturier,
que
les
de voir un peu plus cultiver aujourd'hui.

Pour qu'il y ait coloration vriNature des colorations.
il faut
la
matire
colorante
se fixe sur l'objet teindre,
table,
que
avec une intensit
telle
qui a servi prparer
le
qu'un lavage effectu avec le dissolvant

bain de teinture, ne dcolore pas l'objet.
On distingue, en histologie comme en teinturerie, deux groupes

de colorations. Les unes se produisent simplement par immersion
dans le bain colorant, ce sont les colorations directes (colorations
subslantives des Allemands).
agir directement;
il
faut
que
Dans
les autres, le colorant
ne peut
l'objet colorer soit trait
aupara-
vant par une autre substance, qui

et
qu'on
nomme mordant
par mordanage
binaison que
le
le
prpare recevoir
le
colorant
ce sont les colorations indirectes ou
(colorations adjectives des x\llemands). La comle colorant se nomme une
mordant forme avec
laque ^
On
a propos Ijeaucoup d'interprtations du phnomne des teintures.

n'est pleinement satisfaisante et ne s'applique tous les cas,
Aucune
Du moins
c'est ainsi que nous comprenons ce nom, dont la signilication

pas parfaitement dfinie. Il semble qu'en Angleterre on ne donne le nom
de laques qu'aux composs forms par les mordants basiques avec les couleurs
I.
n'est
acides.
M. Langerox.
23
MTHODES GNRALES
354
si
bien
n'y a pas do llioiie d'ensemble des leinluies el (iifon ne
(lu'il
pourciuoi cl comment nous obtenons des colorations

Nous allons ccpiMidant cx])0ser, trs soniniaircMiicnt, les diffrentes explications (jui ont l('' donnes de Taflinit que \v,s tissus pr-
pas au
sait
jiislo
liislologiques.
sentent pour les
matires
colorantes,
allinit
mtbodes liistolog-iques et cytoloîques.

Pour les partisans de la thorie chimique,
par combinaison du colorant avec le corj)s
il
qui
est
se produit
un
la
base
des
vritable sel,
color. Cette opinion s'appuie
sur les recberclies de savants tels (ju'Elirlicb, JMayer, Flemmin^-, Ucidenbain, Unna, Benda, Micbaelis, Giemsa, etc. La molcule albuminode est considre comme renfermant des groupements acides et
basi(|ucs, auxquels la prcipitation n'enlve rien de leurs proprits
cbimi(ities g-nrales et qui se combinent avec les groupements acides
des matires colorantes. Unna et Golodelz ont insist rcemrle considrable que joue l'oxygne dans
et sur la ncessit de paralyser les proprits rductrices des tissus, par l'emploi de fixateurs et de mordants
oxydants.
Les partisans de la thorie physique, dont le protagoniste est A. Fischer,
ne veulent voir, dans les colorations, qu'une fixation mcanique des
matires colorantes, par suite de phnomnes d'adsorption i, sorte de
condensation ou d'attraction, de nature purement pbysiiiue, comparable
l'action exerce par le noir animal sur les gaz et sur certaines matires
colorantes. On objecte Fischer et ses disciples (jue l'lectivit manifeste par certains lments, pour des colorants dtermins, ne concorde
pas avec une condensation purement physique, qui devrait s'exercer
indiirremment sur toutes les matires colorantes. Au contraire, on
constate toujours que cette lectivit correspond la prdominance des
ou
l>asi(iues
ment (p. 209. note 2) sur le

les phnomnes de teinture
groupements basiques ou acides, dans un albuminode donn.

Il faudrait plutt attribuer Vadsorption des
phnomnes de condensations produits, non plus par les molcules, mais par des particules de
dimensions mesurables, de vritables lments morphologiques. Dans
ce cas, la matire colorante serait nergiquement retenue, dans les petits
interstices (jui sparent ces lments. C'est alors un phnomne superpos la vritable coloration et auquel on remdie par la diffrencialion (p. 360).
Entre ces deux opinions extrmes, vient se placer l'hypolbse de Wilt,

qui considre les colorations directes comme des solutions solides. On sait
en elfet, grce aux rccliercbes de van't llof -, (|ue les corps solides
peuvent prsenter toute une srie de i)roprits qu'on pensait appartenir exclusivement aux liquides; tels sont les [)hnomnes de diffusion
et de dissolution. C'est ainsi que si on comprime fortement l'un contre
l'autre un cylindre de plomb et un cylindre d'or, For diffuse dans le
plomb. De mme, on peut considrer les alliages et les verres colors
comme des solutions solides. Witt admet donc que les colorants se dissolvent dans les tissus solides comme dans de l'eau. La substance
1. C'est Frankenheim
qui a employ le premier, ds 1830, le terme d adsorption
{Lelire voir dcr Cohsion, Breslau, 1835). 11 dsignait ainsi la proprit que possdent tous les corps solides, surtout ceux qui sont linement diviss (noir
animal, mousse de platine), d'attirer et de condenser, sur leurs surfaces libres,
les corps liquides ou gazeux.
2.
Ztschr.
/'.
j)hys. C/iemie,
V, p,
3'-2?,
1810.
355
du colorant, simplement parce qu'elle le dissout plus

facilement que Teau. Les deux dissolvants en prsence, le tissu et l'eau,
se comportent vis--vis du colorant comme deux liquides non miscibles
en prsence d'une substance solide soluble. On peut comparer ce phnomne celui qui se produit, quand on agite de l'iode avec de l'eau et
colorer s'empare
du sulfure de carbone.
Bien que cette thorie
soit
trs sduisante elle
ne rsiste pas cer-
taines objections. Ainsi, il est prouv exprimentalement que les tissus

sont, pour les colorants, des dissolvants beaucoup moins bons que
l'eau. On ne s'explique donc pas comment ils pourraient extraire la
matire colorante dissoute dans l'eau, et on comprend encore moins que

des solutions colorantes trs faibles puissent arriver produire une
coloration trs intense. Le phnomne de la solution solide ne saurait
donc tre qu'un intermdiaire entre la simple absorption ou diffusion et
la fixation
chimique du colorant.
Actuellement, on tend de plus en plus considrer les colorations

comme des phnomnes trs complexes, dans lesquels les actions physiques et chimiques sont synergiques, mais avec prpondrance de ces
dernires. Pour en donner
un exemple,
je
la trs
citerai
ingnieuse
explication propose rcemment par Giemsa i, pour rendre compte des

colorations du noyau. On sait que la substance nuclaire est trs riche
en composs phosphores, principalement sous forme d'acide mtaphos-
phorique. Or Giemsa a montr (jue les couleurs basiques d'aniline,

susceptibles de produire des colorations directes, donnent, avec l'acide
mtaphosphorique vitreux, des prcipits de mtaphosphates colors,
d'autant plus insolubles dans l'excs de liquide que le colorant employ
a plus d'affinit pour les noyaux. Cette raction ne russit ni avec
l'acide orthophosphorique, ni avec l'acide pyrophosphorique; nous
avons donc ainsi le moyen d'essayer un colorant in vitro, au point de
vue de sa valeur comme colorant nuclaire. Ce qui ajoute l'intrt de
cette exprience, c'est le fait que l'albumine, peu ou pas sensible
l'tat normal aux colorants nuclaires, le devient lorsqu'elle est transforme en nucloprotide phosphore. Inversement, Reichenow a montr
que la volutine de VHmatococciis pluvialis perd sa colorabilit, lorsque

ces Flagells ont t cultivs quelque temps dans un liquide priv de
phosphore.
Ces faits, trs curieux, montrent bien le rle que les phnomnes purement chimiques jouent dans le processus de la coloration; mais il est
ncessaire de rappeler ici, avec Mann, que l'ancienne barrire qui
sparait
autrefois
les
phnomnes physiques des phnomnes
chi-
que, pour faire de la

micrographie rellement scientifique et rationnelle, il faudra de plus
en plus tenir compte des proprits physico-chimiques des tissus et des
corps qu'on fait ragir sur eux.
miques tend de plus en plus s'abaisser
1.
Von Prowazck, Handhuch der
et
[lathoijenen Protozoeii,
I,
p.
18, 19IJ.
CHAPITRE XV
CLASSIFICATION DES COLORANTS

Comme
que nous adoptons pour

La seule mthode vraiment ration-
loiites les classifications, celle
les colorants est trs artificielle.
nelle serait de les ranger d'aprs leur constitution chimique, mais,

pratiquement, une telle classification est inahordable. Nous divi-
serons donc les colorants en deux grands groupes trs ingaux
les colorants naturels et les colorants artificiels.
Les colorants naturels^ extraits directement de produits anisont le carmin, Fhmatoxyline, Torcine et le
maux ou vgtaux,
safran.
Les colorants artificiels (couleurs d'aniline, couleurs de

houille) sont presque toujours employs sous forme de sels.
la
Ils
ne diffrent pas fondamentalement des colorants naturels, mais

doivent former une classe part, parce que leur constitution est
assez bien connue et parce qu'ils sont susceptibles d'tre multiplis
presque
La
Tinfini,
par les procds synthtiques.

des colorants artiticiels, que nous devons
classification
Ehrlich, est purement hislologique. Elle repose sur les affinits
que
le
noyau
et
le
cyto|)lasme
prsentent pour deux grands

dits nuclaires ou basiques
groupes de ces colorants. Les uns sont
parce que leur .composant colorant actif est une base colore; les
autres sont cytoplasmir/ues ou acides et caractriss par un acide
color. Il est trs rare qu'on utilise les bases ou les acides libres,
cause de
qu'on
les
leur
])eu
de solubilit. Les colorants
artificiels,
tels
emploie en microscopie, sont donc presque toujours
des sels.
Les colorants basiques sont des

l'acide incolore.
sels,
dont
la
base est colore et
Ainsi, le corps dsign sous le
nom
de bleu de
mthylne n'est autre chose que du chlorhydrate de bleu de
357
CLASSlFIGATIOiN DES COLORANTS
de la
mlhylne, c'esl--dire un sel form par la combinaison
base du bleu de mlhylne avec Tacide chlorhydrique.
Dans les colorants acides, c'est la base qui est incolore et Tacide
de l'osiqui est color. Ainsi, Fosine n'est pas autre chose que
nate de potassium ou de sodium, dans lequel Tacide osinique
(ttrabromonuorescine) est color, tandis que la potasse et la soude
sont incolores.
Ehrlich distingue encore des colorants neutres, dans lesquels

la base et Tacide sont colors. De bons exemples de ces colorants
sont Tosinate de bleu de mthylne et Fosinate d'azur de mthylne, qui jouent
un
si
grand rle dans
la coloration
du sang
et
des
Protozoaires.
Il est bon de ranger dans la catgorie des colorants in diffrents,
cre par Michaelis, ceux qui ne sont ni acides, ni basiques et ne
Ces
possdent pas de groupements capables de former des sels.
colorants sont gnralement insolubles dans l'eau, mais solubles

dans Talcool, Tther et les huiles grasses. Ce sont, par exemple,
deux colorants importants des matires grasses, le Sudan 111 et le
Ponceau ou Scharlach R.
Enfin, Giemsa propose rcemment de nommer aniphochrouies
certains colorants neutres, constitus par des bases colores poly-
acides et des acides colors polybasiques, pouvant se combiner

diversement, pour former des sels basiques, acides ou neutres.
dtail les proprits de ces diffrents colorants, il
de dfinir ce que c'est qu'un colorant. La plupart de nos
connaissances ce sujet sont dues Otto Witt (lui, ds 1876, prsenta
une thorie trs sduisante de la constitution des matires colorantes.
Un colorant n'est pas seulement un corps color, mais il faut encore
Avant d'tudier en
est ncessaire
puisse communiquer sa coloration d'autres corps incolores. La

plupart des colorants artificiels, ou mme naturels (hmatoxyline),
drivent de corps incolores, par exemple de carbures aromatiques.
Comment donc ces corps incolores deviennent-ils l)rus(iuement colors,
quehjuefois avec une intensit extrme?
On suppose que le pouvoir colorant est d la prsence, dans une
molcule, de deux ^roupemenls atomiques, le chromophore et Vauxo(ju'il
chrome. Le chromophore est quelque chose

sensibilisatrices;
il
donne
lieu
la
comme
les
ambocepleurs ou
formation de matires colorantes
d'une fagon indirecte, car il ne peut aijîr seul. Sa prsence, dans une
molcule, ne la rend pas encore colorante, mais la sensibilise en la
transformant en chromogne.
L'auxochrome est comparable au complment ou alexine; c'est lui
qui complte le chromogne et rvle ses caractres latents. 11 est
ncessaire que cet auxochrome se fixe la molcule de chromogne,
pour que le colorant soit constitu. En outre, l'auxochrome modifie la
358
MTHODES GNRALES
raction des chroinognes

ceux-ci, qui sont gnralement neutres,
deviennent acides ou basiques.
:
Au fond, nous ne devons pas nous laisser tromper par ces mots qui
ne nous servent (\n'k masquer notre ignorance. Nous ne savons pas ce
que sont ce chromophore et cet auxochrome, ni pourquoi ils confrent
des corps incolores des colorations intenses. Mais en prcisant bien
l'avance la valeur relle de ces termes mtaphysiques, il est utile et
commode de les employer pour concrtiser nos ides.
La classification des colorants artificiels en colorants basiques, acides
une trs grande importance, car c'est sur elle qu'est fonde
l'analyse chromatique, dont les rsultats sont si prcieux pour la cytologie et pour la physiologie cellulaire. Elle ne rpond pourtant pas
et neutres a
tous les besoins, car elle n'a t base par Ehrlich que sur des recherches
faites sur des leucocytes isols et fixs par la clialeur. Aussi faut-il,
d'une part, la complter en distinguant d'autres affinits (corps azurophiles, sidrophiles, fuchsinophiles, etc.), et, d'autre part, la modifier un
peu dans certaines circonstances. Ainsi certains colorants acides, tels
la
(jue l'orange G, peuvent donner des colorations nuclaires par
mthode rgressive, tandis que des colorants basiques, tels que la safranine et le bleu de mthylne, peuvent donner des colorations plasmatiques, le premier aprs mordanage et le second dans les colorations
vitales.
CHAPITRE XVI
CLASSIFICATION DES MTHODES

DE COLORATION
Tous
Il
copie.
ne peuvent servir indislinclement en microsdeux grands groupes de colora-
faut eu effet distinguer
les unes teignent les objets d'une faon diffuse, tandis que
autres se fixent lectivemenl sur certaines parties, toujours
lions
les
les coloranls
qu'elles mettent ainsi en vidence. Les coloralions

n'ont
aucun emploi en microscopie, car elles sont tout
diffuses
fait
impropres lanalyse chromatique. Les colorations lectives
les
mmes,
sont les seules qui nous occuperont; ce sont elles qui nous
permettent de raliser la diffrenciation optique, dont nous avons
parl plus haut, sur laquelle sont bases presque toutes nos connaissances histologiques. Les colorations lectives sont dites sp-
un tissn, on colore exclusivement un lment ou un groupe d'lments (coloration des fibres lastiques, de
cifiques lorsque, dans
la fibrine, etc.). Elles prennent le nom de

cytologiques, lorsqu'elles
sont destines mettre en vidence des lments particuliers du
noyau ou du cytoplasme (chromosomes, mitochondries, ergastoplasme, appareil rliculaire).

Quand nous parlerons de colorations,
il
ne s'agira donc que de
colorations lectives. Celles-ci peuvent tre classes de plusieurs

manires, suivant la mthode qui sert les pratiquer.
1 Colorations directes et indirectes.
Nous avons dfini
plus haut (p. 353) la nature de ces deux modes de coloration.

2 Colorations profjressives et rgressives
Ces deux
mthodes diffrent j)ar la manire dont on conduit la coloration.
.
Dans la mthode progressive., on emploie des solutions colorantes faibles, qu'on fait agir longtemps sur les tissus ou les
coupes. Lorsque l'objet est retir du colorant, il doit avoir sa colo-
MTHODES GNRALES
360
ration dfinilive,
comme
ton et
comme
La seule
intensit.
inter-
vention du micrograplie consiste surveiller la coloration et

l'arrter au moment voulu, en entranant par un lavage mcanique
Texcs de colorant non fix par le tissu. Ce procd est donc un

de ceux qui permettent de rvler le plus srement les affinits
des lments histologiques pour les colorants, il peut tre employ
avec beaucoup de substances, notamment avec les couleurs d'aniline acides, telles que le bleu de mthyle, le bleu colon, etc.,
qui donnent des colorations trs solides et trs difficiles diffrenLa plupart des colorations au carmin et Ihmatoxyline
cier.
peuvent rentrer dans cette catgorie. Les meilleures solutions

seront celles qui auront le moins de tendance donner des surcolorations ou colorer autre chose que Tlment mettre en
on aurait une coloration diffuse, ou bien
vidence. Autrement
on
serait oblig d'employer la mthode rgressive.

Les seuls inconvnients de la mthode progressive sont
la diffi-
cult qu'on prouve limiter la coloration certains lments et

l'uniformit du ton obtenu pour toute la prparation.
Dans
la
ynlhode rgressive, on surcolore l'objet et on le dcopar un dissolvant appropri ou diffrenciai eur. Ce
lore ensuite
second temps, se nomme donc diffrencicUion car

mettre en vidence un lment particulier*.
^
Ici, l'action
du micrographe,
se fait
est destin
il
beaucoup plus
sentir, car le
rsultat dfinitif varie, suivant l'insistance avec laquelle la diffrenciation est pousse.
Pour donner de bons
rsultats, la
mthode rgressive
soumise quelques rgles trs simples.

1 On ne doit l'appliquer (ju' des cou})es
trs
doit tre
minces
et
d'paisseur gale, car, avec des coupes paisses, l'extraction est

irrgulire, et avec des coupes d'paisseur diffrente les rsultats
ne sont plus comparables, ni uniformes.

2 Les meilleures couleurs pour teinture rgressive sont l'hmatoxyline et les colorants basiques, parce qu'elles se prtent trs
bien la diffrenciation.
1. A cette opration se rattache ce que Heidenliain [Arcli. f. mikr. A)iat..

LXIII, p. 438) nomme coloration par soustraction et Unna {Ztsclir. f. iriss. Mikr.,
XII) proccupation tinctoriale. Ce modo de coloration consiste teindre d'abord
certains lments, par une couleur pour laquelle ils ont beaucoup d"aftinit, puis
faire agir sur les coupes un autre colorant. Celui-ci ne se fixe que sur les portions non teintes par le premier colorant et il est compltement extrait des pre
micros portions par le diffrenciateur.
CLASSIFICATION DES xMTHODES DE COLORATION
361
3 Heideiihain conseille, avec raison, d'employer des solutions

tendues pour la surcoloration K En effet les solutions concentres
colorent plus vite, mais donnent des images irrgulires aprs la

La dilution favorise aussi la dissociation du colo-
diffrenciation.
rant et sa fixation sur les tissus.

4
La diffrenciation ou
ment, pour
e:^lraclion
tre rgulire. Les
devra tre pratique lente-
mthodes rapides sont
rejeter,
aussi bien pour la surcoloration que pour la diffrenciation.

o"* Il est
quelquefois ncessaire d'augmenter la colorabilil de
certains
lments
par Temploi
des
mordants.
Les
colorations
rgressives sont donc souvent aussi des colorations indirectes,

tandis que les colorations progressives sont presque toujours des
colorations directes.
3 Colorations simples et combines

Les colorations simples sont celles qu'on obtient avec une seule couleur simple, acide
.
ou basique. Suivant leur objet,
elles sont
miclaire^ ou plasma-
tiques, les premires tant produites surtout parles colorants acides.

Suivant leur nature, elles sont monochrojnaliques ou mlachro-
matiques. Dans
le
premier cas, tous
les
lments sont
teints
du
du bain
colorant, tandis que, dans le second cas, certains lments font virer la couleur un ton diffrent; c'est ce que nous
ton
tudierons plus loin (p. 366) sous le nom de mtackromasie.

Les colorations combines peuvent tre pratiques en faisant
agir plusieurs colorants, soit successivement, soit simultanment.
Dans les colorations successives, chaque couleur simple peut agir
pour son propre compte et se fixer sur un lment donn, comme

dans la coloration rhmaline-osine. Il peut arriver aussi qu'un
lment agisse, non seulement comme colorant, mais aussi comme
exemple le vert lumire qui, aprs coloration

chasse
ce colorant du cytoplasme; l'orange G qui,
magenta,
par
le
coloration
Romanovsky ou le bleu polychrome de
aprs
par
Unna, se fixe sur les lments acido[)hiles.
diffrencialeur, par
le
Dans les colorations simultanes, chaque lment agit gnrament pour son compte, du nôins dans les formules rationnelles,
car il faut se dfier de certains liquides donnant automatiquement
des colorations triples ou quadruples, dont le rsultat est presque
toujours dfectueux ou inconstant. Un bon exemple de coloration
simultane nous est fourni par le triacide d'Ehrlich.
1.
Mayer
est d'un avis diffrent. Voir ce sujet p. 392.
METHODES GENERALES
362
Il ne faut
4" Colornlions ; anoptiques.
pas confondre ces
colorations avec les colorations combines; dans ces dernires, en
on ne
effet,
fait
agir
que des colorants basiques ou acides, tandis
colorations panoptiques sont des colorants

neutres (ou mieux amphocliromes). Le but des colorations panoptiques est de mettre en vidence le plus grand nombre possible
que
les
agents
des
d'lments, avec une grande varit de tons. Cette mtbode a pris

une importance capitale pour Ttude du sang et des Protozoaires.
Le type des colorations panoptiques
est la
mtbode de Roma-
novsky, modifie par les procds de Giemsa et de Pappenheim,

dans lesquels la coloration est produite par l'osinate d'azur de
mtbylne et par l'osinate de bleu de mthylne. Les phnomnes

de mtachromasie jouent un grand rle dans les colorations
panopti(|iies et contribuent encore les distinguer des coloratioiis
combines.
5
Colorations en masse.
Les procds de
la
technique
moderne sont presque toujours appliqus aux coupes

ces procds, par exemple la mthode rgressive et les
certains de
colorations
combines ou panoptiques, ne peuvent tre employs que dans

ces conditions. Mais il faut savoir que les objets peuvent aussi
tre colors en masse; cette mthode, trs employe autrefois,
peut rendre encore des services, notamment pour l'tude des ani-
maux
entiers et pour renseignement.

Les colorations en masse sont surtout directes, simples et progressives et doivent tre appliques avec des colorants trs pntrants. Pratiquement, elles ne sont possibles qu'avec le carmin et
l'hmatiue. Les couleurs d'aniline sont exclues parce qu'elles ne
sont pas assez pntrantes; elles surcolorent les parties pri})hri-
ques
et n'atteignent
Ce procd
monter
pas les parties profondes.
conomique, car
au baume^ ds
immdiatement
coupes
est trs expditif et
il
permet de
qu'elles sont
dparaftlnes, sans avoir besoin de passer par Talcool. iMais on
n'obtient jamais de colorations aussi dlicates que par le traite-
ment
les
direct des coupes.
Nous savons que les mordants sont des corps

Mordanage.
qui servent d'intermdiaires entre le corps colorer et le colorant.
D'aprs Texcellente dfinition de Mann, ils provoquent une combinaison chimique entre deux corps qui n'ont aucune affinit chimique Tun pour
l'autre. D'une part,

sorte le tissu, en contractant avec lui
ils sensibilisent en quelque

une combinaison stable et en
CLASSIFICATION DES xMTHODES DE COLOllATION

son
exallaiit
avec
le
leclivit
colorant
un
et,
363
part, ils peuvent produire

fortement color et insoluble dans
(.l'autre
prcii)it
l'eau.
Les mordants ne peuvent former des combinaisons stables avec

albuminodes qu'en les prcipitant. Aussi, bon nombre de fixateurs sont en mme temps des mordants et beaucoup de colora-
les
tions,
qui semblent tre directes, ne sont pas autre cliose que des
c'est le cas, en particulier, des
mordanage
colorations aprs
en gnral,
pices fixes par l'acide chromique, les bichromates et,
tous les sels mtalliques.
Unna et Golodelz ont montr rcemment (p. 269, note 2) que
mordants mtalliques agissent comme oxydants,

taux d'oxygne des tissus et en combattant ainsi
les intUiences rductrices, ce qui favorise la plupart des colorations, mme lorsque les fixateurs ne forment pas de laque avec
les fixateurs et les
en augmentant
le
Ceci ne s'applique ni aux aluns, ni au tannin, qui

sont des fixateurs de couleurs non oxydants.
les colorants.
Les mordants peuvent tre employs d'une autre faon. Au

tissus, on les mlange au
lieu de les faire agir d'abord sur les
colorant, de
manire
produire
une laque soluble. Ou
teint
alors l'objet avec cette laque, qu'il fixe grce la prsence
du
mordant.
Les teintures l'hmatoxyline nous fournissent de bons exem-
du mordanage. Dans
ples de ces deux modes d'application
coloration l'hmatoxyline ferrique, qui est la fois indirecte et
est l'alun de fer,
rgressive, on fait agir d'abord le mordant, qui
on diffrencie de
enfin
et
est
le
colorant, qui
l'hmatoxyline,
puis
nouveau avec le mordant. Lhmalun de Mayer, au contraire,
la
est
une laque aluminique d'hmatoxyline qui donne une colora-
tion indirecte et progressive.

11 exisle un 1res grand nombre de mordants employs en teinturerie,
mais on n'en a appliqu ([ue quelciues-uns Thistologie. En gnral,
les couleurs acides sont mordances par les sels mtalliques, tandis que
les couleurs basiques sont surtout sensibles des composs organiques,
tels que le tannin; mais cette rgle souffre de nombreuses exceptions,
aussi nous contenterons-nous d'tudier les principaux mordants, en
indiquant leurs applications.

1 Les aluns sont de trs bons mordants pour les noyaux et pour les
couleurs acides, telles que l'hmatoxyline. Les deux aluns les plus
et de
employs sont l'alun de potasse (sulfate double d'aluminium
potassium) et l'alun de fer (sulfate double d'ammonium et de ses([uioxyde
de
fer).
METHODES GENERALES
364
ou associ un sel de fer i, est un trs bon mordant

couleurs basiques d'aniline, avec lesquelles il forme des laques
insolubles. Nous trouverons son emploi dans la mthode de Lfder
pour la coloration des cils des Bactries (p. 699).
3 L'iode, sous forme de teinture d'iode ou de liquide de Lugol, est
un trs bon mordant pour certaines couleurs. On l'utilise de deux
fa(:ons. Pour renforcer l'action du vert de mthyle et du bleu Victoria,
Le
2"
tannin, seul
les
pour
coupes pendant quinze minutes, avant la coloration, par

d'iode. En outre, l'action mordancânte de l'iode, pour
certaines couleurs et certains tissus, est la base de la mthode de Gram
on
traite les
de
la
teinture
(p. 394).
est essentiel d'liminer
Il
compltement
l'iode,
car
il
dtruirait
dans
la suite toutes les colorations (p. 464).

Je dsigne
4" Mordants chromiqiies.
sous ce nom les Chronibeize GAI

GAII de Hchst, introduits par Rawilz 2 dans la technique histolog-ique. Ce sont des solutions de chromate d'oxyde de chrome, acidules
pour le GAI par l'acide chlorhydrique et pour le GAII par l'acide acon l'tend raison de 70 parties
tique. Le plus employ est le GAI
pour 130 parties d'eau distille et on le conserve ainsi. Pour l'emploi,
on le dilue encore de son volume d'eau distille pour les pices fixes
par un fixateur chromique, et de 6 10 volumes d'eau distille, pour les
pices fixes aux ]i(piides picri({ues. Le mordancage dure 24 heures
la temprature ordinaire et doit tre suivi d'un lavage l'eau, prolong
jusqu' ce que celle-ci ne se colore plus. Ces mordants agissent comme
ils se combinent avec les parties rductrices des tissus et
oxydants
et
favorisent ainsi la coloration

Il
(Unna
et Golodelz).
faut tre trs circonspect dans Temploi des [nordanls, surlout
lorsqu'on dbute dans les travaux de microscopie, parce qu'on

obtient toujours une surcoloration, duc en grande partie des
prcipits qui se forment dans les tissus. Il faut donc pratiquer
diffrenciation trs soigne, de manire loigner tout ce qui
est artifice de coloration et interprter trs prudemment les rsul-
une
tats
obtenus.
Accentuateurs.
On
confond souvent avec
les
mordants
certaines substances qui favorisent les coloratious, sans toutefois

participer la combinaison qui se forme entre le colorant et Tobjet
color; Mann a pris soin de mettre en garde contre cette erreur.
Ces corps,
qu'il
nomme
accentualcurs, exercent une action qu'il

de grands services,
impossible d'expliquer, mais qui rend
est
notamment en
bactriologie.
l'^ Potasse
Accentuateurs basiques.
Bleu de
caustique 1 p. 1 000
Lfller (p. 392). Elle est remplace par le carbonate de potassium dans
la solution d'Azur II de Giemsa (p. 389).
note
2.
Pour
le
mordanagc par
le
lanuin-tartre stibi, voir Ra\vitz,
1.
Anat. An=., Xf,
p. 2C-1, 189:.
Ztschr.
f. iviss.
Mikr.. XI, p.
toc. cit., p. 382,
r)03.
1805.
CLASSIFICATION DES METHODES DE COLORATION

2.
Borate
de
sodium.
Bleu
de
boracique
Manson
et
365
de
Sahli
(p. 391).
Les alcalis agissent
soit
en modifiant
la
nature du colorant (produc-
tion d'azur), soit en diminuant sa solubilit et en le plaant dans

tat voisin de la prcipitation (Sch^vebefallun de Unna).
3. Aniline. Ce corps agit comme oxydant. Avec l'eau d'aniline,
un
on
safranine aniline (p. 393), le violet de gentiane aniline

(p. 393), etc., colorants trs importants.
4. Formol. Propos, ds 189.'j, par Ohlmacher, repris par Wermel ^,
puis par Morel et Dalous, pour toute une srie de colorants formuls 2.
Voir aussi p. 694 la curieuse mthode de Biot qui est peu connue.
Accentuateurs acides.
Acide actique. Vert de mthylc acI.
tique (p. 383) et coloration des capsules des Bactries par le procd de
Friedlnder (p. 698).
2. Acide phnique. Joue un rle considrable dans la
prparation des
colorants usits en bactriologie (p. 394 et 397). Il agit comme oxydant,
de mme que l'aniline, mais leur action est beaucoup moins intense
que celle des vritables mordanls mtalliques.
prpare
la
Action des fixateurs sur les colorations.

Nous savons
les tissus non fixs se colorent trs mal; nous avons vu (p. 248)
que
avec quelle diflicult on colore les tissus vivants

il en
est
peu prs de mme pour les tissus et organismes morts mais non
fixs. La fixation exerce donc une influence
particulire sur la
:
comme
colorabilil des tissus. Certains fixateurs agissent
mordants
de vrais
ce sont ceux qui donnent naissance des albu-
363)
minales mtalliques
(p.
et qui agissent comme oxydants. D'autres,

Falcool, prcipitent simplement les albumines et les sels
dissous dans les cytoplasmes; ils ne font que conserver ou accen-
comme
tuer Taffinit naturelle des lments pour les matires colorantes,

tout en rservant presque exactement les ractions naturelles des
albuminodes. Ces ractions sont encore mieux respectes par la

dessiccation, prockl qui a permis Elirlich de fonder-Fanalyse
chromatique, mais qui n'est malheureusement pas applicable aux

tissus
Par contre nous savons que

colorations,
notamment
longe de Falcool rend

11
1.
faut
donc
tenir
difficiles toutes les colorations (p.
295).
grand compte de Faction des fixateurs
Meditzinskiye Obos renie,
p. 50-54, 1899.
2. Morel et
osmique gne beaucoup de

Fhmatine, et que Faction pro-
l'acide
celles
p. 8-29-833,
1897.
Ztsckr.
/".
et
uiss. Mikr.,
des
XVI,
Ualous. L'emploi du formol dans les colorations histologiques.

Presse mcdicale, p. 575-5"/(3, 1-2 aot lOOo.
3. La mthode de dessiccation d"Altmann no peut rentrer dans les procds
normaux de la micrographie.
MTHODES GNRALES
366
la thorie que dans la praliquides conservateurs, aussi bien dans

colorations.
des
tique
Mtachromasie.
Nous avons mentionn plus haut
les colo-
rations
jouent un rle considrable dans la technique moderne, nous devons donner leur sujet
ait
quelques mots d'explication. D'aprs Ehrlich, pour qu'il y
mtachromatiques; comme
elles
mtachromasie, il faut qu'un colorant chimifjuement dfini colore

diffrents lments hislologiques en nuances diffrentes. Ainsi, la
thionine colore en bleu presque tous les lments d'une prparaen rouge les granulations des labrocytes et le mucus. La
mtachromasie est donc un virage de certaines matires colorantes au contact d'lments particuliers. Les couleurs qui pr^
tion et
sentent cette proprit sont dites mtachromatiques (;/sT, prfixe
impliquant l'ide de changement)
lments qui les font

nomenclature d'Ehrlich.
et les
d'aprs la
virer sont dits
chromolropes 2,
Les colorations mlachromaticiues s'opposent donc aux colora-
tions orthochromatiqiies^, ces dernires n'tant pas accompagnes d'un virage du colorant.
Les principaux colorants mtachromatiques sont le violet de
mthyle et le dahlia, colorants violets, qui colorent en rouge la
:
matire amylode et les granulations de labrocytes; la thionine et

bleu de toluidine \ colorants bleus, qui colorent la matire amylode en bleu et les granulations des labrocytes en rouge; le
le
violet de mthjtne, colorant violet, qui colore les granulations

des labrocytes en rouge; le crsylviolet RB, colorant violet, qui
colore la matire amylode en bleu et les granulations des labrocolore les noyaux
cytes en rouge; la safranine, colorant rouge, qui
en rouge
et le
mucus en
jaune.
En somme,
les
principaux colo-
rants mtachromatiques sont des couleurs basiques, dont la nuance
normale
est
bleue ou violette et
la
nuance mtachromatique
rouge.
Les principales substances chromotropes sont
la
matire
amy-
1. Mastzellen des Allemands. Le nom de labrocyte (Xaopo, vorace) a t trs

heureusement introduit dans la nomenclature C3tologique, par le Prof. R. Blanchard, pour dsigner cet lment important qui n'avait pas de nom franais, ou
du moins de dsignation correspondant aux autres termes de la nomenclature
scientifique internationale, racines grco-latines.

2. Ne pas confondre avec les chromotropes de Ilochst, p. 399.
3. On peut dire aussi que les colorants mtachromatiques s'opposent
rants monochromatiques.
A. Le lileu de Nil et le bleu de crsiji hrilhint sont aussi des bleus
tiques.
aux
colo-
mtachroma-
CLASSIFICATION DES METHODES DE COLORATION

le
lode, les grauilalioiis des labrocyles,
fondamentale du cartilage.
rouge par tous
les colorants
mucus
3G7
et la substance
Ces deux derniers sont

mtacliromatiques bleus
en
colors
et violets.
Les opinions sont partages au sujet de la
naliire de la mlachrod'abord liminer les phnomnes mtacliromatiques

dans les colorants. Ainsi, le vert
produits par des impurets contenues
d'iode n'est mlachromatitiue pour la matire amylode ([ue parce o[u'il
renferme des traces de violet de mthyle; le bleu de mthylne ne
colore en rouge les granulations des labrocyles que lorsqu'il renferme
du violet de mthylne. D'autre part, des expriences trs prcises,
effectues avec des colorants chimiquement purs, ont bien montr que
la proprit mlacliromatique est bien inhrente certaines couleurs et
tout fait indpendante de la prsence d'impurets.
11 faut savoir en outre que la naance mlachromatique est toujours de la
couleur de la base libre. En effet la base de la thionine, du bleu de toluidine, du violet de mthyle et du violet de mthylne est rouge. Celle
de la safranine est rouge. Comme ces bases sont mises en libert par
les alcalis, on a cru d'abord que la mtachromasie tait due l'alcali-
masie.
Il
laut
Mais les acides, par exemple l'acide

chlorhvdrique, ne modifient pas la couleur mlachromatique, tandis
des sels bleus avec des bases colores
qu'ils reforment immdiatement
nit des substances chromotropes.
libres.
iMicluielis
considre la mtachromasie
comme une
modification iaulo-
Ce serait quelque chose d'analogue aux changements de coloration que certains corps, tels que l'iode, prsentent au
contact de diffrents dissolvants. Par exemple, les solutions alcooliques
d'iode sont brunes, tandis que les solutions chloroformiques sont violeltes. Giemsa obtient des rsultats analogues au moyen d'une exprience trs lgante. On fait une solution aqueuse trs tendue de
chlorhydrate d'azur de mthylne chimiquement pur. Cette solution
doit tre transparente. On en remplit au tiers trois tubes essai,
disposs dans un porte-tubes. On met dans chacun d'eux la base en
libert, au moyen de quelques gouttes de lessive de soude trs dilue;
puis on agite le contenu d'un tube avec de l'ther de })trole, d'un
autre avec de l'ther sulfurique et du troisime avec du chloroforme.
mhre'' des sels colorants.
La base
par chacun de ces liquides
et prend respectivement
base peut tre combine
puis mise une seconde fois en
libert, et ainsi de suite, il s'agit videmment, dans ce cas, d'un phnomne de taulomrie. De mme, Michaelis a montr que la thionine
bleue et la thionine rougie par le mucus sont tautomres.
Si j'entre dans ces dtails, c'est parce que l'interprtation tautomrique de la mtachromasie ne repose pas seulement sur ces analogies,
mais encore sur des faits exprimentaux prcis, mis en lumire par
Nietzki et Michaelis. 11 est en effet dmontr que la couleur du sel
est extraite
Comme
les teintes jaune, rouge et violette.

de nouveau l'acide chlorhydrique,
la
color varie, suivant la position des atomes aux dpens desquels

produit et suivant la mise en libert de certains autres atomes.
il
se
1. Deux corps sont tautom6res lorsqu'ils ont la iiimc l'ormulc brute et ne diffrent i[ue par la disposion des atomes daus la formule do constitution.
MTHODES GENERALES
368
ingnieuse explication ne rend pas compte de tous les

une autre interprtation,
a-t-il rcemment propos
base sur Vhydrolysc. Par suite de ce phnomne, les solutions aqueuses
des colorants sont dissocies et renferment des molcules de base
libre. C'est ce qui donne leur ton pourpr aux solutions de colorants
mtachromatiques, tels que la thionine, le bleu de toluidine, etc. Plus
la solution est concentre, plus la teneur en base augmente, tandis
qu'en liqueur dilue, la base est hydrolyse comme le sel lui-mme et
la solution redevient bleue. Quand la base libre est trs faiblement
colore ou est de la mme couleur que le sel, il n'y a pas mtachromasie.
Donc, d'aprs Hansen, la coloration mtacbromati(iue rsulte de ce
que certains lments prennent la couleur de la base libre prexistant
dans le liquide. Il appuie sa thorie sur la ncessit de la prsence de
l'eau pour la plupart des colorations mtachromatiques, sur leur desPourtant, celte
faits,
Hansen
aussi
'
truction par dshydratation et leur rgnration par l'eau. Remarquons

toutefois que ([uelques-unes de ces colorations, par exemple celle des
labrocytes et du mucus, rsistent trs bien l'alcool et peuvent tre
montes au baume. Les autres seront

lose 2 ou au sirop d'Apathy (p. 443).
montes au sirop
de
lvu-
Ce qui
Mtachromasie basophile et neutrophile.
complique eucore Ttude de ia mlacbromasie, c'est Texistence
trs probable de plusieurs espces de mtachromasie. Dans uu
rcent travail^, Pappenheim distingue en
effet
une mtachromasie
une mtachromasie neutrophile (p. -403).

basophile
La premire donne une coloration directe des chromotropes
basophiles, tels que le mucus, les granulations des labrocytes, le
et
cytoplasme des Protozoaires. Elle est produite par les bleus basiques
mtachromatiques (bleu de toluidine, thionine, bleu de INil, bleu
de crsyl brillant), mais non par le bleu de mthylne pur.
La seconde n'est produite que par le mlange d'azur ou de
violet de mthylne avec une substance telle que l'osine (mlange
de Romanovsky)
rle de mordant
celle seconde substance joue
donc
11
ici
probablement le
d'une coloration
(p. 387).
s'agirait
Cette mtachiomasie neutrophile est celle de
maline des Protozoaires et des corps azurophiles.
indirecte.
1.
llauscD,
wiss. Mikr.,
Ueber
XXV,
die Ursaclicn
la
chro-
der luetachromatischon Farbung. Zlschr.
f.
p. 145-153, 1908.
comment
Micliaelis {Enci/kl. d. m'tkr. Technik) conseille de prparer

ce sirop
mlanger la lvulose avec un peu moins que son volume d'eau et
laisser 24 heures l'Luve, de manire avoir un liquide pais. Passer directement de l'eau ce sirop qui claircit mieux que la glycrine et ne cristallise
jamais. Il est inutile de luter les prparations.
2.
Voici
3.
Pappenheim,
loc. cit., p. 390,
note
2.
CHAPITUE XVII
COLORATIONS AU CARMIN
Le carmin est un produit rouge pulvrulent, extrait de la
Cochenille, c'est--dire du Coccus cacti, Hmiptre parasite d'un
Cactus du Mexique. Le carmin provient seulement des femelles et
n'existe chez elles que dans le corps graisseux et le vitellus des
ufs. C'est essentiellement une combinaison d'acide carminique
avec de l'alumine, de
la
chaux
et
des albuminodes.
On
peut donc
Cochenille, du
prparer
carmin ou de l'acide carminique. 11 n'y a pas d'avantage se
servir de la Cochenille elle-mme, nous passerons donc sous
les colorants
au carmin, en partant de
la
silence les colorants base de Cochenille.
Le carmin
anciennement employ en microsGohn paraissent avoir t les premiers s'en servir
est le colorant le plus
copie. Gppert et
en botanique en 1849. Ce n'est
([ue beaucoup plus tard, en 1863, qu'on

utiliser l'iimatoxyline et les couleurs d'aniline. Nos connaissances rationnelles sur les colorations par le carmin ne datent que
des travaux relativement rcents de Paul Mayer (1892-1899)
grce
lui, nous savons que l'alumine joue un rle capital dans ces colo-
commena
rations.
Actuellement, le carmin est encore un de nos meilleurs colorants.

Malheureusement, il ne se prte gure la coloration des coupes la
paraffine, ni aux recherches cytologiques. Aussi est-il nglig par les
dbutants, qui font rarement de l'anatomie microscopiciue et s'orientent
plut<H vers la cytologie, et par ceux qui font de la microscopie pratique,
pour le diagnostic, car l encore ce sont les mthodes cytologiques
(Romanovsky) qui triomphent. 11 ne faut pourtant pas oublier que le
carmin donne des colorations nuclaires trs fines et 1res prcises et
que c'est le meilleur colorant que nous possdions pour les objets
entiers. Son emploi s'impose donc pour la coloration en masse des
tissus, des embryons et des petits animaux, ainsi que des objets dis-
1.
Mittheil. Zool. Stat. Xeapel,
M. Langeron.
X,
p. 480, 1892.
%^
MTHODES GNRALES
370
socier, en un mot pour tous

proprement dite.
les
travaux d'anatomie
microscopique
Les meilleurs liquides pour les colorations en masse sont le

carmin au borax alcoolique de Grenadier et le carmin clilorhyle premier est alcalin et, ])ar suite, peut nuire
aux objets dlicats; le second est acide et donne des colorations
il ne
moins lectives, mais il est encore plus pntrant
peut convenir pour les objets contenant du carbonate de calcium. Le
drique alcoolique
est moins pntrant, mais donne une coloration

c'est en outre un
nuclaire trs pure, sans jamais surcolorer
colorant lectif de la cellulose, trs employ en histologie vgtale.
carmin alun
Enfin, le picro-carmin est encore un des meilleurs ractifs qu'on

connaisse pour les tissus frais.
Carmin au borax alcoolique de

Solution aqueuse de borax 4
n" 40
p. 100.
Carmin
Grenacher \
.
100 cm3.
2 3 gr.
Faire bouillir doucement pendant trente minutes, puis ajouter un gal

volume d'alcool 70, laisser reposer vingt-quatre beures et filtrer.
Les objets colorer y restent un temps variable (quelques

heures quelques jours), suivant leur volume. On les transporte
ensuite, sans les laver, dans de l'alcool 70, acidul par l'acide
chlorhydrique (4 6 gouttes pour 100 ce). On les y laisse
jusqu' ce qu'ils ne laissent plus chapper de nuages de matire
colorante et qu'ils aient pris une belle couleur rouge clair, ce qui
indique que la diffrenciation nuclaire est complte. On passe
ensuite par les alcools pour inclure.
Pour
les objets trs difficiles
pntrer et bien fixs, on peut
colorer l'luve, en tubes bien bouchs. La coloration ne russit
pas aprs les fixateurs osmis; les bichromates et l'acide chromique ne gnent pas, pourvu que le lavage ait t bien fait.
Ce liquide ne convient pas pour

fine,
mais seulement pour
les
les
coupes colles la parafcoupes non colles et les objets
entiers.
et le carmalun de Paul Mayor sont des formules plus

mais, pratiquement, elles ne prsentent pas de supriorit vidente sur les vieilles formules de Grenacher, datant de 1819. Aussi, pour ne
pas drouter le dbutant, jo les passe sous silence.
i.
Le paracarmin
rationnelles,
COLORATIONS AU CARMIN
Carmin chlorhydrique
371
alcoolique.
(Formule de Mayer modifie par Schuberg-.)
Eau
15
Acide chlorhydrique.
...
Carmin
cm''.
XXX
1,5 cm'^ ou
4
Faire bouillir jusqu' dissolution du carmin et ajouter

cm.
95
Alcool 85
Ce
irouttes.
gr.
:
excellent pour les objets difficiles pntrer

(Vers, Artliropodes) il colore trs rapidement cause de sa grande
richesse en carmin. 11 est donc plus puissant que le carmin boraliquide
est
cique et altre moins les tissus, pourvu que ceux-ci ne renferment pas de parties calcaires. Si la coloration est trop intense et
un peu
diffuse, diffrencier dans de Talcool chlorhydrique (alcool

0,5 p. 100 d'HGl). Il est toujours bon de faire au moins un
premier lavage rapide dans cet alcool acide, pour liminer l'excs
80
de colorant et viter sa prcipitation par Talcool 90. Cette coloration se conserve trs bien dans le baume.
Carmin alun de Grenacher.

Eau
100 cm3.
Alun de potasse
Carmin
^
1
'''
o^
Faire bouillir quinze vingt minutes petit feu, laisser refroidir, puis
filtrer et ajouter un cristal de thymol, pour viter le dveloppement des
Moisissures.
Il
Teau
ne faut colorer dans ce liquide que des objets bien lavs

et ne renfermant pas trace d'alcool. Laver Teau aprs colo-
mais
il
un colorant
trs lectif des novaux et de la cellulose,

ne
convient que pour des objets peu pais
mal
et
pntre
ne peut servir pour les coupes colles l'albumine.
ration. C'est
il
Picrocarmin de Ranvier.
Cet excellent ractif est tomb
en dsu-
prparer et parce qu'il ne rpond plus

aux" tendances actuelles. En effet, il ne peut servir pour les coupes
colles l'albumine; d'autre part, on ne colore presque plus d'objets
tude parce qu'il
est difficile
on ne fait gure de dissociations, comme au temps o

Ranvier crivait son Trait technique dliistologie. 11 suffit de lire cet
admirable ouvrage, pour voir combien la technique s'est transforme en
un petit nombre d'annes. La mthode des coupes a acquis une perfection telle, qu'elle peut tre applique mme par les dbutants et, dans
l'tat frais et
METHODES GENERALES
372
picroenrmin ne joue aucun rle, car on dispose, pour

colorer les coupes, de colorants bien plus srs et plus lectifs. En outre,
comme nous l'avons dit plus haut, on tend de plus en plus dlaisser
Tanatomie microscopique pour la cytologie. Nanmoins des savants tels
que Mann recommandent encore l'emploi du picrocarmin pour les
tissus frais. 11 est prfrable d'acheter ce ractif tout prpar, sous la
forme li(iuide ou solide.
'
Dissoudre du carmin saturation
..ârm.jn actique de Schneider.
dans (tc^rcide actique 45 p. 100, port l'buliition. Filtrer. Je ne
donne cette formule que parce qu'elle a t souvent conseille pour
cette
mthode,
le
tuer et colorer les Protozoaires entre lame et lamelle. Son action est
analogue celle du vert de mthyle actique (p. 383), mais certainement
moins
prcise.
CHAPITRE
COLORATIONS A
XVIII
L'H MATOXYLl
NE
L'hmaloxyline est une substance cristalline, incolore ou lgrement jauntre, extraite du bois de Campche (Hmatoxylon
campechianum), Lgumineuse arborescente de l'Amrique centrale. Ce corps n'a, par lui-mme, aucun pouvoir colorant, mais
il est trs facilement
oxydable et se transforme d'abord en hmatine, qui s'oxyde son tour et
finit
par donner des produits inu-
pour la coloration. Les anciennes solutions d'hmatoxyline devaient donc mrir, c'est--dire s'oxyder, pour acqurir leur
tilisables
pouvoir colorant, dont elles taient plus ou moins rapidement

prives de nouveau, jxir les progrs de l'oxydation. En ralit,
c'est rhmatine qui est la vritable substance active des solutions
d'hmatoxyline
tous les procds de prparation de ces
solutions ont pour but, volontaire ou non, la transformation de

Ihmatoxyline en hmaline. C'est principalement aux travaux de
Unna
et
de Paul Mayer que nous devons nos connaissances ce
sujet.
Il est
bien dmontr maintenant que ni l'hmatoxyline ni
l'hmatine seules ne peuvent fournir de colorations, mais qu'elles
doivent tre associes une base, avec laquelle elles forment un
qui porte le nom de laque. Nous avons donc ici un excellent

type de coloration ]iar mordancage, puisque le colorant ne peut
agir qu'en prsence du mordant. La base qui sert de mordant peut
sel
tre l'alumine,
ou bien tre emprunte
de chrome, de vanadium
etc.
Dans
un
la
sel
de
fer,
de cuivre,
coloration par la laque
aluminique, celle-ci est prforme dans la solution, qui agit gnralement par teinture progressive. Avec les autres laques, lemor1. M. Iloidcnhain, Uebcr
Yanadiunihfpmatoxylin, Pikroblauschwarz
korinth. Ztschr. f. loiss. iVikr., XXV, p. 401-410, 1908.
und Kongo-
METHODES GNRALES
374
daol et
dans
coloranl sont appliqus sparment et
le
laque se forme
et
glycrine. L'hmatine est trs peu
la
l'eau, tandis
l'hmatine sont toutes deux solubles dans
et
L'hmatoxyline
l'alcool
soluble dans
beaucoup plus. L'hmatine

commerce sous la forme d'une poudre brune.
que riimatoxyline
se prsente dans le
COLORATION
I.
la
les tissus colorer.
l'est
PAR LA LAQUE ALUIVIINIQUE
mthode correspond l'ancienne coloration par ThmaLe terme d'hmatoxyline est rest dans le langage usuel,
mais nous savons trs bien que l'hmatoxyline n'est pour rien
Cette
toxyline.
dans celte coloration. Le principe colorant de toutes les solutions

d'hmaloxyline est la laque aluminique d'hmatine. De trs
nombreuses formules ont

fourni le
t proposes, mais, depuis
mo\en de prparer
et stables,
il
faut faire table rase
qui encombrent encore
les
que Mayer a
des solutions immdiatement mres
de toutes
les
anciennes recettes
ouvrages de technique.
Je considre qu'avec deux liquides, l'un pour les colorations en

et la coloration courante des coupes, l'autre pour les mat-
masse
un colorant trs puissant, on peut effectuer tous

Le premier sera l'hmalun de Mayer et le second le
glychmalun de Mayer.
riaux qui exigent

les travaux.
Hmalun de Mayer
Eau
1000 cm^^,
Hmatoxyline crist. de Grbler

lodate de sodium 2
Alun de potasse-'
On mlange
le tout et
on
gr.
gT. 2.
50 gr.
laisse la dissolution se faire la
temprature
ordinaire.
Pour prparer Vhmahin acide on ajoute par
litre
Hydrate de chloral
Acide citrique
et
on
1.
50 gr.
1
gr.
laisse dissoudre.
Je ne donne
f. iviss.
Mi/cr.,
ici
XX,
que
la
formule
la
plus rcente parue en 1904 dans Ztsclir.
p. 410.
Carazzi prfre employer l'iodate de potassium, qui est plus facile obtenir
{Ztsclir. f. iniss. 3/ikr., XXVIII, p. 273, 1911). Ces corps
agissent comme oxydants et transforment instantanment l'hmatoxyline en
2.
parfaitement pur
hmatine.
3. Avoir soin de
le
pulvriser pour hter la dissolution.
COLORATIONS A L'HMATOXYLINE
375
Personnellement, je prfre employer rhmalun acide, qui donne une

coloration nuclaire plus prcise et se conserve encore mieux i. Dans
une solution prpare depuis plus d'un an, je n'ai pas la moindre trace
de prcipit ni au fond du flacon ni sur les parois.
Ds ([ue la dissolution des produits est acheve, le colorant est prt
employer. Il colore trs rapidement les coupes (5 10 minutes suivant
le mode de fixation) et pntre trs bien les objets pour la coloration en
masse
Ce
(24 48 heures'.
liquide esl
en masse
ture des
Tosine
un des meilleurs qui
c'est aussi notre colorant
coupes par l'action
existent
pour
la coloration
plus parfait, pour la teinsuccessive de l'hmatine et de

le
(p. -418).
L'hmalun ordinaire donne une coloration bleutre et Thmalun

acide une coloration rougetre. Pour obtenir un beau (on bleu
noir dfinitif,
il
suffit
de laisser
quelques minutes aprs
ou les coupes, pendant

dans de l'eau de source. Celle-
les pices
le lavage,
agit par les sels alcalino-terreux qu'elle lient en dissolution

(carbonate de calcium). Si on n'a que de l'eau non calcaire, il
faut plonger les coupes dans une solution trs faible (1 p. 100)
de bicarbonate de sodium ou de carbonate de lithium, puis laver
ci
l'eau ordinaire.
Eu
ou
un peu diffuse, il suffit de laver les coupes

dans de l'alun 1 p. 100, puis dans de l'eau ordi-
cas de coloration
les pices
naire. Ce passage par l'alun est toujours une bonne prcaution

prendre pour les colorations en masse.
Eu cas de surcoloralion^ rgresser dans l'alcool clilorhydrique
faible
0,5 p. 100, en surveillant attentivement, car ce ractif

Quelques secondes suffisent. On lave ensuite abon-
agit trs vite.
damment feau de source, jusqu' bleuissement complet. Pour

plus de sret, passer dans l'eau alcaliuise comme }ilus haut.
Pour diluer l'hmalun, il faut toujours employer de lalun
2
p.
100
et
non de
l'eau
ordinaire
qui rendrait
la
coloration
diffuse.
Les colorations
l'hmalun se conservent bien dans
le
baume,
condition qu'il soit dissous dans le chloroforme, le xylol ou le
tolune, mais non dans les essences de girolle ou de bergamote.

1. Ehrlirh a montre, ds 1886, que l'addition d'acide actique empche la dissociation de l'alun en acide sulfurique libre et composs basiques d'alumine. Ces
derniers, en se combinant avec l'hmatoxyline, produisent une laque aluminique
insoluble qui se prcipite. Le liquide s'appauvrit ainsi peu peu. L'acidification

enraye ce processus, c'est pourquoi je conseille vivement de prparer de l'hmalun
et du glychmalun acides.
MITHODES GENERALES
376
Quelquefois
les
prparations plissent prs des bords de la lamelle

La glycrine conserve assez bien la colora-
(voir insuccs, p. 464).

tion,
mais ceci a peu d'importance, car ce
ment employ pour
les
mdium
est bien rare-
coupes.
Glychmalun de Mayer
Peser 0,4 gr. d'hmatine de Geigy, de Ble, et broyer dans un moravec quehjues gouttes de glycrine. Quand on a obtenu une pte
bien homogne, on lave le mortier, par portions, avec le licinide suivant, de manire entraner toute la pnte
tier
Eau
70 cm'K
distille
30 cm^.
Glycrine
Alun de potasse
dissoudre
Faire
rine.
On
chaud
peut acidifier en
5 gr.
l'alun
dans
ajoutant 2
puis ajouter la glyc100 d'acide actique cristal-
l'eau,
p.
lisable.
Je crois
que ce colorant, qui
est trs stable et trs
nergique,
remplacer avantageusement Ihmatoxyline de Delafield qui,

d'une routine incomprhensible, est encore [irconise
suite
par
Je
reproche cette dernire d'lre trs longue prparer
partout.
Il
mois
n'y a aucune
environ) et de se conserver trs mal.
(deux
doit
raison de perptuer cette antique formule alors que le glychmalun nous donne une teinture aussi puissante, trs stable et de
de
prparation instantane. Il faut abandonner aussi l'hmatoxyline
Bohmer qu'on voit encore citer dans quelques ouvrages.
Le mode d'emploi du glychmalun est le mme que celui de
l'hmalun. On peut procder par la mthode progressive, ou surcolorer
II.
et
rgresser dans l'alcool chlorhydrique faible.
COLORATION PAR
LA
LAQUE FERRIQUE
deux procds principaux de coloration par la laque ferLe premier est

rique, celui de Heidenbain et celui de Weigert.
essentiellement une mthode indirecte et rgressive, tandis que
Il
1. Ce liquide se rapproche beaucoup de riimatoxylinc acide d'Ehrlicli qui tait

une des meilleures formules anciennes. Voici d'autre part la nouvelle ibrmule de
Eau dist. 400; glycCarazzi (Ztschr. f. wisR. Mikr., XXVIII, p. 273, 1911)
rine 100; alun '20; iodate de potassium 0,01: hcmatoxylinc 0,5. Mler le tout
ensemble et laisser dissoudre, sans chautier.
:
377
COLORATIONS A L'HMATOX YLLNE

le
second est encore une mthode progressive. Ces procds sont
exclusivement rservs aux coupes
1.
Hmatoxyline ferrique de Heidenhain

les
deux
ractifs suivants
(1891).
Prparer
Solution 3 p. 100 d'alun de fer (sulfate double d'amMordant.
monium et de sesquioxyde de fer).
Solution aqueuse d'hmaloxyline 1 p. 100, prpare
2" Colorant.
en mlangeant 10 cm"', de solution d'hmaloxyline 10 p. 100 dans
l'alcool 90 avec 90 cm-\ d'eau.
Pour prparer la solution d'alun de fer, il ne faut employer que des
s'ils prsentent une teinle jauntre, ils sont
cristaux violets bien clairsaltrs et doivent tre rejels. Pour avoir srement du bon alun de fer,
il ne faut pas acheter de petits cristaux, ni de l'alun de fer pulvrulent;
mais, suivant le conseil de Francotte, exiger de trs gros cristaux qui
se conservent parfaitement en bocaux bien bouchs l'meri. Au
moment de faire la solution, on racle avec un scalpel la ([uanlit
ncessaire et on obtient ainsi une dissolution immdiale. Le licjuide,
qui est jauntre, doit tre absolument limpide. 11 ne faut pas prparer
l'avance une quantit de cette solution, car elle ne se conserve pas.
11 est essentiel de faire la solution froid.
La solution d'hmaloxyline est d'autant meilleure ([u'elle est plus
ancienne. Elle devient noire, par suite de l'immersion des coupes
imprgnes d'alun de fer, mais il n"y a pas s'en occuper. D'aprs
Mayer, il ne s'y formerait pas (riiinaline, mais d'autres composs
plus ric'ies en oxygne.
1
Le temps consacr au mordancagc
cl
la coloration
diffre
beaucoup, suivant la nature des pices, le mode de fixation, le

rsultat cherch. Pour une simple coloration nuclaire topograde trente
phique, il suffit d'un mordanage et d'une coloration
minutes une heuiê, tandis que, pour les diffrenciations cytolodouze et mme
giques, les bains doivent tre prolongs pendant
obtenue
la
coloration
Dans
le
premier cas,
vingt-quatre heures.
que dans le second, elle est parfaitement noire.

marche gnrale du procd. On opre avec une batterie
est bleue, tandis
Voici la
de cylindres Borrel ou de tubes JoUy.

1 Mordancer les coupes dans l'alun de fer pendaid trente
minutes douze heures;
2 Laver rapidement l'eau distille;
1. Pourtant llraers est arriv colorer en masse, par le procL'd de Heidenhain, en prolongean;; le mordanage et la coloration pendant 2-3 jours; on
lave ensuite l'eau sans diffrencier. Biblioyr. anat., IX, p. 1. 1900. Voir
aussi, p. 380, le procd de Morel et Bassal.
2. ?se pas confondre avec le sel double de proto.xyde de fer ou sel de Molir,
en cristaux verts.
MTHODES GNRALES
378
Colorer
dans
la
solution
criimatoxyline
pendant
trente
minutes vingt-quatre heures.
On
acclre beaucoup la coloration dans l'tuve 37"
^ La pr-
paration doit prendre une coloration noire encre de Chine;
Laver rapidement Teau
A'^
distille
11 faut
prendre un liquide
de celui qui sert mordancer. La concentration peut
mme ou plus faible (1 p. 100), s'il y a intrt ralentir
5" Diffrencier dans l'alun de fer.

diffrent
tre la
processus pour le suivre plus exactement -. En effet, il est

indispensable de retirer les coupes de temps en temps, pour conle
trler la diffrenciation. On les lave rapidement

examine avec un grossissement appropri.
l'eau et
on
les
dans ce cas qu'un objectif immersion l'eau peut rendre des

Pour les objectifs sec forts, il est ncessaire de dposer une
lamelle la surface de la prparation. Pour retirer cette lamelle, sans
endommager les coupes, il suffit de plonger la lame dans un tube
C'est
services.
Borrel plein d'eau

11
sur
la
la
lamelle se dlaclie d'elle-mme.

ne pas rpandre de l'eau ou de l'alun de fer
faut prendre soin de
la platine du microscope; pour cela, il faut essuyer soigneusement

face infrieure de la lame ou, mieux encore, recouvrir la platine
d'une plaque
examen ne
verre ou d'une bote de Ptri.
de
Bien
doit pas tre pratiqu avec le cliariot, dont
il
entendu, cet
faut enlever
la partie amovible.
6"
on
le
Aprs diffrenciation, laver soigneusement

juge
utile
par un
colorant
l'eau, colorer
plasmatique (voir p.
si
397 colo-
rants acides), puis dshydrater et monter au baume.

La diffrenciation peut varier dans de trs larges limites; on la
pousse plus ou moins loin, suivant les parties qu'on veut mettre
en vidence. C'est l la fois l'avantage et Fcueil de la mthode
de Heidenhain;
elle
permet au travailleur exerc de diffrencier

mais elle expose le dbutant de
les plus fins dtails cylologiques,
graves erreurs d'interprtation. En effet, non seulement le rsultat

obtenu varie, suivant la dure de la coloration et de la diffrencia-
mais encore
il ne faut
pas prendre tous les corpuscules siddes
nuclaires ou cytoplasmiques, ni
inclusions
rophiles pour
tirer des conclusions errones d'une diffrenciation incomplte ou
tion,
1. Gurwitscli inordance et colore chaud (tuve 40"),

puis diffrencie la
tempi'ature ordinaire. On arrive ainsi avoir en dix minutes une bonne coloration. Ztschr. f. wiss. Mikr., XVIII, p. 291, 1902.
2. On peut diffrencier par immersion dans le tube Borrel ou simplement en
mettant sur les coupes, laves et gouttes, une grosse goutte d'alun de fer.
On installe sur le microscope et on surveille la marche de la diffrenciation.
COLORATIONS A L'HMATOX YLINE
379
trop pousse. Il faut savoir aussi que Tpaisseur des coupes ou

des froUis iuflue beaucoup sur le rsultat final de la diffrencia-
Par consquent, dans une mme prparation, les noyaux ne

seront pas tous au mme point
les uns seront trop diffrencis,
les autres pas assez et il faudra savoir choisir ceux qui se prsenlion.
tent l'tat voulu,
le dtail
pour
Dans une prparation bien

ressortent en noir intense sur
dmontrer.
russie,
un fond
les
structures nuclaires
incolore ou peine color.
La coloration est la fois trs nergique et trs prcise; au

point de vue optique, elle prsente donc des avantages considrables, car elle permet l'examen avec les plus forts grossissements
et mme l'emploi des oculaires les plus puissants, ce qui n'est
pas toujours possible avec les colorations la laque aluminique
ou avec les couleurs d'aniline. Aussi, cette mthode est-elle cer-
tainement la plus importante de toutes les techniques cytologiques,

aussi bien pour les coupes que pour la coloration des Protozoaires
dans les frottis. Elle parait devoir remplacer presque toutes les
mthodes aux couleurs d'aniline, qui donnent des rsultats moins

Il est certain
que Thmatoxyline ferrique et le Romanovsky sont maintenant les deux pierres angulaires de la cytologie
stables.
et
de
la protistologie.
Hmatoxyline ferrique de Weigert^
(1904).
Dans ce procd, on emploie le perchlorure de fer au lieu

d'alun de fer et on mlange extemporanment le colorant et le
mordant, pour
A.
les faire agir
Hmatoxyline
Alcool
ensemble sur
crist.
de Grbler
Eau
95
distille
Au moment de
parties gales de
l'emploi (ou
et
de
mieux
et
gr.
lOU cm3.
4
95''
Perchlorure de fer officinal

Acide chlorhydrique pur 3
B.
les coupes.
dix minutes avant), mlanger
colorer avec ce
mlange pendant
Weigcrt, Eine kleine Vcrbesserung der Haematoxyli a-van Gieson Mthode.

Ztschr. /'. iviss, Mikr., XXI, p. 1, 1904. Les mthodes de Weigert, spciales pour
le systme nerveux, seront tudies p. 659. La mthode que nous donnons ici est
une mthode gnrale.
2. De la pharmacope allemande, 10 p. 100 de fer. Mallory pratique le procd de Ileidenhain avec du perchlorure de fer lu p. 100, au lieu d'alun de
fer. Ztschr.
wiss. Mikr., XVIII, p. 177, 190J.
3. De densit 1,1-24, renfermant -25 p. 100 d'HCl.
1.
/'.
MTHODES GNRALES
380
vingt Irenic minutes, ou
mme
moins, suivant
la
nature des
pices. Il faut colorer plus longtemps (vingt trente minutes) si

on doit faire ensuite un van Gieson, cause de l'action dcolo-
rante de l'acide picrique.
L'avantage de celte mthode est d'tre trs rapide et progresne produit donc pas de surcoloration et ne ncessite pas
sive. Elle
de diffrenciation. Elle est surtout commode, lorsqu'on l'associe

la mthode de van Gieson. Au |)oinl de vue cytologique, elle ne
saurait remplacer le procd de Heidenhain.
Morel
et
Bassal
sont arrivs stabiliser ce colorant, en y ajoutant de

comment ils modifient la solution B.
l'actate de cuivre. Voici
Perchlorure de fer
Acide chlorhydrique
Actale de cuivre 4
B.
Eau
2cm-*
95
1
p.
100
distille
mlang-e parties gales de A et B comme plus haut et on peut

colorer en masse ou sur coupes. Aprs coloration, on lave dans un
mlange parties gales d'alcool et d'eau, puis Teau. Ensuite un
monte ou on inclut.
Seidelin ^ remplace Thmatoxyline par de Thmatine (ju'il dissout
froid. 11 prend 3 parties de A pour 2 parties de B.
On
Nous passons sous silence les autres laques d'h^'Hiatoxyline,

considrant qu'elles n'ont pas d'applications dans le travail courant.
Importance des colorations Ihmatoxyline.
Il
est
curieux de constater que l'hmatoxyline, dont la constitution chimique est inconnue et dont le mode d'emploi est rest pendant
trs
longtemps empirique,
est
encore un de nos colorants
les plus
pu tre dtrne par les couleurs synthtiques.

C'est en 1863 que Waldeyer tenta d'employer l'extrait aqueux de
bois de Gampche; deux ans plus tard, en 1865, Pxdimer comimportants
elle n'a
bina la premire formule rationnelle, prpare avec l'hmatoxyline

cristallise et associe l'alun, suivant les procds des teinturiers.
Unna
et
Mayer nous ont enfin donn
le
moyen de prparer
des solutions immdiatement mres et stables.

colore
encore
part cela,
comme au temps de Bohmer, du moins
avec
on
la
laque aluminique.
Ce qui assure la supriorit de l'hmatoxyline, sur le carmin et
l(;s couleurs
d'aniline, c'est qu'elle peut colorer aprs tous les fixa1.
Morel
et Bassal,
Journ. Anaf.
2.
Sur un procd de coloration en niasse par l'hmatoxyline.
cl PlujsioL,
XLV,
p. 632-633,
Parasilology, IV, p. 91-103. 1911.
1909.
COLORATIONS A L'HMATOXYLINE
381
La colora lion oblenue esl 1res

permet des doubles colorations trs dmons-
leurs (an moins la laque ferrique;.

leclive, 1res stable el
tratives.
Nous verrons plus loin, en tudiant ces colorations, que la

mthode rhmatine-osine est le procd fondamental de Thistologie normale et pathologique, de mme que le procd la
laque ferrique esl la mthode cardinale de la c\ tologie et de la
prolistologie. Ce dernier procd prsenle, sur la coloration [lar
les couleurs d'aniline basiques, Tavanlage de teindre non seulement le noyau, mais encore les cenlrosomes et certaines portions
du cytoplasme, comme les grains de scrtion et les fuseaux
achromatiques.
et conjonctives.
Il
colore aussi les fibres nerveuses,
musculaires
CHAPITRE XIX
COLORATIONS PAR LES COULEURS

D'ANILINE
Nous avons expos plus haut (p. 356) la classification des coud'aniline. Nous allons tudier maintenant les mthodes
leurs
gnrales
neutres.
de
coloration
I.
par les colorants hasiques, acides
et
COLORANTS BASIQUES
Comme nous Ta vous dit, les couleurs d'aniline basiques sont

des colorants nuclaires, mais leur lectivit ne s'exerce pas toujours dans les mmes conditions. Les unes peuvent tre employes
la mthode progressive, tandis que les autres exigent la mthode
rgressive. Ces colorations sont surtout directes, car on se sert
par
rarement des mordants proprement dits ', mais plutt des accentuateurs (formol, aniline, phnol). Pourtant Tiode peut, dans certains cas, servir avec avantage
A.
au mordanage
Colorations
(p.
364).
progressives.
La plupart des couleurs hasiques, en solution acidifie 1 p. 100

par Facide actique, donnent des colorations progressives. En pratique, trs
peu sont
utilisables sous cette forme.
Il m'est impossible, daus un ouvrage de ce genre, d'indiquer toutes les

1.
mthodes de mordanage et de coloration, gnralement trs ingnieuses, proposes par Rawitz. Ce sont des procds trop spciaux pour un livre o jo ne
peux donner qu'un petit nombre de mthodes gnrales, ncessaires pour la
pratique courante du laboratoire. Les spcialistes liront avec intrt l'expos des
ides trs originales de Rawitz dans ses Leitfadcn fur histologische Untersu-
chungen, lna, 1895, et Lelirbuch der mikr. Technik^ 1907.
COLOUATIOiNS PAR LES COULEURS D'ANILINE
383
C'est un chlorure double de zinc et de violet

Vert de mthyle.
pentamthyl, aussi renferme-t-il souvent, comme impuret, une certaine quantit de violet, ainsi que d'autres corps. Il faut l'avoir aussi
pur que possible.

Il ne faut pas confondre le vert de mthyle (iMelhylgrin) avec
d'iode, qui est encore plus souill de violet (p. :{67). ni avec
un colorant acide
lumire {Lichtgriin) qui est
le vert
le
vert
(p. 400).
Le vert de mthyle doit toujours tre employ en solution acide et en

milieu neutre ou acide, car il est extrmement sensible l'action des
alcalins. Le vert de mthyle actique, c'est--dire la solution concentre
ou 1 p. 100) dans l'acide actique 1 p. 100, est un colorant imporpour les tissus frais, non fixs. Dans le noyau, il met la chromatine
en vidence avec une leclivit remarquable. Dans le cytoplasme, il
peut colorer diverses enclaves ou scrtions. La coloration est trs
rapide et il n'y a jamais de surcoloration.
Cette coloration est fugace et ne rsiste pas l'alcool. Il faut conserver les prparations dans la glycrine pure ou glatine. Unna et
Golodctz ont montr rcemment que ce colorant est trs sensible aux
(0,5
tant
agents rducteurs et n'est pas rversible jiar oxydation.

Le vert de mthyle fait partie de mlanges tels que
le
triacide
d'Ehrlich.
Thionine ou
violet
bleu de mthylne et
de
un
C'est un
Laiilli.
corj)S ti^s voisin
du
colorant important, cause de ses pro-
366) et de son lectivil pour le

l'emploie simplement en solution hydro-alcoolique
noyau.
1 p. 100 ou mieux en solution phnique, suivant la formule de
mtachromatiques
prits
(p.
On
Nicolle-.
Solution sature de thionine dans l'alcool 60"
2 p. 100
Eau phnique
Dans beaucoup d'ouvrages, on
me semble assez
tre, ce qui
difficilement dans Teau.
partie.
parle de solution aqueuse concenla thionine se dissout
peu rationnel, car
La thionine phnique
agit tout aussi bien
conserve beaucoup mieux.

La coloration des frottis et des coupes se produit en quelques
minutes et le rsultat est sduisant, car il n'y a gure que la chro-
et se
matine qui
aurait
l'alcool, ce
de
soit teinte
un peu de
'^
On
lave ensuite Teau.
surcoloration,
il
suffit
de
Au
cas
il
diffrencier dans
qui ne prsente pas de difficult, cause de la rsistance

Le seul inconvnient de cette mthode est que les
la coloration.
\.
Loco
2.
On peut prparer
3.
Le mucus
cilato, p. -260. note 2.

aussi la tliionine ptinique
p. 394 pour le violet de gentiane.
d'aprs le procd indiqu
est color en rouge. Voir ce sujet p. 673.
MTHODES (NRALES
384
prparations ne se conservent pas du tout. Je ne connais aucun

moyen srieux de les garder elles plissent aussi bien dans le
:
baume neutre
dans Thuile de cdre;
<[ue
le
meilleur milieu est
encore Thuile de paraffine.

C/esl un corps trs voisin du bleu de
Bleu de toluidine.
11 est
et
de
la
tliionine.
mlhylne
mtacliromatique sous toutes
formes, c'est--dire en solutions neutres, alcalines ou acides.

Cette proprit le distingue donc bien du bleu de mtbylne, qui ne
devient
Hacliromatique qu'aprs traitement par les alcalis. Dans
les
bleu de toluidine, c'est
la base libre
qui est mtacbromatique
bleu de mtbylne alcalinis, c'est un nouveau corps, car
base libre est bleue et non mtacbromatique. Par contre, le bleu
le
dans
la
le
de toluidine ne colore jamais
la
les corps azuropbiles, ni seul, ni
D'aprs Mann
cbromaline des Protozoaires ou
combin
l'osine.
en solution acidifie par l'acide actique

(1 p. 100 environ), un trs bon colorant des noyaux et des nucloprotides, tels que les corps de Nissl.
Il
c'est,
peut remplacer
le
bleu de mthylne pour beaucoup de colorations,
notamment pour la recherche des corps de Nissl (p. 660), pour les examens bactriologiques rapides (Thry) (p. 089), et pour la prparation
du bleu polychrome
Eau
(p.
390)
que MnrlinoUi
formule ainsi
75
distille
Carbonate de lithium
Bleu de toluidine
Aprs dissolution complte ajouter
cm'.
0,5 gr.
1
gr.
20
5
Glycrine
Alcool 95
Celte solution est
'
bonne pour l'emploi
lorsqu'elle a pris
gr.
cm3.
une
teinte
rouge.
Bleu de mthylne.
Ce corps,
qui est le plus important des

colorants basiques, par ses emplois multiples et par ses drivs,
chlorhydrate de la ttramthyllbionine. Nous n'avons en vue

que le bleu de mthylne cbimiquement pur et non le sel
est le
ici
double, associ au chlorure de zinc. Le bleu de mth3'lne, mme

trs pur, renferme trs souvent de l'azur de mthylne
ce corps
:
Martinotti, Bleu policromo o bleu di toluidina. Ztschr. f. loiss. Mikr., XXVII,

Je donne cette formule parce quelle permet, en cas de besoin, de
remplacer le bleu polychrome de Unna.
1.
p. 24-27, 1910.
COLORATIONS PAR LES COULEURS D'ANILINE

se
forme sponlaument dans toutes
un des principes aclils de

chrome de Unna.
les solations (p.
certains colorants, tels
comme
importe de ne pas confondre^
Il
dans certains ouvrages,
le
387)
que
385
et constitue
le
bleu poly-
cela se voit encore
bleu de mthylne aoec
le
bleu de
mlhyle, qui est un colorant acide, absolument diffrent par sa

conslitulion et ses proprits (p. 400).
Le bleu de mthylne peut servir la coloration des noyaux,
mais il est moins lectif que la thionine
(en solution 1 p. 100),
et
que
bleu de toluidine.
le
A mon
avis,
il
convient peu pour ce
genre de coloration; qu'il s'agisse de coupes ou de frottis, on

obtient de bien meilleurs rsultats avec Tazur de mthylne, sous
polychrome de Unna ou de mlange de Romanovsky.

mthylne pur fournit d'excellentes colorations vitales (p. 251 et mlhode,de Sabrazs, p. 625) d'animaux
entiers, de cellules isoles et surtout du systme nerveux. Pour
forme de
Au
-Ijleu
contraire, le bleu de
ce dernier usage et pour la mise en vidence du ciment intercellulaire, des lymphatiques, etc., il prsente certains avantages
sur les imprgnations mtalliques.
En
effet,
il
est
d'un emploi plus
les tissus
nerveux, il a la prcieuse
pour
ne
colorer
ce qui permet de
de
lments,
que quelques
pi'oprit
rapide
et
plus facile et,
suivre leur trajet plus facilement qu'avec les imprgnations l'or,

qui en colorent un trop grand nombre et rendent la prparation
confuse.
Le bleu de mthylne pur n'est pas mtachromatique ^ Il colore

bien les granulations des labrocytes, mais en bleu, comme d'autres
colorants basiques, et non en ronge. Il ne colore pas non plus la
chromatine des Protozoaires.
En somme, en
dehors des colorations
vitales, le bleu
de mthy-
aucun emploi en
microscoi)ie. Toutes les colorations

nuclaires qu'on lui attribuait autrefois sont lies ses deux principaux drivs, l'azur de mthylne et le violet de mthylne.
lne
pur
Toutes
n'a
les solutions classiques
de bleu de mthylne (bleu de Unna,
de Manson, de Sahli, de Lijffler, de Kiihne, etc.) n'agissent que par

suite de la prsence de ces corps. Gela ne diminue en rien l'importance du bleu de mthylne, puisque c'est lui qui fournil ces
importants drivs et puisque sa prsence est ncessaire pour
qu'ils exercent leur action.
l.
Ce mme que
devient que
s'il
le
vert de mthyle pur n'est pas uitachromatiquc et ne le
est souill de violet de
M. Lakgeron.
mthyle
PivN'is de Microscopie.
(p. 3G7).
25
MTHODES GNRALES
386
Azur de mthylne.
hydrate;
il
est
importants de
Ce corps s'emploie sous forme de chlordevenu un des coloranls ctjtologiques les jjIus
la
technique moderne.
Son histoire ost des plus curieuses

longtemps mconnu, puis
dsign sous des noms divers et confondu avec d'autres corps, il a t
d'abord employ empiriquement dans la mthode de Romanovsky et,
comme toujours dans ces conditions, donnait des rsultats assez irrguliers. Aujourd'hui, grce aux travaux de Bernthsen, Unna, Noclit,
Michaelis, Giemsa et Pappenheim, la question est trs simplifie et on
colore coup sr avec l'azur de mthylne.
Je crois que l'tude de ce corps doit tre prsente ici, au moins dans
ses grandes lignes, car il est, avec le violet de mthylne, le colorant
le plus employ, dans les laboratoires o on se borne aux recherches
d'hmatologie. L'importance de ce corps n'est donc pas moins grande
pour le mdecin europen ou colonial que pour l'histologiste de profession. Je pense mme que, dans le domaine mdical, les colorants base
d'azur de mtl;iylne peuvent remplacer tous les autres. La connaissance des proprits de ce corps ost donc indispensable.
L'histoire de l'azur de mthylne commence en 1891. A cette poque,
Romanovsky dcouvre fortuitement qu'un mlange d'une solution de
bleu de mthylne avec une solution d'osine permet de colorer en
violet carmin le noyau des parasites du paludisme. Ce noyau n'avait pu
jus(]ue-l tre mis en vidence par aucun ractif. Malheureusement,
cette coloration spcifique, dont Romanovsky avait saisi toute l'importance, tait trs difficile obtenir. Un lger excs de l'un ou l'autre
les proportions employer dilleliquide l'empchait de se produire
raient avec les diverses marques de bleu et, malgr toutes les prcautions, il y avait des cas o la raction ne russissait pas. Romanovsky
remarqua pourtant que les solutions anciennes de bleu de mthylne
taient celles qui donnaient les meilleurs rsultats.
La mme anne, Unna - dcouvre aussi, par hasard, la coloration
mtachromati([ue des granulations des labrocytes, en employant une
solution de bleu de mthylne alcalinise et ancienne. 11 arrive
reproduire volont cette coloration avec son bleu polychrome, qui est
encore actuellement un de nos meilleurs colorants directs. Ce bleu
polychrome n'est autre chose qu'une solution de bleu de nitliylne,
fortement alcalinise par le carbonate de potassium et transforme en
un liquide violac, dont nous tudierons plus loin la composition.
C'est Nocht 3 que nous devons la premire tentative d'explication
de la coloration de la chromaline des Protozoaires, par la mthode d.e
:
'
Romanovsky. H pensa que cette coloration devait tre due quelque

impuret du bleu de mthylne, puisqu'elle ne russit qu'avec des solutions anciennes. Il remarqua que le bleu polychrome de Unna, aprs
neutralisation, produit trs bien cette coloration, lorsqu'il est associ
et du bleu de mthylne pur, non altr. Finalement, il
de rosine
1.
Romanovsk}^ Zur Frage der Parasitologie und der Thrapie der Malaria.
Sl-Pctersbourg med. Woch., VIII, p. 297-307, 1801.
2. Ztschr. f. iviss. Mikr., VII, p. 447, 1891.
3. Nocht, Zur Farbung der Malariaparasitcn. (Jeniralblatt f. Bakt., XXIV,
p. 839-817, 1898, et
XXV,
p. 764, 1899.

montra que, dans
387
bleu polychrome et dans les solutions mries de

bleu de mthylne, il s'est form un nouveau corps, qu'il nomma rouge
du bleu de mthylne, sans se prononcer sur sa nature. Ce corps peut tre
extrait en agitant la solution de bleu de mthylne avec du chloroforme ce dernier se colore en rouge et abandonne, par vaporation, un
corps qui, associ au bleu de mthylne et Tosine, produit coup
sur la coloration de Romanovsky. Donc, pour russir la mthode de
Romanovsky, il est ncessaire d'employer une solution de bleu de mthylne, renfermant du rouge du bleu de mthylne.
Nous tudierons plus loin, en traitant des colorants neutres, la nature
de la raction de Romanovsky. Pour le moment, nous devons chercher
savoir ce qu'est le rouge du bleu de mthylne dcouvert par Nocht. En
ralit, on discute encore sur la vritable nature de ce corps. Il
semble pourtant rsulter des recherches de Giemsa, de Mac Neal et de
Pappenheim, ({ue c'est un mlange d'azur de mthylne et de violet de
mthylne. Au contraire, pour Michaelis 2, ce serait de l'azur de mthylne
ce qui fait l'erreur de Michaelis, comme Ta montr Pappenheim,
c'est qu'il attribue l'azur de mthylne, contenu dans le bleu polychrome, la proprit de colorer mtachroraatiquement les granulations
des labrocytes. Or Pappenheim a dmontr que l'azur de mthylne pur
ne donne pas celte coloration mlachromatique rougo, mais colore les
granulations en bleu. Il y a donc, dans le bleu polychrome de Unna et
dans les prparations analogues, trois corps en prsence
du bleu de
le
'
mthylne non
altr,
du
violet
de mthylne et de l'azur de mthylne.
L'azur de mlhylne n'est donc pas autre chose qu'un produit

de Foxydaliou du bleu de mthylne en solution alcaline. On
l'obtient rapidement en traitant, froid ou chaud, le bleu de
mthylne par la jiotasse, la soude, la lilhine, le borate de

sodium, etc. Dans les vieilles solutions de bleu de mthylne, il
se forme spontanment, sous rinfluence de petites quantits
proviennent du verre.
La proprit essentielle de l'azur de mthylne, celle qui lui
donne une si grande importance dans la technique moderne, c'est
qu'il produit une coloration spcifique de la chromatine et en
d'alcali qui
gnral des substances dites azurophiles. Cette coloration spcifique ne peut se produire qu'en prsence d'une couleur acide, particulirement de l'osine. Il faut bien savoir pourtant que l'osine
bablement
comme colorant, mais comme

comme mordant, car on peut la
corps, tels
que
n'agit pas ici
Non seulement
1.
dans
2.
Ne pas
la
la
et prod'autres
remplacer par
agent chimique
rsorcine, la pyrocatchine, rhydroquinone, etc.

coloration de la chromatine est la plus intense
confondre avec le rouge de mthylne qui ne joue aucun

un compos bien dfini.
Das
Michaelis,
Methylenblau und seine Zersetzungsprodukte. Centrabl
le
rle
la raction et qui est
Bakt., Orig.,
XXIX,
p. 763-769, 1905.
f.
METHODES GENERALES
388
de toutes
celles (ju'od puisse obtenir,
mais encore
elle est
spci-
fique^ jjoiir la chromaline des Protozoaires. En effet, tandis

que la cliromatine des Mtazoaires se colore })ar une quantit de
couleurs basiques, y compris Tazur et le bleu de toluidine, celle
des Protozaires ne se colore que par le mlange d'azur de mthylne et d'osine, non par l'azur seul, ni par aucune autre couleur
d'aniline basique. Nous tudierons plus loin la nature de cette
coloration, ainsi
que
celle des corps azurophiles.
On nomme corps azurophiles ceux
qui ne peuvent tre colors

d'azur
Vosinate
et
non
d'autres
colorants neutres ou
par
que par
sans
L'azur
colorer
vitalement les graseul,
osine,
peut
basiques.
nulations azurophiles des leucocytes, mais non la chromatine des
Dans ces colorations vitales, les granulations sont
colores en bleu et non en pourpre.
Protozoaires.
bien savoir, et ce qui a bien t mis en vidence

qu'il faut
c'est que l'azur seul n'est pas
mtachromatique,
Ce
par Pappenheim,
c'est--dire qu'il colore
en bleu
non en rouge violac
et
la
mucine
granulations des labrocytes. L'azur seul ne colore pas la

chromatine des Protozoaires; mais il coloi'e celle des Mtazoaires
et les
et la
plupart des corps basophiles en bleu, mais non en pourpre.
On a propos de nombreux procds pour prparer des solutions de

tous reposent sur ce fait que le
bleu de mthylne riches en azur
bleu de mthylne se transforme plus ou moins compltenient en azur
de mthylne, en prsence des alcalis et de l'oxygne. Ainsi, le bleu polychrome de Unna (p. 390), qui est trs riche en azur, est prpar par l'action
du carbonate de potassium sur le bleu de mthylne, la temprature
de l'bullition. Michaelis prpare de mme l'azur, au moyen de la soude
caustique. Ces solutions, trs fortement alcalines, doivent tre neutralises pour servir la raction de Romanovsky.
Un trs bon moyen de prparer l'azur est le procd dit du bleu
Borrel, introduit dans la technique par Laveran 2. H repose sur l'action
de l'oxyde d'argent sur le bleu de mthylne. Bernthsen s, qui nous
devons la plupart de nos connaissances thoriques sur le bleu de
mthylne et ses drivs, a montr en effet ({ue l'oxyde d'argent met en
libert, beaucoup mieux que les alcalis forts, la base du bleu de mthylne, qui est la ttramthylthionine. Ce dernier corps, qui est trs
instable, se transforme en grande partie, par oxydation, en azur de
mthylne. J'ai longuement dcrit, en 1908 ^, la prparation du bleu
:
1.
pas
Bien entendu
la possibilit
il
n'est ([ucstion ici
de la coloration par
que des couleurs d'aniline. Cela n'exclut

carmin et l'hmatoxyline ferrique.
le
3.
R. Soc. Mol., p. 250, 1899.

Liebigs Annalen, CCLI, p. 19, 1889.
4.
M. Langeron, Technique microscopique applique
2. C.
Archives de pnrasitologie, XII,
p. 135-163, 1908.
la
mdecine coloniale.
COLORATIONS PAR LES COULl-URS D'ANILINE
389
l'oxyde d'argent. Je n'y reviendrai pas ici, car je considre que celte
mthode a fait son temps et j'ai compltement renonc son usage.
On
trouve actuellemenl dans

suivaul
prpar
le
commerce de Tazur
procd secret de Giemsa.
le
prfrable d'employer soit cet azur, soit
la
spciale pour le Romaiiovsky.

Le produit vendu par Griibler sous le
Il
est
1res pur,
donc bien
solution de
nom
Giemsa
'azur I est du
chlorhydrate d'azur de mthylne pur; Vaziir II esi un mlange

de chlorhydrate d'azur de mthylne et de chlorhydrate de bleu de
mthylne. C'est le produit le plus employ, car, pour une raison
encore inconnue,
les proprits
de l'azur ne se manifestent pleine-
ment qu"en prsence du bleu de mthylne. Nous verrons plus

loin
en
qu'il
A. Azur
de
mme
de mthylne.
pour
le
violet
Solution d'azur
II
de Giemsa.
est
II
Eau phnique
0,5 p. 100
gr.
100 cm-^
Se conserve indfiniment.
B. Carbonate de
sodium ou de potassium
p.
100.
Diluer A avec de l'eau distille jusqu' obtention d'une solution transparente. A 10 cm", de cette dilution, ajouter 1 10 gouttes de B. Colorer
10 15 secondes.
Ce liquide remplace avantageusement tous les bleus alcalins (bleu de
Manson, bleu de Sahli, bleu de Lffler).
Violet de mthylne'.
il
mthylne;
ment avec
l'azur de
les conditions
C'est encore un driv du
se produit aussi par l'action des alcalis,
mthylne
de l'exprience.
et
bleu de
concurrem-
en proportion variable suivant
Bernthsen, Michaelis, Giemsa, reconnaissent son existence dans les

solutions de bleu de mthylne traites par les alcalis, mais ils lui
refusent tout pouvoir colorant et tout rle dans la raction de Romanovsky. Pourtant, ds 1904, Unna dmontrait que, dans son bleu polychrome, il y a autre chose que de l'azur de mthylne et que le violet
de mthylne y joue un rle considrable. La mme anne, Marino 3

prconise l'emploi simultan du violet de mthylne et de l'azur de
1. Ne pas confondre ce corps avec le violet do
mthyle, qui appartient un
tout autre groupe (p. 393).
2. Unna. Die wirksamen Bestandteile der polvchromen Metlivlenblaulsune:

und eine Verbesscrung der Spongioplasmafrbuna. Monatsh. f. prakt. Dermat.,
XXXYIII,
p.
113-131, 1901.
Pdslcur, 1904.
3. Aiui. Insi.
MTHODES GNRALES
390
mthylne, pour la coloration de flomanovsky. Enfin, en 191)6, MacNeal ',

dans un travail trs important, mais qui ne parat pas avoir t sufflsamment remarqu, a dfinitivement dmontr l'importance du violet
de mtliylne. Non seulement Mac Neal confirme les vues de Unna sur
la valeur tinctoriale de ce corps, mais encore il dmontre qu'il peut rem- a tout
placer l'azur dans la coloration de Romanovsky. Pappenheim
rcemment repris cette (juestion, confirm les rsultats de Mac Neal et
expliqu le rle du violet de mthylne.
Ce
corps, agissant en prsence du bleu de mthylne, possde

de la chroproprits que l'azur (coloration spcifique
mmes
les
des corps azurophiles), mais, de plus,

colore mlachromaliquement les granulations des labroc} tes.
matine des Protozoaires
runit en
somme
Tazur. Pourtant,
il
et
les proprits
ne colore pas
du bleu de loluidine
comme Tazur
celles
il
Il
de
d'autres substances
basopbiles non chromotropes et les colorations azurophiles qu'il

fournit sont moins intenses que celles qu'on obtient avec l'azur.
Le point intressant de l'histoire de ce corps, c'est la mise en

valeur de son importance par Unna, Mac Neal et Pappenheim
et dans
il
joue un grand rle dans le bleu polychrome de Unna
:
les solutions
de bleu de mthylne mries par l'action des
alcalis.
longtemps mconnu. Unna, puis Pappenheim, ont

bien montr que, dans le bleu polychrome de Unna, c'est le violet
de mthylne et non l'azur qui est dou de proprits mtachro-
Ce
rle a t
dans ce hquide, on supprime le violet de mthylne,

ne se colorent plus en rouge. En
outre, Pappenheim a montr que, dans les vieilles solutions de
Giemsa, il se forme toujours du violet de mthylne, par dcommatiques.
Si,
les granulations des labrocytes
position de l'azur.
Connaissant les proprits de

Bleu polychrome de Unna.
l'azur de mthylne et du violet de mthylne, nous pouvons
tudier ce colorant clbre. Nous avons dit qu'il est fabriqu en
faisant agir du carbonate de potassium sur du bleu de mthylne
en solution aqueuse, la temprature de l'bullition. Je n'en

donne pas la formule, car c'est un ractif qu'il ne faut pas
prparer soi-mme, mais acheter tout
1.
Mac
fait
chez Griibler.
Neal, MeLhylenvioIct and methylenazur. Journ. infect, diseases, III,

trs bonne analyse do M. NicoUe, dans Bull. Inst. Pasteur,
p. 41-2-433, 1906,
p. 60-2, 1906.
Pappenheim, Panchrom, eino Verbesserung der panoptischen Universalfarfiir Blutpraparate jcder Art nebst Ausfiihrungen iiber metachromatisrhe
Farbstotfe und die metachromatische Potcnz des polychromen Methylenblau.
2.
blsung
Folia hsematologica, XI, Archiv., p. 194-218, 1911.
COLORATIONS PAR LES COULEURS DAMLLXE
391
du bleu de mlhylne non transform, de

l'azur de mlhylne, sous forme de carbonate, el du viojel de
mthylne. C'est un merveilleux colorant pour l'tude du tissu
conjonctif, dans lequel il met admirablement en vidence les
Il
renferme
plasmocyles
la fois
(p.
654), les labrocytes, les cellules conjonctives, etc.
Le carbonate d'azur colore
le
granoplasma
granuleuse du
(partie
cytoplasme des cellules conjonctives, d'aprs la conception de

Unna), tandis que le violet de mlhylne met en vidence lespongioplasnia (partie rticule du cytoplasme, d'aprs Unna) qui est
color orthochromatiquemenl ^ et les granulations des labrocytes
qui sont colors mtachromatiquemenl '.
De nombreuses modifications ont t proposes pour cette solution.

Outre le bleu polychrome de Goldhorn (1901), qui est prpar avec du
carbonate de lithium et le bleu polychrome de Martinotli (p. 384), nous
mentionnerons le mlange d'azur de Unna (1904)
:
Carbonate d'azur de mthylne

Carbonate de potassium
Violet de mthylne
Eau
distille.
'.
Glycrine
0,2o gv.
0,25
iOO
100
Le bleu polychrome de Unna surcolore gnralement les tissus;

donc diffrencier ^êc l'lher glycrique de Unna (p. 427).
Dans ce cas, on procde par la mthode rgressive.
Pour les colorations progressives, on emploie encore le bleu
il
faut
boracique de Manson, qui renferme de l'azur

mthylne,
Eau
comme
bouillante
Borate de sodium
Bleu de mthylne de Hchst
On
et
du
violet
100 cm-\
3 gr.
2 gr.
dilue celte solution jusqu' ce qu'elle devienne transparente ou bien
on l'emploie concentre.
Ce
de
toutes les solutions de ce genre.
colorant est trs voisin du bleu boracique de Sahli

Solution aqueuse sature de bleu de mthylne.
Solution aqueuse de borate de sodium o p. 100.
Eau
distille
1. Voir p. 366 la dfinition de ces termes.

2. Ztsclir. f. wiss. Mikr., II, p. 49, 1885.
3 vol.
METHODES GENEiiALES
392
Les bleus alcalins de Loffler

lion est difficile, seront
alcaline de
Giemsa
B.
fp.
s''ap[)liquer
bien uniformes,
si
389)
colorants agissent
les
cependant certain
matriaux
les
que
chromiques donnent de meilleurs
de fixation, on peut chromer par
364);
(p.
II
(p. 3G0) que les colorations rgressives ne

qu'aux frottis et aux coupes trs minces et
on veut obtenir des rsultats constants et
comparables. Bien que

est
conserva-
la
avanlageiisement remplacs par Taziir
Colorations rgressives \
Nous savons dj
peuvent
de Khnc^ dont
el
la coloration sera
La concentration des
fixs
rsultats;
le
la fois
solutions
sans moi'dayit^
par
les
il
mlanges
dfaut de ce
mode
Ghrombeize GAI de Hoclist

plus intense et plus lective.
a une certaine importance
:
concentres, elles colorent plus vite, mais moins lectivement que

solutions tendues agissant
des
lentement,
comme
le
conseille
Heideidiain (p. 361).
La diffrenciation
s'effectue
gnralement avec de Falcool
et souvent avec de Talcool chlorhydrique

( 90 ou absolu)
a eu soin d'liminer d'abord, par un lavage
On
1
100.
ou
5
0,
p.
Teau, Texcs de matire colorante. Il faut savoir que l'alcool
chlorhydrique agit trs rapidement et qu'il dcolore la chromatine

au repos avant les mitoses. On peut diffrencier aussi avec une
autre couleur d'aniline, gnralement un colorant acide.
Pour arrter la diffrenciation^ on plonge les coupes dans
ou mieux dans un liquide intermdiaire entre l'alcool et le

il arrte
baume. Le xylol (ou le tolune) est le plus employ
instantanment la diffrenciation et permet le passage rapide au
baume. Beaucoup d'auteurs conseillent l'essence de girolle; dans
l'eau
certains cas, ce liquide peut complter la diffrenciation, mais,
mon
avis, son
emploi est gnralement une complication
inutile,
faut toujours l'enlever ensuite par le xylol ou le tolune.

Il existe un trs grand nombre de safranines -.
Safranine.
car
il
La meilleure
est
certainement
la
safranine
de Grbler pour
1. Nous avons dj dit que l'imporiance de ces colorations a beaucoup diminu,

depuis l'apparition des mthodes rhmatox3linc ferrique.
2. Curtis a indiqu le moyeu dlsoler la base do la satranine, qui donne des
colorations plus rapides et plus intenses. C. R. Soc. biol., LX, p. 983, lOO.
COLORATIONS
PAl
LES COULEUi;S D'AMLINE
393
nuclL'aire. Il n'est pas toujours facile d'obtenir des

solutions aqueuses concenlres, anssi beaucoup d'auteurs conseillent-ils de faire des solutions hydroalcooliques.
coloration
Babes conseille, soit de mlanger parties gales

Solutions de Babes.
de solutions concentres aqueuses et alcooliques, soit de saturer de
safranine de Tenu aniline sature. Persounellcment, j'ai obtenu de
trs bons rsultats avec cette dernire formule. Quand on se sert de
trs vieille eau d'aniline, on obtient une coloration trs rapide, en 5
10 minutes au lieu de 12 heures. Voici comment je procde je prpare
l'avance, comme le conseille Duboscq, de l'eau aniline sature, en
mettant dans un grand flacon de l'eau avec un excs d'aniline. Quand
on veut faire une solution de safranine, on filtre la quantit voulue de
cette vieille eau d'aniline et on la sature de safranine. Le colorant se
conserve indfiniment.
Solution de Zwaardemaker.
:
Solution alcoolique sature de safranine

Eau aniline sature
~
*"
On recommande gnralement do
colorer au moins 12 heures, mais,

formule Babes-Duboscq, 10 minutes peuvent suffire. Le matriel
qui se colore le mieux est celui qui a t fix au Flcmming-; pourtant
on
j'ai obtenu d'excellents rsultats avec des pices fixes au Bouin
peut aussi mordancer par l'iode, suivant le procd de Gram (p. 394),
comme le conseillent Babes et Prenant.
avec
la
La diffrenciation se fait gnralement l'alcool absolu, mais, pour

mettre les mitoses en vidence, on peut employer l'alcool chlorhydrique
i
trs faible (1 p. lOOOj.
Ce colorant n'est autre chose qu'un

Violet de gentiane.
mlange de penlamlhylpararosaniline (violet de mthyle, violet
de Paris) et de violet hexamthyl ou cristal-violet. Je suis oblig
de conserver le nom de violet de gentiane, qui est connu de tous,
mais
je
violet,
conseille de
qui
est
remplacer toujours ce corps
beaucoup
i)lus
pur
prcises.
Ces divers violets s'emploient
alcoolique
ou de
il
l'acide
est
bon d'y ajouter,
phnique.
On
et
jiar le cristal-
donne des colorations plus
en solution aqueuse ou hydroaccentuateur, de l'aniline
comme
obtient ainsi les violets
colorants trs employs en
phniqu,
bactriologie
viennent non moins bien en histologie.
et
aniline
et
qui con-
Se prpare en ajoutant de l'eau

Violet aniline d'Ehrlich.
aniline filtre une solution alc()oli(iue sature de violet, jusqu' forma1. Voir, au sujet de la coloration par la safranine, Ssoboiew, Zur Tcchnik der
Safraninfarbung. Ztschr. f. wiss. Mikr., XVI, p. '1-25-4-2, I89.X
MKTHODES GNRALES
394
d'une pellicule irise. Ce colorant ne se conserve pas

prpar au moment de l'emploi.
Triturer dans un mortier
Violet phniqu.
tion
Cristal-violet
Alcool 90"
gr-
10 cm3.
'
phniqu
Actique
et doit tre
2 gr.
crist
On
dissout d'abord le colorant dans l'alcool puis on ajoute peu peu

l'acide phniqu. Quand le mlange est bien homogne, on rince le
mortier avec de l'eau, par petites portions, qu'on reverse au fur et
mesure dans un flacon; il faut employer 100 ce. d'eau. On filtre aprs
24 heures de repos. Cette solution peut se conserver trs longtemps lorsqu'elle a t bien prpare.
Dans certains ouvrages, on conseille de mlanger simplement une

solution alcoolique de violet avec de l'eau phnique. A mon avis, ce
procd est mauvais on obtient gnralement un liquide trouble presque
:
dpourvu de pouvoir colorant.
Ces violets s'emj)loienl comme la safranine on diffrencie par

Talcool absolu, additionn d'acide clilorhydriqne (1 p. 1000) ou
d'actone (voir Gram-Nicolle). Les colorations sont des plus
intenses, mais ne se conservent pas indfiniment. A l'emploi des
;
accentuateui's (aniline, acide plini(|ue) on joint trs souvent le
mordanage par l'iode, qui agit ici d'une faon

connue sous le nom de mthode de Gram.
Elle repose sur ce fait que
Mthode de Gram.
particulire,
les
couleurs
de gentiane, violets penta et

pararosaniline
hexamth} ls, bleu Victoria) forment avec l'iode une combinaison
drives de
la
(violet
que l'alcool ne peut dissocier. Certains lments (chromatine

en mouvement dans les figures de karyokinse, certaines Bactries) ont pour cette combinaison une affinit telle que l'alcool ne
peut l'entraner on dit alors que ces eimenis piênn en t le Gram.
D'autres ne possdent pas celte affinit, ne prennent pas le
Gram, et abandonnent l'alcool la combinaison iodopararosaniline.
:
Celle-ci
n'est
pas
dissocie,
Gram
mais entrane.
La coloration des
la com-
due, non au violet, mais

parties qui prennent
binaison iode, car elles prennent une teinte bleu noir.
le
est
Cette raction ne se produit pas avec les couleurs drives de

rosaniline (fuchsine, magenta, diamantfuchsine, solferino, etc.).
Celles-ci forment avec l'iode une combinaison instable qui est
la
dissocie par l'alcool
ce dernier entrane l'iode et laisse la couleur
1.
Beaucoup d'auteurs indiquent Talcool aljsolu. Je ne vois pas trs bien
pourquoi, car la couleur se dissout aussi bien dans l'alcool 90 et il me semble
inutile de prendre de l'alcool absolu pour l'hydrater ensuite.
COLORATIONS PAR LES COULEURS DANILLNE

dans
le tissu
C'est
donc un non-sens d'appliquer
est
qui
une coloration
teint
la fuchsine
395
uniformment, sans diffrenciation.

la
mthode de Gram aprs
phnique. Thoriquement,
un driv de
servait de ruhine hasique vritable,

qui est
si
on se
la
para-
rosaniline, on pourrait appliquer la
mthode de Gram, mais les

fuchsines basiques du commerce sont toujours un mlange de
chlorhvdrates
(p.
et
d'actates
de rosaniline
et
de
pararosaniline
39).
Technique de la mthode de Gram.

1. Colorer
par le violet phniqu ou anihn.
2.
Laver rapidement, pour enlever Texcs de matire colorante.

recommandent de ne pas laver je crois qu'un
Certains auteurs
lavage trs rapide ne peut nuire

3.
Mordancer par
Nicolle)
le
la
raction^
liquide de Lugol^ (solution forte d'aprs
lodure de potassium
Iode
Eau
laisser
distille
frottis
gr.
200 ce.
en contact avec
minute. Les
2 gr.
1
la
ou
la
prparation pendant 30 secondes ou une

coupe doivent prendre une teinte brun
noir.
4.
Laver rapidement
Teau.
Dilfrencier par Talcool absolu ou par V alcool-actone de

Nicolle.
5.
6.
Alcool absolu
Actone
Laver l'eau pour arrter
la
diffrenciation et colorer le
fond ou passer rapidement par Talcool absolu
et le xylol et
monter
au baume.
Cette marche fondamentale peut tre lgrement modifie, suivant les cas indiqus dans les mthodes spciales. Ce qu'il faut
bien savoir c'est que le temps dlicat est celui de la diffrenciation. Si on le prolonge trop, la dcoloration
pourra tre complte,
sans respecter aucun lment;
la diffrenciation
cherche.
si
on l'courte, on n'obtiendra pas
Comme
toutes les
colorations indi-
Mann {Physiological histology, p. 2-23) rince aussi l'eau avant

Et non liquide do Gram, comme on le nomme souvent tort.
de liquide de Gram, mais une mthode de Gram. Fortschr. d. Med.,
1.
2.
le
Lugol.
Il
n"y a pas
1884
II,
METIIODHS GiNKlALKS
396
rectes
el
rgressives,
rsultat
le
la
dpond de
mthode de Gram
manire dont
la
ii'esl
pas aiilomaliqiie
on conduit
la
diffren-
ciation.
Pour obvier cet inconvnient on peut employer

tirer d'embarras.
1, qui, en cas de doute, peut
1. Colorer au violet pliniqu, comme plus haut.
2. Laver rapidement Teau.
3. Traiter pendant une minute par
la mthode de Claii-
dius
Solution aqueuse sature d"acide picri(iue
Eau
distille
^
"^^
Eg'outter, ponger doucement au buvard et diffrencier par le chloou l'essence de girolle, jusqu' ce que ces liquides ne se
colorent plus en bleu.
4.
roforme
5. Xylol,
baume.
Il est bon de savoir que les prparations traites par le Gram

sont moins stables que celles qui sont colores au violet de gentiane ordinaire.
Ce ractif a la proprit de colorer les fibres lasBleu Victoria.

tiques, mais, ce point de vue, il est trs infrieur la mthode de
Weigert et la mthode l'orcine. 11 a t maintes fois propos pour
je persiste le
remplacer le violet de gentiane et les autres violets
:
considrer comme trs au-dessous de ces colorants. Son emploi n'a de

raison d'tre que dans la mthode d'Anglade pour la coloration de la
(p. 639).
nvroglie
Il
y a toute une srie de colorants
et qui, dans le commerce, sont
sous
ce
nom
qu'on peut ranger
fuchsine
intituls
rubine,
rubinc,
magenta, solfrino, diamantfuchsine, etc. Tous sont des colorants basiques qu'il ne faut pas
Fuchsine basique.
:
confondre,
comme
je Tai
trop souvent vu faire, avec la fuchsine
398). Thoriquement, on peut les diviser en

deux groupes qui sont, d'une part, les rubines basiques ou chlorhydrates de pararosaniline et les fuchsines basiques proprement
ou rubine acide
dites
(p.
ou chlorhydrates de rosaniline.
les colorants commerciaux basiques du groupe

des fuchsines sont des mlanges de chlorhydrates et d'actates de
rosaniline et de pararosaniline. D'ailleurs, les sels de pararosaniline
ne diffrent gure des autres que par leur plus grande solubilit.
Pratiquement,
1.
Annales Inst. Paslcur, XI,
p. 33-2, 1897.
COLORATIONS PAR LES COLLEURS D'ANILLNE

Il
de
307
y aurai! pourtant avantage, au point de vue de la raction iode

Gram (p. 394), avoir des drivs purs de la rosaniline ou de la
pararosaniline.
La meilleure solution
comme
est la
fuchsme phnique de Ziehl^ qu'on
prpare
phniqu (p. 394), avec cette diffrence
qu'au lieu de 2 gr. d'acide phniqu on en prend 5 gr. On emploie
aussi la solution de magenta sature dans Teau pour le trichroviolet
le
mique de Cajal ([>. 426).

La fuchsine est utiUse en
avec
bines
vert
le
(p. 426). En bactriologie,

constant (p. 693).
II.
histologie pour des colorations
lumire
le
com-
picro-indigo carmin
liquide de Ziehl est d'un emploi
et
avec
le
COLORANTS ACIDES
Les colorants acides sont toujours des colorants plasmatiques,

mais l'inverse n'est pas vrai, car, en employant convenablement
les mordants, on
peut obtenir des colorations du cytoj)lasme avec
jdupart des colorants basiques. Nanmoins, dans la pratique
courante, les colorants plasmatiques sont toujours choisis parmi
les couleurs acides. Parmi ces dernires, il faut
distinguer celles
la
qui produisent des colorations diffuses, comme l'osine, et celles

qui se fixent plus particulirement sur les inclusions du cyto-
plasme (graisse \ mucus, lastine,
Acide picrique.
Sa couleur
etc.).
Colorant plasmatique
trs important et trs
bien celle du carmin (picro-carmin)

et de l'hmatoxyline. Avec cette dernire, son emploi est surtout
solide.
s'allie trs
la coloration
par la laque ferrique, car la coloration
la laque aluminique plit trop et prend une vilaine teinte bruntre, sous l'influence de l'acide picrique. On l'emploie surtout
associ la rubine acide, pour la coloration de van Gieson
indiqu aprs
(p.
421)
(p.
652).
et
au bleu de nithyle pour
la
Colorant plasmatique
Orange G -.
On l'emploie seul, en solution
intense.
coloration
trs
1 p.
du collagne
prcis,
mais peu
100, aprs l'hma-
Les colorants des graisses seront tudis plus loin, au chapitre consacr
microchimie (p. 655 et 673).
2. Ne
pas le confondre avec l'orange III (orang de mthyle, CJoldorangc) qui
sert de ractif indicateur (p. 253).
\.
la
MTHODES GNRALES
398
toxyline
trs
ferrique.
nuances dans
Associ l'osine, il donne des colorai ions

la mthode Thmaline-osine
(p. 418) et la
mthode de Mann au hleu de toluidine
comme
colorant et
de Unna
(p.
comme
407, note
Magenta S.
11
429).
Il
agit la fois
2).
Fuchsine acide.
de FuchsinS, Rubin
(p.
difrenciateur dans le tannin-orange
Ce corps
est
encore dsign sous
le
nom
S, rubine acide, Surefuchsin, Surerubin,
ne faut pas
le
confondre
avec
ses
homonymes
basiques (p. 396) qui ont des proprits toutes diffrentes. Nous
savons que la rubine acide proprement dite est un driv sulfon
de
la
pararosaniline, tandis que
la
fuchsine acide drive de
la rosa-
Pratiquement, les fuchsines ac[des du commerce sont des

mlanges de sels monacides de sodium et d'ammonium, de para-
niline.
rosaniline et de rosaniline trisulfoues.
Ce colorant prsente une

qu'on
le
neutralise,
il
se
particularit
trs
transforme en un
lorsimportante
neutre incolore;
:
sel
extrmement sensible aux alcalis, mme

Par consquent, le lavage l'eau ordinaire dcolore
aussi est-il
ment
les
rapideprparations colores la
faut les laver Teau acidule par Tacide ac-
coupes; pour conserver
fuchsine acide,
il
trs faibles.
trs
les
tique ou les traiter par le xylol actique (p. 422).

La fuchsine acide s'emploie en solution 1 p. 500 ou
aprs les teintures l'hmatoxyline.
p.
1000.
Je passe intenlionnellement sous silence les clbres mlanges dits

et mlange d'Ehrlich-Biondi-Heidenhain, dans lesquels la rubine acide joue un rle important.
Ces colorants, excellents pour l'poque laquelle ils ont t imagins,
doivent, mon avis, cder le pas aux mthodes panoptiques, base
d'azur de mthylne et de violet de mthylne (p. 404). En tous cas, ils
ne sauraient plus convenir pour le travail courant et ne doivent donc
pas trouver place dans cet ouvrage.
triacide d'Elirlich
osines.
Les osines sont des drivs de
la
fluorescine.
11
a beaucou[) d'osines et on les emploie quelquefois tort et

travers. Je vais donc m'efforcer de mettre un peu d'ordre dans
cette question et de
donner des indications pratiques.
Les osines proprement dites, ou bromes, sont des sels de

sodium ou de potassium de la fluorescine brome. C'est dans cette
1.
catgorie
que
se rangent l'osine soluble l'eau, l'osine jauntre
(osine w. g. de Grbler), l'osine bleutre (osine blulich de

Griibler), Tosine extra BA de Hochst, l'osine pure franaise. La
COLORATIONS PAR LES COULEURS D'ANILIiNE
399
couleur de ces diverses osines dpend surtout du nombre d'atomes

de brome fixs au noyau de la tluorescine. Les drivs mono
et
dibroms sont jauntres, tandis que
les
drivs ttrabroms
sont bleutres.
Les osines donnent en gnral des colorations difluses; mais,

les emploie bon escient, on peut en obtenir une gamme
quand on
de tons variant du rose trs lger au rose vif et mettre en vi-
dence divers lments
acido[)liiles.
La premire condition, pour
obtenir ce rsultat, est d'employer les osines en coloration rgressive. On surcolore dans une solution aqueuse 1 p. 100 et on
rgresse, d'abord par l'eau, puis par l'alcool 70 (p. 419). On peut
obtenir ainsi une lection trs nette pour les granulations osinophiles des leucocytes et pour les lments musculaires.
Toutes les osines ne se prtent pas aussi bien cette diffrenciation.

D'aprs un rcent travail de Martinotti (p. 655). on peut les ranger comme
il suit
l'osine bleutre l'eau de Griibler donne une coloration lective des granulations osinopbiles sur fond incolore; l'osine extra BA
de Hchst et l'osine pure franaise de Griibler permettent d'obtenir en
outre une coloration du fond; enfin, l'osine jauntre l'eau de Griibler
(\v. g.) est la moins lective. Je dois dire pourtant que j'ai employ
longtemps cette dernire marque par la mthode rgressive et que j'en
:
obtenu d'excellents rsultats.

Ces diverses osines sont solubles dans l'eau et dans l'alcool
ces
solutions sont doues d'une fluorescence particulire, surtout accentue
dans les solutions alcooliques. Les solutions a(iueuses s'altrent assez
facilement, par suite du dveloppement de Moisissures aussi ne faut-il
pas en prparer de grandes quantits la fois.
2. Eosines solubles Valcool. Ce sont des osines-thers mthyls ou
thyls, solubles surtout dans l'alcool 50 p. 100. 11 n'y a aucun avanai
tage les employer.

3. Erylhrosines ou osines iodes. Ce sont des sels de sodium ou de
potassium de la tluorescine ttraiode. Ces couleurs n'ont pas d'emploi
en microscopie. mais le radical acide libre, connu sous le nom d'iodosine,
un
ractif microchimique important, pour la dtermination de l'alcapar la raction de Mylius (p. 669).
4. Je mentionne seulement, pour tre complet, la safrosine ou osine
carlate, qui est un driv bromonitr de la lluorescine et la phloxine,
qui est un sel de sodium de la tluorescine chlore. Leur emploi ne
est
linil
prsente pas d'avantag;es.
Chromotropes de Hchst.
Aux osines, nous rattacherons
chromotropes, en tant que colorants plasmaliques rouges.

Ces corps sont des drivs azoques de l'acide chomotro}ique. On
les
en solution aqueuse acidule,

en solution alcoolique concentre.
les emploie, soit
soit
de prfrence
mi:thodes genirales
400
Le chroinoUopo 2R donne une coloration ronge cerise, tandis

que le 6B et le 7B sont plus carmins. Ces colorants prsentent,
sur
les osines,
Favantage de se fixer facilement sur les coupes

alcalinises et de colorer d'une faon
colores Ihmatine et
plus lective'. Leur
mode
d'einploie sera dcrit p. 421.
Vert lumire (Lichtgrn).
un grand
rle
Ce colorant plasmali(|ue joue

mthode de
dans certaines colorations combines
On remploie en
(p. 123), safranine-lichtgriin (p. 425).
gnral avec les colorants nuclaires rouges (safranine, magenta,
Prenant
carmin).
Bleus d'aniline.
On comprend
sous ce
nom
toute
une
famille de colorants bleus acides qu'il faut bien distinguer des

colorants bleus basiques-. Malheureusement, l'opinion s'est accrles colorants bleus sont
dite
que tous
font
encore aucune distinction entre
basiques et beaucoup ne
bleus basiques et les
les
bleus acides.
Tous
les
d'aniline
bleus acides drivent de la triphnylrosaniline ou bleu

ce sont des sels de sodium d'acides
dit
proprement
sulfons.
Commercialement, on dsigne sous le nom de bleu de mlhi/le

du bleu d'aniline. Ce colorant joue un
de Mann (p. 430) et dans les mthodes
rle
dans
la
mthode
grand
tous les drivs sulfons
de coloration du tissu conjonctif (p. 052). A ce groupe appartiennent aussi le bleu Veau (Wasserblau et Methylwasserblau) et les
bleus
pour micrographie n
et
de Saint-Denis (voir trichro-
mique de Massou, p. 424, et picrobleu de Dubreuil, p. 653).

Le bleu coton (BaumwoUblau) est plus spcialement un bleu
ou ttrasulfon.
tri
11
prsente des avantages particuliers pour la
coloration de la callose (p. 726) et des Champignons (p. 712).

C'est ce corps que parait correspondre le sel de calcium de
la
triphnylrosaniline
Blochmann
de
la
mme
(p.
529)
et
trisulfone
le
sel
faon (p. 529).
Carmin d'indigo ou
employ dans
la
mthode de
de sodium que Schuberg emploie
C'est encore
sulfo-indigotale de sodium.
colorant acide qui n'a aucune parent avec le carmin. On
l'associe l'acide picrique sous le nom de picro-indigo carmin
un
1.
M. Ileidcnhain, Ueber die An\veii<lung des Azokarmins und der Chromotrope.

1905.
f. wiss. Mikr., XXII, p. 337-313,
Zischr.
2. Il y a des bleus d'aniline basiques (bleu de Lyon, de Paris, bleu lumire,

bleu de nuit), mais ils sont insolubles dans l'eau et nous n'avons pas nous en
occuper, car je considre leur emploi comme superflu.
COLORATIONS PAR LES COULEURS D'aNILINE
401
c'est un bon colorant de fond aprs

salVanine et surtout aprs le magenta (trichromique
de Gajal, p. 426). On l'emploie aussi en injections vitales, pour
l'tude de l'appareil excrteur (|). 681).
OU carmin d'indigo-picrique
riimatine,
Orcine.
la
L'orcine
ne peut rentrer dans aucune des cat-
gories que nous venons d'tndier. Je la place la suite des colorants plasmatiques acides, car je ne peux pas lui consacrer un
chapitre spcial. Elle serait mieux au voisinage de l'hmatoxyline,
puisque
c'est aussi
un colorant basique
et
un colorant
acide.
On
l'extrait des
la fois
Lichens
forme la plus grande partie

note 1).
729,
(voir p.
C'est un colorant spcifique des fibres lastiques et c'est ce
orseille
de
une couleur d'origine vgtale. C'est
[Lecanora, Roccella);
l'orseille
elle
du commerce
seul titre qu'elle est employe en technique microscopique (p. 654).

Safran.
Pierre Masson a dcouvert la proprit que possde
l'infusion de safran de teindre le
coUagne en jaune
d'or.
Voir
ce sujet p. 423.
m. COLORANTS NEUTRES
C'est encore Ehrlich
rants
neutres
dans
la
que nous devons l'introduction des coloSon mlange

trois groupements basiques du vert de
technique microscopique.
dans lequel les

sont
saturs par l'orange et la fuchsine acide, a t le
mthyle
premier colorant neutre rationnel. Ce mlange clbre a t longtemps le meilleur ractif pour l'analyse chromatique, surtout
triacide,
dans
les recherches d'hmatologie, tandis que le

mlange neutre
de Ehrlich-Biondi-Heidenhain a rendu les mmes services pour
coupes. Les travaux de Rosine puis de Laurent^, ont beaucoup contribu nous faire connatre les colorants neutres et
les
leurs proprits et tablir les rgles de la prparation de l'osinate de bleu de mthylne.
Les colorants neutres peuvent tre trs nombreux, car il suffit, pour
prparer, de mlanger en proportions convenables une couleur
basique et une couleur acide en solution aqueuse. On peut obtenir
les
1. H. Rosin, Ueber eine neue Gruppe von AnilinfarbstolTen, ihre

Bedeutung
fur die Biochemie der ZoUe und ihre Vcrwendbarkeit fur die Gewebsfarbung.
Berl. klin. Woch., p. 251, 1898.
Ceixtralbl. f. PhysioL. XIII. p. nl-Ca. 1900.
2. Laurent, Ueber eine neue Farberaethode mit neutralcr
Eosinmcthylenblau-
mischung, anwendbar auch auf andere ncutrale Farbgemische. Centiâbl.

PathoL, XI, p. 86-97, 1900.
M. Langeron.
26
f.
allg.
METHODES GENERALES
402
un colorant neutre susceptible de
cristalliser, qui peut donc tre

Ces colorants neutres se prcipitent au moment du mlange,
parce qu'ils sont insolubles dans l'eau. Mais, pour ol)tenir une prcipitation complte, il faut oprer avec beaucoup de soin, car le prcipit est
soluble dans un excs de colorant basique et surtout do colorant acide.
Gomme ces colorants sont insolubles dans l'eau, il faut tourner la
difficult pour arriver obtenir des colorations. Plusieurs mthodes ont
ainsi
purifi.
t proposes
Dissoudre dans un excs du colorant acide (Ehrlich).

2. Dissoudre dans un excs du colorant basique (Rosin).
3. Dissoudre le colorant neutre par buUifion (Laurent).
4. Appliquer le colorant neutre l'tat naissant, car, ce moment, il
manifeste un maximum d'acLivif. On mlange les colorants acide et
basique au moment d'effectuer la coloration (procd primitif de
llomanovsky, mthodes de Ziemann, de Nocht et toutes les variantes
l'eau du procd de Romanovsky).
5. Dissoudre dans un liquide indiffrent, tel que l'alcool mtliylique
1.
(Jenner, Leishman, May-Grmwald, Giemsa).

De ces cinq mthodes c'est la dernire, imagine par Jenner, qui
parat devoir tre seule conserve.
Les remarquables rsultats obtenus avec les osinates de bleu de
mthylne, d'azur de mtliylne et de violet de mthylne ont accapar
l'attention des techniciens, au point de leur faire ngliger compltement les autres colorants neutres. On obtient avec ces osinates des
colorations panoptiques superbes, mais on pourrait peut-tre avoir aussi
des rsultats fconds avec d'autres corps neutres.
Personnellement, j'avais entrepris, il y a quelques annes, toute une
srie de recherches exprimentales sur les corps neutres obtenus en
prcipitant la srie des colorants basiques usuels (vert de mthyle,
violet hxamthyl, bleu de toluidine, bleu de mthylne pur ou transform partiellement en azur) par des colorants acides (osines diverses,
rubine acide, orange G, vert lumire). Les solutions de colorant basique
et acide taient mlanges de telle sorte que la prcipitation ft aussi
complte que possible; le prcipit tait recueilli sur un filtre, longuement lav l'eau distille, dessch, puis dissous dans l'alcool mthylique pur, suivant le procd de Jenner Pour colorer, je versais sur le
frottis ou la coupe, un mlange en proportions variables, dtermines
par ttonnements, de solution alcoolicjue et d'eau distille. J'obtenais
toujours des colorations nuclaires presque instantanes, mais jamais
une lection spcifique sur la chromaline des Protozoaires aussi nette
que celle de l'osinate d'azur. Les combinaisons qui ont donn les
meilleurs rsultats taient bleu de toluidinc-orange G et violet de
gentiane-orange G.
osinates de bleu de mthylne, de bleu de toiuidine,

Les seuls
d'azur de mthylne, de violet de mthylne.
colorants neutres employs couramment sont, d'une part, les
osinates de bleu de mthylne et de blende toluidine ei, d'autre
part, le
et
mlange complexe de bleu de mthylne
de violet de mthylne qu'on
et d'osinates
nomme mlange
d'azur
de Romayiovsky.

Il
403
de bien distinguer ces deux ordres de coloranis

bien que
est essentiel
mallieureusement trop souvent confondus,
qui sont
leurs proprits soient trs diffrentes.
La caractristique de la nilhode de Romanovsky est de colorer en

rouge violac la chromatine du noyau des Protozoaires, ainsi que certains antres lments, dits azurophiles (p. 388). Au contraire, les osinates
de mthylne et de bleu de toluidine ne colorent pas les
de bleu
noyaux des Protozoaires et colorent les autres noyaux en bleu. Celte

proprit du mlange de lômanovsky parat tre du mme ordre (jue
c'est du moins l'opinion
les phnomnes de mtachromasie
qui
semble la plus probable, d'aprs les recherches de Michaelis, de
Xeumann
et
de
de
Ce
dans
un
rcent
Giemsa,
Pappenheim.
dernier,
mmoire-, donne une interprtation trs sduisante de cette mtachro:
'
masie, qu'il
nomme
phile, produite
de toluidine,
par
neutropliile, par opposition la mtachromasie basoles couleurs basitiues telles que la thionine, le bleu
bleu de mthylne polychrome
le
(p. 368).
En
outre, la mtachromasie basophile parait tre le rsultat d'une

coloration directe (substantive), tandis que la mtachromasie neutro-
phile se produirait par coloration indirecte (adjective) et le mordant

que larsorcine, p. 387), puisque la
pour la production de la coloration
serait l'osine (ou un autre corps tel

prsence de ce corps est ncessaire
de Romanovsky.
Nous pouvons donc distinguer, avec Pappenheim, une mtachromasie

basophile et directe, produite par les colorants basiques mtachromatiques sur les substances chromotropes telles que la mucine et les
granulations des labrocytes et une mtachromasie neutrophile et indirecte, caractristique des corps chromotropes azurophiles (noyau des
Protozoaires) et produite uniquement par le mlange de Romanovsky
(bleu de mthylne et osinates d'azur et de violet de mthylne).
Ce qui
fait
l'importance
mlange de Romanovsky,
de cette mtachromasie
c'est qu'elle est
spcifique.
neutrophile
du
Ce mlange
est,
jusqu'ici, le seul colorant driv de l'aniline (p.
388. note 1) qui permette de mettre en vidence la chromatine des Protozoaires. Ni l'osinate de bleu d mthylne, ni l'osinate de bleu de toluidine ne peuvent la colorer.
Ce mlange est simpleMlange de May-Grunwald"'.

ment de Tosinale de bleu de mthylne pur (non transform en
azur), dissous dans de Talcool mthylique (Griibler). C'est un perfectionnement de la mthode primitive de Jenner. Sa prparation
repose sur le 5 mode d'emploi des colorants neutres (p. 402).
Nous expliquerons plus loin, propos de la mthode de Romanowskv, comment le colorant est mis en libert.
L Neumann, Zum Wesen der Romanowsky-Noclitschen Farbung (relative
Mtachromasie). Centralbl. f. Bakteriologie. Orig., XLIII, p. 716-75-3, 1907.
2. Loco citnto, voir p. 390, note 2.
3.
Centralbl.
/'.
innere Medizin, XXIII, n
11, p.
265-268, 1902.
404
MTHODES GNRALES
Ce mlange
})eiil
tre
employ aussi bien pour
les
coupes que
colore en bleu les lments basophiles et en

ces derniers sont gnralement
rouge les lments acido})liiles
les frottis.
pour
Il
mal mis en vidence par
Romanovsky. Aussi Pappenlieim

avec raison, prconis l'emploi successif du May-Grmwald
et du Romanovsky-Giemsa pour colorer tous les lmenls,
y compris les acidophiles. Nous tudierons donc l'emploi du mlange
trs
le
a-t-il,
de May-Griinwald en
Pappenheim
(p.
mme
temps que
la
mthode panoi>tique de
406).
que le May-Grnwald ne colore pas les

noyaux des Protozoaires et ne peut convenir seul pour Ttude
des parasites du sang.
Il
faut bien
savoir
Il en est
de mme du mlange Vosinate de bleu de toluidine de
Pappenheim (19ti). On peut le prparer soi-mme en mlangeant deux
solutions aqueuses 0,1 p. 100 de bleu de toluidine et d'osine, recueillant le prcipit sur un filtre, le desschant et le dissolvant 0,5 p. 100
dans l'alcool mthylique. Il est prfrable d'acheter le mlange prpar

par Grbler. Il prsente, sur celui de May-Grunvvald, l'avantage de
colorer mtachromatiquement les granulations des labrocytes.
Mthode de Romanovsky.
Nous savons que
cette
mthode repose sur Temploi d'un mlange
proportions variables d'osinate d'azur de mthylne, d'osinate
de violet de mthylne
Nous avons expliqu
rants neutres.
et
(p.
de bleu de mthylne.
387
et
408)
le
mode
d'action de ces colo-
Nous savons
qui puisse donner une

noyau des Protozoaires.
aussi que cette mthode est la seule

coloration mtachromatique spcifique du
Nous avons vu que
l'osinale d'azur peut donner cette raction,

prsence du bleu de mthylne est ncessaire pour
obtenir une coloration tout fait parfaite de la chromatinc, sans
mais que
la
qu'on puisse expliquer pourquoi.

Nous savons aussi que ce mlange ne produit que la mtachromasie neutrophile. Pour obtenir la mtachromasie basophile, il
faut y adjoindre de l'osinate de violet de mthylne.
Donc, pour obtenir du mlange de Romanovsky le maximum

il doit renfermer,
en proportions convenables, les
d'effet utile,
osinates d'azur et de violet de mthylne et du bleu de mthylne.
Les innombrables formules qui ont t proposes pour raliser ce

plus, mon avis, qu'un intrt historique. On semble
mlange n'ont
COLORATIONS PAR LES COULEURS D'ANILLXE
405
avoir compltement abandonn, et avec raison, les procds Veau, qui

consistent mlanger extemporanment des solutions aqueuses d'osine
et de bleu
charg d'azur et de violet de mthylne (procds de Nocht,
de Laveran, etc.).
Les procds Valcool mthylique jouissent de la faveur parce qu'ils
donnent des rsultats beaucoup plus sirs et plus rapides. Ils reposent
sur l'isolement du colorant neutre et sur sa dissolution dans l'alcool
mthylique (principe de la mthode de Jenner, 5" mode d'emploi des
colorants neutres, p. 402). Mais, sous cette forme, le colorant neutre ne
peut agir; il faut le mettre en libert par addition d'eau. Celle-ci doit
tre mnage de telle sorte que la matire colorante reste encore un
certain temps l'tat de dissolution et puisse exercer son action. En
effet, ds que la prcipitation du colorant neutre est complte, le colorant n'agit plus, ni froid, ni chaud; il est inutile de prolonger le
contact avec l'objet colorer, car il ne reste plus en solution que
l'excs de colorant basique qui sert retarder la prcipitation.
On est donc pris entre deux alternatives en solution alcoolique, le

corps neutre ne colore pas; par addition d'eau, il prcipite et ne colore
plus. Pour russir, il faut donc saisir le stade intermdiaire, dans lequel
le colorant neutre est encore dissous dans l'alcool
mthylique trs
dilu. Ceci nous rend compte des prcautions observer pour bien
russir une coloration, surtout avec le mlange de Giemsa.
:
Les solutions
employes actuellement, pour obtenir la

Romanovsky, sont celles de Giemsa et de Leishman.
travail normal de coloration des fr^Dttis, je conseille viveles plus
coloration de
Pour le
ment l'emploi de la mthode panoptique de Pappenheim et
surtout du mlange panchrome de Pappenheim qui runissent
les
et
avantages des mthodes de May-Griinwald et de Romanovsky,

donnent une coloration trs dlicate et trs nuance. Pour le
diagnostic rapide, la mthode

rsultats excellents, suprieurs
Comme
Leishman.
frottis
rapide de Giemsa donne des

ceux que fournit le procd de
ces procds sont destins la coloration des
desschs, je donnerai ensuite les mthodes particulires
applicables
aux
frottis
humides
et
aux
coupes.
Procds applicables aux frottis desschs.
I. Mthode
Ce procd est
panoptique de Pappenheim '.
bas sur lemploi successif du mlange de May-Grnwald et do
celui de Giemsa. Le premier colore surtout les lments acido-
philes et les granulations neutrophiles des leucocytes, tandis que

second colore les noyaux et les parties azurophiles. Spar-
le
I.
Pappenheim, Panoptische Universalfrbung
Klinik, IV.
2,
p.
1244, 1908.
fiir
Blutpraparate. Afedizinische
METHODES GENERALES
406
ces deux mthodes donne une coloration

May-Griinwald colore mal les noyaux el pas du
le Giemsa met insuffisamcorps azurophiles, tandis que
ment, chacune
incomplte, car
tout les
de
le
ment en vidence
trophiles.
1 Fixation.
granulations neu-
les parties acidophiles et les
Verser sur
le frottis
10 gouttes^ de liquide de
verre hien sche. Laisser

May-Griinwald. Couvrir avec une hole de
agir
minutes.
//
est
liquide ne sche pas
essejiiiel
le
que
".
Un grand avantage
des mlliodes Talcool

de dispenser de la fixation par l'alcool absolu
Peau, devait durer
^^^j^ rivec les mthodes
^j^. minutes. Ici, comme dans le Leishman ou
est
Bote de
Fig. 171.
Ptri, pour colorations
au Romanovsky, daprs
Pappenncim.
^
^'
pour
les colonies,
j^ Qiemsa rapide, la fixation est produite trs

._
-.u ij
rapidement par 1 alcool methylique qui. sert de
dissolvant au colorant. C'est un grand avantage
est souvent trs difficile de trouver et de con-
,1.1
il
server de l'alcool absolu.
2" Coloration.
Premier temps.
10 gouttes d'eau
En deux
temps.
Dcouvrir le frottis, verser sa surface
distille
^ Bien mlanger avec
le May-Griinwald,
en inclinant la lame en
tous
Laisser
sens.
agir
une minute au moins.

Ce temps
colorer
COOlT C"
Fig. 17'3.
tions au
Cuvette et support pour colora-
Romanovsky. d'aprs Giemsa
Pappcnlieim.
et
tous
pour but de
lments
les
acidophiles en rose vif et

les
granulations neutrophiles. Pour eiectuer la
coloration, on se sert avec
avantage du support en
verre avec cuvette reprsent par la figure 172. On opre ainsi trs
proprement, sans tacher la table et on peut mme laver la pisselte
sur la cuvette.
Deuxime temps.
Rejeter
le
colorant
Ou
prcdent
et,
sa?2s
12, 15 gouttes, si c'est ncessaire pour bien couvrir la lame.

cet accident arrivait, il faudrait, pour y remdier, laver le frottis l'alcool
methylique, de faon dissoudre le prcipit adhrent. On verserait ensuite de
nouveau 10 gouttes de mlange colorant et on passerait immdiatement au
premier temps de la coloration.
3. Employer toujours un noml)re de gouttes d'eau distille gal au nombre des
1.
2. Si
gouttes de May-Grnwald qui ont servi pour la lixation.
407
laver, verser sur le frottis du Giemsa dilu dans la proportion

de 3 gouttes pour 2 cm"^ d'eau distille. Laisser agir de 5 minutes
30 minutes ou une heure, suivant la nature et l'anciennet du
frottis
un
frais
frottis
demande en gnral 10
15 minutes de
coloration.
Lavage.
On
peut laver l'eau
distille, la pissette,
ou
plus simplement sous le robinet, sous un jet d'eau assez fort.

Le lavage doit donc tre violent, pour entraner les prcipits, et
rapide, pour ne pas nuire la
coloration.
Quelques
secondes
suffisent.
Si la coloration tait trop
bleue ou trop intense-, on pourrait

un peu le lavage, de prfrence
diffrencier- en prolongeant
alors dans l'eau distille.
la
A Schage.
scher
le
Ds
frottis
par
que
le
lavage est termin, se hter de

dans un cahier de papier
compression,
Joseph.
Il
ne faut pas craindre d'appuyer, comme lorsqu'on sche au

])age d'criture. Mais il faut viter que le buvard
buvard une
mince couche de sang serait raille.

ne faut jamais chauffer un frottis pour en achever la dessiccation, mais le passer deux ou trois reprises dans le buvard. Se
glisse sur le frottis, car la

Il
mfier du transport possible de parasites d'une lame l'autre par

l'intermdiaire du buvard.
5
Examiner
avec
l'objectif
immersion dans
d'huile de cdre, sans lamelle; aprs
une goutte
examen, enlever l'huile de
cdre en plongeant la lame dans un tube Borrel plein de xylol ou

de tolune, scher au buvard, et conserver sec sans lamelle,
et bien l'abri de la poussire, dans des botes rainures. En effet
ces colorations ne peuvent supporter ni les milieux rducteurs, ni
milieux acides; le mieux est de les conserver sec au contact
les
de
l'air (p.
465).
Pour examiner avec
les objectifs faibles
sec (recherche des
doigt une mince couche d'huile de
Pilaires, etc.),
on tend avec
cdre sur
pour le rendre transparent. Il ne faut jenais

non imbib d'huile de cdre, car on ne distingue
Pour les objectifs forts sec, mettre une grosse
le frottis,
examiner un
aucun
le
frottis
dtail.
Voir p. 408 les prcautions prendre pour cotte dilution.

On peut diffrencier aussi par le tannin-orange de Unna. tendu de son
volume d'eau, mais ce procd, excellent autrefois aprs la coloration au bleu
Borrel-osine, nuit la finesse des tons que fournit la mthode panoptique.
1.
2.
MTHODES GNRALES
408
d'iiiiile
goulte
faire
de cdre et une lamelle, alin de ne pas risquer de

les objeclifs courle dislance focale. Aprs
immersion avec
examen, plonger
d'elle-mme.
la
lame dans
le
lolune
Prcautions prendre pour prparer
La
la
lamelle se dtache
le
Giemsa
dilu.
solution de Giemsa poui^^la coloration de Romanovsky (Giemsa's

fur Romano\vskyfrbung- de Griibier) est ainsi constitue
Lsung
Azur
Azur
II
osine
0,8
II
Glycrine de Merck
Alcool mthylique de
125
Kahlbaum
375
gr.
Bien entendu, il ne faut pas la prparer soi-mme, mais Tacheter

otoute faite. Nous avons expos (p. 389) la nature de l'azur II; Tazur II
sine est rosinate d'azur, qui agit comme colorant neutre et qui est
mtachromasie neutrophilo spciliciue pour les corps azuroNous savons aussi (p. 390) que, dans les flacons un peu
anciens de solution de Giemsa, il y a toujours un peu de violet de
mthylne. Naturellement le liquide renferme aussi de l'osinate de
bleu de mthylne et un excs de colorants basiques (bleu de mlhylne et azur de mthylne), calcul de maniie retarder la prcipitation de l'osinate d'azur, au moment de la dilution, sans toutefois
dou de
la
pliiles (p. 403).
influencer la coloration.
La g-lycrine a pour but de donner des solutions plus concentres en
matire colorante que l'alcool mthylique seul ne pourrait le supporter
et d'obvier l'extrme volatilit de cet alcool (qui bout 67). Primitivement la teneur' en glycrine tait de 50 p. 100, mais, depuis 1907-,
elle a t abaisse 25 p. 100, sans que la puissance colorante et la
facult de conservation du liquide aient t intluences.
'
En
oprant
la
dilution,
il
faut viter tout ce qui peut favoriser la
prcipitation de l'osinate d'azur.

1 L'eau distille ne doit pas tre acide
il est mme
prfrable qu'elle soit lgrement alcaline. Les moindres traces d'un
acide organi(|ue ou minral et mme l'anhydride carbonique nui:
Cette sensibiht est telle que le papier de

tournesol est impuissant dceler les traces d'acide suffisantes
sent la coloration.
composants basiques du colorant. 11 faut employer,

indicateur
'^ la solution alcoolique d'hmatoxyractif
pour altrer
comme
les
1. Giemsa, Eine Vereinfachung und Vervollkommung meincr MethylenazurMethylenblau-Eosin Farbemethode. Centralbl. f. Bakt, Orig., XXXVII, p. 308, 1904
2. Giemsa, Beitrag zur Farbung der Spirochate pallida in Ausstrichpraparaten
Deutsche med. ^yocll., n" 17, 1907.
3. Ces dtails sont
emprunts Giemsa. Deutsche med. Woch., n" 12, 1910.
COLORATIONS PAR LES COULEURS D'AMLINE

Une. Dissoudre dans de
loxyline, ou
mthode
la
prendre
95 quelques cristaux d"hnia 1 p. 100 qui sert pour la

377). Prendre 10 cnr^ de Feau
l'alcool
soluliou
la laque ferrique (p.
essayer, y ajouter 2 gouttes de

Si,
409
la
solution dlimatoxyline et agiter.

est reste incolore ou jauntre,
au bout de cinq minutes, Teau
la provision d'eau distille et goutte goutte, une solution

100 de carbonate de sodium ou de potassium, jusqu' ce
que celte eau, prouve par Thmatoxyline, prenne, au bout de
cinq minutes (et non d'une seule minute), une coloration violace,
ajouter
1 p.
faible
A la
aprs
mais nette.
rigueur, on peut se servir d'eau de pluie ou de neige fondue,
et fillration. Dans les eaux de source, les sels
bullition
de magnsium sont les plus nuisibles.

Pour la mise en vidence des granulations de Maurer, dans
les hmaties parasites par le Plasmodium falciparum, il faut
on la prpare en ajoutant une

alcaline
nouvelle goutte de carbonate de potassium 1 p. 100 pour 20 cm^
d'eau distille.
une eau franchement
La dilution
Le mlange ne doit pas tre concentr.
7iormale esi de 1 goutte de Giemsa pur pour 1 cm^ d'eau distille.
On peut, pour la mthode panoptiqiie de Pappcnheim, porter la
2
dose 3 gouttes pour 2

faut jamais dpasser.
On
mais c'est l'extrme limite qu'il ne

risque non seulement de voir le mlange
cm%
concentration
prcipiter rapidemeit, mais, en outre, la trop grande
en glycrine et en alcool mthylique nuit la coloration. Giemsa
insiste
beaucoup sur ce
po'int,
car on est facilement tent de forcer
la dose.
Propret absolue du matriel (prouvettes, pipettes, lames

Lorsque du prcipit est adhrent aux parois
de ce matriel, la dilution est beaucoup moins stable et prcipite
avant d'avoir color. Il faut donc laver soigneusement les vases
avec de l'eau distille ou de l'alcool, en cas de prcipit trop
3''
et lamelles).
adhrent. Rincer l'eau distille et viter toute trace diacide.
Ne pas agiter le
On est souvent tent de secouer

mlange.
c'est une pratique
le liquide pour assurer son homognit
colorant.
dangereuse, qui amne promptemeut la prcipitation du
Il faut donc se servir d'un vase assez large, ayant au moins 3 cent,
:
de diamtre on mesure l'eau distille dans une prouvette spcialement destine cette usage et on la verse dans le large tube o
on fait le mlange. On a soin d'y introduire d'abord l'eau et de
:
METHODES GENERALES
410
loaiber dans celte dernire
les goiiUes de liquide de Giemsa.

faire
EflecUier rapidement le mlange en agitant trs doucement, par un
mouvement tournant. Si on prpare une certaine quantit de
il
mlange,
faut agiter au fur et
gouttes.
5^ Prparer le
mesure qu'on
fait
tomber
les
mlange immdialement au moment de s'en

mme pour quelques minutes. Nous
servir et jamais Tavance,
avons vu, en effet (p. 405), que le colorant produit son effet maximum au moment o la solution alcoolique est additionne d'eau.
Lorsquun mlange a
prcipit, il est inutile de prolonger la

coloration ou de colorer chaud. La seule chose
qu'il
ait faire est
de jeter
le
mlange, de bien
rincer le frottis Teau distille et de le recouvrir
d'un autre mlange prpar avec soin.

6*^ Ne
jamais introduire dans le mlange aucun
instrument mtallique.
7 Conservation des colorants neutres.
Le
meilleur moyen, pour conserver intactes les solutions alcooliques de colorants neutres (Giemsa,
Fla-
Fig. 173.
con
compte
gouttes
t-
tine.
(lig.
Giemsa
rapide,
shman,
etc.), est
compte-gouttes
May-Griinwald, panchrome, Leide les garder dans des flacons
ttine,
du modle
reprsent
ligure 173. On a sur la table, dans une tagre

168) ou un bloc en bois (fig. 167) toute la srie des colorants
usuels.
On
vite ainsi les confusions de compte-gouttes, et Fintroduclion
de poussires ou d'impurets dans

ont toujours
avec
le
mme
les liquides.
En
outre, les gouttes
mme
volume, puisqu'elles sont toujours comptes

instrument. En voyage, on retire les lubes compte-
le
gouttes, on les numrote pour les emballer part et on les

place par des bouchons de lige numrots.
Mthode rapide de Giemsa ^
rem-
Elle consiste
fixer par la
puis inonder la prparation
avec une quantit dtermine d'eau distille.
Nous avons vu (p. 4.08) que la solution mre de Giemsa renferme
II.
solution alcoolique
25
p.
du
colorant,
100 de glycrine. Cette quantit, qui est ncessaire pour sa

empche de l'employer telle qu'elle, comme la solude Leishman, pour la fixation des frottis. Il faut donc la
conservation,
tion
1.
Giemsa, Uebor eine neue Sclincllfarbiing mit meiner Azureosinlsung. Mnclii\^ 47, 1910, et Archiv fiir Schiffs-und Tropenhygiene, XIV, p. 695, 1910.
med. W'och.,
COLORATIONS PAU LES COULEUHS D'ANILINE
411
diluer avec son volume d'alcool
nilhylique ou d'aclone. Je
donne celte dilution le nom de Giemsa rapide. Les liquides de
dilution doivent tre trs purs, anhydres et sans trace d'acide.
L'actone ne convient pas pour les pays chauds, cause de sa

trop grande volatilit.
11
ne faut prparer
la fois
quantit de dilution, car elle ne se conserve pas
mre.
l
Fixation.
Mettre
le
frottis
qu'une petite
comme
la
solution
dans une bote de verre bien
sche (bote de Ptri (fig. 171) ou bote carre, genre de bote de

Laveran). Verser sur le frottis 15 goultes de Giemsa rapide. Couvrir et laisser agir
2 Coloration.
30 secondes.
Verser sur
la
lame lo
cnr^ d'eau distille,
additionns au besoin de 3 gouttes de carbonate de potassium

1 p. 1000. Le frottis doit tre bien recouvert par le liquide. Remuer
doucement pour homogniser. Colorer de 3 o minutes, ou beausi on veut avoir une coloration
plus intense.
coup plus longtemps
3 Laver rapidement sous le robinet, scher au buvard

examiner dans l'huile de cdre.
et
D'aprs Giemsa ce procd pr.ênle sur celui de Leislimari les avantages suivants
1 La teneur en azur est plus constante et Texcs de colorant basique
est moins grand, d'o coloration plus rgulire et plus intense.
2 La prsence de la glycrine empche l'vaporation rapide du
mlang-e et la formation de prcipits.
3" La solution mre peut servir volont pour ce procd rapide ou
pour d'autres colorations *.
:
III.
Mlange panchrome de Pappenheim (Pappenheims Pan-
chromgemisch de
Griibler).
Pappenheim a combin ce mlange
le plus grand nombre possible d'lnuances particulires, correspondant

ractions cytologiques actuellement connues
baso-
de manire arriver colorer
ments
diffrents, avec des
toutes les
philie, acidophilie, neutrophilie,
mtachromasie bas)[)hile
et
neu-
trophile.
Ce qui manque surtout aux mlanges genre Giemsa ou Leishman,

de colorer mtachromatiquement les chromotropes basophilcs, tels que le protoplasme des Protozoaires et les granulations des
labrocytes. Aussi Pappenheim a-t-il voulu composer un mlange du type
Giemsa (alcool mthylique-glycrine) renfermant, d'une part le bleu de
c'est la facult
1.
Par exemple l'ancien procd
l'alcool absolu et colore
lent, dans lequel on fixe 10 minutes par

12 heures dans la dilution normale.
412
MTHODES GNRALES
mthylne et l'osine et, en outre, le bleu de

de mthylne. L'avantage du bleu de toluidine est
de permettre une coloration plus intense des lments acidophiles, car
l'osinate de bleu de toluidine est beaucoup plus facile dissocier que
les osinates de bleu de mthylne et d'azur. L'avantage du violet de
mthylne est de colorer mtachromatiquement les chromotropes basophiles (granulations des labrocytes).
Voici la teneur du mlange panchrome, mais il est bien prfrable
de l'acheter tout fait chez Grlibler
mthylne,
l'azur de
toluidine et
le violet
Bleu de mthylne
Bleu de toluidine
Azur
gr.
0,5
Violet de mthylne
0,75
osine
250
200
50
Glycrine
Actone
Verser sur
le frottis 10 gouttes de mlange de

d'osinate
bleu de toluidine de Pappenheini,
de
May-Grmwald (ou
Couvrir
cinq minutes.
et
laisser
trois
agir
p. 404).
On
Fixation.
peut aussi fixer en cinq minutes, par immersion dans un
mlange
parties
absolus.
2
Coloration.
panoptique
(p.
gales
d'alcools
Premier
temps.
le frottis
de panchrome pour 10 cm^ d'eau

minutes. Pour les Protozoaires,
moins 20 minutes
Lavage
Gomme
et
dans
thylique
la
et
diffrencier par le
un mlange de 15 gouttes
Colorer au moins cinq
prfrable de colorer au
distille.
il
est
l'tuve 37".
schage au buvard, comme pour
panoptique (p. 407).

4" Diffrenciation.
Aprs schage au buvard,
la
il
certainement trs suprieur toutes
variantes de la mthode de
et
mme
est
bon de
75
25
Actone
est
mthode
mlange suivant.
Alcool mthylique
Ce procd
mthode
406).
Deuxime temps. Verser sur
mtliylique
les autres
Romanovsky (Giemsa, Leishman,
etc.)
au procd panoptique de Pappenheini. Notamment, pour
il donne une diffrenciation

beaucoup plus prcise.
permet de colorer des frottis trs anciens et il ne donne jamais
de prcipit. Actuellement je ne me sers plus que de cette
mthode.
les Protozoaires,
Il
413
Cotte mthode est encore trs en

lY. Procd de Leishman'.
usage dans les pays de langue anglaise, mais, mon avis, elle ne vaut
pas les procds de Pappenheim.
Verser sur le frottis 6 gouttes de solution de
1" Fixation.
Leishman -, couvrir avec une bote de verre bien sche, laisser agir
30 secondes.
2 Coloration. Dcouvrir le frottis et verser sur la lame un

nombre de gouttes d'eau distille double de celui des gouttes de la
solution de Leishman, soit 12 gouttes. Mlanger avec soin, en balantjant

la lame et laisser agir cinq dix minutes.
Ce temps est trs important
3" Diffrenciation l'eau distille.
et doit tre contrl au microscope. 11 a pour but de dissoudre le pr-
de prciser la coloration rouge des noyaux des Protozoaires

donner aux hmaties une teinte rose.
4 Scher au buvard et examiner dans l'huile de cdre.
cipit,
et
de
Procds applicables aux frottis humides.

Voir p. 628 la mthode de prparation et de fixation des frottis
humides. La coloration peut tre efl'ectue soit par le procd de
Giemsa, soit par les mthodes de Pappenheim (panoptique et pan-
chrome). Pour ces deux dernires mthodes, procder

est
indiqu pour
les
coupes
Procd de Giemsa ^
alcoolique de Schaudinn
heures.
(p.
(p.
416).
Dans
1 Fixation.
le
comme
il
subhm
283), pendant douze vingt-quatre
Giemsa trouve que le sublim est trs suprieur l'alcool et au

formol qui modifient trop la structure de la chromatine et l'empchent
de prendre la teinte azurophile caractristique. En outre, le sublim est
facile liminer par l'iode. Je crois, nanmoins, qu'on peut trs bien
fixer au Bouin; dans ce cas, le traitement l'iode est inutile, il suffit
d'liminer compltement l'acide picrique (p. 271 et 348).
2
Lavage
Premier temps.
Laver rapidement Teau et
minutes dans du Lugol faible * ainsi constitu
plonger cinq dix

1.
Journ. Roy. micr. Soc. London, p. 715, 1901.
Brit. med. jown., II, p. 757,
1901.
2.
dans
Acheter chez Grbler

l'alcool mthj-Iique
la solution toute faite ou

pur la dose de 0,15 p.
le
colorant sec qu'on dissout

Les produits Solod sont
100.
aussi trs bons.

3. Giemsa,
Ueber die Frbung von Feuchtpraparaten mit meiner AzurEosinmethode. Deutsche med. Wocli., p. 1751, 1909.
4. L'emploi du Lugol est indispensable, car la solubilisation du sublim par
l'iodure de potassium seul aboutit la production d'un prcipit opaque de
mercure mtallique provenant de la dissociation du proto-iodure de mercure (p. 295,
note
1).
METHODES GNRALES
414
Eau
100 cm'^
distille
lodure de potassium
Lugol ordinaire (p. 395)
Deuxime temps.
2 gr.
3 cni-^.
Immdiatement aprs
Liigol. laver rapidement
Fean
el i)longer dix
HyposuHite de sodium
Eau
distille,
le
Irailemenl an
miaules dans
^
:
0,5 gr.
100
cm^.
Laver cinq minutes Teau courante.

Troisime temps.
3 Coloration, pendant une douze heures ou plus, dans la
dilution' normale de Giemsa (p. 409), soit une goutte par centimtre
cube d'eau
distille. Aprs la premire demi-heure, rejeter le

colorant et le remplacer par une dilution frache.
La coloration doit tre faite ds que le lavage est termin, car si
on conserve
les frottis
Lavage
quelque temps,
ils
perdent leur colorabilit.
rapide Feau distille, au besoin diffrenciation
prolonge.
Dshydratation par passages
liquides suivants
1.
3.
4.
Actone
2.
+
+
+
95 cm=^.
70
70
5 cm'^
Xvlol
30
30
Xylol pur
Monter an baume bien pur
successifs dans les quatre
et
neutre ou mieux encore dans
la paraffine liquide.
La mthode de Giemsa, applique aux frottis humides, donne

nuclaires beaucoup plus fines qu'avec les
des diffrenciations
frottis
desschs. Les rsultats obtenus prsentent, sur les colo-
rations la laque ferrique, favantage de la polychromie, qui rend

la lecture
des prparations beaucoup plus facile.
Procds applicables aux coupes

l.
Procd de Giemsa ^
celui qui est applicable
aux
Ce procd
humides.
diffre trs
peu de
frottis
C'est la mthode de Heidenhain (p. 464).

L'actone a, sur l'alcool absolu, l'avantage de trs peu dcolorer les frottis
et de s'emparer de leur eau, mme en prsence du xylol. En outre il produit une
lgre diffrenciation qui amliore la coloration. Cette diffrenciation est maxima
avec le liquide n" 1. On peut aussi employer do l'actone pure.
3. Giemsa, Ueber die Farbung von Schnitten mittels Azur-Eosin. Deutsche
1.
2.
COLORATIONS
iWll
LES COULF-:URS D'ANILLNE
415
Fixation. Les fragments d'organes ne doivent pas avoir plus

d'paisseur. Fixer dans le sublim alcoolique de Schau-
mm.
de 5
283) ])endant quaranle-huil heures, en renouvelant

bout de vingt-quatre heures.
au
liquide
dinn
(p.
le
On peut employer
aussi la solution aqueuse sature de sublim, mais

ne faut pas y laisser trop longtemps les organes cause des cristaux
qui envahissent les tissus. Au contraire, on peut garder longtemps
(trois mois) les pices dans le sublim alcoolique, condition d'employer
des flacons bien bouchs Tmeri. // ne faut jamais toucher les pices
il
avec un instrument mtallique.
Dshydrater par
paraffine et
comme
il
couper
est dit p.
les alcools,
[x
imprgner au tolune, puis
au plus. Bparaf/mer
la
coupes
347.
Traitement des coupes par
les
le Lugol.
Employer soit 1-e
70 additionn de 3 p. 100 de
Lugol
faible (p. 414), soit Talcool
Lugol
ordinaiiê
la
teinture d'iode
faible.
Ce dernier procd produit un mordaneage
trs favorable
soit
(p. 395),
simplement de
Tobtenlion d'une coloration protoplasmique bleue intense

20 30 minutes.
il
doit
alors durer
4 limination de l'iode^ par

a.
b.
Lavage rapide l'eau distille;

Sjour de 10 minutes dans
rhyposulfile
sodium
de
0,5 p. 100;
c.
Lavage de 5 minutes
Teau ordinaire;
Lavage rapide l'eau distille.

5 Coloration, pendant deux douze heures, dans le Giemsa
dilu 1 goutte pour un centimtre cube d'eau distille (ou pour
d.
2 cnr en cas de coloration trs lente), changer

la premire demi-heure.
6 Laver l'eau distillje et
humides (p. 414).

IL Procd de Schilling'.
traiter ensuite
le
colorant aprs
comme
les frottis
Ce procd, excessivement
simple, consiste taler les coupes la paraffine sur de l'eau tide

puis les faire flotter sur le colorant (Gien)sa dilu); on les
reporte ensuite sur l'eau. Coller sur lame, scher,
par
le
xylol et
dparafliner
monter au baume.
^\ôch., n" 12, 1910.

Schuberg. Ueber die Fiirbung von Schnittpr;iparaten
mit der Giemsaschen Azur-Eosin Mthode. Deutsche med. Woch., XXXY, p. -2106,
1909.
Voir aussi ce sujet
Seidelin, An iron-hmatein stain with reraarks
on the Giemsa stain. Parasitology, IV, p. 94-103, 1911.
1. Beihefte z. Archiv f. Schi/fs u. Trop. Hi/y., 1, p. 86, 101'2.
med.
MTHODES GNRALES
416
III.
Zenker
Procds de Pappenheim ^
(p.
284), formol 10
iod, dshydrater
p.
Fixer de prfrence au
100, laver Teavi,
i)uis l'alcool
et inclure la paraffine.
Mthode panoptique (procd
hislologique)
Colorer les coupes pendant lo minutes Ttuve 37, dans

un mlange parties gales de liquide de May-Grmwald et d'eau
1.
distille.
2. Sans laver, colorer 45 minutes, l'tuve 37", dans du

Giemsa dilu raison de 3 gouttes pour 2 cm^ d'eau distille.
3. Laver Teau, diffrencier dans Teau aclifie 4 gouttes
100, laver de nouveau, puis essorer au buvard.

Dshydrater d'abord par l'alcool-actone (alcool 90, actone 10), puis par Falcool absolu. Xylol, baume.
p.
4.
Mthode du panchrome (procd cytologique).

1.
Colorer au May-Griinwald
comme
ci-dessus.
Sans laver, colorer 30 minutes 37" par

Pappenheim dilu 3 gouttes pour 2 cm^ d'eau
2.
3.
le
panchrome de
distille.
Laver l'eau, diffrencier dans l'acide picrique 0,2
p.
100,
laver de nouveau.
4. Traiter par l'actate d'uranyle 1 p.
mine 8
p.
5. Dshydrater par
puis par
6.
et
de
100 ou Tactate
d'alu-
100. Laver de nouveau.
un mlange d'alcool absolu
et
d'actone (aa),
l'alcool absolu.
Essence de cajeput; monter dans parties gales de dammar

baume dissous dans le xylol.
1. Pappenlieim, Ueber die Anwenduiig des kombinierten May-Gicmsaverfahrcn

zur Selinittfdrbung. Folia h;ematolo(/ica, XI, Archiv., p. 373-377, 1911. Voir aussi
Dermatol. Studicn, XXI, 1910.
CHAPITRE XX
COLORATIONS COMBINES
que les colorations combines les plus utiles.
ces colorations sont presque toujours destines aux coupes,
c'est dans ce chapitre que
je donnerai la marche suivre pour
Je ne- dcrirai
Comme
colorer les coupes
mme
la
paraftine.
Cotte marche est d'ailleurs
la
pour
coupes au collodion In seule diffrence consiste,
au lieu de traiter les coupes sur lames, les passer gnralement
de godets en godets, dans les divers liquides colorants et interles
mdiaires
(p. 35).
La mthode type
mon
avis,
est la
sera la coloration
l'hmatine-osine, qui,
mthode fondamentale de Thistologie normale
et pathologique.
Uu'est-ce qu'une coloration combine? Sous ce nom, je runirai

doubles ou multiples, qu'elles soient successives ou
les colorations
simultanes. Je
mthodes
crois
qu'il
n'y a pas
et multiplier les catgories,
intrt
comme on
pulvriser
les
a quelquefois
tendance le faire. L'arsenal technique parat si embrouill et si

obscur au dbutant, qu'il faut autant que possible lui en simplifier
l'accs. Je distingue donc les colorations simples, o on n'emploie
qu'un colorant (hmatoxyline au fer, thionine phnique, bleu
et les colorations combines, dans lesquelles
on emploie plusieurs colorants, simultanment ou successivement
(hmatine-osine, trichromique de Cajal, tri}de coloration de
polychrome de Unna)
Prenant, etc.). Parmi ces dernires nous tablirons des catgories

la nature du colorant nuclaire
(hmatoxyline, couleurs
d'aprs
basiques, etc.).
M. Langeron.
27
418
INJTIIODES
1.
COLORATIONS
Mthode
i.
GiNUALLS
A L' H
M AT
XYL N E
I
hinatineosine.
Nous avons ex[)li(|u (p. 347) la manire de (lparalTmer les

coupes. Nous supposons donc que les lames ont l hydrates,
aprs passage dans les tolunes et les alcools. Elles sont dans une
bote rainures
remplie
batterie de tubes Borrel
d'eau.
Nous avons devant nous une
ou Jolly renfermant
Hmalun
acide de Mayer ( p. 374).

Alcool chlorhydrique 0,23 p. 100 (V goutles p. 100).
Eosine extra BA de Hchst 1 p. 100 '.
Alcool 70".
Alcool 90'\
iVlcool absolu.
Xylol.
lame de Teau
1 Sortir la
et
la
plonger dans
l'hmatine-.
Colorer de cinq vingt minutes ou |lus, suivant le cas;

2" Rincer l'eau et vrifier au microscope, avec un objectif
faible (50 diani.), si les noyaux sont suffisamment colors on peut,
;
sans inconvnient,
acide
surcolorer pour rgresser ensuite
Falcooi
3 Dilfrencier quelques secondes dans l'alcool chlorhydrique

puis se hlei- de laver abondamment.
*,
Laisser
sjourner les coupes dans une boile

rainures remplie d'eau de source, jusqu' ce qu'elles aient pris
une belle teinte bleu noir.
4
Virage.
Ce virage est
et assurer
l'acide
1
100
p.
par
la
le
non seulement pour avoir une bonne

mais encore pour liminer srement toute trace d'acide
des plus importants,
teinte nuclaire,
conservation de la prparation. On peut aussi saturer

carbonate de litbium ou le bicarbonate de sodium
(p. 373).
parties gales de solutions 1 p. 100 d'orange G et d'osine

de llochst ou encore le mlange bleu de mcthyle-osine de Mann.
2. On peut colorer deux lames la fois dans un tube Jolly et trois ou six
dans un tube Borrel muni d'un prisme.
3. Cette ditrrenciation n'est pas indispensable avec l'hmalun acide de Mayer,
si on n'a pas pouss trop loin la coloration. Elle permet d'avoir une teinture
1.
Ou un mlange
extra
BA
exclusivemont nuclaire.
COLORATIONS COMBINEES
une minute dans l'osine;
6 Laver abondamment Teau pour enlever
419
5" Colorer'
tout
l'excs de
colorant;
7"^
Diffrencier dans l'alcool 70% puis dans Talcool 90, en
surveillant au microscope, jusqu' ce

ait
disparu
la teinte
que
rouge
difiiise
L'osine no doit produire qu'une coloration cytop]asmi(jue bien franche

donner une gamme de roses plus ou moins vifs, suivant 'inte nsil de
l'acidopliilie des divers l-
et
On pousse
ments.
moins
loin
suivant
dsire
les
la
plus ou
dcoloration,
parties
mettre en
qu'on
vidence.
Noter que les tissus fixs au

formol prennent trs difficilement rosine (p. 277) et se
dcolorent trs vite.
8 Dshydratation.
Ce temps est trs important, car c'est de lui (jue
dpend la russite du
montage au baume. Les
coupes, au sortir de l'al-
Fig.
n4.
Appareil form de cristullisoirs
pouvant servir remplacer les

batteries de tubes pour les colorations. Le
vase central est rempli de Ijilles de verre ou
embots,
cool 90. sont dj partiellement

dshydrates.
de grenaille de plomb pour assurer l'immobilit du systme. L'intervalle qui spare

chaque cristallisoir est rempli par un liquide
Bien essuyer
de la lame et
diffrent.
le
dessous
la
plonger
dans un tube plein d'alcool absolu, ou mieux verser trois reprises,

la surface de la lame, de l'alcool absolu conserv dans un
petit
flacon bien bouch. Verser suivant la longueur de la lame, de manire
chasser l'alcool hydrat qui imprgne les coupes. Balancer la
lame pour que les coupes soient bien pntres par le liquide ^
Une grande quantit n'est pas ncessaire on peut dshyd rler
:
une lame avec quelques centimtres cubes, condition d'oprer
mthodiquement
et
rapidement]
Essuyer rapidement
9 Eclaircissement.
le
dessous de
la
1. A mon avis, la dshydratation sur lame est

beaucoup plus sre, car l'alcool
absolu employ en tubes Borrel se charge deau peu peu; avec un peu d'habitude, on dshydrate sur lame aussi rapidement qu'avec les tubes. Avoir sa
porte un petit cristallisoir pour y rejeter l'alcool qui, au besoin, pourra servir
d'autres usages (^lavages, collections, etc.).
420
MTHODES GNRALES
lame et se hter de la plonger dans un tube de xylol bien propre

o elle sjourne pendant qu'on prpare une lamelle. Le xylol - ne
doit pas se troubler, mme par un louche lger, sinon il faut
recommencer la dshydratation ^
'
10
Montage au baume.
cou])es Texcs de xylol, dposer
Essuyer rapidement autour des

une goutte de baume du Canada
au xylol
(p. 436) au milieu de la prparation et couvrir avec la

lamelle; appuyer trs lgrement pour chasser les bulles d'air
et absorber au besoin l'excs de baume avec des bandelettes de
buvard
Pour viter srement les bulles d'air, employer le tour de main suivant
dposer une goutte de baume sur la coupe et une autre sur la lamelle,
mettre les deux gouttes en contact et appliquer doucement la lamelle.
Celle-ci ne doit pas tomber brusquement sur les coupes, mais lre applique d'abord par le cl gauche, puis abaisse lentement, en la soutenant du ct droit avec une pince (p. 438).
:
La prparation doit tre absolument transparente et ne montrer

aucune trace de louche, en l'examinant sur un fond noir. S'il y a
une opalescence, c'est que la dshydratation est mauvaise. Dans
ce cas,
faut enlever la lamelle avec soin. Dissoudre le
il
en versant du xylol
Pendant toute
sui- la
lame
cette srie de
et
reprendre par
manipulations
baume
l'alcool absolu.
(de
la
coloration
au moulage dfinitif), il faut veiller attentivement ce que les

lames portant les coupes soient toujours dans un liquide et ne
schent
j^cis
entre
deux oprations.
Lorsqu'on doit traiter de nombreuses lames, on peut faire toutes les

oprations dans des cuvettes rainures '% dans des cylindres Borrel ou
dans des bocaux bas plus larges. Dans ces deux derniers cas, on peut
procd suivant, qui m'a t communiqu par le D' Aldo
de minces rondelles de moelle de Sureau (2 mm.
d'paisseur environ); on spare les lames avec ces rondelles qu'on
place leur partie suprieure et qui adhrent par capillarit. On peut
ainsi mettre de nombreuses lames dans un bocal sans qu'elles se
employer
le
Perroncito.
touchent.
On dcoupe
On
les relire
une une,
ce qui est prfrable
1. Avoir soin d'essuyer la face infrieure de

pour introduire le moins possible d'alcool dans
la
lame
et le
aux
dispositifs
pourtour des coupes,
le xylol.
Pour cette opration, je prfre le X3'lol au tolune qui est trop volatil.
3. Se mtier do Talcool plus ou m'oins hydrat, qui peut rester adhrent la
face infrieure de la lame et qui produit un louche, mme aprs une bonne dshy2.
dratation des coupes.

4. Employer des cuvettes rainures disposes pour placer les lames horizontalement et non verticalement, car, dans ce dernier cas, les coupes un peu larges
sont dtriores par le bord des rainures.
421
plus ou moins compliqus, au moyen desquels on les
ensemble. Voir aussi le petit appareil de Funck qui est
et qu'on peut construire soi-mme.
i
relire
toutes
trs pratique
Mann conseille de coller les coupes destines l'enseignement sur

de plaques de mica de 10 20 centimtres. On fait toutes les oprations
dans des cuvettes photographi(]ues. Finalement, on spare les coupes
avec des ciseaux, on les colle au baume sur lame, le mica en dessous et
on recouvre d'une goutte de baume et d'une lamelle.
Mthode aux chromotropes de Heidenhain.
2.
comme
Colorer rhmalun, diirencier et virer
\.
plus baut.
lame une ou deux minutes dans un tube

Alcool ammoniacal 1 p. 1 000.
2.
Plonger
3.
la
d'alcool 90.
Alcool 90 pur.
Colorer en solution alcoolique concentre de chromotrope 2
6 B, jusqu' obtention de la teinte rouge (voir p. 399).
G. Alcool absolu, xylol, baume.
4.
5.
3.
mtlioJe
Celle
ainsi
que
ou
Mthode de van Gieson.

met
1res bien en
les basales et le
vidence
le
lissu conjonclif,
rticukim des organes lyniphodes, mais
les fibres lastiques. C'est nn procd clbre qui a joui

d'une grande vogue, peut-lre un peu exagre. En tous cas,
pour bien russir celle coloralion, il faut observer certaines pr-
non
cautions.
La coloration
llimatoxyline ferrique est indispen-
noyaux prennent une

dfavorable.
brun
trs
teinte
rougetre
ou de Weigert.
1. Colorer la laque ferrique de Heidenliain
2. Laver Teau.
3. Colorer par le mlange de van Gieson (acide picrique et
sable, car, avec les laques aluminiques, les
''
rubine acide) pendant quelques secondes

1.
Funck. Dispositif pour dshydratation. Ztschr.
^.
f.
wiss. Mik)'.,
XXVI.
p.
4'2i2,
1909.
2. Le 2R s'emploie en solution plus faible que le GB. Frhlicli passe rhmalun, dshydrate, colore en solution d'acide picraminique dans l'alcool absolu (3
5 min.), lave l'alcool absolu et colore de nouveau par solution alcoolique d'un
chromotrope. Collagne rouge, lastique jaune, muscle brun, hmaties jaunes.
Ztsch.
f.
iviss.
Mikr.,
XXVII,
p. 549-352, 1910.
Le procd chaud, indiciu p. 378, est le plus rapide. A la rigueur, on pourrait virer au noir, dans l'alun do fer, une coloralion l'hmatine.
4. Avant de colorer par le mlange de van Gieson, P. Masson passe les coupes
pendant 5 10 minutes dans une solution 1 p. 100 de jaune mtanil de Poirrier.
3.
La
coloration jaune est encore plus belle.
MTHODES GNRALES
422
De trs nombreuses formules ont t proposes pour ce mlange. Une

des meilleures est la suivante, donne par Weigert; elle s'associe trs
bien sou bmatoxyline ferri(iue.
Rubine acide
p.
10 cm-^.
100
100 cm^.
Sol, aq. sat. d'acide picrique
On
la
peut augmenter ou diminuer la (juantit de rubine acide, suivant

nature des tissus
t
colorer. La van Giesons'cbe Lsung de Grbler
;
donne d'excellents
Laver
4.
trs
rsultats.
rapidement Veau distille.
Dshydrater trs rapidement par les alcools 90 et absolu '.

Xylol. P. Masson lave d'abord dans du xylol actique (
2 gouttes p. 100) pour fixer la coloration par la rubine acide. Il
laisse ensuite trs longtemps les coupes dans le xylol, pendant
plusieurs heures ou mme 24 heures, de faon diffrencier la
coloration par Tacide picrique. On obtient ainsi une lection
particulire des fibres lastiques et des hmaties en beau jaune
5.
6.
brillant.
7.
Monter au baume.
1. Dcoloration des noyaux. I/acide picrique agit

diflrenciateur nergique sur l'hmatoxyline et surtout sur
la laque alumini(jue. H faut surveiller cette action.
2. Lavage Veau.
L'eau de source dissout et dcolore la rubine acide.
Causes
cVinsiiccs.
comme un
On
y remdie en employant Teau distille et, d'aprs Pierre Masson, en

traitant les coupes par le xylol actique.
3. Dshydratation.
L'alcool dissout rapidement l'acide picrique et
attnue la coloration jaune.
Dans une prparation bien
russie, les lments conjonctifs sont
rouge vif, les protoplasmes jaunes, les noyaux noirs. Ce procd

nest pas une mthode gnrale, comme on le croit souvent
tort,
mais
il
est surtout destin
4.
1.
Tlnde du
tissu conjonclif.
Mthode de Mann.
Colorer riimalun de Mayer, laverai virer
comme
d'iia-
bitude.
2.
Mann
1.
par
Colorer
le
fond par
le
mlange bleu de mthyle-osine de
(p. 430), pendant 5 7 minutes.
Woiyert dshydrate
le xylol
les
plicniqn (xylol
coupes la collodioe par l'alcool 90

3, acide phonique 1) (p. 351).
et les olaircit
Laver
3.
423
Teau de manire bien diffrencier la coloration
(suivre au microscope).
4. Alcool 90", alcool absolu, xylol,
5.
Mthode au safran de Pierre Masson^.
recommande parliculiremenl
Je
rsultats
les
baume.
remarquables et qui
pices fixes au Bouin.
cette
mthode, qui donne des
est trs facile russir, surtout
A mon
avis,
avec
les rsultats sont trs
suprieurs ceux du van Gieson. Les couleurs sont plus agrables

Toeil, les coupes plus lisibles et la conservation assure.
Colorer rimalun.
1.
Diffrencier dans l'alcool chlorhydrique (V gouttes p. 100).

3. Bleuir dans le carbonate de lithium 1 p. 100.
2.
Bien laver Teau ordinaire.

Colorer 10 minutes dans l'osine w. g. de Grbler 5 p. 100 ou une
heure dans la solution 1 p. 100.
6. Laver.
7. Colorer 10 minutes dans la solution de safran prpare comme il
4.
5.
suit
Faire bouillir 1 gramme de safran du Gtinais de Vanne dans 100 centimlrcs cubes d'eau de source, pendant une heure. Fillrer. Ajouter
1 cm'^ de tannin 5
p. 100 et 1 cm^ de formol du commerce.
8. Laver, dshydrater, monter.
Le
rsultat est
beau
et trs dmonstratif.
Les noyaux sont bleu
fonc,
protoplasmes ross ou saumon, les fibres nerveuses,
et
musculaires rose franc vif, les fibres conjonctives,
lastiques
Tossine, la chondrine jaune d'or brillant, les granulations osinoles
pbiles rouge intense.
Triple coloration de Prenant^-.
6.
1.
Colorer
Thmatoxyline ferrique.
ii
Colorer
mthylosine ou Trythrosine
solution concentre pendant 10 minutes.
2.
1.
p. ^lasson,
le
I.e
fond par
la
safran en techniquo histologique. C. R. Soc. de
bioloijie,
en
LXX,
p. 573, 1911.
Arch. d'anat. micr., V, p. 191, 190-2.

3. D"aprcs ce que nous avons dit, p. 399, la mthylosine n'est soluble
que dans
l'alcool; l'rytlirosine (sel de la fluorescine iode) est soluble dans l'eau. Dans
le premier cas on colore donc en solution
alcoolique et dans le second en solution
aqueuse employer des solutions 1 p. 100 et colorer 10 minutes environ, suivant
l'affinit des tissus pour ce colorant. J'inclinerais prfrer l'rytlirosine comme
plus lective et comme rsistant mieux l'action des alcools de dshydratation.
2.
METHODES GENERALES
424
3.
Laver
Teau pour enlever l'excs du coloranl ou, simjilemciil,

la
lame.
Colorer par
le
verl lumire
essuyer
4.
dos de
le
p.
100 dans
l'alcool 90. C'est
si le vert lumire
agit trop
temps dlicat de la mthode
longtemps, il dplace compltement l'osine et donne la prparation une teinte \ert sale trs dsagrable. Le vert lumire ne
l le
devra donc agir que pendant quelques secondes.

5.
Dshijdraler rapidement, xylol, baume.
La chromaline
est noire, les
protoplasmes sont rouges ou ross,
collagne est vert fonc. Malbeureusement cette mthode est

trs difficile russir et les prparations se conservent mal.
Ce procd s'ap})lique aux tissus vgtaux, dans lesquels le vert
le
lumire colore lectivement
7.
la cellulose.
Trichromique de Pierre Masson
'.
1.
Colorer l'hmaloxyline ferrique de Heidenhain. Diffrencier dans l'alun de fer jusqu' dcoloration compbMe du tissu
du cytoplasme.
conjonctif et, autant que possible,
2.
Laver
l'eau.
Colorer 5 10 minutes dans une solution aqueuse de rubine

acide 1 p. 1000, jusqu' coloration rose des cytoplasmes.
4. Diffrencier 5 minutes dans l'acide phosphomolybdique
3.
1 p. 100.
Colorer 20 minutes au moins (une heure au plus) dans
5.
Bleu d'aniline l'eou de Poirrier

Sol. aq. d'acide
phosphomolyl)dique
p. 100.
1
p.
100.
*^
6. Rincer l'eau distille, puis l'alcool 90, pour extraire

tout le bleu qui imbibe le protoplasme sans y tre fix.
7. Alcool absolu, xylol, xylol actique (2 gouttes p. 100), baume.
Les noyaux sont noirs; la coloration cytoplasmique est particulirement bonne, avec toute une gamme de rouges plus ou moins
colores en bleu
vifs; les plus fines fibrilles de collagne sont
cette mthode est la meilleure qui existe
mise en vidence du collagne, mais, en outre, elle est
d'une russite absolument certaine et les i)rparations se conser-
intense.
pour
Non seulement
la
vent trs bien.
1.
Bull. soc. anaLomique, juin 1912.
42o
Cette mtliode est une simplification de celle de Mallorv (p. 527).

Elle est suprieure toutes les autres mlliodes au bleu d'aniline
Blochmann (p. 529), parce qu'elle

(Curtis, Dubreuil (p. 653),
Unit toujours par diffuser.
n'emploie pas l'acide picrique qui
II.
COLORATIONS
A LA
SAFRANINE
Mthode de Benda'. Safranine-vert lumire.

Colorer dans la safranine aniline de Babes, pendant 5 minutes
du colorant et la nature du tissu (p. 393).
1.
12 heures, suivant la puissance

2. Laver rapidement l'eau.
.3.
Colorer 30 secondes dans
Vert lumire (Lichtgriin)
!ir-
400 cm-^.
Alcool 90
-^
Ce liquide diffrencie la safranine et colore en mme temps le lissu

les noyaux seuls doivent
conjonctif en vert. Dans une prparation russie,
tre rouges.
le chapitre consacr au tissu conjonctif
combiuces (mthode de Dubreuil, de
colorations
d'autres
(p. 652)
Nous indiquerons, dans
Curtis).
ne dcris pas ici la clbre mthode

de gentiane, orange) ce procd, de
de Flemming (safranine,
mme que les modifications de Reinke et de Laguesse, est d'une
trs dlicate et, mon avis, ne convient pas pour le
C'est avec intention
que
je
violet
application
travail courant
III.
-^
COLORATIONS
Ces mthodes,
comme
ne conviennent que pour
LA FUCHSINE BASIQUE
toutes celles
o on emploie le magenta,
au Flemming.
les pices fixes
Arch. Anat. Fhys. Phys. Abt., p. 549, 1891.

1
p. 100
L'indication orioinale est 1 p. 400, souvent on emploie une solution
ou mme du vert lumire en solution aqueuse ce qui, mon avis, est contraire
l'esprit de la mthode.
und
Hans
von AViniwarter,
3. On trouvera de minutieux dtails ce sujet dans
iciss.
G. Sainmont. Erfahrungen ber die Flemmingsche Dreifarbung. Zfschr. /'.
anat. ynicr., IV, p. 157Arch.
aussi
Laguesse,
Mikr., XXV, p. 157-16-2, 1908. Voir
1.
2.
218,
1901.
MTHODES GNRALES
426
1.
1.
Magenta-vert lumire de Pierre Masson.
Colorer deux minutes io^-SO" dans le
magenta
suivant la formule de Ziehl (p. 397).

2. Laver Teau.
3. Colorer 15 20 secondes dans le vert lumire
phniqu, prpar
p. 100
dans
l'alcool
95.
4. Diffrenciation dans l'alcool picriqu, jusqu' ce qu'il ne s'chappe
plus de nuages rouges.
5. Alcool absolu, xylol, baume.
Cette mthode ne russit qu'avec les pices fixes au Flemming.
Trichromique de Ramon y CajaP.
2.
Pour
1.
les
coupes non fixes au Flemming.
Colorer 10 minutes froid daus

Sol. sal. de
Eau
magenta dans
l'alcool
absolu
Laver largement
3.
Colorer 10 minutes dans
la
solution de Cajal
Teau
Eau
25 centigr.
100 cm''.
Sol. aq. sat. d'acide picrique
Rincer
Tean.
Carmin d'indigo
5. Diffrencier
vol.
i2.
4.
...
distille
distille.
2 minutes dans
100 cm3.
distille
Acide actique crist
2 gouttes.
pour dbarrasser de Tacide picrique
le tissu
conjonclif qui devient
bleu pur.
Les noyaux sont rouges,
les
cytoplasmes jaunes,
le
collagne
bleu.
Pour les coupes
fixes
aux liquides chromiques
Colorer 5 minutes chaud (45") dans

formule que plus haut).
1.
le
et
osmiques.
magenta (mme
1. R. Maire a obtenu de trs beaux rsultats, cliez les

Basidiomyctes, avec la
diamantfuclisine de Grblcr prpare suivant la formule de Ziehl. Thse de
Paris (sciences), p. 21, 1902, et Bull. Soc. mt/col. France, 190-2. On trouvera, dans
cet important ouvrage, toute une srie de colorations combines, avec la diamantfuchsine comme colorant nuclaire. Ces mthodes, employes pour la cytologie
des Basidiomyctes, sont transposables pour la cytologie animale ou vgtale en
gnral.
2. Je dois mon excellent ami, le D"" Pierre
Massoo, ces indications trs prcises sur la manire
d'appliquer le procd de Cajal.
427
COLORATIONS COMBINICES
Laver
2.
k Teau.
3. Colorer
30 secondes dans
Carmin d'indigo
Sol. aq. sat. d'acide
Le
reste
IV.
i.
comme
plus haut.
COLORATION AUX BLEUS BASIQUES

Mthode du bleu polychrome de Unna.
Nous avons tudi
composilion du bleu polychrome de

un mlange, en solution fortement
de bleu de mthylne, dazur de mthylne et de violet
p.
390
Unna. Nous savons que

alcaline,
40 centigr.
100 crn^.
picrique
la
c'est
de mthylne.
C'est un colorant cytologique de premier ordre qui convient
surtout pour l'lude des lsions intlammatoires et pour celle du
cytoplasme dans les divers lments cellulaires du tissu conjonctif.
est applicable aussi bien aux frottis qu'aux coupes et
diffrenciation trs dlicate.
Il
donne une
Colorer une cinq minutes ou douze heures, suivant
1.
dans
le
bleu polychrome pur.

2. Laver rapidement, pour enlever l'excs de colorant.
cas,
le
Diffrencier par l'ther glycrique {Glycerinaethermiscliung) de Unna tendu de trois parties d'eau, au moins.
4. Laver longtemps et fond, dans l'eau ordinaire, de manire
3.
liminer
5.
compltement toute trace de diffrenciateur.

trs rapidement l'alcool absolu.
Dshydrater
6. Xylol, huile
Telle est la
d'une
infinit
de cdre.
mthode fondamentale; mais

de variantes, suivant
la
elle
est susceptible
nature des lments qu'on
dsire mettre en vidence.
Le point important
cela,
est
de bien effectuer
la diffrenciation.
Pour
quelques explications complmentaires sont indispensables.
Ether glycrique, Glycerinaether ou Glycerinaetherniis-
chung de Unna.
Cet important it'actif est quelquefois interprt

d'une manire trs fantaisiste. Ce n'est point, comme on le croit trop
souvent, un mlange de glycrine et d'ther sulfurique, mais bien un
produit trs complexe, dans lequel des thers de la glycrine sont
MTHODES GNRALES
428
dissous clans
un mlange convenablement dos
d'alcool absolu et de
glycrine.
Ce produit est prpar par Grdbler et Schucbardt depuis 1S92; on ne
connat pas au juste sa composition centsimale, mais on sait que sa
partie active est un ther ou mieux un anbydride de la glycrine. Pour
l'obtenir, on soumet la glycrine la distillation scbe fractionne avec
2 p. 100 de cblorure d'ammonium i
on recueille les produits, on les
mlange de nouveau, on les additione du tiers de leur poids d'alcool
absolu et on ajoute assez de glycrine pour donner une consistance con;
venable.
Je crois qu'on peut appeler ce mlange clher glycrique
je propose
cette dnomination, pour qu'enfin on puisse dsigner en franais un
produit important, d'usage journalier dans les laboratoires. En tous cas,
c'est le terme que j'adopte pour cet ouvrage.
On emploie trs rarement l'tber glycrique pur, parce que son pouvoir
dcolorant est trs grand. Unna conseille gnralement de l'tendre de
trois volumes d'eau. Je prfre une dilution encore plus grande, par
exemple V gouttes pour 10 centimtres cubes d'eau distille. Le mlange
on peut l'employer tel quel ou le filtrer.
est toujours trouble
:
Ce ditfrenciateur agit d'une faon
en etTet, ii dcolore
trs spciale
chromatine avant le cytoplasme il est donc tout particulirement propre
dmontrer les inclusions basophiles (corps de Nissl, granulations basola
philes, etc.). En outre, il met admirablement en vidence les granulail les dpouille compltement
tions mtacliromatiques des labrocytes
de toute teinte bleue et les fait apparatre en rouge pur. On peut mme,
en prolongeant la diffrenciation, arriver ne plus avoir que ces gra:
nulations mtacbromatiques, ressortant en rouge sur le fond trs ple

de la prparation.
Ds que la ditfrenciation est termine, il est indispensable de procder
un lavage l'eau soigneux et prolong, de manire liminer toute
trace d'ther glycrique. Si on nglige cette prcaution, on s'expose
voir les coupe.s se dcolorer compltement.
La dshydratation doit se faire l'alcool absolu et trs rapidement,
pour ne pas dcolorer la prparation. On passe ensuite au xylol et on
monte au baume parfaitement neutre ou Ihuile de cdre (p. ii'2] qui
sche suffisamment et conserve trs bien la coloration. On peut encore
employer avantageusement l'huile de paraffine ou le sirop d'Apathy.
mais, dans ce dernier cas, sans dshydrater.
Les coloralions ainsi obtenues sont remarquablement belles. Au

point de vue topographique, elles ne parlent pas Til; mais,
examines de
forts grossissements, elles
richesse de dtails trs dlicats, avec toute
montrent une grande

une gamme de tona-
qui les rendent trs prcieuses pour les recherches de cytologie

fine, sur les lments du tissu conjonctil". Ces prparations sont trs
transparentes, sans aucune tendance cet emptement qui est
lits
recueil de beaucoup de colorations par les bleus basiques.
II
se forme certainement aussi
une petite quantit d'acroline.
Les
429
pour bien apprcier

parties acidophiles sont colores en verdlre
leur rpartition, il est bon de comparer avec une coupe de la
:
mme
pice colore l'hmatine-osine.
Bleu polychrome et orcine.

1.
2.
Colorer 5 lo minutes par

Laver Teau.
bleu polychrome.
dshydrater dans
3. Diffrencier et
dans Talcool
le
une solution d'orcine
0,25 p. 100
70.
4r Alcool absolu, xylol,
baume.
Cette mthode donne des rsultats presque aussi beaux que

de Tther glycrique et prsente Favantage de colorer en
celle
outre le coUagne en rouge. La diffrenciation est trs

convient trs bien pour l'tude aux forts grossissements.
2.
Mthode
Ce procd,
11
et
osine et au bleu de toluidine.

de Dominici, jouit en
dit
grande vogue, parce

lves.
fine
qu'il a t
a t publi par
Mann
France
d'une assez
adopt par Dominici et par ses

en 1894 \ comme mthode gn-
rale, applicable non seulement au systme nerveux, mais encore

tous les autres tissus; ce serait, d'aprs Mann, le meilleur pro-
cd pour
la
dtermination quanlitative de
une excellente
la
chromatine. C'est
qui donne des colorations

agrables l'il et trs solides. Elle mrite d'tre conserve comme
mthode gnrale, d'un emploi sur et facile, mais elle sera toud'ailleurs
jours infrieure au
Rubens Duval
mthode,
Romanovsky.
a prcis avec
beaucoup de soins
la
technique
suivre.
1.
Colorer pendant une heure dans

osine l'eau
Orange G
(Griibler)
i2.
Laver rapidement
3.
Colorer une minute dans
l'eau
p. 100
p. 100
aa
pour enlever l'excs de colorant

le
bleu de toluidine 1 p. 100.
1. Mann, Ueber die Behandlung der Ncrvenzellen fur experimentell-histologische Untersuchungen. Ztschr. f. rviss. 3Iikr., XI, p. 489, 1894.
2. Rubens Duval, Cijioloi/ie des
inflammations cutanes. Thse de Paris (mdeFixer les pices au Dominici, au
cine), in-8 de 2'/2 p., 3 pi., 1908; cf. p. 24-28.
sublim actique ou au Bouin.
METHODES GENEKALES
430
4.
Laver
5.
Diffrencier par l'alcool absolu.
rapidenieiil l'eau.
6. Xylol.
7.
On
iMonler riuiile de cdre (p. 442).

peulditrencier aussi par l'ther glycri(iue
()).
427), laver
soigneu-
sement l'eau et achever par Talcool absolu. Au lieu de bleu de toluidine, on peut employer le violet hexamthyl. Rubens Duval a eu de
bons rsultats en mordainjant 15 secondes dans l'alun de fer 1 p. 100;
l'lection acidophile est plus prcise.
Dans une prparation

le collagne
rouge
russie,
vif, les
les
hmaties sont jaune orang,
noyaux bleus,
les
granulations osino-
vif, les
granulations neulropliilcs violaces, les graphiles rouge

nulations basophiles bleu fonc."
MTHODE DE MANN'
AU BLEU
DE MTHYLE-OSINE
V.
Je donne cette mthode en mme temps que les procds gnraux, parce qu'elle est susceptible de nombreuses applications.
Nous avons dj vu (p. -422) qu'elle constitue une excellente coloration de fond, aprs la teinture l'hmatine. Elle a, en outre, une
grande importance pour l'tude du systme nerveux, ])our celle
des Protozoaires et pour
la
recherche des corpuscules de Negri
540).
(p.
Le colorant de
Mann
est
un mlange de bleu de mthyle-
et
d'osine. Les proportions de ces deux colorants acit/es sont conjbines de manire viter la prcipitation du bleu
:
Bleu de mthyle 1 p. 100 dans l'eau distille

osine 1 p. 100 dans l'eau distille
Eau
distille
...
35 cm^.
45
100
Ce mlange
est dou de proprits particulires qui se rappro

certains
chent,
gards, de celles des colorants basi(|ues. Les pices
fixes par le
sublim
et
les
mlanges chromiques donnent des
rsultats particulirement beaux.
l.Mann,
Phtjsioloijical histology, Oxford.

p. '216-217. Il est bon do dire
1 pi., 190-2; cf.
la
premire fois par Mann ds 1892.

Et non de bleu de mthylne. Voir
"2.
Clarendon Press, in-S de xxiii-488 p.,

que cette mthode t publie pour
p. 100 l'tude
de ce colorant acide.
COLORATIONS COMBINEES
Il
est
bien entendu que ce procd ne s*appli(|ue qu' des
ou des coupes
la parafllne el colles
Mthode rapide.
Au sortir de l'eau, colorer
1.
les
Laver
l'eau
Mthode
lente.
3.
pour diffrencier
Alcool absolu, xylol, baume.
l'roUis
TaUjumine.
coupes dans ce mlange pen-
dant 5 10 minutes, suivant leur paisseur et

2.
431
la
l'effet dsir.
coloration ])ar l'osine.
Colorer douze vingt-quatre heures.
1.
2.
Rincer 30 secondes
3.
Dshydrater par
4. Diffrencier
dans
Alcool absolu
Polasse caustique
l'eau distille.
l'alcool absolu.
l'alcool alcalin
*.
30 cm-^.
1
p.
100 dans Talcool absolu
-.
gouttes.
Les coupes virent au rouge.

Laver fond l'alcool absolu pour liminer tout Talcali.
6. Diffrencier Vod dans l'eau distille. Les hmaties doivent
5.
ressortir en
rouge
vif,
les
leucocytes neutrophiles el les plasmo-
somes en pourpre \
7. x\lcool absolu, xvlol,
baume.
Il est essentiel de faire agir la polasse dans un milieu absolument

priv d'eau, afin d'viter son action caustique sur les lments. C'est
pourquoi on doit dshydrater une premire fois les coupes, avant de les
soumettre l'alcool alcalin.
D'aprs Mann, il n'y a pas de meilleure mtbode pour mettre en

vidence les lments du noyau des cellules nerveuses, glandulaires et conjonctives.
ordinairement nette.
rouge
Les hmaties ressorlent d'une faon extraLes muscles stris sont aussi colors en
vif.
1.
On peut remplacer
'2.
Pour prparer cette
la
potasse par ranimoniaque.

solution, ou met, dans un flacon bien bouch, 100 cm'
de
d'alcool absolu et
gr.
potasse caustique. On met ce llacou au-dessus d'une
les
courants de dili'usion. Ou filtre au bout de 2-4 heures
favoriser
tuve, pour
1
pour liminer la potasse non dissoute.

3. Au cas o la coloration bleue paratrait trop faible, on peut l'intcnsiticr par
de l'eau faiblement actifle (2 gouttes d'acide actique cristallisable pour 100 cm^
d'eau).
CHAPITRE XXI
IMPRGNATIONS MTALLIQUES
conD'aprs la dfinition d'Apathy, l'imprgnalion mtallique
des
dtermins
siste essentiellement produire, sur des lments
conmis
en
Le
mtal
est
mtal
rduit.
de
un
fin
tissus,
prcipit
la rduction est
avec les tissus sous forme de solution saline
due, en partie Faction propre du tissu, en partie l'action de substances rductrices ou d'agents physiques tels que la lumire. Les
tact
mtaux les plus employs sont l'argent, l'or et l'osmium.

La mthode des imprgnations m^talliques a une trs grande
donne que
importance en histologie. Dans cet ouvrage, o je ne
les mthodes essentielles du travail courant d'examen et de diabref. Pourtant, comme l'imprgnagnostic, je serai forcment trs
tion
joue un grand rle dans l'tude des organismes
argentique
mthode de Cajal, qui a servi de

sur ce sujet.
effectues
aux
recherches
de
dpart
point
la
spirales, j'insisterai surtout sur
Imprgnations l'argent.
Le
sel
d'argent
le
plus employ est
le nitrate,
tion se nomme-t-elle encore nitratation.
deux sortes d'lments
aussi cette opra-
On imprgne
l'argent
endothlhims (msentre, pricarde, poumon et vaislments cellulaires

seaux), pour mettre en vidence les limites des
ainsi une image ngative, dans
On
obtient
les
composent.
qui
1 Les
le prcilaquelle la substance intercellulaire seule est colore par

les cellules elles-mmes restent incopit mtallique, tandis que
lores.
2 Les lments
nerveux (terminaisons, cylindres-axes, neuro-
433
IMPREGNATIONS METALLIQUES
au contraire obtenir une

fibrilles), pour lesquels on cherche
imsige positive, c'est--dire produire le prcipit dans les lments
eux-mmes.
1''
Imprgnation des endothliums.
comme exemple
Choisissons
le
msentre de
la
Grenouille et
mthode de Ranvler.
1. Isoler une partie du msentre de la Grenouille et la tendre
sur un anneau d'ternod ou, plus simplement, sur une plaque
de lige, perce d'un trou de 20 mm. de diamtre. Le point important est que la membrane soit parfaitement tendue, sans faire
aucun pli.
2. Laver rapidement Teau distille avec une pissette.
3. Arroser avec une solution de nitrate d'argent 1 p. 500
dans Teau distille et exposer une vive lumire.
4. Au bout de deux minutes environ, lorsque le tissu a bruni
la
procdons par
aprs tre devenu opalescent, laver l'eau distille.

5. Durcir 15 minutes dans l'alcool 90.
6.
Dcouper des fragments de
la
membrane, dsormais
fixe et
durcie.
7.
Dshydrater
et
monter au baume.
Pour imprgner les animaux marins, il faut liminer les chlorures qui
immdiatement le nitrate d'argent. Harmer lave d'abord
les Bryozoaires, llydrodes, Mduses, Eponges, Annlides, etc. dans le
nitrate de potassium o p. 100 ou le sulfate de sodium 4,5 p. 100, puis
'
prcipiteraient
imprgne comme plus haut.
2"
Imprgnation du systme nerveux-.
Mthode de Ramon y
Cajal pour l'imprgnation des neurofibrilles
'K
Cette mthode est une des plus prcieuses acquisitions de la

toutes les mthodes actuelles d'imprgnation
technique moderne
1.
2.
3.
Mitteil. Zool. Stat. :<eriiirA, V, p. -115, 1884.

Voir p. 658, les autres mthodes concernant le
systme nerveux.
Cajal, Un sencillo metodo de coloracin del rticule protoplssus efcctos en los diverses centres nerviosos de Vortehrados c Inverte-
Ramon y
S.
mico y
brados. Trabajos
Madrid, II, 4,
Nancy, XIV,
de.l
Lahoratorio de inveaiigaciones hiolgicas de la Universidad de

dcembre 1903. Traduction Azoulay. Dibliogr. aiiatomique,
p.l-29-L'-21,
p. 1-03, 1905.
Ueber einige Mcthodcn der Silbcrinipragnirung zur Untcrsuchung dcr NcuroAf.
T.ANGERON.
ô
434
MTHODES GNRALES
argentique (mthodes de Levadili, Yamamoto, Veralti, etc.), ne

sont que des drivs du procd de Cajal.
L'animal de choix, pour s'exercer l'lude des neurofihrilles,
Lapin de 1 30 jours, sur lequel on prlve des petits fragments de centres nerveux ayant au plus 3 4 mm. d'paisseur.
est le
1. Imprgner les fragments pendant 4

jours ou plus dans une
solution aqueuse de nitrate d'argent titrant de 0,75 3 p. 100,
l'tuve 37 et l'ohscurit.
2.
3.
Laver quelques secondes l'eau distille.

Rduire vingt-quatre heures dans
:
Acide pyrogallique ou hydroquiiione.

Formol 40 p. lUO
gr.
5 15 cm3.
100 cm3.
Ecau distille
4. Laver, dshydrater
au dammar.
el
inclure
la
paraffine.
Couperet monter
Cet expos gnral del mthode est trs simple, mais il montre aussi
le procd est lastique et combien il demande de tact de la
part de l'oprateur. Cajal nous a du reste fourni de minutieuses instructions, dont je vais donner un court rsum.
Titre de la solution arijentiqiic. Le chiire moyen de 3 p. 100 permet
d'imprgner en une seule fois un certain nombre de fragments. On a de
meilleurs rsultats, en harmonisant la concentration avec la nature des
combien
pices.
Solution 3 p. 100. Titre moyen applicable tout et pntrant en 4
6 jours.
Solution 6 p. 100. Prfrable pour les Invertbrs et pour les fixations
nergiques et rapides. Agit en 2 3 jours. Produit facilement des sur-
colorations de la priphrie des pices, dont il vaut mieux abandonner

le centre.
Solutions 1 et 1,5 p. 100. Donnent un prcipit trs fin et trs lectif.
vitent l'inconvnient des surcolorations superlicielles. Agissent en 4
6 jours. Conviennent trs bien pour essayer la mthode sur le jeune
Lapin. Permettent d'utiliser
la totalit
Solutions 0,50 et 0,75 p. 100.
des pices pas trop paisses.
Donnent quelquefois
(bulbe, moelle,
Souris et Rat d'un mois, Vertbrs infrieurs) de meilleurs rsultats
que les liquides concentrs. Agissent en 3 jours.
Quel que soit le titre de la solution, il est indispensable que

volume du liquide soit au moins vingt fois celui des pices
flbrillen,
XX,
der Achsencylinder und der Endvorzweigungen. Ztschv.
f.
iciss.
le
et
Mikr..
p. 401-4U8, 1903-1904.
Trois modificatious pour des usages diffrents de ma mthode de coloration des

Targent rduit. CR. Soc. de biolof/ie, LVI p. SCS-S"/!, 1904.
Quelques formules de fixation destines la mthode au nitrate d'argent.
neurofibrilles par
Trabajos... V, p. 215-224, 1907.
435
IMPRGNATIONS METALLIQUES
que
poids de nitrate d'argent, dissous dans ce volume de
liquide, soit suprieur au poids des jjices.
le
Une
au
pice bien imprgne prsente la coupe,
sortir
de
une couleur ocreuse ou marron. Une teinte laiteuse indique

une imprgnation insuffisante. Il y a une }>hase optima de maturation qu'il faut savoir saisir; on y arrive en retirant. et traitant
l'tuve,
des fragments par intervalles.
Mthode de Sand
pour Pimprgnation des neurofibrilles
cylindre-axes.
1. Fixer des blocs de 5
mm.
d'paisseur au plus dans
et des
90 cm^.
10
Actone anhydre
Acide azotique
le liquide aprs 1 heure et 24 heures. Fixer en tout 48 heures.

Placer les blocs sur une couche de coton ou de papier fillre.
2. Dshydrater par Taclone pendant G heures, puis imprgner 30 minutes dans du xylol.
3. Inclure la paraffine 50" en 2 heures. Couper, coller les coupes
Talbumine, dparaffiner par le xylol et l'actone puis laver l'eau.
4. Imprgner les coupes colles, dans du nitrate
d'argent 20 p. 100,
pendant 3 jours 37", en vase bien bouch.
Changer
5.
Sans laver, rduire pendant 10 minutes dans
Eau
000 gr.
Actate de sodium fondu

Acide g-allique
10
Carmin
Le liquide doit tre prpar depuis 3 jours. On le renouvelle ds qu'il

se trouble. Il ne sert (ju'une fois.
6. Virer en cinq minutes, jusqu'au gris violac, dans
:
Eau
distille
Sulfocyanure d'ammonium 2
Chlorure d'or 2 p. 100
7.
Laver,
80
p. 100
....
17
3
cni-^.
hxer quelques secondes dans rhyposulfile de sodium
5 p. 100, laver de nouveau et monter au baume.

D'aprs l'auteur, ce procd est absolument sr, rgulier et facile.
11 a t expriment sur l'Homme, le
Chien, le Chat et le Lapin.
Les coupes, au lieu de subir l'imprgnation argenlique, peuvent tre

colores par une mthode quelconque. Le procd ne russit pas pour
l'corce crbrale et crbelleuse.
1.
C. B. ssoc. des analoniistes, XII, p. 128, 1910,
CHAPITRE XXII
MILIEUX D'OBSERVATION
ET DE CONSERVATION
Monter un objet en prparation microscopique consiste
enfermer cet objet, entre lame et lamelle, dans un liquide rfringent qui sert la fois de milieu d' observation et de milieu de
conservation. Ce milieu ou
mdium^ dans
lequel sont plongs les
objets microscopiques, doit possder des qualits optiques et chimiques qui assurent la fois la visibilit parfaite de tous les
Les milieux peuvent

ou
solides
devenir
liquides
par refroidissement ou va})oration. Les milieux solidifiables sont en principe
les meilleurs, parce qu'ils donnent des prparations trs solides,
dtails et la conservation indfinie de l'objet.
tre
et
rester tels
sans qu'il soit ncessaire de les lu ter. Les meilleurs milieux solisont les rsines, qui permettent un vritable embaume-
difiables
ment des
On
objets.
est
liquides; dans ce cas
il
quelquefois oblig d'employer des milieux

faut fermer la prparation au moyen d'un
lut.
Milieux solides.
11
y a deux catgories de milieux solides ou solidifiables les
rsines, solubles dans l'alcool ou les hvdrocarbures, et les milieux
:
aqueux, tels que

de gomme.
la
glycrine glatine ou les sirops de sucre et
Baume du Canada.
employe parce
Celte
rsine est de
beaucoup
Elle provient de divers conifres de l'Amrique
balsamea
et
la
plus
qu'elle est trs rfringente et se solidifie trs vite.
du Nord (Abies
canadensis).
Elle se trouve dans le
commerce sous
diverses formes.
Il
existe
MILIEUX d'observation ET DE CONSERVATION
437
un baume du Canada pur el neutre au xviol, prpar par Grubler.

Son inconvnient est d'tre cher; il ne convient donc pas pour les
laboratoires o travaillent de nombreux lves. Ce n'est pas seulement la raction plus ou moins acide qui importe pour la conservation des couleurs, mais plus souvent encore Faction rductrice.
Or celle-ci est la mme pour toutes les sortes de baume c'est elle
:
qui empche l'emploi de cette rsine pour les couleurs du groupe

du bleu de mthylne, qui se dcolorent en milieu rducteur. Le
baume du Canada sec, en fragments de volume variable, se dissout
facilement dans
masse qui
le xylol.
est parfois
d'un emploi trs
Son seul inconvnient est de donner une

Le baume fluide ou sirupeux
trs fonce.
commode pour
les grands laboratoires, parce

quelques gouttes de xylol pour l'amnera
la consistance voulue. Malheureusement, c'est celui qui donne le
plus de prise la fraude il arrive qu'au lieu de baume pur on
reoit un mlans;e de diverses rsines de moindre valeur. Le
est
qu'il suffit d'y ajouter
vritable
baume du Canada
et l'addition d'alcool
Le xvlol
est le
dans
qu'en partie soluble dans l'alcool

solution thre amne un trouble.
n'est
la
meilleur dissolvant du baume. Je dconseille
le
chloroforme, qui altre les couleurs d'aniline, et l'essence de trbenthine, qui dcolore l'hmatine.
Pour
les
coupes
et
objets minces,
il
faut
employer des solutions bien
fluides, de faon obtenir une couche de baume trs peu paisse, ce

qui facilite l'tude aux forts grossissements et donne une garantie de
conservation des couleurs. Pour les objets pais, on prend

des solutions trs denses, de manire viter la rentre
de
l'air
par vaporation du dissolvant.
On garde le
Emploi du baume du Canada.
baume du Canada dans des flacons dits baume
(lig. 175), ferm's par un capuchon de verre el renfermant un
petit agitateur effil
son extrmit.
On
ne peut monter dans ce milieu que des objets parfaitement dshydrats. Il est donc ncessaire de les
soumettre d'abord l'action de l'alcool absolu, puis
de chasser l'alcool par le xylol. Lorsque l'objet est
liacon
baume.
les traces d'eau qu'il renferme produisent immdiatement, au contact du baume, un prcipit de gouttelettes
rsineuses opaques, qui enlve la prparation sa transparence.
On s'aperoit immdiatement de cet accident la teinte laiteuse
mal dshydrat,
que prend
la
prparation, surtout lorsqu'on l'examine sur
un fond
METHODES GENERALES
438
Lorsque cet accidenl se produit, il faut se hter d'enlever

lamelle; ou dissout le baume en versant du xylol plusieurs
noir.
la
reprises, puis
on reprend par l'alcool absolu. Lorsque la dsliyon passe de nouveau au xylol et au baume.
di'atalion est parfaite,
Aprs la dsliydratalion, on conseille quelquefois de traiter les objets

par Vessence de girofle. Je crois ([u'il faut viler autant que possible
l'emploi de ce ractif, parce qu'il nuit beaucoup de colorations et
empche le baume de se solidifior convenablement. Son emploi n'est
indi([u que pour les Arthropodes (p. 598) et encore dans certain cas trs
particuliers. Lorsqu'on a employ l'essence de girofle comme difrenciateur, il faut donc l'enlever par le xylol avant de monter au baume.
Le xylol phniqu de Weigert (p. 3ol) n'a de raison d'tre qu'avec
les coupes au collodion, qui ne peuvent tre dshydrates l'alcool
absolu et qui ne supporteraient pas le xylol pur, aprs l'alcool 9(J".
Pour les coupes colles sur lames,

technique indi([ue p. 420. Avoir soin, pour viter les
bulles d'air, de dposer une goutte de baume sur la coupe et une
autre sur la lamelle. Retourner la lamelle, la tenir obliquement
Montage des coupes.
suiviT. la
avec une pince, appliquer le ct gauche sur la lame, mettre

deux gouttes en contact et abaisser doucement le ct droit.
les
Les coupes au collodion sont dshydrates comme il vient d'tre dit

dans une gote de baume, et
une tendance se gondoler,
on les comprime entre la lame et la lamelle au moyen d'un poids ou
d'un compresseur, comme il va tre dit plus loin (p. 440).
(voir aussi p. 351), puis portes sur la lame,
recouvertes d'une lamelle. Si ces coupes ont
Les petits objets spars et

Arthropodes, fragments d'organes animaux ou vgsout monts entre lame et lamelle, dans une goutte de
Montage des
objets spars.
isols (Vers,
taux, etc.)
baume, sans difficult
i.
Lorsque
l'objet est pais,
il
est
souvent
ncessaire de l'enfermer dans une cellule de
verre ou de papier.
On trouve dans le commerce des cellules toutes

prpares ce sont des lames de verre, d'paisseur
variable, de la dimension des lamelles, et perces
en leur centre d'une ouverture circulaire. On peut
prparer soi-mme des cellules en papier (fig. 176),
au moyen d'un emporte-pice rond, en acier, qu'on
Fig. 176. Cellule en
trouvera dans une maison de quincaillerie. On
papier, dcoupe
l'emporte-pice.
dcoupe, dans une feuille de carton ou de buvard
blanc pais, des carrs de dimension gale a
celle des lamelles. On perfore ces
carrs avec l'emporte-pice
cette opration se fait trs proprement en oprant sur une
plaque
:
].
Xôir p. 577 les
prcautions particulires prendre pour les Arthropodes.
439
MILIEUX d'observation ET DE CONSEUVATION
e zinc; ce mlai est assez tendre pour se laisser entamer lgrement et permettre ainsi une section trs nette des papiers, sans
aucune bavure. En mme temps, il est assez rsistant pour ne pas se
dformer. Toutes les fois qu'on veut dcouper correctement du papier
ou du carton, avec une pointe ou une lame tranchante, il faut toujours
prendre comme support une lame de zinc. C'est le seul moyen d'obtenir
une coupure correcte, sans bavures et sans endommager le tranchant de
la lame. Pour les objets de grande dimension, les cellules ouverture
ronde deviennent insuffisantes. On dcoupe alors, sur la plaque de zinc,
avec un bon scalpel, une cellule carre ou rectangulaire (flg. 177) de la dimension d'une lamelle.
Les cellules de verre

lamelle
avec
du
se
collent
baume. Les
sur
cellules
la
de
.,
,,
Cellule
reciig. Iti.
tanguiairc en papier.
papier doivent lre imprgnes pralablement

de baume trs fluide, a(in de chasser Tair qui se trouve emprisonn entre les fibres; on les colle ensuite avec un peu de baume.
On
la
on remplit de baume
charge au pralable d'une
prfrable d'employer un excs de
dpose Tobjet au centre de
la
cellule
^,
cavit et on applique la lamelle,
grosse goutte de baume.
baume, de manire
Il
est
ne pas emprisonner de bulles d'air dans
la
cavit de la cellule, ce qui obligerait recommencer toute l'opralion. On chasse ensuite l'excs de baume par compression et on
l'absorbe avec des bandelettes de buvard.
L'emploi de ces cellules est trs commode avec les objets pais. Sans
prend une position oblique qui peut gner l'observation. En outre, le baume, en couche paisse, est insuffisamment retenu
par capillarit et coule trs facilement en dehors de la prparation.
Celle-ci est excessivement longue scher et doit rester des semaines
l'tuve. Enfin, la compression est trs difficile exercer et on risque de
briser la lamelle. Tous ces inconvnients sont vits par l'emploi des
cellule, la lamelle
cellules.
Au lieu de cellules, on peut souvent se servir avec avantage de fragments de lamelles, de poils ou de cheveux qui soutiennent la lamelle,
assurent son horizontalit et permettent aussi de comprimer la prparation sans craser l'objet (p. 242).
Montage de
sries d'objets.
Le montage des
objets spars
ne rencontre pas d'autre obstacle que leur paisseur. Il est plus

difficile de monter correctement un groupe de plusieurs objets,
sans que ceux-ci se dplacent au
moment o on
applique
la
lamelle.
1. Lorsque Tobjet est imprgn d'un dissolvant non vohitil (ierp'inol, essence
de girofle, chloralphnol), il faut le dposer auparavant sur une bandelette de
buvard, de faon al^sorbcr la majorit du li(|uido.
MliTIIODES GENllALES
440
Pour viler cet incoavnienl, il laut les coller au pralable. De

une des meilleures
nombreuses mthodes ont t proposes
consiste employer le coUodion de Schllibaum (p. 350). La lame
les objets, pntrs
esl enduite de collodion de Schllibaum
d'essence de girofle et essors sur du papier Joseph, sont
:
couche de collodion. On
laisse desscher quelques

on monte au baume comme d'habitude les objets
sont suffisamment colls pour ne pas se dplacer. On peut aussi
enduire la lame d'une trs mince couche de baume, laisser celte
couche devenir poisseuse, ranger les objets imprgns de terpinol
et essors, puis monter rapidement au baume.
rangs sur
la
instants, puis
Compression des
objets.
Les coupes au collodion
et les
objets isols ont quelquefois besoin d'tre
,.o
.
rig.
1/8.
presseur
com-
prparation une planit et une minceur suffisantes et pour loigner

l'excs de baume. Pour tre efficace et inotensivc, la prcssiou doit tre continue. Il faut donc
}trims, pour assurer
r
Com-
dit pin-
gie anglaise.
la
proscrire la compression exerce avec les doigts

ce procd esl brutal et surtout inefficace,
:
car
il
ne peut durer
assez
longtemps.
existe de petits compresseurs ressort, dits pingles anglaises, forfil d'acier recourb (fig-. 178). Ces appareils sont trs commodes,
mais on peut les remplacer par des petits poids do cuivre, des balles de
II
ms d'un
fusil, ou mieux encore par de petits tubes de verre fond

dans lesquels on verse un peu de mercure. Par ce dernier moyen,
on peut prparer l'avance une srie aussi nombreuse qu'on le dsire
de poids gradus, qu'on place sur les lamelles des prparations com-
revolver ou de
plat,
primer.
11
ter
est
que
une prcaution
le
c'est d'viessentielle prendre avec ces poids

la lamelle et vienne mouil:
baume en excs passe par-dessus
ler le poids. 11 serait impossible de retirer ensuite ce dernier sans

dplacer la lamelle et dtriorer la prparation.
Les poids doivent rester en place plusieurs jours, jusqu' dessiccation
parfaite du baume sur les bords de la prparation. Lorsqu'on retire le
poids trop tt, l'lasticit de Lobjet soulve la lamelle, fait rentrer de
l'air et
tout est
recommencer.
Schage du baume.
Le baume sche assez rapidement sur

beaucoup plus lentement l'intrieur
piparation
la
prparation soit maniable, il suffit que les
cependant, pour que
bords soient solidifis, de telle sorte que la lamelle ne puisse tre
dplace. Pour activer le schage, on peut mettre les prparations
les bords de
et
la
l'tude 37"
les
coupes schent en quelques heures,
les pr-
MILIEUX D OBSERVATION ET DE CONSEIIVATION
441
demandent plusieurs jours ou mme plusieurs
paraliolis paisses
semaines.
Tant que le baume n'est pas parfaitement sec, les lames doivent tre
conserves plat. En ng-ligeant cette prcaution, on s'expose voir les
lamelles glisser, le baume couler et les botes salies 11 faut donc garder
les prparations soit plat, dans des carions (fig. 179), soit en dressant
verticalement les botes rainures, de
manire ce que
les
lames soient
bori-
zontales.
Lorsqu'on veut tudier ou transporter de suite des prparations non

sches il faut les luter au lut de Krnig(p. 447).
Bulles
dans
le
est la
'd'air.
Un grand cueil
montage des prparations
prsence de bulles
d'air.
On
gnralement leur production

en employant le procd des deux
vite
Fig.
n9.
Carton volets pour
prparations microscopiques.
gouttes de baume sur la lame et

sur la lamelle et en abaissant doucement celte
420
et 438). Lorsqu'il s'en produit,
obliquement (p.
moyens de les liminer
dernire
il
tenue
y a plusieurs
on peut appuyer sur la lamelle, de faon

chasser les bulles avec l'excs de baume, mais on s'expose
craser la prparation. On peut aussi soulever dlicatement la
:
lamelle avec une aiguille, sur l'un des cts, en ayant soin de
caler le ct oppos avec une autre aiguille, pour viter le glissement. Ce moyen est le meilleur.
Les
petites
bulles
heures, parce que
le
disi)araissent
baume
plus loin (p. 577) de
la
d'elles-mmes en quelques
est trs avide
rentre de
l'air
d'oxygne. Nous parlerons

dans les Arthropodes.
Le seul avantage que la trVenise prsente sur le baume du Canada est de

permettre de monter directement des objets sortant de l'alcool,
sans passer par le xylol ou les claircissants. Ce milieu est donc
Trbenthine de Venise'.
benthine de
particulirement prcieux pour les Arthropodes et les tissus vgtaux, car il })ermet de simplifier beaucoup les manipulations. La
dOnilion est excellente, la transparence est parfaite et les lins
dtails sont plutt
l'indice
1.
mieux conservs que dans
de rfraction plus faible de
la
le
baume,
trbenthine.
Un
cause de
autre avan-
Je laisse do ct la rsine Danimar qui ne prsente pas d'avantages marqus

baume du Canada; on remploie en solution dans le xylol.
sur le
METHODES GENERALES
442
lage esl de supporter la prsence triine pelile quaiitil creaii. On

peut donc passer directement de l'alcool 90 la trbenthine,
sans avoir besoin de dshydrater par l'alcool absolu.

Malheureusement, aucune coloration ne se conserve dans la
trbenthine, aussi est-elle inutilisable
pour
les
et
coupes
les
objets colors.
Voici comment je prpare la lrljenlliine de Venise, l'imitation de
Vosseler. Je mets dans un grand flacon, bien boucli, volumes âux
de trbenthine et d'alcool absolu ou au moins 95. 11 faut que l'alcool
soit assez fort pour que le mlange ne se trouble pas. A l'tuve 37
on agite de temps autre pour

rapide
complte, et que le liquide est bien homogne,
on dbouche le llacon et on laisse vaporer l'tuve, jusqu' consistance suflisante. En mme temps, toutes les impurets se dposent.
On dcante le liquide clair dans des flacons baume. Le mode d'emploi
est le mme que pour le baume du Canada, le schage est un peu plus
la
dissolution
est
assez
l'activer. Lorsqu'elle est
lent
1.
Huile de cdre.
L'huile de cdre paissie
(et
non l'essence
de cdre) est peut-tre le meilleur de tous les milieux. C'est certainement un de ceux qui mnagent le mieux les coloiâtions. particulirement celles qui sont effectues avec les colorants basiques du^
c'est--dire celles qui
(p. 383-389),
doivent tre conserves dans un milieu non rducteur. Nous avons
groupe du bleu de mthylne
dj indiqu ailleurs (p. 2-49) la ncessit de la prsence de l'oxygne

pour la conservation de ces colorations; l'huile de cdre et surtout
conviennent parce qu'elles sont peu rductrices.

L'huile de cdre sche suffisamment sur les bords des prparale di)lacement des lamelles.
tions, surtout l'tuve,
l'huile de paraffine
pour empcher
Ce milieu
Glycrine glatine-.
pour
dit.
est
un des
plus employs
toutes sortes de travaux, parce qu'il est d'une grande
On
commo-
nombreuses formules, mais nous ne

de Kaiser ^
a propos de trs
retiendrons que celle
7 gr.
Glatine
Eau
42 gr.
50 gr.
distille
Glycrine
Acide phnique^
o^-
absolu
1. On peut
employer aussi le baume du Canada, dissous dans
selon Seiler, mais ce milieu est moins tolrant pour des traces d'eau.
2.
On dit souvent glatine glycrine, mais cette expression me parat
est
impropre, parce que, dans ce cas, le vritable milieu est la glycrine qui
l'alcool
solidifie par la glatine.

Voir p. 557, note 1, la formule de Deano.
Botanisches Centralblatl, I. p. 25.
Au lieu d'acide plinique. on peut mettre un peu d'acide arsnieux ou do
simplement
3.
4.
thymol.
443
MILIEUX D'OBSERVATION ET DE COiNSERVATION
Faire g'onfler la glatine dans l'eau pendant deux heures environ,

ajouter la glycrine, faire fondre au bain-marie en agitant, puis ajouter
l'acide phni({ue. Filtrer bien chaud sur coton de verre. Pour liminer
d'avance les filaments et les corps trangers, il faut dcouper, dans les
de glatine, les parties losangiques, en rejetant les traces du

sur lequel ces feuilles ont t solidifies, car ce rseau est souill
de filaments provenant des ficelles du filet.
feuilles
filet
On peut monter certains objets peu dlicats en passant directement de Teau la glycrine glaline mais, gnralement, il
est prfrable
d'imprgner d'abord par la glycrine ou le laclo;
En
tous cas, il ne aui jamais passer de l'alcool la

glycrine glatine, sous peine d'avoir une coagulation immdiate
et dfinitive de ce milieu, sous forme de nuages blancs opaques.
phnol.
y a deux moyens d'employer
Il
la
chauffer au bain-marie dans
un
la
glycrine glatine.
On
petit flacon et puiser la
peut
masse
fondue avec une baguette de verre ou un pinceau. On peut aussi

couler dans une cuvette de verre ou de porcelaine et dcouper
en lanires le produit solidifi. Au moment de s'en servir, on
la
prlve un fragment qu'on dpose au centre d'une lame; on

chauffe doucement pour faire fondre, sur une petite flamme ou
sur la platine de Malassez (fig. 147). On dpose l'objet dans la

goutte et on recouvre d'une lamelle, sur laquelle on a dpos
une autre gouttelette fondue. On appuie lgrement et on chauffe
de nouveau
la lame, si c'est ncessaire,

puis on laisse refroidir
enlve ensuite les bavures avec une petite brosse, sous le
robinet d eau froide.
plat.
Il
On
est
bon de
que produirait
la
la
Comme
lut, on prend une peinture mail quelconque

du maskenlack (p. 449). Les bulles d"air ne disparais-
forte chaleur.
(ripolin) ou
pour empcher la poussire de s'accumuler

prparation et pour prvenir les inconvnients
fluidification du milieu, sous Tinfluence d'une
luler,
sur les bords de
sent jamais dans la glycrine glatine; il faut donc les viter avec
soin et ne pas agiter ce milieu lorsqu'il est fondu, car il emprisonne
trs facilement de l'air, dont il est trs difficile de le dbarrasser.
L'bullition y dveloppe aussi des bulles gazeuses trs gnantes.
Sirop d'Apathy ^
Gomme
arabi([ue
Sucre de canne (non candi)
Eau
Aprs dissolution, ajouter
1.
Ztschr.
f.
iciss.
>
an
2 p. 100 de formol ou
Mikr., IX, p. 37, 1892.
un peu de thymol.
MTHODES
444
G.NIIALES
Ce sirop est excellent pour monter toutes sortes d'objets qu'on

ne veut pas dsliyclraler. Il conserve trs bien toutes les colorations,
mme celles au bleu de mthylne (voir [). 368, le sirop de lvulose de iMichaelis).
devient rapidement trs dur sur les bords
Il
prparation et dispense de tout lut. 11 peut servir aussi

border certaines prparations en milieu liquide. Les objets qui
de
la
pourraient se contracter sont plongs d'abord dans ce milieu fortement tendu d'eau on laisse ensuite le liquide se concentrer peu
;
peu, par vapora lion.
Milieux liquides.
Au
point de vue de la rfringence et de la conservation des

aux
objets, les milieux liquides sont gnralement trs suprieurs
milieux solides
mallieureusemenl, un grand obstacle leur
:
emploi
rations.
est la difficult
Il
employer,
la
a pourtant
soit
avec laquelle on arrive fermer les prpabeaucoup de cas o on sera oblig de les
pour des objets dlicats qui seraient dforms par
dshydratation, soit pour conserver telles quelles des dissections
ou des dilacrations
Je
tels
me
difficiles, etc.
contente d'numrer des milieux liquides bien connus
que Teau formole,
la
glycrine, le mlange glycrine-alcool-
448) la manire
de luter'les prparations faites avec ces liquides.
Je mentionne en outre quelques milieux moins connus et
eau
( parties gales), etc. J'indique plus loin (p.
cependant des plus
utiles.
Lactophnol de Amann.
publie par Amann en 1896
La
formule de ce liquide a t
Acide plnique
Acide lactique
crist.
ctiimiquement pur
...
1
1
Glycrine
Eau
distille
gr.
bien pur. Le
ne tarde pas
brunir sous Tinfluence de la lumire, ce qui est d'ailleurs sans importance. Pour le conserver incolore, il faut le garder en flacons jaunes.
L'acide phnique doit tre parfaitement blanc
mlange frachement prpar est incolore, mais
Je considre ce ractif
comme une
et
il
des plus importantes acqui-
und Einschlussmedien
1. J. Amann, Conservirungsflussigkeiten
Chloro- und Cyauophycccn. Ztschr. f. loiss. Miki\, XIII, p. 18, 1896.
fiir
Moose,
445
MILIEUX d'observation ET DE CONSERVATION
sitions de la technique moderne i. 11 esl exlrmement utile pour

examiner et conserver toutes espces d'objets, animaux ou vgtaux.
Les lments les plus dlicats sont claircis sans tre jamais con-
tracts.
rfraction {n z= 1,44) est tel qu'il
Son indice de
de voir de
fins
permet
gnralement dans les
bien plus agrable manier
dtails qui disparaissent
rsines et dans la glycrine; il esl

cette dernire. Je m'en sers pour examiner et
que
objets possibles et je
m'en trouve
trs bien.
monter tous les

Pour fermer les pr-
parations, j'emploie maintenant le lut de Kronig (p. 447).

J'ai t beaucoup moins satisfait de la glycrine glatine et de
gomme au lactophnol de Amann. Je prfre monter la glycrine glatine ordinaire ou au sirop d'Apatliy, aprs imprgnation
la
le
par
lactophnol.
Ce
corps a t propos tout rcemment- par

Mayer pour remplacer l'essence de girofle. Il prsente, sur cette
Terpinol.
dernire, l'avantage d'tre incolore, d'avoir une faible odeur de

un indice de rfraction infrieur (1,48). Ce corps, qui est
lilas et
un produit synthtique,
il
peut servir de
est
mdium
moins coteux que l'essence de

condition de luter au lut de
ou au sirop d'Apathy. Il admet des objets sortant de

Il ne dissout
pas le collodion.
girolle
Kronig
l'alcool 90.
Ce mdium, peu connu, est susceptible

Paraffine liquide.
de rendre de grands services. C'est d'abord un excellent liquide
d'immersion^ qui prsente, sur l'huile de cdre, l'avantage du
bon march
et
'
et de la pro)ret, car il ne sche pas, n'jiaissit pas

s'enlve trs facilement au buvard et avec le tolune (p. 83,
note 1). En outre, c'est un prcieux milieu d'observation cause

de son faible indice (1,47), intermdiaire entre ceux du terpinol
et
du lactophnol. Enfin
sa neutralit et son
absence de pouvoirs
donnent une grande supriorit pour la

oxydant
conservation des bleus basiques. Les objets doivent tre dshydrats et passs au xylol avant d'tre monts dans ce liquide. On
lu te au sirop d'Apathy ou au lut de Kronig.
rducteur
et
lui
Je pense qu'il peut tre utile de connatre l'indice de rfraction
1.
M. Langeron, Emploi du lactophnol pour
les
Nmatodes.
LVIII, p. 750, 1905.

P. Mayer, Ueber oin neues Intermedium. J^tschr.
C. R. Soc. de bio-
logie,
^.
f.
wiss.
Mikr.,
XXVI,
p. 5-23, 1909.
3. Kowntrcc, Note on the use of paraflinum li({uidum as an immersion
Journ. ofpat/i. and bact., XIII, p. :28, 1909.
4. Soixante-quinze centimes les cent grammes au lieu do cinq francs.
oil.
METHODES GENERALES
446
el la solubilit
des principaux milieux d'observalion et de conser-
vation, aussi ai-je runi ces donnes dans le tableau suivant
SOLUBILITE
INDICE
DE
PRINCIPAUX
MILIEUX d'observation
RFRACTION
MOYEN
Air
Eau
Eau.
Alcool.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Xvlol
distille
Actate de potassium, sol. aq. sat.

alcool 1 -f eau 1
Glycrine 1
Lactophnol
Acide lactique
Glycrine
Paraffine liquide
Trbenthine de Venise
Terpinol
Chlorallactophnol
Huile de cdre
Chloralphnol
Essence de girofle
1,33
1,37
1,39
1,44
1,44
1,45
1,47
1,47
1,48
GhJoralchlorophnol
1,49
1,51
1,52
1,53
1,53
1,54
Monobromonaphtaline
1,50
Baume du Canada
-r
u
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Je joins ce tableau celui du nombre de gouttes au gramme

des principaux ractifs. Ce tableau peut rendre des services pour
mesurer de petites quantits, sans recourir aux mesures gradues.
Les indications ne sont rigoureusement exactes que pour le

compte-gouttes de 3 mm, de diamtre extrieur et de 600 a de diamtre intrieur. Pour tout autre compte-gouttes, elles ne sont
qu'approximatives.
RACTIFS
CHAPITRE XXIII
LUTS ET VERNIS
Il existe d'innombrables formules et
procds pour la fermeture
des prparations. Ces manipulations sont chres aux amateurs de
microscopie et aux marchands qui cherchent, avant tout, obtenir
un rsultat agrable l'il. Il est certain qu'avec des lamelles

rondes, scelles la tournette avec un bon vernis, on obtient des
prparations trs jolies et trs solides. Malheureusement, le travailleur ne dispose gnralement pas du temps matriel suffisant
pour effectuer ces oprations.
Ou
bien encore
il
n'excute que
par intermittence des prparations en milieux liquides et, au

moment o il aurait besoin d'un bon vernis, sa provision est des-
sche et hors d'usage. Il faut donc qu'il possde une mthode

rapide, applicable aux lamelles carres, qui sont d'usage courant,
avec un lut facile conserver.
Lut de Krnig.
le lut le
plus simple
Pour
et le
les
meilleur
prparations en milieu liquide,

^
est celui de Kronig -.
Cire jaune
2 parties
79
Colophane
On
en poids.
fondre la cire, dans une capsule de porcelaine ou de mtal, et

la colophane, en agitant avec une baguette de
coule ensuite dans de petites botes de fer
fait
on ajoute peu peu

verre ou de fer. On
blanc
3.
prconis autrefois les bordures en glatine glycrine recouvertes de

ai compltement renonc car la glatine absorbe le liquide de la
prparation, l'air rentre et l'objet est cras. En outre, l'application de ces deux
bordures tait trs longue, tandis que le procd de Kronig est trs simple et
1. .J'ai
ripolin.
.J'y
trs rapide.
2.
Arch.
f.
mikv. Anat.,
XXVII,
p. 657, 1886.
Les botes mtalliques des cigarettes de luxe sont excellentes pour cela leur
couvercle charnire permet de conserver le lut l'abri de la poussire.
3.
448
METHODES GENERALES
Pour appliquer ce lui ou se sert (Tua fil de fer de 2,5 mm.

de diamtre, recourb augle droit (fig.' 181) ou en triangle
(fig. 180). La partie recourbe doit avoir la largeur d'une lamelle
dimensious
de
'^^
mm. On
22
soit
moyennes,
chauffe
modrment
ce fer luter et on le plonge dans

qui fond son contact. Ou
le lut,
en porte une goutte en fusion aux

au
quatre coins de la lamelle
:
contact du
difie
verre, le lut se soli-
instantanment.
ne reste
Il
plus qu' border les quatre cots,

ce qui se fait trs rapidement en
Fig. 180.
lter
gulaire.
Fer
trian-
Fer
Fig. 181.
lutcr coud.
Ori-
appliquant sur chacun d'eux

fer charg de lut. Il faut que
bordure
soit
ginal.
d'elles
celui-ci
soit
lame
chaud pour que
sur 3
recouvre chacune
mm.
environ. Le
bien fondu
le lut soit
une masse homogne et sans bavures (fig. 182).

Ce lut est trs dur et adhre parfaitement au verre,
que
la
Original.
et la lamelle et
fer doit tre assez
cheval sur
le
la
et
forme
condition
faut donc,
avant de luter, enlever la
parfaitement iiropre
et
sec.
Il
moindre trace du
li(juide
conservateur. Le mieux
est
d'entourer
le
doigt
d'un chiffon qu'on imbibe

d'eau, d'alcool ou de tolune, suivant
la
nature
du liquide enlever.
Pour la glycrine et le
lactophnol, l'alcool est excellent. Pour ne t)as dranger la lamelle,
on peut d'abord la fixer aux quatre coins et procder ensuite au
nettoyage des bords.
On
fine
peut ])rparer un lut analogue avec parties gales de parafou de colo( 60") et de baume de Canada (Apathy)
dure
phane. Les rsultats sont
les
mmes.
Ce mdium,
Sirop d'Apathy.
pour
les Hipiidcs
liquide.
On
non aqueux,
tels
rappliipn^ an })inceau.
dcrit p.
que
le
M3,
sert aussi de lut
terpinol ou la paralfinc
LUTS ET VERNIS
Ce corps
Bitume de Jude.
tournelle. Une excellente formule
geance de M. Benoit-Bazille
449
sert surtout faire des cellules la

est la suivante,
que je dois
l'obli-
Solution paisse de bitume de Jude dans

l'essence de trbenthine
Mixtion des doreurs
aa en
poids.
pinceau. Au moyen de la tournette, on fait une celune lame bien propre. Quand la cellule est sche, on la
remplit de liquide, on place l'objet et on recouvre d'une lamelle ronde.
On essuie l'excdent de liquide et on borde la tournette avec le mme
lut. Les prparations ainsi obtenues sont trs jolies, malheureusement
le procd est long et ne peut convenir au travailleur press.
On applique au
lule ronde sur
Maskenlack.
Ce vernis
se
trouve tout
fait
dans
le
com-
merce. C'est probablement une solution alcoolique de gomme

laque, additionne de noir de fume ou d'une poudre bleue, suivant
la
On
couleur du vernis.
nettoie ensuite l'alcool.
bitume de Jude.
11
Il
est trs
l'applique avec
sert faire des
un pinceau qu'on
cellules,
comme
bon aussi pour recouvrir d'autres
le
luts,
que celui de Kronig ou la parafline.

Quand on veut fermer des prparations en milieu liquide, il
faut absolument faire d'abord une cellule ronde ou carre, suivant
la forme de la lamelle. Une fois la cellule sche, on y place l'objet
tels
avec le liquide et on recouvre de la lamelle. On aspire l'excs de

liquide et on nettoie l'alcool avec soin, car le maskenlack ne
prend pas sur le verre mouill d'eau ou de glycrine. On ferme
ensuite la prparation
la
main ou
la tournette, avec
une pre-
mire couche de maskenlack trs pais. Aprs schage complet on

passe encore une ou deux couches de maskenlack moins pais
on ne doit
(dilu avec de l'alcool). En regardant par transparence,
voir aucune fente dans la bordure, sinon appliquer une nouvelle
couche.
Ce lut est le plus simple de tous et il prend l>ien

verre parfaitement nettoy, malheureusement il est trs
couche d'un vernis tel que le
fragile et doit tre recouvert d'une
maskenlack. On applique la paraffine avec le fer luter. Elle
Paraffine.
sur
le
rend surtout des services pour
la
fermeture provisoire de prpa-
rations extemporanes.
M. Langeron.
Prcis de Microscopic.
29
CHAPITRE XXIV
DPIGMENTATION
La (lpigmen talion
souvent indispensable pour rtude de
est
certains objets, tels que l'il, certains ufs, la peau de divers

animaux, etc. C'est toujours une opration assez dlicate, aussi
les formules abondent-elles. Comme il faut adapter le ractif
l'objet et
souvent ttonner,
je vais
indiquer les principales mtbodes.

Placer au fond d'un flacon
').
Mthode du chlore (Mayer
quelques cristaux de chlorate de potassium, arroser de deux

trois gouttes d'acide chlorhydrique, puis, lorsque le chlore commence se dgager, ajouter de l'alcool 70, dans lequel on
dpigmenter. On l'y laisse jusqu' blanchiment
au
besoin, ajouter encore un peu d'acide. On dcolore
complet;
ainsi non seulement les pigments, mais encore le noircissement
immerge
l'objet
produit par l'acide osmique. Pour la chitine, employer de l'eau

lieu d'alcool. Ce procd convient aussi pour les coupes colles.
au
Procd de Tacide chlorique (Grynfelt
Prparer de l'acide chloiique par
le proc<l
et Mestrezat)
suivant
-.
Dans un ballon de verre, dissoudre ^0, 50 gr. de chlorate de

baryum dans 70 cm^ d'eau dislille. Aprs refroidissement partiel,
ajouter, par petites portions et en agitant bien, 8,5 cm'^ d'acide sulfurique pur 06" Baume dilus dans 40 cm^ d'eau distille. II se produit
du sulfate de baryum insoluble et de l'acide chlorique qui reste en dissolution. Aprs 48 heures, dcanter en flacon l'meri et conserver
l'obscurit.
Pour dpigmcntcr, ajouter 2 cm^ de solution d'acide chlorique

90. On peut augmenter la dose si c'est ncessaire.
15 cm^ d'alcool
1.
Milh. zool. Station
NeapeU
II, p. S, J880.
Grynfelt et Mestrezat, Sur un nouveau procd de dpigmentation des

prparations histologiques. C. li. Soc. Iiiol.\ LXI, p. S7, 19C.
2.
DEPIGMENTATION
42**
10
et laisser
12
451
On
heures en contact.
Oprer
passe
ensuite par les alcools, puis on lave l'eau.
Les coupes doivent tre colles Teau distille et, au besoin,
collodionnes par la mthode de Regaud (p. 350).
3o Persulfate
d'ammonium.
Ce corps, qui
est
employ
en photograithie pour affaiblir les ngatifs, russit quelquefois

bien en solution aqueuse ou alcoolique 4 p. 100.
Eau oxygne.
trs
Le meilleur procd pour se procurer

de Teau oxygne consiste dcomposer par l'eau le perborate de
sodium on trouve ce sel dans le commerce sous le nom d'oxylithe ^
4
Cent grammes de
ce corps dveloppent au moins 80 litres

Carazzidissout
d'oxygne.
Toxylithe dans Teau ou Talcool 70
et ajoute un peu d'acide citrique ou
tartrique. pour augmenter la
production d'oxygne. Le liquide obtenu est neutre ou peine

acide. Les coupes ne sont pas altres et les tissus osmis se blanchissent trs bien.
S*"
Permanganate de potassium
On
Cette mthode est due Allieri\
par
le
permanganate de potassium
24 heures. On
et acide oxalique.
traite l'objet
1
p.
ou
les
coupes
000 pendant 2
lave grande eau et on dcolore par l'acide oxalique 1 p. 300. On lave ensuite l'eau. Herzog conseille de
diluer cinq fois ces solutions pour les coupes la paraffine.
2.
Oxylithe, 113, rue Cardinet, Paris.

Ztschr. f. wiss. Mikr., XXVI, p. 526, 1909.
3.
Monitore zool.
1.
iial.,
VIII,
p. 57, 1897.
CHAPITRE XXV
LIQUIDES CONSERVATEURS
POUR
COLLECTIONS MACROSCOPIQUES
Les deux principaux liquides conservateurs sont alcool et le
formol. Le premier convient surtout pour les Arthropodes et pour
les animaux dont on doit faire Tlude morphologique, car, s'il
conserve gnralement mal la structure histologique, il permet de
rendre aux spcimens leur forme naturelle en les plongeant dans
Teau. Pour les collections, on prend au moins de l'alcool 70, ou
plus gnralenip.nt 90'-. Quand on y plonge des animaux frais, il
faut le renouveler au moins une fois, car son litre baisse beaucoup
et les pices
peuvent tre macres.
Le formol a t l'objet d'un vritable engouement, dont on

commence heureusement revenir. Nous avons dit jilus haut
(p. 276), qu'employ seul c'est un mauvais fixateur. Pourtant,
dfaut d'autre liquide, il est trs suprieur l'alcool pour la conservation histologique des pices, car il ne produit jamais de macration; il suffit d'en faire une dilution 4 ou 5 p. 100 (p. 277).
En
outre,
copiques.
il
donne de
pour les collections macrosmatriaux ainsi conservs ne
trs jolies pices
Malheureusement,
peuvent tre dissqus,
les
ni utiliss
pour autre chose que pour
la
morphologie externe. S'ils sont dforms, il est impossible de leur

rendre, par immersion dans l'eau, leur aspect primitif. Aussi,
malgr son bon march
et la facilit
de son emploi,
le
formol doit-
employ avec beaucoup de circonspection. Nous donnerons

des indications ce sujet dans les divers chapitres des mthodes
il
tre
spciales.
La prparation des pices analomiques destines
la
dmons-
LIQUIDES CONSERVATEURS
453
Iration ncessite des prcautions particulires cause de la difficult de conserver les couleurs. Si le formol et Talcool, convena-
blement employs, peuvent donner une conservation morpholoet histologique suffisantes, ces liquides sont
gique
empcher
la
disparition des
couleurs;
or
il
est
impuissants
essentiel
que
conserves dans les pices d'auatomie pathologique.

D'innombrables formules ont t proposes, surtout en Alle-
celles-ci soient
magne
nous nous contenterons d'indiquer
de Nastioukov qui paraissent
Mthode de Kaiserling'.
liquide suivant
de Kaiserling
celles
et
les plus sres.
Fixer
les
pices dans le
Phosphate de potassium
Phosphate de sodium
Chlorure de sodium
Azotate de potassium
Formol du commerce
130 gr.
60
10
50
400 cm^
4 000
Eau
11 est bon
que la pice repose sur du coton et ne soit d'aucun
ct en contact avec le verre. 11 est essentiel qu'elle soit entire-
ment recouverte par le liquide. La dure du bain varie, suivant le

volume et la consistance de la pice, de 12 heures cinq jours au
})lus. Ce liquide peut servir deux ou trois fois.
2 Dvelopper la couleur par un bain d'alcool 90^*. Retirer
ds que les couleurs primitives ont rapi)aru.
Conserver dfinitivement dans
les pices
Eau
Actate de sodium
000 cm3.
225 gr.
100
Glycrine
Renouveler ce liquide au bout de quelques jours.

Mthode de Nastioukov -.
Immerger les organes
dans
frais
Crosote de htre
Azotate de potassium
2 gr.
10
200
800 cm3.
Glycrine
Eau
1. II y a de nombreuses variantes de la mtliode de Kaiserling; je donne celle

qui est employe au laboratoire d'anatomic pathologique de la Facult de mdecine de Paris.
2. Russki
Vmtclu p. 51:?, 19 avril 1908.
Semaine mdicale. XXYIII, p. 393,
1908.
METHODES GENERALES
454
La dure du bain est d'au moins vingt-quatre heures. On conserve ensuite les organes dans de Thuile de vaseline ou de ptrole K
Les petites pices donMontage la glatine glycrine.
nent de trs jolies prparations lorsqu'elles sont incluses' dans la
On
-.
glatine glycrine
prpare une glatine bien transparente
en y mlangeant un peu de blanc d'uf et en portant FbuUition.

On filtre sur papier Chardin. Une bonne formule de glatine est
celle
de Kaiser
442). Les pices sont d'abord traites par
(p.
mthode de Kaiserling, puis montes dans
la
la
gele glycrine,
dans des botes de Ptri ou d'autres rcipients.
Prparations transparentes.
Spalteholz arrive, en combinant l'emploi de liquides d'une rfringence particulire avec
celui des injections, obtenir des pices anatomiques transparentes, trs dmonstratives. Les liquides qui lui ont donn les
meilleurs rsultats sont Tlher mthylique de l'acide salicylique
et le benzoate de benzyle.
Durcissement des
piques.
Freclet
''
pour
objets
les
coupes
macrosco-
conseille linjection vasculaire par la forma-
chromique (eau 1000, formol 100, acide chromique

cadavre humain est durci en deux mois.
line
5).
Un
Fermeture des bocaux.

Ciment de Groot.
Pour
bocaux remplis d'alcool, de
les
Groot"^ conseille le mastic suivant, soluble dans l'eau, mais inso-
luble dans l'alcool
quand
il
est sec.
Prendre 8 parties de blanc de
broyer dans un peu d'eau, puis ajouter de l'eau de manire

en utiliser 30 parties; y faire dissoudre chaud, mais sans
boiUir 6 parties de glatine. Appliquer chaud (chauier le
zinc,
ciment
et les surfaces runir)
ou obturer
les
bouchons de
Cimenl Latasle.
pour
sceller les plaques
de verre
lige.
(convient pour tous les liquides.
On
le
prpare en fondant ensemble deux parties de paraffine et une

partie de caoutchouc. Cette opration est trs lente et demande
tre conduite avec prcaution
pour que
le
mlange ne s'enflamme
facilement la fluorescence du ptrole avec quelques

1. On fait disparatre
gouttes de nitrobenzine (Unna).
Voir ce sujet
'2.
Roussy, C. Ji. Soc. de Biologie, LXVI, p. 308, 1909.
R. CoUin {Ibid., LIX, p. 489, 1905), conseille le silicate de potassium.
3. Voir ce sujet Rev. gn. des se, 15 dcembre 1911. Anat. Anzeigcr, XLI,
:
p. 75, 191v>.
4. Xlll'' Congr. inlcrn. de md., Paris, 1900.
5. Zool. Anzevjer, XXVIII, p. 406-407, 1904.
455
LIQUIDCS CONSEIIVATEUIIS
Oprer dehors ou sous une
pas.
bon
Iiolte
tirage,
Todeur. Appliquer chaud, en faisant fondre
cause de
ciment
k^.
et
en
chauffant les surfaces runir.
Gomme
arabique.
La simple dissolution de gomme arabique
est excellente pour la fermeture provisoire des bocaux, au moyen

d'une plaque de verre.
Moyens de coller les chantillons sur des lames de
Pour les pices conserves dans Talcool, employer la

verre.
solution forte de cellodine (p. 315). Pour les pices conserves
dans
les liquides aqueux, coller la glycrine glatine (p. 4-42),

puis, quand elle a fait prise, insolubiliser par un bain de formol
5 p. 100. Ces colles sont absolument invisibles.
Dans une collection, les tiquettes doivent tre

Etiquettes.
Fencre de Chine et immerges dans les bocaux. C'est le
crites
seul
moyen de
pour
les
conserver propres
dement,
dans 250 cm^ d'eau
et
on y ajoutera 2
dissous dans 20 cm^ d'eau.
un
et d'viter les confusions.
Pourtant, si on veut les coller solitiquettes.

on fera une dissolution de 100 gr. de gomme arabique
Colle
de sulfate d'alumine
gr.
Vernis pour tiquettes.

Passer rapidement sur l'tiquette
petit pinceau dur charg de paraffine trs chaude. Ce moyen
trs
simple rend les tiquettes impermables.
Encre pour
crire sur
le
verre.
Encre noire
une
partie de
de potassium pour deux parties d'encre de Chine. Encre

blanche pte d'oxyde de zinc dans le silicate de potassium.
silicate
Crayon pour
peut
aussi
crire sur le verre.
crire
avec
Crayons gras Faber.
un fragment de
feuille
On
d'aluminium,
dcoup en pointe ou enroul en tortillon mouiller le verre avec

salive ou simplement y dposer un peu de bue. On russit
:
la
mieux en mouillant d'abord avec du

lavant l'eau.
silicate
de potassium, puis en
CHAPITRE XXVI
PRHENSION, CONTENTION,
ANESTHSIE
Le premier soin d'un bon exprimentateur doit tre de saisir et
de maintenir correctement les animaux en exprience, tant pour
les inoculer
avec succs que pour se mellre Tahri de blessures
qui, avec certains virus, peuvent tre des plus dangereuses.
Non
seulement un animal insuffisamment maintenu peut user de ses

dents et de ses griffes, mais encore il peut occasionner des blessures avec les instruments d'inoculation.
Chien.
cou.
S'il
est docile, le saisir
solidement
iar la
faroucbe, lui jeter autour du cou un
S'il est
nud
peau du
coulant
on peut alors le
soumettre une demi-strangulation
museler et lui attacher les pattes. L'n bon nud coulant peut tre
fait avec un fouet de charretier, l'extrmit
duquel on attache,
et
la
le
un anneau de fer on passe le manche dans

La manuvre de cet instrument, que j'ai appris
place de la mche,
cet anneau.
connatre
la
fourrire de Tunis, est des plus faciles.
Pour museler un Chien, passer une bonne cordelette en arrire

des canines, faire un nud simple sous le maxillaire infrieur, puis
ramener les deux brins sur le museau et les attacher solidement.
On peut aussi passer une barre de fer en arrire des canines et faire
une bonne ligature derrire la barre.
Pour Vaneslhsie., donner du chloroforme par petites doses et
sans que le liquide touche la muqueuse nasale. Se servir d'un
cornet de carton, au fond duquel on met un tampon de coton.
Chat.
C'est le plus difficile manier de tous les animaux.
Pour la contention, l'enrouler dans une pice de toile (p. 476). Pour
l'anesthsie, le projeter dans un grand bocal avec un tampon
PRHENSION, CONTENTION, ANESTHSIE
457
imbib de chloroforme. Ds qu'il tombe, le retirer, car cet animal

est trs sensible au chloroforme. Ne pas donner de petites doses.
Voir
Le
Oiseaux.
p.
586,
fig.
199.
saisir par les oreilles. Prendre d'une main les

Lapin.
quatre membres, de l'antre la tte. Ou peut encore Tattacher sur
une planche comme dans la fig. 200, au moyeu de ficelles ou de
lacets de cuir. Pour Tanestlisie, donner d'emble une forte dose,
au moyen d'un cornet, et suspendre ds que l'animal tombe en

Ne pas donner de petites doses qui le
rsolution.
tueraient coup sr.
Cobaye.
Le
saisir
par
la
liais blancs et Souris blanches.
On
'ocuia-
la
p."''
tion par inges-
Pour les mamtenu', les prendre la

une louffue pince cran darrt (lig. 239). Accrocher un anneau de la pmce un clou ou bien,
d'une seule main, tenir la pince
par les anneaux
*
"^
Cet appa^^^^'^
^
construire
en
maintient
bois,
ouverte la bouchedel animal.
parioritice.on
tion.
11-
11-
'^'^'^-
et saisir la base
de
la
Souris grises
trs
dangereux
Rats
une
introduit
Le Hat
,j
et
queue, de manire main-
tenir l'animal en extension.

,
Mors
Fig. 183.
peut
queue.
^
nuque avec
gnralement les saisir la main par

"
.
peau du dos. Trs
facile maintenir.
gris.
manipuler;
il
sonde en caoutchouc jusque

dans lestomac.
T^
gris est
faut avoir deux
longues et fortes pinces. Saisir d'abord au hasard,

si
possible travers le grillage de la cage, puis appliquer une
autre pince sur la nuque. Desserrer la premire pince, extraire
l'animal de la cage et le maintenir en extension
blancs.
Au
comme
les
pince qu'on fait tenir par un aide.

Anesthsie
le chloroforme tue trs facilement les Rats.
:
prfrable d'employer l'ther.

l'animal ds qu'il tombe.
'
Singes.
fig.
200
la
Rats
besoin, pour plus de sret, appliquer une seconde
Voir
p.
manire de
622
la
On
opre dans un bocal
et
on
Il
est
relire
manire de s'en rendre matre, et

Les Singes de petite taille sont
les attacher.
assez faciles manipuler avec
un peu d'habitude. La
difficult est
pourtant plus grande avec les espces queue prenanle et surtout

avec certains Lmuriens, qui sont d'une souplesse extraordinaire
et finissent
toujours par se retourner pour mordre.
Marmottes.
Le seul moyen de
faire mordre est de les prendre et de
saisir les
Marmottes sans se
les porter
peut ainsi faire seul une prise de sang
la
par
la
queue.
On
queue. Aucun appa-
MTHODES GNRALES
458
reil
de conteiiUoii ne convient
la
Marmotte, cause de
la
forme
de son crne; pour Fimmobiliser, il faut la saisir brnsqiiement

par la nuque avec une main en la maintenant par la queue de
l'autre main.
Ce produit est excellent })onr obtenir une anesChloralose.

Ihsie i)rolonge. On l'emploie en injection sous-cutane dans
Feau tide, la dose de 10 cenligr. par kilogr. d'animal. La rsolution est parfaite et dure longtemps.
CHAPITRE XXVII
RSUM DES MTHODES GNRALES

J'ai
expos, avec tous les dtails essentiels, les mthodes gnrales
de prparation des objets microscopiques; mais il peut arriver que

le dbutant se sente perdu au milieu de ces descriptions forcment
un peu longues. Aussi j'ai pens qu'il serait bon, pour fixer les
de rsumer sommairement la succession des oprations
qu'on doit faire subir un organe, ou un objet monter.
Premier exemple.
Faire des coupes dans un organe.
ides,
L Fixation.
Instruments un rasoir, une plaque de lige; bocaux ou tubes fond plat.
Ractif
Picroformol de Bouin (p. 284).
:
1"
2"
Extraire l'orgâno (voir aulopsies, p. .j45).

Diviser rapidement l'organe en gros fragments, sur la plaque de
lige, avec le rasoir (p. 291).

3" Immerger dans le liquide
4 Retirer les fragments au
de Bouin (p. 291).

bout d'une heure ou deux
les dbiter
avec le rasoir en fragments de 3 ou 4 mm. d'paisseur (p. 291).
5 Achever la fixation dans le licjuide de Bouin pendant 3 jours au
moins, 8 jours au plus.
IL Lavage dans
90 renouvel
l'alcool
trois fois
(p.
Dshydratation dans l'alcool absolu renouvel

en 24 heures (p. 300).
III.
IV.
Imprgnation dans
le
tolune renouvel trois fois
294).
trois fois
(p.
305).
Y. Bain de paraffine o0-55 (p. 306).

YI. Inclusion dfinitive (p. 309) dans la paraffine propre, dans
une capsule d'tain, un moule de papier ou les barres de Leuckart.
YII. Refroidissement sous l'eau (p. 311).
1.
Les temps que doivent durer

volumes des pices.
nels aux
les
passages dans
les liquides sont proportion-
METHODES GENERALES
460
bloc de paraffine, de manire ce que ses

faces soient parallles deux deux (p. 333).
IX. Fixer le bloc de paraffine au porle-objet du microlome
Dresser
YII.
(p.
le
333).
X. Couper en rubans (p. 335).

XI. Coller les coupes Valbumine
(p.
345).
Instruments un scalpel, deux aiguilles dissocier, une pipette compte-goutles,

lames conserves dans l'alcool.
albumine de Maycr, eau distille.
Ractifs
:
Dtacher du ruban une ou deux coupes avec un scalpel et les

dposer sur une lame bien propre le cl brillant des coupes doit tre
en dessous.
2. Avec une pipette, introduire sous les coupes l'eau albumineuse (p. 346),
de faon les faire flotter.
,3.
Chauffer la lame avec prcaution, de prfrence sur la platine
chauffante. Les coupes s'talent d'elles-mmes sous Tinlluence de la
chaleur. La paraffine ne doit pas fondre, sinon les coupes sont perdues.
Quand les coupes sont fortement plisses, il faut, avant
Remarque.
de chauier, et aprs les avoir fait (lotler sur l'eau albumineuse, les
dplisser une une avec les aiguilles.
4. Aprs talement parfait, goutter l'excs de liquide.
5. Orienter la coupe au milieu d(^ la lame avec les aiguilles.
6. Placer les lames sur un gouttoir phologra})hique. Scher aw moins
deux heures Ttuve 37'\
1.
XII. Dparaffner les coupes (p. 347).

Instruments
1
et 2, alcool
l,
un porte-tube avec cinq tubes Borrel ou Jully numrots, tolune

2 et 3 une cuvette en verre ou en porcelaine rainures horizon;
tales, pleine d'eau.
Chaulfer lgrement les lames bien sches, pour faire fondre la

et coaguler l'albumine. Ne pas trop chauier, sous peine
d'altrer irrmdiablement les coupes.
2. Dissoudre la paraffine par un sjour de trente secondes dans chaque
tube de tolune.
3. Enlever le tolune en passant successivement dans les trois tubes
1.
paraffine
d'alcool 90.
4.
Plonger dans
la cuvette rainures.
Les coupes sont prles subir une coloration quelconque. Si on

ne peut les colorer de suile, il faut les consei^ver dans l'alcool,
mais ne pas les laisser scher., sinon elles seraient irrmdiable-
ment
])erdues.
Xllf. Colorer rbmatine-osine (p. 418).

un porte-tube avec six tubes Borrel ou Jolly.
Instruments
Ractifs
Ilcmalun acide de Mayer, alcool chlorliydrique (V. gouttes p.
osine de Hiichst 1 p. 100, alcool 70, alcool 90, xylol pur.
:
100),
RSUML: des METHODES GNRALES

1.
Colorer cinq vingt minutes (ou plus) dans l'hmalun.
2.
Rincer Teau.
Diffrencier quelques secondes

4. Laver fond l'eau.
3.
5.
6.
7.
8.
9.
dans
l'alcool
461
chlorhydrique.
Virer au bleu noir par un sjour de cinq dix minutes dans l'eau.
Colorer une minute dans l'osine.
Laver l'eau.
Diffrencier dans l'alcool 70.
Passer dans l'alcool 90.
XV. Dshydrate?'
(p.
419).
Retirer la lame de l'alcool 90 et verser trois reprises de l'alcool

absolu
1. La premire fois, pour chasser l'alcool 90. Essuyer avec soin le
dessous de la lame.
balancer la lame pour
2 et 3. Les deux autres fois pour dshydrater
activer l'action de l'alcool. viter de dshydrater au voisinage de l'eau;
viter de respirer sur les coupes.
:
XV. Monterait baume

Essuyer rapidement
1.
(p.
420
et
438).
dessous de
le
2.
3.
Prparer une lamelle.

Retirer la lame du xylol
lame, ds que le drrnicr

le tube de xylol propre.
la
alcool absolu a agi, Gise hter de la plonger
dans
essuyer en dessous et autour des coupes.
Dposer une goutte de baume sur les coupes.

5. Dposer une gouttelette de baume au centre de la lamelle.
6. Retourner la lamelle, la tenir obliquement avec une pince et
appliquer les deux gouttes de baume l'une contre l'autre, en posant
4.
le bord gauche de la lamelle sur

cement le bord droit soutenu par la pince.
7. Appuyer trs lgrement pour chasser
baume.
d'abord
la
lame, puis abaissant dou-
les bulles d'air et l'excs
de
Essuyer le pourtour de la lamelle avec des bandelettes de buvard.

Scher plat l'tuve.
8.
9.
Deuxime exemple.
isol
Mouler dans
le
laclophnol un objet
ou dissoci.
Prparer une lame el une lamelle.

Dposer au centre de la lame une goulle de laclophnol.
3. Transporter et orienter Tobjet sur la lame avec une aiguille
1.
2.
lancole.
4.
Dposer sur la lamelle une goutte de laclopbnol (p. 444).

tomber la lamelle sur la lame, de maniiê ce que
5. Laisser
les
deux gouttes entrent en contact
de
la
prparation.
el
que
l'objet s'tale
au centre
MTHODES GNRALES
462
6.
Appuyer
trs
calcul, le liquide
lgrement. Si
ne dpasse pas
le
les
volume des gouttes

bords de
la
a t bien
lamelle et on peut
lu ter de suite.
7. Si le liquide dpasse les bords de la lamelle, aspirer Fexcs
avec des bandelettes de papier buvard
nettoyer avec le doigt
entour d'un chiffon imbib d'alcool, jusqu' ce qu'il n'y ait plus
aucune (race dehc[o[^hno\. viter de dranger la lamelle.
:
8. Avec le fer luter, appliquer aux quatre coins de la lamelle

une goutte de lut de Krnig fondu (p. 448).
9. Achever le nettoyage l'acool si c'est ncessaire.
10. Achever de border la lamelle sur les quatre cts.
la lamelle plat; si on
a. Il faut laisser tomber
Remarques.
vers
l'applique de gauche droite, comme plus haut, l'objet est chass
la droite, surtout s'il y a trop de liquide,
b. S'il y a des bulles d'air (n 6), soulever lgrement la lamelle avec
une aiguille et la laisser retomber doucement; caler de l'autre ct
avec une aiguille pour empcher la lamelle de glisser. On arrive ainsi
liminer les bulles.
CHAPITRE XXVIII
PRINCIPAUX INSUCCES
DES PRPARATIONS. - CAUSES
ET REMDES
Nous avons
survenir lors
rlj signal les accidents qui peuvent
confection des coupes (p. 337) et du collage sur les lames
(p. 344). Il nous reste tudier les insuccs ou les altrations qu'on
constate dans les prparations termines.
de
la
1. Les dchijnires et les

plis dans les coupes proviennent d'un
mauvais lalement (p. 343). Pas de remde.
2. Les diffrences d'paisseur dans les coupes proviennent de
vibrations
du
rasoir ou d'une
mauvaise inclusion
(p.
338). Pas de
remde.
3.
La prsence de prcipits \Aws ou m'oins colors peut recondeux causes

ou bien un mauvais lavage aprs fixation,
natre
s'est servi de sublim, ou bien un prcipit

de matire colorante. Ce dernier cas se produit surtout avec les
notamment lorsqu'on
couleurs d'aniline et dans la mthode de Romanovsky; on peut

enlever ces prcipits avec des liquides diffrenciateurs appropris.
4. La prparation est
opaque^ sur fond noir elle a une teinte
laiteuse.
La cause de ce dfaut
est une dshydratation insuffisante

conserv une certaine quantit d'eau, qui a prcipit
sous forme de gouttelettes rsineuses microscopiques. Ce
:
les tissus ont

le
baume
sont ces gouttelettes qui produisent l'opalescence et Topacit. Pour

rendre la prparation sa transparence, il faut arroser la prparation de tolune,
le
enlever dlicatement
baume au moyen du
repasser par
5.
le
la
lamelle, bien dissoudre
tolune, reprendre par l'alcool absolu, puis
tolune et
le
baume.
Les tissus ont un aspect contract
les cellules sont
comme
MTHODES GNRALES
464
coupe a une apparence fibreuse. Cet insuccs est

presque toujours d la cuisson des tissus. L'accident a pu se
produire au cours de l'inclusion, lorsque la paraffine est trop
vides, toute
la
soit en tachauffe. Souvent aussi on a trop chauff les coupes

lant sur Teau albumineuse, soit en coagulant Talbumine avant de
:
dparaffiner,
en
soit
colorant chaud sur la
flamme. Pas de
remde.
Une
autre
cause est
la
dessiccation des
avons parl en plusieurs endroits

recommand de ne jamais laisser
coupes. Nous en
nous avons
(p.
420
les
coupes se desscher entre
et 460), et
deux oprations. Il n'y a pas de remde.

soit parce que le colorant n'a pu
6. Coloration insuffisante
soit
certains
fixateurs,
parce que la diffrenciation a t
agir aprs
pousse trop loin, soit parce que la coupe s'est dcolore (voir
plus loin). On peut essayer de dmonter la prparation dissoudre
:
le
baume
par
le
tolune, revenir l'eau en passant par les alcools
et recolorer.
7. Coloration trop intense
par sjour trop prolong dans le
bain colorant; par diffrenciation insuffisante; par suite d'une trop
grande paisseur des coupes. Dmonter la prparation et revenir
:
au diffrenciateur, en remontant la srie des

8. Causes de dcoloration des coupes.
ractifs.
Nous pouvons
les
Ces causes ont t
dans un rcent travail de Martin Heidenhain^
trs bien tudies
ranger dans
les catgories suivantes
Les colorants vg:taux sont dcoRaction des tissus colors.

que certaines couleurs d'aniline plissent en
monter autant que possible en milieu neutre
(baume neutre) ou modifier la raction du milieu suivant la nature du
colorant. Voir hmatine (p. 375), chromotropes (p. 400), rubine acide
a.
lors en milieu acide, tandis

milieu alcalin. II faut donc
(p. 398).
L'acidit du milieu peut provenir du fixateur, du colorant ou des

liquides difrenciateurs. Enfin la dcoloration peut provenir de l'oxydation de composs chromiques.
b. Action de l'iode.
L'iode est trs employ en histologie, soit pour
sublim, soit comme mordant. Ce corps se combine probablement aux substances albuminodes des tissus et fait plir ensuite les
colorations. Le meilleur remde consiste liminer l'iode par l'hyposulfite de sodium (p. 414). Heidenhain conseille l'emploi d'une solution
2,5 p. 100, qu'on tend de 9 parties d'eau, au moment de l'emploi.
c. Action du baume du Canada.
Toutes les rsines sont acides,
liminer
le
1.
M. Heidenhain, Ueber die Haltbarkeit mikroskopischer Praparate, insbesonderc ber die Nachbehandlung jodierter Gewebe mit Natriumthiosulfat.
Ztschr.
f.
wiss. Mikr.,
XXV,
p. 397-400, 1908.
PRINCIPAUX INSUCCS DES PREPARATIONS
46o
avides d'oxygne et dissolvent certains rolorants. Pour viter la dcoloration, il faut

employer le baume neutre de Griibler; mettre aussi
peu de baume que possible, de manire rduire l'paisseur de la prparation se servir de grandes lamelles.
En effet, au contact de l'air, le baume neutre devient assez rapidement acide; de l, les dcolorations purlielles, qu'on observe dans les
coupes dont les bords atteignent ceux de la lamelle. Il faut que le bord
des coupes soit toujours 2 mm. au moins du bord de la lamelle.
Certains colorants (thionine, bleu polychrome, bleu de toluidine) se
dcolorent toujours dans le baume, parce qu'ils sont avides d'oxygne et
ne peuvent supporter les milieux rducteurs. Dans ce cas, il faut monter
dans l'huile de cdre ou dans la paraffine liquide.
Pour ces colorations et pour les prparations colores au lomanovsky,
la dcoloration a toujours lieu du centre la priphrie et non de la
priphrie au centre, comme pour les coupes colores l'hmatine en
elfet, elle est due surtout l'action rductrice du baume et non son
oxydation. Les parties marginales, en contact avec l'air, plissent moins
vite que le centre, qui est exclusivement soumis aux actions rductrices.
C'est pourquoi il est prfrable de conserver sec, sans lamelle, les
:
frottis
9.
qui supportent
la dessiccation.
Bulles d\dr.
Nous savons que
raissent rapidement par
l'oxydation
les
petites bulles dispa-
du baume
enlever les grosses bulles, soulever
la
(p.
Ml). Pour
lamelle sur un ct, en
l'appuyant du ct oppos pour Tempcber de glisser (p. 441).

Lorsqu'il est rentr de l'air dans une prparation ancienne, on
peut ajouter du
baume
la
dans
pri)aration
enlever ou soulever
10.
de
la
la
la
lamelle ou plonger toute
pour ramollir
tolune,
lamelle pour chasser
baume, puis
le
l'air.
et lame salies,
Des dpts de colorants, de
d'huile de cdre, etc., salissent quelquefois les deux faces
Lamelle
baume,
gnent beaucoup l'observation. On les enlve

appropri, en prenant bien soin de ne pas
lamelle. Au besoin, fixer celle-ci par deux ou quatre
prparation
un
avec
sur les cts de
le
dranger
et
dissolvant
la
coins avec
le lut
de Krihiig
(p.
447).
On voit souvent
Nuages de gouttelettes rsineuses.
en boites, un
conserves
sur
les
apparatre,
prparations longtemps
11.
nuage de
fines gouttelettes
recouvrant
la
lame
et la
lamelle.
Il
faut
enlever ce nuage avec un chiffon imbib de tolune, avant d'examiner la prparation. Ces gouttelettes apparaissent aussi dans les
prparations montes sec. dans
prparation
et la nettoyer.
12. Objets contractes K

1.
l'air; alors
il
Certains animaux
faut
dmonter
la
et certains tissus
Ne pas oublier que la <lc'=siccatiou des objets peut amoner leur contraction
Nous rptons pour eux ce que nous avons dit pour les coupes jamais
dlinitive.
M, Langeron,
30
MTHODES GNRALES
466
ne peuvent tre monts au baume qu'avec de grandes prcautions

au moyen de passages trs mnags de l'alcool au xylol et au
baume. 11 y a mme des animaux, tels que les Nmatodes, qu'il
est impossible de monter au baume. Les objets contracts dans le
et
baume
sont gnralement perdus
pour essayer de
traiter
(p.
l'objet
par
le
seul
moyen dont on
sauver est de dmonter
les
le
57o) aprs quoi
chloralphnol
ou
le
la
dispose
prparation et de
cbloralchlorophnol
on repasse de nouveau graduellement au
baume.
un objet ne doit scher entre deux oprations, il faut toujours
dans un liquide. 11 n'y a d'exception que pour les frottis desschs
le
maintenir
(p. 625).
TROISIEME PARTIE
MTHODES SPCIALES
Dans
cet ouvrage, qui est surtout destin
aux mdecins
et
aux
applications mdicales de la microscopie, nous nous bornerons

indiquer les procds d'tude applicables aux animaux parasites ou
vulnrants.
Nous exposerons
les
mthodes de recherche concer-
plupart des Protozoaires, des Vers et des Arthropodes,

ainsi que la faune des eaux douces. 11 sera facile de transposer ces
nant
la
mthodes, pour Ttude dautres types d'intrt purement zoologique. Les seuls animaux dont nous ne parlerons pas en dtail
sont ceux qui appartiennent la faune marine (Spongiaires,
il est bien rare
Clentrs, Echinodermes)
que le mdecin ait
s'en occuper et il trouvera dans les ouvrages spciaux les indications qui lui seront ncessaires.
:
J'ajouterai que la faune parasitaire ou vulnrante, et surtout la

faune des eaux douces, fournissent au dbutant un matriel abondant, trs vari et trs facile se procurer. Il y trouvera des ani-
maux de
fait
tous les groupes, dont l'tude prsente
pratique
et lui
un
permettra de se familiariser avec
intrt tout
les
techniques
les plus dlicates.
Des notions sommaires de technique botanique, mycologique

me paraissent indispensables pour complter
l'expos de toutes les mthodes fondamentales de recherches et de
et bactriologique
diagnostic microscopique.
PREMIERE SECTION
PJ{OTOZOAJJiES
Pexamen
Tlat frais joue un

d'organismes si dlicats, les
meilleures donnes morphologiques sont obtenues par Texamen
direct de l'animal vivant. Les mthodes de fixation et de colora-
Dans
rle
lion
Ttiide des Protozoaires,
Quand
cousidrable.
il
s'agit
ne conviennent que pour trouver plus facilement les microoret pour rvler certains dtails de la strncture cylolo-
ganismes
gique, peu visibles
L'examen
l'lat frais.
une grande imi)ortanceau

mlhode pour le
vue
en
effet
la
meilleure
de
c'est
mdical;
point
Protozoaires.
Ce
des
maladies
genre d'examen ne
diagnoslic
l'tat frais prsente aussi
ncessite ni ractifs compliqus, ni perle de temps pourvu qu'on

possde un bon microscope, il peul tre pratiqu extemporan:
ment,
mme
au
coloration des
lit
du malade.
Il
matriaux recueillis
sera complt ensuite par la

lors de ce premier examen.
Mais, pour simple que soit cette mthode, elle exige une parfaite
ducation de l'il
et
une connaissance complte du maniement
du microscope.
Nous avons vu, en tudiant
la
formation des images microsco-
piques (p. 146), que ces images sont de deux sortes. Celles que
fournissent les prparations colores sont dues des phnomnes
d'absorplion et se forment selon les lois de l'optique gomtrique;
ces images sont faciles observer et ne peuvent donner lieu
aucune erreur, lorsque la coloration est correcte. Au contraire,
les
images des corps non colors rsultent de phnomnes de
rflexion, de rfraction et de diffraction; leur production est soumise des lois beaucoup plus compliques. Les dtails ne sont
plus mis en vidence par des diffrences de coloration, mais par
PROTOZOAIRES
469
au lieu de percevoir des parties

des diffrences de rfringence
colores, on ne voit que des lignes ou des stries et des parties plus
:
ou moins lumineuses. L'interprtation en est d'autant plus dlicate que, dans certaines conditions, on peut voir apparatre des
Nous avons dmontr la production de ces stries,

en faisant une srie d'expriences avec la lame de diffraction d'Abbe
(p. 69); nous avons indiqu en outre (p. 157) comment on peut
reconnatre la vritable nature de ces stries, soit en diaphragmant
stries fictives.
cne d'clairage,
le
soit
du condensateur. Les
intensit et le
mme
en intercalant un verre jaune au-dessous

conservent toujours la mme
stries relles
cartement. Enlin nous avons montr (p. 73)
de quelle ressource pouvait tre l'clairage oblique, pour augmenter

la rsolution. La premire condition, pour l'examen l'tat frais
des Protozoaires, est donc d'employer d'excellents objectifs et de
connatre toutes les ressources que peut fournir l'appareil d'clairage.
Cet examen, lorsqu'il est correctement accompli, est le plus sr

contrle des rsultats obtenus par les mthodes de fixation et de coloration, lorsque quelque doute s'lve dans l'esprit
moyen de
En effet, il est quelquefois difficile de distinguer

de prparation, surtout les prcipits colorables ds
certains fixateurs, des vritables dtails de structure. Si l'objet
de l'observateur.
les artifices
dont
la
nature est douteuse se trouve
la fois
colores et dans les prparations fraches,

trouve supprime.
dans
toute
les
prparations
incertitude se
L'clairage fond noir pourra rendre des services, notamment pour le diagnostic des maladies Trponmes. Par suite
de phnomnes de diffraction, ces organismes paraissent plus volumineux qu'ils ne sont rellement, ce qui, combin avec l'aspect
prennent sur le fond peu prs obscur du champ

optique, permet de les trouver facilement. Mais, comme nous
brillant qu'ils
l'avons dit plus haut, ce procd n'est avantageux, pour l'tude

morphologi(]ue fine, qu'entre des mains trs exerces.
Pour tout ce qui concerne l'examen Vtal frais, on se reportera au

chapitre dans lequel nous traitons de cette mthode gnrale (p. 239). Il
en sera de mme pour les colorations vitales (p. 248). Voici pourtant
quelques remarques concernant
les Protozoaires.
Le
blca de crcsyl brillant (Hrillankresylhlau), 1 p. 1000, recommand

par Ehrlich, Ascoli et Levaditi i, colore mtachromatiquement certaines
t.
Journ. de
pltijsiol. et
de pathol. gnr., n
3. 1901.
470
MTHODES SPCIALES
granulations. Chez quelques Protozoaires (Trypanosomes),

se colore intensment au moment de la mort.
Le rouge
iieulre
n'est
pas un produit compltement
le
karyosome
inditrent.
Il
toxique partir de certaines concentrations, qui varient avec les

espces. Chez un certain nombre de Protozoaires, le noyau se colore trs
bien et on peut suivre tout le processus de la division i. C'est le cas de
la plupart des Infusoires parasites. Chez les Flagells, ce ractif colore
surtout des granulations protoplasmiques ou le karyosome, mais rarement le novau.
est
Les azurs I et II peuvent fournir, pour les Spirochtes, de bonnes

colorations vitales, encore plus intenses que celles que donne le bleu
de mthylne.
1.
rsotamincut chez Opalina ranarum et Nyctotherus cordiformis, d'aprs Przes-
mycki.
CHAPITRE PREMIER
AMIBES
I.
1.
facile
RCOLTE DES AMIBES
Amibes non pathognes.
II est
Amibes aquatiques.
de se procurer des Amibes vulgaires, au printemps ou en t.
Voici ce qu'il faut examiner

dans les marcs, les touies d'Oscillaires
(Algues d'un bleu verdlre fonc, qui vivent au fond de l'eau ou flottent
en touffes sa surface); la couche glatineuse qui se trouve sous les
feuilles de Nnuphars; la boue mlange de dtritus vgtaux qui se
trouve au fond des fosss. D'autre part, la mousse qui recouvre les
rochers humides, les Sphaignes qui vivent dans certains marcages,
sont trs riches en Rhizopodes et particulirement en Amibes. Il suffit
de les exprimer comme des ponges et do recueillir l'eau qui en
dcoule. On conserve celte eau dans de grands crislallisoirs quon place
dans un endroit chaud les Amibes viennent la surface et on peut les
sparer du reste du liquide. Schaudinn et Eyferth conseillent de jeter
des lamelles dans l'eau renfermant les Amibes; celles-ci doivent s'y
fixer et on retire au bout de quelques heures les lamelles couvertes
d'Amibes.
Amibes de la paille.
Von Wasielewski et Hirschfeld puis Wlker 2
ont tudi rcemment un grand nombre d'Amibes. Un des procds
:
'
employs par eux pour s'en procurer consiste mettre, dans un grand
vase cylindrique en verre, 20 g. de paille hache et arroser avec un
litre d'eau ordinaire bouillie. Ds qu'il se produit un voile la surface,
on en prlve une portion pour l'examiner et au besoin pour Tensemencer sur glose spciale. On traite de mme la terre, le tan, etc.
Amibes
parasites.
en examinant
On
le tartre et la
peut encore se procurer des Amibes

l'Homme, ou le
carie dentaires chez
contenu rectal de divers animaux sang
froid,
notamment de
X'on "Wasielewski und Hirschfeld, Untersuchungen iber Kulturamoben. Abh.

Heidelberier Akad. d. ^yiss.. I, 1910.
Wlker, Die Technik dcr Amubenziichtung. CentraWl. f. Bakt., Rf., L,
p. 577-610, lll. Travail trs complet, bas sur le procd de Mouton (voir p. 477).
1.
d.
2.
MKTHODES
472
SPliCIALES
Batraciens ou de Sangsues. Il n'est pas ncessaire pour cela de

sacrifier ranimai. 11 suffit d'introduire dans le rectum une effilure
de pipette, dont l'ouverture ne

bords soient bien mousss.
Dans
trouve
la
soil
pas trop troite et dont les
suprieure du gros intestin de la Souris' on

mris qui donne des kystes 8 noyaux (incul-
partie
Amba
Chez
les Blattes [Periplanela orientalis) qu'on vient de

on
trouve
aussi une Amibe trs intressante (couper la tte
capturer,
et les derniers anneaux abdominaux pour extraire le tube digestif).
tivable).
Tous ces procds sont excellents pendant la belle saison, mais,

en hiver, il peut tre peu prs impossible de se })rocurer des
Amibes. Le procd de la paille est peut-tre celui qui, cette
poque, donnera les moins mauvais rsultats.
4.
Amibes pathognes.
La recherche
des Amibes dans les
ne prsente gnralement pas de difficults. Lorsque le

malade est atteint de dysenterie bien typique, il suffit de prlever,
selles
avec
le
fil
de platine, un petit fragment de mucosit sanguinolente

et lamelle, sans diluer avec aucun
de l'examiner entre lame
et
liquide additionnel, car la solution physiologique elle-mme peut

tre fatale aux Amibes. On reconnat ces organismes leurs
mouvements,
leurs
vacuoles
sont quelquefois bourrs.

Pour avoir de bons rsultats,
vivantes pendant toute
il
aux globules rouges dont

faut conserver les
ils
Amibes bien
dure de l'examen. Dans ce but, on

malade au moment de l'examen microscola
doit faire dfquer le

pique et recueillir les matires,
vase
et
ou bassin pralablement
non mlanges (Turine^ dans un

chauff.
Il
n'est
pas
ncessaire
d'employer la platine chauffante, mais il faut pratiquer l'examen

de suite et l'abri du froid. On peut donc difficilement faire un
diagnostic avec des matires mises depuis quelque temps et
surtout expdies par
la
poste. Si on constate la prsence de cor-
puscules mobiles, il faut

1 S'assurer que ce sont bien des Amibes
:
-;
Examiner si ce sont a des Amibes dysentriques;

b des Amibes inoffensives du groupe coli\
c des Amibes
saprophytes du groupe Umax.
1.
Voir
2.
Pour tout ce qui concerne
Wenyon, Arch.
Protisienkunde, Suppl. I, p. 169-'?01, 1907.

les caractres morphologiques des organismes
pathognes, se reporter l'excellent /"rf'cs de parasitologie du 13'" Emile Brunipt,
Paris, Masson, collection des Prcis mdicaux, 1910.
f.
473
AMIBF.S
Un bon caraclre des Amibes palbognes esl la prsence d'un

endoplasme bien dislincL de l'ectoplasme, 1res vacuolaire el renfermant de nombreuses bmaties. Mais il ne faut pas confondre
les
Amibes avec des macropbages ou des Infusoires.
Voici quelques renseignements qui pourDiagnostic diffrentiel.

le diagnostic de la dysenterie amibienne, par l'examen des
ront faciliter
selles.
la dysenterie amibienne on trouve

Des Amibes du type pathogne;
Des hmaties nombreuses:
Des leucocytes en nombre variable;
Dans
1.
2.
3.
il
a toujours des osino-
philes.
4.
5.
Des cellules pithliales desquames;

D'innombrables Bactries.
Dans
i. II
2.
3.
la dysenterie bactrienne
n'y a pas d'Amibes ou seulement des
:
Amibes du type
coli;
Nombreuses hmaties;
Leucocytes excessivement nombreux, mais peu ou pas d'osino-
philes:
4. Cellules pithlia'cs
desquames
et
mme lambeaux
de muqueuse
ncrose;
5.
Un nombre
Dans
variable de Bactries.
prsence des Balantidiuin impose le

Ne pas confondre avec les Infusoires qu'on rencontre quelquefois, dans les cas anciens de dysenterie amibienne.
la dysenterie balantidicnne, la
diag-nostic.
II.
FIXATION ET COLORATION
Les meilleures prparations d'Amibes sont celles qu'on obtient

frottis bnmides et en les colorant ensuite par Tbma-
en fixant des
toxvline ferrique ou le
Fixation.
On
Romanovsky.
tend donc en coucbe trs mince sur une
lame, au moyen d'une lamelle, d'une aiguille ou d'une effilure

de pipette, le produit ricbe en Amibes. Cet talement exige un
tour de main un peu diffrent de celui que nous dcrivons pour
le
sang
appuyer trs peu la lamelle, ou plutt la

appuyer par son seul poids et procder par
saccades ou mme piar hachures (p. 646). On arrive ainsi
(p.
628).
faut
Il
traner en la laissant
petites
taler des mucosits trs visqueuses, sans craser les Amiltes et

les leucocytes.
Avant que
dans
se hte de le plonger
Je
et
recommande
de Bouin
(p.
le frottis n'ait
le
eu
le
temps de scher on
fixateur.
surtout les liquides de Duboscq-Brasil (p. 285)
284), qui donnent des rsultats excellents et ne
MTHODES SPCIALES
47 4
ncessitent que des manipulations trs simples. Le sublim alcoolique de Scliaudinn, trs vant par Tcole allemande, ne donne
pas de meilleures fixations et exige
von Wasielewski
un lavage
trs soign Talcool
minutes par
le sublim
chaud (-1-70), puis vingt-cinq minutes froid; il lave ensuite
une heure Talcool iod et conserve dans Talcool 70. Au contraire, avec les mlanges picriques, si on ne veut pas colorer de
suite le matriel fix, il suffit de laver les frottis une ou deux
reprises Talcool 70 et de les conserver dans ce mme liquide,
iod. Ainsi,
fixe cinq
sans se proccuper de la lgre coloration jaune qu'il peut conOn peut mettre ainsi en rserve de grandes quantits de
server.
lames charges d'Amibes. L'essentiel est que le matriel soit toujours dans un liquide et ne sche jamais autrement les Amibes
seraient dformes et deviendraient mconnaissables.
:
Coloration.
retenir
Pour
le
travail courant, trois
Thmatine-osine,
hain, le Ronianovsky.
1 Hmaline-osine et
mthodes sont
rhmatoxyline au
hmatoxyline au
fer.
fer
de Heiden-
Russissent
bien aprs tous les fixateurs. Procder comme il a t dit pour la

mthode gnrale de coloration (p. 377 et 418). Diffrencier avec
soin, car le protoplasme des Amibes se colore souvent d'une faon
trs intense. Les prparations au fer doivent tre dcolores
jusqu' ce que
le
protoplasma
soit
noyau montre nettement en noir
parfaitement clair
hmaties phagocytes restent colores en noir ou en
Russit
et
que
sa charpente de chromatine.
le
Les
bistre.
surtout aprs fixation au sublim

Romanovsky.
alcoolique; les frottis fixs par les liquides picriques doivent tre
plongs dans l'alcool 70 (p. 348). jusqu' disparition de toute
teinte jaune, puis lavs fond dans l'eau.
la
technique pour
les frottis
humides
p.
Employer de prfrence
413.
Von Wasielewslci fixe au sublim, comme il a t

Romanovsky dans de petites cuvettes o le
^
colore au
en dessous,
coloration,
est
il
dit plus haut, et

frottis,
mis face
en contact avec une
lave l'eau de
petite quantit de liquide. Aprs

source et examine sous lamelle, dans
une goutte d'eau. Si la coloration est bonne, on lave de nouveau pour

faire tomber la lamelle. On essore au buvard, sans scher, puis on
diffrencie dans deux bains d'actone (1" bain 1 seconde, 2" bain
5 secondes) et, sans scher, on monte Thuile de cdre. D'aprs von Wasielewski, cette mthode est la meilleure pour faire le diagnostic diffrentiel entre les Amibes et les autres lments
elles tranchent par
:
1.
Von Wasielewski, Ueber Anibennachweis. Mnch. med. Woch.,
n 3, 1911.
AMIBES
475
leur coloration bleu fonc sur les lissus ncross et les dbris.
Il
ne
la prsence d'un protoplasma vacuolaire,

car cette apparence peut rsulter d'une altration cadavrique. Le noyau
doit prsenter deux zones caractristiques, l'extrieure irrgulire, bleu
faut pas se fier
uniquement
violac, l'intrieure rouge clair.

Mouton a obtenu les rsultats suivants par coloration vitale : le rouge
de ruthnium (p. 723) colore vivement le karyosome en rouge et le
1
protoplasme en rose ple; le bleu de mthylne colore bien le caryosome; de mme pour le violet dahlia, mais celui-ci tue l'Amibe.
Fixation en masse et coupes.
On
peut laisser tomber
des gouttes de mucus ou de pus, riches en Amibes.

Ces gouttes ne doivent pas tre trop grosses, pour que le fixateur
pntre facilement. On inclut dans la paraffine, on coupe et on
dans
le fixateur
colore
comme prcdemment
-.
Le formol 5 p. 100 conserve admirablement les Amibes et leurs kystes

avec l'aspect qu'ils prsentent l'tat frais. Ce procd est particulirement indiqu pour le matriel destin l'enseignement on dilue les
matires ou le mucus avec leur volume de solution formole, puis on
dcante l'excs de liquide. Les prparations, montes telles quelles entre
lame et lamelle, se conservent bien lorsqu'elles sont lutes au lut de
:
Krnig
(p. 447).
Enfin, lorsqu'on a de grandes quantits d'Amibes, on peut les fixer

et les colorer par centrifugation (p. 312 et o39).
IIL
EXPRIMENTATION
L'tude des lsions se
fait
d'aprs les
mmes mthodes. Les
fragments de rectum sont prlevs au niveau des ulcrations,

piqus sur des lames de lige paraffin (p. 292) et fixs suivant les
mthodes habituelles. Le Duboscq-Brasil et le Bouin russissent

trs bien
on colore ensuite l'hinaline-osine. Si on veut
:
Giemsa (mthode des coupes,

au
sublim.
prfrence
colorer au
On peut
encore employer (de
de Mallory et Wright
1.
2.
mme
p.
que pour
il4), on fixera de
les frottis) la
mthode
Fixer les pices l'alcool:

Colorer 5 minutes par une solution a(iueuse sature de thionine;
L Ann.
Inst. Pasteur,
XVI,
p. 480, 1902.
2. Voir aussi la mthode de Hart {Journ. of trop, med., VI, p. 380, 1905), qui
colore directement les matires dans du glychmalun dilu, filtre sur gaze, vire
l'eau et monte la glycrine.
METHODES SPECIALES
476
3. Diirencier dans une solution d'acide oxalique

pendant 30 secondes. Surveiller attentivement;
4.
Laver l'eau
ou
p.
100
Alcools, xylol, huile de cdre.

Le noyau des Amibes se colore en rouge, les autres noyaux en violet,
les protoplasmes en diverses nuances de violet et de bleu. A notre avis,
o.
cette
mthode ne donne pas d'aussi beaux rcsullats que le Romanovsky

grand inconvnient de dbuter par une mauvaise fixation.
et a le
Le meilleur moyen d'lucider
la
nature palhogjie d'une Amibe
trouve dans les selles est de l'inoculer au jeune Chat. lien est
d'ailleurs de mme pour les Amibes des abcs du poumon, du foie
On commence par examiner les djections des

animaux en exprience, pour s'assurer ({u'ils ne sont pas dj
porteurs d'Amibes; puis on les laisse jener pendant un jour, de
ou du cerveau.
manire ce qu'ils puissent vider compltement leur rectum.

L'inoculation doit tre faite dans cet organe; l'ingestion par la
bouche ne
russit
d'Amibes.
11
que lorsque
les
matires renferment des kystes

chaudes et autant que
faut oprer avec des matires
possible au lit du malade.

Voici le procd employ par Brumpl, qui, avec des matires
virulentes, a toujours russi ses inoculations. On roule le Chat
dans un tablier ou une grande pice de toile; un aide s'assied, le

prend sur les genoux et maintient solidement la lte et le train"
important que l'animal ne puisse dgager sa
tte, car, pendant qu'il s'efforce de la glisser hors du linge, le
train postrieur est facile maintenir. Le rectum tant cens libre,
antrieur
il
est trs
une grosse sonde en caoutchouc enduite de

en insistant, on arrive facilement
glaireux ou de salive
la faire pntrer trs profondment. Tout le succs de cette
l'oprateur y engage
mucus
technique dpend de
la
profondeur laquelle pntre
la
sonde;
si
pousser jusqu'au cfpcum, le rsultat sera parfait. On

injecte alors, avec une grosse seringue, une dizaine de centimtres
cubes de mucosits riches en Amibes et encore chaudes. On
on peut
retire
la
doucement
quelque temps
la
la tte
sonde
et
on
maintient
en bas, puis on
le
l'animal
]endanl
remet en cage.
Comme ces Amibes sont trs pathognes, il faut prendre de

minutieuses prcautions, et dsinfecter soigneusement les djections des animaux, par exemple avec du sapocrsol. Les antiseptiques base de sels mtalliques ne peuvent convenir, cause
mtal des cages
et
des plateaux qui les supportent.
du
AMIBES
CULTURE
IV.
La culture des Amibes

qui ont pour
j)oint
477
a fait Tobjet
de dpart
les
de travaux considrables,
et de
recberches de Mouton
Mouton dlaie un peu de terre dans de Feau strilise et

Lesage
ensemence avec ce li([uide un milieu trs pauvre, fait avec de la
glose 2 p. 100, pralablement bien lave; on coule cette glose
en botes de Ptri ou autres. Pour repiquer les cultures premires,
on ensemence d'abord la Bactrie qui doit nourrir les Amibes (par
-.
exemple B. coli) en six ou huit stries, rayonnant autour d'un

cercle de 1 2 cent, de diamtre. Au bout d'un ou deux jours, on
ensemence les Amibes au centre du cercle. Elles se dveloppent
le long des stries, en laissant din^rire elles les Bactries
impurets. Les cultures se purifient ainsi pen peu.
et
les
On
n'a pu, jusqu'ici, cultiver les Amibes pathognes. Toutes

cultures qui oui t obtenues ne renferment que des Amibes
aucune de ces culsaprophytes du groupe de VAmha Umax
les
tures ne s'est montre pathogne. Quelles
que soient les Amibes,

non seulement leur donner un milieu
pathognes ou non, il faut

de culture appropri, mais encore les nourrir avec des Bactries.
Pour les Auiibes de la paille, von Wasielewski

du groupe du fluorescens.
conseille
un
Bacille
Von Wasielewski et Hirschfeld 3 modifient comme il suit le milieu

de Mouton
glose 10, bouillon de Buf 100, eau distille 900. Ils
obtiennent en trois jours une abondante culture, en partant d'un kyste
d'Amibe de la paille du groupe liinax.
Francbini et Uaspaolo cultivent les Amibes presque sans microbes,
sur g-lose au sang de Nicolle (p. 497).
:
'<
Elude microscopique des

il
faut environ
Ponr obtenir de
peut employer
Wasielewski
Hirschfeld.
1.
En
goutte pendante,
des Amibes.
la division
belles prparations en partant des

le
et
cultures.
30 minutes pour obtenir

procd
Mouton, Recherches sur
la
de
cultures, on
Deetjen, recommand
par von
digestion chez les Amibes. Ann. Inst. Pasteur.
p. 457-509, pi. VIII. 1902.

2. Lesage, Culture do l'Amibe do la dysenterie des pa\s chauds. A]in. Inst.
Pasteur. XIX. p. 9-16, 1905.
.3. Von
Wasielewski und Hirschfeld, Zur Technik der Amobonuntersuchung.
Puschkarew, Zur Technik des
Hiji/ienische Rundschau. XIX, p. 925 930, 1909.
Ambenstudiums. Zuchr.f. wiss. Milcr.. XXVIII, p.

4. Malaria e mal. dei pacsi caldi, II, p. 130, 1911.
145-150, 1911.
METHODES SPCIALES
478
On
recherche, dans les cultures en hotes de Ptri, les parties

Til nu, formant une frange dlicate de 2 3 mm. de
visihles
large et renfermant heaucoup d'Amibes en division. On dcoupe

ces portions de glose, de faon avoir des morceaux de 1 cm.
1 cm. 5 de diamtre, qu'on dpose dans de larges cellules rondes
colles sur lames (fig. 139). Ces cellules doivent tre trs grandes,
car
sur
Au
il
une lamelle qui doit reposer

surface de la glose, sans toucher les bords de la cellule.
faut qu'elles puissent admettre
la
bout d'une demi-heure aune heure de contact, presque toutes

Amibes se sont colles la lamelle. On introduit alors, avec
les
prcaution, le liquide fixateur dans la cellule, de manire ce

qu'il ne touche pas la lamelle et mouille seulement la base du
bloc de glose. Il pntre alors peu peu par diffusion et finit par
atteindre la couche d'Amibes; celles-ci sont beaucoup mieux fixes
que par action directe.

Von Wasielewski et Hirschfeld n'emploient que le sublim
alcoolique et l'acide osmique 2 p. 100 le premier fixe mieux les
noyaux, le second diffrencie mieux l'endoplasme et l'ectoplasme
:
et
conserve
pseudopodes. Je crois qu'on pourrait
les
avec avantage
Bouin
utiliser aussi
Duboscq-Brasil. Quoi qu'il en soit,

sublim pendant une heure au plus; on arrte son
le
et
le
on laisse agir le
action ds qu'au microscope les noyaux sont devenus bien apparents. On lave deux heures l'alcool iod, on rince l'alcool et
seulement alors qu'on peut dtacher la lamelle de la glose.
moment, on peut laver la prparation sous un filet d'eau,
c'est
ce
les Bactries et laisse les Amibes plus adhrentes.

colore par l'hmatoxyline ferrique de Heidenhain.
qui entrane
On
Vacide osmique ne doit agir que pendant cinq minutes

environ. Le bloc de glose et la lamelle sont ensuite ports dans
l'alcool 50 pendant une heure. On dtache la lamelle, on lave
l'eau
et
on colore. Aprs ce mode de llxation,

on surcolore par le Giemsa
russit trs bien
le
et
Bomanovsky
on diffrencie
dans de l'eau lgrement acidule. Il faut viter de scher les

et, dans ce but, employer le procd pour frottis
humides.
prparations
le
Brumpt emploie
mlanger sur
de
tit
mucus
la
nasal.
de salive
lame
On
suffit
le
fait
'procd de la salive^ qui consiste

matriel fixer avec un peu de salive ou
ensuite un frottis humide; la petite quan-
pour
faire
adhrer
les
Amibes.
CHAPITRE
II
FLAGELLES
II
est ncessaire d'tablir,
au point de vue technique, une
dis-
tinction entre les Flagells libres et les Flagells parasites.
On se procure les premiers par la pche au filet fin et l'examen des

vgtaux aquatiques (voir p. 615, technique du plankton). Leur fixation
et leur coloration se font soit entre lame et lamelle, soit en masse, au
moyen du centnfugeur. Par ce dernier moyen, on peut les inclure dans
la paraffine, en masse, et dbiter en coupes minces le bloc ainsi obtenu.
On fixe soit au Flemming, soit au sublim alcoolique, soit au DuboscqBrasil, soit la quinone. On colore l'hmatoxyline ou au carmin. Pour
mettre les flagelles en vidence, on peut employer la mthode de Lffler
(p. 699).
Parmi
les Flagells parasites,
nous devons distinguer
trois
groupes
du tube digestif
et des cavits naturelles, les Flagells

sanguicoles, et les Spirochtes. Ces trois sections sont tout fait arbitraires et n'ont trait qu'aux manipulations techniques.
les Flagells
I.
FLAGELLS DU TUBE DIGESTIF
Ces organismes doivent tre tudis Ttat

l'tat humide. Le Bodo lacer tae est
fixs
Lzards d'Europe (examiner
Le Lamblia
les djections
frais et sur frottis
frquent chez les

frachement mises).
intestinalis abonde gnralement chez la Souris et
Rat, dansPinteslin grle. On trouve, dans le ccum du Cobaye,

du Rat, de la Souris, de divers Singes, des Trichomonas quelle
quefois trs nombreux. Les mthodes de flxation et de coloration

sont les mmes que pour les Trypanosomes. Pour faire de bons
frottis,
on dilue sur
la
lame
les
matires avec de la solution phy-
siologique tide et on limine rapidement les gros dbris alimentaires, puis
on tale
et
on
fixe
humide.
MTHODES SPCIALES
480
Tous ces Flagells
se conservent assez
longtemps vivants dans
des prparations bien lutes. En chambre humide, leurs mouvements diminuent peu peu d'intensit, ce qui permet d'viter
l'emploi des narcotiques. La coloration vitale russit bien et
permet
Pour
mme
d'tudier
la
formation des kysles.
Lamblia^ le fond noir facilite beaucoup l'lude des

flagelles, de leur nombre, de leur mode d'insertion, de la nature
de leurs mouvements. Fixer au sublim alcoolique, laisser Irois
jours l'alun de fer et diffrencier 1res lentement dans un liquide
les
trs dilu.
II.
Ce
FLAGELLS SANGUICOLES
pour nous, les Trypanosomes et les Trypanoplasmes,

nous
auxquels
adjoindrons les Lcishmania.
Matriel d'tude.
Pour les Trypanosomes, rechercher chez
sont,
Grenouille
la
le
7'.
rolatorium; chez
le
Surmulot
le
T. Letrisi;
T. granulosum. On peut aussi s'adresser un

laboratoire pour obtenir une Souris inocule avec un Trypanosome
non })athogne pour l'Homme, tel que T. Brucei^. On aura ainsi
chez rAnguille
le
des frottis trs riches en parasites, mais on ne pourra conserver le

virus que par des inoculations successives et rapproches (tous les
4 ou 5 jours). Pour les Trypanoplasmes, on pourra se servir de la

Tanche; mais, comme les Poissons sont assez difliciles manipuler, on fera mieux de s'adresser au Trypanoplasme de l'Escargot
(7rijpanoplasma kelicis Lcidy), toujours trs abondant dans le
rceptacle smiual. Au commencement de la priode d'hibernation, on trouve toutefois des formes non flagelles. Ce parasite
existe non seulement chez IJelix pomatla, mais encore chez un
nombre d'autres Gastropodes pulmons.

Les Poissons marins fournissent d'excellents matriaux d'tude
certain
les Flagells sanguicoles. On prlve le sang, soit en piquant

branchies avec uneeffilure de pipette, soit en piquant la queue
de l'animal, soit enfin en ponctionnant directement le cur, avec ou
pour
les
sans ouverture pralable de
la
paroi.
La ponction du cur
est la
1. L'entretien de ces virus est trs coteux, car il ncessite un matriel considrable et rclame beaucoup de temps. Je dois l'obligeance de ]NL le Professeur
Mesnil, de l'Institut Pasteur de Paris, les virus dont je me sers tous les ans,
pour les travaux pratiques de l'Institut de mdecine coloniale; je tiens lui en
exprimer ici toute ma reconnaissance.
FLAGELLS
481
meilleure mlhode pour ol)lenir du sang en quantit sulTisanle et

non mlang d'eau. On trouvera, p. 621, la manire de prlever
le sang des diffrents animaux.
Trypanosomes
Examen
Ftat frais.
et
Trypanoplasmes
Vexamen
de ces organismes
Vtat frais est on ne peut plus simple. On prlve une goutte de

sang sur l'animal en exprience et on examine entre lame et
La goutte ne
lamelle.
doit pas tre trop grosse
',
car.
si la
couche
trop paisse, on a de la peine apercevoir les

Trypanosomes. Dans une bonne prparation, les hmaties doivent
de sang
est
former une seule couche
On examine
autres.
et tre
avec un
lgrement spares les unes des

donnant environ
fort objectif sec,
500 diamtres.
On
ments
reconnat immdiatement les Trypanosomes leurs mouveet aux dplacements qu'ils impriment aux hmaties. Pour
faire des observations
rations, afln
temps
les
un peu prolonges,
d'empcher
la
dessiccation.
il
On
faut lu ter les prpapeut alors suivre long-
mouvements des Trypanosomes.
Les colorations
vitales
ne montrent pas grand cliose et ne sont gure

si le rouge neutre colore quelques granula-
conseiller. C'est peine

tions protoplasmiques.
V examen
l'tat
aprs coloration
humide.
Frottis secs.
Les
frottis
se fait sur des frottis secs
sont excuts suivant la
ou
fixs
mthode
gnrale (p. 626) et desschs le plus rapidement possible. Ils

sont colors ensuite par un driv quelconque de la mthode de
Romanovsky. Je
panoplique ou
le
conseille particulirement le
Giemsa rapide
et le
panchrome de Pappenheim.
La valeur del mthode de Romanovsky
a t trs conteste par Breinl

Moore, Uosenbusch. puis Minchin, qui lui reprochent de donner une
fixation insuffisante et de modifier la forme de ces organismes. Minchin a bien montr que les Trypanoplasmes sont presque toujours trs
dforms et mconnaissables dans les frottis secs. 11 affirme aussi ^ que
et
1.
Se reporter aux instructions donnes,
p. 6-23,
pour l'examen du sang Ttat
frais.
2. Minchin, Observations on the Flagelltes parasitic in tlie Idood of freshwater
Fishes. Proc. Zool. Soc. London, 1909.
3. Minchin, The structure of Trypanosotna Leivisi in relation 1o microscopical
technique. Quart. Journ. of micr. Set., LUI, p. ^55-800, 1909.
M. Langero.v.
31
METHODES SPECIALES
482
mthode de Romanovsky exagre les dtails de la structure nuclaire,

en rendant plus volumineuses toutes les parties chromatiques. Les granulations ultra-microscopiques renfermes dans le noyau sont considrablement grossies et masquent toute la structure nuclaire. Ce phnomne est d, non la dessiccation mais la mthode de coloration les
substances qui colorent la chromatine en rouge sont prcipites, non
seulement Tintrieur de certains points, mais encore leur priphrie,
ce qui augmente leurs dimensions et donne une ide fausse de leur
a tent de rhabiliter la
forme. Tout rcemment, Swellengrebel
mthode des frottis secs colors au Giemsa, au moins en ce qui concerne
les Trypanosomes. 11 trouve que la diffrenciation du noyau et du
blpharoplaste, ainsi obtenue par lui, est meilleure que celle qui est
fournie par Thmatoxyline ferrique de Heidenhain.
la
des frottis secs est parfaileinent suffi.rajouterai que le procd

sant pour les tiâvaux courants et qu'il donne toujours de trs
jolies prparations.
Frottis humides.
Mthode de Romanovsky pour
les
Cette mthode est dcrite p. 413. C'est une

des meilleures et des plus sures pour tes recherches cytologiques
frottis
humides.
sur les Trypanosomes.
Etendre une couche trs mince

Mthode de Breinl et Moore -.
d'albumine glycrine sur une lame parfaitement propre pour cela,
prendre une goutte de la grosseur d'une forte tle d'pingle et l'taler
avec un linge propre.
1. Sur cette couche, on tale la goutte de sang et on jette rapidement
le frottis encore humide dans le fixateur. Celui-ci sera de prfrence
du Flemming fort. La fixation doit durer de 5 10 minutes;
?
2.
3.
On
On
lave ensuite l'eau, puis

passe par la srie des alcools- en
:
montant de
10 en 10 p. 100
jusqu' l'alcool absolu;
Revenir l'alcool 80". additionn d'iodure de potassium iod. On

prpare eu ajoutant une solution aqueuse concentre d'iodure de
potassium et une solution alcoolique d"iode jusfju' obtention d'une
teinte fonce. Laisser de o 10 minutes dans ce li(iuide;
5. Revenir a l'alcool 30 p. 100.
6. Coloration.
a) Safranine.
Employer la safraninc aniline d<^
4.
le
Babs
1.
2.
3.
(p. 393).
Colorer de 1/2 heure 2 heures;

Laver l'eau;
Colorer au bleu polychrome, ainsi prpar
et vieilli l'tuve
Bleu de mthylne pur de Hochst

Carbonate de soude
Eau
1.
III,
2.
100
distille
gr-
Swellengrebel. Fixation and Staining of Trypanosoma Lewisi. Parasitology^

p. 226-238, 1910.
Breinl et Moore, An, of trop. med. and parasitologij.
I,
j).
410, 1907-1908.
FLAGELLES
Laver Teau
4.
483
5. Diffrencier par le tannin-orange de Unna, tant qu'on voit s'chapper

des nuages bleus;
6. Passer par les alcools jusqu' l'alcool absolu. Le frottis est alors
rougetre
7. Eclaircir dans l'huile d'aniline qui enlve l'excs de bleu laiss
;
le
par
tannin-orange
Xylol et baume.
En sortant de l'alcool iod, redescendre la
6) Hmatoxyline an fer.
srie des alcools pour arriver l'eau
1. Bain d'alun de fer 3,5 p. 100 pendant une heure;
8.
Bain d'hmatoxyline pendant
2.
Eau
1/2
heure
distille
100
o
Hmatoxyline
Aprs dissolution, ajouter quelques gouttes de solution concentre de

carbonate de lithium;
3. Diffrencier dans l'alun de fer.
1. Fixer les frottis de
Mthode de Rosenbusch '.
sang ou de cultures, pendant ([u'ils sont encore humides, dans le sublim alcoolique
froid
Laver l'alcool o0, puis Teau;

3. Mordancer une heure et demie dans l'alun de fer 3,5 ou 5 p. lUO;
4. Colorer cinq minutes au plus dans une solution 1 p. 100 d'hmatoxyline dans l'alcool 96-, additionne d'une solution aqueuse de car2.
bonate de lithium jusqu' obtention d'une teinte vineuse

0. Diffrencier sous le microscope dans l'alun de fer trs dilu;
6. Laver, dshydrater, monter au baume.
;
Mthode de Minchin.
Minchio
expos longuement ses

Trypanosomes et sur les
mettre en vidence, dans les deux
ides sur la structure cytologique des
meilleures mthodes pour
la
travaux cits plus haut (p. 481, notes 2 et 3). Je ne saurais trop
engager ceux qui veulent se livrer Ttude ap})rofondie de ces
organismes, lire les remarquables publications de Minchin. On

y trouvera Texpos dtaill et la critique des procds de prparation des Trypanosomes. Je ne donne ici que les principes essentiels
des mthodes les plus importantes.
Minchin a obtenu les meilleurs rsultais, en

en deux temps, d'aprs Weideniêich (p. 629).
!"'
Excuter ra|)idement les frottis
temps. Fixation osmique.
et, sans perdre de temps, plonger la lame dans un bocal bouch
Tmeri, au fond duquel on a vers quelques gouttes de solution
Fixation.
fixant
\.
Rosenbusch. Trypanosomen
296, 1909.
2. Je crois
tStudien.
Arch.
f.
Prolisienkunde,
XV,
p. 263-
quon peut, sans inrouvniont, prendre de l'alcool 95 ou mnie90.
METHODES SPECIALES
484
d'acide osmiqiie A p. 100, laquelle on ajoute 1 goutte d'acide

actique cristallisable par 20 gouttes. Laisser le frottis expos
aux
osmiques pendant 30 60 secondes.
vapeurs
Transfrer le frottis dans

2" temps. Fixation alcoolique.
un bocal d'alcool absolu (fig. 245), fixer pendant 10 minutes, puis
scher.
La fixation osmio-alcoolique, suivie de la dessiccation, convient

surtout pour les prparations qui doivent tre colores au Romanovski. Elle a, d'aprs Minchin, finconvnient de lixer incompltement le noyau. Lorsqu'on veut colorer par un autre procd
(hmatoxyline, mthode de Twort),
au subhm ou au Mann
il
et les fixer
faut faire des frottis
285). Dans
(p.
humides
ce cas,
il
est
sur lamelle, afin de pouvoir les

dposer brusquement face en dessous dans le fixateur. Comme
Minchin le fait remarquer avec raison, les lames ne peuvent tre
prfrable d'excuter les
frottis
immerges facilement que par une extrmit

jours des dformations dans les lments.
Les meilleurs fixateurs liquides sont
282),
liquide de
(p.
le
et
le
il
sublim
sublim alcoolique de Schaudinn
Mann
en rsulte tou-
(p.
actique
283), et le
(p.
Coloration.
cette mthode est
1.
285).
Roman ovsky.
dmontre
Minchin reconnat que
mieux
les caractres gnraux des Trypanosomes, surtout aprs la double fixation osmioalcoolique, suivie de la dessiccation. Mais, comme nous venons de
celle qui
le
il lui
reproche d'exagrer et de voiler les dtails de la
structure nuclaire. Notons que les frottis ainsi fixs se colorent
le dire,
beaucoup plus intensment que
les frottis simplement schs,

aussi faut-il surveiller attentivement la coloration, sous peine de
voir le cytoplasme devenir opaque. Minchin emploie le liquide de
Giemsa dilu dans
la
proportion de 1 goutte pour 1 cm^ d'eau

de 3 18 heures, ou moins, suivant la
il lave
rapidement l'eau distille, diff-
distille (p. 408). 11 colore
mthode de
fixation;
rencie quelques secondes dans le tannin-orange de

bler), puis lave une minute ou deux sous le robinet.
Unna
On
(Grii-
sche ou
bien on dshydrate par l'actone et on monte au baume.

2.
Bmaloxijline ferrique de Heidenhain.
Pour Minchin,
Jo crois qu'on pourrait aussi employer avec avantage le Bouin et le Duboscqen efict, Mincliin a remarqu que le liquide de Mann, qui renferme de
Tacido picrique et du formol, fixe mieux que le sublim seul, et met notamment
mieux en vidence les dtails de la structure nuclaire.
1.
Brasil
FLAGELLES
485
c'est la mthode de choix pour llude des dtails de structure des

noyaux et de Tappareil locomoteur. Les frottis doivent avoir t
fixs humides par le sublim ou le Mann. Le principe est de pro-
longer
a.
les
Le
sjours clans le
frottis,
mordant
pralablement
et
fix,
dans
est
colorant.
le
d'abord plong pendant
une heure dans l'alcool absolu, puis pass par une srie d'alcools,
en descendant de 10 en 10 degrs jusqu' l'eau distille.
b. Mordaneage dans Falun de fer 3,5 p. 100 pendant une
nuit (voir p. 377).
c.
Lavage rapide
Teau
distille.
0,5 p. 100 pendant

vingtobtient cette solution en mlangeant parties
On
heures.
quatre
et de la solution suivante
gales d'eau distille
d. Coloration dans
Thmatoxyline
Hmatoxyline
Alcool 'OO
10
Eau
90
dist
Les lamelles doivent
flotter
gr.
cm3
sur les solutions colorantes, et ne pas
y tre immerges.
Diffrenciation, qui est Toprationla plus importante. Aprs
la lamelle dans la solution
lavage Teau distille, iMinchin plonge
e.
d'alun de fer, jusqu' ce qu'elle paraisse se dcolorer; on lave

Teau et on examine 400 diamtres. Si le karyosome
alors
est suffisante, sinon

apparat nettement, la diflerenciation
il
faut
recommencer. Il est inutile de faire une coloration de fond.

Il est bon de prparer plusieurs lamelles et de les diffrencier
mettre en vidence divers points de
ingalement, de manire
structure. Plus
la diffrenciation est
pousse
loin, plus le cyto-
plasme devient ple.

des rsultats obtenus, pourvu que le
pas sch et que la fixation ait t correcte. Lorsque le
Romanovsky et l'hmatoxyline ferrique donnent des rsultats contradictoires, au point de vue de la structure nuclaire, c'est toujours la
mtliodo au fer que l'on doit accorder confiance.
Mincliin indique, d'aprs Twort, la manire
3. Mthode de Tworl.
de prparer le colorant
mlanger deux solutions demi-satures de
rouge neutre et de vert lumire de Griibler dans l'eau distille, verser
lentement le vert dans le rouge, plac au pralable dans un vase trs
30" ou 40". lâssembler le prcipit par
large; chauffer le liquide
37".
dcantation, sans filtrer le laver Teau distille et le scher
On pse 0,2o gr. de ce prcipit, on triture avec un peu de sable blanc
et on puise par 100 cm-^ d'alcool mthylique, renfermant 5 p. 100 de
Mincliin garantit luniformit
frottis
n'ait
glycrine.
METHODES SPECIALES
486
Pour retnploi, on prend 2 parties de

d'eau distille; on colore pendant
cette
1
partie
mn;
solution
et
une
heure, en ayant soin de
frijttis face en dessous, pour viter les prcipits. Aprs coloon diirencie par l'ther ^lycriquo de (Jnna (p. 427) 2 p. 100
dans Teau, pendant 1/2 ou 1 minute, puis on dshydrate par l'alcool
absolu et on monte au baume. Les prparations doivent tre fixes par
un liquide renfermant du sublim.
Cette mthode donne des colorations trs dlicates, mais qui manquent de contrastes. Elle ne convient pas pour les prparations de
dmonstration, mais, d'aprs Mincliin, elle rvle la structure du noyau,
aussi bien que l'hmatoxyline ferrique. Le noyau, le blpharoplaste et
les granules chromatodes sont rouges, le flagelle et le priplaste sont
verts, le protoplasme parat verdtre.
mettre les
ration,
Exprim en ta tion
1.
Inoculation.
et inoculer ce
L'inoculalion des Trvpaiiosomes
consiste prlever
Trypanoplasmes
et
des
du sang chez Tanimal malade
sang un animal sain.
Lorsqu'il s'agit de Trypanosomes pathognes et d'animaux trs

infests, il suffit d'inoculer quelques gouttes de sang. Ainsi, pour
transmettre de Souris Souris les divers trypanosomoses des
Mammifres,
il
suffit
de sectionner l'extrmit de
queue d'une
la
Souris malade, de prlever une ou deux gouttes de sang avec

et d'inoculer
l'extrmit hien effile d'une pipette strilise
'
imiTdiatement ce sang dans
accidents,
pritoine d'une Souris saine. Nous
prcautions prendre pour viter

lorsqu'on opre avec un virus dangeiêux pour
indiquons plus loin

les
le
(p.
les
494)
l'Homme.
Lorsque l'animal
est trs
peu infest
pas de parasites l'examen du sang,

plus grande de ce liquide.
On
el
ne prsente que peu ou

une quantit
faut prlever
le recueille alors dans
il
une solution
p. 100, de manire empcher

a soin de prparer d'avance
de citrate de sodium 1
lation.
1.
La
On
solution citrate, strilise ou
vase conique d'irlenmeyer
Un
3.
Quelques pipettes pointe
simplement
bouillie
dans un
petit
4.
Une seringue de verre de
petit cristallisoir strilis ou bouilli;

trs fines strilises;
le tout strilis
Au
coagu-
2.
1.
la
lieu de
ou
ou 2 centimtres cubes
et
son aiguille,
bouilli.
serinoue on a trs souvent avantage inoculer la pipette. On

On prend une pipette
se sert pour cela de pipettes strilises dites double effilure.
FLAGELLES
487
L'animal lanl immobilis, on sectionne Foreille on la qneue,

le cas. On fail couler le sang goutte goutte, dans le
un aide doit
cristallisoir garni de 2 ou 3 cm=^ de solution cilrate
snivanl
et
agiter continuellement
doucement
le cristallisoir
ponr mlanger
immdiatement le sang avec le liquide anticoagulant. Si Tanimal
est indocile on si le sang s'coule difficilement, on fera bien de
au fur et mesure qu'il sourd, au
puiser le sang dans la plaie,
moyen d'une des pipettes effiles, pralablement mouille de

citrate. Chaque goutte est souffle dans le
cristallisoir. On
recueille ainsi
une quantit de sang variant de 10
2 ou 3 cm'' suivant
sang
et
la taille et
de citrate est inocul
seringue,
s'il
Singe; dans
d'un Rat.
s'agit
Flat de l'animal.
:
sous
la
peau du
d'un animal d'assez grande
le pritoine, la pipette, s'il s'agit
20 gouttes
Le mlange de
avec
la
comme
le
flanc,
taille
d'une Souris ou
Lorsqu'on veut conserver certains virus qui tuent trs vite la Souris
Rat (sommeil, nagana, surra, etc.), il peut tre avantageux, pour
viter une surveillance constante et de nombreux passages, d'employer
le Cobaye ou le Lapin. On obtient, chez ces animaux, une maladie plus
lente, pouvant durer plusieurs semaines. Il y a peu ou point de Trvpanosomes dans le sang priphrique, mais il suffit d'inoculer une Souris
avec 1 cm3. de sang, pour les faire apparatre chez celte dernire. Le
Cobaye et le Lapin peuvent donc servir, dans certains cas, conserver
les virus Trypanosomes.
Dans le cas o un animal inocul vient mourir inopinment, on peut
tenter de sauver le virus en puisant du sang dans le cur, aprs ouverture du thorax, et en l'inoculant un animal sensible. Ce procd est
trs bon aussi lorsqu'on veut saigner compltement un animal. La ponction du cur proprement dite est dcrite p. 498.
et le
2.
volution.
Les
expriences de transmission exprimen-
plus compliques. Prenons d'abord, comme exemple, la

transmission des Trypanosomes ou des Trypanoplasmes des Ver-
tale sont
tbrs sang froid par les Sangsues. On doit aux remarquables

travaux de Brumpt de bien connatre les conditions dans les-
on
raliser
cette transmission. Rappelons, pour

des expriences de Brumpt reprsentent
mmoire, que
les premiers documents prcis que nous possdions sur l'volution
quelles
peut
les rsultats
des Flagells sanguicoles.
notre avis, rpter ces expriences,
(fig. 255), dans feftlure de laquelle on fait une seconde effilure, de

manire avoir une pointe courte et fine. On vite ainsi l'ennui du nettoyage et
ordinaire
de la strilisation des seringues.
METHODES SPCIALES
488
coiisliUu3 le mcilliiur exercice
pour
iiii
Uavailleur
({iii
veut tudier
maladies Trypaiiosomes. Le matriel est facile lever

dissquer et les rsultais sont certains.
les
a.
Trijpanosomes ou Trypanoplanmes
Evolution des
et
des
Vertbrs sang froid.

Quel que soit le parasite tudier,
il faut se
procurer un animal porteur de viru&, des animaux sains
de la mme espce et des Sangsues d'espce approprie. Ces
Sangsues seront toujours des Rhynchobdelles ou Sangsues

d'une part, ce sont les seules pour lesquelles on contrompe
:
naisse des faits de transmission et, d'autre part, la structure de
leur trompe fournit,

pour suivre le
lires
comme nous
mode
le
verrons, des facilits particu-
d'inoculation.
Nous conseillons au dbutant d'tudier l'volution du Try|ianosome de V kngrnWe {Truiânosoma granulosum Lav. et Mesn.)
chez Hemidepsis narginataK
est facilo de se procurer partout, au printemps, des Anguilles adultes
des alevins d'Anguilles; on en trouve chez tous les marchands de
Poissons, en Europe. La plupart des Anguilles adultes hbergent ce
Trypanosome; il est facile de s'en assurer en examinant un peu de sang,
prlev soit au niveau des branchies, soit par piiire de la queue. Les
alevins sont presque srement indemnes. Kn etl'et ils sont capturs dans
les estuaires au moment de la remonte; or les Sangsues capables de les
infester vivent exclusivement en eau douce et ne s'avancent jamais dans
les eaux demi-sales o on capture les alevins. D'ailleurs, on peut contrler ces derniers, en les faisant piquer par des embryons d' Hemidepsis,
comme nous le verrons plus loin.
Il
et
est la Sangsue qui se prte le mieux

une Glossosiphonide qui peut transmettre
aux Poissons un grand nombre de Trypanosomes. On la trouve
Hemidepsis marginata
ces expriences
c'est
partout en Europe. Les jeunes exemplaires jeun sont l'afft,

fixs sur les plantes aquatiques. Les adultes gorgs se tiennent
de prfrence sous les pierres des ruisseaux et des mares. On les

y trouve parfois en abondance, au moment de la ponte annuelle,
qui, pour la France, a lieu de mai juillet (avec quelques variantes
suivant les rgions). Ces animaux pondent de 50 80 ufs qu'ils
fixent sous une pierre ou un fragment de bois et qu'ils couvent
jusqu'au
moment de
leur closion. Les petites Sangsues s'atta-
1. Tous les dtails de cette volution sont dus aux recherches de Brumpt. Les
renseignements que je donne proviennent en partie de ses publications; je dois
le reste des communications verbales, de sorte que beaucoup de dtails sont
indits, .l'ai d'ailleurs t tmoin do ces lêlles expriences.
489
FLAGELLS
client alors au ventre de leur
mre qui abandonne son support
et
transporte ses petits avec elle, jusqu'au moment o elle rencontre

un Poisson sur lequel toutes vont se fixer. Aprs quatre ou cinq
repas les petits deviennent adultes.

Cette Sangsue prsente de grands avantages au point de vue exprimental. Elle est facile trouver c'est une petite Sangsue verdtre,
tle cordilorme, munie do 4 yeux. Les somites moyens sont forms
de trois anneaux. La bouche est situe profondment au fond de la
ventouse antrieure en arrire se trouve la gaine de la trompe, renfermant cet organe qui y est cach l'tat normal. On ne peut donc
:
trompe que par transparence, en comprimant lgrement

moyen d'un compresseur (fig. 130). Elle esl relaliveinent facile
lever on la conserve des mois dans des bocaux o elle se reproduit
trs bien. II faut que ces bocaux renferment quelques plantes vertes
des lentilles d'eau [Lemna trisulca est une des meilleures espces), des
Algues filamenteuses, etc. Une mousse aquatique, trs commune, Amblystegiiim riparium, rendra de grands services pour ces levages, car elle
vit trs bien en aquirium. il faut avoir soin de ne pas toucher l'eau
dans ce cas, il faut
et de ne la renouveler qu' la dernire extrmit
prendre une eau de mme provenance et dans laquelle les mmes plantes
vivent depuis longtemps.
voir cette
l'animal au
:
Pour commencer les

petites Sangsues. Pour
exj)riences,
on
il
faut avoir
un levage de
au printemps, des
adultes qu'on nourrit sur un Poisson quelconque et qui ne tardent
pas pondre. Les embryons sont toujours indemnes de parasites,
cela,
se procure,
mme lorsqu'ils proviennent de parents infests ils peuvent

servir en toute sret aux expriences de transmission.
:
donc
On place un certain nombre de jeunes Bemiclepsis sur une

grosse Anguille parasite, dans un aquarium. Ces embryons
vont se gorger avec voracit et ne tardent pas tre distendus, ce
qui est un grand avantage. La seule prcaution prendre est
d'empcber TAnguille de les dvorer. Pour cela, on lui introduit
dans
la
boucbe un hameon auquel
est fixe
une
ficelle,
termine
par un Ilot leur en lige ^ Lorsque les embryons sont gorgs, on

les enlve au moyen d'un bourdonnet de coton hyprophile fix
un
petit
bton
ne faut jamais
c'est le seul
les
moyen de ne
prendre avec
les doigts,
pas les traumatiser. Il

ni surtout avec une
pince.
Lorsque
les
animaux ont digr
la
plus grande partie du sang
1. Lo mme artifice peut tre employ avec toutes espces de Poissons. Pour
exprimenter sur les Tortues, on les attache une pierre ou un poids qui les
maintient au fond de l'eau, tant que dure le repas des Sangsues.
490
MTHODES
Sl'CIALIS
sont redeveiius Iranspareiils tl on peut les examiner

al)sorb,
au compresseur (fig. 136), entre lame et lamelle. On aperoit alors
les petits
rypanosomes dans l'estomac ou dans Tintestin; vêrs
ils
ou le S'' jour, ils apparaissent dans la gaine de la trompe.

Cet examen est trs bien support lorsque la compression n'est
c'est le seul moyen de savoir si une Sangsue est
pas exagre
le 4^
infectieuse ou non.
Pour
tudier, sur des frottis colors, les formes
l'estomac et de l'intestin,
pendant
sa digestion.
est ncessaire
il
On coupe
soit la partie
postrieure;
on en
alors,
fait
soit
la
sourdre
primant d'un bout l'autre, puis on tale,

mthodes habituelles la goutte obtenue.
flagelles
de
de sacrifier l'animal
partie antrieure,
le
sang en
fixe et colore
la
com-
par
les
Ds que les Trypanosomes ont apparu dans la gaine de la

trompe, les petites Sangsues sont devenues infectieuses et peuvent
contaminer les alevins. Ceux-ci sont conservs en aquarium
eau courante
et nourris avec des larves de Chironomes (Vers

rouges de vase). Nous avons dit qu'ils sont peu prs loujours
indemnes de Trypanosomes pour s'en assurer, on peut mettre
sur un alevin un seul embryon d' Hernie lepsis qu'on ne laisse pas
se gorger compltement. Il est bien rare que cet
embryon pr:
sente des ry]anosomes la suite de ce repas. Aprs avoir t
piques par les Sangsues infectieuses, les petites Anguilles prsentent des Trypanosomes au bout de 4 ou 5 jours.
I^nrsqu'on veut tudier l'volulion des Tivpanoplasmes, on peut
s'adresser soit Ileinlclepsis manjiiiata, soit une Ictittiyobdellide, Piscicola geometra. Je ne conseillerai
elle est trs difficile trouver et
pas cette espce aux dbutants, car
lever. C'est une petite Sangsue

bruntre, qui vit cache dans les herbes aquatiques, notamment sous les
feuilles de Nnuphars. Elle ne couve pas ses petits comme VHemiclcpsis
elle se contente de pondre un certain nombre de cocons, renfermant
un seul embryon. Celui-ci se gorge trs peu et volue trs lentement. Par contre, les Piscicoles adultes vivent trs longtemps en
:
captivit.
Dans le nord de l'Afrique on peut rpter les expriences de Brumpt

sur le Trypanosoina inopincUuin de la Grenouille verte. Ce parasite est
transmis par llelobdella algira. On la trouve communment sur les
Batraciens au moment de la reproduction. Elle ne les quitte gure que
pour pondre et se cache alors sous les pierres et les feuilles des plantes
aquatiques. Les embryons, au nombre de 20 50, s'attachent la mre
comme ceux des Ileiniclepsis. Ils sont trs petits et se dveloppent lentement. Ils se fixent de prfrence autour des yeux des Batraciens. On
peut observer chez eux la transmission hrditaire des Trypanosomes,
dcouverte par E. Brumpt.
FLAGELLS
491
Evolution des Tnjpanosomes pathognes des Mamndfiu'.s.

Pour les Tryi)anosomes africains, oprer sur place, avec des
b.
Glossines obtenues par levage; les faire gorger sur des aniuiaux
infests et tenter de contaminer des animaux sains et non immu-
tudier
niss.
contenu de
le
la
trompe
et
du tube
digestif des
Mouches, par dilacrations dans la solution physiologique et par

frottis colors. On coupe d'abord les ailes et les pattes de la Mouche,
puis on sectionne
dernier anneau abdominal; on peut ainsi
le
extraire et prparer le tube digestif ^

Des travaux rcents tablissent que certains
Trypanosomes sont
transmis non par piqre, mais par riutermdiaire des djections,

par pntration directe travers la peau ou les muqueuses. Voir
ce sujet les expriences de
Ctenocephalus serraliceps
111.
Brumpt sur le Tnipanosoma Cruzi

le Trypanosoma Lewisi avec le
de NuUer- sur
et celles
495)
(p.
(p. 596).
DIAGNOSTIC DES
T R Y PA N OS
M OS ES
HUMAINES
Maladie du sommeil.
1.
Lorsque l'ensemble des symptmes cliniques et des commmopermet de souponner la maladie du sommeil, le diagnostic
ralifs
doit tre prcis par la
souvent fort
est
dcouverte du parasite; mais sa recherche

car il est gnralement trs rare dans le
difficile,
sang. Voici les divers procds qu'on

mettre en vidence.
Examen du sang
1.
prlve
cins,
devra employer pour
priphrique, d'abord
Vtat frais.
le
On
sang au doigt ou Toreille; s'il y a des rythmes ciron prlvera de prfrence ce niveau. Examiner entre
le
lame
et lamelle,
pour
viter la dessiccation. Parcourir la prparation mthodiqueau moyen del platine k chariot. Multiplier les prparations.
ment
enlutant au besoin
la
vaseline ou la paraffine
\. Voir ce sujet
Roubaud, Recherches sur la biologie et les adaptations de
la Glossina palpalis; les Trypanosomes pathognes et la Glossina palpalis. Rapta
mission
de
d'tudes de la maladie du sommeil au Congo franais, 1906-} 908,
port
:
in-8
de 121
Chatton. MicrosporiMasson, 1909; cf. p. 383-643.

causes d'erreurs dans Ttude du cycle volutif des Try-
p., 8 pi., Paris.
dies considres
comme
panosomides chez les Insectes. Bull. Soc. patliol. exot., IV, p. 66-2, 1911.
2. NUer, Die Uebertragungsweise der
Rattentrypanosomen durch Flohe.
krchiv
f.
Protistenkunde.
XXV,
p. 3SG-4-2-1.
l'.U-?.
METHODES SPECIALES
492
ce
Si
moyen
faire
clioue,
moins. Fixer
douzaine au
iiii
bon nombre de
une
frottis^
au
et colorer
Romanovsky (Giemsa
ou panchrome). Quelquefois on n'aperoit un Trypanosome
rapide
qu'aprs avoir parcouru mthodiquement 15 ou 20 lames.
Lorsque l'examen
panosomes,
il
morphologique du
On
l'tat frais a
dmontr
peut employer
prsence de Try-
la
faut colorer aussi quelques frottis,
pour
faire l'tude
parasite.
la
mthode des frottis pais de Ross. Etaler grossire(fig. 244). Scher l'air. Dissoudre
ment de grosses gouttes de sang

l'hmoglobine dans
Acide actique
Formol
Fixera
2 p.
l'alcool et colorer ou.
100
p.
100
--
plus simplement, oprer
dit p. 628.
On a signal Vaiito-oggluLinaiion des hmaties
probabilit. Elles se rassemblent alors
comme
comme
tant
il
est
un signe de
en amas bien diflerents des
piles
de monnaie.
et
Mthode de Martin et Lebuf.

pli du coude (p. 623)
mlanger immdiatement un gal volume de solution de
2.
1.
Centrifugation.
Prlever 10 cm^ de sang dans une veine du
citrate
de sodium 1 p. 100.
en tournant
2. Centrifuger trois fois,
manivelle
la
d'arbre pour
le
la vitesse
de 65 tours de
minute, ce qui correspond environ 1

cenlrifugeur de Krauss
(p.
500 tours
647).
a. Tourner pendant sept dix minutes, jusqu' ce que le sang soit

nettement spar en deux couches.
b. Dcanter le ])lasma et le centrifuger nouveau pendant dix minutes. On trouve, dans le culot, des hmaties, des embryons de Filaires,
lorsque le malade en est porteur, et quelques Trypanosomes.
c. Dcanter encore une fois le liquide clair et le
centrifuger de nouveau pendant vingt minutes. Le culot ne renferme plus que trs peu
de leucocytes et d'hmaties; on y trouve des hmaloblastes, gnralement mconnaissables, quelques Microfilaires et les Trypanosomes.
3.
Ponction ganglionnaire.
Ponctionner
avec une petite
seringue les ganglions cervicaux hypertrophis. L'examen, l'tat

frais ou en frottis, de la goutte de liquide ainsi obtenue, permet
quelquefois de reconnatre des Trypanosomes trs nets. A dfaut
des ganglions cervicaux, ponctionner les sous-maxillaires ou les
inguinaux.
Voici, d'aprs Wiirtz,
tion,
comment on
au moyen de sa seringue spciale
doit procder cette opra(fig.
184)
FLAGELLS
"
bien fixer
le
faire le vide
2*^
493
gaDglion avec les doigts et enfoncer Taiguille.

en tirant le piston, puis fermer la conimiinica-
du rservoir avec
le corps de la seringue
dilacrer lgreen
tous
sens
en
on doit voir
dplaant
l'aiguille
ganglion
pntrer dans le rservoir un peu de suc ganglionnaire.
tioo
ment
'S'^
le
retirer Faiguille,
Fig. 184.
ouvrir la communication entre les deux
Serinffue de Wiirtz pour ponction ganglionnaire
parties de la seringue
et
chasser
le
lames propres, pour l'examiner Ftat

4,
Ponction lombaire.
retire
5.
fois
Inoculation exprimentale.
il
cm-^ de liquide cphalo-
la
Ftat frais et en frottis colors.
ont chou,
10
technique habituelle (p. 644). On centrifuge

pendant 10 minutes, puis on examine le culot
rachidien, suivant
une seule
On
suc ganglionnaire sur des

frais et en frottis.
Lorsque tous
faut encore tenter d'inoculer des
ces
animaux
moyens
sensibles.
Le
ractif de choix est le Singe, pourvu qu'on s'adresse une

espce rceptive. La plus sensible de toutes est le Singe Pata(Cprcopitheciis ruher), chez lequel l'volution de la maladie est partiil meurt
gnralement en trois semaines
Ce
Wrtz,
Thiroux).
Singe est trs abondant en Afrique
(Brumptet
on peut donc l'employer sur place, pour le diagnostic ou pour les
culirement rapide, car
expriences d'infestalion par les Glossines. Il est facile de se procurer cette espce en Europe, soit chez les marchands d'animaux,
les jardins zoologiques d'Anvers et de Hambourg. Ces
sont
Singes
gnralement trs doux et faciles manipuler. A leur
dfaut, on pourra prendre des Macaques, de prfrence le Macacus
soit
dans
cynomolgus ou le 3Iacacus siniciis (Bonnet chinois), qui sont

Macacus rhsus convient aussi, mais il est plus
assez doux; le
sauvage, plus difficile manier et impossible apprivoiser. Il faut

bien se garder d'acheter des Cynocphales ou des Cercopithecus
fuUginosus, car ces Singes ne sont pas sensibles au Irypanosoma

gambiense.
Lorsque le sang a t prlev aseptiquement, ou peut faire une
inoculation intraprilonale dans le cas contraire, on se contentera
d'inoculer le sang sous la peau. Il faut injecter au moins 10 cm^
;
METHODES SPCIALES
494
de sang cilral, de faoon assurer la russite; aussi esl-il difficile

d'employer de petits animaux, tels que la Souris blanche et le Rai
blanc, qui sont pourtant trs sensibles et prsentent de nombreux
parasites dans le sang.
Il faut liminer
compltement le Lapin et le
Cobaye qui, bien que contractant une maladie mortelle, ne prsentent que peu ou point de Trypanosomes dans le sang priphrique.
manipulation des animaux porteurs du Trypanosoma gambicnse

dangereuses. 11 faut se prserver d'une part du contact du
sang, d'autre part des morsures. Tlioriquement, un seul Trypanosome
suffit pour donner la maladie et il pourrait bien se faire que ce soit
vrai aussi en pratique. Il faut donc qu'aucune goutte de sang ne soit
projete et ne vienne en contact avec la peau, car une excoriation invisible suffirait pour oll'rir une porte d'entre au virus. On devra obturer,
avec du coUodion, toutes les petites plaies visibles; si on vient tre
atteint par une goutte de sang, laver immdiatement avec de Talcool
ou mieux du formol 5 p. 100, qui tue instantanment les Trypanosomes. Si le liquide atteint l'il, instiller une ou deux gouttes de nitrate
La
est des plus
d'argent
p. 100.
fort dangereuses, car l'animal qui mord s'est

dbattu auparavant, a pu se faire de petites plaies aux gencives ou aux
lvres et inoculer ainsi du sang virulent au moment o il mord. Avec
les petits Rongeurs (Souris et lit) on vite facilement les morsures en
plaant l'animal, sur lequel on puise le sang, dans une bote en bois,
ferme d'un ct par un grillage, dans le genre des petites cages dites
sabot. Avec une
pince, on saisit la queue, qu'on fait passer travers
Les morsures sont aussi
puis travers un trou perc dans un morceau de carton.

peut alors prlever une certaine quantit de sang, par section de la
queue, sans que l'animal puisse mordre et sans que ses mouvements
gnent l'opration. Se mfier des mouvements de circumduction qui
peuvent amener la plaie de la queue en contact avec la peau de l'oprateur. Ds que la prise de sang est termine, cautriser avec le fer rouge
ou simplement avec la llamme d'une allumette. H est trs dangereux de
prendre avec une pince et de transporter un animal dont la queue n'est
pas cautrise et qui, en se dbattant, projette partout du sang virulent.
Cbez le Singe, il faut prlever autant que possible le sang au niveau
de l'oreille, car les plaies de la queue amnent presque toujours de la
le grillage,
On
et peuvent faire perdre un animal intressant. Le mieux est

d'immobiliser l'animal, ou au moins la tte, avec le mors d'un appareil
contention. Cautriser avec soin aprs chaque prlvement de sang.
gangrne
Tous
les
instruments (ciseaux, bistouris, scalpels, etc.) doivent
tre striliss par rbullilion,
immdiatement aprs Topration.
Les Trypanosomes sont tus instantanment par Feau bouillante.

2.
Trypanosomose brsilienne Trypanosoma Cruzi.

Comme
ment
pour
la
rare dans
le
maladie du sommeil, le parasite est gnralesang prii)hri(]ue ou bien son apjiarition y est
FLAGELLS
495
recommaode-l-il, pour le diagnoslic,

irrgiilire. Aussi Cliagas
rinoculatiou au Cobaye de quel([iies cm-' de sang, prlevs [lar
ponction veineuse. Le Cobaye prsente des Trypanosomes dans le
sang au bout de quelques jours et meurt en moins d'un mois. Les

Ouistitis du genre Callithrix sont encore plus sensibles.
L'bte intermdiaire de ce Trypanosome est, ainsi que Ghagas
Ta dmontr, Conorhinus megistii.s. L'levage de cet animal se
fait facilement au Brsil (Neiva)
et en France
(Brumpt). Les
animaux ne sont jamais infectieux leur naissance, mais il suffit

d'un seul repas sur un animal contamin spontanment ou exprimentalement, pour qu'ils deviennent infectieux, peut-tre par
leur piqre (Chagas), plus vraisemblablement par leurs djections
(Brumpt).
-^
Brumpt inocule ces djections qui renferment des Flagells

du type Trypanosome, blpharoplaste antrieur ou postrieur
et qui infestent les animaux sensibles.
Enfin, Brumpt^ vient de dmontrer que

coup sr en piquant un animal infect.
Ce diagnoslic repose sur

sur l'obtention
et
Punaises s'infectent
DIAGNOSTIC DES LEISHMNIOSES
IV.
frotlis
les
flagelles caractristiques.
1 Bouton d'Orient.
la
de
dcouverte du parasite dans les

cultures, renfermant des formes
Racler avec un bistouri
le
bord des
non avec le
sang, mais avec des lments du tissu enflamm. Pour les lsions
non ulcres, ponctionner la seringue, avec une aiguille
d'acier fine et neuve. Aspirer un peu de pulpe sanglante et taler
sur lames. C'est ces lsions non ouvertes qu'on devra s'adresser
ulcrations ou le fond, de manire faire des frottis,
pour obtenir des cultures.

2 Kala-azar.
La seule mlhode permettant le diagnostic
du kala-azar, d'une faon certaine, est la })onction de la rate.
dus une technique dfectueuse, on a t

de
cette
oblig
remplacer
opration par l'examen du sang ou par
la ponction du foie. Ces deux procds ont t prconiss })ar
la suite d'accidenis,
1.
Chagas, Nova tripanosomiaze humana, Mem. Inst. Oswaldo Cruz,
1909.
-2.
AIrm.
n,i'l. .s-oc.
Inst.
Oswaldo Cruz.
Il,
paUiul. n.roL. V, p.
p. Ô-SIO, 1910.
^2->--2G
et 360-364, 1912.
I,
p.
139,
MTHODES SPECIALES
496
mdecins anglais des Indes. Ch. Nicolle et Manceaux ont bien

montr qne l'examen du sang est infidle et que la ponction du
foie ne permet pas de faire le diagnostic au dbut de la maladie.
Pourtant Cummins et Gh. Nicolle se servent aussi du procd
du vsicatoire qui, dans certains cas donne de bons, rsultats.
Samuel Cochran - excise un gangliori cervical ou inguinal et
les
'
en
fait
des
frottis.
ponction de
D'aprs
la rate.
Ponction de
la
procd serait trs suprieur
la
Voici, d'aprs Gb. Nicolle^, comment

ponction de la rate. L'essentiel est de bien
la rate.
on doit pratiquer
Ini, ce
Une grosse aiguille fournit beaucoup de sang et

du viscre ponctionn elle expose en outre aux
aux ruptures d'organe. Les accidents survenus au
choisir l'aiguille.
trs
peu de
tissu
hmorragies et
cours de ponctions de
la
rate taient presque toujours dus l'em-
ploi d'aiguilles trop grosses.
Avec une
aiguille fine,
au contraire,
on obtient immdiatement un petit cylindre de tissu. Des aspirations rptes amnent en apparence une ponction blanche, mais,
en ralit, on a dans la cavit de l'aiguille assez de pulpe splnique
pour faire 3 ou 4 frottis ou pour ensemencer quelques tubes.
Donc proscrire les grosses aiguilles en platine iridi, qui dchirent les tissus. viter aussi les aiguilles usages et rouilles, qui
piquent mal. Ne prendre que des aiguilles en acier, fines et
neuves. Striliser
la
seringue
et avoir soin
de
la
desscher com-
ou sur une flamme. Immobiliser parfaitement

pltement
le malade, appliquer sur la peau une couche de teinture d'iode et
piquer au milieu.
Ponction du foie chez le Chien (d'aprs Gh. Nicolle'').
l'tuve
Indispensable pour suivre le kala-azar infantile exprimental chez

cet animal.
Prendre une aiguille fine, mais plus longue et plus rsistante que
pour l'Homme. Immobiliser parfaitement l'animal. Piquer dans le
dixime espace intercostal droit, un ou deux travers de doigt des
apophyses pineuses. Pour trouver facilement cet espace on compte
partir du bas; c'est donc alors le troisime, mais il faut bien
savoir
que le premier est trs troit.

Trpanation du fmur ou du tibia chez
1.
2.
3.
4.
le
Chien.
Pen-
Archives Jnst. Pasteur Tunis, p. 158, 1908.

Journ. of trop. med.. XV, p. 9, 1912.
Archives Insf. Pasteur Tunis, p. 'iOQ, 1909, et Bull. Soc. jmihol. exol., p.M4,]909.
Arch. Inst. Pasteur Tunis, p. 109, 1910.
497
FLAGELLS
un sjour llnstitul Pasteur de Tunis, le D' Manccaux a

bien voulu me montrer une mthode trs lgante pour faire le
Texamen de la moelle
diagnostic du kala-azar chez le Chien, par
daiit
osseuse, o les parasites sont souvent plus nombreux que dans la

rate. Raser un point de la peau, choisi de telle sorte qu'il nV ait
une couche de
pas trop de parties molles traverser; appliquer
teinture d'iode et trpaner Tos avec un petit foret m par un porteou
foret
drille (on
Le
1ers).
s'arrter ds
En
trouve ces instruments chez tous les quincail-
foret a t bouilli
que
retirant le foret,
deux
au pralable. Trpaner doucement et

parvenue dans le canal diapl^ysaire.
la pointe est
on ramne assez de moelle pour
faire
un ou
frottis.
V.
CULTURE DES
T R Y PA N
OSO M ES
ET DES LEISHMANIA
La culture des Trypanosomes
se fait
en ensemenant
le
sang
ou
parasit dans des tubes de milieu de Griffon et de Besanon,
glose au sang.
Ce milieu,
trs
improprement
nomm
milieu de
Novy-Neal, a t modifi par ces deux derniers auteurs, puis par

Ch. NicoUe, qui a beaucoup simplifi sa prparation et Ta rendue
tout
fait
pratique.
On
Milieu glose-sang (formule Ch. NicoUe^).
mlange suivant, sans neutraliser
ni alcaliniser
Eau
prpare
le
900 gr.
ordinaire
Glose
14
Sel marin
On
rpartit dans des tubes essai, sur 3 4 centimtres de

hauteur, et on strilise l'autoclave. On peut prparer ainsi
l'avance une provision de tubes qu'on peut conserver longtemps,

pourvu qu'on les prserve de la dessiccation.
Tout rcemment, Manceaux - conseille de faire macrer d'abord la

glose dans de l'eau distille qu'on renouvelle deux fois, d'abord au
bout de cinq six heures, puis au bout de vingt-({uatrc heures; on
parfait alors le poids de 914 ^r., puis on ajoute le sel et on fait fondre.
Cette macration et ce lavage favorisent beaucoup les cultures.
1.
C. R. Acad. des Sciences,
CXLVI,
p. 843, 1908.
Anii. Inst. Pasteur,
XXII,
p. 397, 1909.
2.
Manceaux, Sur
la
technique de culture des Leishmania. Bull. Soc.paih. exot.,
IV. p. 586-28S. 1911.
M. L.\NGERON.
32
MTHODES SPCIALES
498
En outre, Nicolle et Manccaux cultivent Leahmania tropica

sur milieu solide (glose au sang bien frache), aprs aspiration de
Teau de condensation. Ce procd est commode pour purifier les
'
cultures.
Pour rendre ce milieu propre

chaque tube un
suffit d'ajouter
la
culture desTrypanosomes, il
de son volume de sang de
tiers
Lapin, prlev par ponction aseptique du cui\ suivant

cd de Gh. Nicolle -.
le
pro-
Ponction du cur chez le Lapin (mthode de Gh. Nicolle).

On prpare d'avance une ou plusieurs grosses seringues de 20 centimtres cubes, strilises avec leurs aiguilles spciales. Ces aiguilles
sont en acier et de gros calibre (longueur 2 cent., diam. 1,5 mm.). On
peut se servir de seringues en verre, mais d'aprs Manceaux, les seringues
armature mtallique sont plus commodes, cause de Tanneau (jui
termine la tige du piston et qui permet de modrer volont la course
de ce dernier. Les seringues en verre sont strilises entirement
enfermes dans de gros tubes essai bouchs au coton. Les seringues
armature mtallique ne sont enfonces dans ces gros tul)es que
jus([u'au plateau mtallique suprieur; on fait un bon joint de coton
ordinaire pour fermer le tube. On peut ainsi manuvrer le piston pour
s'assurer de son fonctionnement et cela autant de fois qu'on le dsire
puisqu'on n'aspire que de l'air strile. Au moment d'oprer, on retire du
tube seringue et aiguille et on vrifie une dernire fois, en aspirant
dans la fiamme d'un bec Bunsen.
Les tubes de glose sale, fondus 100. sont maintenus liqufis
45"-50. On immobilise alors un Lapin sur l'appareil de contention
on
rase la rgion prcordiale et on la strilise la teinture d'iode.
:
Pour ponctionner le ventricule droit, on opre de la faon suil'index gauche est appuy sur Tangle form par la septime
cte gauche avec Fappendice xyphode. On remonte en comptant
vante
On arrive ainsi au 3" espace intercostal

mm. du bord sternal, en dirigeant Taiguille de
4 espaces intercostaux.
qu'on pique 3
bas en haut et d'avant en arrire, en inclinant lgrement droite.
On pntre brusquement, puis on retire lgrement Taiguille

de 2 ou 3 mm. La seringue doit tre tenue comme une plume
crire. La pointe de l'aiguille doit tre parfaitement intacte, afin
de ne pas blesser
le
myocarde.
Si on incline trop peu droite, on pi(|ue le ventricule gauche, ce qui

ne prsente pas d'autre inconvnient que de fournir le sang plus lentement. Si on incline trop droite, on longe le bord droit du cur et on
C. n. Soc. bioL, LXX, p. 712, 1911.

C. R. Soc. biol., 4 juillet lOu.Yoir aussi Balfour, Note on a method of obtainingr blood aseptically. 4"' fiep. Wellcome Laho. Khartoum. A. Med., p. 107, 1911.
2.
FLAGELLES
une ponction blanche.
manire que la pointe seule
fait
faut alors
11
soit
dans
la
499
retirer
un peu
l'aiguille,
de
paroi; on rectifie la position et
on pique de nouveau.
Ainsi pralique, la ponclion du
l'animal, condition qu'on ne lui
mme
animal peut
(Hre
cur est sans danger pour

prenne pas trop de .^âng. Un
ponctionn
plusieurs
fois,
avec des
intervalles.
On
aspire le sang lentement et, lorsque la seringue est remplie,
brusquement. Bien entendu, si on doit aspirer

on laisse l'aiguille en place. Dans les deux
seringues,
plusieurs
cas, on se hle de rpartir le sang dans les tubes renfermant la
on
retire Taiguille
glose liqufie.
Un
garnit de sang
un second aide
aide prsente les tubes l'oprateur qui les

les saisit et les roule entre les
doigts, pour effectuer le mlange du sang et de la glose. On les

incline ensuite (fig. 261) et on les laisse ainsi pendant douze
heures, de manire a assurer
la solidification.
Si la glose est trop chaude, le sang est cuit et devient noir. Si

on a trop agit le mlange, il se forme une mousse persistante.
Des tubes bien russis doivent prsenter une glose rouge sang,
A la base de la couche de gele, il doit y avoir
bien transparente.
une certaine quantit d'eau de condensation.

J'ai vu Mauceaux oprer seul de la manire suivante. Le Lapin
un plateau mtallique et les tubes de glose

sont liqufis au bain-marie et placs ct du Lapin. On ponctionne le cur et on remplit la seringue. Pour rpartir, on continue
tenir la seringue de la main droite, le pouce pass dans l'anneau.
est bien attach sur
De la main gauche on dbouche chaque tube, on le prend, on y

verse environ 2 cm-^ de sang, on le rebouche sommairement et on
le replace au bain-marie. On doit faire 12 13 tubeSj avec une
seringue de 20 cm^ de sang. Lorsque la seringue est vide, on
reprend les tubes un par un on bouche fond, on flambe l'orifice
et le coton, on roule soigneusement entre les doigts pour bien
:
et la glose et finalement on incHne.

ftuve 37 pendant quelques jours et on
tubes
place
limine ceux qui prsentent un dveloppement microbien. Cet
mlanger
On
le
sang
les
accident est trs rare lorsqu'on opre avec soin.
Ensemencement.
On ensemence
l'eau de condensatiou; au cas
les
Trypanosomes dans
o cette dernire ne
serait pas assez
abondante, on ajouterait un peu de solution physiologique strilise. Ce milieu convient aussi bien aux Trypanosomes des Pois-
METHODES SPECIALES
bOO
sons qu' ceux des Maumiifres. Hrunipl a reconnu que les premiers donnent de plus belles cultures dans ces conditions que sur
des milieux au sang de Poisson (Raie, Chien de mer).
Pour Texamen, on pn'lve un peu de liquiile avec

une pipette strile ou encore, dans certains cas, on
enlve les petites colonies formes par les Flagells.
On examine en goutte pendante ou en frottis colors.
--^,
Les meilleurs
centrifugeant
obtenus, d'aprs Nicolle, en

additionn d'un peu de solution
frottis sont
le liquide
physiologique on aspire le liquide clair, on lave avec

un peu de solution physiologique et on centrifuge de
;
nouveau.
On
rejette alors le liquide et
on
tale le culot.
Pour prserver les tubes de la dessiccation, on les

capuchonne avec des capuchons striles ou mieux,
d'aprs Manceaux, on recouvre chaque tube d'un autre
tube strilis bouch Fouate (fif 185).
Milieu au sang chauff.
Mathis
est arriv
.
rypanosomes, ainsi que les Leishmania sur un milieu prpar en ajoutant simplement,
un volume de glose nutritive (ou mieux de glose
sale de Nicolle), un ou deux volumes de sang dficultiver certains
brin de
Buf ou
Le mlange
Fig. 185.
Pr
e d
de Cheval (ou d'un autre animal).

avec la glose refroidie aux
est effectu
environs de 50, aprs avoir t fondue 100. On

roule soigneusement les tubes, puis on les incline.
du double
Aprs soliditication, striliser, soit par plusieurs chaufMauceaux fagcs 75-80 OU 100'\ pendant une heure; soit
pour con- l'autoclavc
minutes. Les sub120, pendant
quinze
^
^
,
server les
tubes
de
milieu Nicolle
Original,
slauccs
toxiqucs pour les Trypanosomes se trouvent

mme temps.
Si l'eau de condensation est
'
dtruites en
.
insuffisaute, ajoutcr qiielques gouttes d'eau physiolo-
gique strile, avec une pipette strile.

Row - remarque que
liquide hmoglobinis.
l'hmoglobine est l'lment ncessaire pour la culture des Leish-
Milieu
mama
et
organismes voisins;
dissoute dans
un milieu
il
fluide et
est
ne
bon que l'hmoglobine soit

soit pas contenue dans les
hmaties.
1.
2.
C. R. Soc. de bioloi/ie, LXI, p. 550, 1906 et LXXI. p. 538, 1911.

R. Row, A simple haz-moglobinized saline culture mdium, for the
of Leishmania
and
allied Protozoa. Brit.
med. journ.,
I,
p. 1119, 1912.
growth
Il
FLAGELLS
aOl
comme
milieu de culture, de l'eau
propose donc d'employer,
comment il opre
de sang par ponction veineuse aseptique;
2. Dfibriner eu agitant avec des billes de verre;
sale addilionne de sang hmolyse. Voici

1.
Prlvera
3.
Hmolyser par addition de 8
strilise
cm'^
10 volumes d'eau
distille
Prparer une srie de tubes striliss, renfermant deux

volumes de solution de chlorure de sodium 1,2 p. 100. Chauffer
4.
y ajouter un volume de sang hmolyse. Le

chauffage dtruit le complment.
Avec o cm^ de sang, on peut l'aire une douzaine de tubes rences tubes 56 et
fermant chacun 5 cm^ de milieu liquide.
Ce milieu est trs conomique, facile prparer et permet de

conserver longtemps des cultures vivantes, sans risque de dessiccation. On peut le prparer avec un sang quelconque ou mme
du sang humain.
Les rcents travaux de M. Robertson paraissent devoir jeter un jour
nouveau sur le dterminisme de ces cultures. Elle a vu des Trypanosomes de Poissons entrer en division active lorsqu'on dilue le sangavec son volume d'eau ordinaire ou distille
ces divisions sont identiques celles qu'on observe dans l'estomac des Sangsues ou dans les
cultures. L'auteur explique ce phnomne par l'abaissement de la pres'
tout
sion osmotique du milieu et l'absorption d'eau par les Trypanosomes;
un rapprochement trs suggestif avec les expriences de Loeb

sur la parthnogense exprimentale. Peut-tre des actions physicochimiques remplacent-elles normalement la fcondation chez les Flagells, coifime elles peuvent la remplacer exprimentalement pour les
leufs d'Oursins.
Quoi qu'il en soit, ces faits concordent avec les observations de
Brumpt 2 ((ui, plusieurs fois, a vu des cultures demi dessches
reprendre une nouvelle activit, par addition de solution physiologique
qui venait diminuer la concentration du liquide.
elle tablit
On les recherche
Trypanosomes normaux des Bovids.
le
de
^
le
Delano
Prlever
sang aseptiquement la
par
procd
jugulaire, dlibriner, ensemencer 2 heures aprs dans du bouillon
ordinaire (3 cm^ de sang pour 10 cm'^ de bouillon). On peut repiquer sur milieu Nicolle.
1. Mai'iel Roberison,
Transmission of Flagelltes living in the blood of certain freshwater Fishes. Phii. Trans. Ro'j. Soc. Londoii, CCII, p. 45, 1911.
2.
Communication verbale.
3.
nul/. .Soc. pnthol. r.rot., n"
2.
1011.
CHAPITRE
III
SPIROCHTES
ET ORGANISMES SPIRALES
Nous runissons
aux Protozoaires
ces organismes
(section des
lieu de
Flagells) pour simplifier notre expos. Ce n'est pas ici le
discuter leurs affinits; mais, comme les mmes mthodes tech-
niques s'appliquent tous les organismes spirales, nous croyons

plus commode d'exposer toutes ces mthodes dans le mme chapitre.
L'tude pratique des organismes spirales prsente des difficults

particulires, en raison de leur petit
qu'ils prsentent quelquefois
men
l'tat frais
noir
208).
(p.
sera
pour
les
grandement
volume
et
du peu
d'affinit
matires colorantes. L'exa-
facilit
par l'emploi du fond
Gomme pour les Trypanosomes, on

Matriel d'tude.
pourra demander un laboratoire une Souris inocule avec, par
exemple, Spirochta gallinarum.
riches. L'enduit denlaire, qui existe,
On aura ainsi des frottis trs

mme chez les personnes les
plus soigneuses, dans le sillon situ entre la gencive et la dent,

fournira plusieurs types de Spirochtes en grande abondance.
Pour l'tude des grosses espces on prendra le S. Balhianii qui
existe dans la tige cristalline de THuitre. Les lsions syphilitiques
permettront de se ])rocurer en abondance des Trponmes. On
obtient assez facilement le Spirochxla plicatilis^ en laissant
pourrir dans l'eau des Algues d'eau douce.

De trs nombreuses mthodes ont t proposes pour la coloration et la recherche des organismes spirales. Nous n'avons pas la
prtention de les signaler toutes, d'autant plus que certaines sont
peu rationnelles, de peu de valeur, ou font double emploi avec des
procds dj connus
et
prouvs.
SPIROCHTES ET ORGANISMES SPIRALES
o03
Avant de passer au classement et l'tude de ces mthodes,

pour les dbutants, deux procds qui permettent de
dceler, coup sur, les Spirochtes dans les frottis. On colore
j'indiquerai,
Giemsa rapide ou le panchrome de Pappenheim, soit

plus simplement encore par le violet de gentiane phniqu ou
aniline (p. 512^ Dans ce dernier cas, on tixe l'alcool absolu
(10 minutes) ou au besoin la flamme (3 passages dans la flamme
d'un bec Bunsen, la face du frottis tant tourne en haut) et on
colore une ou deux minutes, en chauffant jusqu' apparition de
vapeurs. Ces deux moyens trs simples donneront des rsultats
soit
le
par
certains.
Pour mettre un peu d'ordre dans les mthodes de coloration,

les diviserons d'abord en deux
groupes mlhodes four les
frottis, mthodes pour Ips coupes d'organes. Dans chacun de
nous
ces groupes, nous tablirons des sections suivant la nature chimique du colorant. Ces mthodes conviennent indistinctement
pour l'tude des Spirochtes sanguicoles

organismes spirales, y compris
le
et
de tous les autres
Treponema pallidum.
Nous n'tudions pas part la fixation, car elle varie suivant la

mthode de coloration. Nous pouvons dire cependant que la fixation la flamme est un mauvais procd, dont il faut autant que
l'emploi. Les alcools thylique ou mthylique
osmique en vapeurs donnent au contraire de trs
bonnes fixations. Lenartovicz et Potrzobowski ont montr qu'il
viter
possible
absolus, l'acide
faut choisir le fixateur

et
les
que
divers
le
plus convenable pour chaque colorant

produisent des variations sensibles
fixateurs
dans l'paisseur des organismes spirales-.
I.
MTHODES POUR
LA
COLORATION
DES FROTTIS
1.
La supriorit incontestable de celte mthode sur toutes les

autres provient de ce que le fond de la prparation est trs peu
color et que les divers lments qu'on
y rencontre prennent des
].
0.
Centralblait fir Bakteriologie. fjrig.. LVI, p. 186-191, 1910.

Voir aussi C. Dolicll. Rcsearchcs ou Spirochacts. Arrhiv. f. Protistenkunde,
XXVI.
p.
l-.'3-l-28,
l.i-2.
504
MTHODES SPCIALES
Ions diffrents. Ces conditions
facilitent
beaucoup
notamment des Trponmes.

Procd lent.
Procds de Giemsa.
a.
des Spirochies et
frottis
immersion dans
'
jiar
l'alcool absolu
la
recherche
Fixer
le
pendant 10 minutes
(p. 630).
Colorer par
(1 goutte
Giemsa dilu dans les proportions ordinaires

cm^ d'eau distille, p. 408). kw bout de 10 minutes,
le
1
pour
le mlange colorant et laisser

agir au moins 30 minutes.
Ce procd est bon, mais il est long il exige au moins une
heure pour la fixation et la coloration. Pour des travaux de simple
diagnostic, il n'est pas ncessaire d'effectuer une fixation aussi
parfaite. On a donc cherch le moyen d'abrger la fixation et la
renouveler
coloration
de
sont venus les procds ra})ides.
Procds rapides.
Je mentionne simplement l'ancien
procd chaud de Giemsa -, qui a cd le pas son nouveau
b.
rcijyide (p. 410); bien plus facile excuter et donnant

des rsultats trs suprieurs.
procd
Procds
de
Pappenheim.
La
mthode
pnnoptique
405) et le panchrome de Pappenheim (p. 411)

aussi, en un temps trs court, d'excellentes colorations.
(p.
donnent
Procd de Iloffinann et Halle.

11 consiste colorer au Giemsa lent,
aprs fixation aux vapeurs osmicjues par la mthode de Weidenreich
(p. 029). C'est une excellente mthode qui mrite d'tre recommande.
Autres procds drivs de la mthode de Romanousky
Nous ne ferons
que signaler les procds de Goldhorn et de Leishman (p. 413). Us
ne donnent pas de rsultats suprieurs ceux que fournissent les
divers procds de Pappenheim et de Giemsa, notamment sa dernire
mthode rapide froid.
Le procd de Mac-Neal fait double emploi avec le panchrome de
Pappenheim. Nous savons en effet que Mac Neal emploie le violet de
mthylne, au lieu de l'azur de mthylne, pour produire la raction de
.
Romanovsky
2.
(p. 390i.
Mthode des colorants basiques.
Cette mthode, qui consiste employer des solutions concende bleu de mthylne, de divers violets, de fuchsine
tres
1. Pour la recherche des Trponmes, le frottis sera fait avec les prcautions
habituelles (p. 513). On s'efforcera d'obtenir, la priphrie du chancre, de la
srosit aussi peu mlange de sang que possible,
2. Giemsa, Beitrag zur Filrbung der Spirochato pellida (Schaudinn) in Ausstrichpraparaton. Bisch. mnd. AVoch.. n" 17. l'.'OT.
SPIROCHETES ET ORGANISMES SI'IRALS
oOo
basique, donne
les coioralions monochromes. Le

procd leclisimple et russit coup sr, mais il prsente le
grand inconvnient de donner une coloration uniforme et intense
de toute la prparation. Les organismes spirales sont Lien colors,
est 1res
nique
mais
ils
ne ressorlent ni sur
les autres
lments, dont
la
le
fond de
la
prparation ni parmi
comme tona-
coloration est semblable
en rsulte que le travail de recherche peut tre

pnible lorsqu'il y a peu de Spirochtes. L'emploi des colorants basiques en solutions phniques a t prconis surtout
lit et
intensit.
Il
trs
par Bandi et Simonelli^

11
existe
un
trs
et
par Ehrlich
et
Lenartowicz
-.
grand nombre de procds. Nous n'numre-
rons que les principaux.
A.
Coloration par les bleus basiques.
Sabrazs colore avec sa
solution de bleu de mtiiyine 1 p. oOU (p. 625). Les Trponmes restent
incolores sur fond bleu.
Gradle^ mlange parties gales trois solutions de bleu de mthylne

cyanure de potassium et d'iodure de potassium. Il colore
les Trponmes en une minute.
Mandelbaum+ se sert du bleu potassique de Lfder. additionn de
lessive de soude dcinormale (une goutte de cbaque) pour obtenir une
coloration vitale des Trponmes en goutte pendante. Examiner les
bords de la goutte avec l'objectif immersion.
Leporsky colore in vivo le Spirochla reciirrentis en ajoutant sur lame,
une goutte de sang, une trace d'un mlange de bleu de crsyl l)rillant
et de Sudan lit. pulvriss au mortier d'agate.
B.
Coloration par les violets basiques.
Davidson prconise le
Krsylviolet R extra de Miilheim en solution aqueuse.
alcalinis, de
Gunter emploie
le violet aniline aprs fixation l'alcool.

Herxheijicr colore par la solution aqueuse sature de violet de gentiane; Oppenheim et Sachs par le violet de gentiane phniqu ( chaud).
Sudakevitch (ixe par immersion dans l'acide osmique 0,5 p. iOO et
colore par le violet aniline.
Klausner fixe par les vapeurs osmiques 1 p. i'OO et colore chaud

(mission de vapeurs) par le violet aniline.
Proca et Yasilescu-' mordancent 10 minutes dans
:
Eau
Fuchsine 2,5 p. 100 dans
Acide phniqu
l'alcool
absolu
1.
2.
3.
1.
5.
le violet
phniqu.
med. Wocli., n 35, 1905.

Wien. med. Woch., p. 1018, 1908.
amer. med. assoc, L, p. 1665-1666, 1908.
Miinch. med. \Yoc1i., LIV. p. -i-^S. 1907.
Mi'iich.
Joiirn.
r. n. Soc. do bioloijie,
LVIll.
100 cm3
100
50 gr.
40
Tannin
puis colorent 10 minutes dans
....
p. 1041, 1905.
MTHODES SPCIALES
506
Ballenger^ prconise l'emploi du violet dahlia, (jui, d'aprs lui, colore

les Trponmes beaucoup mieux que le Giemsa. 11 fait une solution de
dahlia 10 p. 100 dans l'alcool 90" et prend une partie de celle solution
pour 9 parties d'eau.
Zweig applique sur la lsion syphilitique une bouillie faite en broyant

un peu de violet de mthyle avec quelques gouttes d'eau. Aprs deux
ou trois minutes, on aspire de la srosit colore et on porte sur une
lame. On dilue avec de l'eau distille. pour examiner. Les cellules et les
Bactries se colorent en bleu fonc, les Trponmes en bleu ple.
G. Coloration par la fuchsine basique.
Lennrtovicz et Polrzobowski 2 obtiennent une coloration tii/aiice, avec laquelle les Trponmes apparaissent en clair sur fond rouge. Voici comment ils oprent
1. l'Lxposer pendant 5 secondes une lame bien
propre aux vapeurs
d'une solution d'acide osmique 1 ou 2 p. 100;
2. l'excuter rapidement le frottis;
3. Fixer humide par les vapeurs
osmiques pendant 10 20 secondes,
puis attendre la dessiccation (mthode de Weidenrcich, p. 629);
4. Colorer une minute au Ziehl (15 cm-' de solution
alcoolique concentre de fuchsine pour 85 cm^ d'eau phnique 5 p. 100);
5. Laver, scher, examiner dans l'huile de cdre. Une prparation
bien russie doit prsenter une surface rouge, brillante et comme laque.
Les Trponmes paraissent augments de volume, ils sont plus pais
qu'avec le procd l'encre de Chine et par consquent trs visibles.
Les flagells sont colors en rose ple. Le Sp. refringens se distingue

facilement sa coloration rouge fonc.
Borrel et Burnet ^ emploient le procd de Loffler pour la coloration
des cils (p. G99). Cette mthode permet, dans certains cas, de mettre en
vidence la membrane ondulante {S. gallinanim, S. balautidis, etc.); elle
russit surtout aprs une lgre macration du frottis dans l'eau distille ou le taurocholale de sodium 10 p. lUO.
Ueitmann colore par le Ziehl chaud, aprs mordan(;age pendant
cinq minutes dans l'acide phosphomolybdique 2
3.
p.
100.
Mthode des imprgnations mtalliques.
Nous diviserons ce paragrajthe en deux sections, correspondant chacune un mtal.
1
Il
Imprgnation par
existe de
les sels d'argent, a. Nitrate d'argent.
nombreuses
nitilhodcs
pour rimprgnation des
du procd classique
de Van Ermengen pour la coloration des cils des Bactries.
Procd de van Ermengen.
1. Fixer le frottis pendant
Spirochtes sur les frottis
toules drivent
trente minutes froid ou
L
2.
une minute
Journ. amer. med. assoc. n

Loco citalo, p. 502. note 1.
:i C.
R.
.Soc.
20,
LIIL
de biologie, LX, p. 212, 1906.
o()
dans

Solution aqueuse de tjinnin 10
2.
3.
lUO
p.
Laver Teaii, puis Talcool absolu

Imprgner une ou deux minutes dans
goutte.
Eau
Sans
Eau
laver, porlerune minute dans le ])ain rducteur.

5 gr.
10
350
distille
Sans
r.
200 cm3.
distille
Acide gallique
Acide tannique
Actate de sodium fondu
5.
16
Nitrate d'argent crist
4.
507
8 cm"^
cni'"^.
laver, reporter dans le bain d'argent jusqu' coloration
noire.
scher monter au baume. Le rsultat est excellent.
6. Laver,
Procd de Yamamoto ^
suit,
Yamamoto
a modifi
en 1907, lancien procd de Van Ermengen.
ensuite
Texamen des
Il
comme
il
Ta appliqu
Protozoaires.
1.
Etaler
2.
Imprgner dans
organismes avec un peu d'albumine sur une

lamelle parfaitement propre. Scher Tair et fixer la flamme.
les
d'argent 5 p.
nitrate
le
100 pendant
vingt-quatre heures 37^.

3.
Rduire pendant dix minutes dans
Acide pyrogallique
Acide tannique.
Eau
Ce bain
2 gr.
2
100
distille
doit, autant
que possible,
cm^
tre prpar depuis vingt-
quatre heures.
4.
Essuyer dlicatement
le
prcipit
noir
avec un buvard
mouill. Laver, scher, examiner.
Ce procd, qui peut
pour certains travaux de

deux graves inconvnients la
tre excellent
bactriologie, prsente, notre avis,
fixation brutale et le prcipit noir trs gnant. Ces dfauts se

font surtout sentir dans Ttude des Spirochtes, lors de la
recherche des granules. Aussi

Buchanan, de manire viter
a-t-il
la
modifi par Balfour et
fixation la
flamme
et
cipil.
1.
Centralblatt
f.
Ba/ct., Orifj.,
XLVII,
p. 570, 190S et
LUI.
p. 38, 1910.
le jir-
METHODES SPECIALES
508
Procd de Balfour
et
Buchanan K
Ce
})i-ocd est })arLicu-
lirenient indiqu pour l'tude des granules endoglobulaires, dans

les maladies Spirochles.
1.
2.
Fixer
Laver
pendant dix minutes.
les frottis lalcool absolu
froid
Teau
distille.
3. Imprgner dans le nilrate d'argent 5 p. 100. Les frottis

sont mis face en dessous, reposant sur deux baguettes de verre,
dans une cuve de verre renfermant 10 centimtres cubes de solu-
tion argenti([ue.
Vaseliner
le
couvercle avec soin et mettre pen-
dant deux jours 37.

4. Laver fond pendant dix minutes Teau courante.
0.
Rduire pendant une heure
37 par
Acide pyrogallique
Acide taniquc
Eau
6.
7.
du
2 gr.
1
100 cm-'.
distille
Laver de nouveau fond

Deuxime bain rducteur
l'eau courante.
37,
pendant deux jours, dans
liquide frais.
8.
Dernier lavage fond Teau courante. Scher. Monter.
La russite de
la
prparation dpeml de
la
perfection des lavages.
Ce procd est trs rapide

Mordancer, pendant trente secondes, en chauffant lgrement, par
une solution aqueuse de tannin 5 p. 100.
2. Laver l'eau pendant trente secondes.
3. Traiter, pendant vingt trente secondes, en chauffant lgrement,
par une solution de nitrate d'argent 5 p. 100, laquelle on a ajout,
goutte goutte, environ 9 cm^ p. 100 d'ammoniaque liquide. Le prcipit doit se redissoudre; verser ensuite un peu de nitrate d'argent
5 p. 100, de manire saturer l'excs d'ammoniaque et avoir un liquide
opalescent. Cette solution se conserve plusieurs mois.
4. Laver l'eau et scher.
b. Albuminalc d'argent.
Ravaut et Poncelle^ ont conseill l'emploi
de ce produit sous forme de largine de Lilienfeld.
1. Fixer les frottis par l'acide osmique;
2. Imprgner pendant deux heures 55 dans
Procd de FonLana.
1.
2 gr.
100 cm^.
Largine
Eau
3.
distille
pendant (luelques minutes dans

Laver l'eau distille, scher.
Rduire
5 p. 100.
Journ. of trop, med., XIV, p. 113, 1911.
'2.
Dcrmut. \Voclienschri/t, LV,
3.
C. TL Soc.
Iiiol.,
LXV\
p. 1003, 191-2.
p. 438, 1908.
l'acide
pyrogallique
SPIROCHETES ET ORGANISMES
Procd de Zt'itnow^.
SI'H'.ALKS
509
consisle
monlanccr par r.Mnlimoiiio cl

traiter par l'oxyde d'argent ammoniacal, prpar avec relh} lamine.
2 Imprgnation par les sels de plomb.
Ghoreyeb^ fixe les frottis
pendant 30 secondes dans l'acide osnii(iue 1 p. 100: il imprgne pendant 10 secondes dans une dilution au centime, frachement prpare,
de sous-actate de plomb liiiuide; il rduit pendant 10 secondes dans
une solution aqueuse 10 p. 100 de sulfure de sodium. 11 faut laver
fond l'eau distille entre chaque opration et rpter trois fois la srie
de ces trois manuvres, puis, pour finir, traiter encore 30 secondes par
la solution osmique. On lave une dernire fois, on sche et on monte
au baume.
II
- MTHODES POUR LA COLORATION DES COUPES
II.
Nous suivrons, dans TUide de

que pour
la
ces mthodes, la
mme marche
coloration des frottis.
En
ce qui concerne les coupes
ramne aux deux procds de Giemsa et de

Pappenheim, spcialement modifis pour les coupes (p. 414 et 416).
Mthode des imprgnations mtalliques.
Cette mthode
est, avec celle de llomanovsky, celle qui donne les rsultats les plus
d'organes,
se
elle
dmonstratifs et les plus srs. Les imj)rgnations de fragments

d'organes se font toujours au nitrate d'argent. A moins d'indications contraires (action rductrice de la lumire) les oprations
d'imprgnation
en verre jaune
et
et,
de rduction devroni se faire dans des flacons

autant que possible, l'obscurit. C'est l une
prcaution souvent nglige, d'o de nombreux insuccs. Il faut

aussi que le poids de nitrate d'argent dissous soit suprieur
celui des pices.
Les im]rgnations mtalliques jouissent d'une grande faveur,

parce qu'elles donnent des prparations trs nettes et trs durables.
Elles prsentent aussi l'avantage de russir parfaitement avec des
matriaux conservs depuis longtemps dans le formol.
Parmi
les
nombreux procds qui ont
t publis, j'ai choisi
ceux qui m'ont paru donner le plus facilement des rsultats

certains. Je ne dcris pas le procd primitif de Levaditi, parce
qu'il me parat faire double emploi avec celui de Yamamoto. Le
procd de Golgi, quoique un peu compliqu, est celui qui donne
les plus
1.
2.
beaux
rsultats.
Utsch. med. Woch., p. 376, 1906.

Journ. amer. med. assoc, 7 mai 1910.
510
MTHODES SPCIALES
Mthode de Levaditi
et Manoulian.
Celte mlhode, qui
une modification du procd })rimitif de Levaditi, est une des
plus employes en France. Ces deux procds drivent d'ailleurs
de celui de Cajal (p. 433 et 661), dout ils ne sonl qu'une modifica-
est
adapte
Fixation.
tion,
la
recherche des organismes spirales dans
Couper des fragments
les tissus.
trs
minces, ayant 1
2 mm. d'paisseur, et fixer vingt-quatre heures dans du formol
10 p. 100. Durcir dans Talcool 95 pendant vingt-quatre heures.
Au sortir de Talcool, jeter les fragments

Imprgnation.
dans un rcipient plein d'eau distille qu'on change une fois;
les y laisser
jusqu' ce qu'ils tombent au fond. A ce moment, les
transporter dans
fermant
un bocal en verre jaune bouch
l'meri, ren-
10 cm'.
90
Pyridine pure
Nitrate d'argent 1,5 p. 100

Il est
bon de suspendre
fragments d'organes des
les
fils.
Laisser douze heures 37 ou trois heures la temprature

ordinaire, puis trois cinq heures 4o'^'-50.
Rduction.
tion suivanie
Laver
l'eau distille, puis plonger dans la solu-
frachement prpare
Pyridine pure
Actone
Acide pyrogallique en solution aqueuse 4 p. 100.
15 cm^.
10
90
Laisser agir pendant douze heures.
Inclure
faire
et
la paraffine
ou au bleu de toluidine
Tther glycrique de Unna
20 cm^ d'eau
On
peut
dist.)
100, suivie d'une diffrenciation
(p.
427) trs tendu (10 gouttes pour
'.
Le procd de Yamamoto pour

coupes ressemble beaucoup celui que nous avons dcrit pour
les frottis (p.
La
507).
Il
fixation se fait
est trs vant
par certains auteurs.

de prfrence au formol; mais on peut
employer un fixateur quelconque

1.
d'habitude.
p.
Mthode de Yamamoto.
les
comme
couper
une coloration de contraste au bleu polychrome de Unna
Minassian
ment comme
il
[Giortt. ilal. d.
suit
mal. ven.
e.
(c'est
d. pelle, I,
le
grand avantage),
1910)
procde trs rapide-
l'' Fixer et
imprgner en vingt-quatre heures o^ dans nitrate d'argent 1.5,
formol 5, eau 50;
2 Rduire en vingt-quatre licures froid dans
acide pyroformol
10, eau 100. Renouveler quatre ou cinq fois ce liquide;
galliquo 3,5,
3 Dshydrater et inclure.
en
flacons
Oprer
jaunes.
511
])Our\u qu'il soil limin ensuite par un lavage convenable el

prolong. Si le matriel est conserv dans Talcool, on limine
un grand lavage de 24 heures Teau distille. On

imprgne pendant quarante-huit heures 37'' dans du nilrate
d'argent 5 p. 100. On lave Teau distille et on laisse ensuite
celui-ci par
vingt-quatre heures 31 dans le bain rducteur

on lave une heure l'eau distille. L'inclusion se
(p.
507), puis
fait la
paraf-
ou de prfrence au coUodion ^
Mthode de Golgi - pour la coloration de l'appareil rticulaire interne, applicable la recherche des organismes spirales
dans les tissus. Le grand avantage de cette mthode est de colorer
fine
en noir
les
Spirochtes seuls. Les tissus restent incolores et peuvent

un colorant de contraste lectif, tel que la safranine
tre leints par
ou mieux
le trichromique de Gajal (p. 426.)

Fixation. Traiter de deux six heures 30, suivant
1.
taille
des fragments, par
Formol 25
p.
le
mlange suivant
100
Alcool 90
Acide arsnieux^ en
2.
la
soi.
aq. sat
ca.
Imprgner, aprs un court lavage, dans
le nitrate
d'argent
100 pendant dix vingt-quatre heures.

3. Laver rapidement l'eau distille et rduire, pendant 8
24 heures, dans le rducteur de Gajal
1 p.
20 gr.
5 gr.
50 cm^.
1000
Hydroquinone
Sulfite de sodium
Formol
Eau
4.
Laver l'eau ordinaire, inclure
dparaffiner
5.
les
Virer par
coupes
la
paraffine,
et
couper
^.
le virage
de Gajal, en poussant fond au noir
1. Barannikov [Centrolbl. f. Bukt., Orig., L, p. 263, 1909) emploie une mthode

analogue. Il recommande d'imprgner 42*' et dans robscurit. Il passe les
organes, avant et aprs imprgnation, par une srie gradue d'alcools et non
directement de l'alcool 80 ou 90" dans l'eau et vice versa.
2. Golgi. Di un mctodo per la facile e pronta dimostrazione dell'apparato reticolaro interne dellc cellule nervose. Avch. ital. biol., XLIX, p. 269-274, 1908.
Gazz. med. lombarda. LXVII. p. 119-421. 1908.
3. L'acide arsnicux ne doit pas tre pris l'tat vitreux, mais en poudre ou
en cristaux.
4. D'aprs une communication verbale que je dois l'obligeance du D"" Aldo
Perroncito, de Pavie, Veratti fixe et imprgne soit par la mthode de Golgi
pour l'appareil rticulairc interne, soit par la mthode de Cajal pour les neurotibrilles (p. 433) et continue comme il va tre dit.
512
iMTIlODES SPCIALES
Snirocyanure d'nmmnniiim
liyposuUile de sudium
3 gr.
3
Eau
Chlorure d'or brun
6.
100 cm'.
1
p.
lOl)
quelques goutles.
Dcolorer, trs rapidement (une
prcaution, dans
trois
minutes)
et
avec
Permanganate de potassium
Acide sulfurique pur
gr.
1
Eau
000
50
cm^.
Au
6.
7.
besoin, allonger de son volume d'eau pour modrer Faction.

Blanchir dans Tacide oxalique 1 p. 100.
Laver kVddiW. et colorer les tissus par le trichromique de Cajal.
Mthode de Sabrazs et Duperie la Thionine picriqiie.

mlhode a, comme celle de Veratti, Tavantage de donner une colo-
Cette
ration lective des tissus, permettant leur tude anatomo-pathologique.

Imprgner les tissus par la mthode de Levaditi la pyridine. Colorer
les coupes la thionine phnique pendant 1 ou 2 minutes. Laver
fond l'alcool absolu, puis au xylol. A ce moment, dposer fextrmit
de la lame un ou deux cristaux d'acide picrique; balancer pour faire

lcher la coupe par le xylol picrique. Ds qu'on voit apparatre un ton
vert-pr, laver au xylol pur et monter au baume.
m. PROCDS SPCIAUX
1.
Ces
Spirochtes de grande taille.

en frottis humides par le Bouin,
formes doivent tre
Duboscq-Brasil ou le
sublim de Schaudinn, mais ce dernier, d'aprs Schellack, rend
souvent les organismes granuleux et mconnaissables. Colorer
ensuite rhmatoxyline alune ou f(M*rique.
fixes
le
Coloration ultra-rapide des Spirochtes sanguicoles

Arroser
(uniquement pour diagnostic rapide ou dmonstration).
le frottis d alcool 1)0 et allumer cet alcool. Quand la combustion
est acheve, recouvrir la lame de violet phniqu et chauffer
2.
de
vapeurs. Laver, scher, examiner. Bien

barbare
n'est pas recommander pour le
procd
travail ordinaire, mais il peut rendre des services et colore bien
jusqu'
apparition
entendu, ce
les Spirochtes
3.
du sang.
Recherche des Trponmes.

procds de diagnostic.
Examen, aprs coloration au
On
peut classer en six
catgories les
1.
Romanovsky.
des frottis
SPIROCMTES ET ORGANISMES SPIRALES
513
fails avec les produils pathologiques (srosit des lsions, i>rodiiit

de ponction ganglionnaire). C'est la mthode de choix.
S. Examen avec clairage fond noir.
L'emploi du fond
noir permet de faire trs rapidement
et
srement
le
diagnostic
parce que, dans les prparations frase

le
ches,
dislingue facilement de tous les autres
Trponme
Pour
tout ce qui concerne la technique de
organismes spirales.
microscopique de
la syphilis,
Fclairage fond noir, nous renvoyons aux pages 208 223 o

cette question a t traite. On examinera toutes les lsions suspectes, gnitales ou extra-gnitales, sans oublier le raclage de la
face interne des amygdales.
a. Lsions ouvertes. Pour

un bon examen, il faut faire sourdre, des lsions ouvertes, de
la srosit et non du sang. Cette srosit doit provenir du corps
papillaire du derme, o les Trponmes sont 1res nombreux. Donc
il faut dabord
nettoyer avec soin Tulcration suspecte, avec un
Prlvement de lexsudat.
faire
tampon de colon hydrophile lgrement imbib d'eau
strilise
ou
mme
d'lher de ptrole, comme le conseillent Arning et Klein,

de manire enlever toutes les crotes. Essuyer ensuite avec un
tampon sec et attendre quelques instants. Sur la surface nettoye,

on voit apparatre la srosit, qu'on recueille avec reffilure d'une
pipette strilise. On en porte une gouttelette entre lame et lamelle
parfaitement nettoyes et on
liite
la vaseline
ou
la
paraffine,
pour empcher l'accs de l'air et l'vaporation. On aura d'autant

plus de chances de russite que le prlvement aura t fait plus
^
profondment ou plus prs des bords. Wladissavlivitch insiste

sur la ncessit d'oprer sas violence, sans grattage, de manire
avoir de la srosit profonde pure, non souille de sang.
Il ne faut
jamais diluer la srosit avec de l'eau, qui gonfle le
Trponme et modiie sa forme au point de le rendre mconnaissable. Si
on
est
oblig de diluer la srosit,
il
faut
absolument
prendre de la solution physiologique.

b. Lsions fermes.
Quand il s'agit de lsions fermes, il
faut ponctionner de prfrence les parties marginales. Les papules
seront grattes trs lgrement. Dans les pustules et les bulles,

on prlvera la srosit au fond de la lsion.
Dans le champ du
2 Aspect du Treponemn pallidum.
on
130),
aperoit gnralement une foule d'lmicroscope (fig.
1.
Scriudnc mdicale, 6 mars
M. Langeron.
191-2.
Prcis de Microscoiuc.
33
METHODES SPECIALES
514
trs variables. Ce sont des hmaties,

contour circulaire trs fm; des leucocytes, plus volumineux, irrguliers, remplis de granulations ])rillanles; des cellules pilh-
ments de dimensions
liales sous forme de lambeaux de mosaque, gros lments polygonaux, finement granuleux, avec un gros noyau sombre. Dans
les espaces vides circulent des granulations de toute laille, plus ou
moins mobiles
et,
parmi
elles,
les
Trponmes, minces filaments
brillants, fines spires trs rgulires.
Suivant
la
mise au point, Fincidence de fclairage, flat de
mobilit, ces organismes se prsentent plus ou

moins nettement sous leur forme typique. Quelquefois la ^})irale
couservation,
la
est trs nette et les extrmits effiles bien visibles. D'autres fois
on ne peroit qu'une srie de ponctuations brillantes ou de

petites lignes obliques, rgulirement disposes en ligne droite ou
ces ponctuations et ces btonnets sont
quelque peu sinueuse
:
scintillants, par suite des
mouvements de fanimal.
Parmi ces mouvements,
il faut bien
distinguer les dplacements
propres de ceux qui sont ds aux courants. Les mouvements
j)ropres se manifestent par des ondulations qui parcourent la spire
d'un boAit fautre. L'animal se dplace ainsi, soit dans le pian de
un plan
vertical et oblique
dans ce
plus ou moins compltement et,
pour le suivre, il faut changer la mise au point. Mais ces mouvements sont trs lents et bien diffrents de ceux de tous les autres
la prparation,
dernier cas, on
soit
<lans
le voit disparatre
Spirochles. Ces derniers se dplacent trs rapidement, soit par

un vif mouvement de rotation, soit par des ondulations semblables
Le Spiroclita dentium lui-mme a des

mouvements plus rapides que ceux du Trponme. D'ailleurs, la
mobilit de ce dernier varie beaucoup, suivant la nature du milieu
(eau, srum artilciel, srum normal, etc.) et suivant la temp celles d'une Anguille.
rature.
3"
Diagnostic
Treponema pallidum
Il faut
savoir distinguer le
d'autres espces morphologiquement voi-
diffrentiel.
sines V
Dans
les
lsions gnitales.,
souvent associ au Trponme;

spirale est
moins serre
et ses
Spirochta refringens
il
est
est
trs
de forme plus trapue, sa
mouvements
sont plus brusques.
1.
D'aprs Mucha [Med. KUnik., p. 1498, 1908) les Trponmes paratraient
blancs, tandis que les autres organismes spirales auraient une teinte jauntre ou
515
On
peut trouver aussi, ce niveau, Spirochta balanitidis,

grosse espce, larges ondulations aplaties, extrmits arrondies;
Spirochta
gracilis, trs semblable au
moins rgulire
et
sans
cils
Trponme, mais
spire
terminaux.
Dans les lsions buccales, on peut rencontrer

Spirochta
buccalis organisme pais, double contour, ondul plutt que
membrane ondulante.
spirale, extrmits effiles et
:
Spirochta dentium, trs semblable au Trponme, mais plus

un peu plus mobile, tours de spires moins nombreux et
court,
plus serrs.
C'est peine
qui est ondul,
s'il
est besoin
de signaler le Spirochta Vincenti^

et souvent associ au Bacillus
mais non spirale
hastilis.
On
du
le diagnostic diffrentiel de la syphilis et

s'aidera surtout des signes cliniques, car le Trepo-
peut avoir faire
On
pian.
nema pallidulum
est si voisin,
morphologiquement, du T. palli-
dum, qu'il est bien difficile de les distinguer.

Le diagnostic devrait le plus souvent tre confirm par une
prparation colore^ qui seule peut donner une certitude
absolue.
3.
Examen par
la
mthode
l'encre de Chine.
Cette
mthode, sduisante par son extrme simplicit, a fait Tobjet

d'une foule de publications, surtout en Allemagne. Comme nous
l'expliquons ailleurs (p. 699), le procd original de Burri a t
adapt cette recherche particulire. Cette mthode a pour but
de fournir, par un
moyen beaucoup plus
simple, des images
analogues
que donne l'clairage sur fond noir. Le
examiner
est
mlang avec de l'encre de Chine et tal
liquide
celles
sur lame. Les lments figurs apparaissent comme des taches

claires, contours trs nets, sur le fond noir ou bruntre de
l'encre sche.
Voici
i.
comment on
doit pratiquer la recherche des Trponmes

comme il a t dit plus haut
:
Prlever l'exsudat sreux
513).
(p.
Mlanger sur lame une goutte de ce liquide avec une gale

quantit d'encre de Chine, prpare comme il est dit p. 700. Le
2.
mlange
que
rapidement
et aussi
parfaitement
possible.
Etaler en couche mince, soit avec une lamelle, comme pour

sang, soit simplement avec une effilure de verre ou un fil de
3.
le
doit tre effectu aussi
MTHODES SPCIALES
516
Le
plaline.
frottis doit avoir
nue coloration brun
ple.
Scher par
agitation, sans chauffer.

4. Exannner dans une goutte d'huile de cdre. Les hmaties^
forment de larges taches claires circulaires, les Bactries et dbris

cellulaires des taches de forme et de dimensions trs variables. Les
organismes spirales apparaissent sous forme de spirales claires

on les dtermine d'aprs leurs caractres morphologiques.
D'aprs Gins \ ce procd est appel remplacer toutes les
;
colorations, car, habilement employ, il montre mme les flagelles

des Trponmes. Pourtant, il n'est pas exempt de sources d'erreur
Barach ^ met en garde contre les Spirochles et formations analogues pouvant provenir de l'encre. Nous indiquons ailleurs
:
(p.
les
700)
prcautions prendre pour purifier l'encre.
4. Recherche du parasite dans le sang.

Nous liminons le
procd de Levaditi et Stanesco la ricine, parce qu'il n'est pas d'un
emploi pratique, cause de la chert de ce produit.
Nggcrath et Stachelin extraient au moins un cm^ de sang et l'hmolysent par au moins 10 fois son volume d'acide actique 13 p. 100.
Centrifuger nergiquement; taler et colorer le culot.

Nattan-Larrier et Bergeron hmolysent simplement par l'eau distille
10 cm3 de sang sont rpartis dans deux tubes de 100 cm^ remplis d'eau
on centrifuge nergiquement aprs hmolyse et on tale le culot.
Ravaut et Poncelic font tomber le sang goutte goutte dans 30 cm^
d'eau distille. On laisse coaguler, on lave le caillot et on l'imprgne
par la mthode la largine (p. 508).
:
5.
Biopsie
et
recherche du Trponme dans
des mthodes applicables aux coupes d'organes.

6.
Recherche dans des
frottis d'organes.
peu de travaux sur ce procd, mais

de faire
le
il
les tissus,
}'
est intressant, car
diagnostic rtrospectif de la s\q)hilis
et
par une
encore
il
permet
peut avoir une
grande imjtortance mdico-lgale.

Ds 1907, ZabeP indique qu'on peut fixer au formol des fragments d'organes et les conserver dans ce liquide. Pour dceler les
Trponmes, on coupe un
et
fragment du volume d'un haricot

pendant un quart d'heure. On essuie
on pratique une section frache, avec laquelle on
on l'imbibe d'eau
au buvard
1.
Cxins,
Centralhl.
Wien.
et
petit
distille
Zur Technik uud Verwendbarkeit des Burrischen Tusclicverfahrens.

f.
klin.
BakL,
Orig.,
Woch., n"
LU,
p. 620-625, 1909. Consulter aussi
26, 1909 et
qo 22, 1910.
2.
Journ. amer. met!, assoc, LV, p. 1892, 1910.
3.
Med.
Klinik.,
n''
20, 1907.
Hecht
et
AVilenko,
Fraser Gurd, Journ. amer. med. assoc. LIV,

excule
les frollis.
un colorant basique
Ceux-ci sonl colors,
soit
517
au Giemsa,
avec
soit
phiiiqu.
Plus rcemment, Duperie a montr que des pices conserves

depuis plusieurs mois dans le formol donnaient d'excellents rsul'
tats.
La
fixation doit tre pratique
avec du formol
10
p.
100
pices doivent rester longtemps dans ce liquide. Les frottis

schs^ puis fixs Talcool, sont colors au Giemsa alcalinis
les
(10 cm^. d'eau distille, XV gouttes de Giemsa, X gouttes de

carbonate de soude 1 p. 1 000).
Hecht et Wilenko - retrouvent le Trponme, par le procd
Tencre de Gbine, dans des organes conservs dans le formol. Il

suffit de gratter la surface de
l'organe, de diluer dans Feau
distille la bouillie
dilution
oi)tenue et de mlanger
plus haut (p. 515]
1.
2.
une goutte de
avec une goutte d'encre de Cbine,
Journ. maladies eut. et syphil., (6)

Dtsch. med. Woch., p. 6T>. 1910.
XX,
1909.
comme
il
cette
est
dit
CHAPITRE
IV
SPOROZOARES
1.
HEMOSPORIDIES
Pour ceux qui ne sont pas en pays paluMatriel d'tude.

den et n'ont pas de malades leur disposition, nous recommanles liuiosporidies des Oiseaux. Un des meilleurs sujets
d'tude, facile se procurer partout et trs bon march, est le
Calfat (Padda onjzivora], qui est expdi en Europe en grande
derons
quantit des les de la Sonde. C'est un Oiseau robuste, facile

nourrir (avec de l'alpiste, graine du Phalars canariensis), supportant trs bien de nombreuses prises de sang. 11 est gnrale-
ment porteur de gamtes de VHimno'proteus Danileirskyi ce sont

de gros parasites endoglobulaires, donnant avec le Romanovsky
de magnifiques colorations; on trouve assez frquemment des
:
Plus rarement, le Padda est porteur du

relictum, parasite encore plus intressant, car, au
lieu de trouver seulement des gamtes, on peut observer encore
Oiseaux
trs parasits.
Plasmodium
toute l'volution scliizogonique.
Les Singes
particulirement les Macaques (Macacus cynoPlasmodium trs voisins des

molgus) peuvent
et
tre porteurs de
humains [P. cynomolgi et espces voisines). On fera

donc bien, lorsqu'on aura de ces animaux sa disposition, de ne
pas ngliger l'exa.nen attentif de leur sang. Un hasard heureux
parasites
peut faire rencontrer un animal })arasil '. Ces Singes ne sont pas
trs chers (20 25 fr.) et sont faciles se procurer soit Paris chez
les
1.
marchands d'animaux du quai de
la
Mgisserie, soit Anvers
R. Blanchard et M. Langeron, Le paludisme des Macaques. Arch. de paraXV, p. 529-54->, pi. VIII et IX, 1912.
siloloyie,
SPOKOZOAIRES
OU Hambourg, dans
les jardins
zoologiques
519
qui les
expdient en
colis postal.
Enfin
les
animaux
sang froid (Grenouilles, Lzards
des Hmogrgarines, parasites

ments et dont l'volution est toute entire trouver.
fourniront
facilement
',
Tortues)
non pig-
Les mthodes que nous allons dcrire s'appliquent au^si aux

Babsies (ou Piroplasmes)
(cf. p.
Examen
1.
524).
l'tat frais.
Cet examen est indispensable pour tudier
les
mouvements des
Hmosporidies et les phnomnes qui accompagnent la fcondation. 11 faut, en outre, s'habituer faire le diagnostic chez l'Homme
et les animaux, par exajiien direct, sans coloration. Ce genre de
prsente pas de difficults particulires, lorsqu'on
bien la manuvre de l'appareil d'clairage et du dia-
ne
travail
connat
iris.
phragme
Voir page 623,
la
technique de Texamen du sang l'tat frais.

Chez l'Homme (p. 621), on prlve le
Prlvement du sang.
sang au doigt (pulpe ou face dorsale au-dessus de l'ongle). Chez les

petits Oiseaux, on ponctionne sans danger une veine de la patte ou
la patte, la veine qui passe sur le fmur au-dessus du
de l'aile
:
l'aile, une grosse veine qui passe obliquement sur l'hugenou

mrus. Chez le Singe, le mieux est d'inciser dlicatement l'oreille
;
fins
en procdant mthodiquement on peut faire
un grand nombre de coupures sur chaque oreille, en alternant, un
jour d'un ct, un jour de l'autre. Les premires coupures ont
avec des ciseaux
temps de gurir, avant qu'on ait us tout le contour et

qu'on
obhg de revenir au point de dpart. H n'est pas conseiller de prendre le sang la queue, car cet organe se gangrne
ainsi le
soit
facilement lorsqu'il est traumatis.
Des mthodes d'examen plus compliques ont

Biffi.
proposes par divers auteurs. Nous ne retiendrons que les procds
de Plelm et de Bifli, qui reposent sur remploi de Thuile de vaseline.
Plehn couvre le doigt de vaseline liquide, pique, puis recueille le
sang sur une lamelle huile, de manire empcher le contact de l'air.
Le procd de Biffi - est encore meilleur. On dpose une goutte d'huile
Mthode de
1.
cuit,
Maiiceaux conserve les Lzards de Tunisie en leur donnant du jaune d"uf

des pommes de terre cuites et un peu d'eau boire. Bull. Soc. pailiol. exot.,
V, p.
2.
3-]7,
1915.
Bull, dlie sci. mediche,
LXXIX,
1908.
MTHODES SPECIALES
520
de vaseline sur une lame, puis on tale le sang ou le liquide examiner

sur une lamelle, qu'on se hte de renverser encore humide sur Thuile.
La prparation, bien lute, se conserve plusieurs jours elle prsente les
avantages de la goutte pendante sans en avoir les inconvnients.
L'paisseur est gale, l'clairage gal, sans jeux de lumire comme sur
une goutle convexe. On peut examiner aux plus forts grossissements,
sans crainte de voir les organismes gagner la portion dclive de la
goutte et s'loigner hors de la porte de l'objectif. Cette mthode convient pour l'examen de tous les liquides organiques.
Pour des recherches spciales il faudra employer, la suite de
Schaudinn ', la chambre humide sur platine chauffante.
:
Diagnostic du paludisme l'tat frais-.
Cette recherche
suppose des pi'paiii tiens parfaites, dans lesquelles les hmaties

sont bien plat, non en piles, et lgrement spares les unes des
autres ou au plus conligu("s. Il est inutile de perdre son temps
examiner des prparations qui ne prsentent pas ces qualits,

moins que les gros parasites ne [)ullulent, ce qui rend le diagnostic
vident.
1.
Recherche des formes
jeune.''.
Elles tranchent sur le
ar leur teinte blanchtre, leur

fond jaune paille de Thmatie
aspect opaque, leur contour bien dfini. Lorsque ces formes sont
j
annulaires,
la
vacuole centrale laisse apercevoir, par transparence,
jaune de Thmalie; une portion de Tanneau est gnralement ])lus paissie. Quand le pigment existe, on n'en trouve
la teinte
qu'un ou deux grains. La recherche de ces formes jeunes,

est
frais,
excessivement
difficile,
exercs.
2.
l^lasmodies adu'tes.
nique.
le
l'tat
pour des micrographes
voit trs bien le parasite hyalin
prsence du pigment est pathognomodiagnostic spcifique est relativement facile. Le
qui remplit Thmalic

Ici,
On
mme
la
1. Consulter ce sujet le mmoire de Schaudinn sur le Plasmodiuni vivax,

Arb. aus. d. hais. Gesund/ieitsamte, XIX.
2. Mentionnons aussi le procd rcent d'Urriola {Semaine m'dicale du 4 janvier 1911), qui repose sur la dcouverte de pigment ralanique dans le sang et
surtout dans l'urine. On centrifuge cette dernire pendant cinq minutes et on
examine le culot un fort grossissement. En cas de paludisme, on trouve du
pigment noir trs abondant, bien caractris par sa couleur charbon. Il se prsente sous forme do grains plus ou moins groups ou agglomrs, quelquefois
inclus dans des leucocytes ou des plaques hyalines. Se mtier des causes d'erreur
(poussires diverses). A mon avis, cette mthode n'est indique que lorsqu'il est
impossible de dceler les parasites dans le sang. L'examen du sang- frais ou
color donne une certitude absolue et est en somme beaucoup plus rapide J'ai
essay moi-mme, en Tunisie, la mthode d'Urriola, sur des paludens avrs,
dont le sang tait richement parasit. Les rsultats obtenus ont t trs irrguliers et souvent trs incertains, quant la nature exacte des poussires trouves
.
dans
le culot.
SPOROZOAIRES
Plasmodium vivax
produit
une
521
globulaire
hvperlro})liie
trs
de pseudopodes trs mobiles. Le pigen fins btonnets d'un brun rougetre, surtout visibles
grandes formes. Au contraire P. malari atropbie le
nelle, riimalie est remplie
ment
est
dans
les
globule rouge, sa motilit est trs faible et son aspect plus comle parasite est toujours plus petit, moins diffus; le
pigment
en grains irrguliers, plus volumineux, de couleur brun cho-
pact;
est
colat.
Gamtes.
3.
Les corps
en croissant ont une forme trs sp-
renferment toujours un amas de pigment dans leur partie

moyenne; ils prsentent au hile un reste globulaire. Les gamtes
ciale et
sphriques remplissent
fournis de }igment.
4.
globule et sont toujours
le
Leucocytes pigments.
Leur importance
abondamment
est trs
grande,
faut bien savoir qu'il peuvent tre rares, mme dans des
cas svres. Pour les reconnatre sans erreur, il faut d'abord s'as-
mais
il
surer qu'ils possdent bien un noyau volumineux et ne pas les

confondre avec des cellules pithliales petit noyau, provenant
ventuellement de la peau. Les leucocytes pigments (ou mlasont
nifres)
presque toujours
noyau arrondi ou chancr.

Ce point tabli, examiner
le
des
grands mononuclaires,
pigment qui
est toujours
abondant
et
se prsente sous forme de btonnets ou de masses irrgulires. Il

ne faut pas le confondre avec les poussires qui peuvent souiller
la prparation, mais qui sont superposes aux
leucocytes et non
incluses dans leur masse, disperses dans toute la prparation et
non
localises.
En lumire
fringent
Le pigment
polarise
cette proprit
d'hsitation, mais
ment
est
trs
il
203),
le
pigment paluden
permet de lever tous
faut
opaque
libre est exce[)tionnel.
(p.
et
employer un
faiblement
les
fort clairage car ce pig-
birfringent.
cutan, qui peut aussi induire en erreur, n'a jamais

btonnets et n'est pas englob par les leucocytes.
L'emploi du fond noir est inutile;
est bir-
doutes en cas
les parasites
Le pigment
la forme de
pigments
et
beaucoup mieux en lumire

ordinaire, condition de diaphragmer convenablement. Le pigment noir tranche sur le fond clair de la prparation, tandis
les leucocytes mlanifres se voient
qu'avec le fond noir

cules de mme taille.
il
parait brillant,
comme
les autres
corpus-
METHODES SPECIALES
522
Voici quohiues sources de confusion qu'il suffit

Causes d'erreur.
de connatre pour ne pas se laisser tromper
Peuvent en imposer, mais n'ont
1. Vacuoles el fentes des hmaties.
pas de contours nets, pais, ni l'aspect blanchtre et opaque des vrais
parasites. Les fentes ont toujours une teinte rougetre et une rfrin-
gence particulire.
2. Crneliires.
Peuvent
faire hsiter lorsqu'elles apparaissent
la priphrie, mais la surface du globule. En variant la

on les voit devenir successivement brillantes et obscures.
des lvations de
3.
la surface (fig. 93, p.
Hmatohlastes.
156) et
Peuvent tre pris pour des
non
mise au point,
Ce sont donc
non des corps
inclus.
parasites lorsqu'ils sont
superposs aux hmaties. Mais ce sont des masses granuleuses diffuses,

n'ayant pas l'aspect opaque et le contour bien dfini des vritables
parasites.
4. Faux flagelles, qui se produisent au bout de ([uelque temps, aux
dpens des hmaties du sang anmique, et se dtachent pour flotter
dans le liquide de la prparation. Les vrais flagelles sont plus longs,
plus pais, mobiles, et naissent aux dpens d'un gamte pigment.
5. Hmaties replies ou contournes simulant des gamtes en croissant,
mais ne possdant pas de pigment.
2.
Examen aprs
Frottis desschs.
indique p. 626.
Ross (p. 628), on
fixation
la
et
On
ExciUer
peut essayer
la
coloration.
les iVollis selon la
mthode des
mthode
frottis pais
de
de Cropper et de James-. La
coloration se feront suivant une des nombreuses
^
les modifications
la mthode de Ilomanovsky (p. i04). Parmi ces

procds, ceux qui, mon avis, donnent les meilleurs rsultats
sont la mthode panoptique de Pappenheim (p. 405) et le pan-
variantes
de
chrome de Pappenheim
(p.
ili).
Pour un diagnostic rapide, on peut employer soit le bleu boracique

de Manson (p. 391) ou la solution d'azur II de Giemsa (p. 389), aprs fixation par l'alcool, soit la mthode de Sabrazs (p. G25) (coloration vitale
parle bleu de mthylne 1 p. 500). Il est encore plus simple d'excuter
la mthode rapide de Giemsa (j). 410), qui donne en cinq minutes une
prparation dfinitive.
du paludisme sur les

Ce n'est pas
Romanovsky.
Diagnostic
colors au
frottis
ici le
lieu
desschs et
de dcrire
les
Cropper, Rapid diagnosis of malaria, Brit. med. Joiuni., p. 891, 20 avril 191-2.
South, med. Joitrn., III, oct. 1911. Analyse dans Bull. Inst. Pasteur, X, p. 877,
191-2. Dposer sur la lame une goutte suffisante pour faire un grand frottis (7 mm';
mais ne pas taler. Scher. Dissoudre l'hmoglobine dans l'alcool chlorhydrique
(X gouttes pour 50 cm^). Laver l'eau, scher, colorer.
1.
2.
SPOROZOAIRES
523
formes de Plasmodies qu'on rencontre dans les prparations. Nous

voulons seulement mettre en garde contre les sources d'erreur.
et le volume du corps examin, il
une
Plasmodie, qu'on y dislingue nettefaut, pour que
ment une partie bleue et une partie rouge.
Dans les formes jeunes, les plus difficiles reconnatre, on
devra donc trouver ce noyau rouge et ce protoplasme bleu les
anneaux prsenteront, en outre, une vacuole incolore ou d'un bleu
trs ple. Si on n'arrive pas constater ces caractres, on ne
Quels que soient
la
forme
ce soit
pourra affirmer Texislence d'une Plasmodie.

Pour les formes adultes, la prsence du pigment s'ajoute aux
caractres chromatiques; il en est de mme des granulations
caractristiques.
1. Une des principales causes d'erreur

Causes d'erreur (voir p. 642).
due aux hinatoblastes superposs aux timaties. Lorsqu'ils sont isols
sur un globule, ils simulent un jeune parasite; lorsqu'il y en a plusieurs,
on peut les prendre pour les mrozotes d'un corps en rosace.
11
faut donc bien connatre ces corps, savoir qu'ils prsentent un
contour diius, un contenu g-ranuleux et qu'ils se colorent uniformment en violet, un peu plus fonc au centre. Jamais ils ne prsentent
est
un contraste net de rouge et de bleu, comme les vrais parasites.

Un amas d'bmatoblastes peut simuler un gamte, mais on se
d'erreur en constatant l'absence du pigment.
tirera
Elles sont quelquefois trs frquentes, surtout

fait dans de mauvaises conditions, avec une
gouttelette longtemps expose l'air. Elles peuvent avoir un contour net
2.
Vacuoles colores.
lorsque Ttalement a t
un aspect granuleux, mais ne prsentent pas les zones rouge et

bleue caractristiques des parasites.
C'est tout au plus si ces gra3. Hmaties granulations basophilcs.
nulations pourraient tre confondues avec celles de ScbfTner, mais
elles n'en ont ni la coloration rouge ni les dimensions et elles ne sont
et
pas accompagnes par un parasite.

4. Nous ne ferons que mentionner comme autres sources d'erreur,
les normoblastes granulations basophiles, les dbris de noyaux leucocytaires, les hmaties en demi-lune, les leucocytes eux-mmes et enfin
les corps trangers provenant de la peau sous forme de Levures, Bactries, poussires, pigment, etc. Dans tous ces cas, il suffira de rechercher s'il y a vraiment un parasite color en rouge et en bleu et renfermant du pigment.
Frottis humides.
Ceux-ci n'ont d'intrt que pour tudier la struc-
ture du noyau, aprs coloration par l'hmatoxyline ferrique. Pour tous

les autres dtails morphologiques, les frottis desschs et colors au
Romanovsky donnent d'excellentes prparations. Les frottis humides

faire les frottis sur
seront fixs d'aprs la mthode dcrite p. 484
lamelles et les dposer, face en dessous, sur le fixateur.
:
MTHODES SPCIALES
524
Babsies.
3.
La coloration des Babesia ne prsente pas de

obtient de trs ])eiles prparations avec
diflicnlts
on
toutes les variantes du
Ronianovsky, notamment avec les mthodes de Pappenlieini. Leur

recherche c Ttat frais, par contre, n'est pas facile cause de
la petitesse des parasites et de Tabsence de
pigment. On pourra
en faisant des examens de gouttes paisses,
techiiique indique p. 44)2, 522 et 628. J'ai dit combien je
trouve ce procd imparfait surtout pour les Babesia^ il pourra ne
tourner
suivant
la difficult
la
donner souvent que des rsultats bien douteux. Baldrey

ont indiqu
une
et Mitchell
sorte de coloration vitale qui peut permettre d'exa-
miner rapidement un grand noml>re iranimaux, pourvu qu'on ait

un laboratoire. On dfibrine le sang^ et on en mlange une petite
quantit, dans un verre de montre, avec une solution 1 p. 100 de
rouge neutre. On aspir le mlange dans une pipette de Wright,
on scelle l'extrmit avec prcaution, pour ne pas brler, et on
met 15 minutes Ftiive 37". On examine alors une goutte
du mlange entre lame
cl lamelle.
Les Babesia sont colors en
rouge-brique.
II.
COCCIDIES
Il est assez facile de se

procurer du matriel. Au printemps, la
Coccidiose du Lapin est frquente ^ La recherche des oocystes dans
les djections permettra de reconnatre les animaux parasits. A
dfaut du Cuccidium cuniculi^ on pourra rechercher le 6'. Schiibergi chez un Myriapode, le Lithobius forficalus^ frquent sous
les
pierres dans les bois ou sous les corces et facile conserver
en captivit
c'est
avec cette espce que Schaudinn a
belles recherches sur les Coccidies

cidie,
dans
il
faut isoler le tube digestif
la solution
physiologique ou, plus simplement, en coupant

et tirant l'intestin avec une pince.
deux extrmits de l'animal

1.
fait
ses
\ Pour se procurer cette Cocdu Myriapode, en le dissquant

les
Ou
Jourii. trop, vc'terinary sci., II, 1907.
Je crois qu'on peut oprer aussi bien avec du sang- citrate, ce qui est beaucoup plus simple. Employer comme d'iiabitude le citrate de sodium 1 p. 100.
3. Une question encore Ttude est celle des
kystes de Gilruth, parasites qui
se rencontrent dans la muqueuse digestive du Mouton, du Kanguroo, etc. Voir
ce sujet Gilrutli, Bull. Soc pathol. exot., III, p. 297, 1910 et Proc. Roy. Soc. Victoria. 24 (N. 8.), II, p. 432, 9 pi., 1911 Chatton, Arch. zool. e.pr., V, p. CXIV, lUlO.
2.
i.
Zool. Jarhb. Annt., XIII, p. 197, 1900.
SPOROZOAIRES
examine ensuite
pour en
52o
rtat frais, par dissociation,
ou on
fixe l'intestin
faire des
coupes.
peut encore reclierclier A'iossia helicina cliez Hlix hov-
On
comment on opre
Voici
tensis.
on casse
d'aprs Salomonsen
"2" tour de
spire; on
coquille prs de Torilice, au niveau du

enlve les dbris et on cherche le poumon
la
battre.
du cur
ct
se trouve le rein,
et le
cur qu'on
sous
la
forme d'une
et
aux ciseaux.
masse fusiforme jauntre, on le dtache la pince

On en dilacre une partie et on fixe le reste.
Au
bord de
la
mer,
les
Agrjregata du Poulpe
et
de
la
voit
Seiche
fournissent un merveilleux malrieP.
Examen
l'tat frais.
dans
parasits, soit
viscral
ou
le
Dilacrer Tpithhum des organes
la solution
physiologique,
srum de l'animal
soit
parasit, soit enfin
dans
dans
le
liquide
le
liquide
de von Wasielewsky.
Eau
200 cm3.
20
Blanc (l'uf
marin
Sel
Frottis.
gr.
apposition (p.
Secs ou humides; pour le foie, de prfrence par

(337). Colorer soit au Romanovsky, soit rhmaliin-
osine, soit Thmatoxyline ferrique.
Pour
diagnostic de la coccidiose aviaire, produite par le Coccidium

aux tats-Unis, Hadiey 2 recommande de faire
des frottis. On place au centre d'une lame un peu de djections ou un
le
cuniculi et trs frquente
petit fragment d'pithlium. Recouvrir d'une lamelle, presser lgrement

pour craser, puis tirer la lamelle vers la droite, de manire taler la
matire. Si le contenu intestinal est trop compact, diluer avec un peu
de srum, de liquide d'ascite ou de solution physiologique et faire le
frottis de mme. Hadiey convient que le Romanovsky donne une coloration nuclaire trs dlicate, mais il lui reproche de ne pas colorer
lectivement les Coccidies aussi prfre-t-il la mthode propose par

Ira van Gieson (^'oir p. 542) pour la coloration des corps de Negri
Mlange de van Gieson (ne se conserve pas plus de vingt-quatre heures)
;
Eau
10 cm^.
distille
Sol. alcoolique sature de violet de rosaniline^,

Sol. aqueuse de bleu de mthylne 50 p. 100.
Arch.
et
H
X
gouttes.
Protistenhunde, Xll, p. 44-108, pi. V-VII. 1908.

Paris, ^Masson, collection des prcis mdi-
Duboscq,
E.Lger
Brumpt. Prcis de Parasitologie,
1.
caux. 1010
cf. p.
f.
37.
P.-B. Hadiey. Regarding the value of the van Gieson and thc Romanovsky
malarial stains for the dtection of Coccidia. Centralbl.f. Bakt.. Oric/., LU, p. 1472.
150, 1909.
.3.
Je donne cette indication sous toutes rserves. En fait de violet de rosaniline

mlange de Hanstein (parties gales de violet de mtliyle
je ne connais que le
et de fuchsine).
MTHODES SPCIALES
526
Fixer les frollis Talcool absolu, les couvrir avec le mlange de

van Gieson, chaulTer avec prcaution jusqu' apparition des vapeurs,
et scher au buvard.
Les hmaties sont rouge orang avec noyau bleu; les cellules pithliales ont leurs noyaux bleu fonc et leurs cytoplasmes bleu ple;
le tissu conjonctif est bleu
les coccidies sont rouge vif l'tat de
rojeter le colorant, rincer l'eau
schizonle, rose ple l'tat de gamtes.
Fixer les pices au Bouin, au DuLoscq-Brasil, au

sublim actique ou au Flemming, suivaut le rsultat obtenir.
Coloration approprie au fixateur.
Coupes.
On peut cultiver facilement les oocv stes

Exprimentation.
il suffit de
du Coccidium cuniculi
recueillir des crottes de
:
Lapin, que Texamen microscopique a montres riches en parasites

et de les mettre en chambre humide, par exemple dans une bote
de Ptri, la temprature ordinaire. Il sera bon de ne pas fermer
couvercle de
le
hermtiquement
la boite, afin d'viter
possible le dveloppement des Moisissures.
jour par jour,
On
autant que
pourra suivre
ainsi,
dveloppement des sporozotes lintrieur du

prlevant une parcelle de la culture.
le
sporocyste, eii
11 est assez difficile de se
procurer des animaux neufs pour les
d'infestation.
Dans
certaines rgions, et noiamment
expriences
presque
Paris,
tous les Lapins ont la coccidiose au printemps;
aussi faut-il, pour les expriences, lever une porte avec des
soins particuliers, pour que les petits ne s'infestent pas avec des
de Choux ou d'autres herbages.

infester les larves de Blaps mortisaga avec Adelea
^
il broie des
zonula, voici comment procde Moroff
sporoc\ stes
feuilles
Pour
mrs avec
le
de manire
corps graisseux de Thle et un peu de son mouill,
une
faire
sorte de bouillie qu'il
donne
manger aux
larves, maintenues jeun auparavant pendant quatre ou
cinq
jours.
Au
bord
Portunus
de
mer, on obtient assez facilement,
la
chez les
schizogonique des Aggregata dont la sporogonie a lieu chez les Cphalopodes. Il suffit de
donner aux Pagures et aux Portunus des intestins de Seiche ou
et
les
de Poulpe infests
Pagurus"^^
1.
Arch.
state
on reconnat facilement ces derniers au semis
de petits kystes dissmins
2,
le
la
surface du tube digestif.
f. Protistenkumle, VIII, p. 18, 1906.

Ceux-ci sont souvent infests naturellement.
SPOROZOAIRES
GREGARINES
III.
On
527
trouve ces Protozoaires dans l'intestin d'un grand nomljre

notamment des larves d'une foule d'Insectes. La
d'Invertbrs et
du Tenebrio molitor (Ver de farine), qu'il est facile de

se procurer chez les oiseleurs et les marchands d'animaux, quelquefois aussi dans les boulangeries, est presque toujours parasite
larve
par une trs belle espce ^ Dans les testicules du Lombric (au
niveau des segments 11-13) on trouve frquemment, surtout au
printemps, le Monocystis ngilis, espce trs mobile. Le Sty-
lorhynchus longirostris,
dans
l'intestin des
Homard
se trouve
belle
Grgarine
Blaps morlisaya
trois
adulte.
vit
segments,
Dans
l'intestin
du
souvent une Grgarine gigantesque {Porospora
gigantea).
Vexamen
Vtat frais est trs facile. Pour tudier la locomoon

tion,
peut mettre en suspension dans le liquide des grains de
carmin ou un peu d'encre de Chine. Les colorations vitales
dmontrent l'existence d'inclusions particulires
les grains
car-
minophiles se colorent par le picrocarmin ou le carmin actique.

Le Lugol met en vidence les grains de paraglycogne de Biilschli
(colors en jaune bruntre).
Les f'roftis ne sont pas conseiller,
ces
animaux
II
est prfrable
de
les
cause du volume de
monter
la glatine glyc-
du lvulose ou au sirop d'Apathy. On peut leur

appliquer la mthode de fixation par l'acide osmique ou par la
quinone 4 p. 1000 (p. 617). On peut enfin les monter dans du
formol 5 p. 100, simple ou lgrement picriqu (voir p. 538 le
procd de Brumpt pour les Infusoires); on lute au lut de Kronig
rine, au sirop
qui tient trs bien et ferme hermtiquement.

Par contre, l'tude du contenu des sporocystes se fera par la
mthode des frottis secs ou mieux humides. On colore au Roma-
novsky ou par une teinture d'hmatoxyline.

Les pices destines tre coupes seront
fixes par les pro-
cds habituels.
Outre les colorants classiques, on se trouvera bien d'employer l'excellente mthode de Mallory qui, malheureusement, ne fournit pas de
les coupes la paraffine sont d'abord colores
rsultats constants
:
1.
Kuschakewitsch, Arch.
f.
Protistenkunde, Suppl.
1,
p. 202-249, 1907.
MTHODES SPCIALES
528
1
p. 100 pendant 1 3 minutes, puis, aprs
lavage l'eau, plonges dans de l'acide phosphomolybdique 1 p. 100
pendant 1 2 minutes, et enfin bien laves, puis colores cinq minutes
dans
dans
la
fuchsine acide a
Eau
200 cm^
Bleu d'aniline
0,5 gr.
Orange G
Acide oxalique
Laver rapidement
baume.
l'eau, passer
par les alcools, le xylol'et monter au
L'lude de la cuticule pourra se faire par les

tions mtalliques l'or et l'argent.
mthodes d'imprgna-
MYXOSPORIDIES
IV.
Nous joindrons ce grou])e celui des Microsporidies (cnidospores quatre noyaux el une capsule polaire), qui renferme un
]>arasite im})orlant, celui de la pbrine des Vers soie, le Nosema
Gomme
type de ce groupe, on peut prendre aussi le

Pleistophora blattae, parasite des tubes de Malpliighi du Pri-
bombycis.
le Giugea anomala de TEpinoclie [Gasaculeatus, peau, branchies, ovaire). Pour mettre en

vidence le filament spiral, garder 24 heures en chambre humide
avec un peu de teinture d'iode. Dans les cellules nerveuses
planeta orientalis, ou
trosteus
ganglionnaires de
le
la
Baudroie {Lophius piscatorius) on trouve
Doll., qui possde d'assez gros kystes.

Les Myxosporidies proprement dites (cnidospores deux capsules
Giugea loplni
polaires) sont
divers et
frquentes chez les animaux sang froid les plus

les Poissons et les Crustacs. Elles
notamment chez
forment de petits kystes la surface des tguments, des vaisseaux,

des branchies, du foie, de la rate, de la vessie urinaire (Myxidium Lieherkhni Biitschli, du Brochet, Esox liicius) ou natatrouve aussi dans les muscles {Myxobolus
du
Barbeau). On pourra les rechercher encore
Pfei/feriJ Thl.,
chez la Tanche et la Truite.
La dilacration des kystes ou des
Examen l'tat frais.
masses parasitaires montre les spores, dans lesquelles il faut
toire,
etc.;
on
les
les capsules polaires et le filament spiral.

drouler ce filament, on a propos de nombreux rac-
mettre en vidence
Pour
1.
faire
Voir Kcyssclilz, Arch.
f.
l'rotislcnlcunde, XI, p. 'ibl-Ti. 1908.
SPOIOZOAIRES
529
alcalis caustiques (soude ou potasse), acides

tifs
ou organiques
(chlorliydri(iue, azotique, sulfurique)
:
mme
ou
glycrine, solutions iodes
minraux
(actique),
eau distille et enfin suc
gas-
on est oblig d'taler les spores sur

trique de riile. Quelquefois
une lame et de les laisser scher l'air, avant de les traiter par les
alcalis
moyen
caustiques ou les acides minraux; c'est seulement au

de cet artifice qu'on arrive drouler le filament. La
putrfaction peut aussi rendre des services dans certains cas. Les
spores du /\osema bombycis sont excessivement rsistantes tous
ces ractifs.
La sparation des deux valves des spores

des
mmes
s'obtient par faction
ractifs.
Frottis.
De prfrence
frottis
humides.
les mtliodes
gnrales de coloration, nous signalede Schuberg et Schrder. Cette dernire

consiste colorer les objets en masse par le carmin boracique; aprs
inclusion la paraffine, on dbite en coupes de 3 5 tx et on colore,
soit par un colorant basique de contraste (bleu de mthylne ou vert
de mthyle), soit par le procd de Blochmann. On fait une solution de
bleu de coton (sel de sodium i de l'acide trisulfoniquo de la triplinyl-
Coupes.
Outre
rons celles de Mallory
(p. 527) et
0,05 p. lO dans la solution aqueuse sature d'acide

picrique et on colore les coupes dans ce liquide pendant douze heures,
puis on lave l'eau, on dshydrate et on monte au baume. Employer
le procd du xylol actique (p. 422). Les valves sont jaunes, le protoplasme et les capsules polaires sont verts et les noyaux rouges.
rosaniline)
11 est trs facile, d'aprs Balbiani, d'infester les

Exprimentation.
il suffit de badigeonner des feuilles de Mrier avec une
Vers soie
bouillie obtenue en broyant un Papillon malade et de nourrir djeunes
Vers avec ces feuilles. Les expriences sur les Poissons se font par
gavage avec du matriel infest. (Voir ce sujet le mmoire de Thlohan -.)
:
V.
Les animaux
Porc
et le
SARCOSPORIDIES
les plus
Mouton. Dans
frquemment
parasits sont la Souris, le
les abattoii^ parisiens,
on trouve presque
f sophage est plus ou moins farci de

toujours des Moutons dont
kvstes de Balbiania gigantea.
Les muscles des Souris infestes prsentent un aspect tendineux
1.
Blochmann
et Bettendorf prennent le sel de calcium, Schuberg et Schrder

de sodium.
Thlohan, Recherclies sur les Myxosporidies. Bail, scient. Fiance et Bel-
le sel
2.
gique, 1895.
M.
L.\ngf:ron.
Prcis de Microscopic.
34
MTHODES SPCIALES
530
trs particulier.
On
peut obtenir Tinfeslalion exprimentale de ces
animaux par ingestion de muscles de Souris

L. Ngre ^ Ngri-).
parasite (Th. Smith,
Vexamen
Vtat frais se fait simplement en dilacrant les

dans
l'eau
kystes
physiologique, simple ou lgrement albumine use.
et
Les frottis desschs se colorent trs bien par le Romanovsky

donnent d'excellentes prparations de spores. On a signal
rcemment des formes
libres
dans
le
sang.
Les coupes de muscles parasits seront

fix
1.
y.
par les procds habituels.
On
laites
sur du matriel
colore par les colorants usuels.
L. Ngre, C. R. Soc. de Biologie, LXTII, p. 374, 26 octobre 1907.

Negri, Beobachtungen iibcr Sarcosporidieii. Ceutralil. f. Uakt., Oriij., XLVII,
p. 56-Gr, 1908.
CHAPITRE
INFUSOIRES
Il
trs facile
esl
gnautes,
paille,
les
de se procurer des Iiifiisoires les eaux staet macrations de dbris vgtaux (t'oiu,
:
iufusious
feuilles,
fumier de
Cheval, etcr) renferment d'innom-
brables individus d'espces varies. Il est plus difficile d'obtenir

des cultures pures d'une espce donne. Le moyen le plus
videmment d'ensemencer, avec un seul individu de

en
l'espce
question, linfusion nutritive strilise. On y arrive
avec un peu de patience, surtout pour les grosses espces, en
faisant des dilutions successives, dont on puise une goutte avec
sr
esl
une
effilure de pipette.
On examine chaque
fois
au microscope
ces gouttes sur une lame et on s'assure que, finalement, on a bien

un seul Infusoire.
Hertwig, on
peut se procurer des Parapied et les branchies et

on met les morceaux pourrir dans de l'eau. Au bout de quelques
jours, on peut rcolter la pipette les Paramcies qui se sont rassembles la surface, sur les bords du vase. On les transporte alors dans
des cristallisoirs remplis d'eau de mare riche en matires organiques.
Dans chaque cristallisoir on suspend, l'aide d'un fil, un petit nouet de
ces feuilles, qu'on renouvelle
g-aze plein de feuilles de laitue haches
souvent, favorisent le dveloppement des Bactries dont se nourrissent
les Paramcies.
V'oici
mcies.
comment, d'aprs
On prend une Anodonte, on
Iiaclie le
Les Infusoires parasites se trouvent dans
l'intestin
d'un grand
nombre d'animaux. L'estomac des Ruminants et le Ccecum du

ChevaP fournissent des formes trs intressantes, pourvues de
curieux appendices. Le jeune Porc hberge normalement le Balantidium
coll.
mais on n'en
trouve pas srement chez tous les
l.'Voir ce sujet
Schuberg, Die Protozoen des Wiederkuermagens. Zool.
Jahrb. Sijst., III, p. 36i, 1888 et Eberlein, Ztschr. f. wiss. ZooL, LIX, p. -ô-i, 1895.
:
METHODES SPECIALES
532
individus examins. Les Batraciens sont plus commodes se procurer; chez presque toutes les Grenouilles de France on trouve
abondamment Opalina ranarum^ Balantidium entozoon et

Nyctotherus cordiformis c'est un trs bon matriel pour s'exercer
;
l'tude des Inl'usoires.
Chez d'autres Batraciens on trouvera
encore diverses espces intressantes. Metcalf^ signale en particulier Opalina inteslinalis et 0. caudata, qui se trouvent dans le
rectum de Bombinator igneus et de B. pachypus, et qui ne
possdent que deux masses nuclaires. Ces mmes espces, ou
des varits, se rencontrent en abondance chez Bufo calamita et
Biscoglossus piclus (Brumpt).

Les animaux parasits par une seule espce peuvent servir en
infester d'autres par inoculation rectale. Les expriences de
Brumpt
ont montr que l'infestation buccale, bonne surtout chez
les Ttards, est
moins
efficace
que
l'infestation rectale.
En
prati-
quant l'levage systmatique des Batraciens, ce qui ne prsente

pas de grandes difficults, on peut se procurer en quajitit des
animaux neufs, qu'on
infeste ds le stade Ttard, en les nourris-
sant avec des djections renfermant des kystes d'une espce donne
d'Infusoires. J'ai t tmoin des belles expriences encore indites
de Brumpt
et j'ai
pu me convaincre que
les
Batraciens constituent
un
il
matriel de premier ordre.

Les Ttards se nourrissent trs bien avec des cadavres d'adultes;
y a pourtant de grandes variations dans leur voracit suivant
Quant aux adultes auxquels on tient, il faut, pour les

conserver longt:3mps, se rsigner les gaver avec des petits morceaux de viande crue. En captivit, certains Batraciens adultes ne
les espces.
mangent jamais
on ne
seuls, aussi ne subsistent-ils
que quelques mois

se sert quelquefois
les
gave pas rgulirement. Brumpt

avantage d'Escargots pour cette opration. Biscoglossus
pictus^ Bombinator igneus, Bufo viridis, B. calamita, Rana
si
avec
esculenla se nourrissent bien avec des Mouches, des 'Asticots, de
jeunes Escargots, etc.

Examen l'tat frais.
pipette dans
les
les Infusoires parasites
tions.
Pour
les
milieux naturels
On
et
puise avec une effilure de

les cultures. On trouve
dans
des Mammifres en examinant les djecil

faut, si on ne veut pas sacrifier
Batraciens
l'animal et ouvrir l'intestin, introduire dans le rectum une pipette

1. Metcalf,
Opalina, Its
XIII, p. 198-^206, 1909.
anatomy and reproduction, Arch.
f.
Protistenkunde,
533
INFUSOIRES
mousse, de calibre voulu. S'il n'y a pas de liquide, donner un

lavement de quelques gouUes d'eau physiologique, de manire
diluer le contenu rectal et dlayer les Infusoires, qui vivent en
amas
la surface de la
muqueuse.
Les Infusoires restent

dante ou entre lame
trs
lute. Mais la rapidit de leurs
l'observation
movens
pour
longtemps vivants en goutte pen-
et lamelle,
lorsque
la
mouvements
prparation est bien

un grand obstacle
est
prolonge. Aussi a-t-on jiropos de nombreux

ralentir ces mouvements. Tous reposent sur
aux liquides
l'emploi de substances mucilagineuses qu'on ajoute
de culture ou d'examen. Brumpt emploie simplement de la salive
dpourvue de bulles
d'air.
une tude trs complte des mucilages qui

mieux pour l'tude des Infusoires. Il faut que le
mouvement des cils ne soit pas modifi dans sa nature, mais seulement ralenti, par la rsistance que lui oppose la consislance, du
Stalkewitsch
conviennent
a fait
le
milieu. Le principe de la mthode de Statke^vilsch consiste

augmenter lentement et progressivement cette consistance, par
la
dissolution d'une substance collodale. L'auteur partage ces sub-
stances en deux groupes 1" muco-collodales (Caragahen, graines

de Plantago j^sullium, de Cognassier, gonsme iVAstragalus tragacanthus, agar-agar) 2 proto-collodales (glatine, albumine,
:
amidon, dextrinej. Ce sont

tent le
mieux
celles
du premier groupe qui
se pr-
fournir des liquides de consistance varie, pourvu

se dissolve facilement dans l'eau froide et
que leur mucilage

de substances toxiques. On peut
qu'elles ne renferment pas
guer 3 degrs dans cette consistance
hquide, sirupeuse
distin-
et collode.
graines de Plantago psyllium qui fournissent les mucilages

On met une couche de 1
2 cent, de ces g-raines au fond d'une large prouvette et on verse pardessus 5 10 cm3 de culture riche en Infusoires.
Le Caragahen (Fucus crispus) donne volont les trois consistances;
aussi cette Algue se prte-t-elle toutes les varits de recherches, mais
il faut avoir soin, avant de s'en servir, de la laver dans une solution de
carbonate de soude 0,5 ou 1 p. 100. On peut s'en servir pour paissir
Ce sont
les
les plus dlicats et les plus transparents.
met quelques brins dans le liquide et

au bout de quatre cinq jours, suivant la consistance
d'ailleurs, au bout de ce temps, le mucilage comqu'on veut atteindre
mence se dcomposer en donnant au milieu une raction acide. On
peut y obvier avecjjuelques cm^ de carbonate de soude 1 p. 100. On
toute la culture: pour cela on en
on
les
retire
1. P. Statkewitsch, Zur .Methodik der biologischeu Untersucliungen ber die

Protisten. Arch. f. Protistenkunde, V, p. 17-39, 1905.
534
METHODES SPECIALES
peut aussi suspendre l'Algue clans de petits sachets (4 6 gv. pour lUO cm-^
de culture). En trois jours le li(iuide est devenu assez consistant. Mais
on peut le rendre plus pais en en faisant vaporer une petite portion
dans un verre de montre ou sur lame.
Certaines espces, notamment les Paramcies, finissent par dgnrer
dans ce milieu, qui est alors envahi par ColpidUun colpoda et Colpoda
ciicallus, qui peuvent vivre fort longtemps dans des milieux trs consistants. On peut empocher la disparition des Paramcies en lavant la
culture l'eau frache, aprs trois ou quatre semaines, mais en ayant
soin de maintenir le niveau exact du liquide par le procd que nous
indiquons plus loin. Au bout de trois jours, on remet quelques branches
de Fucus, et, en renouvelant rgulirement ces oprations, on peut
conserver les Paramcies pendant des mois.
Si on craint de perdre une culture prcieuse, on n'en paissit qu'une
faible portion, dans un petit rcipient.
Les graines de Cognassier donnent normment de mucilage il faut
les employer dans la proportion de
pour 50 parties d'eau. Elles permettent de prparer rapidement un milieu trs cousislant. La gomme
d'Astragale (gomme adraganle) s'emploie encore en moindre proportion:
on en met de 2 5 dcigrammes au fond du vase de culture. Le milieu
peut tre rendu ainsi trs pais en peu de temps. La gomme de Cerisier
et la gomme arabique se dissolvent trs lentement et donnent de moins
bons rsultats.
L'agar se dissout bien chaud, mais trs lentement froid. Aussi
convient-il particulirement pour les cultures pures, en vases hauts et
troits. On y met 100 200 cm^ d'eau, 3 7 gr. d'agar en morceaux de
8 10 cm. de long, et des traces de carbonate de sodium et de phosphate de calcium. Deux ou trois jours aprs, on y ensemence les Infusoires qui s'y dveloppent trs lentement. Le liquide ne devient consistant qu'au bout de trois ou quatre mois. Ces cultures sont trs
propices l'tude du chimisme de ces animaux.
La glatine, prconise par Ludloi, est fortement dconseille par
Statkewitsch. Il faut, en effet, liqufier chaque fois la gele de glatine et on n'arrive jamais la mlanger parfaitement avec le liquide
de la culture. En outre, les Infusoires s'y dforment et leurs mouvemenis
ne sont plus normaux. Quant aux geles d'albumine, d'amidon ou de
dextrine, les Infusoires ne peuvent y vivre, cause de la dcomposition
rapide de ces substances
Dans certains cas, il peut tre intressant d'tudier les mouvements des
cils dans des suspensions colores (carmin d'indigo, charbon porphyris, poudre de Lycopode, etc.). Le volume des grains devra tre proportionn la taille des Infusoires. Le procd l'encre de Chine de
Burri (p. 099), appliqu sans dessiccation, pourra rendre de trs grands
services. Mais tous ces moyens ne montrent que le sens du mouvement
des cils et non les cils eux-mmes.
:
Les colorations vitales sont \\\\Q importance capitale pour

Le ractif le plus sur est le rouge neutre
colore
(p. 251), qui
quelquefois le noyau el qui dmontre beau-
l'lude des Infusoires.
1. Chez les Opalines, d'aprs Metcalf,

on ne i)eut mettre en vidence (jue
le
et le nuclole ne se colorent jamais

sphrulcs de Tendosarc et do l'ectosarc.
noyau
les
INFUSOIRES
COU})
mieux que
le
53 5
bleu de mthylne certaines granulations

cyto-
le rouge neutre permet en outre de suivre les

plasmiques
prode
la
grs
digestion, car il vire au rouge cerise en prsence des
:
acides et au ronge jauntre en prsence des substances alcalines.

La poudre de tournesol et le rouge congo (p. 252) donnent aussi
des ractions digestives intressantes. Certes ^ a employ

dahlia n'' 170, le violet de mthyle oB, le vert acide
Poirrier en solution 1 p.
10000 ou
1 p.
le violet
JEE de
100 000, pour colorer
le noyau. Les bleus 2BSE et C3B, ainsi

que le bleu de diphnylamine, ne colorent que les vacuoles, mais tuent les Bactries en
les colorant intensment.
L'acide actique ou le carmin actique de Schneider (p. 372)^

appliqus au matriel frais, mettent souvent trs bien en vidence
structure du cytoplasme
obtenue n'est pas durable.
Culture des Infusoires.
la
et
du noyau. La coloration
ainsi
Nous avons dj dit quelques

pratique habituellement dans des
infusions de foin ou de paille ou dans de Teau de mare. Pour
avoir des cultures pures, il laut employer des liquides striliss
mots de ces cultures
-.
On
les
par l'bullition. Les cultures sont indispensables pour faire une

tude mthodique et suivie, mais il est assez difllcile de les entrecar, d'une part, la facult de multiplication
d'autre
s'puise et,
part, le milieu s'appauvrit et se charge de
de
dchet.
produits
Pour remdier ces inconvnients, Statkewitsch a propos
tenir
longtemps
divers moyens.
1.
Lavages successifs. On
enleve l'ancien liquide,
au
moyen
d'un siphon form d'un tube de caoutchouc, termin par un tube

de verre plongeant jusqu'au fond du vase. Un autre tube, dont
l'orifice est
5 cm. environ au-dessous de
la surface, sert l'arrive
de l'eau frache. L'essentiel est que le niveau de Veau ne varie

pas pendant toute la dure de l' opration, qui doit tre trs
lente (1 2 heures). La frquence de ces lavages doit dpendre
de
la sensibilit
des espces
les Parancies sont trs exigeantes
Il va sans dire
que ces lavages doivent tre
:
ce point de vue.
1.
C. B. Soc. de biologie, avril 1884.

faisait ses cultures en chambre
humide entre lame et lamelle. Les

lamelles taient soutenues par des poils de brosses dents. Il isolait ses Infusoires la pipette, par dilutions successives sur des lames. Ses travaux sont
lire par ceux qui veulent se livrer l'tude des Infusoires. Arc/i. de zool. expcr.,
2.
Maupas
VI, 1888 et vil. 1889.
METHODES SPECIALES
536
complts par renlvement des dbris vgtaux putrfis. On les

remplace par des feuilles fraches ou des Algues.
2. Agitation mcanique. Suffit souvent pour rpartir les produits de dchet accumuls vers la surface et les rendre inoffensifs;
mme
de
Enlever
la
matriaux nutritifs se trouvent mieux distribus.
les
crote d'Algues qui se forme quelquefois
Neutralisation
3.
Avec une solution
la
surface.
trs faible (1 p.
100) de
carbonate de sodium.
Addition
4.
quantit de phosphate de calcium
' wxiQ trs petite
en poudre.
Tsujitani
prpare une glose la dcoction de paille
Glose
Bouillon
Dcoction de paille 20
5 g.
p.
000
50 cm3.
000 cm^
qu'il laisse solidifier en tubes inclins. On creuse la surface, avec le

fil de plaline, des stries irrgulires et on ensemence les Infusoires dans
montent
l'eau de condensation. Les Infusoires
que
les
Amibes, auxquelles
ils
peuvent
tre
le long des stries, tandis

mlangs, restent au fond du
On nourrit les Infusoires avec des Bactries.

Les Infusoires parasites sont trs difficiles conserver en cultures.
Metcalf est arriv faire vivre quelques jours les Opalines des Bombinaior, dans de grands verres de montre remplis de liquides appropris. Elles vivent deux jours dans la solution physiologique 6 p. 1 000,
trois neuf jours dans le mme liquide additionn d'une partie du
rectum et du contenu rectal de l'hte. Opaiina ohtvigona {d'Hyla arborca) est
tube.
l'espce la plus rsistante et 0. caudata la plus dlicate. Metcalf conseille
encore l'emploi du liquide de Locke
Chlorure de
Chlorure de
Chlorure de
Bicarbonate
calcium anhydre
potassium
0,07 gr.
0,01
sodium
de sodium
0,06
0,01 0,03
Eau
100
cm3
Putter a propos le liquide suivant, qui, lorsqu'il est absolument

priv d'oxygne libre, permettrait de conserver les Opalines pendant
trois
semaines
'
Chlorure de sodium
Tartrate de sodium et de potassium
100 gr.
5
Eau
400
distille
cm^
Les cultures en goutte pendante conviennent mieux pour l'tude des

formes de l'intestin des Ttards. On ouvre cet intestin sous le
petites
1.
Ueber cinc Mthode,

Tokio,X\ni, ly04.
Tsujitani,
Gesell.
die
Infusorien zu cultivieren. Mittli. mcd.
537
INFUSOIRES
binoculaire ( 50 diam.) dans une g-outte de solution physiologique ou

de liquide d Locke, on spare les Opalines et on recouvre d'une lamelle
qu'on lute la vaseline. Ce lut est prfrable tous les autres, d'aprs
Metcalf, cause de sa souplesse. De telles cultures peuvent vivre un ou
deux jours. Chez certains individus, on peut voir, avec une nettet
tonnante, les chromosomes, les fibrilles du fuseau et les granules achromatiques, mais il faut quelquefois chercher longtemps avant de trouver
un individu favorable cet examen.
Fixation.
d'excuter des
Il
frottis
ne peut tre question, pour les Infusoires,

desschs. La fixation doit donc se faire soit
entre lame et lamelle, soit par

soit enfin
la
mthode des
frottis
humides,
en masse, par centrifugation.
De trs nombreux
comme pour tous les
lixateurs
ont t proposs pour ce groupe,
autres. Notons d'abord
que
l'acide
osmique
en solution ou en vapeurs est souvent trs infidle. La plupart

des auteurs recommandent l'emploi du sublim, principalement
sous la forme du sublim alcoolique de Schaudinn, mais, d'aprs
Brumpt et d'aprs notre exprience personnelle, le Bouin ou le

Duboscq-Brasil donnent d'aussi bons rsultats. Les formes trs
contractiles (Yorticelles) pourront tre fixes par la mthode de
ranesthsie sous lai/ielle, due Certes et de Beauchamp ^ Les
animaux sont placs dans une goutte d'eau, entre lame et lamelle;
la prparation est mise sur deux cales, dans une boite de verre
renfermant un peu d'alcool ou tout autre anesthsique volatil.
Surveiller
un
et,
ds que les
mouvements ont
cess, faire pntrer
fixateur sous la lamelle.
Il est certain
que le formol seul, en solution 5 ou 10 p. 100,
donne des rsultats merveilleux. Les Infusoires s'y conservent
aussi beaux qu' l'tat frais
en usant d'un clairage convenablement rgl, on peut les tudier sans coloration aussi bien qu'
:
Ce procd est prcieux, car il permet de conserver

in toto^ simplement par addition d'eau formole, le contenu intestinal d'un animal parasit ou le produit d'une culture. Nous
l'tat vivant.
avons vu des contenus rectaux d'lphant et d'autres Mammifres,

Brumpt de sa traverse de l'Afrique et mon-
rapports ainsi par
trant, aprs plusieurs annes, de splendides Infusoires parasites.

Le procd est d'une extrme simplicit et russit toujours.
Lorsqu'on a sa disposition du matriel

fur et mesure,
est prfrable
frais,
qu'on tudie au
d'employer du formol lgrement
p. de Beauchamp, Fixation l'tat d'extension des animalcules contractiles

spcialement des Vorticelles. Bull. Soc. zooL. de France, XXIX, p. 26, 1904.
1.
et
il
MTHODES SPCIALES
538
La
})icriqu.
encore meilleure
lixalion est
animaux
les
que prennent
est
trs
et la lgre teinte jaune

favorable l'observation.
Brumpt emploie de prfrence du formol

ajoute 10 p.
fixateur et de
5 p. 100, auquel il
284); ce liquide sert la fois de
conservateur; on lute au lui de Kronig ou
100 de Bouin
mdium
(p.
d'Apalby.
comment on
Voici, noire avis,
conserver au mieux
Etude
doit procder
pour tudier
et
les Infusoires parasites.
ci/tologique.
Sur
frottis fixs
humides au Bouin, au
Duboscq-Brasil, au sublim alcoolique, au Flemming,
etc., puis
colors.
Pour
le
faciliter
procd de
On
l'adhrence des Infusoires
la
lame, employer
la salive (p. 4^78) prconis par
peut aussi fixer
Brumpt.
en masse par cenlrifugalion. Pour conserver
sans qu'ils se mlangent, Metcalf prconise,

la suite de Mayer, l'emploi de capsules de glatine formes de
les chantillons fixs,
deux tubes embots (capsules Le Huby de Le Perdriel). Ces

capsules sont moins fragiles que les petits tubes de verre et
vitent l'emploi du tampon d'ouate, dans lequel une partie du
matL-riel
rieur, de
peut se perdre. On ferme au collodion le cylindre intmanire que son contenu ne glisse pas entre les deux
cylindres et ne soit pas cras. Le tout est jet dans l'alcool fort
95 ou 90, mais non 80, qui ramollit la glatine.
2 Etude morphologique. Dposer sur une lame une goutte-
lette
de liquide renfermant les Infusoires, ajouter une goutte de

trs tendu, d'aprs la formule de Brumpt. Becouvrir
Bouin
d'une lamelle
el luter.
Avant d'ajouter
bon d'aspirer au buvard
le
liquide fixateur,
il
est
plus grande quantit d'eau possible,

sans que toutefois les Infusoires se desschent.
3 Conservation en masse dans le formol 5 ou 10 p. 100,
suivant
la
la
quantit d'eau qui imbibe les objets.
Coloration.
Le carmin
et
Thmatoxyline sont
les
meilleurs
colorants pour les Infusoires. Les meilleures teintures de carmin

sont le carmin chlorhydrique et le carmin al une de Mayer. Lli-
matoxyline ferrique est indispensable pour l'tude du noyau. En

ce qui concerne l'iimatoxyline alune, les avis sont partags
beaucoup d'auteurs el notamment iMetcalf, dconseillent riimalun
:
el
prconisent Thmatoxyline de Delafield. Cette dernire solution

vante qu' cause de sa puissance de coloration. J'ai dj
n'est
montr plus haut
(p.
376) que cette formule est suranne et je
539
INFLSOIUES
crois qu'ici encore
on peul
hmakin de Mayer, dont

prparation et
la
J'ajouterai
m'a
donn
la
la
reuiplacer avec avanlajo par
l'action est tout aussi
conservation
sont
nergique
beaucoup plus
le
et
glyc-
dont
aises.
que l'hmalun de Mayer (nouvelle formule de 1904)

rsultats
d'excellents
pour Balaniidium coli,
B. eniozoon, Nyclotherus cordiformis Qi pour diverses Opalines.

Quoi qu'il en soit, il faut gnralement surcolorer les Infusoires,
trs dilu (1
puis les diffrencier dans de Falcool chlorhydrique
1000), surveiller au microsco})e et ai'rler l'action jiar un

lavage l'eau ou mieux, d'aprs Metcalf, l'eau lgrement
ammoniacale. Avec Thmalun de i\Ia}er (nouvelle formule) on
2
p.
peut arriver facilement obtenir une bonne coloration par teinture

la dcoloration des
progressive, sans difrencialion. Pour viter
Metcalf conseille d'exposer, pendant quelques
prparations,
secondes, aux vapeurs d'ammoniaque, les Opalines dshydrates et
imprgnes d'huile de cdre, avant de les monter au baume. Pour
les grosses espces, fixes et colores in toto, on peut les
mettre dans l'huile de cdre, l'essence de girofle ou le terpin'ol,
sous une lamelle supporte d'un ct par un cheveu. En imprimant de lgers dplacements cette lamelle, on peut retourner
examiner
les Infusoires et les
Comme
examiner sur toutes leurs
faces.
Hochst aprs
fuchsine acide aprs l'hma-
colorant de fond, on choisira l'osine de
l'hmalun ou
le
glychmalun
et
la
toxyline ferrique.
Ces coupes sont faciles faire sur les InfuCoupes dinfusoires.

en masse et dsliydrats par centrifugation. Le culot, puis
avec une pipette, est inclus dans la paraffine et coup comme un bloc
de tissu. Pour faciliter cette inclusion, Metcalf conseille de faire tous
les passages et l'inclusion dans de petits tubes de glatine fond rond,
qu'on trouve facilement dans le commerce (capsules l.e Huby de Le Perdriel). On se dbarrasse ensuite de la glatine en la ramollissant dans
soires fixs
l'eau froide. Voir aussi p. 312 et p. 475 (coupes cl'Amibes).

On colore les coupes l'hmatoxyline ferri([ue de Heidenhain,
l'hmalun, au glychmalun, la safranine-lichtgrin, etc.

Les mthodes de coloration que nous avons
Coloration des cils.
indiques pour les frottis et les coupes mettent gnralement hien les
cils en vidence, surtout en employant un bon colorant cyloplasmique.
Pour une tude plus particulire de ces organes on peut employer le
procd de Lfjler (p. 699), lgrement modifi pour tre appliqu aux
frottis humides. On a soin de ne chauffer ni le mordant, ni le colorant
et de les faire agir tous deux froid au moins une demi-heure. 11 faut
claircir au xylol et non l'essence de girolle. D"apres Waddinglon i, un
1.
Jonrn. Roy. micr. Soc.
(2) III. p. 185.
540
METHODES SPECIALES
les cils des Infusoires (et surtout des

Paramcies) est d'ajouter la goutte d'eau qui les contient une goutte
de tannin 25 p. 100 dans la glycrine.
On peut encore imprgner Vargent par la mthode de ScJuiberg
fixer dans un verre de montre par l'acide osmique bichromate (1 partie
d'acide osmicfue 1 p. 100 pour 5 parties de bicliromate de potassium
2 p. 100). Bien mlanger avec le liquide riche en Infusoires, par plu-
bon moyen de
en vidence
nieltre
sieurs aspirations successives la pipette compte-gouttes. Porter ensuite

le nitrate d'argent d'abord trs tendu, puis dans la solution
et
1
p. 100. Laver enfin abondamment l'eau distille. Dshydrater
dans
le terpinol, en usant de moyens mcaniques (chocs,

compression) pour mettre mieux en vidence l'insertion des cils.
examiner dans
APPENDICE
TECHNIQUE DE L'TUDE MORPHOLOGIQUE

DES CHLAM YDOZOAIRES
I.
Corpuscules de Guarnieri de la vaccine.
Le meilleur procd d'tude
consiste
inoculer
la
vaccine
corne du Lapin, par stries superficielles ou par insertion

dans Tpaisseur de la corne. On rcolte le meilleur matriel du
sur
la
deuxime au quatrime jour
1. Froilis par apposition en touchant la corne avec une lame ou une

lamelle, scher, fixer l'alcool, et colorer au P.omanovsky ou mieux
traiter par la mthode des frottis humides et colorer au Romanovsky
(procd spcial, p. 413) ou l'hmatoxyline ferrique. Bien entendu, on
peut employer aussi tous les procds indiqus ci-dessous pour l'tude
des corps de Negri.

2. Fixation et inclusion de la corne par les procds habituels. Colorer
l'hmatoxyline alune ou ferrique, au Maliory, au Gram, au trichromique de Cajal et surtout au Romanovsky modifi pour les coupes .
IL
Corpuscules de Negri de la rage.
Les trs nombreux procds, proposs pour colorer les corpuscules de Negri, peuvent se ramener quatre sections.
/''^
section.
Coloration par la mthode de Mann.
Mthode de Negri.
d'Ammon
corne
de
Fixer au Zenker des fragments de la

suspect. Inclure la paraffine.
l'animal
Colorer par la mthode de iMann

1.
Pour plus de
chung,
-2,
Beihefte
dtails voir
Aufl., p.
z.
Arch.
/'.
(p.
430).
von Prowazek,
Tasclienbucli der Protistenuntersuet

f. Proiisienkunde, 1908,
et Keysselitz, Arch.
Schiffes- u. Trop. Hyg., 1909.
78.
Mayer
CHLAMYDOZOAIRES
541
'
Kraouclikine prfre lixer les fragments de corne d'Ainmon

dans l'actone, l'tuve 31^ pendant 30 45 minutes. On passe
directement la paraffine 48 ou bien on intercale un bain de
xylol de 10 minutes.
rapide permet
3^ section.
On
colore ensuite au
Mann. Cette mthode
diagnostic en deux heures.
le
Coloration par action successive de l'osine

du bleu de mthylne
Mtliode de Lenlz.
Fixer (d'aprs Bohne) pendant une heure
dans l'actone 37, inclure en une heure

55, chauffe 58'. Colorer
Alcool
et demie
une minute par
la paraffine
100 cin^
tiO
Eosine extra
Laver
et
BA
de Hochst
l'eau, puis colorer
Potasse 0,01
p.
0,5 gr.
une minute dans
100
Sol. alcoolique sat.
cm3
100
de bleu de mthylne B Patent

'
de Hochst
30
Essorer au buvard, diffrencier d'abord dans de l'alcool alcalinis

30
Alcool absolu
cm^
V gouttes
Soude caustique 1 p. 100 dans l'alcool absolu
est essentiel que cet alcool soit parfaitement anhydre.
.
Il
jusqu' obtention d'une faible teinte osine, puis dans de l'alcool

absolu actifi (1 goutte d'acide actique 50 p. 100 pour 30cnr^
d'alcoolj jusqu' ce que les tractus ganglionnaires apparaissent
encore
comme
Lentz
fait
des lignes bleues. Dshydrater et monter au baume.

aussi des frottis avec des parcelles enleves sur la
d'Ammon, en prenant de prfcellules.

de
On fixe humide l'alcool
grandes
rgion
mthslique, on lave l'alcool absolu et on colore comme ci-dessus.
section transversale de la corne
rence
la
Les corps de Negri sont colors en rouge
en bleu.
Mthode des
frottis.
Harris
fait
vif et leurs inclusions
des frottis avec la corne
d'Ammon
de l'animal suspect, fixe l'alcool mthylique une

minute, passe l'eau, colore de une trois minutes dans une solu-
tion alcoolique d'osine sature et ancienne, lave quelques secondes,

plonge cinq quinze secondes dans une solution rcente de bleu
1.
Russki Vratch, p. 439-442, 15 avril 1906.
METHODES SPECIALES
542
<le
alcalin, rince trs
mthylne
rapiflement
et
diffrencie dans
ralcool 95.
Baschieri procde de mme, avec cette seule diffrence que

Tosine est en solution actique faite chaud et filtre
:
Alcool absolu
Eosine l'alcool de Grbler
Acide actique crist
100
1
0^3
gr.
Colorer ensuite au bleu de mthylne 0,5 p. 100.

Cette mthode des frottis est excellente pour
rapide de
veuses et
la
le
diagnostic
rage, car elle respecte bien la forme des cellules ner-
la localisation des corpuscules de Negri. Mais si elle

lorsque le rsultat est positif, on ne peut rien conclure d'un
rsultat ngatif, et il faut alors la complter par la mthode des
suffit
coupes. Les frottis doivent tre excuts avec la substance grise de

corne d'Ammon, aprs enlvement de la mince bandelette de
substance blanche qui la recouvre.
la
Les Amricains emploient volonliers, aprs fixation l'alcool mthypour colorer les corps de Neg-ri, la mthode de Ira van Gie?on
que nous avons donne plus haut (p. 525). Ces corps se colorent en rouge
i
lique,
cramoisi, tandis que leurs inclusions sont bleues Celte mthode, appliaux frottis de substance crbrale suspecte, serait trs rapide, trs
facile et trs sre-; on peut colorer aussi ces frottis au Romanovsky
(jue
(p. 659).
3*^
section.
Mordanage par
l'iode.
'
dmontr Texistence du pouvoir iodorsislant des corde

Negri; il a su en tirer un excellent parti, pour instipuscules
tuer une mthode de coloration applicable aux frottis et aux
Neri
coupes.
Les
frottis
sont fixs falcool absolu.
Les pices sont fixes
(d'aprs Bohne) une heure dans factone, puis imprgnes pendant

deux heures de paraffine 55'^ chauffe 58.
1. Mordancer dans Tosine iode pendant 10 minutes au moins
:
Eau
100
distille
lodure de potassium
Eosine B de Griibler
Iode
cm3
0,2 gr.
1
0,1
1. Centralbl. f. Bakl., Orig., XLIII, p. 205. 1907.

2. Voir ce sujet Williams et Lowden, Journ. of inf. dis., III, p. 45-2, 1906, et
van Gieson, Proc. Vew York path. Soc, VI. p. 83, 1906. et Centralbl. f. Bakt.i
Ori(j., XLIII, p. 205, 1907.
3.
Neri,
Le diagnostic rapide de
la rage. Centralbl.
/'.
Uakt., Orig., L, p. 109, 1909.
CHLAMYDOZOAIHES
Dissoudre, d'une
50 cm d'eau
'
et,
o43
Fiodure de potassium
pari,
d'autre part, l'osine dans
el
Laver l'eau distille.

Colorer cinq minutes dans du bleu de mthylne
Laver rapidement l'eau distille.
2.
3.
4.
dans
iiode
50 cm^ mlanger, filtrer.

1 p.
000.
Diffrencier dans l'alcool 95, jusqu' ce que la prparation

teinte rose faiblement nuance de bleu.
5.
prenne une belle
6. Alcool absolu, .xylol,
baume.
Les corps de Negri doivent prsenter une belle teinte rouge

violace brillante, se dtachant nettement sur le fond bleu ple du
cytoplasme el sur le bleu fonc des noyaux des cellules nerveuses.
Les hmaties sont colores en rose vif, non violac. On doit
voir, l'intrieur des corps
de Negri, les corpuscules basophiles
colors en bleu ^
La mthode
ds 1907, repose sur le

d'Ag-alli, employe par Lentz
principe. On colore d'abord, comme dans la mthode de Lentz
(p. 541), puis on mordance dans le Lugol pendant une minute (eau 300,
Kl 2, iode 1); on lave l'eau, on dilrencie dans l'alcool mlhylique
jusqu' teinte rouge, on lave l'eau et on colore encore trente secondes
dans le bleu de mtliylne, puis on termine comme dans la mthode de
Lentz, par double dilTrenciation dans les alcools alcalin et acide.
mme
4^ section. Coloration au
et
Employer
les
Romanovsky
des frottis
des coupes.
mthodes gnrales qui ont
404
t dcrites p.
416.
m.
On
ou,
avec
le
lsion s'y prte,
on
des
fait
si la
Corpuscules de Prowazek du trachome.

frottis
produit du grattage des granulations

fait des frottis
par apposition.
La mthode de Romanovski
est
certainement un des moyens
les
plus srs de colorer ces corpuscules.
Tout rcemment, Lindner^ a montr qu'au dbut on ne trouve,

1. D'Amato et Faggella, qui nient la nature parasitaire des corps de rs'egri,
les colorent, sur coupes de pices fixes au Zenker, en trente minutes dans le
vert de mthyle-pyronine de Pappenlieim. On diffrencie par l'alcool absolu
actique (2 gouttes pour 10 cm'). Ztschr. f. Hyg., LXV, p. 353, 1910.
2. Lentz, Ein Beitrag zur Farbung des Negrischen Korperchen, Centralbl.
f.
BakL,
3.
Orly.,
XLIV,
pT 374-378, 1907.
Lindner. Zur Farbung der Prowazekschen Einschliisse. Centralbl.
Oriy.,
LV,
p. 429, 1910.
f.
Bakt.,
MTHODES SPCIALES
544
dans ces inclusions, que
Un
le
colorable en bleu par le
initial
corps
on voit apparatre des granulations

mtachromatiques azurophiles qui ne prennent pas de coloration
lective. Le corps initial est donc une formation plasmatique, for-
Giemsa.
peu
])lus
lard,
tement basophile, mais non mtachromatique. Cette basopbilie

permet d'obtenir une coloration lective. Pour cela, Lindner conseille d'acidifier le
mlange de Giemsa, de faon
supprimer
la
raction de Tosinate d'azur et faire agir l'azur de mthylne

comme colorant basique. Lindner propose deux formules. Tune
une autre rapide (B) moins sre.
lente (A) qui russit toujours et
Eau
Formule A.
10 cm3.
distille
Solution de Giemsa
Acide actique 1
Formule
V gouttes.
p.
100.
Giemsa
B.
Acide actique 0,5
p. 100.
Fixer les frottis pendant 10 minutes par l'alcool absolu. Colorer

une heure au moins dans la solution A ou 10 minutes dans la
solution B. Pour les coupes, fixer les pices au sublim ou au
formol, colorer les coupes douze quarante-huit heures dans
solution A, puis laver
Les Bactries,
colors en
bleu
bleutres et ceux des
la
l'eau distille.
les
les labrocytes et
sont
roses
une heure
corpuscules de Prowazek
noyaux des leucocytes sont

pithliales sont un peu moins
les
fonc,
cellules
le
cytoplasme.
que
L'examen sur fond noir ne
rsultats pratiques.
Bhlman
parat pas avoir

a
vu nettement
donn encore de
trois sortes
de cor-
des lments
puscules qu'il considre comme caractristiques
et
des globules
mobiles
des
masses
bactriformes,
protoplasmiques
le
rle
confrer
il ne sait
Mais
}>athogne. Au
auxquels
jauntres.
:
point de vue
du diagnostic microscopique,
tout reste faire de ce
ct.
1.
Rahlman, Ueber Trachom.
Beitr.
z.
Aurj enheilkunde
LXII, 1905.
DEUXIME SECTION
MTJlZOJnJiES
CHAPITUE PREMIER
VERS
Nous
n'tudierons, dans ce vaste groupe, que les Vers parasites
ou Helminthes
et les
Annlides vulnranles ou Sangsues ^
RCOLTE DES HELMINTHES
I.
Nous devons rechercher
les
Helminthes dans tous
les tissus
ou
il est donc
organes des Vertbrs
indispensable de savoir faire
correctement une autopsie. Les iiistruments ncessaires sont
:
des ciseaux; deux paires de pinces, une fine et une giosse; un

scalpel, une sonde cannele et, au besoin, un entrotome et une
cisaille
pour
les ctes.
Marche de
Nous supposons Panimal mort ou

l'autopsie.
tu par saigne, par le gaz ou le choroforme. On commence par
rechercher avec soin ses parasites externes (Puces, Poux, Aca594 la technique suivre). Il faut ensuite le placer
sur une planchelte proportionne sa taille, les quatre
tendus et fixs, et la tte fixe aussi au besoin. Les
riens) (v. p.
sur
le dos,
membres
animaux (Balraciens, petits Rongeurs, [letits Oiseaux) peuvent tre piqus avec des pingles, sur une plaque de lige ou dans
une cuvette dissection fond lig on peut encore se servir
petits
1.
Les Rotifres seront tudis avec
M. Langeron.
le
plankton
(p. 619).
3o
METHODES SPECIALES
546
de ciivelles ou de boites mtalliques, au fond desquelles on coule

le
mlange suivant
Paraffine 60"
2 parties
.
_
Caoutchouc
partie
OU simplement
mlange de noir animal.
Les pingles pntrent trs bien dans ces masses, dont la coude la paraffine 60
leur est trs favorable aux dissections.

Les animaux plus grands (Lapins, Chiens, Chais, etc.) peuvent tre
simplement clous sur une planche ordinaire; il est plus commode
d'avoir une planche perce de trous ou garnie de clous (de prfrence
pitons ou anneaux vis) sur les bords. On fixe les quatre membres
au moyen de ficelles ou lacs, nous de prfrence au nud physiologique
Les plateaux mtalliques bords percs de trous sont
(flg. 201, p. 587).
encore meilleurs, car ils empchent l'coulement des liquides.
Les Oiseaux seront plums sur le ventre; les animaux long poil
seront tondus la tondeuse le long de la ligne d'incision. Pour les animaux poil court, on se contente de mouiller le pelage du ventre. Ces
prcautions sont indispensables, car le poil et les plumes sont trs
gnants dans la suite. Pour l'autopsie des grands Mammifres, une visite
aux abattoirs sera la meilleure dmonstration.
i
Ouverture de l'animal.
Quel que soit Tanimal, on doit

une incision sur la face ventrale, du cou au pubis, C)ette
incision ne doit intresser que la peau on la prolonge latralement jusqu' la racine des membres, puis on dtache la peau
faire
avec
le scalpel et
on
la rcline
sur les cts, en
la fixant
au besoin
avec des clous ou des pingles.

On ouvre ensuite la cavit abdominale avec les ciseaux, en
ayant bien soin de pincer la paroi au moment de la premire
ouverture, de faon ne pas lser les intestins. L'incision doit
tre prolonge jusqu'au sternum, en respectant le diaphragme.
On examine alors la cavit abdominale et le pritoine on voit
:
s'il
y a
un panchemenl, des fausses membranes, des adhrences,
des Gysticerques, etc.

On ouvre ensuite
la
cavit
thoracique,
en
dsinsrant
le
en coupant les ctes de chaque

partie mdiane, de manire h former un volet
thoraciqne, qu'on relve en avant et qu'on peut couper sa base
en haut du sternum. On examine alors la cavit pleurale, le pri-
diaphragme sur
ct, dans leur
\.
sa priphrie et
Les Oiseaux seront
fixs
par
trois lacs,
un plac sur
aux pattes. On peut aussi attacher ou piquer
le
cou, les
deux autres
les ailes, aprs les avoir
plumes.
VERS
surface des poumons.
la
carde,
On
547
note
la
prsence de liquide,
de Cysticerques, on prlve le liquide s'il y a lieu, etc.

On enlve alors tout
Enlvement des viscres.
le paquet
pour cela de poser une ligature on une pince
forcipressure aussi haut que possible dans le cou, de manire
lier Tsophage, la trache et les gros vaisseaux. On coupe audessus de la ligature puis, en tirant sur la pince ou la ligature,
viscral
il
suffit
on dtache progressivement les viscres thoraciques, en s'aidant

des doigts ou du manche du scalpel. On sectionne les insertions
postrieures du diaphragme et on enlve d'un seul coup tout le
paquet des viscres abdominaux. Le rectum est sectionn son
tour prs de Tanus, entre deux ligatures.
On
et
peut alors examiner le paquet viscral sous toutes ses faces

le fond des cavits thoracique et abdominale. Il ne
explorer
doit plus rester, dans cette dernire, que la vessie et les organes
gnitaux. La vessie est lie sa base, puis enleve. On l'ouvre
dans un
cristallisoir et
(bilharziose
Examen
on examine
le
liquide, puis la
muqueuse
humaine, Trichosome du Rat, etc.).

Le pricarde est ouvert, on note
des viscres.
et
prlve l'panchement s'il y a lieu le cur est extrait, les ventricules sont ouverts et on v recherche ventuellement les Filaires
:
[Filaria immitis du Chien).

Les poumons sont ensuite examins
on note
la
congestion,
fragments de poumon s'enfoncent dans l'eau),

l'hpatisation
les foyers inflammatoires ou purulents. Un examen microscopique
(les
rapide des mucosits bronchiques ou

foyers, montre
la
du contenu caseux des
prsence d'ufs de Nmatodes (strongylose pul-
monaire) ou de Trmaiode^ (Par ago7nimi s Westermanni^ Trmatodes pulmonaires des Grenouilles) On recherche ensuite, dans
les foyers
ou
les cavernes, les
On examine
Nmatodes ou Trmatodes^
ensuite la trache et le
diaphragme
dernier, on recherche ventuellement les Trichines en
dans ce
comprimant
un fragment musculaire entre deux lames
(fig. 186).
passe ensuite au foie, dans lequel on peut trouver des
Trmatodes. On commence par ouvrir la vsicule biliaire dans un
On
cristallisoir;
le
contenu
On coupe
est
dilu
au besoin dans
physiologique.
entre les doigts pour faire sortir les Trmatodes.
1.
Chez
la Grenouille, les
la
solution
ensuite le foie en tranches, qu'on presse
Trmatodes vivent
mme
le
On
aperoit
sac pulmonaire.
548
xMTHODES SPCIALES
quelquefois ces derniers dans les canaux biliaires, simplement en

raclant la surface de section des tranches avec le dos du couteau.
faut, quelquefois,
rechercher sur
examiner aussi avec soin

de section
les surfaces
le
la
veine porte et
contenu de ses branches
{Schistosomum japonicum). Enfin, on peut trouver dans

des larves de Gestodes
sont localises, soit la
le foie
(Echinocoques, Cysticerques, etc.) qui

surface, soit dans la profondeur.
Eventuellement, on fait, avec le foie et la rate, des frottis par

apposition (p. 657), pour la recherche des Protozoaires (Plasmodiwn, Leishmania, etc.). Pour cela, on sectionne avec un bon rasoir
une petite tranche d'organe.
On
saisit cette
une
pince
tranche avec
ou
avec
les
doigts et on l'applique en
CudroitS d'uue
plusieurs
^
pour comprimer les

^'inf;nt7/^'^'''''f^
tragments de muscle, pour la reclierche des
lame bien propre. On fixe

humide (p. 628) ou on dessche rapidement comme un frottis de sang (p. 626)
on obtient
ainsi un vritable
dcalque de la surface de section. Il ne faut
Trichines.
pas frotter Torgane sur la lame, car on crase les lments.

Les reins sont dcortiqus, puis fendus longitudinalement
jusqu'au bassinet, en sectionnant leur bord convexe.
Le pritoine
lorsqu'on
doit tre
souponne
examin avec
la
prsence
examiner par transparence
le plus grand soin, surtout

de Filaires adultes. On doit
l'piploon
et
tous
les
replis
du
msentre.
Il ne reste
plus examiner que le tube digestif. Celui-ci est
droul en entier. On a soin de couper le msentre de faon
bien librer les anses intestinales.
Lorsque
le
tube digestif est
court (Carnivores), on peut l'taler en long sur une table et

l'ouviir d'un bout l'autre, de
rso})hage au rectum. Pour les
gros animaux et les Herbivores,
il
est prfrable
de
le
couper entre
deux ligatures,
par portions (sophage, estomac, grle, gros

intestin) qu'on examine successivement. Ces portions doivent tre
ouvertes sur toute leur longueur, avec des ciseaux mousses ou
mieux avec un entrotome
il faut
procder lentement et avec prcaution de manire ne pas couper les Helminthes. On doit avoir
sa porte un cristallisoir ou une cuvette photographique noire,
:
On y dpose les Helminthes

dcouvre. Les Cestodes, qui sont
garnies de solution physiologique.
au fur
et
mesure qu'on
les
540
VERS
trs fragiles, doivent tre enlevs avec des prcaulions particulires. Au besoin, on arrose linleslin d'eau physiologique pour
ou mme on dcoupe la portion de muqueuse et

le liquide, pour dtacher Tanimal sans le briser.
dans
porte
ventuellement on prlve, i)Our les fixer histologiquement, des
dans la muqueuse.
portions avec les parasites implants
les faire flotter
on
la
Les petits Helminthes doivent tre recherchs par lvigation du

On dlaie avec de Teau le contenu d'une
contenu intestinal.
portion d'intestin
phique noire. On
doucement. Les
lgers,
cristallisoir ou une cuvette photogradposer quelques instants, puis on dcante
dans un
laisse
dbris
alimentaires,
entrans avec
sont
trs
le
liquide;
plus
les
denses, tombent
Helminthes, toujours
rapidement au fond et y restent. Si le rsidu
est trop pais, on agite et dcante une seconde
^^^^gê ^
^^^ ^^^
tond mi-panie noir
Finalement, on ne garde qu'un culot

fluide, dans lequel on recherche les petit?
Helminthes. Ceux-ci tranchent par leur coufois.
^:,;j.:^:;<^-
,::';
Helminthes.
le fond noir de la cuvette (fig. 187). On les

avec des pinces pour les porter dans Teau
dlicatement
prlve
leur blanche sur
physiologique.
Il est de la
plus haute importance de pratiquer ces recherches
avec beaucoup de mthode et de noter exactement en quel point
on a trouv les parasites. Leur situation dans Tintestin est rgie
par un dterminisme rigoureux qu'il importe de mettre en vidence; lorsque l'animal autopsi est frachement tu, tous les
parasites sont encore en place et la plupart fixs la
FIXATION
II.
muqueuse.
ET CONSERVATION
DES HELM INTHES

Examen
l'tat
frais.
L'tude des Helminthes doit se
autant que possible, sur du matriel frais. Il ne faut pas

oublier que l'tude des animaux conservs n'est qu'un pis aller
faire,
les
vritables
l'animal vivant.
observations
biologiques
doivent
Beaucoup d'Helminthes, surtout
les
tre
faites
sur
Vers plats, sont
assez transparents pour pouvoir tre tudis entre lame et lamelle

ou entre deux lames, au moyen d'une lgre compression. Le
binoculaire rendra de grands services pour l'examen des grosses
MKTHODES SPECIALES
550
espces. En mettant les Helminthes Ftuve 37, dans de la

solntion physiologique, ils prsentent des mouvements trs actifs
qui donnent une honne ide de Faction vulnrante que peuvent
exercer certains d'entre eux.
Cestodes.
La grande difficult surmonter, dans la prparation de ces
animaux, est leur contractiUt il faut s'efforcer de les fixer en
:
extension.
Pour les petites espces, ne

5
centimtres
de
longueur, on peut employer la
dpassant pas
on racle le contenu de l'inmthode par agitation de Looss
l""
Conservation totale.
testin et la
le
muqueuse avec une lame moujse
on met, par portions,
et
produit du raclage dans un tuhe avec de
la
solution physiolo-
On
remplit presque com])llement le tuhe, on le houche

au lige ou avec le pouce et on agite fortement pendant quelques
instants (3 secondes), de manire fatiguer les Vers et faire
gique.
cesser leurs
instant, puis
musculaires.
contractions
on remplace
la
On
laisse
dposer
un
moiti du liquide par du suhlim en
concentre ^ On agite de nouveau pendant

instants
quelques
(30 secondes), puis ou couche le tuhe plat
aux
Vers de s'tendre. On lave ensuite Teau
pour permettre
solution
aqueuse
plusieurs reprises, puis l'alcool iod
Liilie^ fixe aussi par agitation dans un tube avec du sulilim concentr des espces assez grandes, jusqu' 15 cm. Il supprime l'agitation
pralable dans la solution physiologique. 11 couche le tube aprs agitation.
Pour les grandes espces, le traitement est beaucoup plus difficile.
Looss conseille de les fixer dans une cuvette remplie de solution physiole Cestode
logique additionne de i 2 p. 100 de sublim. On tient
avec une pince en bois ou en corne et on l'agite vivement de droite
gauche dans le liquide, de manire l'tendre le plus possible. Les

trs grands exemplaires pourront tre lavs la solution physiologique,
puis placs cheval en travers de la main gauche, de manire ce
und Conservierungslechnik von Hehninthen. Zool.
1. A. Looss, Zur Sainmcl
Anzeiger, XXIY, p. :!()>>. 1901.
2. Ou de ralcool-formol fp. 551), ou simplement de l'alcool. Dans ce cas, on
dcante ds que les animaux sont tus et on conserve dans l'alcool 00".
3. En voyage, on peut laisser le tout dans le sublim pendant plusieurs jours
ou mme plusieurs semaines. On procde ensuite aux lavages. Si on a lix
l'alcool-formol ou Talcool, on conserve dans ces liquides purs, sans laver.
4.
Centralbl.
fiir
BakterioL,
Abth.,
XXX,
p. 167, 1901.
VERS
551
deux extrmits ne se touchent pas. On

concentr sur les deux parties du Ver.
que
les
couler du sublim
fait
Lorsqu'on ne dsire pas conserver la strucUire hislologique, je

trouve bien prfrable de laisser le Ver mourir en extension dans
Tean ou la solution physiologique, puis, ds qu'il ne ragit plus,
on
le
2o
plonge dans du formol 3
p.
100.
Fixation histologique.
mon
avis, le meilleur
moyen
d'avoir de jolies pices colorer au carmin et monter en prparations microscopiques, consiste fixer des fragments de Cestodes
par compression lgre entre deux lames. Les fragments, aussi

longs que possible, sont tendus entre les deux lames, qu'on serre
lgrement avec un fil enroul autour de leurs deux extrmits.

Les anneaux doivent tre aplatis, mais non crass.
Les deux difficults surmonter sont Fcrasement et le glissement
des anneaux qui fuient entre les deux lames, s'chappent sur les cts
ou se tassent vers une extrmit. Pour rendre la pression plus rg-ulire,
laire
on dcoupe, dans du buvard blanc, une grande cellule rectangude la dimension des lames (fig. 117). Lorsque les anneaux sont
bien tals, on plonge l'appareil dans

est V alcool-for mol.
Alcool
le
fixateur. Celui
je prfre
90
90'^
Formol 40
que
p. 100
On opre dans un tube
10
vident que les bords des

et que la pntration du
fixateur est trs lento. Aussi, ds que les bords sont fixs, faut-il
relcher le fil et soulever dlicatement une des lames, de manire
hter l'opration en facilitant l'entre du liquide. On serre de nouveau
les lames avec le fil et on recommence plusieurs fois cette opration. Il
faut l)ien faire attention ne pas dchirer le Ver en cartant les lames.
Lorsqu'on dsire simplement faire des coupes dans les anneaux, sans
anneaux sont
fixs
Borrel.
avant
la
Il
est bien
partie centrale
examiner par transparence, je conseille une compression beaucoup

On peut alors employer un fixateur histologique quelconque: mais il importe que celui-ci ne soit pas acide, si on veut conserver
les
plus lgre.
les
corpuscules calcaires.
Larves de Cestodes.
Les Cysticerques seront lixs par

compression entre deux lames, aprs dvagination de la tte. Celleci s'obtient soit
par taxis, soil en mettant les Cysticerques l'tuve
37. dans la solution physiologique (voir aussi p. 260). On fixera
3'
de
en
mme des portions de Cniires.

On obtiendra des prparations trs
fixant
des fragments
de
instructives d'j^cAi/vocor/tês
membrane
fertile
la
compression,
MTHODES SPCIALES
552
dans ce cas, devra tre trs lgre, pour ne pas craser les lles.
-Les Cysticercodes^ qui sont toujours de trs petite taille, peu-
comme des objets isols (p. SH et 461). Le mieux

sera de les tudier sur des coupes d'organes de Thte intermdiaire.
Les Plrocercodes sont trop pais pour tre tudis autrement
vent tre traits
que sur des coupes.
Ils figureront aussi dans la collection de prparations macroscopiques, aprs fixation dans Talcool ou le formol,
soit isolment, soit avec les viscres dans
lesquels ils se sont
dvelopps.
4 Conservation en collection.
Les plus
jolis chantillons
de collection sont ceux qui, aprs tre morts en extension, ont t

plongs dans du formol 5 p. lOO.LesCestodes y gardent la demitransparence de Tlat irais et une grande souplesse. Le l'upiide
devient toujours opalescent, mais on peut le remplacer par intervalles. L'alcool a le grave inconvnient de contracter les Cestodes
de les rendre opaques, ce qui est un grand obstacle aux

recherches de systmatique. Les grandes espces peuvent tre
enroules autour d'un gros cylindre de verre ou d'une carcasse
et
de baguettes de verre; on fixe
les
deux extrmits avec un
fil.
On
peut encore faire scher les Cestodes sur une lame de verre noir
ou transparent laquelle ils adhrent trs bien. Marotel combine
ce procd avec une coloration jtralable au carmin.
5 Coloration des prparations de Cestodes.
Le meilleur
carmin au borax alcoolique ou

Employer
le carmin
chlorhydrique (p. 370). Avoir soin de dtacher les Cestodes des lames entre lesquelles ils ont t fixs. Diffrencier
colorant est
carmin
le
le
par l'alcool chlorhydrique 1 p. 100. Dshydrater et monter au

baume. Comprimer la prparation avec un petit tube de mercure
(p. 440), de manire avoir l'animal bien plat. Le picro-carmin
donne aussi de jolies prparations les crochets sont colors leclivement en jaune par l'acide picrique.
Les coupes d'organes, renfermant des Cestodes, seront colores
:
l'hmatine-osine ou par la
laquelle les
safran i ne.
crochets sont
mthode de Curtis
teints
lectivement en
(p.
652), avec
rouge par
la
dans
le
Trmatodes.
1
Rcolte.
foie (p. 547).
Nous avons vu comment on
les rcolte
Les Trmatodes du tube digestif sont plus
difficiles
553
VERS
dcouvrir, parce qu'ils sont quelquefois trs petits. Voici comment

Looss * conseille de jirocder on racle lgrement la muqueuse
:
intestinale avec
une lame mousse
et
on agite
le produit par porsur ainsi de ne pas perdre

des petites espces. Malheureusement, le triage par dcantation est
quelquefois trs diflicile. parce que les villosits sont aussi lourdes
tions,
comme
il
a l dit p. 550.
On
est
que les petits Ti'matodes. Il est prfrable alors de couper Tintestin en morceaux
qu'on agite fortement avec de la solution physiologique;
la
est
plupart des Vers se dtachent. L'avantage de ce dernier

de fournir tous les Vers d'un segment intestinal donn.
procd
^ Fixation.
la
Les petites e^pce^ sont
solution
fixes par agitation,

le
fixateur
en
remplaant
physiologique par
Bouin, alcool-formol, alcool) comme il a t dit p. 550. Il faut proportionner la violence de l'agitation la musculature des Vers et
(sublim,
ne pas oublier que c'est celle agitation qui les met en extension.
Bien entendu, lorsqu'on n'a que quelques Vers traiter, on les
fixe entre lame et lamelle ou entre deux lames, en les comprimant
lgrement.
Parmi
il
y a deux catgories distinguer
peu muscles se fixent admirablement
par compression entre deux lames retenues par des tours de fil,
avec emploi ventuel d'une cellule en papier- (fig. 177). Il ne faut
les
grosses espces,
celles qui sont foliaces et
pas que la compression soit assez forte pour provoquer

des anifs et du contenu intestinal.
la sortie
Les espces
trs paisses ou de forme cylindrique sont laves

solution physiologique, puis inondes du fixateur.
3 Conservation en collection.
Le formol 5 p. 100 est
dans
la
excellent lorsque les animaux ont t tus en extension

dans ce
liquide, ils restent souples et transparents et se prtent trs bien
:
de
s'ils sont contracts ou
plisss, il est impossible
leur rendre leur forme primitive. Au contraire, les chantillons
fixs et conservs dans l'alcool (sans formol) reprennent facilement
leur forme et leur souplesse, par simple immersion dans l'eau
l'lude. Mais,
distille.
4 Coloration.
Le carmin chlorhydiique donne d'admirables
Loco citato et Beitrage zur Systematik der Distomen. Zool. Jahrbcher,

imd Biol.., XXYI, 1907.
2. Ce mode
de fixation convient tous les Vers plats, tels que les Turbellarics
(Planaires) et les Nmcrtes. Pour ces derniers, voir Oxner. Bull. Muse ocan.
n"
1-27,
1908.
iMonjco,
1.
Syst. Geogr.
MTHODES SPCIALES
554
colorations, surtout aprs fixalion dans le formol ou Talcool-formol.
On monte
au baume aprs dshydratation.
Les grosses espces, qui seraient trop opaques, par suite de leur
paisseur, seront dshydrates et claircies dans la crosote. On
peut
les
vit.
Les
monter sous bon
lut
de Kronig, dans des lames conca-
trs gros individus, tels
que
les
Paragoniinus, peuvent
conservs en tubes, aprs claircissement par la crosote; il

sera ncessaire de les tudier par dissection Ttai frais ou par
coupes sur du matriel fix.
lre
Nmatodes.
Les Nmatodes sont particulirement difficiles monter en prparations microscopiques, cause de la rsistance de leur cuticule.
Deux
cueils sont craindre
le plissement de
peut en rsulter d'apercevoir
ne peut tre question de monter
la
contraction et
cette cuticule et l'impossibilit qui
En
organes internes.
les
outre,
il
une rsine ni de les colorer en masse.

La technique de Nmatodes est donc tout fait
ces Vers dans
spciale
les
meilleures indications que nous possdions ce sujet sont dues

aux travaux de Loosssurles Sclrostomids* et notamment sur les
Ankylostomes ^
Rcolte et nettoyage des adultes.
et
bien lavs dans
devient
pour
les
impossible
Ces
Vers sont rcolts
solution physiologique ^. Ce nettoyage, qui

aprs la fixation, est surtout indispensable
la
Sclrestomids, dont les capsules et les bourses copulasouvent encombres de dbris alimentaires ou pith-
trices sont
liaux.
On met
les
Vers dans un tube au
tiers
rempli de liquide,
on agite vigoureusement les animaux

pouce
vivants supportent trs bien ce traitement. On achve par un
on ferme avec
le
et
lavage dans un grand volume de liquide, pour dtacher les bulles

d'air.
La recherche des petits Nmatodes dans de grandes quantits

de matires (autopsies d'Herbivores, Ankylostomes dans les selles de
l'Homme), se fait en dlayant ces matires dans de grands bocaux
Looss, The Sclcrostomidae of Ilorses and Donkcys in Egypt. Records of titc
1901.
Gov. Scliool of medicine, Cairo, in-l" do 138 p., 13 pi
Looss, The anatomy and life-history of Agchylostoma duodenale Dub. Records
lr)8
the
de
in-4
Gov.
School
Cairo.
III,
nf
p., 10 pi., 1905
Egypt.
of medicine,
et IV, 19il.
3. L'eau lait gonfler et clater certaines espces, notamment les Pilaires.
1.
Efjiipt.
2.
VERS
555
pleins d"eau. On laisse dposer quelques instants et on dcante

Teau charge des parties les plus lgres. On recommence plusieurs reprises, en laissant sdimenter chaque fois 5 6 minutes.
Pour les selles humaines, on s'arrte quand l'eau de lavage n'est
plus trouble
il
est inutile d'craser
les gros
morceaux qui ne
renferment gnralement pas de Vers. Ce procd est trs rapide;

il
permet de rassembler tous les Helminthes en 15 20 minutes.
On
peut aussi laver les selles sur un
un
lique, sous
robinet.
On
fin
tamis de
mtal-
toile
agile le tamis continuellement et, au
besoin, on crase les matires avec une baguette de verre. Ce pro-
cd est moins sr, parce qu'on peut laisser chapper de petits

il est
et traumatiser ceux qui restent sur le tamis
Helminthes
aussi plus long.
Fixation.
On
Looss.
La meilleure mthode
est
videmment
celle
de
chauffer de l'alcool 70, jusqu' ce que des bulles

apparatre (oO 60-') au fond du vase et on y
fait
commencent
plonge les Vers. L'alcool ne doit pas tre bouillant, de manire

ne pas durcir les tissus et permettre une inclusion ventuelle
dans
la
parafline. Pourtant,
n'est pas assez
s'il
chaud, l'extension
ne se produit pas bien.

Les dtails de la technique peuvent varier beaucoup. Il est prfrable
de faire cliauder l'alcool dans un ballon, car on vite ainsi les dangers
de l'inflammation. Lorsque les Vers fixer sont nombreux, on les rassemble dans un cristallisoir avec aussi peu de liquide que possible et
on les inonde avec une grande quantit d'alcool chaud, puis on agite
doucement, pour rendre la fixation bien uniforme pour tous.
Lorsqu'on n'a que quelques Vers fixer, on peut faire chaulTer l'alcool
dans une capsule ou une casserole; en mettant trs peu de li([uide
et en usant d'une petite flamme, on vite l'inflammation de l'alcool. Si
celle-ci se produit, on couvre le vase avec un carton et la flamme
s'teint de suite. On lixe les Vers en les plongeant un un dans l'alcool
chaud; ils meurent immdiatement en extension.
Les Vers trs longs et trs minces, tels que les Pilaires, Strongles,
Trichocphales, demandent des prcautions particulires pour viter les
nuds ceux-ci doivent tre dnous avec deux aiguilles. Pour fixer
les Trichocphales, on les saisit dlicatement par la grosse extrmit
et on fait plonger la partie effile dans le liquide en l'y agitant rapidement pendant quelques secondes. Lorsque l'alcool est chauff au point
voulu, les Vers s'tendent parfaitement ou ne forment que des courbes
molles et grand rayon. Les Trichosomes s'enroulent toujours malgr
:
toutes les prcautions (Looss).
Aprs
la
fixation,
on
peut conserver indfiniment les Vers
dans
l'alcool 10"
Il
est
bien entendu que celte
mthode ne s'applique qu'aux Vers

simplement immergs dans l'alcool
vivants. Les individus morts seront
556
OU
MTHODES SPCIALES
le
formol. Les Ankylostomes sont encore vivants vingt-quatre heures
aprs la mort de l'hte.
mme
en est de
Il
de la plupart des Ncmalodcs
intestinaux.
J'ai prconis autrefois
le formol comme fixateur pour les Mmatodes.
Ce liquide donne des chantillons de collection macroscopique beaucoup
plus jolis que ceux qu'on obtient avec l'alcool. Les prparations microscopiques russissent trs bien avec le lactophnol, dans lequel les Vers
ainsi fixs restent parfaitement ronds. Mais ils se contractent gnralement et s'claircissent mal dans la glycrine et la crosote et se ratatinent toujours dans l'alcool, ce qui explique pourquoi Looss rejette
compltement le formol. En outre, ce liquide durcit trop et empche do
faire de bonnes inclusions la parafline. Donc, sans liminer compl*
comme le fait Looss, l'emploi du formol, je pense qu'il faut

restreindre son usage aux cas de ncessit et aux objets macroscopiques.
riailliet et Henry prfrent pourtant fixer par le formol 3 p. 100 dans
la solution physiologique; ils conservent les Nmatodcs dans ce liquide.
tement,
Pour monter en prparations, ils claircissent dans l'acide lactique

(surveiller) et montent la glycrine glatine.
Andr ^ fixe dans l'eau bouillante ce qui, mon avis, durcit trop les
tissus et conserve trs mal les lments histologiques. L'alcool chaud
ou le formol sont bien prfrables.
Les fixateurs renfermant des sels mtalliques ou des acides, rapetissent et contractent les Vers et les empchent de devenir transparents
dans les liquides glycrines.
Montage en prparations.
tre
peuvent
sissements,
dtermins qu'au
aussi
faut-il
les
La plupart des Nmalodes ne

microscope,
claircir
parents.
Glycrine ordinaire ou glatine.

nise par Looss.
Pour
pour
les
C'est la
de forts grosrendre trans-
mthode prco-
faut passer trs

lentement de l'alcool 70" la glycrine. Looss fait une solution de glycrine o p. 100 dans l'alcool 70'\ 11 place les Vers
dans une grande quantit de ce liquide et fait vaporer l'tuve
37, jusqu' ce qu'il
les
(1
espces
3
dlicates,
pour 100).
manire ce
qu'il
viter le
ralatinement,
il
glycrine pure.
Pour
prendre une solution encore plus
faible
ne reste que de
la
Surveiller les progrs de l'vaporation, de

ait
toujours assez de liquide pour recouvrir
les Vers.
On
peut conserver indfiuiment les chantillons dans la glycmonter en prparations dans ce li(|uide. Le seul inconvnient est la difficult du lutage.
rine ou les
L M.
Langeron, F]mpIoi du lactophnol de
Amann pour
le
montage des Nma-
todes. C. R. Soc. de biologie, LVIII, p. 749, 1905.

2. E. Andr, Sur la rixation et la prparation des Nmathelmintlies. Zlsc/tr.
loiss.
Mikr.,
XXIV,
p.
278-279, 1907.
f.
VERS
557
Montage la glycrine glaline i.

au buvard, on le place sur une lame
On
et
essuie soigneusement le Ver

le recouvre d'une lamelle.
on
Celle-ci est souleve d'un ct par l'paisseur du Ver et louche la lame

un la lixe en ce point la lame avec une ôulte de
par l'autre cl
:
glycrine. On fait alors rouler l'chantillon en dplaant la lamelle,

tout en regardant au microscope
on arrive ainsi orienter convenablement le Ver 2. On fixe alors la lamelle par deux gouttes de lut. aux
deux coins qui sont en contact avec la lame. On charg:c l'autre (;t d"un
:
lger poids, de
rsultat obtenu,
manire aplatir un peu le Ver sur ses deux faces. Ce

on enlve poids et lamelle, on essuie la glycrine et on
monte le Ver la glycrine glaline sans rien dranger.

Pour monter plusieurs Vers sous la mme lamelle, on les essuie, on
les dispose, on charge la lamelle d'un poids et on pose la lame sur un
plan bien horizontal (de prfrence platine chauftante tidie). On fait
pntrer goutte goutte la glycrine glaline chaude sur un des cts
perpendiculaires l'axe longitudinal des Vers, de manire viler les
bulles d'air. Tout le secret de cette mthode consiste employer la
glycrine glaline une temprature aussi basse que possible, pour
ne pas ratatiner les Vers.
Looss se sert quelquefois de la crosote pour

obtenir un claircissement trs puissant. 11 faut d'abord enlever
Crosote.
compltement
la
Si on
glycrine par l'alcool, puis dshydrater.
Vers dans Talcool, aprs examen dans la crosote,

il faut les dbarrasser
compltement de ce produit par l'alcool
absolu, car, s'il en reste la moindre tiâce, les chantillons prennent
veut remettre
une
teinte
les
brune ou noire indlbile.
Aprs une exprience de plus de neuf ans,

je considre toujours le lactophnol de Amann comme un excellent
milieu pour Texamen et la conservation des Nmatodes. Ce
Lactophnol.
liquide ne contracte jamais les Vers, mme lorsqu'ils ont t fixs

au formol. Il ne les gonfle pas non plus. La transparence est gnralement trs bonne, surtout pour les petites espces.
Si on craint la lgre teinte jaune
que prennent quelquefois

on peut supprimer l'acide phnique, ou mme
remplacer par un poids gal de glycrine.
les chantillons,
le
L'acide lactique claircit
normment
les
Nmatodes; mais,
si
l'imprudence de les laisser trop longtemps en contact avec

ce liquide, ils ne tardent pas tre gonfls et ramollis au point
d'clater d'eux-mmes. 11 ne faut donc user de ce ractif qu'avec
on
une grande circonspection, îme lorsque
les
prparations ne sont
forme des granules qui
les
rendent inutilisables.
pas dtruites,
1.
Employer
la
il
s'y
formule de Kaiser
(p. 44-2)
ou celle de Deane
glycrine 4, en poids.
2. Ce procd est minutieusement dcrit par Looss. Zoco citato,
glatine
1,
eau
p. 554. note 1;
-2,
MTHODES SPCIALES
558
Les grands Nmatodes se dissDissection des Nmatodes.

trs bien sous l'eau ou sous la solution physiologique. Quant aux
petites espces, le mieux est de les ouvrir sous la glj'crine, aprs
imprgnation par ce liquide. On opre dans une petite cuvette, fond
g-arni de paraffine au noir de fume ou au caoulchouc (p. 54G).
Inclure la paraffine, mais seulement
5. Coupes de Nmatodes.
aprs fixation l'alcool. On peut passer de la glycrine l'alcool 80
4,
quent
ou 95. Il faut absolument faire queîLies incisions la cuticule pour

favoriser la pntration des licjuides. Imprgner par l'huile de cdre
qui ne rend pas les tissus cassants comme le xylol. Si les coupes se font
difficilement (Ankyiostomes, coupes de la capsule et coupes longitudinales), collodionner la surface du bloc avant chaque coupe (p. 338). Il faut
alors coller les coupes au Schllibaum (p. 350), la surface collodionne
en dessous. Colorer au carmin chlorhydrique ou l'hmatine-osine.
Fixer des fragments (rinteslin grle de Souris

Trichines.
ou de Rais infests exprimentalement (p. 573), intervalles
rguliers aprs lingeslion, de manire suivre la pntration
des femelles et la ponte. Rechercher ls adultes dans le contenu
chaud ou au formol, monter au lactoRecherclier

les
phnol.
embryons dans Texsudat pritonal, par
inleslinal, fixer l'alcool
examen
qu'on peut colorer Thmaau Pappenheim. Pour Ttude hislologique des lsions
musculaires, fixer des fragments au Bouin et faire des coupes;
l'tal frais et par frottis
tine ou
pour l'tude bistomorphologique, comprimer des fragments de

muscles (de prfrence le diaphragme) entre deux lames, lier
avec un fil et fixer l'alcool ou l'alcool-formol (voir aussi p. 260).
Colorer au carmin clilorhydrique
et
monter au baume.
Filaires.
Filaires adultes.
dans
le pritoine
peau, dans les
Au cours
des autopsies, les rechercher
(examiner par transparence), les muscles, sous la

cavits cardiaques. Cette recberche est souvent
trs longue et trs difficile. Eviter de tirer sur les Vers

lorsqu'on
a mis dcouvert l'extrmit de l'un d'eux, le couvrir avec un
:
du coton imbib de solution physiologique et attendre

lui-mme (Brumpl).
Fixer de prfrence dans l'alcool chaud (p. 555). Le formol
donne de jolis chantillons de collection, mais gnralement peu
chiffon ou
qu'il sorte de
utilisables
pour l'tude.
Microfilaires sanguicoles
1.
Examen
Ftat frais.
Mettre
une goutte de sang entre
VERS
559
lu 1er la paraffine ou la vaseline.

lame el lamelle (p. 622)
Examiner d'abord avec un grossissement faible (200 diam.), pour
reprer les Microfilaires, puis tudier 700 ou 1000 diam. Cet
examen montre la forme, les mouvements, la prsence ou l'absence
:
de
la
gaine, la forme de l'appareil buccal K On peut oprer sur

c'est--dire additionn de solution de citrate de
citrate,
sang
sodium 1 p. 100.
2. Colorations vitales.
Pratiques pour la premire fois

en 1905, elles ont t reprises par les Allemands el
notamment par Rodenwaldt - dont voici la mthode
par
PeneP
Mlanger sur une lame une goutte de sang avec une goutte de solurecouvrir d'une lamelle et luter,
aqueuse d'azur II 1 p. 3 000
sauf en deux points opposs des petits cts, par lesquels on introduit,
au bout de quelque temps et par capillarit, une trs faible solution
d'osine. On met ainsi en vidence les cellules sous-cuticulaires, le corps
interne et deux groupes de cellules que les Allemands dsignent sous
le nom de cellule excrtrice et de cellules g;nitales, correspondant aux
deux pores excrteur et gnital. Le colorant pntre d'abord par ces
deux pores, comme Penel Ta vu le premier 3 les cellules excrtrice et
tion
gnitales se colorent les premires, puis les cellules sous-cuticulaires,

puis les autres cellules.
Le rouge neutre agglomre les hmaties; le bleu de mthylne et le
bleu de crsyl brillant, lgrement alcalinis. peuvent aussi tre
employs, la mme dilution, mais ils donnent des rsultats moins
satisfaisants ^. Les deux colorants les moins toxiques sont l'azur II et le
bleu de mthylne.
D'aprs Rodenwaldt, les caractres des appareils excrteur et gnital
sufflsent pour distinguer les diverses espces de Microfilaires.
Coloration semi-vitale., par
3.
ou
de Schilling-Torgau
A. Coloration des frottis.
celle
born"*
11
recommande beaucoup
fixe,
suivant Looss
c,
la
mthode de
(p. 624).
a.
Frottis humides.
Sabrazs
Fille-
ces frottis.
l'alcool 70" chaud
taler le
sang sur
1. Manson, pour observer cet appareil, fait sortir les embryons de leur
gaine
par sjour des prparations la glacire. Brit. med. Journ., I, p. "392-794, 1893.
2.
Rodenwaldt, Studien zur Morphologie der Mikrotilarien. Archiv fur Schiffsund Tropenkygiene, XII, Beiheft 10, p. 18-20, 1908.
Ditierentialdiagnose
zwischen Mikrofilaria nocturna und dinrna. Ibidem, XIII. p. 215-220, pi. IV. 1909.
3. Penel, Les Filaires du sang de V Homme. Thse de Paris
(mdecine), 1905;
Cf. p. 139 et 140.

4. Voir p. 623 les autres procds de coloration vitale et notamment la mthode
de Papponheim.
5. Fulleborn, Untersuchungen ani mcnschlichen Filarien. Archiv
fir SrJdffsund Troponhygiene, XII, Beiheft 0. p. 15-20, 1908.
in
6. Looss
Mense, Handbuch d. TTopenkrankheiten, I, p. 160, 1905.
560
MTHODES SPCIALES
lamelles et non sur lames faire llolter la lamelle face en dessous, la

surface de Talcool chaud. Conserver dans Falcool 70\
Colorer l'hmatoxyline ou au carmin chlorhydrique; monter au
;
baume ou mieux la glycrine glatine, aprs passage dans l'alcool

glycrine et vaporation graduelle ([). 550) pour viter les contractions.
1).
Frottis dessches.
recommandent de
Fiilleborn et la plupart des auteurs
faire des frottis 1res pais, d'aprs la
mthode
de Ross; on dshmoglobinise dans Teau, (face en dessous en metet on

tant la prparation sur des cales), on fixe l'alcool absolu
^
colore' 1 hmatoxyline. J'ai dit (p. 492 et 628) que, malgr

Tautoi^t des savants qui prconisent cette mthode, je la trouve
franchement mauvaise. En effet, la dessiccation ne peut s'effectuer
lentement
(jue
et
toutes
les
dans
les
partie, de cette lenteur.
En
dformations
embryons proviennent, en grande
produites
outre, les prparations sont loin d'tre planes; les Pilaires peuvent
tre recouvertes de leucocytes et d'hmatoblastes et elles sont
le
gnralement endommages par
contact de l'eau, suivi de
la
Pourtant ce procd peut

fournir des indications quantitatives, en montrant combien il y a
de Microfilaires dans une goutte de sang.
fixation l'alcool et de la dessiccation.
Je conseille donc vivement l'emploi des frottis ordinaires, mais

bien excuts^ c'est--dire en talant loule la goutte de sang, et
en appuyant
trs
peu
la
lamelle, de faon ce
En examinant
soient pas trop minces (p. 626).
du
frottis,
En
excutant un certain nombre de lames
on
est
sr de trouver
les frottis
que
bords et
les
ne
la fin
y en a.
en pratiquant aussi
les Microfilaires, lorsqu'il

et
on est sr d'arriver au diagnostic. On peut

ne dispose pas volont du malade, prlever
quelques gouttes de sang et les citraler pour les examiner loisir.
// faut toujours rechercher les Microfilaires avec un faible
l'examen
l'tat frais,
en plus,
si
on
grossissement (200 diam.), sans cela on s'expose de graves

erreurs.
De mme, en
l'avis
ce qui concerne la coloration, je ne suis pas de

le Romanovsky donne des rsul-
de Flleborn. Je trouve que
bien suprieurs Thmatoxyline. En employant la mthode

panoptique (p. 405) ou le panchrome de Pappenheim (p. 411), on
colore admirablement la gaine en rose, d'une faon absolument
tats
constante.
Dans un
frottis
convenablement excut
et
1. Le
liquide formo-actiqiie de Ruge dissout l'hmoglobine
temps formol 5 p. 100, 95; acide actique crist., 5.
:
dessch, les
et fixe en
maie
VERS
561
Microfilaires ne paraissent pas plus
minces qu'avec riimatoxyline.

oprant comme je le conseille, on a non seulement les Microfilaires, mais le tableau hmatologique complet, ce qui a une
En
grande importance pour Thistoire du malade. Pratiquement, je

considre mme cette mthode comme trs suprieure celle des
humides
frottis
on peut l'employer partout
stances; lorsqu'elle est bien

tout aussi exacts.
et
en toute circon-
excute, elle donne des rsultats
Pour dmontrer les cellules excrtrice et

desschs, Rodenwaldt colore le frottis non
gnitales, sur frottis

lix par l'azur II
1 p. 1000, en chauffant lgrement, et diffrencie par l'ther

glycrique (p. 427). Laver l'eau fond, scher et examiner
dans l'huile de cdre.
Ce n'est pas ici le lieu de

Dtermination des Microfilaires.
donner les caractres systmatiques des Microfilaires. Notons seulement, au point de vue technique, l'importance des mthodes de coloration. .Jus(iu'aux travaux de Rodenwaldt (1908-1909) on dterminait
les Filaires d'aprs la prsence ou l'absence de la gaine, la dimension
l'hmades cellules embryonnaires et la position des taches claires ^
toxyline et surtout le Romanovsky (procds de Pappenheim) montrent
parfaitement ces caractres. Rodenwaldt donne plus d'importance systmati(iue aux organes qu'il nomme cellules excrtrice et gnitales; pour
dterminer les Microfilaires en utilisant ces nouveaux caractres, il faut
employer, soit la coloration vitale l'azur 1 p. 3000, soit les frottis des:
schs, colors
l'azur
p.
1000 et diffrencis avec l'ther glyc-
rique.
Fiilleborn - conseille deux mthodes

Numration des Microfilaires.
1. Mesurer le sang avec une pipette gradue et numrer dans une
cellule numration, aprs dissolution de l'hmoglobine par un liquide
:
formo-actique, color au violet de mthyle 3.

2. Mesurer le sang avec une pipette gradue et l'taler sur une lame.
Laver deux fois la pipette et taler ces liquides de lavage sur deux lames
dilTrentes.
Dshmoglobiniser
la
premire dans l'eau
distille, face
en
dessous, puis fixer l'alcool. Fixer seulement les deux autres. Compter
les Microfilaires dans les trois lames.
Fiilleborn, dans le mme travail,

deux procds
1. Pour la numration, il importe peu d'avoir des Microfilaires mortes.
formoCentrifuger le sang mesur et mlang avec le prcdent liquide
nctique. Etaler et numrer le culot.
2. Pour avoir des Microfilaires vivantes
mlanger le sang avec de la
Mthode d'enrichissement.
indi(iue
1.
2.
Cf.
Brumpt, Prcis de parasitoluijic, p. 436.

Ueber Yersuche an Hundefilarien. Arch.
Fiilleborn,
XII, Reiheft 8, p. 11-1-2, 1908.

Formol 5 p. 100, 05; ac. actique crist., 5;
f.
Schiffs
und Tropen-
h;/f/iene,
3.
gentiane,
sol. alcooliq.
conc. de violet de
2.
M. Langkro.n.
Prcis do Microscopic.
-'O
METHODES SPCIALES
362
solution physiologique'; centrifuger fond; dcanter; traiter le culot

par l'eau distille qui n'altre pas les embryons; centrifuger de nouveau; remplacer l'eau distille par de la solution physiologique et centrifuger
une dernire
fois.
Acanthocphales.
Ces Vers sont surtout frquents chez les Poissons, les Batraciens et les
Oiseaux acjualiques. Chez le Porc on trouve Giyantorhynclms glgas et chez
le Rat G. moniUfonnis. Lorsqu'ils sont fixs fortement la muqueuse,
il faut sectionner un
fragment de celle-ci, et dbarrasser ensuite dlicatement la trompe des dbris de tissu. Faire gonfler les Vers dans la
solution physiologique, puis les fixer dans l'alcool chaud ou, s'ils sont
de petite taille, les comprimer entre deux lames et les immerger dans
l'alcool ou l'alcool-formol. Ce dernier procd est le meilleur lorsqu'on
doit monter les Vers en prparation microscopique et les colorer. Le
meilleur colorant est le carmin chlorhydriiiue; on monte ensuite au
baume. Ne jamais colorer dans une solution n({ueLise (\m gonflerait les
Vers. Les grandes espces se conservent admirablement dans le formol
"OU dans l'alcool.
IH.
RECHERCHE ET CONSERVATION
DES UFS D'HELMINTHES
La recherche des ufs irHelminlhes, pour
le diagnostic, doit
lre effectue dans les produits d'excrtion des oi^ganes parasits
crachats, urine, matires fcales.
de ces dernires qu'on a
le
Nous nous occuperons d'ahord
plus souvent Toccasion d'examiner.
Pour les crachats et les urines, se reporter aux articles spciaux

(p. 646 et 647).
La coprologie microscopique est la recherche des lments
Ces lments figurs
figurs qui se trouvent dans les djections.
peuvent tre des dhris alimentaires, des lments histologiques,

des parasites, des ufs d'Helminthes. L'examen microscopique
des selles a pris peu peu une grande importance clinique; pourtant il est encore trop souvent nglig, peut-tre parce que heau-
coup connaissent insuffisamment
la
technique coprologique.
Technique coprologique.
Elle
comprend l'examen macroscopique
et
microscopique des
selles.
t.
Je prfre employer
mieux
la coagulation.
le
citrate de
sodium
p.
100 qui
empche encore
VERS
563
L'examen
macroscopique est g*nralemeiil nglig ou pratiqu

superficiellement. Il ne faut pas seulement examiner les matires
travers les parois d'un llacon ou dans un vase
quelconque. Il
faut encore les diluer
les
comme
il
gros dbris alimentaires et
a t dit p.
549
et
y rechercher
faut aussi
gros parasites.
s'aider de la loupe pour rechercher, dans le sdiment, les Helminthes de trs petite taille, tels que les Trichines ou les
Heterophyes.
les
Il
L'emploi d'une cuvette photographique noire rendra de grands

services (p. 549).
L examen
rclame
microscopique
aussi
des
prcautions
spciales, surtout lorsqu'il s'agit de dceler un trs petit nombre

d'ufs ou d'tablir un pourcentage par numration. Aussi allons
nous esquisser une revue des procds les plus utiles.

1- Examen direct.
La mthode la plus simple consiste prlever un petit fragment de matire, le diluer au besoin avec un
peu d'eau physiologique bouillie et l'taler bien uniformment
entre lame et lamelle. Ce procd fournil d'excellents rsultats,
malgr sa simplicit,
est
lorsqu'il
appliqu
avec
mthode
et
patience.
1
Employer toujours de
trs
grandes lamelles
22x22
ou
22x32.
2 taler le
la lamelle,
mlange bien uniformment, non pas en crasant
mais en
la
dplaant lgrement avec un
mouvement
Saisir la lamelle par ses bords, avec une pince, })our

effectuer ce mouvement. Les matires doivent former une
tournant.
mieux
couche mince, transparente ^ homogne.

3
avec
4
Examiner mthodiquement toute
Ne
comme
Mthodes d'enrichissement.
but d'abrger l'examen
ufs sont
surface de la lamelle
il
ra lions.
la
a t dit p. 14 et 169 (fig. 99).

pas conclure avant d'avoir examin ainsi 4 6 pr])a-
la platine chariot,
trs
et
de faciliter
le
Ces mthodes ont pour

diagnostic, lorsque les
peu nombreux.
Notons de suite Timportance pratique des mthodes d'enricliissement.

ces manipulations est amplement compens par
l'conomie de temps et de fatigue, ralise sur un examen microscopiiiue
Le temps qu'exigent
1. Il est souvent utile de diluer les matires avec du

lactophnol, qui donne
plus de transparence et augmente la rfringence des ufs, sans les gonfler ni les
dformer; mais ce ractif peut rendre invisil)lcs les Protozoaires, lorsque ceux-ci
n'ont pas t fixs par le formol.
MTHODES SPCIALES
564
prolong
mthodiquement une prparation de
matires fcales, exige une attention soutenue et toujours en veil,
cause de la varit des objets et de la ncessit de dterminer la nature
exacte de ceux qui peuvent ressembler des ufs d'Helminthes, surtout
lorsque ces derniers sont trs rares. 11 en rsulte une grande fatigue
crbrale et oculaire, dont on peut supprimer une partie au moyen des
procds de concentration.
La concentration est une des mthodes les plus employes en micrographie gnrale, pour l'tude des lments isols et pars dans un
milieu solide ou liquide. On la produit par des procds mcaniques
et infructueux. Parcourir
(centrifugation, lvigation), physiques (triage par les liqueurs denses),

chimiques (dissolution de la gangue par l'eau, les acides ou les bases).
En ce qui concerne la recherche des o?ufs, l'idal est d'arriver li-
miner tous
les corps autres que ces ufs, en profitant de la solubilit

des diffrences de densit, de manire obtenir finalement, sous un
petit volume, tous les lments parasitaires renferms dans une grande
quantit de matires.
Les procds de concentration ont t ports un trs haut degr de
prcision et de perfection dans le domaine de la micrographie lithologique. 11 serait dsirer que les biologistes s'inspirent un peu de ces
mthodes et essaient de profiler des progrs raliss par Thoulet,
Lauby, etc. Un bon nombre de ces mthodes minralogiques ne sont
pas applicables aux ufs d'Helminthes, cause de leur fragilit, mais il
est des appareils, tels que le tube lvigation de Lauby ', qui pourraient tre employs avec avantage, dans les laboratoires o on pratique
constamment l'examen des matires fcales.
et
On
a propos
Maurice Hall
un grand nombre de procds. Tout rcemment,

une revue 1res complte de ces mtbodes.
a publi-
que j'emprunte la plupart des dtails qui vont

que je dispose dans un ordre diffrent.
C'est ce travail
suivre, mais
a. Sdimentation simple.
Laisser dposer les matires liquides.
Diluer les matires solides avec un excs d'eau, laisser reposer pendant
5 minutes, dcanter le liquide trouble, recommencer plusieurs fois,
jusqu' ce que les eaux de lavage soient peu prs claires. On limine
ainsi les matires solubles et les particules amorphes; on produit donc
une concentration partielle et on rend la pte fcale moins obscure.
6. Centrifugation.
C'est une sdimentation rapide, applique de
3
reproche ce procd d'altrer la
petites quantits de matire. Letulle
forme des oufs {Schistosomum, Ankylostomum)\ je n'ai pas constat cet
accident, bien que j'aie eu centrifuger de grandes quantits d'urines
bilharziennes.
c. Tamisage.
Le passage des matires travers un tamis mailles
fines (1 mm.) a pour but de sparer les parties grossires, qui restent
L Voir
note
565.
?, p.
C. Hall,
A comparative study of methods of examining fseces for

evidonces of parasitism. U. S. Dpart, of ayric. Bureau of animal industry. Bull,
n" 135, iQ-8 de 36 p., 1911.
Journ. of trop, vieil, XIV, p. 169-171, 1911.
3. Presse mdicale, 30 dc. 1905.
2.
Maurice
565
VERS
sur le filtre, des portions les plus fines, renfermant les o.'ufs, qui passent
avec l'eau de lavage. Ce procd est employ par de nombreux auteurs
(Bass, Telemann, Garrison, Brumpt) avec diverses variantes. C'est une
bonne mthode pour trier de suite les gros parasites. Les ufs passent
avec les eaux de lavage, qu'on recueille et qu'on sdimente. On peut
laver encore le sdiment plusieurs reprises, pour le concentrer et le
dpouiller des particules amorphes.
La sparation des divers
d. Traitement par les liquides denses.
lments des sdiments, suivant leurs densits, au moyen de liqueurs
plus ou moins denses, est un procd trs employ dans certaines branches de la micrographie, notamment en lithologie microscopique. Au
point de vue gnral, je considre ce procd comme trs suprieur la
dcantation, parce que les objets peuvent rester en suspension dans

l'eau pendant des temps trs variables, proportionnels non leur densit mais leurs dimensions, comme l'ont bien montr les recherches
de Thoulet i et de Lauby -. Pour les recherches biologiques, l'emploi

de ces liqueurs est malheureusement trs limit, cause des altrations
et dformations qu'elles produisent dans les lments.
Bass a d'abord employ une solution concenMthode de Bass -K
tre de chlorure de sodium, puis a conseill de prfrence le chlorure de
Les matires sont tencalcium, qui est employ aussi par Garrison
dues de 10 fois leur volume d'eau et passes au tamis. Le sdiment est
lav plusieurs fois par centrifugation, de manire enlever le plus possible de matriaux solubles, puis mlang une solution de chlorure de
calcium de densit 1,050^'. On centrifuge de nouveau, les ufs tombent au fond, car leur densit varie de 1,050 1,100; ce qui surnage est rejet. Si le sdiment est abondant, on le reprend par une
les ufs
solution plus concentre, de densit 1,250*^ et on centrifuge
se rassemblent la surface; on limine ainsi des parcelles lourdes et
grossires qui gnent beaucoup pour l'examen microscopique. On enlve
la couche superficielle du liquide, on la reprend par de l'eau pour
revenir 1,050 et on centrifuge. On retrouve, dans le culot final, tous
les ufs qui existaient dans la quantit de matire mise en exprience.
'
Wellman remplace le chlorure de calcium par l'actate de sodium.
Prlever diverses portions
e. Mthode chimique de Telemann *^.
''.
1. J.
Thoulet, Prcis d'analyse des fonds sous-marins actuels et anciens. Paris,

Analyse mcanique des sols sous-marins. Ann. des mines (9),
Cliapelot. 1907.
XVII, 1900.
2. A.
Lauby, Nouvelle mthode technique pour l'tude palo-phytologique
des formations sdimentaires anciennes. Bull. Soc. botanique de Irance, LVI,
.Vmoire ia, 1909.
3. Journ. Amer. med. Assoc, XLVII, p. 185-189, 1906 et Arch. intern. med.
Chicago, III, p. 446-450, 1909.

4. Garrison, Helminthological technic. U. S. Naval med. BulL-lV. p. 345-354, 1910.
5. A 18C, une solution 10 p. 100 pse 1,041 et une solution 15 p. lOO, 1,062,
d'aprs Behrens; ces chiffres varient beaucoup suivant les auteurs et aussi suivant
la puret
du produit employ.
6. Une solution 26 p. 100 de sel anhydre pse peu prs 1,2415 15. Une
solution 55 p. 100 de sel hydrat pse 1,252 18".
7. Wellmann, Comrnents on tropical medicine. Calif. State Journ. med., VIII,
p. 312-313, 1910.
8. W. Telemann, Eine Mthode zur Erleichterung der Auffindung von Parasitoneiern in den Fteces. Dtscli. med. Wocli., XXXI V, p. 1510, 1908.
MTHODES SPECIALES
566
des matires
et
dlayer Tensemble de ces prises dans
le
mlange suivant
ELher sulfuri(iue ....

Acide clilorhydrique pur
aa
L'lher dissout les graisses neutres et les acides gras, tandis que
Tacide dissout les alhuminodes, les savons, la mucine, les phosphates,
les sels de calcium. On passe au tamis fin, puis ou centrifuge. 11 se
forme trois couches
au-dessus, l'tlier avec les graisses; au milieu,
l'acide avec les bactries et les fines particules; au fond, le culot renfermant les ufs le traitement a produit une concentration assez notable
de ces derniers. Cette mthode ne donne pas de rsultats suprieurs
celle de lall et elle prsente le trs grave inconvnient de dtriorer
i"apidement le microscope, cause des vapeurs acides que dgagent
:
les prparations.
f.
Mthode mixte de
les matires, puis
Division.
Hall.
les tamiser,
Elle cuiisisle diviser rmenient
sdimenter
et enfin centrifuger.
librer
les parasites et
Indispensable pour
leurs ufs et mettre tous les lments en suspension dans l'eau.
Agiter les matires dans un flacon bien bouch, aux trois quarts
au besoin, diviser d'abord avec un agitateur en
rempli d eau
1.
verre, pour briser les gros fragments. Employer de prfrence un

et alors une minute suffit pour cette opraagitateur mcanique
tion.
2.
Premier tamisage.
Prparer
cuvettes en fer-blanc^ s'embotant
six
tamis, forms de six
Tune dans
l'autre.
Le fond des
cuvettes a t dcoup et on a
soud sa place une toile mtallique en laiton. Les mailles doivent avoir 3 mm. pour le premier
tamis,
et des
Les six tamis de Hall

188.
embots et prts fonctionner.
Fig.
diamtre au fond
Emboter
et leurs
les six
250 a pour le dernier

dimensions intermdiaires
dcroissantes pour les autres. Les

cuvettes mesurent 16 cm. de
bords ont 5 cm. de hauteur
tamis et mettre
le tout
(fig.
dans un grand
188).
cristal-
les matires sur le premier tamis et y ajouter assez

recouvrir le fond de ce
solution
d'eau ou de
physiologique pour
lisoir.
Verser
tamis.
Tamiser successivement avec

1.
Pour viter
fer galvanis
la rouille,
ou en zinc.
les six tamis et
examiner macros-
on peut peindre les cuvettes, ou mieux,
les
prendre en
VERS
567
sur chacua (reux. Cha({iie

copiqaemeiil les matires qui restent
secondes.
dure
quelques
tamisage
Deuxime tamisage.
3.
dernier tamis, est vers sur
un
117 13 i a (ou mieux en
toile
de ce diamtre). Tenir
blanc identiques aux
prcdentes,
Le sdiment qui a travers le

en soie bluter a mailles de
de laiton, si on peut en trouver
crible
tendue entre deux cuvettes de fer-
la soie
_^^=3
c'est--
"^^"^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
prives de leur
fond les deux cuvettes
dire
wMu\
sont serres avec des
4,
Sdimentation.
a travers le tamis
On
de soie
peut, au besoin, laver une

laisser reposer de nouveau.
Dcanter le liquide
o. Centrifugation.
sdimenter^
le
le
l/i
Manire de tendre la soie bluter

^j^ ^gg
pour le second tamisage de la mthode de Hall.
189).
Le liquide trouble qui
i^^^^^^^^pj'
pinces linge en bois

(fig.
l^^^
^^wim\r\
rsidu,
qu'on peut laver,
si
c"est
fois
est
abandonn
ce sdiment et
clair et centrifuger
ncessaire,
par plusieurs
centrifugations. Il est important de centrifuger trs peu, juste
assez pour sdimenter les ufs. A la vitesse de 1 230 tours la
minute, dix secondes suffisent.

centrer tout le sdiment utile,
On
arrive facilement ainsi con-
dans
les
deux tubes du
centri-
fugeur.
L'opration termine, laisser un des tubes tel quel. Jeter le
liquide de Tautre et le remplacer par une solution de chlorure de
calcium de densit gale 1,250 (27 p. 100 de Ga Cl- anhydre ou

p. 100 de sel hydrat). Centrifuger dix secondes 1230 tours,
^
la surface, avec une pipette. Mlanger
puis prlever 1 cm
14 cnr^ d'eau et centrifuger de nouveau.
oo
une prparation SiYec le culot du tube trait par Teau

une autre avec le culot du tube chlorure de calcium, qui
6. Faire
et
sert
de contrcMe.
La mthode de Hall donne au moins quatre fois plus de chances

de trouver les ufs que la mthode d'examen direct. C'est, en
outre, la plus rapide de toutes les mthodes d'enrichissement.
Ce procd est excellent pour la recherche de tous les ufs
d'Helminthes
1.
Pour viter
ajouter 2 3
p.
et
mme
le
dveloppement des ufs
des oocvsles de Coccidies.
100 de formol.
et la putrfaction, je conseille d'y
568
MITHODES SPCIALES
Je crois que personne n'a eu l'ide (remployer

g. Lumire polarise.
ce procd optique pour l'examen des matires fcales; il peut rendre
des services dans certains cas. Les dbris vgtaux s'illuminent brillam-
ment
ufs
entre les niois croiss; en outre,

est birfringente
dans
les
j'ai
que" la coque des

Bothrioccplialus, Clo-
remarqu
genres suivants
Paragonimus, Trichocephalus.
Les essais de coloration qui ont t tents n'ont rien
Colorants.
donn de satisfaisant. Le Sudan 111 ne convient que pour la recherche
des graisses et l'iode ne montre nettement que les grains d'amidon et
les Levures.
norcliis,
h.
Numration des ufs d'Helminthes.

Leichtenstern ^ pse une certaine quantit de matires, la mlange
100 cm3 d'eau et compte les ufs renferms dans une goutte (0,03 cm3).
11 obtient ainsi le nombre d'ufs au
gramme.
Brumpt - opre de la faon suivante

peser 5 gr. de matires, les
tendre de deux volumes d'eau distille et bien homogniser, puis passer
au tamis de 1 mm. Laver deux fois le rsidu qui reste sur le tamis, en
exprimant chaque fois. Runir le produit des trois oprations, ajouter un
vingtime de formol et sdimenter en 24 heures. Dcanter et peser le
rsidu
soit 20 gr. le poids obtenu. Chaque gramme de matires est
donc reprsent par 4 gr. de dilution. On cherche alors combien il y a
de gouttes dans un gramme de dilution bien homogne
suivant le
diamtre du compte-gouttes, on en trouve de 20 30. On examine entre
lame et lamelle une ou deux gouttes et on numre les diverses espces
d'ufs. Il est facile de calculer, au moyen de ces donnes, la teneur en
ufs de 1 gr. de matire
on multiplie le nombre d'ufs trouvs dans
une goutte par le nombre de gouttes au gramme et par le cliillre de la
dilution. Ce procd, (juoique trouv d'une faon indpendante, rappelle
celui de Lulz '>.
:
'^
Conclusions tirer de l'examen des prparations.

On
n'a encore
relations entre le
les selles
que des donnes parses
nombre des
et
contradictoires sur les
parasites et le chilfre d'ufs trouvs dans
s.
En
ce qui concerne le diagnostic, un examen ngatif doit toujours

laisser subsister un doute, car le parasitisme peut exister sans se
manifester par des ufs
Deutsche med. Woch., n" 11-14, 1886.
'2.
Brumpt, Diagnostic des pizooties parasitaires.
Ileo. f/rn. des se, p. \-23-\-21,
1911.
3.
L'action du formol est triple

les ufs d'voluer.
antiseptique, dcolorant, fixateur qui
empche
en partie
Lutz, Ueber Ankyiostomum duodenale und anhylosLomiasis. Yolkmann's Sammlung klin. Vortrage, Leipzig, Breitkopf und Hartel, 1885.
5. Leichtenstern [loco
cltato) divise par 47 le nombre d'ufs d'Ankylostomes
trouv dans un gramme de matires et connat ainsi le nombre de femelles. Ce
est
bas
sur
de
nombreuses
procd
autopsies.
4.
569
VERS
Lorsqu'il n'y a que des mles de Nmatodes;

a que des larves de Cestodes ou de jeunes Trmatodes;
femelles sont infcondes;
2 Lorsqu'il n'y
3 Lorsque les
Par suite d'oscillations dans l'expulsion des ufs.

Lorsque les parasites ne pondent pas dans l'intestin (Tnias,
Oxyures, etc.).
Il sera donc bon, en cas d'chec, de rpter l'examen pendant plusieurs
jours conscutifs.
4
Causes d'erreur.
Le dbutant peut prendre
ufs pour
les
des dbris alimentaires ou, plus frquemment, faire la confusion

inverse. Il ne faut pas oublier que les ufs possdent une mem-
brane double contour, de forme et de dimensions caractristiques;

dans cette enveloppe se trouve un embryon ou une bauche
embryonnaire prsentant aussi des caractres spciaux.

Parmi les corps figurs qui peuvent tre pris pour des ufs,
les grains de pollen les spores de Lycopode les spores
de Champignons et notamment celles de Truffe, d'Ustilagines et
d'Urdines; les sphrules de savons calcaires; les fragments de
signalons
Irachides spirales prenant
non plus prendre certains
la
forme d'anneaux.
poils
Il
ne faut pas
vgtaux pour des
(THelminthes; ces poils ont toujours une paroi paisse
et
embryons
une base
d'implantation tronque.
Conservation des ufs d'Helminthes en
prparations dfinitives.
Il
peut tre ncessaire, pour les comparaisons ultrieures ou pour

de renseignement, de conserver les ufs d'Helminthes,
les besoins
soit
en rserve, dans des tubes,
Matriaux de collection.
soit
en
prparations microscopiques.
Le produit
de
sdimentation des
la
matires peut tre conserv soit dans le formol 5 p. 100, soit

dans le lactophnol. Le formol fixe trs bien les ufs et leur
conserve leur aspect naturel, mais il produit quelquefois autour

d'eux de fcheuses agglutinations de particules. Le lactophnol a
de ne pas s'vaporer et d'claircir les ufs, mais il
l'avantage
leur enlve un peu de leur aspect naturel.
On peut monter la plupart

des matires dans l'eau formole et luter au lut de Kronig. PerPrparations microscopiques.
sonnellement, je prfre de beaucoup le montage au lactophnol

donne des prparations trs limpides, dans
(p. 444 et 461) qui
METHODES SPECIALES
570
lesquelles les
ufs sont admirablement
claircis,
en conservant
leurs caractres morphologiques et leurs dimensions.
procde comme il suit pour monter la glycrine gladlayer les matires avec de Peau et liminer les gros
fragments; fixer en mlangeant la bouillie avec de Talcool 70"
Looss
line
">
p. 100), chauff -I- 70. Aprs refroidissement,
dcanter, ajouter de l'alcool glycrine frais, vaporer Ttuve et
glycrine (
monter la glycrine glatine.

Les ufs des Tnia exigent quelquefois
l'acide lactique et monts dans ce liquide.
IV.
En
d'tre
claircis
par
EXPRIMENTATION
ce qui concerne les Ceslodes et les Trmatodes je ne puis
qu'indiquer les matriaux les plus favorables. Les Nmatodes,

dont le cycle est en partie libre, se prlent aux expriences Ui
vitro et donneront lieu de plus longs dveloppements.
Le malriel le plus facile employer est le Tnia serrata

Cestodes.
dont rvolution larvaire se produit chez le Lapin tuer les
Lapins entre le 3^-4" et le 15' -20" jours et fixer le foie. On y trouvera
les dbuts de la formation du Cystiscercus pisiformis, avec des lsions trs
intressantes. On peut oprer aussi avec le Tnia crassicollis du Chat^ et
obtenir le Cysllcercus fasciolaris chez le lât ou la Souris, ou inversemenl.
Pour le Tnia echinococcus, rpter les belles expriences de Dv.
Rechercher les Gysticerdodes dans les Puces et les Poux (dissquer
dans la solution physiologique) de Chiens infests de Dipylidiuni caninuni.
Trmatodes.
Essayer l'volution des ufs qui se trouvent dans les
voies biliaires des Moutons douves; le Miracidium ne sort quelquefois
qu'au bout de plusieurs semaines. Il n'est pas toujours facile de trouver
des Limna truncatala.
Chez la Grenouille 3, on trouve de nombreux Trmatodes qui se
prtent trs bien aux expriences. Le Diplodiscus subclavatas, Paramphistomid du rectum, volue chez divers petits Planorbis. Dans Lintestin
grle, on peut trouver jusqu' six espces le Brandcsia tiirgida s'enkyste
dans des tumeurs qui font saillie la surface externe du duodnum;
cla Gliieii,
Brachycliani crassicolle, Opisthioglyphe endoloba, Pleiirogenes claviger,

P. mdians, Pi'osotocus confasus, vivent fixs la muqueuse. Ils sont
excessivement petits, et, pour les dcouvrir, il faut examiner un
faible grossissement le
1.
Looss
2.
Brumpt
produit
de raclage de
la
mutiueuse. Dans
la
Mense, Handb. d. l'ropenkrankhciten, I, p. 79, l'iO.

a reconnu qu'it est facile d'infester le Chat avec le Cysticercus fasciolaris bien mr, mais trs difficile d'infester le Rat et la Souris en partant
in
d'anneaux du Tsenia crassicollis.

o. A. Looss, IJie Distomen unserer Fische und Frsche.
Brauer,
Stuttgart, 1894.
Siisswasserfnmia Deutscidands, Heft 17, Trematoden. lena, Fischer, 1909.
VERS
o71
bouche, on trouve Halipegiis ovocaudatus: dans les poumons

Haploinelra
cylindracea, Pneumoneces variegalus et P. similis: dans la vessie, Gorgodcra
cygnoides et Polystoinuin integerrimurn, ce dernier appartenant au groupe
des Trmatodes monognses. Pour les expriences sur le Schistosomuni
japoniciun K Katsurada et Ilashegavva ont fig:ur un appareil trs ingnieux, sorte de cangue, qui permet de faire flotter le Chat, animal
rceptif, dans l'eau charge de Mira:
cidia (flg.
190).
Nmatodes.
La ncessit de
combatlre l'ankylostomose a port

Jes chercheurs perfectionner les
procds techniques d'exprimentation. Ceux-ci ont t prsents
sous leur forme la plus rcente par
Looss, dans la seconde partie de sa
monographie de rAnkylostonie -.
Fig. 190.
rada et Hashograwa.
Culture des Ankylostomes et

Anguillules par la mthode de
Looss.
animal
et
Ptri.
Mlanger
tendre
Le noir ne
sistante
la
Cangue pour exprimenter sur les animaux qu'on

doit immerger. D'aprs Katsu-
de noir
gales de matires et
bote de
une
dans
en
couche
mince,
pte
parties
doit pas tre acide et la ple doit tre assez con-
pour qu'on puisse retourner
le
vase sans qu elle coule
les selles diar-
donc, pour les selles dures, ajouter de Teau; pour

noir.
rhiques, dcanter ou augmenter un peu la quantit de
Le noir
la
putrfaction et are
vases,
il
Todeur
agit en enlevant
faut
effectus avec
mme
et la raction acide;
la culture.
Pour
les cultures
empche
il
en larges
complter cette aM'ation par des sarclages

les deux ou trois jours.
une spatule, tous
Pche des larves.

celui de Leichtenstern.
Le procd de Looss
Exposer
est
les cultures l'air,
une amlioration de
jusqu' dessiccation
voit les larves sorlir et on les

recommencer plusieurs fois de suite, si la
superfifielle, puis les recouvrir d'eau.
On
dcante avec Teau. On peut,

pte est assez dure pour ne pas se dlayer.
Par dcantation ou \)iiT fiitratiou. Ce derNettoyage des larves.
nier procd est bas sur la proprit (ju'ont les larves de traverser le
papier flllrer. Filtrer d'abord rapidement le li(iuide renfermant les
larves, attendre
que
celles-ci
aient travers
le
filtre,
puis les entraner
en remplissant de nouveau le filtre d'eau. Sdimenler pour avoir les

larves. Ne pas oublier que leurs mouvements sont actifs 25 mais
cessent vers 15". Se mfier de la dessiccation.
1.
Centraltdalt
2.
Becords of the
f.
Bakt., Orig., LUI, p. 519-522, 1910.

Gov. School of mediciaCyCairo. IV,' 1911.
l'Jgi/pt.
MTHODES SPECIALES
572
On peut encore prparer un sachet form de 3 ou 4 paisseurs de

vieux linge, le remplir de culture riche en larves et le suspendre dans
un vase plein de suhlim 1 p. 5 000, qui ne tue pas les larves. En cas
de froid, on peut oprer l'tuve.
Prparer des cadres en fil de fer ou de laiton,
Exprimentation.
huit
rectangulaires ou ovales, de 6-10 sur 4-5 cent. Les recouvrir de
paisseurs de gaze pansements ou de deux paisseurs de forte toile;
attacher des cordons aux deux petits cts. Prparer des bonnets de
ces bonnets ont une ouverture entre
toile pour les Chiens en exprience
on les attache derrire les oreilles.

Les Chiens s'occupent uniquement les enlever, sans se soucier de ce
le
nez
et les
yeux pour
la respiration,
le
qui leur arrive d'autre part. Appliciuer et attacher, l'endroit choisi,
rectangle de toile, l'imbiber avec le liquide riche en larves, pour raliser
les conditions naturelles d'infestation par les vtements mouills. Au
besoin, renouveler Timbibition plusieurs fois. L'exprience finie, on
enlve le bandage, on nettoie la place, on la sche, et on dlivre le Chien.
Le bonnet empche l'infeslalion par la voie buccale. Tuer l'animal par
le chloroforme, le plonger dans le formol 2 p. 100, aprs ouverture de
l'abdomen et du thorax et remplissage des cavits naturelles. Prlever
les pices
aprs durcissement.
Fixer l'alcool 70"

et coloration des larves.
chaud. Sdiinenler dans un tube fond rond. Enlever l'alcool avec une
Fixation
pipette. Le remplacer par du carmin chlorhydrique et laisser colorer

24 heures. Diffrencier dans l'alcool chlorhydrique (5 gouttes HCl p. 100).
Laver l'alcool pur et monter au baume (aprs dshydratation et passage

au xylol) ou mieux la glycrine glatine (aprs passage dans l'alcool
glycrine 5 p. 100 et concentration l'tuve).
Mthode de Nissle et Wagener '.
Verser, dans des boites de Ptri,
un milieu prpar en faisant bouillir pendant une heure 100 cm^ d'eau
avec 1 gr. de glose. Etendre la surface, avec un pinceau, les matires
dlayes dans de l'eau. Cette mthode est commode pour le diagnostic
et la numration, car il est facile d'apercevoir les larves; mais elle
expose de graves erreurs, car la dtermination de ces larves est trs
difficile.
Mthode de
Fulleborn'-.
entonnoir en verre
(fig.
Placer les
malires
191) garni, au lieu d'un
d'un entonnoir de gaze noircie.
Au
fond, on
filtre
met du
dans un
en papier,
sable strilis
L'entonnoir est pos sur une prouvette,

dans
cuve
de verre pleine de lessive de potasse,
une
place
grande
trs
les
tue
larves.
qui
rapidement
L'prouvelte est tenue diset au-dessus, les matires.
tance des bords par
un
triangle de
fil
de
fer.
On
vite ainsi la
de rexprimentateur. Les larves

se
rassemblent, la partie suprieure de
strongylodes enkystes
la gaze, en tortillons ou mches
caractristiques, bien visibles sur
sortie des larves
1.
2.
et l'infeslalion
Hyr). Rundschau, p. 57-60, 1904.
Fulleborn, Mthode zur Anreicherung von Ankylostomenlarven. Arch'iv
Schiffs-und Tropenhijyiene,
XV,
p. 368-371, 1911.
fi'ir
b73
VERS
Ces mches se produisent surtout en dehors de

par la condensation de Teau sur les
fond noir.
le
Ttuve
sont favorises
et
Pour
parois.
mentation,
mches
les
Texpri-
on
prlve
on
et
'^J
les
porte directement sur la
peau de Tanimal.
Trichine.
fester
les
Pour
in-
Brumpt
un bocal
Souris,
les met dans

avec un trs petit fragment
de viande triehine. Si la
dose est trop forte, l'ani-
mal meurt, la priode

des troubles gastro-intestinaux, avant l'infestalion
musculaire.
Acanthocphales.
est
Il
facile
d'exprimenter
sur les Crustacs d'eau
douce, qui servent d'htes
intermdiaires certaines
espces.
Asellus
aquaticus
convient pour VEchinorhynchiis

hnica de la Grenouille
tatus
et
Appareil de Fiilleborn pour l'levage

Fig. 101.
KOH, lessive
des larves d'Aukylostome.
de potasse /, larves agglomres en mches
e, entonnoir en
gaze noire; g, entonnoir eu
verre.
pour E. angus-
des Poissons carnivores. Gammarus piilex hberge les larves de

et, entre autres, celles de VEchinorhynchus proteiis des
plusieurs espces
Poissons.
SANGSUES
Anesthsier les animaux dans l'eau chloroforme ou plus simplement
avec de l'eau de Seltz, puis fixer par le sublim ou tout autre fixateur.
Dbiter ensuite en tranches pour inclure et couper.
Pour les travaux de systmatique, la fixation dans l'eau bouillante ou
l'alcool 70 bouillant suthsent parfaitement. Conserver les animaux
dans l'alcool. Pour l'levage des petites espces de Sangsues, voir
p. 488-4U.
Cette technique est applicable l'tude des Lombrics. Avant de les

il faut leur faire vacuer la terre
qui remplit leur tube digestif :
tuer,
pour cela, on les garde quehiue temps sur du papier buvard humide ou
du marc de caf. Ces substances, surtout la dernire, se coupent passablement bien dans la paraffine.
CIIAPITUE
II
ARTHROPODES
Les seuls x\rlliropodes qui nous intressent au point de vue
les Arachnides et les Insectes ^ Ils sont caractriss
mdical sont
par la prsence d'un squelette chitineux externe. La systmatique

de ces animaux est base sur les caractres de ce squelette. Leur
prparation microscopique doit donc tre envisage deux points
trs diffrents, suivant qu'il sagit de conserver leurs
de vue
caractres extrieurs ou d'tudier leur structure histologique.
Dans le premier cas, les parties molles importent peu il faut

seulement conserver les caractres externes dans leur intgrit et
;
les
rendre visibles, en amenant l'animal un degr suflisant de
transparence.
Dans le second cas, au contraire, il faut, ou se dbarrasser du
squelette chitineux, ou. au moins, le ramollir suffisamment, pour
permettre d'appliquer aux organes internes
les
mthodes
histolo-
giques.
1
Prparation du squelette externe.
Nous supposons
l'animal tu.
employer pour chaque groupe.
Il
Nous verrons
s'agit de
le
les
procds
monter entre lame
et
lamelle. Les amateurs de microscopie arrivent, force de patience,

aplatir parfaitement les Arthropodes, par l'action prolonge de
la potasse, suivie d'une compression
mthodique malheureusement
;
ces prparations ne sont pas toujours utilisables pour les travaux

de systmatique. Je prfre beaucoup les prparations un peu
1. Les petits Crustacs,
qui peuvent servir d'htes intermdiaires, sont justiciables, soit des mthodes du plankton (p, 615), soit des mthodes que nous
allons exposer pour les Arthropodes.
ARTHROPODES
respeclanl mieux
575
paisses,
rapports des divers
On
dans
un aplatissement
obtenir
certains
cas,
organes.
peut,
modr en tuant l'animal par le chloroforme, en le ramollissant
inimdialement dans Feau trs chaude et en le disposant entre
les
reliefs et
les
deux lames qu'on charge de poids progressifs (petits tubes contenant du mercure, p. 440;; aprs aplatissement, on lie les deux
lames avec un fil et on plonge le tout dans l'alcool pour durcir.
Mthode de
Ce procd
trbenthine de Venise.
est le plus simple de tous et donne des rsultats parfaits. L'animal
doit avoir s^'journ quelque temps dans l'alcool 95 on l'en sort,
on le dpose dans une goutte de trbenthine de Venise, prpare
A.
la
comme
a t dit p. 442, et on recouvre d'une lamelle avec ou
il
sans cellule. Les parties molles sont souvent fixes et conserves

parfaitement, et peuvent tre tudies travers la carapace
chitineuse.
Mthode du chloralphnol.
B.
est
un
excellent
Le baume du Canada
mdium, mais d'un emploi plus compliqu, car
faut passer, aprs l'alcool, par un liquide intermdiaire. Pour

viter la fois cet inconvnient et le durcissement invitable des
il
objets dans l'alcool absolu
temps
Aman
et j'ai
II
et le tolune, j'emploie depuis longprconis rcemment l'emploi du chloralphnol de
'.
Cet excellent ractif- n'a t cr par son auteur qu'en vue de

l'examen des objets vgtaux, mais il s'applique trs bien aux
Arthropodes.
ordinaire
Il
se prpare de
deux faons
Hydrate de cliloral crist

Acide plinique crist
soit
2 parties.
1
avec du para-monochlorophnol
liqufie ces
Ilvdrale de cliloral crist.
Monochlorophnol
deux mlanges
(para).
^
^
On
avec du phnol
soit
une douce chaleur
et
on
les
conserve en flacons compte-gouttes pipette (fig. 173). Le premier {n

1,52) a l'inconvnient de cristalliser trop facilement en
1. M. Langeron, Emploi du
chloralphnol de
Arthropodes. C. R. Soc. de biologie, LXX, p. 457,
2. .J.
Amann, Neue Beobachtungsmediea.
Zisclir.
Amann
191
pour
le
montage des
1.
f. iriss.
Mikr.. XVI, p. 38, 1899-
576
MICTHODES SPCIALES
hiver
on
reprocher au second in=^ 1,54) son odeur pn-
peiil
trante et tenace.
Tous deux sont miscibles aussi bien avec Veau quavec le

baume, sans donner aucune espce de trouble ou de prcipit.
jouissent donc de la prcieuse proprit d'claircir, de dshydrater et de permettre le
direct dans le baume.
Ils
passage
comment on opre
Voici
Tanimal,
frais
o;i
conserv dans
port dans le chloralphnol, soit dans un petit tube,

soit simplement
sur lame, sous lamelle. Laisser agir de six
l'alcool, est
douze heures
renouveler
et
le
liquide au moins une fois, pour
assurer une dshydratation parfaite. goutter Tanimal sur du

buvard. Monter au baume dissous dans le xylol. Si rchantillon
est trs fragile,
ne pas toucher
phnol avec du buvard
et le
la lamelle,
aspirer le chloral-
remplacer peu peu par du baume.
Les avantages de cette mthode sont les suivants

l*" Simplicit et
rapidit, car on emploie un ractif unique, non volatil.
2" Intgrit des chantillons qui subissent le minimum de manipulations, restent mous, non cassants, ne perdent ni poils, ni cailles, ni
organes caractristiques et conservent exactement leur forme, sans con:
traction, ni gonflement.
3 Dissection facile des pices chitineuses (pices buccales) car les animaux deviennent trs mous.
11 ne faut pas laisser les
objets fragiles (larves) pendant trop longtemps
dans ce liquide, sous peine de les voir clater et se dissocier. Pour les
objets trs opafjues, Amann conseille de saturer ces mdiums, avec du
salicylate de sodium (fondre une douce chaleur, p. 724;.
La seule contre-indication a trait aux animaux gorgs de sang, qu'il
faut faire bouillir dans la potasse.
G. Mthode de la potasse caustique.

Ce procd, trs
ancien, est le i)lus connu, mais c'est aussi le plus mauvais, parce
qu'il dtruit non seulement les parties molles, mais quelquefois
aussi des organes essentiels (poils, piquants, cailles). On met
les
animaux dans une solution de potasse ou de soude
ques
10
p. 100.
On peut
oprer
la
causti-
temprature ordinaire
ou 50'' (quelques heures), et

temprature de l'buUilion (quelques minutes). Ce
dernier moyen est dconseiller cause de l'agitation violente
(quelques jours),
enfin
qu'il
l'tuve 37
la
produit;
il
est
prfrable, dans ce cas, d'oprer au bain-
marie pendant dix quinze minutes.

Laver l'eau distille actifie, l'eau
distille
passer l'alcool et monter la trbenthine de Venise.
pure,
puis
ARTHROPODES
577
Si raction de la potasse a l trop prolonge et si la chitine est

dcolore, on peut rendre aux animaux leur aspect primitif en les
colorant par une solution d'acide pyrogallique dans l'alcool ou la
En
glycrine'.
de
cas
surcoloration,
rgresser
faible.
chlorhydrique
D. Rgnration
[)ar
du matriel dessch.
Talcool
Enderlein
conseille le traitement par la potasse faible. Je trouve bien prfrable d'employer le lactophnol chaud ( Ftuve 37), ou
encore de faire bouillir dans le lactophnol 10 p. 100 dans
Peau. Traiter ensuite par
le
chloralphnol ou Talcool.
Insuccs et remdes.
Les deux principaux insuccs, dans le
montage des Arthropodes, sont l'opacit ou la transparence trop grande
qui masque les dtails.
1 Transparence trop grande.
lique ou employer un milieu
Colorer
la
chitine par l'acide pyrogal-
moins rfringent que
le
baume.
Gomme
milieux liquides, on prendra le terpinol ou le lactophnol et, comme

milieu solide, la glycrine glatine. Dans ce dernier cas il faut, au
pralable, imbiber l'objet de glycrine, par concentration dans l'alcool
glycrine
(p. 556).
2" Opacit.
principe, les
Quelquefois due au sang dont l'animal est gorg.
animaux gorgs donnent de mauvaises prparations;
les traiter
par la potasse pour liminer
les laisser
mourir d'inanition.
le
sang ou mieux,
si
il
En
faut
possible,
Le plus souvent,
l'opacit est due la rentre de gaz dans les append'un phnomne particulier aux objets dont la cuticule est difficilement pntrable
lors du passage d'un mdium peu
dense et volatil (tolune) dans un mdium plus dense (baume), le
premier sort plus vite que le second ne peut entrer; il en rsulte
un vide partiel, qui est rempli par de l'air ou des gaz provenant des
liquides employs. Cet accident est gnralement irrparable, mme par
le vide ou l'bullition. 11 ne se produit jamais avec ma mthode au
chloralphnol et il est trs rare avec la trbenthine de Venise.
dices.
Il
s'agit ici
2"
Mthodes
histologiqiies.
A. Fixation.
Employer des liquides trs pntrants, tels que le
Duboscq-Brasil (p. 285), le Carnoy (p. 284) oue Gilson (p. 284). Cameron,
Burgess, Semichon 3, etc., conseillent le mlange suivant, qui ne rend
pas les objets friables
:
Alcool
UO cm''.
70"^
Formol 40
Acide
p. 100
actique cristallisable
Fixer douze heures au moins, puis laver

d.
mikr. Terhnik,
1.
Mayer. Gninchge
2.
Zool. Anzeiger,
3.
Communication verbale.
M. Laxgeron.
XXVII,
3"^
et
conserver dans l'alcool
dition, 1907. p. 427.
p. 479, 1904.
'
^~
70.
METHODES SPCIALES
578
B. Inclusion.
coUodion et la
C'est
ici
le
cas d'employer les mthodes mixtes au
paraffine (p. 318) de Stephens et Ghristophers et de

Metalnikoff ^ inclut la paraffine, puis rabote cette
Field et Martin.
traiter alors par de l'eau de
dernire en face des points chitineux
Javel qui ramollit seulement les points non protgs par la paraffine.
On peut aussi inclure la celloidine (Low).
Looss a montr depuis longG. Ramollissement de la chitine.
temps - que l'eau de Javel (p. 722) ramollit et rend transparente la
chitine des Arthropodes. On peut oprer l'bullition, mais, si on
veut conserver les parties molles, il faut oprer froid avec de l'eau de
Javel tendue de 5 vol. d'eau.
:
LINGUTULIDES
I.
Les larves de Ltnguatides sont quelquefois difficiles monter

en prparations, surtout lorsqu'elles ont t conserves dans le
Tacide lactique est alors le seul milieu qui les claircil
formol
:
sans les contracter. Aprs fixation

faciles
mouler dans
Talcool chaud, elles sont plus
les rsines.
II.
ACARIENS
La meilleure manire de tuer
Acariens, pelils ou grands,
les
lorsqu'il ne s'agit pas de recherches histologiques, est de les

jeter dans l'eau bouillante ou l'alcool 70" bouillant. Les ani-
maux
ment
y meurent en extension parfaite.

l'alcool fi"oid
appendices
et
le
ou
le
formol;
second durcit
Il
faut proscrire
absolu-
premier fait contracter les

objets, au point de rendre
le
les
impossible toute manipulation ultrieure. L'alcool actifi, prconis par Benoit-Bazille % m'a i)aru infrieur l'alcool chaud.
Les
/>eiO(iex" seront
ou mieux
comdons.
l'huile
Il
faut bien savoir
ment porteur de ces

jours
examins en
de paiaffine,
la
traitant ])ar l'ther, le tolune,
substance blanche extraite des
que toute personne
est habituelle-
qu'en insistant on arrive tou les trouver. Ils sigent surtout la base des comdons,
parasites et
1. s. Metalnikoff, Sur v.n procd nouveau pour faire des coupes microscopiques dans les animaux pourvus dun tgument chitineux pais. AjtA. zool.
expr., p. Lxvi-Lxvin, 1904.

2. Zool. Anzeiger, VIII, p. 233, 1885.
3. Bull. Soc. zool., XXXIII, p. 114, 1908. Voici la formule de Benoit-Bazilie
parties gales d'eau et d'alcool 90 phonique 2 p. 100, ajouter 5 p. 100 d'acide
:
actique crist. au volume total.
ARTHROPODES
579
la partie filamenteuse, et non au voisinage de la surface'.

Le meilleur endroit pour les trouver est la commissure de la
narine. Pour les examiner, on diaphragme fortement. On peut
dans
ensuite passer l'alcool et la trbenthine de Venise, soit dans

un petit tube, soit sous la lamelle. Il est plus sinn)le de monter au
lut de Kronig dans l'huile de paraffine, aprs nettoyage parfait des
bords de la prparation.
a remarqu qu'en frottis (et non en coupes) les Demodex
montrent acido-rsistanls et se colorent trs bien par le Ziehl-
Kraus
se
Neelsen
(p. 694).
Les Sarcoptes de l'Homme sont recueillis en ouvrant un sillon

et en recueillant le point blanc qui se trouve au fond, avec une
aiguille ou un cil de Porc. Ce point est une femelle qu'on transporte dans une goutte de lactophnol. Elle adhre d'elle-mme
l'aiguille par ses ventouses.
Le diagnostic des gales animales esi souvent bien plus difficile,

notamment chez le Cheval. Lorsque les crotes sont paisses,
l'examen des parties superficielles ne montre rien;
jusqu'au sang les parties profondes et examiner
raclage dans
le
chlorallaclophnol ou dans
la
(technique des teignes, p. 714).

Les meilleurs milieux de conservation pour
sont le lactophnol et la glycrine glatine
:
il
faut gratter
le
produit de
potasse
les petits
30
p.
100
Acariens
les rsines les
ren-
dent gnralement trop transparents.
IXODIDS^
Ces Acariens de
grande taille sont d'une haute importance

pour le biologiste, parce qu'ils sont suceurs de sang et vecteurs de
maladies Protozoaires. Aussi faut-il, non seulement les connatre
au point de vue systmatique, mais encore savoir les lever pour
avoir
du matriel exprimental.
Rcolte '^
Les Argas ont les murs des Punaises. Ils vivent pendant le jour dans les fentes troites des parois des habitations qu'ils
1. Du Bois, Recherche du Demodex
folliculorum dans la peau saine. Ann. de
dermat., n 4, p. 188-190, 1910.
2. A. Kraus, Ueber farbetechnische Methoden zum Naclnveis des Acarus folliculorum. Arch. fur Dermat. vnd Syph.. LVIII, p. 351, 1901.
3. R. Blanchard, L'Insecte et l'infection. 1*"' fascicule, Paris, 1910.
4. Je suppose connues la distribution
gographique et la biologie de ces
animaux.
METHODES SPECIALES
580
infestent. On peut les trouver, par exemple, dans les poulaillers, en

soulevant des planches, des pltras fendills, etc. Le soir, ils sortent
pour se gorger et on peut alors les capturer sur les animaux, ou placer
des Poules pour les attirer, etc. Il faut bien savoir qu'ils rentrent dans
leurs fentes ds qu'ils sont gorgs.
Les Ornitliodorus ont des murs analogues celles des Argas, avec
cette diffrence qu'ils vivent dans le sable. C'est donc au moment o ils
sortent qu'on pourra les saisir; il ne faut pas oublier qu'ils sont diffi-
cause de leur mimtisme.

Les Ixodins, au contraire, sont des parasites relativement permanents.
La capture directe sur leur hte est longue et difficile, mme avec les
ciles apercevoir
Fig. 192.
Mthode de Brumpt pour
recueillir les Tiques gorges.
Original.
animaux domestiques elle est impossible avec les animaux sauvag-es.

Brumpt a dcouvert un moyen trs ingnieux pour oprer la capture
indirecte. L'animal est plac dans une cage en grillage mtallique
:
au-dessus d'un plateau rempli d'eau. Les Tiques se dtachent

l'eau, o elles peuvent sjourner sans inconvnient
pendant un grand nombre d'heures; on les recueille chaque jour, on
les lave soigneusement, on les sche au buvard et on les installe comme
(flg. 192),
et
il
tombent dans
est dit p. 582.
On
peut oprer aussi avec l'animal mort ou avec sa dpouille. Mais

il faut faire recueillir les
Tiques, dans les peaux, par un animal
sur lequel elles se fixent. Le Hrisson est particulirement commode
pour ce genre d'expriences. Il s'enfonce dans tous les replis de la
dpouille et recueille la majorit des Ixodes, dont il ne peut se dbarrasser cause de ses piquants qui l'empchent de se gratter. A dfaut
de Hrisson, prendre un Gobaj'e ou encore un jeune Chien ou un jeune
Chat, mais le rsultat est beaucoup moins bon. A son tour, le Hrisson
est mis dans une cage, au-dessus de l'eau, et on recueille les Tiques
gorges qui tombent. C'est ainsi que Brumpt a pu se procurer la faune
d'Ixodes des Cerfs de France, au moyen de peaux d'animaux tus la
alors,
chasse.
ARTHROPODES
581
Mthodes d'examen.
On les immobilise entre deux lames,

anneaux de caoutchouc. On peut alors les tudier
commodment au binoculaire.
La plupart de ces animaux, principaConservation sec.
ment les Ixodins ou Tiques, et de prfrence les spcimens non
Animaux
vivants.
serres avec des
peuvent tre piqus en collection comme des Insectes.

on les tue dans une bouteille cyanure (p. 588) et on
pique sur une languette de carton comme les Moustiques
gorgs,
Pour
les
cela
Ce procd est excellent pour l'tude de

(p. 611).
externe K
la
morphologie
peut encore les monter sec entre lame et lamelle,

sont pas trop pais. Pour cela on les comprime
ne
qu'ils
deux lames, les pattes bien tendues, lorsqu'ils sont encore
et on les laisse scher
aprs avoh' t tus par le cyanure,
On
temps dans
cette position.
Il
ne faut luter
sont parfaitement secs, autrement
ils
Conservation en prparations.
trbenthine de Venise.
la
On
la
lors-
entre
mous
long-
lamelle que lorsqu'ils
moisissent.
Le meilleur
tue les
animaux par
mdium
est
l'alcool 70
on les transporte ensuite dans l'alcool 95, puis dans la

Les exemplaires tus au cyanure seront bien tals entre
deux lames et durcis dans cette position, dans l'alcool 90'\ S'ils
sont trop opaques ou gorgs de sang, on peut les traiter par la
chaud
rsine.
ne pas endommager les appenpotasse, mais avec prcaution, pour

U n'y pas avantage aplatir immodrment les animaux,
dices.
car ou perdrait la notion exacte des plans et de la position respective des parties -.
Les prparations la trbenthine prsentent l'avantage d'une

d'une conservation indfinie, mais on apprcie
moins bien certains dtails que sur le matriel dessch et piqu
solidit parfaite et
surtout que sur le matriel fraisa
et
Brumpt a remarqu que, par la dessiccation, les palpes des Ixodins s'cartent
mettent trs bien en vidence les pices buccales.
2. Les prparations commerciales prsentent souvent ce dfaut.
1.
et
Nuttall [Parasitolodij I, p. 162, 1908) traite les Ixodins froid par la potasse
colore au xylol satur d'acide
p. 100, lave l'eau actifie, dshydrate,
il conpicriquc et monte au baume. Pour obtenir un claircissement maximum,
seille l'emploi de l'acide phnique fondu. Je crois que le chloralphnol, simple
donne des rsultats de beaucoup suprieurs ceux de ces deux
ou
3.
10
salicyl,
mthodes.
Galli-Valerio
recommande
(CenfraZ6^.
f.
BakterioL, Orig., L,
p. ^02, 1909),
pour
MTHODES SPCIALES
582
Les
Ai'âsiiis, qui muent beaucoup plus que les Ixoabandonnent une dpouille qui conserve les plus fins
dtails de la morpbologie externe et mme de pices buccales. Il
est avantageux de recueillir ces mues, beaucoup plus faciles
monter que les animaux eux-mmes, qui sont souvent trs pais
Mues.
dins,
et trs
opaques. Les mues sont mouilles d'alcool 95
et
montes
la trbentbine de Venise.
Les gros individus, principalement les Argasins, se

Dissection.
dissquent trs bien dans une petite cuvette prpare comme il a t
dit p. 546. On commence par prendre l'animal entre le pouce et
l'index et, avec de trs fins ciseaux, on dcoupe tout autour un lambeau
dorsal, en ayant bien soin de n'entamer que le tgument. Pour les
Argas, on coupe finement la marge qui spare les deux faces. On flxe
ensuite l'animal avec les pingles fines qui servent piquer les Moustiques. On opre sous l'eau physiologique et avec le binoculaire. On
relve lentement le lambeau dorsal avec une pince, en coupant les
tractus conjonctifs qui le relient au lambeau ventral. 11 faut avoir bien
soin de ne pas lser le tube digestif et, de prfrence, il faut prendre
des animaux non gorgs. On fixe le lambeau dorsal avec des pingles
ou mieux on le coupe au niveau de la tte. On peut alors tudier commodment les organes internes et les fixer sparment pour y faire des
coupes.
Mthodes d'levage
Tout
le
'
.
une propret
parfaite et dans la
hygromtrique appropri. Brumpt a reconnu
a
des exigences particulires ce point de vue;
espce
secret consiste dans
ralisation d'un tat
que chaque
faut donc ttonner pour trouver Toptimum.
il
Comme
il
m'est
impossible d'entrer dans le dtail des cas particuliers, on se guidera sur les indications gnrales qui vont suivre.
Ixodins.
On peut partir d'un point quelconque de l'volu-
tion
uf ou animal
Pratiquer
la
rcolte
ô?'j7e (cette
comme
il
dernire condition est essentielle).

dit p. 580. Supposons que
a t
nous partions de femelles gorges. Chacune
est
mise dans un
petit tube, juste assez gros pour lui livrer passage; au fond on
conserver leur aspect aux gros Argasins, de les imprgner vingt-quatre heures
dans le liquide de Nastioukow (p. 453), puis de les monter dans une cellule
remplie d'huile de paraffine et ferme par une lamelle ronde colle au baume.
1. Tous les
renseignements concernant l'levage des Ixodids sont entirement
dus des communications verbales de mon excellent collgue et ami le
D""
Brumpt. Sa comptence et les succs remarquables obtenus dans ses expriences sont la meilleure garantie de la perfection de ces mthodes, dont les
dtails sont encore indits.
ARTHROPODES
met un
petit chiffon
On
de papier Joseph
et
i83
on bouche au colon ordi-
un cylindre Borrel
193), au fond duquel se trouve de Touate hydrophile recouverte deau, de manire saturer de vapeur d'eau
du
naire.
runit plusieurs de ces tubes dans
(fig.
Tatmosphre
temprature ordinaire ou on met l'luve
La ponte a lieu dans
( 25^ au plus).
les tubes et Vclosion se produit au
tube; on laisse
la
^^
bout de quelques semaines.

Le meilleur moyen pour lever
les
', sans en perdre, consiste les

mettre dans un tube Borrel avec une
larves
Souris ou un Rat nouveau-n. Celui-ci
peut vivre quatre cinq jours Ttuve
37%
ce qui est suffisant
larves se
en deux
gorgent.
temps
pour que
L'opration se
1 on
les
fait
met l'animal
dans un tube essai sur du buvard,

avec les larves sur lesquelles on veu^t
exprimenter.
coton.
2"^
On bouche
Quand les
le
tube au
larves
sont
on transporte Tanimal dans un

tube Borrel garni d'un peu de coton et
de papier Joseph. Le tube est pos dans
fixes,
un
vase
garni
couche d'eau
d'une
et le tout est
recouvert d'une
194)
cloche, de manire assurer l'aration,
sans nuire l'tat hygromtrique. Les
(fig.
F\g. 193.
tale
Ponte
des
exprimen-
Ixodins,
d'aprs
Brumpt.
larves gorges grimpent le long du tube et tombent dans l'eau o

on les recueille. On pourrait aussi mettre les larves sur des
Hrissons ou de jeunes Chiens, mais il y a toujours d'assez fortes

On oprerait
pertes, surtout avec les Chiens qui se grattent.
1 On met d'abord
encore en deux temps
avec les larves dans un sac de toile ferm.
:
sites sont fixs,
l'animal en contact
2
Quand
les para-
on transporte l'animal dans une cage pose sur un
plateau rempli d'eau (fig. 192).

Les larves gorges sont sorties de l'eau, essores au buvard et
mises par lots dans de petits tubes bouchs au coton oi'dinaire,
toujours avec
un peu de papier buvard pour absorber
les excr-
1. Ceci s'applique aux larves ubiquistes. Certaines espces ne peuvent se dvelopper que sur les Vertbrs sang froid.
MKTHODES SPCIALES
584
men'is
^ Les
liil)es
comme
sont placs dans des cylindres Borrel
plus haut
Aprs
nymphes
(fig.
la
195).
mue,
les
sont mises
gorger sur le Hrisson. Le Chien et
Chat sont beau-
le
coup moins
l'avora-
bles et on a toujours
avec eux de fortes
Aprs gorge-
pertes.
ment,
elles sont re-
cueillies
dans Peau,
schesau buvard
et
comme
prcdemment. On
fait de mme
pour
rinstalles
les arfM//P5,
toujours
en employant de prfrence le Hrisson.

Fig.
194
levage des larves d'Ixodins par

procd de Brumpt. D'aprs Brumpt.
le
Argasins.
principes
Les
sont
les
atmosphre moins
mmes, mais ces animaux ont besoin d'une
sature
et
d'humidit
supportent
trs
bienTtuve 37".
OrnithodoLes
riis
peuvent
tre
conservs trs longtemps dans le sal)le,
levage
Fig. 195.
des larves de Bhipar le
procd de Brumpt.
picephalus
Orif/inal.
Fig. 196.
Tube Borrel avec
papier pliss, pour l'levage

et la conservation des rcjas.
Original.
soit l'Ar1. Quel que

thropode qu'on lve, il
faut toujours mettre uu
peu de papier buvard
chilonn ou pliss. Cette
prcaution est absolument
1
pour
vidispensable
permettre aux animaux
de se maintenir sans fatigue 2" pour absorber
:
on ne met pas de buvard, les animaux se fatiguent, tombent

au fond du tube et meurent ou bien ils sont mouills par leurs excrments, se
collent au verre et meurent.
les excrments. Si
ARTHROPODES
58:
de prfrence du sable de leur pays dôrigine. On met ce sable

dans un grand cristallisoir (fig. 197) couvert par une lame de
verre; ne pas oublier un
petit
cristallisoir
plein
d'eau. Les femelles
gordans
ges peuvent pondre
Pour
le sable.
les
recueillir
on
jeunes nymphes^
tale le sable, par petites
une grande
portions, sur
feuille
on
de papier
rouler
fait
filtrer;
sable en
le
bords de
la
relevant
les
feuille et
on aperoit alors
facilement
les
tubes qu'on met dans

cylindre Borrel, avec
nymphes
comme
Les
servs
Borrel
coton
celle des
dans
(fig.
peut aussi
faire
pondre
les
un
un
Les
traites
sont
Argas
On
cVeau et
plein
au
bouch
nymphes
au papier.
qui restent accroches
femelles dans des petits
petit tube
Conservation des Or)nlhodorus

dans le sable.
Original.
Fig. 197.
Argas.
sont
contubes
des
196), sur du
en
pli
papier buvard
accordon. Un petit tube,
rempli
d'eau
et
bouch
au coton, suffit assurer

rhumidit ncessaire. On
met un capuchon de papier filtrer sous le bouchon du cylindre,
pour
empcher les vasions

Pour la ponte, on peut
.
Fig.
198.
Appareil pour faire
larves
'.-i?'âs.
gorger
les
Orifjinal.
femelle
mettre
chaque
dans un petit tube, mais ce n'est pas ncessaire.
Les larves des Argas doivent tre gorges sur des Oiseaux. On
bac de
prend, par exemple, un jeune Poulet qu'on met dans un
METHODES SPECIALES
586
sur lequel on porle les larves. Au fond du bac,

((ig. 198) el
on met un appareil semblable celui (jui sert lever les Punaises
el form de deux plancbeltes en bois. 11 faut
(fig. 208)
que la
munie
infrieure
soit
de
quatre petits pieds, pour l'loiplanchette
verre
guer du fond du bac et des excrments qui
Fig. 199.
s'y
accumulent. Aprs
-Manire d'attacher les Oiseaux pour les faire piquer exprimentale-
ment.
Orif/inal.
s'tre gorges, les larves se rfugient entre les deux planchettes

o on les recueille K Si elles sont sales, on les lave Teau tide,
on
les
essore au buvard et on les
met en
petits tubes
ou en
du papier pliss.
cylindre Borrel, sur
Les nymphes d'Argas devront tre gorges sur un Oiseau
immobilis comme le montre la figure 199. On plume un des
lianes,
on y appllcjne un cylindre Borrel dont on a enlev
Fig. 200.
Manire d'attacher un
Singe pour
le faire
le
fond
piquer exprimentalement.
Ori//inal.
dans lequel on verse les animaux gorger. On les retire ensuite

dlicatement avec une pince, au fur et mesure qu'ils se dtachent^.
Quand tout le lot est gorg, on lave l'eau tide, on essore sur
et
du buvard
et
on rinstalle en tubes.
Les nymphes (Ormthodorus sont gorges de la mme faon,

soit sur un Oiseau, soit sur un Mammifre, par exemple un Singe.
1. Ces larves
gorges ne peuvent grimper contre les parois du l)ac, comme le
feraient des larves d'ixodins.
2. Le repas doit tre surveill continuellement
par l'oprateur, car les animaux
se dtachent au bout de quelques minutes, ds qu'ils sont gorgs.
ARTHROPODES
587
La figure 200 montre comment on peut immobiliser trs simplement un Singe, sur une planche perce de trous. Pour ne pas
blesser Tanimal,
nud
dont
l'animal
la
tire, le
les
liens seront
attachs aux
figure 201 dmontre
nud
se serre
il
membres par le
temps. Quand
les diffrents
se relche
quand Tanimal ne
2
Fig.
lire plus.
la figure.
Fi^. 902.
-201.
Manire de
faire le
nud
physiologique.
Original.
Les membres doivent tre bien tendus, comme

Pour de petits Mammifres (Rats, Souris) il
Manire
le
montre
est prf-
d'attarlier les petits Rongeurs, sur un grillage mtallique,

pour les faire piquer exprimentalement.
Original.
rable de se servir d'un

grillage mtallique auquel on les attache
comme
le montre la
figure 202.
Les repas des adultes, se font de la mme faon.
Pour un court voyage
Expdition des Ixodids vivants.
de quelques jours, les Lxodes et Argas voyagent trs bien, emballs
dans du papier Joseph, dans des tubes de verre bien bouchs. Pour
un plus long transport, mettre lxodes et Argas dans des tubes de
MTHODES SPCIALES
588
verre bien bouchs au coton el garnis de papier jose})h pliss.

Les Ixodes doivent tre en outre dans une atmosphre humide,
entretenue par un fragment d'pong mouille ou un peu de coton

hydrophile humide. Les Ornithodorus doivent tre expdis dans
leur sable d'origine, dans des botes de bois ou de fer-blanc.
III.
Pour tudier
INSECTES
les Insectes,
il
faut d'abord savoir les rcolter; la
plupart des indications seront donnes au fur et mesure, propos

de chaque groupe, mais il y a quelques points communs qui vont
tre exposs de suite
pour viter des redites.
Bouteille cyanure, chloroforme, petits

Instruments ncessaires.
tubes bouchs, pingles n''* 3, 4 et micro, pince piquer, plaque de
tourbe ou d'agave, botes Insectes fond lig, disques ou rectangles
de carton blanc.
Bouteille cyanure.
Sert tuer la plupart des Arthropodes non
microscopiques, par les vapeurs qu'met le cyanure de potassium au
contact de l'eau i. Ces bouteilles se trouvent dans le commerce mais il
avantageux de les prparer soi-mme.

Prendre un flacon large ouverture, bien bouch au lige, et pouvant tenir dans la poche. Couler au fond du pltre gch avec une
solution sature de cyanure de potassium
ce pltre doit avoir la consistance d'une crme paisse. Laisser scher. On peut aussi mettre au
fond du flacon un lit de cyanure concass et recouvrir d'une couche de
pltre gch. Laisser scher. Ce mlange peut rester actif pendant plusieurs mois. 11 faut garnir en outre le flacon de copeaux de papier Joseph
et veiller ce qu'il soit toujours parfaitement sec. Ds que les Insectes
sont morts, on les met provisoirement dans des tubes bien secs, garnis
est plus
d'un peu de papier Joseph chiffonn.

Plus simplement, envelopper un
morceau de cyanure dans du

papier Joseph humide, le placer au fond d'un flacon large goulot ou
d'un gros tube et recouvrir de papier Joseph chiffonn et sec. Changer
ce dernier papier s'il devient mouill. 11 est prfrable de mettre le cyanure dans un petit tube troit, l'intrieur duquel on le maintient par
un petit tampon de papier Joseph humide. Fixer ce tube dans le bouchon, l'ouverture en bas, de manire ce que les vapeurs se dgagent
dans la bouteille.
Les Insectes doivent sjourner dans ces appareils jusqu' mort vritable, c'est--dire environ une demi-heure, mais pas plus, car le cyanure altre certaines couleurs.
Chloroforme et benzine.
Ces deux moyens ne doivent pas tre
rejets, car ils tuent rapidement les Insectes et rendent de grands services dans les pays trs humides, lorsque le cyanure devient
par trop
dliquescent. Leurs seuls inconvnients sont leur grande volatilit et
1. Au contact de l'air, la solution

aqueuse de cyanure de potassium se dcompose spontanment en carbonate de potassium et acide cyanhydrique.
ARTHROPODES
b89
lger durcissement qu'ils produisent (surtout le chloroforme; 11 ne

faut pas qu'ils entrent en contact avec les Insectes; ils ne doivent agir
le
que par leurs vapeurs. On en imbibe un petit tampon, qu'on spare des
Insectes par une rondelle perfore de lige ou de carton, llowlett
a
^
construit
un appareil
ingnieux qui peut servir la fois pour le

cyanure ou le chlorororme (fig. 203). C'est un tube ouvert aux deux extrla substance toxique est spare des Insectes
mits
par un bouchon perfor au centre et recouvert de
gaze sur ses deux faces
grce au bouchon infrieur on peut changer le poison sans que les Insectes
trs
s'chappent. Le pltre cyanure peut y tre introduit

sous forme de pastilles.
Feuilles de Laurier-cerise.
Notons enfin que
des feuilles de Laurier-cerise coupes en morceaux
dans un flacon ou dans un tube, suffisent

pour asphyxier les Insectes et les maintiennent
en tat de parfaite fracheur pendant quelques
et places
jours.
Pour les
Modes de conservation des Insectes.
travaux de systmatique, il est indispensable d'avoir
des Insectes prpars sec -. C'est le seul moyen de
conserver convenablement les couleurs, poils, cailles,
etc., qui servent de base aux descriptions.
Les chantillons conservs dans l'alcool ne sont
bons que pour les tudes anatomiques. On a bien la
ressource de les sortir de l'alcool et de les scher,
mais les couleurs sont toujours altres et les
cailles dtaches; on dit que les chantillons sont
lavs.
Manire de piquer
les
Insectes.
Pour con-
faut les piquer avec des

pingles entomologiques. Les meilleures sont les
pingles noires dites autrichiennes, dont on choisit
server les Insectes sec,
il
Fig.
-203.
Tube
de Howlett poiinterchanson
geable pour tuer
numro, suivant la taille de l'Insecte. Pour les

travaux parasitologiques, j'estime que deux sortes
les Insectes.
d'pingles suffisent; les unes trs petites, deux
pointes, dites pingles micro (c'est--dire pour Microlpidoptres); les autres suffisamment rsistantes pour pouvoir tre
piques dans le lige ou l'agave sans le secours d'une pince (n" 3 ou 4).
viter avec soin les longues pingles fines qui sont difficiles piquer
le
et trop lastiques.
Les gros Insectes sont piqus directement avec les fortes pingles
piqus sur un disque ou un rectangle
de carton (ou un cube de moelle de sureau) avec une pingle trs fine
et le carton est support son tour par une pingle forte (fig. 234). Cette
:
les petits individus sont d'abord
mthode
petit
est
carton,
p. 611. A chaque pingle doit tre annex un

portant une indication d'origine ou un numro d'ordre.
dcrite
L Howlett, On
the collection and prservation of Insects. Parasitology,
III,
p. 485-489. 1911.
2.
Bouvier, Rcolte et conservation des Diptres. Annales Inst.
p. 547-563, 1906.
Pcisleur,
XX,
MTHODES SPCIALES
590
ne (aut jamais coller les Insectes, si petits qu'il soient

Voici les rgles pour piquer les divers groupes d'Insectes
Coloptres
prs de la base de l'lytre droite et bien au milieu de
cette lytre, de sorte que l'pingle ressorte derrire la deuxime paire
de pattes.
au milieu du corps, entre les bases des ailes, lorsque
Orthoptres
celles-ci sont tendues; au sommet de l'aile droite, lorsque les ailes sont
fermes.
comme les Coloptres ou au milieu du scutellum.
Hmiptres
Homoptres les grosses espces au milieu du msothorax, les autres
'
Il
comme
les
Hmiptres.
au milieu du thorax.
Hymnoptres, Diptres, Nvroptres, Lpidoptres
Pour manipuler les Insectes piqus et pour
Pince piquer.
enfoncer convenablement les pingles dans les botes lig:es, il faut se
servir d'une pince piquer, dont les extrmits sont recourbes et
arrondies (flg-. 204), Il est
^^^
i
1T^^lli]]]II]I][ll]]ll]SM^!^!^^
commode
Pince piquer
partiment pour celte pince

et des cases pour les divers
'
Fig. 201.
d'avoir une bote

a pingles, avec un com-
les Insectes.
numros
d'pingles.
Les collections d'Insectes piqus doivent tre

Botes Insectes.
conserves dans des botes fond lig. Les cartons dits double gorge
ne donnent pas une scurit absolue, car les petits Coloptres destructeurs pondent dans le velours qui garnit les gorges. Les cartons
fermeture ordinaire suffisent parfaitement, lorsqu'ils sont bien construits.
Les botes vitres sont commodes pour la dmonstration. Le meilleur
prservatif est la crosote de Htre, avec laquelle on badigeonne tous
les ans l'intrieur du couvercle ou les cts de la bote -.
Pour les pays chauds, Maxwell-Lefroy ^ recommande les botes en
bois de teck, peintes en blanc l'intrieur. Le lige est peint aussi en
blanc
au-dessus
et
au-dessous on coule une certaine paisseur du
paraffine 60-, 80; naphtaline, 20. Ce lige paraffin est bien suprieur au lige couvert de papier.
Il faut y apporter tous ses soins, car un
tiquetage des Insectes.
chantillon d'histoire naturelle non tiquet est sans valeur. L'tiquette
la localit, la date, le nom du coldoit tre fixe l'pingle et porter
mlange suivant
vivant, etc.). Lorsque de nombreux chantillons d'une mme espce ont t rcolts en mme temps,
on peut les runir avec une tiquette collective ou en indiquant seulement pour chacun d'eux un numro d'ordre.
Les Insectes piqus voyagent
Transport des Insectes desschs.
lecteur, la station (sur
un animal mort,
1.
Deegener
{Zool. Anzeiger,
XL,
p.
-29,
1912)
met
les chenilles (chloroformes)
dans de l'eau froide qu'il fait bouillir 30 60 secondes pour les tuer. Les chenilles
ne doivent pas tre jeun, pour viter les contractions. Laisser refroidir, puis
passer dans les alcools 40, 60, 90, 100, puis dans un mlange parties gales
d'alcool et de xylol et enfin dans le xylol. Scher l'tuve sur du buvard, puis
piquer avec une pingle et mettre en collection. Ce procd s'applique toutes
les larves et
pupes d'Insectes.
2. C'est ainsi que sont disposes les collections du Musum d'histoire naturelle
de Paris. Je dois ces renseignements l'obligeance de M. R. du Buisson.
3. Parasitolofiy lY, p. 174, 1911. A'oir aussi Howlett, Ibidem, III, p. 485, 1911.
,
ARTHROPODES
on veut
591
transporter sous cette forme, il faut

emballer la boite qui les contient dans une caisse garnie de colon ou
de fibre de bois. Bien enfoncer les pingles, car un seul Insecte dtach
peut produire un dsastre irrparable. On peut encore mettre chaque
Insecte dans un large tube de verre (fig. 2-35).
Les voyageurs, explorateurs, missionnaires feront mieux d'emballer
les Insectes par lits, entre des feuilles d'ouate
tailles la dimension
de la bote d'emballage et pralablement comprimes. Les Insectes y
sont rangs avec soin, de manire ne pas se toucher; on les dessche
difficilement;
si
les
parfaitement dans un courant d'air chaud (au-dessus d'une lampe) et on

peut fermer hermtiquement les boites; aprs dessiccation parfaite, on
peut trs bien employer des botes mtalliques.
Avoir soin que les botes soient bien remplies
d'ouate, pour viter le tassement et le ballottement.
Le procd des boites d'allumettes remplies de
coton et disposes comme l'indiquent les figures 232
et 233, est excellent surtout pour les petits Insectes.
Ce procd a t employ par Brumpt pendant sa

traverse de l'Afrique; de mon ct, j'ai reu de
nombreux envois provenant d'Afrique occidentale,
prpars suivant cette mthode et parfaitement
conservs.
Insectes dans ralcool.

Cette mthode ne
convient que pour les petits Insectes. Il faut de
l'alcool fort, du coton card et des tubes de verre
10 cm.), troits (14 18 mm.) et bouchs
A dfaut de tubes spciaux, on peut prendre des tubes essai, dans lesquels on place les
Insectes par groupes spars par des tampons de
coton.
longs
au
(8
lige.
Enfoncer un tampon de colon bien serr jusqu'audessous du niveau du liquide (fig. 20.^), de manire
immobiliser les Insectes et empcher l'introduction de bulles d'air. Cette dernire condition
est essentielle car l'agitation du liquide avec de
Fig.
-205.
Manire
de conserver les petits Insectes dans

a. niveau
l'alcool.
du liquide; b, tampon de coton bien

serr, au-dessous
duquel il ne doit pas
y avoir de bulles
d'air. D'aprs Langeron, in Archives
de parasitoloyie.
infailliblement les appendices. On peut
mettre plusieurs Insectes dans un mme tube.
Ne pas oublier de placer, Vintrieur du tube, une ti([uelte crite au
crayon ou l'encre de Chine et portant un numro d'ordre ou l'indication du lieu et de la date de la capture.
Ramollissement des Insectes desschs.
En principe, il est prfrable de piquer les Insectes aussitt aprs leur mort, mais souvent
cela n'est pas possible en voyage. 11 faut donc ramollir les Insectes
l'air brise
desschs, pour les piquer sans les briser. Un des raniollissoirs les plus
un cristallisoir ou un bol
pratiques est celui de Villeneuve ^ (fig. 206)
est moiti rempli de sable fin mouill, on recouvre le sable avec
quelques paisseurs de papier filtrer, sur lequel on dpose les Insectes
:
1. Certains
entomologistes proscrivent absolument l'emploi du coton. Avec un
peu de soin, on arrive en dbarrasser les pattes des Insectes sans les briser.
C'est, malgr cet inconvnient, le procd de transport le plus pratique.
2.
Feuille des Jeunes naturalistes (L),
XXXV,
p. 45, 1?05.
METHODES SPECIALES
592
ramollir. Recouvrir avec un entonnoir, dont l'orifice suprieur reste

ouvert, de manire viter un excs
d'humidit. Surveiller attentivement les
Insectes, pour qu'ils ne s'imbibent pas
d'eau et ne moisissent pas
ils doivent
:
dans une atmosphre humide, mais

non en contact avec l'eau. Une nuit suffit
tre
gnralement.
Appareil de Sergent (fig. 207).
Indispensable pour l'tude des Insectes
piqus, sous le microscope ou le binoculaire. Se fixe la platine avec la vis de
pression
et
dans toutes
crainte
de
permet d'orienter l'animal

sans
les positions possibles,

le
dtriorer.
On enfonce
le bouchon de lige
l'pingle qui
supporte l'chantillon tudier.
dans
HM IPTRES
RamoUissoir de
Fig. 5206.
Villeneuve.
Original.
Les Poux, surtout ceux qui sont
parasites de l'Homme, sont assez difficiles conserver parce qu'ik sont trs voraces, et meurent trs
on ne
vite, si
les
gorge
pas au moins toutes les

vingt-quatre heures.
Warburton êt Fantham ^ sont arrivs

obtenir en captivit le
cycle complet du Pe-
diculus
vestimenti
Fantham
garde
les
adultes fixs des frag-
ments de
dans
flanelle
des tubes placs dans

ses
vtements
nourrit
il
les
sur lui deux
par jour. La ponte

rlevage
o des larves
fois
.
c.
et
ruSSisSCUt
bien.
Reports local Governt. Board Publ. Healtli and med. malters, London,
Sries, n
2.
Appareil de Sergent
pour l'tude des Insectes.
Fig.
1.
^^
-207.
'2,
1909.
Proc. Roy. Soc. London, B,
LXXXIV,
p. 506, 1912.
New
ARTHROPODES
593
D'aprs Ch. NicoUe, Tlat hvgromlrique a une grande importance, ainsi que la lempralure qui ne doit pas dpasser 25.
Ces animaux sont faciles tuer par le jene, le cyanure ou
Talcool chand. Ils se montent sans difficult dans la trbenthine
de Venise. Leur dissection se fait comme celle des Moustiques.

Les Pin?fase5 sont des animaux nocturnes c'est donc la nuit qu'il
:
faut les capturer dans les endroits o elles pullulent. Le jour, on

en soulevant les parties craquepeut les rcolter comme les Argas,
ou fendilles des
les
parois des habitations.

E. Brumpt les lve
le
par
sui-
procd
Dans un grand
bac en verre, on insvant.
talle
des Souris blan-
ches avec du
Au
Appareil de Brumpt pour

des Punaises; /, coupe transversale.
grain.
Fig. 208.
fond du bac, on
l'levage
Original.
j)lace l'appareil reprsent par la figure 208.
Il est form de deux

planchettes de bois,
cartes de quelques millimtres par de petits tasseaux et maintenues serres par un crou oreilles. Ces planchettes sont indis-
pensables pour servir d'abri aux Punaises. Il suffit de placer dans

bac des couples de Punaises adultes pour avoir, au bout de
le
quelques mois, un abondant levage. Pour retirer des Punaises,

suffit de desserrer l'crou et d'carter les planches.
il
Pour conserver
il
les
Punaises en exprience ou pour les expdier,
faut toujours se servir de tubes garnis de papier Joseph chilonn.

On monte les Punaises la trbenthine de Venise. Le rsultat
avec des animaux jeun tus dans l'alcool 70^ chaud.

peut aussi piquer des chantillons secs. Leur dissection se
comme celle des Moustiques (p. 607). On peut aussi, pour les
est parfait
On
fait
gros chantillons, dcouper le bord de l'animal
et
relever
un lam-
beau dorsal, comme pour les Argas (p. 582).

Les liduvides ont pris une grande importance en parasitologie,
depuis qu'on connat le mode de transmission du Trypanosoma
Cruzi
495). Les
Conorhinus megisius
et infcstans peuvent
en
France,
pourvu qu'ils
expdis d'Amrique
soient emballs dans des rcipients ars (botes en bois ou en fer-
trs
(p.
bien
tre
blanc) et bien garnis de papier pliss, de manire ce que les

animaux puissent s'accrocher avec leurs gi'iffes. Les adulles
M. Langerox.
38
METHODES SPECIALES
594
prissenl gnralement, en route, mais les larves et les nymphes

survivent trs bien et les ufs arrivent en excellent tat. Brumpt
animaux Ttuve 25 avec les mmes prcautions que

Argas. Les ufs sont mis clans de petits tubes, avec un
"
lve ces
les
ces tubes sont groups dans des

fragment de papier filtrer
cylindres Borrel garnis d'un petit tube d'eau (p. 585). Les larves
on les conserve
se gorgent trs bien sur un animal quelconque
:
chacune dans un tube bouch au coton ordinaire, en atmosphre

lgrement humide, avec les mmes prcautions que plus haut. Il
est difficile de faire piquer les adultes. Brumpt russit en renversant un grand bocal d'levage sur Tanimal en exprience il obtient
;
mme
des pontes.
DIPTRES
Pupipares.
Il
faut
une certaine habitude pour
pelage des Mammifres.

ment entre les doigts.
la
Ils
saisir ces
animaux dans
le
sont trs agiles et s'chappent facile-
Les formes non ailes peuvent tre piques sec ou montes

trbenthine de Venise. Les formes ailes seront piques en
collection.
La dissection des pices buccales exige un ramollisse-
ment pralable dans la potasse ou dans le chloralphnol.

Les Mlophages peuvent tre levs facilement en captivit, en
prenant les mmes prcautions que pour les Argas (p. 585).
Puces.
La
les
rcolte des Puces se
fait
avoir vivantes ou mortes.
diffremment, suivant qu'on veut
Pour avoir
les
faut immobiliser l'animal, et soulever le poil
Puces vivantes,
il
mthodiquement
et
avec prcaution. Les Puces abondent surtout dans les endroits o
animaux ne peuvent se gratter. Pour les capturer, on peut les

prendre avec un petit tube dans lequel on les fait sauter ^ avec
un pinceau mouill, ou avec une pince autour des mors de laquelle
on a enroul un peu de coton (Tiraboschi-). On les dpose au fur
les
1. Certaines espces qui ne sautent pas {Ctenopsyla musculi, Ceratophyllus fasciatus et divers Ceratopsylla) sont plus faciles capturer que les espces sauteuses.
2. Tiraboschi, Les Rats, les Souris et leurs parasites cutans. Ai^cli. de paras!-
tologie, VIIT, p. 238, 1904^
ARTHROPODES
et
595
mesure dans des tubes bien secs (tubes
essai
ou mieux
tubes bouchs au lige, dans lesquels elles vivent trs bien

les are tous les jours).
petits
si
on
Les Puces mortes sont beaucoup plus faciles rcolter. Il suffit

d'exposer les animaux, pendant quelques instants, aux vapeurs de
chloroforme. Les Puces meurent bien avant leur hte et mme,
du chloroforme
si l'action
n'a pas t trop prolonge, elles sont
seulement tourdies.
Montage des prparations.
Beaucoup de mthodes ont
jteu sont satisfaisantes. La condition essentielle,

belles
de
avoir
prparations, est de monter des Puces
pour
jeun. Celles qui sont captures vivantes
t proposes,
mais
gorges, seront
jusqu' ce qu'elles
et
les
digrer;
donc
conserves
aient
achev
Puces gorges
et
de
mortes
devront tre traites par la potasse, ce

qui est toujours un pis aller ^.
La trbenthine de Venise, qui, ma
connaissance, n'est signale par aucun
auteur, est un excellent moyen de
monter
par
les
Puces, pralablement traites

90" -. On peut aussi
l'alcool
employer
baume
chloralphnol et monter au
le
le
chloralphnol ramollit assez
pour permettre la dissection

des pices buccales sous le binoculaire.
les Insectes
Opration
Elevage des Puces.
trs facile russir. Brumpt met les
adultes
sur
des
Souris
en
bocaux
Fig.'209.
On
tamise les grains qui

(fig. 209).
sont au fond du bocal pour recueillir
les larves
qu'on lve ensuite part, en
levage des Puces
une
Brumpt.
sur
Souris.
les nourrissant
D'aprs
avec du sang
dessch. Les cocons sont dposs contre les parois ou sur des corps
trangers. J'ai souvent employ un autre procd. J'isole dans un
tube bouch au lige une ou plusieurs femelles pleines (reconnaissabls leur

1.
abdomen
Non seulement on
gonfl et blanchtre]
elles
ne tardent pas
risque de dtacher des poils caractristiques, mais les
animaux sont trop ramollis et s'aplatissent sous le poids de la lamelle au point

de donner une ide trs fausse de leur morphologie.
C'est un excellent milieu, mais
2. Tiraboschi conseille l'huile de cdre.
d'emploi peu commode, car il oblige luter les prparations.
MTHODES SPCIALES
59G
pondre chacune environ 10 12 ufs. On peut alors Uier ces

femelles. On ajoute dans le tube quelques dbris de son et un peu
de sang sch pour nourrir les larves. Le dveloppement se iioiii-on peut prlever larves et nymphes (en cocons)
les lue dans Talcool 70*^ chaud et on monte
suil trs bien et
On
au stade dsir.
la trbenthine de Venise.
en procdant
soit
comme
On
comme pour
Dissection des Puces ^

nu,
peut trs bien oprer Til

les
Moustiques
(p.
607),
soit,
conseille Nijller (voir p. 491, note 2), en sparant le

thorax de Tabdomen et en extrayant les viscres par la partie
le
suprieure de ce dernier. Avoir soin de sectionner le rectum en

avant de Tanus; pour cela couper le G*" et le 10^ segments, juste
en avant de la plaque sensorielle.
On peut faire piquer les Puces en les

maintenant simplement dans un petit tube, isolment ou par
Exprimentation.
groupes. On peut employer aussi Fingnieux appareil propos par

^
Noller
prendre du fil d'argent de 0,15 0,2 mm. de diamtre,
un
fragment de 10 cm., le plier en deux sur une aiguille
couper
:
et le tordre
fait
pntrer
de manire avoir une petite anse, dans laquelle on

la Puce. L'anse doit la serrer entre la 2'^ et la 3^
paire
de pattes. Deux bouts hbres de 1 cm. permettent de plier ra})paen forme de chevalet, maintenant Tanimal en position de
reil
piquer.
On
le garder des semaines ainsi attach. Ce

procd
qu'aux individus volumineux.
peut
n'est ap})licable
Brachycres.
La capture des Brachycres se fait soit avec
de mousseline, soit avec des tubes de chasse.
Avec le filet, on peut
Capture au filet.
au vol ou
(fig.
deux
les capturer lorsqu'ils sont poss.
210) doit tre en

fois
le filet
saisir les animaux

La poche de ce filet
souple (tulle de moustiquaire) et

diamtre du cercle mtallique. Elle
toffe trs
plus longue que
le
doit aussi tre plus allonge d'un ct et l'angle

long doit tre arrondi (lig. 210). Le tulle sera
ruban de
du
filet
toile,
de tulle ou
du cot
le
cousu un
plus
fort
formant coulisse autour de l'anneau. Le manche
sera plus
ou moins long
le
modle que
j'ai
fait
construire
1. Noller, Dmonstration einer neuen Arbeitsmethode zum Studium der Krankheitsiibertragung durch Flhe. Centralhl. f. Bakt., Beferate, Beilage 2, LIV,
Archtv f. Protistenkunde, XXV, p. 386, 1912.
p. 251, 191-2.
ARTHROPODES
597
qui est reprsent figure 210 tient facilement en poclie. Le

diamtre du cercle est de
et
14
15 cm.
'
;
ja longueur
^^^^^^^^^^,,,,^^
du manche est de 15 cm.

Ds que Tlnsecte a pntr dans
le
filet,
il
cercle par un
poche
mouvement du poignet, de faon enfermer
ranimai. On le pousse ensuite peu peu vers
faut replier
sur
la
le
qui doit tre arrondie, de faon

tube
un
dans
le
faire
le cerner et
pntrer
ordinaire ou * cyanure, sans le saisir avec
les doigts. La couleur du filet n'est pas indiffla pointe,
le
rente;
tricles),
blanc effraie certains insectes (OEs-
d'autres (Tabanides) ont
une prdi-
La meilleure
on
couleur sera donc le vert ou le noir
obtiendra ces couleurs par teinture du tulle
avec une teinture commerciale.
Quelquefois un
Capture au tube.
lection
pour
les
toffes
noires.
trouve
large tube de verre, au fond duquel se
j^jcr.
oio
main
en
Filet
tullo
de
moustiquaire pour la
capture des Insectes.
colon lgrement imbib de

de grands .services. L'Insecte
rend
chloroforme,
est immdiatement tourdi et on le fait ])asser
Orii/inal.
un tampon de
dans
l'alcool
ou dans
la bouteille
tr::^
cyanure.
Ce procd est commode pour prendre les

animaux poss ou en train de piquer. Avec
un peu d'habitude on peut mme se servir
d'un petit tube bouch ordinaire, de 20 mm.
de diamtre, sans chloroforme
on l'applique
sur rinsecte, celui-ci s'envole vers
on
bouche prestement.
On
peut
le
fond
et
conserver
pendant toute la dure

211) et ne les tuer qu'au
ainsi les Insectes vivants
de
la
chasse
(fig.
retour, soit dans la bouteille cyanure, soit

en introduisant dans le tube une languette de
buvard imbibe de chloroforme.

Pour capturer un Insecte avec le tube, sur
'IV' V
une vitre, il tant, aprs avoir coiile t animal,
-,-,..
1.
Il
est prfrable de lui donner une forme ovale, par

fil de
fer galvanis do 2 mm. do diamtre.
On prend du
211.
Capture
conservation des
f*
Insectes vivants.
Fig.
Original.
exemple
sur 10 cm.
MTHODES SPCIALES
598
un morceau de carton entre la vitre et l'orifice du tul)e.

Autrement Tlnsecte, vo3ânt la lumire, ne s'envolera jamais vers
le fond du tube.
Il faut connatre les lieux o on trouvera les divers groupes de
les Asilides se posent au soleil sur le sol et sur les
Diptres
Tabanides frquentent les lisires des bois et se
les
arbres,
sur les vlements noirs, les Muscides affectionvolontiers
posent
nent les murs ensoleills, les tas d'ordures ou de fumier, les
iiitrodairc
Stomoxes pullulent dans les tables et les habitations, etc.

Pour l'tude systmatique, les Brachycres
Conservation.
doivent tre piqus, soit directement au moyen d'une forte pingle,

soit, s'ils sont de petite taille ( partir de la Mouche domestique),
par le procd des deux pingles (p. 614). Les matriaux jiour
dissections et manipulations seront conservs
les
dans
l'alcool.
Pour examiner au microscope ou au binoculaire de trs petites

formes, Delcourt conseille de les aspirer dans un tube trangl
o elles se coincent. C'est une simplification de la mthode du
^
rotateur capillaire.
pour prparer l'appareil mle des Glosmtliode est applicable tous les Insectes, car la systmatique a de plus en plus tendance utiliser la structure microscopique
des organes gnitaux du mle.
1. Couper l'abdomen de l'Insecte dessch et le mettre dans un tube
essai, avec de la potasse 10 p. 100. Bouillir 15 minutes au bain-marie.
2. Laver l'eau cinq minutes. Appuyer sur l'abdomen avec" un pinceau
de martre n 1, en le roulant vers rhypopygium, de manire distendre ce dernier. Chasser compltement tout le contenu de l'abdomen.
3. Passer par les alcools, l'essence de girolle et monter au baume
de profil pour le groupe de la Glossina fiisca; en position dorso-ventrale,
Mthode de Newstead
sines.
Celte
pour les groupes palpalis et morsitans. L'aplatissement

de l'abdomen doit tre pratiqu en consquence, ds le traitement au
pinceau, car il est difficile d'y revenir ensuite. Veiller ce que l'appareil gnital soit toujours bien tal.
Je crois qu'on peut modifier avantageusement cette
Remarques.
mthode suivant les principes noncs, p. 573. L'bullition est ncessaire pour le matriel dessch; pour le matriel frais, on la remplace
par un sjour dans le chloralphnol. Le terpinol donnera de meilleurs
rsultats que l'essence de girofie et, surtout, il sera plus simple de
monter la trbenthine de Venise au sortir de l'alcool 95.
le ventre en haut,
levage.
captivit
il
Certains Diptres pondent assez facilement en

d'isoler les femelles gravides dans un tube
sulTil
C. R. Soc. de biologie,
2.
Newstead,
p. 13, 1911.
LXX,
p. 97-98, 191
revision of the Tsetse-Flies. Bull,
of entomol. research,
II,
ARTHROPODES
(fig.
599
211). Les jeunes larves ne lardent pas clorc el on leur

les espces carnassires sont
donne une nourriture approprie
nourries avec de la viande, celles qui vivent dans le fumier seront

leves dans du son humide. Ce trocd, que je crois avoir t le
premier indiquer ^ permet d'lever trs facilement les Slomoxijs,

Musca^ etc. On dispose le son mouill ou la viande dans un petit
lube
212) ou dans un grand bocal, suivant

au besoin Ttuve 25.
(tig.
larves.
le
nombre de
On met
Ds que
la pupalion est produite, il est bon

de transporter les pupes dans un lube bien
Les rcipients d'levage et d'closion

doivent tre ferms avec une forte toile,
sec.
solidement ficele, car les larves ont une

grande tendance s'vader et djouent
souvent les prcautions les mieux prises.
Les adultes pourvus d'une vsicule cphalique traversent, aprs leur closion, des
bouchons de coton mme trs serrs faute
:
d'tre averti,
on peut perdre tout
duit d'un levage.

On peul lever
ainsi
non
le
pro-
Fig. 212.
Dispositif pour
l'levage des larves de
Muscides dans le son
mouille.
Onginal.
seulement
des ufs, mais des larves recueillies dans

et dont on
ne connat pas les adultes.
de
mettre
ces
tubes
prudent
d'levage dans un gardemanger ou dans une cage dans le genre de celle qui est reprsente fig. 226. Brumjit a remarqu en effet que d'autres Mouches
conditions
diverses
Il
est
(par exemple des Lucilia) peuvent venir pondre sur la toile qui
renferme les tubes et introduire leurs ufs l'intrieur de ceux-ci.
Larves.
Le
meilleur
moyen de
tuer les larves est de les
plonger dans de l'alcool 70 bouillant-, ou, plus simplement, de

les mettre dans de l'eau froide
qu'on porte l'bullition (p. 590,
note 1).
Elles
dans
et
meurent en extension
On
parfaite et
on
les transporte ensuite
dans la potasse,
peut
par
obtenir de belles prparations de la cuticule et de ses ornel'alcool 90'\
les vider,
biillition
1. M. Langeron,
Remarques sur la ponte du Stomoxys calcitrans et l'levage
des larves de Muscides. C. R. Soc. de biolorjie, LXIX, p. 230, 1910.
2. Pour la fixation histologique des iarves on peut employer le liquide de
alcool absolu 6, chlorovan Leeuwen [Zool. Anzeiger, XXXII, p. 316, 1907)
forme 1, formol 1, acide actique crist. 0,5 et ajouter 1 d'acide picrique pour
:
100 parties
du mlange.
METHODES SPECIALES
600
meiils. Pour tudier la forme des stigmates antrieurs et postrieurs, ou enlve ces organes avec
un rasoir et on les monte dans la trbenthine de
Venise.
Nmatocres.
Fig. 213.
positif
Dis-
pour
vantses^Mous"
ôs procds techniques diffrent notablement,

suivant qu'il s'agit des CuHcides ou des petits Nmal^crcs piqucurs. L'norme importance des Mous-
humaine
tiques adultes,
liques en pathologie
phenset Chris-
P^^^'' ^^^^^'
tophers
dont nous allons donner les indications essentielles.
a conduit crer
tudc uuc lechuiquc trs perfectionne,
Moustiques ou Culicides
Capture des adultes.
Surtout dans
dans
habitations
les
les
(maisons, huttes, tentes),

endroits obscurs. On les prend avec un tube de
chasse.
Eu
posant doucement
tube sur le Mousimmdiatement au

on bouche rapidement avec du coton ou
le
tique endormi, celui-ci s'euvole
fond
avec
et
le doigt.
Pour tuer, le chloroforme est le moyen le plus

rapide, mais le cyanure donne de plus jolis chantillons
(p.
588).
Pour conserver
les
animaux
vivants, on les capture dans un tube ordinaire et

on les fait passer soit dans un grand hocal o on
les runit, soit dans des tubes essai o on les
{ig. 214). On peut aussi les garder
vivants pendant quelques heures, dans de longs
tubes essai, en isolant chaque individu par un
garde isolment
ConFig. 214.
servation des
Moustiques
vi
petit
vants d'ans un
Un
-%uiTr^'
^1'"" C'jt
On
a rcemment fait
moyen de capture rapide.
tampon de coton. Adie-
connatre un trs bon
tubc cssai ouvcrt aux deux bouts et ferm
par du tulle
(fig.
215) sert
la
capture.
animaux (par le ct garni de tulle)

dans un bocal ou un verre de lampe (fg. 215), ferm par une
soufile les
1. R. Blanchard, Les
Moustiques, Histoire naturelle
de 673 p.. 1905.
2.
Adie,
A handy mthode
et
mdicale, Paris,
of collecting adult Anophles. Paliidism,
3, p. 55,
in-8
1911.
ARTHROPODES
601
caoutchouc (morceau de cliaml)re

fente qui fait fermeture automatique.
laine de
Dans
les
pays paludisme,
Anophles vivants, pour
il
Conservation des
pcrcje d'une
est indispensable de
capturer des
tablir le
pourcentage de ceux qui sont
infests de sporozotes.
absolument
air)
adultes vivants.
11
faut [iroscrire
cages en tulle, dans lesquelles la mortalit est

norme. Ces cages ne doivent servir que ])Our Tclosion des
nymphes (p. 605). Pour assurer aux adultes l'tat hygromtrique
les
qui leur est indispensable, il faut les garder dans un bocal. On

peut, par exemple, mettre au fond une couche de sable, dans
laquelle on enfonce un verre de montre rempli d'eau. On fait
le bocal une bande de carton incline,
indispensable
pntrer dans
pour
se
animaux puissent
les
que
s'accrocher,
car,
sur le verre,
ils
tombent
rapidement,
meurent. On ferme le bocal avec
fatiguent
et
du
travers lequel
tulle,
les ani-
maux
soit
les
piquent trs bien, sans qu'il

ncessaire de les sortir. Il faut
nourrir toutes les quarante-huit
heures en leur faisant j)iquer son bras

ou le flanc dplum d'un Oiseau
'2\h.
Fig.
Appcircil
d'Adie
pour la capture des Moustiques.

D'aprs Adie.
(Poulet, Pigeon).
On peut aussi, comme le montre la fig. 213, renverser un bocal

garni d'un carton, sur un petit cristallisoir plein d'eau,
Adie conserve les Anophles pendant trois semaines, sans les
^
en mettant dans
le bocal une datte sche, enveloppe

morceau d'pong mouille, dans laquelle
on pique un rameau vert. Conserver toujours les adultes
V obscurit.
faire piquer,
de mousseline,
et
un
petit
Transvasement des Moustiques.

en couvrant
Il
se fait trs facilement
vase infrieur d'une toffe noire, les Moustiques

s'envolent alors dans le vase suprieur. Tous les autres procds
sont longs et exposent des vasions. La fermeture Adie en
caoutchouc
avec du
le
facilite
tulle,
beaucoup
tampon d'ouate.
1.
Paludisin, n
cette opration.
dans lequel on dcoupe un
3.
p. 6-2,
1911.
On
peut aussi fermer

obtur par un
orilice,
MTHODES SPCIALES
602
levage des Moustiques.

de
la larve.
On
Les ufs de Culex sont
peut partir de l'uf ou
faciles
mais ceux de Stegomyia
voir,
cbappent
trs
et d'Anophles
aux
recherches,
frquemment
parce qu'ils sont pondus isolment. Pourtant,

en examinant avec soin le produit de pches au
filet
fin,
mthodiquement dans
effectues
on
gtes appropris,
les
par en trouver.
Ces pches sont
Pches au filet fin.
la faune des
connatre
indispensables pour
finit
Filet main,
-JIG.
en soie bluter, pour
la
poche des larves
de Moustiques et du
plankton d'eau douce.
Fig.
Original.
Moustiques d'une contre

par
pour
levage,
les
les
et pour se procurer,
animaux neufs ncessaires
expriences.
compose d'un filet lin, d'une

d'une pipette, d'une pince, d'un bocal et
d'une provision de petits tubes bouchs.
Le filet fin doit tre en soie bluter triple force,
d'un numro plus gros (n 48 ou 50) que pour le
plankton (p. 615), moins qu'on ne veuille pcher
la fois larves de Moustiques et plankton. On
Le matriel se
tasse,
peut avoir un petit filet du modle reprsent

216, tenant dans la poche et facile adapter
au bout d'une canne ou d'un bton quelconque.
On 1q confectionne trs facilement avec du lit de
fer de 2 mm. de diamtre qu'on tord en forme
d'anneau de 13 15 cm. de diamtre et dont on
runit les deux extrmits par une bonne ligature
fig.
c
Fig. 217.
ture de
Arma-
pour la
pche dans les eaux
douces.
canne
c,
en bambou de 1 mtre
filet
de longueur, sur laquelle se visse le cercle e. A cette canne
on peut ajouter,
frottement dur, la
rallonge d de
longueur.
mme
Ori-
(jinal.
1. La soie bluter est le seul tissu qui soit assez rsistant et dont les mailles
gardent un cartement assez constant.. Le canevas ne convient pas du tout.
ARTHROPODES
603
en fil de laiton. La soie bluter doit tre cousue

qui forme coulisse autour de l'anneau; la poche aura 18 20 cent,
un
fort
ruban de
fil
de profondeur.
Un
beaucoup plus solide est

217 c ei d sont deux
flg-.
fortes cannes en bambou de 1 m.
de long-ueur qui peuvent s'emmancher l'une dans l'autre; e est un
cercle en fort ressort d'acier qu'on
doit
peindre soigneusement. La
filet
reprsent
(\g.
218 reprsente le dtail de ce
montre comment il est

vis, sur une pice
en cuivre qui se visse dans une
douille une des extrmits de la
canne c. Le diamtre du cercle est
de 15 cm. On fait coudre tout autour
un fort ruban de fil auquel sera
fixe la poche en soie bluter.
cercle
fix,
et
par quatre
Dtail du cercle
Fig. 218.
de la fig. 217.
La tasse (flg. 219) sera de prfrence maille et blanche l'intrieur. Les tasses en aluminium sont
trs lgres et moins fragiles, mais on y voit moins bien les animaux.
La pipette (flg'. 220) est un simple
tube de verre de 10 15 cm. de longueur, arm d'une ttine en caoutchouc.
Pour pcher, on promne le iilet
dans les eaux oii se trouvent les
larves la soie fait liltre et retient
tous les organismes plus gros que
les mailles. Pour examiner le produit de la pche, on remplit la tasse
:
Tasse pour le triage

avec de l'eau, on retourne avec la
Fig. 219.
des pches.
main la poche du fllet, aprs avoir
enlev les gros corps trangers, et
on dlaie dans cette eau tout ce qui est rest sur le fllet. 11 ne reste
plus qu' faire le triage avec la pince et la pipette: la pince sert
la pipette sert
enlever les dbris vgtaux, les gros Insectes, etc.
;
Fig. 220.
Pipette
pour
le Iriage
des pches.
Original.
capturer les larves de Moustiques et les transporter dans le bocal o

on a mis un peu d'eau. Pour saisir les animaux avec la pipette on utilise
l'aspiration produite en desserrant la ttine en caoutchouc; les larves
supportent trs bien ce traitement sans dommage. Lorsque la collection
d'eau est trop petite pour qu'on y promne le fllet, on puise avec la tasse
et on flltre dans le filet l'eau ainsi puise, de faon ne conserver que
des larves, qu'on transverse dans le bocal.
METHODES SPECIALES
604
Stations des larves
ciles et se
i.
Les (lulicins sont gnralement peu diffioii il y a une collection d'eau, si petite
qu'elle soit. Ces faits sont bien
connus et nous n'avons pas y
insister. La dcouverte des larves
dveloppent parlout
d'Anophlines est plus dlicate

elles exigent une eau propre, limpide, stagnante, entoure d'herbes.
Partout o ces conditions sont ralises, on peut s'attendre en rencontrer. En France, dans tous les
endroits o je me suis donn la
peine de les chercher systmatiquement, j'en ai toujours trouv
:
'2-21.
Marcages Anophlines.
Vgtation fixe, n, niveau normal
de l'eau; A, hautes eaux; b, basses
eaux. D'aprs Daniols.
Fig.
mon
exprience personnelle porte

sur la Bretagne, les environs de
Paris, le Jura et la rgion des
Marcage Anophlines. Bombes
Fig. '2-2i?.
dans les tangs de cette
niveau
de
flottante,
n,
Vgtation
dernire contre on trouve en
l'eau. D'aprs Daniels.
quantit prodigieuse les larves de
y Anophles maculipennis
Partout
cette espce est associe 1'^. bifurcatus, en plus ou moins grande abondance.
Daniels a bien montr les deux manires dont peut se comporter la
ou bien elle
vg:tation
:
toute
garnit
(fig-.
221)
la
berge
et alors l'eau
la
baigne plus ou moins, suivant les variations de son

niveau {h, n, b); ou bien
elle est fiottante (fig. 222) et
suit le
niveau de l'eau dans
ses fluctuations. C'est surtout ce dernier cas qui est
favorable
des larves
la
puUuIation
d'Anophles,
principalement sous les tro-
piques.
Nous ne pouvons entrer

dans le dtail des stations,
qui demanderait de long;s
Fig.
2-23.
Cage pour l'levage des Mous-
tiques. Bti mont.
Original.
dveloppements. En prinet surtout dans les

cipe,
pays chauds, il faut explo-
rer toutes les collections

d'eau, permanentes ou temporaires, herbeuses ou non, si petites qu'elles
soient.
1.
11
mme
est bien vident
nymphes.
Elles supportent trs bien un court transport

avec de fortes secousses (automobile, bicyclette),
Transport des larves.

(trente minutes),
que tout ce qui est
dit
des larves s'applique aussi aux
ARTHROPODES
605
dans un large bocal demi rempli d'eau. Si la dure du transport

au'''mente, la mortalit devient norme, surtout si les secousses sont
telles que les larves et les nymphes ne puissent rester un instant en
contact avec la surface de Peau pour respirer. Le Cheval ou le Mulet
sont particulirement dfavorables; le chemin de fer est nu contraire
sans action nuisible, ainsi que la marche pied, coupe de frquents
arrts. 11 est indispensable que le bocal soit assez largo pour que toutes
Fig.
^2i.
Cage pour l'levage des Moustiques. Bti
pli
sans dmontage.
Original.
mme temps la surface. Quelquefois

transport la surface du coton mouill,
mais les larves prissent rapidement dans ces conditions.
les
larves puissent se tenir en
les
nymphes s'accommodent du
levage des larves.
On peut oprer dans
rempli d'eau et couvert dîu

facilit des captures, il
morceau de
un bocal
tulle,
niais,
demi
pour
la
est bien prfrable d'employer une cage en tulle.

J'ai
combin un mo-
dle de cage dmontable,

trs facile
emporter en
voyage. Le bti (fig. 223)

est form de lattes de bois
lger,
ayant
cm. de
2-25.
Cage pour Flevage des Moustiques.
Bti pli, aprs dmontage partiel de deux
montants verticaux.
Original.
Fig.
largeur. Ces lattes sont

assembles de manire former deux cadres rectangulaires,
mesurant environ 34 sur 21 cm. Ces deux cadres sont relis par
quatre montants de 32 cm., fixs par des boulons. En desserrant
ces derniers, on peut plier la cage comme l'indique la figure 224,
sans rien dmonter. En dvissant compltement deux des boulons,
on peut replier la cage comme Findique la figure 225; elle occupe

alors un volume insignifianl. On recouvre ce bti avec une cage
en
tulle,
renforce sur les arles par des rul)ans de
petites faces
fil.
Une des
du cube porte une ouverture, pourvue d'une mancbe
METHODES SPECIALES
606
ferme par un lastique,

(lig.
et
par laquelle on peut passer
le
bras
226).
Sous cette cage, on
installe
un ou plusieurs vases
(cristallisoir,
terrine en terre, etc.), dans lesquels on mei sparment les larves

et les nymphes. L'eau doit tre limpide; on y ajoute quelques
Lentilles d'eau
et
Si
quelques Algues filamenteuses.
cela
est
vivaient les
possible il est bon d'employer l'eau dans laquelle
leur
avoir
et
doivent
sont
trs
voraces
larves. Celles-ci
disposition un plankton
Conser-
suffisant.
p^rvT^feferK!^
)ap?s
veries levages de
larves en pleine
'*-'L^''''*''
lumire
^
ii?
S-'
it
non au
et
soleil.
Se mtier
ennemis des
des
lar-
ves,
aussi
faut-il
trier
avec
soin la
rcolte la pipette
et enlever tous les
autres
Fig. 226.
Cage pour l'levage des Moustiques,

modle Langeron.
Original.
animaux
(Hmiptres, larves de Coloptres, etc.).
Avoir soin de trier chaque jour les nymphes la pipette et de

les transporter dans un rcipient spar, car les larves les bousculent et peuvent fairent manquer l'closion.
Pour capturer les adultes contre les parois de
introduire par l'ouverture la main arme d'un gros
la
cage,
tube de
chasse, garni ou non de chloroforme ou de cyanure, suivant

qu'on veut avoir les Moustiques vivants ou morts. Fermer
le tube avec la main libre pour hter
l'asphyxie. Ne jamais
tuer
un Moustique
quelques
durcir
aussitt
aprs
son
mais attendre
closion,
heures
pour que les tguments aient le temps de

autrement les ailes s'enroulent et l'animal se d-
forme.
Pour conserveries adultes vivants

donnes
p.
601.
Ils
se reporter
peuvent gnralement
aux indications
faire leur
premier repas
vingt-quatre heurs aprs l'closion.

Ponte en captivit.
Les meilleurs Moustiques pour
la
ponte
ARTHROPODES
sont les femelles gravides
On
(ig.
captures dans les maisons.
227)
comme il a t dit p. 601 elles pondent dans l'eau

montre. Ou mieux encore, d'aprs Stephens et Christo-
les inslalle
du verre de
607
phers, on prend un bocal trs large ouverture

renverse sur un petit crislallisoir plein d'eau.
cette eau,
on
fait
(fig.
la
213), qu'on
surface de
nager un mince morceau
de lige sur lequel on pose une petite

feuille de papier blanc. Conserver V obsce
curit. Les Moustiques pondent, soit dans

soit
Teau,
moyen
sur
c'est
le
un bon
papier;
d'avoir des ufs A' Anophles.
On
peut russir l'levage complet en partant

de ces ufs.
Dissection des Moustiques.
Elle
pour but l'tude du tube digestif, des

.
T
,1
glandes salivaires et des organes gnitaux,
ainsi que la dcouverte des kystes et
a
^xg. 221.
Aspect
femelle gravide de
tique, a, de profil; h, de
f^ce. D'aprs stephens et
'
sporozotes des
Plasmodium.
Il
dune
Mous-
christophers.
ne faut
dissquer que des Moustiques ayant digr compltement ^

Oprer de prfrence sous le binoculaire, ou au moins sous la
loupe (fig. 69, p. 111). Rechercher les
Anophles
infests,
dans
les endroits
on a constat du paludisme chez les enfants

se munir d'autant de tubes qu'on
:
veut rcolter de Moustiques.

Prparer de la solution physiologique ^
deux bonnes
fond noir
et
aiguilles
blanc
(fig.
Fig.
emmanches, un
228.
Fond noir
et
blanc pour les dissections

fines.
228) prpar en
collant des carrs de papier blanc et noir sous
une
feuille
de verre.
1. Tuer un Moustique par le

A. Estomac. Mthode de Stephens^.
ctiloroforme ou simplement en frappant le tube contre le genou.
2. Le poser sur une lame, le prendre par une aile avec une pince et
arracher, avec une autre pince, l'autre aile et les pattes.
3.
1.
Ajouter une grosse goutte de solution physiologique, mettre le Mous-
En
noir, l'estomac plein de
sang; en blanc, au-dessus
le jabot,
au-dessous les
ovaires.
dissection ne peut tre etfectue que sur des Moustiques frais, venant
d'tre tus. Les chantillons conservs dans l'alcool sont inutilisables.
3. D'aprs Perry {Paludism, n 5, p. 4i, 1912], la bile facilite beaucoup ces
manipulations. On en tend une gouttelette sur la lame, avant d'ajouter l'eau;
celle-ci s'tale parfaitement sur le verre dgraiss par la bile.
4. Stephens, Methods for detecting sporozoits and zygotes in Mosquitos infected
2.
La
with malaria. Bull, entomol.
reseai^ch, II, p.
1-8,"
1911.
METHODES SPECIALES
608
dos et traiisfixorle thorax avec l'aiguille
lique
sa/' le
Avec
l'aiguille droite, faire
gauche (fg'. 229, A).

deux encoches de cha({ue cl de l'abdomen,
plus prs possible de l'extrmil postrieure (au niveau du G* ou du
7 segment) (fig. 229, B).
4. Tirer doucement avec
l'aiguille droite sur le dernier segment de
l'abdomen (fig. 229, C). La paroi externe se rompt au niveau des
encoches et on voit apparatre les
le
ovaires, l'intestin et les tubes de

Malpighi, puis l'estomac et l'so-
phage (11g. 229, D).

5. Couper
la partie
suprieure
de l'sophage, encore altache au
jabot rempli de bulles gazeuses, et
couper aussi l'intestin au-dessous
des tubes de Malpighi.
6. Enlever tous les dbris,
ne
garder que l'estomac, porter le

thorax sur une autre lame, ajouter
une goutte propre pour laver estomac et couvrir d'une lamelle.

Examiner en diaphragmant avec
1
soin
1.
Les kysles (oocystes) jeunes (6-7

sont transparents, ovales ou arrondis et renferment du pigment trs
visible et caractristique -. Les gros
kystes ont un double contour trs
net; ils renferment ou non du
pigment et leur diamtre peut
[j.)
atteindre 40-60
On
ij.
dislingue trs
bien les sporozoites.

7.
de
Fig-. 2-29.
tif des
Dissection du tube diges-
Moustiques. D'aprs tStephens
et Cliristopliers.
Coloration.
fixer l'estomac
Le mieux
est
au Bouin ou au
Duboscq-Brasil, de l'inclure la
paraffine et de colorer les coupes
rtimatoxyline ferrique ou au
Romanovsky. On peut encore desscher l'estomac sur lame et colorer
au Romanovsky,
de sang-.
comme un
frottis
Stephens conseille de fixer entre

lame et lamelle, par le formol
10 p. OO; l'estomac reste coll l'une des deux, on lave l'eau et on
colore au bleu de mthylne '^ Monter au baume. Flleborn*, aprs
fixation entre lame et lamelle, dshydrate, traite par l'alcool-ther,
1. Il faut savoir
qu'en dissquant les Moustiques on peut trouver des Trmatodcs. des Ncmatodes, des Sporozoaires et des Flagells.
2. Ne pas confondre avec les cellules
prieardiales bruntres. Ne pas prendre
les fibres musculaires de l'sophage pour des sporozo'ites.
3.
Je conseillerai plutt l'azur
ment dans
4.
Arch.
II
1.
p. 1000.
On peut
aussi conserver simple-
l'eau formole.
f.
Scliiffs-und Tropenhygiene,
XV,
p.
513, 1911.
ARTHROPODES
600
recouvre d'une solution lgre de cellodine, plonge dans l'eau distille

et enlve l'objet enrob dans la pellicule. On peut colorer ou monter
tel que, au baume ou la glycrine glatine, aprs imprgnation par
ralcool glycrine.
Mthode d'Eysell '.
Couper l'abdomen en A (fig. 231). Piquer en a
et h avec les aiguilles pour sparer le 6" anneau du V en tirant doucement; oprer de mme en c et d. Fixer e avec la pointe d'une aiguille
et tirer doucement sur c.
Glandes salivaires. Mthode de Stephens.

I. Coucber l'animal
thorax) sur le ct droit, la trompe tourne vers l'oprateur.
Ne pas ajouter trop d'eau sale, pour ne pas perdre les glandes. Se
B.
le
(ou
rappeler qu'elles sont situes ventralement, au-dessus de l'origine de

premire paire de pattes. Oprer sur fond blanc.
2. Tenir les aiguille"s horizontalement. Appuyer Taiguille gauche sur
le thorax pour l'immobiliser; poser l'aiguille droite sur la partie postrieure de la tte et tirer trs doucement, par petites secousses mnages.
On enlve ainsi la tte, avec une petite masse blanche renfermant les
la
glandes.
3. Couvrir d'une lamelle et examiner en
Les digitations des glandes sont bril-
diaphragmant fortement.
lantes et rfringentes.
4. Sparer les glandes de la tte.
Poser l'aiguille gauche sur la tte et
dilacrer la petite masse blanche avec
l'aiguille droite.
peu de liquide
faut employer trs
Il
et veiller ce
que les
glandes n'adhrent pas l'aiguille.
.5. Faire un frottis avec les
glandes,
scher rapidement et colorer au Roma-
Dissection des glandes

Fig. 230.
salivaires des ^loustiques. An-
cienne mthode.
novsky.
Ancienne mthode,
sment le segment
ainsi
Ce
isol.
Couper en
et 2 (fig. 2.30) et dilacrer
soigneu-
pro-
cd peut servir, au
cas o la mthode de
Stephens n'aurait pas

on aurait
russi et o
arrach la
sans
tte
les glandes.
Mthode
Presser surd'Eysell.
thole
rax pour faire saillir

le cou, puis couper
en B (fig. 231). Tirer
en g
les
et/,
pour sparer
deux moitis
qu'
la
tte.
Fig. 231.
jus-
Dissection du tube digestif et des glandes

Trac des incisions d'aprs Eysell.
salivaires.
Fixer
en la transflxant en h et extraire
la tte
1.
Eysell,
les
glandes
salivaires
avec
l'autre
aiguille.
Bie Stechmcken in Mense, Handbuch der Tropenkrnkheiten,
p. 44-94. pi. I-V, 1905.
M. Laxgero.n.
39
II.
METHODES SPECIALES
610
Ce n'est pas une mlhode de

prcdentes, mais un procd de diagnostic
arracher hnisquoment la tte avec une pince fine, serrer le thorax avec
cette pince et faire sourdre
les tissus tfioraeiques, avec
les([uels on excute un
frottis. Colorer au Roma-
Mthode des frres Sergent'.
dissection,
comme
les
chercher
et
novsky
les
sporozotes.
Collections
de
Moustiques.
Les
Moustiques conservs
dans Talcool (lig. 205)
sont gnralement peu
soit
utilisables,
parce
que leurs cailles sont

laves par le liquide,
est
parce
qu'il
impossible de les desscher convenablement
soit
Fig.
23-2.
Procd de
la bote d'allumettes
pour
la conservation et l'expdition des Insectes fragiles. Manire de disposer les chantillons dans
le tiroir
sibilit
ensuite.
Lorsqu'on n'a
pas le temps ou la posde les piquer, le mieux est de les conserver par le procd
des botes d'allumettes on garnit
:
le tiroir
d'une couche d'ouate trs
lgre et bien tire, sur laquelle
on dpose les Moustiques, puis on

entoure d'une bande de papier,
dispose
comme
ligures 232
de
tirer le
Insectes.
et
233,
tiroir
On
le
montrent
et
les
permettant
sans froisser les
peut en mettre
]lu-
sieurs dans chaquebole, condition

Boite ferme, avec notes
de chasses inscrites sur la bande
Fig. 233
de papier.
sissures;
ne puissent se toucher. Une

goutte de crosote dans la ouate
qu'ils
un bon prservatif contre les

Insectes destructeurs et les Moiest
on peut aussi mettre, au fond du
tiroir,
sous
la
ouate,
Ed. et. Et. Sergent. Campagne antipaludique en Algrie en i908, p. 162.

2. Les figures 232 et 233 ont t extraites d'une notice {Instructions sommaires
pour les pays chauds) publie par le Laboratoire de Parasitologio de la Facult
de Mdecine de Paris,
1.
AHTHUOPODES
quelques cristaux de naphtaline.
611
Inscrire les indications sur la
bande de papier.
Pour piquer les Moustiques ainsi desschs, mettre sim])lement
le tiroir ouvert au ramollissoir (iig. t^06). On peut alors enlever
animaux et les dbarrasser

du coton sans les briser.
les
Mthode des deux pingles.

1.
Dcouper dans du carton mince
(genre carte de visite) des disques

(avec un emporte-pice rond) ou
mieux des carrs ou des rectangles '.
2. Placer le Moustique (rcemment
tu ou ramolli) sur le dos, sur une
plaque de tourbe ou d'agave.
3. Prendre avec la pince piquer
une pingle micro
(fig.
1) et
234,
x?^
la
piquer au centre du disque pos

sur la plaque de tourbe. Enfoncer
la micro jusqu' la moiti de sa lon-
gueur
4.
<c^
2.
Retirer la micro de la plaque
de tourbe avec
le disque et piquer
Moustique exactement entre les
pattes, de manire ce que l'pingle
ressorte de 1 millimtre environ sur
le dos, bien au milieu du thorax
le
(flg.
5.
234, 2 et 3).
Retirer
portant
le
doucement
la
micro
discjue et le Moustique,
disque avec les doigts

ou la pince, poser le bord sur la
plaque de tourbe et le traverser avec
prendre
une
le
Fig. 234.
Mthode des deux piu-
piquer; b, pingle
carton; d,
c, rectangle do
ou d'agave. D'aprs
de
tourbe
plaque
gles. a, pince
micro;
Daniels.
forte pingle n 3 (fig. 234, 4),
avec laquelle on pique ensuite l'tiquette. Le disque doit se trouver

peu prs au tiers suprieur de l'pingle.
Le Moustique
est ainsi
solidement
fix
au
petit appareil
form
deux pingles. Le tout peut tre piqu dans

disque
par
une bote Insectes ou dans un large tube bouch (fig. 235),
le
et les
-^
On trouve dans
le commerce des feuilles de rectangles toutes imprimes,

de dcouper aux ciseaux. On peut aussi employer do petits cubes de
moelle de Sureau qui sont excellents, mais un peu longs prparer.
2. Si la micro a une tte et si on veut enlever cette tte, avoir soin de couper
de
l'pingle obliquement, avec de forts ciseaux, de manire pouvoir la piquer
nouveau dans un autre disque, si c'est ncessaire.
3. Ne pas enfermer les Insectes avant dessiccation complte. Consulter ce
1.
qu'il suffit
A System of mounting,
sujet
n" 3, p. 57-61, pi. III, 1911,
:
examining, preserving mosquitoes. Paludism,
METHODES SPECIALES
612
et mme ponr
procd excellent pour le transport, Texpdition
la dmonstration, car il permet de faire circuler les chantillons entre les mains des lves.
Ne
des Moustiques se fait

pas oublier que la dtermination
Faide des cailles, il faut donc soumettre les
chantillons au
minimum
de manipulations et
Un Moustique
incorrectement piqu, mais intact, vaudra toumieux qu'un Moustique bien piqu, mais
viter avec soin les frottements.
jours
de ses cailles.
qui a perdu une partie
Em-
ou
ployer
son dfaut un bouchon coll sur une lame,
Texamen au microscope ou au binocul'appareil
de
Sergent
(fig.
207)
pour
laire
Les ufs
Prparations microscopiques.
seront monts au lactophnol ou la glycrine
seront
glatine (p. 442). Les larves et les adultes
tus dans Talcool et monts la trbeuthine
SkionsFig. 235.
tique piqu par la
mthode des doux

pingles.
ginal.
Ori-
de Venise. Pour
la dissection et la sparation
des pices buccales, ramollir dans le chloralphnol et passer directement au baume. Ne
bouillir
jamais
dans
la
potasse ni
larves ni
Le chloralphnol permet d'ol)tenir des

larves d'une transparence absolue. Ne jamais monter d'adultes
adultes.
gorgs.
Petits Nmatocres.
Psychodids.
Les Phlbotomes adultes sont surtout des ani-
maux domestiques
on
les
trouve donc
dans
les
maisons, mais
sont excessivement difficiles voir et capturer cause de

leur petite taille. Le meilleur moyen est de les coiffer d'un tube
ils
pendant qu'ils piquent. Les larves et nymphes sont extraordinairement difficiles dcouvrir; il est probable qu'elles se dveloppent
dans
les crevasses
humides des murs
et des rochers. Malgr les

de Marett \ il y a encore beaucoup
biologie de ces insectes.
recherches de Newstead
faire
pour connatre
la
et
R. Blanchard, Quelques mots sur les Phlebotomus. Arch. de parasltologie,

R. Newstead, The Papataci Flies (Phlebotomus) of the Maltese
XIII, 1909.
Islands. Bull, entomol. research, II, p. 41-78, 3 pi., 1911. Annals of trop. med. and
Marett, The life history of Phlebotomus.
parasitology, V. p. 139-181, 3 pi., 1911.
Journ. Boy. Army med. coi'ps, XVII, p. 13, 1911.
M. Langeron, Localits nouvelles de Phlbotomes. C. B. Soc. de biologie, LXXII, p. 973, 1912.
1.
ARTHROPODES
On
mais c'est une besogne

monte au baume, mais je prtrbenthine de Venise ou le lactophnol qui est moins
peut arriver piquer
les adultes,
Gnralement on
trs dlicate.
fre la
613
les
rfringent. Rien ne remplace Ttude des individus frais.

Les larves et nymphes de Sitnulium sont faciles
Simulids.
dcouvrir dans les eaux cours rapide, sur les pierres et les
herbes. L'levage des larves en captivit est difficile raliser, parce
que Teau courante est indispensable; mais Tclosion des nymphes,
conserves sec ou dans l'eau, se produit sans difficult. Gomme

en nuage, on les capture facilement avec un
les adultes volent
petit filet
tillons
ou un mouchoir, mouill d'eau ou d'alcool. Les chan-
piqus sec sont prfrables ceux qui sont conservs
dans l'alcool
et
monts au baume.
Chironomids.
Ge groupe renferme un
trs
grand nombre
de formes piqueuses et non piqueuses. La biologie des larves est trs

curieuse et trs mal connue
toutes paraissent aquatiques, mais
vivent de faons trs particulires. Gertaines larves de Ceratopoqon
:
vivent dans la sve qui coule des plaies des arbres (Ormes); j'ai
fait connatre des larves d'Orthocladius
qui vivent dans les sources
'
incrustantes, jouent un grand rle dans la formation des tufs calcaires et dont les traces se retrouvent jusque dans l'ocne infrieur.
Les adultes se capturent
comme
les
Simulids.
Ils
sont gnrale-
ment
trop petits pour tre piqus; on les conserve dans l'alcool et

on les monte la trbenthine de Venise ou au lactophnol.
Les Blpharocrids. dont

rantes, se traitent de la
les larves vivent
mme
dans
les
eaux cou-
manire.
HYMNOPTRES
L'levage des Hymnoptres parasiles des Insectes nuisibles aux
plantes cultives (Gochenilles, Ghenilles, etc.) a t ralis par un
grand nombre d'entomologistes et d'agronomes amricains et franais
^.
L'acclimatation de ces Insectes aux tals-Unis (Galifornie,
etc.), aux les Hawa, au Gap, en Italie, au Portugal, etc.,

rendu des services normes. On a pu sauver ainsi des cultures
Texas,
a
tout fait compromises par des tlaux comparables au Phylloxra,

contre lequel on ne peut malheureusement pas lutter de la mme
1. M. Langeron, Flore fossile de Szanne, 3'' fascicule. Bull. Soc. hist. nat.
d'Auiun, XV. p. 59-83, pi. III-A', 190-2.
2. P. Marchai, Utilisation des Insectes auxiliaires
entomophages dans la lutte
contre les Insectes nuisibles Tagriculture. Ann. Inst. agronomique., (2) VI, in-8
de 74 p., 1907.
METHODES SPCIALES
6d4
faon. Ces succs remarquables ont t remports pour

sucre, le Cafier, l'Oranger, le Citronnier, le
la
Pommier,
Canne
etc.
Le principe de Tlevage est le suivant on rcolte les Chenilles

ou autres Insectes parasits par les Hymnoptres et on les
enferme dans des rcipients (tonneaux, caisses, elc.) recouverts
:
d'une
mtallique, assez fine pour laisser passer les Insectes

pour empcher de sortir les Papillons, les
toile
auxiliaires
utiles et
Coloptres (Charanons), etc. Ces caisses d'levage sont places

les Hymnoptres parasites closent,
les cultures infestes
dans
s'chappent et font leur uvre. En quelques annes, l'espce utile

est acclimate et lutte avec efficacit contre les ennemis des cultures.
E.
Brumpl
parasite
des
dcouvert,
en France, un
nymphes Îxodes richius;
petit
c'est
Hymnoptre
VIxodiphagus
Caucurtei du Buysson, 1911 ^ L'tude biologique (pril en a

montr qu'il peut parasiter un grand nombre d'Ixodins;
faite lui a
a pu, avec cet
il
Ixodes ricinus^
Hymnoptre,
infester
HxmophysaUs concmna
exprimentalement
et II.
inermis^ Bhipicephalus sangu'ineus, Dermacentor reticulatu?> et D. venustus.

Le rsultat obtenu avec celte dernire espce est |)arliculiremenl
intressant,
l'Homme,
la
parce qu'elle transmet une maladie morlelle pour

fivre pourpre des Monlagnes Ilocheuses. P)rumpt
^
propose de tenter Tacclimatation de VJxodipharpis Caucurtei
dans les Monlagnes Rocheuses, o il pourra trs probablement
trouver des conditions d'existence favorables. C'est la premire
fois
qu'on
pathologie
propose
un
humaine
ou
semblable
moyen
Les
animale.
])roi)liylactique
milliers
de
en
nymphes
pu facilement infester exprimentalement

sur le Hrisson, avec des Ixodiphagus levs en petits tubes
isols (fig. 193), permettraient d'avoir des levages suffisamment
d'IxodidsqueBrumpt
importants pour tenter une exprience dans la nature.

Quelques jours aprs la piqre de l'Hymnoptre, la
nymphe
prend un aspect spcial. Brumpt l'isole alors dans un petit !ube,

et l'lve en cylindre Borrel
la technique qu'il
(fig. 193), suivant
a
prconise pour
les
Tiques
(p.
l'closion des Insectes est proche,
583).
il
Quand
infeste
il
pivoit que
un Hrisson avec des
nymphes de diverses espces de Tiques et vide sur son dos les

ceux-ci vont alors insrer leurs ufs dans toutes
Ixodiphagus
les nymphes qu'ils rencontrent.
:
1.
2.
Arcli. de parasitologic, 1911.

Jhid., 1912.
Presse mdicale, 1912.
CHAPITRE
III
PLANKTON
Il
lie
peut (Hre question, dans cet ouvrage, de faire une lude

de la technique du plankton^ Je veux seulement
mme sommaire
donner quel(|ues indications uliles, pour Ttude de

la tlore microscopiques des eaux douces.
Pche du plankton.
la
faune
et
de
Les traits spciaux donnent les indifilets. Nous nous con-
cations com[iltes sur tous les modles de

tenterons d"ada|)ter la monture dcrite p.
602 (fig. 219 et 220)

d'un numro proportionn aux organismes rcolter. Pour pcher des Infusoires on prendra, par
une poche en
soie hlulcr
exemple, une gaze double force X, n" 16, 17 ou 18 -, mais il ne faut

pas oublier que ces filets se colmatent trs facilement. Les double
XXX,
extra
n 8 10, sont d'un emploi plus facile
dj des organismes trs petits.

Le fond du filet est lav dans
et
retiennent
comme il est dit p. 603,

au
laboratoire, runi dans un
rapport
bocal unique ou spar dans des tubes suivant les circonstances.
et le produit
de
une
tasse,
la p-clie est
ou bien on peut
La rcolte peut tre fixe in toto

organismes, suivant leur nature et leur
fixation, il faut aussi concentrer le plankton
Prparation et triage.
trier les
taille.
Pour pratiquer
dans
plus petite quantit d'eau possible.

tous les appareils qui ont t proposs, nous ne retiendrons
De
la
la
que celui de Francotte^, qui est trs simple, trs ingnieux et trs
pratique (fig. 236). Le filtre pipette se compose d'un tube D qui
Consulter, par exemple, ce sujet
Steuer, Planktonkundc, IVUO etLeitfaden
Planktonkunde, 1911.
de
et
C, 39, rue Jcan-Jacques-Rousseau,
Renaud, Levque
Catalogue
Paris. Certaines maisons anglaises, par exemple Flatters and Garnett. 3-2, Dover
Street, Manchester, fabriquent des appareils trs perfectionns, pour la pche du
plankton d'eau douce.
3. Francotte, Appareil pour la prparation et le triage du plankton. /hdf.
Institut ocanofi ra phiqne de Monaco, n'^ 2-2^, 2c> janvier 1912.
1.
(1er
2.
METHODES SPECIALES
616
gaz rtrci aux deux extrmits, un verre de

simple tube entonnoir (genre tube
La partie infrieure est garnie d'un tamis de soie
peut tre un verre

lampe ptrole ou
de sret).
mme un
numro
bluter de
appropri,
retenu
par un anneau de caoutcbouc. La partie

suprieure est ferme par un bouchon,
portant un tube C, auquel est adapt
un tube de caoutchouc B, termin par
tube
le
'
servant de pipette d'aspi filtrer est en A.
Le llankton
ration.
On comprend comment E
si
pleins d'eau,
se produit en
il
amorce
liltration
le
Fig. -236.
Appareil de Fran
cotte pour le triage du plank
le
tube
le
plankton
g^
pour
Fran-
cotte
pour la
flxation
du
plankton. D aprs Francotte.
restant
au
pour remettre
triages, faire
la
la
le
tube D, enlever le tube de

le tube D pour
caoutchouc. Soulever lentement
Appa-
de
trois fois
un appareil qu'on
main gauche, pendant
pipette T de la main droite.
Lorsque tous les animaux sont
les
rassembls dans
reii
aspiration qui
On
filtre D ne peut jamais rester sec. Si

accumulation des organismes, soulever
qu'on dirige
Fixation.
Fig. 237.
siphon.
puisse tenir tout entier de
tant
suspension. La dimension de l'appareil varie

suivant la nature et la quantit du plankton
traiter
P\
tube D,
peut laisser la
ou
en pinant
bien,
s'oprer
saisir par aspiration tel ou
le
vivement deux ou
et l'enfoncer
en
le
s'coule de
se colmate, par
filtre
T une
et
organisme. L'excdent de liquide

E en F et le contenu du
tel
ton. D'aprs Francotte.
le
tube,
on soulve
laisser couler la
l^^rmtiquement
majeure partie de
le
tube
G avec
l'eau, fei'mer
l'index
(fig.
237)
plankton, flottant dans quelques centimtres cubes d'eau -, dans le vase H renfermant
ct porter le
fixalcur. Plougcr douccment pour que l'eau,

moins dense, surnage et pour que les animaux
fond soient bien fixs. Puis, avec un agitateur.
le
Le tube de caoutchouc a
11 mm. de diam.
le tube Ta IQ mm. et est effil
Ces dimensions varieront suivant la nature du plankton.
2. La plus
petite quantit possible pour ne pas diluer trop le fixateur. 11 ne
faut pas non plus que les organismes collent la soie bluter.
1.
la partie infrieure.
PLANKTON
617
de caoutchouc, faire tomber la soie dans le vase H

pour librer tes organismes. Procder au lavage comme
le lien
pousser
et Tagiter
d'habitude.
Fixateurs.
Flemming
faible
Tous
'
conviennent, notamment le
sublim saturation. Francolte emploie
les fixateurs
le
et
Lo Bianco, form de parties gales de Flemming

de formol 40 p. 100; ce mlange ne se conserve pas et
ne doit pas agir longtemps. Le formol seul est trs mauvais, il est
souvent acide et produit frquemment la macration des orga-
aussi le liquide de
faible et
nismes.
ont propos rcemment l'emploi de la
Yaney
c/uinone 24p. 1000. Ce ractif doit tre frachement prpar
Meunier
car
il
et
brunit trs vite Tair. Le plankton est ensuite conserv dans
Falcool 70. Les noyaux se colorent en brun, les cytoplasmes en
jaune. bruntre faible.

A. Bonnet'^ applique celle mthode aux Algues et monte ensuite
la glycrine glatine. La chlorophylle prend une teinte brunverdtre trs favorable.
A. Nathansohn conserve le plankton marin dans l'alcool 70,

dshvdrate par l'alcool absolu, claircit trois fois dans le xylol
phniqu 1 p. 3 (p. 351), monte au baume et examine avec
'"
l'clairage fond noir.
Mthode de Francotte pour

Solution A, fixatrice
et
les prparations
colorante
microscopiques.
55 cm3.
20
20
Eau
Alcool 90
Glycrine
Formol 40
p.
100
Vsuvine
Vert malachite
Solution B, conservatrice
0,05 cgr.
0,10
50 cm3.
20
30
Eau
Alcool
Glycrine
Eau lOO, acide chroraique -2,5, acide osmique 1, acide actique, 1.

Meunier et Vaney. Nouveau procd de fixation du plankton. C. R. Soc. de
biologie, LXVIII, p. 7-27-7-29, 1910.
1.
2.
3.
A.
Bonnet, Fixation des algues par
4 juin 1910.
4. Bail. Institut
la
quinone.
ocanographique de Monaco, n
C.
140, 1909.
R. Soc.
de biologie,
METHODES SPECIALES
618
Prendre une gouUe de ])lanklon fillr el vivant, mlanger sur

lame avec un i)eu de A. Couvrir d'une lamelle, supporte au
besoin par deux bandelettes de buvard. Laisser vaporer lentement
en compltant le volume avC B, jusqu' ce qu'il ne se produise plus
de vide. Luler. On peut colorer de mme le plankton fix. Convient pour le plankton d'eau douce et marin.
A propos du plankConservation des animaux vivants.

ton, je vais donner quelques indications sur la manire d'installer
un aquarium d'eau douce. On peut
garder longtemps, sur
la
table de
beaucoup d'animaux dans

des cuves de verre analogues
travail,
celles de la figure
15
10
238
et
mesurant
o cm. Quelle que
du
soit la
faut, chose
rcipient,
oublie
souvent,
qu'on
trop
prserver
taille
il
animaux d'un excs de lumire,

sinon beaucoup d'entre eux prissent el les Algues vertes envahissent
les
Fig. 238.
Un bon moNcn
tout.
Aquarium pour plankton

d'eau douce. D'aprs Kuhlmann.
un
de
raliser
en
recouvrant
d'y obvier est
clairage oblique,
l'aquarium
d'une
papier ou de mtal, dispose comme l'indique la

figure 238. La plaque de verre, destine empcher l'vaiioralion
trop rapide et prserver des poussires, ne doit pas s'appliquer
gaine
de
hermtiquement, de faon
ne pas gner l'aration.
Rotifres.
Les lôtifres ont une grande importance pour caractriser les
planktons d'eau douce. De Ccauchamp a donn des instructions minutieuses et trs pratiques pour leur prparation. Les formes plagiques
sont pclies au filet fin; pour recueillir les formes non plagiques, on
transporte au laboratoire, dans un linge mouill, des plantes aiiualiques, en choisissant les formes flottantes {NupJtar, Nympha) ou feuilles
'
dcoupes {Ccratophyllum, Myriophyllnin, JRanuncuhis). A l'arrive,

met dans un baquet avec un peu d'eau pour les couvrir. Les
Rotifres se rassemblent en nuage la surface, du ct de la lumire;
on les recueille avec un tube. )e mme le produit de la pche pla-
trs
on
les
1. P. de
P.eauchamp, Instructions pour la rcolte et la fixation en masse des
Rotifres. Arch. de zool. e.rpr. et r/nrnle, 1, IV, Notes et Revue, p. xwii-
XXXIII. 1906.
PLANKTON
619
mis reposer une demi-heure ou une heure et soumis un

clairage unilatral on recueille dans un tube le nuage de Rolifres.
Anesthsie avoc le liquida de Roiisselet concentr:
gique
est
Chlorhydrate de cocane
Alcool mlh}lique pur
10 cm^.
Eau
10
distille
gr.
Ajouter en trois fois, intervalles de cinq minutes, une trois fois

autant de gouttes de narcotique qu'il y a de centimtres cubes de liquide.
Fixation.
Quand les animaux sont tombs au fond du liquide,
ajouter, par centimtre cube, une goutte d'acide osmique 1 p. 100.
Sdimenter (10 15 minutes au plus), dcanter, laver l'eau deux ou
trois fois, puis conserver dans le formol 2 p. 100.
Monter en cellules de papier ou de verre, dans l'eau formole et
luter avec soin.
Pour prparer des individus isols, anesthsicr sur lame ou dans un verre
de montre par le liquide de Uousselet tendu de deux volumes d'eau i.
Ajouter l'anesthsique avec un tire-ligne, comme le conseille Rubenthaler, oa plus simplement en le laissant couler d'une fine pipette.
Quand
l'animal est bien tal et immobile, fixer [)ar l'acide osmique

tendu, ou par les vapeurs osmiques, en renversant la lame sur le
goulot du flacon, Monter dans l'eau formole, dans une cellule on verre
ou en papier.
Foraminifres.
Ces animaux sont presque tous marins. On se les procure en pchant
filet fin et en examinant des boues marines convenablement choisies. On les fixe - soit aux liquides picriciues (Bouin ou Duboscq-Brasil),
soit au sublim alcoolique, soit l'acide osmique I p. 100 3. On colore
l'hmatoxyline alune ou ferrique, au carmin alun, la safranine, etc.
On peut dissoudre les carapaces dans l'eau de Javel ou dans les les-
au
sives alcalines.
Debes
mercure
'
isole
et
les
animaux par
de potassium)
et
la liqueur de Thoulet
(iodures de
prconise des procds particuliers de
-^
montage.
On, dans certains cas, avec la stovanc 1 p. 100 nie Beauchamp). Voir
mthode d'auesthsie sous lamelle, applicable aux Rolifres et
autres organismes du plankton.
Voir p. 617, les mthodes gnrales de fixation du plankton, et notamment la
2.
mthode la quinone de Meunier et Vaney.
1.
aussi p. 5o7, la
Schaudinn, Zeilsckr. f. iviss. Zool., LIX, p. Ki3. 1895.

Debes, Zur Technik der Foraminiferenpriiparation, Sitz-bev. d. Xuturforsch.
Gesdl., Leipzig, XXXVII, 1910. Rsum dans Ztschr. f. wiss. Mikr., XXVIII,
3.
4.
p. 370-37-2, 1911.
5.
Voir
p. 56r>,
note
1.
620
MTHODES SPCIALES
Radiolaires et Hliozoaires.
Pour ce groupe, comme pour le prcdent, nous ne pouvons donner
que des indications trs sommaires. La recherche de ces animaux
exige du temps et de la patience. Il faut examiner minutieusement les
(jui se trouvent sur les vgtaux aquati([ues et sur les dbris
vgtaux pourrissant dans l'eau. Le plus grand nombre sera captur
en pchant au lllet fin. La majorit de ces organismes vit dans la mer.
Tous les auteurs qui ont tudi des genres de l'un ou l'autre de ces
groupes ont conseill des mthodes particulires dont nous ne pouvons
donner ici l'numralion complte. Toutes se ramnent l'emploi du
sublim alcooliijue, de l'acide osmique, du Duboscq-Brasil ou du Flemming comme fixateurs. On colore avec des teintures d'hmaloxyline
ou de carmin.
dpts
CHAPITRE
IV
EXAMEN DES LIQUIDES ORGANIQUES

TECHNIQUE
HM
ATO LO G Q U E
I
la prise du
sang, Y exacolorations vitales, la mthode des frottis
mthode des frottis humides et enfin la numration
La technique hmalologique comprend
men
Viat frais,
les
desschs, la
des divers lments du sang.
Chez V Homme, piqre du lobule de Toreille

Prise du sang.
ou du doigt
l'oreille,
prendre le lobule entre le pouce
pour
et Tindex et piquer le bord, car, en piquant le plat appuy sur un
doigl, on risque de traverser et de s'infecter. Pour le doigt, piquer
:
de prfrence
La piqre
la face
doit
dorsale, en arrire de la racine de Tongle.

pour que le sang sorte sans
tre assez profonde
compression du doigt; si cette dernire est ncessaire, comprimer

lgrement en remontant les cts du doigt (artres latrales). Ne
pas presser trop fortement, car on obtient alors un mlange de
lymphe et de sang. Rejeter les aiguilles rondes qui donnent un
trou rond, petit, douloureux, saignant mal. Les aiguilles lancoles
bien tranchantes sont excellentes; on peut prendre aussi des vacci^
nostyles ou mme simplement de fines plumes d'acier, dont on
Ce dernier procd est excellent quand on a

beaucoup de malades examiner; chaque plume ne sert que pour
un malade. Emmancher dans un porte-plume ou mieux dans une
casse une pointe.
pince hmostatique et flamber rapidement la pointe. Les lancettes

curseur et ressort sont excellentes, surtout en clientle et pour
les sujets timors.
Lavera Talcool avant
et
aprs
la
prise de sang.
1. Ne jamais chautfer directement dans la flamme et encore moins faire

rougir
un instrument d'acier. Cette erreur est malheureusement trop rpandue. Dsinfecter par l'alcool et l'ther ou lbullition dans l'eau sature de borate de sodium.
METHODES SPECIALES
622
Les pels Rongeurs (Rat, Souris) seront saisis par la peau du cou avec
une pince hmostatique ou une pince kyste (fig. 230). On accroche
l'anneau un clou, un boulon de tiroir, etc. On saisit la queue de
l'animal, en tirant assez fortement et on sectionne l'extrmit. Pour
l'hmostase, brler la plaie avec une veilleuse de gaz, une allumette,
un fer rouge, etc. Pour les virus dangereux, voir p. 494 le procd du
sabot et de la plaque de carton. Chez le Cobaye et le Lapin on fend
lgrement l'oreille. Cautriser au fer rouge.
Chez le Singe, on prend de prfrence l'oreille (p. 494 et 519).
Pour saisir ces animaux, revtir la main
droite d'un gant d'escrime et plonger
rsolument le poing ferm dans la cage
acculer l'animal dans un coin, s'il mord
:
lui
le poing ferm, c'est--dire

rembourr du gant; s'efforcer de
saisir la queue pour le tirer hors de la
cage. Ceci fait, on ramne de la main
droite les deux bras derrire le dos, pendant que la main gauche tient la queue.
L'animal est alors rendu inoffensif et on
prsenter
ct
le
peut ter
Chez
le
gant.
la
i, on pique
veine qui runit le membre postrieur
la queue et qu'on voit par transparence
travers la membrane.
les Chauves-Souris
Chez les petits Oiseaux, piquer une

veine du genou ou du coude (p. 519)
la crte des Poulets saigne trs facilement; chez le Pigeon on peut piquer la
plante des doigts.
:
Les
Amphibiens saignent quelquefois

couper les doigts. Chez les
Tortues, on ne peut avoir de sang que
par la section de la queue qui est souvent
difficilement
Pince pour
Fig. 239.
les petits Rongeurs.
saisir
trs courte et difficile prendre, surtout

Tortues terrestres. Pour les Poissons, voir p. 480.
Ces procds
Moyens d'obtenir de grandes quantits de sang.
sont un peu en dehors de la techni(iue microscopique proprement dite.
J'ai indiqu ailleurs (p. 498) la technique de la ponction du cur chez
chez
le
les
Lapin.
Ponction du cur chez le Cobaye, d'aprs Raybaud et Havvthorn 2.

On cherche le bord gauche du sternum, 8-10 mm. au-dessus du
sommet de l'angle form par la base de l'appendice xyphode et le
dernier cartilage costal articul avec le sternum. Enfoncer l'aiguille
15-17 mm. au-dessus de la pnultime ou antpnultime articulation
chondro-sternale, en inclinant vers la ligne mdiane. On pntre ainsi
dans le ventricule gauche. Plus haut on rencontre l'oreillette et on
Nicolle et
Comte
XX, p. 319, 1906) conservent les

en les gavant de Mouches pour les adultes, de
lait pour les jeunes, ce qui est plus facile. D'aprs Kollinat et Trouessart, certaines espces vivent bien en captivit, nourries avec des Blattes,
1.
{7in.
Chauves-Souris au chaud
2, C. Ji.
Soc,
biol.,
LV,
{2z>)
Inst. Pasteur.
et
p. 815, 1903,
623
la dchirer. Plus bas on tombe dans le diaphragme et plus

en dehors dans le poumon.
Chez le Cobaye, la jugulaire externe suit une
Ponction veineuse.
ligne partant de Tangle de la mchoire, pour aboutir au milieu de
Dcouvrir la veine, aspirer le
l'espace sparant l'paule du sternum.
sang la seringue ou la pipette; au besoin, lier du cl du cur,
pour augmenter l'afllux du sang.
Chez le Lapin, choisir la veine marginale externe de Toreille. Frotter
l'oreille avec du xylol pour produire un afilux du sang. Bien tendre
l'oreille; comprimer la veine avec le doigt ou avec une pince, pour la
rendre turgescente; piquer bien dans l'axe. Pour la veine jugulaire
risque de
externe, les repres anatomiques sont les mmes que pour le Cobaye.
Chez le Chien, prendre la petite saphne ou veine externe du membre
postrieur; elle est facile trouver, la partie suprieure du tendon
d'Achille. Ne pas inciser la peau.
Chez les Oiseaux, prendre la veine axillaire ou celle de la patte (p. 519)
au genou.
Chez l'Homme, la ponction veineuse est trs facile faire, sans danger
non douloureuse. Choisir le pli du coude, ligaturer le bras, faire une
application de teinture d'iode, ponctionner la mdiane cphalique
avec une aiguille d'acier neuve, de calibre un peu fort et bien permable.
Enfoncer progressivement (le dbutant enfonce toujours trop et dpasse
la veine) et s'arrter quand on voit sourdre le sang. L'aiguille doit tre
dans l'axe de la veine et presque parallle la peau, la pointe dirige
vers le haut du bras. Adapter
la seringue et aspirer ou laisi
ser simplement le sang couler
et
par
l'aiguille, si elle est assez
grosse. Quand on a fini, desserrer d'abord le lien, puis

retirer l'aiguille et
dtruire
orifices.
le
Il
masser pour
paralllisme
est
un pansement.
des
inutile de faire
MTHODES SPCIALES
624
parasites.
la
paraffine ou
Border la
la
pour empcher
vaseline,
dessiccation.
Ce i)rocd russit trs bien, condition 1" que lame et lamelle

soient parfaitement propres et dgraisses; 2 que la goutte ne soit
pas trop grosse, car, si la lamelle Hotte, tous les globules s'accolent
:
en rouleaux au lieu de
On
recherche
(p. 520), les
s'taler.
ainsi
formes pigmentes
les
Trypanosomes,
des
Plasmodies
spirales et lesFilaires.
les
organismes
11
peut rendre des services pour
tudier les dformations globulaires mais, part les hmoconies',
ne montre gnralement rien de plus que Texamen en lumire
Emploi du fond
noir.
sauf en ce qui concerne les parasites trs peu

rfringents. L'interprtation des images du fond noir exige la connaissance pralable des objets en lumire ordinaire. Un observaordinaire bien
fait,
teur exerc prfrera souvent l'examen en lumire ordinaire, plus
simple et surtout plus souple, par suite de
la
manuvre du
diaphragme.
Les hmoconies sont particulirement abondantes aprs ingestion
de matires grasses et chez les jeunes Mammifres au sein.
Coloration vitale.
Trs
utile
pour dmontrer certaines
modifications des hmaties et mettre les parasites en vidence. Ce

n'est pas une vritable coloration vitale, car les lments sont
gnralement tus par le ractif. Il faut pourtant conserver cette

dnomination, car les rsultats sont trs diffrents de ceux qui
sont fournis parles autres mthodes de coloration.
a. Mthode de Pappenheim.
Faire une solution alcoolique concentre
avec le colorant, en taler une goutte (comme pour un frottis de sang),
sur une lame bien propre et flambe, puis scher. On peut prparer les
lames d'avance et les conserver Fabri de la poussire.
Dposer une goutte de sang sur la lame ainsi prpare, recouvrir
d'une lamelle assez large pour que le sang n'en atteigne pas les bords.
Les meilleurs colorants sont le bleu de crsyl brillant, Tazur II, le
(pour les granulations graisseuses). On peut employer aussi

de mthylne et de toluidine, le violet de mthyle, le bleu
de Nil, la pyroniue, le rouge neutre. Le vert de mthyle, le vert malachite, la fuchsine, la safranine ne donnent pas de colorations vitales.
b. Mthode de Schilliiig-Torgau '.
Procder comme en a, mais, aprs
coloration vitale, taler le sang, scher, fixer cinq minutes l'alcool
mthylique et colorer au Giemsa ordinaire (p. 411, note 1 et p. 503,
sudan
III
les bleus
1. F. Cottin, Etude sur les hmoconies ou

granulations libres du sani/ observes
V ultra-microscope. Thse de Paris (mdecine), 1911.
Arcli. ynaladies cur,
dc. 19IL
2. Folia hasmatologica, IX, p. 33-2, 1909 et XI, Archiv.,

p. 343, 1911. Voir aussi
Archiv. f. Schiffs iind Tropenhygiene. XV, p. 126, 1911.
625
procd lent). Il est prfrable de prparer comme ci-dessus une lame

avec le bleu de crsyl brillant, taler le sang- sur celte lame, laisser
scher lentement dans une bote de Ptri ferme, puis fixer 3 minutes
l'alcool mthylique et colorer au Giemsa ordinaire.
Excellente et trs simple. Faire un frottis,
c. Mthode de Sabra:s '.
le scher et le recouvrir d'une lamelle charge d'une goutte de bleu de
mthylne I p. 500. Luler au besoin. Colore trs bien les Bactries
(sauf les Bacilles acido-rsistants), les Protozoaires (sauf le Trponme),

les granulations et le rliculum de certaines hmaties (paludisme, ani-
maux intoxiqus par le plomb), les leucocytes, etc. Excellent procd

pour la coloration vitale des hmaties granuleuses, au cours des ictres
hmolytiques.
Prparer la solution avec du bleu do mthylne chimiquement pur
dans un grand flacon; ne jamais remuer; puiser avec une effilure de
pipette.
d.
Recherche des granulations graisseuses {Cesari Demel
deux solutions
C
l
l
-).
Prparer les
Sudan
0,04 gr.
111
Alcool absolu
10
0.02
Brillankresylblau
Alcool absolu
10
Mlanger parties gales de ces deux solutions et taler comme pour

mthode a. Aprs dessiccation, dposer une goutte de sang, puis une
lamelle. Micheli " s'est servi de cette mthode pour le diagnostic diffla
entre la mningite purulente (50 80 p. 100 de leucocytes

et la mningite tuberculeuse (pas de leucocytes sudano-
rentiel
sudanophiles)
philes).
Mthode au rouge neutre d'Achard et Ranwnd

pour rechercher la
des leucocytes (dans les leucocytes morts, le noyau se colore
Verser dans un tube centrifuger 10 gouttes de rouge
en rouge brun).
neutre 1 p. 1000 dans la solution physiologique et 15 gouttes d'eau
sale cilrate 6 p. 1000. Dans ce mlange on laisse tomber, soit une
'*
e.
vitalit
1. Gaz. hebd. sci. md. de Bordeaux, 29 nov. 1908 et passim, 1909 et 1910.
Folia hspniatolorjica, Archiv,
Arch. maladies cur, vaisseaux, sang, III, 1910.
C. l. Soc. de bioloffie. LXX, p. 247, 1911.
X, 1910.
di
1901.
Torino, p. 180,
2. Giorn. R Accad. di med.
3.
Ibidem, p. 199, 1907.

C. R. Soc. de biologie,
Vitalit, rsistance et activit

LXVI, 8 mai 1909.
des globules Ijlancs dans les maladies. Semaine mdicale, 3 nov. 1909. On y trouvera diverses autres techniques que nous ne pouvons reproduire ici, faute de place.
Pour l'tude de activit' leucocytaire et du pouvoir leuco-actioant des liumeurs,
voir la Thse de Ch. Foix, Paris, 1911. o on trouvera des dtails complets sur
dans des ampoules injections, coupes en deux, on
la technique employer
mlange, d'une part, 10 gouttes de srum normal, 10 gouttes de srum artificiel
7
de sodium 6 gr., eau lOOOi, 1 goutte d'mulsion de
citrate
citrate (NaCl
gr. 5,
Levures de muguet (tues au formol puis laves) et 1 goutte do sang normal
d'autre part, les mmes lments, mais avec une goutte do sang
tmoin
tudier. Brasser. Porter 30 minutes l'tuve 37", centrifuger 10 minutes, taler
le culot en frottis pais, scher, hmolyser, colorer au Romanovsky. INumrer
4.
les
polynuclaires
i
-
et les
M. Langeron.
Levures incluses
et tablir le
Prcis do Microscopic.
rapport
^'
Levures
r-r.
polynuclaires
*0
METHODES SPECIALES
626
soit le culot de centrifugalion des srosits ou du

goutte de sang,
minutes 37 puis on examine
liquide cphalo-rachidien. On porte vingt
en chamhre humide. Oprer cet examen rapidement (o minutes), pour
que les leucocytes n'aient pas le temps de mourir.
Faire un frottis,
Recherche des leucocytes granulations iodophiles.
/.
scher et le laisser pendant quelques minutes dans un cylindre de

Borrel, au fond duquel on a mis quelques cristaux d'iode; puis examiner
l'immersion, en recherchant les leucocytes fjui renferment des granu-
le
brun acajou.
lations
Frottis desschs.
logie.
Prparer
iMlhode loiidamentale de riimato-
des Icnnes neuves et bien dgraisses par brossage

dans Fean de savon, laves Feau,
dans
conserves
(p.
l'alcool
90"
236) (ou simplement laves
Talcool ammoniacal), puis essuyes
soigneusement avec un linge non

une ou plusieurs lapelucheux
;
melles 22
32, aussi minces et

souples possible, les choisir bord
bien droit, sans chancrures ni saillies,
renforcer une des extrmits
par une liquette colle cheval sur

Prlever le sang
le pelil ct.
comme
il
est dit plus
haut
(p.
621).
Avoir soin d'employer, pour chaque

frottis, une goutte de sang bien
ronde
et
bien frache, non coagule.
le sang a tendance se
coaguler ou s'taler autour de la
plaie, bien essuyer la peau et faire
,,
SOUrdrC UUC UOUVelle gOUttC par UUC
Lorsque
a-d, les quatre temps

successifs de l'excutioa d'un frot-
Fiff. 241.
de sang;
le
prsenter
doit
aspect que
termin.
D'aprs Langeron in Archives de
pressiou
lgre.
^
,,
ij
,r
Confection deS frottlS.
parasitohMjie.
IcmpS
tis
e,
frottis
ClUq
n-
a. Dposer une gouttelette de

un centimtre environ de Textrmit d'une lame (fig. 241, ),
ou encore prendre cette gouttelette avec le tranchant du petit ct
sang
de
la
b.
lamelle.
Tenir la lamelle incline
avec
petit ct en contact
de sang
la
45'' (fig. 241, b) et mettre le

se trouve la goutte
lame, au point o

c.
Attendre que cette goutte

du petit ct.
ait
fus
(fig.
241,
c)
627
par capillarit
tout le loug
cl.
Tirer la lamelle (fig. 241, d), eu appuyaut lgreiiieut, de
faon taler le sang eu couche mince et uniforme. 11 y a deux
ou bien on tire la lamelle de gauche droite
faons de procder
:
lments sont entrans par capillarit et

par frottement, ou bien on pousse la lamelle (fig. 242) de droite
gauche, et les lments sont entrans seulement par capillarit.
Les deux procds sont bons. Le second a l'avantage de ne pas
(fig.
et alors les
241, d),
rouler
ni
comprimer
les
l-
ments, mais il permet moins facilement de rgler l'paisseur et

la marche des frottis. Ce qui est
essentiel, c'est
de
d'un seul coup
tirer la lamelle
et
sans s'arrter
ni se reprendre.
Excution d'au frottis

Fig. 242.
en poussant. D'aprs Daniels.
Excution d'un frottis

Fig. 243.
de sang avec une aiguille. D'aprs
Daniels.
Desscher rapidement le frottis, en agitant la lame ou en

rventant avec un carton, un ventail arabe, etc. Cette dessiccation rapide est indispensable pour la bonne conservation de la
e.
forme des globules

scher les
et
des parasites.
Conditions que doit remplir un

et
complet
1
Mince
les
frottis.
Il
doit tre
mince
globules doivent tre tals en une seule couche

ni former d'amas.
uns des autres, sans se recouvrir
Complet
la
jamais chauffer pour
et spars les
ne pas
/Ve
frottis.
la
goutte de sang doit tre tale en entier (donc

S'il en est autrement, la lamelle
prendre trop grosse!).
MTHODES SPCIALES
628
entrane, avec Texcs de sang, la plii]art des leiicocvles, des

hmaties parasites, des Pilaires, etc., d'o erreurs de diagnostic.
Le frottis doit prsenter l'aspect reprsent eu e (fig. 241), avec
une extrmit arrondie
et
des bords accessibles Tobservation
microscopique.
Autres procds.
En cas de besoin, on peut faire le frottis avec une
aiguille (fig. 243) ou avec une autre lame, dont on a cass un coin, de
telle sorte que la couche de sang n'alteigne pas le bord de la premire
lame. Autrement on ne peut examiner les parties latrales du frottis;

cet inconvnient serait trs grave, parce que c'est sur les bords qu'il y
a le plus de leucocytes et de Protozaires.
Proscrire absolument les procds o on emploie du papier (carte de visite,
papier cigarettes, etc.). Ces objets absorbent le plasma, retiennent les
leucocytes et les hmaties parasites et donnent des frottis dtestables.
Les divers taleurs mtalliques qui ont t proposs sont tous
dconseiller parce qu'ils donnent des frottis trop minces et trop larges.
1. Le sang s'tale mal par places
Insuccs.
lame malpropre ou
grasse.
2. Le frottis se termine par une ligne droite et paisse
goutte de
sang trop grosse ou lamelle trop appuye, ou encore on s'est repris
plusieurs fois et on a tir la lamelle en hsitant.
3. Le frottis se termine par de grandes dentelures ou de longs pro:
longements lamelle trop appuye ou bord irrgulier. Recommencer

en poussant la lamelle de droite gauche (fig. 242).
4. Le frottis est trou de petites perforations rondes
ce sont les
traces de trompes de Mouches. Cet accident est trs frquent dans les
:
pays chauds.
Frottis
pais.
Ce procd, d Ross^,
est destin permettre

de dcouvrir, clans le sang,
des parasites qui y existent
en
trs petit
nombre. Dposer
sur une lame plusieurs grosses gouttes de sang (fig. 244, a),
les runir en une seule nappe
avec une aiguille
(fig.
244, 6)
Sans fixer,
Giemsa dilu
et laisser scher.
colorer par le
goutte pour 1 cm>^ d'eau

laver trs doucement,
scher sans buvard sur un
(1
Fig. 244.
la
Excution
dun
dist.),
frottis
pais par
mthode de Ross. D'aprs Daniels.
gouttoir(voir p. 492). Ce pro-
cd est trs employ dans les

rsultats si mdiocres et si
alatoires que je n'en conseille pas l'emploi habituel. Les frottis de ce
genre un peu anciens se colorent trs mal. Voir p. 522, note 2, la modification de James.
pays anglais, mais je trouve
Frottis
1.
2.
humides
-.
En
qu'il
donne des
hmatologie, ce procd n'est utile que pour
Lancet,!, p. 86, 1903.

Thompson Yates Laboratories Reports, V, part.
Voir p. 482 les mthodes de Breinl et Moore, Rosenbusch, Minchin.
1,
1903.
629
des recherches cytologiques trs spciales. Faire de prfrence les frottis

sur lauielle. de manire les dposer face en dessous et les faire
flotter la surface du fixateur. Ne prendre (jue du sang riche en parasites, faire les frottis sur lamelle par la mthode ordinaire ou puiser et
taler la g-outle de sang avec une effilure de pipelte. Se hter pour que
la couche n'ait pas le temps de scher.
Tous les fixateurs conviennent. On colore ensuite l'hnialoxyline
Giemsa pour frottis humides.

on fait les frottis sur lame, les dposer face en dessous, sur deux
cales, dans une cuvette ou une bote de Ptri pleine de fixateur.
Mthode de Weidenreich i.
Elle consiste fixer le sang avant l'talement. Mettre dans un bocal bouchant Tmeri 5 cm d'acide osmique
I p. 100 avec 10 gouttes d'acide actique cristallisable. Exposer d'abord
la lame pendant deux minutes aux vapeurs osmiques, puis taler le sang
et, sans scher, exposer aux vapeurs pendant une minute. Scher, lixer
par l'alcool absolu pendant dix minutes. Laver pendant une minute
dans du permanganate de potassium trs dilu (2 gouttes de solution
1 p. 100 dans 50 cm-^ d'eau). Laver l'eau, puis scher au buvard.
Colorer au llomanovsky.
ferrique (p. 377) ou au
Si
'
Conservation des frottis desschs.
Ils
longtemps, condition de n.lre pas fixs.
trs
se
En
conservent
il
voyage,
ne
donc jamais fixer les frottis. On se contente de les emballer,

sparment ou par petits groupes, dans des feuilles de papier,
portant une indication ou un numro d'ordre. Ces paquets sont
faut
enferms
l'abri
daiis des botes
hermtiquement closes et conserves

froltis diminue au fur et
de l'humidit. La colorabilit des
mesure
qu'ils
vieillissent;
pourtant, avec les mthodes de

et surtout panchrome), on
Pappenheim (procd panoptique
peut, en prolongeant la coloration pendant une heure, obtenir des

rsultats suffisants.
La dcouverte des colorations panoColoration du sang -.

a
lendu
dans
la pratique courante, toutes les
inutiles,
ptiques
autres mthodes de coloration. Je conseille donc, en ce qui concerne le sang, de laisser de ct toutes les anciennes mthodes
(hmatine-osine,
triacide d'Ehrlich.
procds taient excellents autrefois, mais
bleu polychrome)
ces
ils doivent passer main:
le domaine histori(iue ou tre rservs des recherches

Avec les mlbodes panoptiques, on obtient d'un seul
coup et avec une seule prparation, la coloration lective de tous
les lments normaux et anormaux du sang, avec des nuances
tenant dans
spciales.
prcises et
\.
2.
constantes,
correspondant leurs affinits chroma-
l'olia luenialolofjica, III, p. 1-7, 1006.

la coloration des leucocytes dans les tissus, voir p. (.51.
Pour
METHODES SPECIALES
630
tiques.
On
colore en outre des lments (granulations azurophiles,
chromatine des Protozoaires, corps en demi-lune, hmaties granuleuses) que les autres mthodes ne peuvent
pas mettre en vidence.
Qu'il s'agisse
logique ou de
zoaires
(p.
du sang normal on pathorecherche des Hmato-
la
522), je conseille de colorer
les frottis, soit
par
la
mthode panoptique
de
Pappenheim (p. 405), soit par le panchrome de Pappenheim (p. 411).

Les parties acidophiles (hmaties, granulations osinophiles) sont rouges ou roses; les
noyaux des leucocytes et des hmaties, violet
plus ou moins fonc; les noyaux des Proto-
zoaires
et
les
granulations
azurophiles,
d'un
beau pourpre. Les granulations neutrophiles
Fig. 245.
Bocal pour fixer
frottis
les
absolu.
sont violettes, les granulations basophiles des

iabrocytes*, d'un bleu fonc presque noir;
les ponctuations basophiles des
hmaties,
bleu cobalt. Le protoplasme des lymphocytes
est d'un beau bleu ciel. Les hmatoblastes
par
l'alcool
sont violacs.
Procds particuliers.
Original.
On peut encore fixer
le frottis (cinq minutes dans l'alcool mthydans l'alcool absolu, fig. 245), laisser scher, puis
lique pur, dix minutes

colorer dans le Giemsa, dilu, avec les prcautions ordinaires, 1 goutte
pour 1 cm'^ d'eau distille.
Pour la coloration spcifique des granulations neutrophiles, fixer par
mettre un cristal d'ure (fondant 131) sur une extrmit
la chaleur
de la lame, poser la lame sur la platine chauffante (fig. 147), surveiller
et retirer ds que le cristal commence fondre. Aprs refroidissement,
colorer quinze minutes au moins par le triacide d'Ehrlich, laver trs
:
rapidement l'eau, scher.

Pour la coloration spcifique des granulations acidophiles, oprer de
mme avec le triacide d'Ehrlich spcial pour ces granulations (osineaurantia-induline).
Hmatoblastes.
les
ouvrages,
mthode de
et le
Contrairement
hmatoblastes
la
1.
chez
ce qui est dit
trs
faciles
dans certains
colorer par la
Romanovsky et notamment par la mthode panoptique

panchrome de Pappenheim. Il faut donc les tudier sur des
prparations colores
de
sont
ils
sont trs visibles dans toute l'tendue
prparation et pas seulement dans sa portion initiale
Les labrocytcs sont assez abondants,

le Cobaye et le Hrisson, o ils sont
l'tat
normal, chez
le
trs caractristiques.
Lapin
comme
et surtout
631
on l'a dit quelquefois loit. Ils sont lgrement azuiopliiles el,

dans les prparations fixes, ils se colorent par Tazur de mthylne
(orthochromaliquemenl), par Tosinate d'azur (mlachromaliquement) et en partie par le bleu de crsyl brillant. En outre, Tazur
et le bleu de crsyl, donnent avec eux des colorations vitales.
On
peut tudier les hmatoblastes
soit
dans des
frottis
ordi-
naires de sang d'un Mammifre quelconque, soit par le procd

Tencre de Cliine (p. 699;, qui permet d'en faire facilement une
numration
technique
Ayuaud
Le
'.
exacte par
assez
la
est
plus prcise
fait capital,
rapport aux -hmaties; mais

due aux recherches d'Achard
dmontr par ces auteurs,
hmatoblastes disparaissent au contact des tissus; il est

pensable de prlever le sang par ponc/ion veineuse.
la
et
que les
donc indis-
est
Prlvement.
Seringue en verre de 5 cm^, avec aiguille d'acier de
mm. de longueur et de 1 mm. 7 de diamtre. Aspirer 2 cm^ de
citrate de sodium 10 p. 100 pralablement strilis. Dsinfecter la
peau avec un liquide aqueux (pour viter la vaso-constriction). Ponctionner rapidement la veine, pousser un peu de citrate, puis aspirer.
Verser le sang- dans un tube paraffin ou dans le fixateur.
Laisser sdimenter, puis prlever du
Examen l'tat frais.
plasma et examiner en goutte pendante, sous lamelle vaseline. Les
hmatoblastes apparaissent sous forme de petits fuseaux trs ples.
Frottis desschs faits avec le sang citrate. Le RomaColoration.
2
novsky russit seu/. On peut aussi fixer le sang en masse avant de l'taler.
hmaties
Elle est destine a tablir le rapport
Numrations.
^hmatoblastes
15
.,,,,,.,
= ^.
est
Il
comme
indispensable de recueillir
sang par ponction veineuse
seringue, en laissant
plus haut. Retirer la
un mlangeur Potain destin
numrer
de sang au liquide de dilution suivant

Citrate de
le
l'aiguille pour
les hmaties. Ajouter
sodium
Formol 40
p. 100
un peu
10 gr.
5
Q.
distille
remplir
Chlorure de sodium
Eau
s.
pour 500 cm.

10 cm.
et de numration
1. Aynaud. Le globulhi de l'Homme. Mthodes d'observation
52 avril 1911; Annales de V Institut
applicables en clinique. Progrs mOical,
Pasteur, XXV. p. 56-78, 1911.
100 avec
2. Par exemple dans un mlange de 9 cm^ d'acide osmique 5 p.
5 gouttes de sang dans
1 cm' de citrate de sodium 10 p. lUO. On fait tomber
colorer au
10 cm- de fixateur. Centrifuger deux fois, taler le second culot et
Romanovsky.
de
3. Aynaud, Mthode de numration des globulius de l'Homme, C. R. Soc.
Brodie and Russel, The enumeration of blood platelets,
biolorje., 18 juin 1910.
Journ. of pliysiolof/ij, XXI. 1807. Helber, Zhlung der Blutplattchen, Dtsch.
Archu:
f.
klin.
Med.,
LXXXl,
1905.
MTHODES SPECIALES
632
de manire avoir un liquide ros. Dans les 16 grands carrs de la

cellule de Thoma (fig. 247), il doit y avoir 1 200-1 500 hmaties. Numrer
500 diamtres, en diaphragmaal tortement. Compter hmaties et hmaIT
toblastes dans les 10 grands carrs et taijlir
le
rapport
j-.
Pour connatre
nombre d'hmatoblastes par mm^, diviser le nombre d'hmaties par

A l'tat normal, le chiflre moyen est de 216 000.
Rticulum fibrineux. A Ttude des hmatoblastes se rattache
celle du rticulum hbrineux, mthode trs simple, dont Hayem et ses
le
ce rapport.
lves ont su tirer des dductions intressantes.

Dposer une goutte de sang sur une lame bien propre, ou
mieux sur
Ranvier (Mg. 142). l'ifiuer le doigt du malade de manire

avoir une grosse goutte, dans laquelle on puise avec une fine pipette
ou sur laquelle on pose doucement le centre de la lame. Recouvrir trs
dlicatement d'une lamelle et fermer la vaseline, sans dplacer la
lamelle. Examiner 500 diamtres le rticulum fibrineux (jui se forme
dans les lacs situs entre les piles de globules. Normalement ce rticulum est pres([ue invisible. On peut en mme temps apprcier grossirement le noml)re des leucocytes.
une
cellule de
Causes d'erreur dans l'examen des lames de sang.

Balfour
donn une excellente revue de
ces causes d'erreurs (avec
figures en couleur). Il les di%'^se en deux groupes, suivant qu'elles sont

d'origine externe ou ([u'elles i^roviennent du sang lui-mme.
r Corps trangers d'origine externe.
Poils d'Insectes, filaments
de coton, simulant des Microlilaires. Cellules de Levures, conidies
cloisonnes, spores diverses. Pour les animaux blesss par coups de

feu, se mfier des parasites intestinaux et des spermatozodes qui
peuvent passer dans le sang. Examiner les parties de la lame non
couvertes de sang, pour voir si on n'y trouve pas les mmes corps; se
rappeler que les parasites du sang sont rarement isols. Ne pas oublier
que le buvard, avec leijuel on sche les prparations, peut transporter
d'une lame l'autre hmaties et parasites. Les dbutants se mfieront
des prcipits colors.
2 Corps trangers d'origine interne.
Dans le sang frais hmaties
crneles, vacuoles (quel([uefois trs trompeuses), granulations issues
des leucocytes, hmaties altres par le chaulage (intentionnel ou
accidentel),
hmatoblastes, hmoconies,
corps
flagelliformes indter-
mins.
Dans les prparations colores

hmatoblastes (principale cause
d'erreur, on les reconnat leur structure rticule; ceux des Sauropsids (cellules en fuseau, Spindelzellen) sont encore plus trompeurs).
:
Altrations globulaires (corps en pessaire, en demi-lune-,
anneaux de
1. Balfour, Fallacies and

puzzles in blood examination. Fourlh Report of the
Wellcome tropical rescarch Laboratories at Kliartiioum, vol. A. Mdical, p. 109-
125, 1911.
2.
1911.
M. Langeron, Hmaties en demi-lune,
C. H. Soc. de biologie,
Association franaise pour V avancement

'
p. 588-596, 1911.
des
sciences,
LXX,
Conr/rs
p. 43-1,
de Dijon.
633
Cabot, taches marginales azurophiles, qu'il ne faut pas confondre avec

les Anapiasina, restes nuclaires ou centrosomes, etc.)- Altrations globulaires artificielles dues au frottis, aux fautes de technique, etc. Altrail faut aussi
reconnatre
tions leucocytaires et dbris leucocytaires
dans les leucocytes les plasmosomes de Ferrata (petits et mtachroma(frquents chez le Cobaye, volumineux
ti(iues) et les corps de Kurloff
:
'
et azurophiles).
d Hmatozoaires nouveaux ou
Brumpt, 1910. Corps de Hfer, corps
douteux.
Sergentella Iiominis
de Howell et Horrocks, retrouvs
par Balfour2 chez l'Homme (extra ou endoglobulaires, forms d'une
masse centrale colornble en bleu, entoure d'une capsule rose).
A ces causes d'erreur, on peut ajouter celles qui ont t signales
rcemment par Schilling-Torgau 3. Je ne suivrai pas cet auteur dans ses
considrations hypothtiques sur la structure des hmaties. Je signale

seulement les faux parasites (reproduits exprimentalement chez le
Chat et le Cobaye) ({ui apparaissent, au cours des anmies, sous forme
d'une aire bleue plus ou moins annulaire, avec un ou plusieurs points
rouges.
les formes persisSchilling- considre comme des i)seudo-parasiles
tantes du paludisme (Dauerformen) de Plehn; les parasites du typhus
:
exanthmalique de Krouipecher-Goldzicher et Angyom; VAnaplasma

marginale et tous les corpuscules marginaux; les parasites de la fivre
jaune de Seidelin. Je reproduis ces indications sous toutes rserves et
seulement pour recommander aux observateurs la plus grande prudence.
N U M R AT
L'appareil de numralieu le plus rpandu est celui de Thomamais le meilleur, mon avis, est celui de Malassez. L'ap-
Zeiss,
d'Hayem
pareil
pratique que
A.
Cet
pour
les
humide
un
excellent instrument,
mais moins
prcdents; faute de place je renonce le dcrire.
Appareil numration de
appareil
les
est aussi
comprend deux
pipettes
Thoma.
pour
dilution,
Tune
hmaties, Tautre pour les leucocytes, et une chambre

gradue, avec des lamelles spciales faces absolument
planes.
1.
Huffman, The Kurloff-body, a spurious parasite. Parasitologij, IV,
p. 457-462,
1912.
2.
3.
Loco
XXII.
Schilling-Torgau, Ueber die Bedeutung neuercr hamatologischer Befunde
citaio, p. 332-365, pi.
und Meihoden
1,
p. 87-99,
Centralbl.
f.
die Tropenkranktieiten, Bfihefle z. Archiv Schiffs. Trop. Hyg-,

1912.
Kr)rmoczi. Protozocnahnliche Gebilde des Blutes,
Baktt'riologie, Orig., LXI, p. 366-375, 1911.
pi.
fiir
VU,
METHODES SPECIALES
634
La pipette destine la numralion des globules rouges {i\g. 246 et 248)

est la plus troite ; el le est marque, au-dessus de la boule, du chiffre 101 ,
ce qui veut dire que
;M ffimpwig''îa'f:frawpr-K'?raR>mî^^^^
boule correspond
\g^
100 parties et la tige

une partie, et que la
dilulion normale esta

1
La
p. 100.
tige porte,
en outre, d'autres divisions permettant des

dilutions
faibles
plus
1
(lp.200,
p. 300, etc.).
La pipette des
cocytes est la
large; elle est
que du
a-.mrigoasr<igimT.Tmmffii'.m:!KiifiTOmimiCTrrgra^^^
-216.
Fig.
dilution obtenue avec cette pipette
Chambre gradue ^
est
mar-
chiffre 11, ([ui
reprsente 10 parties
pour la boule et une
Compte-globules de Tlioma.
donc
Examiner d'abord
la
pour
partie
la
leu-
plus
tige;
10.
p.
la graduation avec un
grossissement d'environ
200 diamtres (diaphrag-
mer).
Des
(fig. 247),
fines
stries
qui se coupent
angle droit, forment un

grand carr de mm. de
ct, divis en 400 petits
1
carrs
:::4i:::^::^::^:
mm.
ont 1/20 de
qui
de
petit carr a
Chaque
une surface
de 1/400 de
mm.
ct.
carr
profondeur de la cellule est de 1/10 de mm.

Le volume du liquide, au
niveau de chaque carr,
est donc de 1/400x1/10
=: 1/4000 de mms.
la
1
I
Il JZ
ZL
Soit 10 le
nombre
d'h-
maties trouv dans un

carr, il y a donc 10 hmaRseau de la chambre gradue de ties dans 1/4000 de mm-^
Fig. 247.
Dans 1 mm3, il y aura
'^^.<^^^4 000= 40 000 h10
100
maties. Comme le sang a t dilu au centime, il y aura 40000
=: 4 000 000 hmaties par mm*.
Outre l'ancienne chambre de Thoma, on emploie beaucoup maintenant la

Biirkcr, qui possde deux champs quadrills, spars par une rigole,
et dans laquelle la lamelle est mise en place avant le remplissage, ce qui
1.
chambre de
beaucoup cette opration. La rpartition se fait par capillarit et est

l'influence de la pression atmosphrique est nulle, car la cellule reste
ouverte. Mnch. med. Woch., LU, p. 91-2, 1905.
facilite
trs gale
635
Pour numrer, on compte les globules dans un grand nombre de

carrs, puis on divise le nombre de globules compts par le nombre des
carrs. La formule employer, pour avoir le nombre d'Iimaties au
mm'^, est
la
4 000
suivante
X chiffre de la dilution x nombre de globules
nombre de
compts
carrs dans lesquels on a compt les globules.
Toutes les cinq ranges de carrs (fig. 247),

Lignes d'orientation.
ceux-ci sont diviss en deux par une ligne destine empcher l'il de
s'garer, mais dont on ne tient pas compte pour la numration. Ces
lignes d'orientation dlimitent seulement des grands carrs, renfermant
chacun \6 petits carrs.

Nettoyage des pipettes.
Il est parfait,
lorsque la boule de verre
n'adhre pas la paroi. 11 faut donc, inimdiatcrnent aprs la numraLion
1. Adapter le caouthouc la pointe et souffler le reste du sang dilu.
2. Aspirer de l'acide actique tendu.
3. Laver l'eau distille plusieurs reprises.
4. Laver l'alcool absolu deux ou trois fois.
5. Laver l'ther deux ou trois fois en le laissant couler, sans
:
souffler.
Laisser scher ou insuffler de l'air chaud (avec une double poire).

on fait des numrations successives, on se contente, entre chacune,
de laver la pipette l'eau distille (2 ou 3 fois) puis au liquide de
0.
Si
dilution
(2 fois).
Ne jamais
laisser scher le sang dans la pipette; si cet accident se

produisait, nettoyer le tube capillaire avec un crin de Cheval ou aspirer
un peu de solution de potasse caustique 10 p. 100 et laver ensuite
comme ci-dessus, aprs dissolution du caillot, ou mieux dissoudre ce
dernier par digestion artificielle (p. 260), 37, avec une solulion de
gr. 1 de pepsine pour 100 cm'^ d'acide ehlorhydrique 1 p. 100.
Laver les chambres gradues l'eau distille puis l'alcool.
Numration des globules rouges.

on peut prendre de la solution physioLiquide de dilution
mais
le
meilleur
liquide est celui de Marcano ^
logique,
:
Sulfate de
Eau
Formol
1.
Piquer
sodium
5 gr.
100
distille
40 p.
100
cm^
du doigt, prs de Tongle, assez profons'coule

le sang
librement. Ne pas presser pour
la face dorsale
dment pour que

viter le mlange avec
la
lymphe
(p.
621).
1. Benario {Dtsche. med. Woch., p.

57-2, 1894), Marcano (Arch. de md. expr.,
XI, p. 434, 1899), puis Armand-Delille et Launoy (Annales Inst. Pasteur. XXV,
hmaties. Cette
p. '22-2, 1911) ont montr lactiou stabilisante du formol sur les
action est telle, que les globules, lavs et stabiliss, fonctionnent aussi bien que
les hmaties fraches pour la dviation du complment.
METHODES SPECIALES
636
2.
Poser
la
pointe de la pipette dans
la
doucement, jusqu'au trait 1 (dilution

anmique et jusqu'au trait 0,5 (dilution
normal. Eviter
les bulles d'air; s'il
y en
a,
gontle de sang, aspirer
p. 100)
1 p. 200)
pour
le
sang
pour
le
sang
recommencer
l'opration.
3. Avec du papier Joseph, essuyer le sang autour de la pointe et

enlever Texcs de sang, s'il yen a, dans le tube capillaire, de telle
sorte que l'af fleure ment se fasse exactement au niveau du trait
choisi.
4. Aspirer rapidement le liquide de dilution jusqu'au Irait 101
exactement. Enlever doucement le caoutchouc. Il ne doit pas y
Fig. 218.
Compte globules de Thoma-Zeiss. E, perle de verre
la pipette; G, tube do caoutchouc; M, embout d'aspiration;
chambre gradue; o, lame; XV, pourtour de la cellule:

gradue proprement dite; D, lamelle; a, ensemble de
c, un des grands carrs du rseau quadrill.
avoir de bulles d'air dans le rservoir, sinon
il
r.
la
S, extrmit
de
coupe de
la
6,
rigole; B,
chambre
chambre gradue;
faut
recommencer
l'opration.
5.
Tenir
le
jtouce et l'index sur les
deux ouvertures de
la
secouer quelques secondes, pour effectuer le mlange

de sang et de liquide de dilution, au moyen de la perle de verre.
6. Remettre le caoutchouc. Cliasser doucement le contenu de
pipette et
la tige (2 gouttes),
la cellule
puis dposer une trs petite goutte au centre de
gradue.
7. Soufller sur la lamelle, appliquer
un des cts sur
la
lame
et
soutenant avec une pince ou

une aiguille et appuyer lgrement'. Le disque central de la
abaisser l'autre rapidement en
le
1. Avec les nouvelles chambres de

Brker, la lamelle est place d'avance et
on remplit la cellule par les deux cts, sans aucune difficult.
637
compltement recouvert parla goutte de sang;

il
ne doit pas y avoir de bulles d'air et le liquide ne doit pas
passer entre la lame et la lamelle, entre lesquelles on doit voir les
cellule doit tre
anneaux de Newton. Les globules doivent
tre
uniformment
distribus dans les carrs. Si ces conditions ne sont pas exactement ralises, laver et scher la cellule et remettre une nouvelle
goutte.
Attendre que
8.
hmaties dans
le
globules soient dposs, puis compter les

nombre possible de petits carrs * et
les
plus grand
appliquer la formule donne plus haut, ou, plus simplement,

avec la dilution 1 p. 100, compter les hmaties dans cinq des
grands carrs, limits par les lignes d'orientation, et multiplier

par 5 000 pour trouver le nombre d'hmaties au millimtre cube,
car les cinq carrs reprsentent I/o 000" de
Pour compter,
mm\
faut suivre une marche mthodique.

Employer un grossissement de 200 400 diamtres et diaphragmer
il
assez fortement le condensateur.
Dans chaque grand
carr,
compter
par tranches horizontales ou verticales

ne
carr,
compter les hmaties qui sont cheval
pour chaque petit
sur les lignes de sparation que sur deux cts, par exemple sur
en suivant
la
ligne
les petits carrs,
du haut
et
De cette manire on
mmes lments-.
sur celle de gauche.
sr de ne pas compter deux fois les
est
Numration des leucocytes.

Liquide de dilution acide actique 0,5 p. 100, additionn
de cinq gouttes de solution 1 p. 100 de violet pentamthyl
(5B) ^ Ce liquide dtruit les hmaties et ne laisse subsister que
:
les leucocytes colors
en
violet.
liquide de dilution dans un verre de montre.

2. Piquer profondment, pour obtenir une grosse goutte de
aspirer jusqu'au trait 1, en ayant soin de tenir la pipette
sang
1.
Verser
le
1. Avec un sang normal, il y a environ 10 12 hmaties par petit carr et

60 leucocytes dans les 400 petits carrs.
2. Dans les laboratoires o on fait habituellement de la microphotographie, on
peut photographier les champs do numration, soit sur plaque ngative, soit,
beaucoup plus simplement, sur papier ngatif au glatino-bromure. On peut faire
ensuite loisir la numration, en pointant chaque hmatie. On est sr ainsi de
ne pas commettre d'erreur.

3.
En cas d'osinophilic intense, on peut faire la numration directe des
osinophiles en remplaant, dans le liquide de dilution, le violet de mthyle par
l'osine, dont on fait une solution 1 p. 100. A. Dunger {Miinch. mcd. Woch., LVII,
p. 1942, 1910)
dilue
p.
10
avec
10; eau distille, 80. Il

cellule de Biirker. Normalement,
actone,
;
osine 1 p. 100, 10:
grossissement, dans une
y a de 100 200 osinophiles par mm'.
le
liquide suivant
numre un
il
faible
MTHODES SPCIALES
638
horizonlale car
sang s'chappe trs facilement.
le
boucher au coton
la
Il
est
Lon de
grosse extrmit, pour viter plus srement
cet accident.
3.
Essuyer
4.
Fermer
la pipette et affleurer
la
pointe avec
le
5.
et
Aspirer lgrement
commenc aspirer. Tenir
jusqu'au
Le
trait
exactement au
doigt et
ne retirer
la
chiffre 1.
plonger dans
le
liquide.
doigt qu'aprs avoir
horizonlale et remplir
le
pipette
11.
des oprations s'effectue comme pour les hmaties

du petit nombre des lments, il faut les compter
reste
mais, cause
Fig.
219.
Chambre
compresseur
de Malassez.
gradue
dans toute l'tendue de
la
chambre gradue,
400
carrs. Lorsqu'on a
dilu au 1/10,
par
100
leucocytes
le
chiffre
correspond
1/100
permette d'avoir dans
ig.
248,
h pipette,
Thoma-Zeiss;
au 400'\
On
mm
de
le
trouv,
c'est--dire dans les

suffit
car
de multiplier
chaque
carr
Employer un grossissement qui

champ au moins un des grands carrs
'\
c).
B.
1.
de
il
du compte-globules
Compte-globules
dite
elle
obtient le
de Malassez.
mlangeur de Potain, est analogue celle de

permet des dilutions au 100'^ ', au 200% au 300%
mlange au
capillaire jusqu' la division
1.
en remplissant deux fois de suite
le
tube
639
La chambre gradue {iig. 249) est enchsse dans une plaque mtaltrois vis qui font saillie et sur lesquelles
lique. L'paisseur est rgle par
vient s'appuyer la lamelle; la saillie est de 1/5 de mm. Cette disposide la chambre en verre de
permet une construction beaucoup plus
la lamelle repose seulement sur
prcise, mais encore, par le fait que
trois pointes, il y a moins de danger de voir un corps tranger s'interde la cellule et causer de grosses
poser, venir augmenter l'paisseur
tion est,
mon
avis, trs suprieure celle
Thoma. Non seulement
elle
avec les trois pointes est

la mise en place de la
assur automatiquement par le compresseur
lamelle se produit d'une faon parfaite et sans danger de bulles d'air,
comme cela arrive trop souvent avec la cellule de Thoma. Ce compresseur assure la cellule de Malassez une grosse supriorit
grce lui,
la prparation russit coup sr
et les chances d'erreur sont bien
erreurs. Enlin, le contact exact de la lamelle
diminues.
Le
quadrillage est
un peu
diff-
rent de celui de Thoma-Zeiss. Les

champs de numration sont des
rectangles (fig. 2o0j composs de

20 petits carrs chaque rectangle
ayant un 1/20 de mm. carr de sur:
et 1/5 de mm. d'paisseur,

correspond un centime de mm^.
Il y a 10 ranges de 10
rectangles,
soit 100 rectangles, dont l'ensemble
correspond 1 mms, ce qui sim-
face
plifie
normment
les calculs.
Parmi ces rectangles,
les uns ne
Fig. -250.
Aspect d'un rectangle de
la cliambre
sont pas subdiviss, les autres sont
gradue de Malassez.
^^ng normal, dilution au 400.
traverss par des lignes horizontaies ou verticales, d'autres enfin
sont subdiviss en 20 petits carrs. C'est dans ces derniers seuls qu'on
compte
les
globules rouges.
Prise de sang.
Oprer comme il est dit plus haut.
Diluer au 400' (division 4) pour le sang normal et au 100'^ (division 1) pour les sangs anmiques.
1.
2.
Mise en prparation.
Fixer la lamelle (n'employer que

rondes spciales faces planes) au cercle du compresseur, en mouillant trs lgrement ce dernier. Rabattre, pour
s'assurer que la lamelle touche bien les trois vis (on ne doit
les lamelles
entendre aucun bruit en
la
avec
le
manche
compresseur portant
la
lamelle
frappant lgrement
d'une aiguille). Relever 45
le
249). Dposer une goutte de mlange sur le disque gradu

et rabattre doucement le
compresseur. Il ne doit pas y avoir de
(fig.
bulles d'air sur la partie gradue.

3.
Numration.
Attendre que
les
globules soient dposs,
METHODES SPECIALES
640
puis compter les hinalies dans les reclangles diviss en petits

carrs, en suivant la marche indique p. 633.
Pour
dilution au 100'', compter les globules qui se trouvent
la
dans un rectangle ^ Si
la
chambre
au 1/5 de mm., ce rec-
est
1/100 de mm^ de dilution au centime, c'esttangle correspond

10 000*^ de mm^ Il suffit donc de multiplier par 10000
-dire 1
obtenu (ajouter quatre zros). Pour plus d'exactitude,
chiffre
le
compter dans plusieurs reclangles
Pour
et
prendre
le
chiffre
moyen.
compter, additionner les globules qui

se trouvent dans 2, 3, 4 rectangles, suivant que la dilution est au
200% au 300% au 400- ajouter quatre zros au chiffre obtenu.
les autres dilutions
Pour plus
d'exactitude, compter
deux
fois
Faire
la
moyenne.
Numration des leucocytes.
prendre
et
se
les
un
mm%
suffit
il
Pour bien voir

du point normal;
trs
sol.
les
p.
L'hiifatocrite
hmaties par
se
dilution,
mettre au point un peu au-dessus
On
peut aussi
le
p.
100
On
peut aussi
liquide actique indiqu p. 634.
violet
penlamthyl.
Hmatocrite.
de Dalnnd est un appareil qui permet d'valuer, par

sans dilution, le chitrre approximatif des timaties.
et
Fig. 251.
Il
la
mm\
de petits points brillants.
100 de
G.
centrifugation
rec-
correspond
en ajoutant au liquide de Marcano 5 gouttes
aq.
hmolyser
surface
lOO*"
les leucocytes, trs rfringents, apparaissent alors
comme
nettement
les colorer,
de
les leucocytes,
cent
les
de multiplier par 100, chiffre de
nombre de leucocytes au
le
un mlange au
trouvent dans
compter
globules qui
tangles subdiviss ou non. Gomme cette
pour avoir
plus de rectangles et
Hmatocrite do Daland (modle do Krauss).
compose d'une armature mtalliiiue
(lig.
251),
qui se fixe sur
1. Avec le sang normal, il

y a environ 25 hcmatios par petit carr avec la
dilution au 100" et 6 hmaties avec la dilution au 100^
641
l'arbre du centrifugeur 1, la place du porte-tubes. A celte armature, on

adapte deux tubes de verre capillaires de 50 mm. de longueur, diviss
mm. 5 de longueur.
en 100 parties de
Pour faire la prise de sang, on pique le doigt comme d'habitude, on
tient le tube horizontalement et on en plonge la pointe dans la goutte
de sang. Gnralement, le remplissage se fait tout seul mais on peut
l'aider par une lgre aspiration avec un tube de caoutchouc ou avec la
;
On remplit rapidement
deux tubes, et on les fixe

que les rondelles de
caoutchouc qui appuient sur les extrmits des tubes soient en bon
tat, surtout du ct extrieur, sinon le sang serait projet au dehors.
Centrifuger pendant deux minutes, la vitesse de 77 tours de manivelle
la minute. Lire la loupe (fig. 2o2) le chiffre auquel s'arrte la trane
pipette spciale.
dans l'armature,
zro en dehors;
le
il
les
est essentiel
et multiplier par 100 000 (ajouter cinq zros).

ration, le tube doit rester entirement rempli par le
a eu une fuite et il faut recommencer.
rouge
la
tin
de l'op-
srum, sinon
il
Les rsultats obtenus sont trs suffisamment exacts et toujours comparables, condition que la longueur et le diamtre des tubes soient
Fig.
-202.
Lecture de Ihmatocrite aprs centrifugation.
la mme vitesse
toujours les mmes et (lue la manivelle soit tourne
dans des temps gaux. 11 faut s'astreindre minutieusement oprer
toujours exactement dans les mmes conditions.
l'hmatocrite, les plonger dans l'eau

crin de Cheval, l'extrmit duquel est
de coton. Scher en insuftlant de Pair avec une pompe de
Pour nettoyer
les
distille et y faire
attach un
bicyclette
fil
tubes
passer
de
un
ou une double poire.
Thoriquement,
Valeur des procds de numration.

des rsultats
compte-globules donnent tous
les
trs prcis. Pratique-
ment, beaucoup de numrations sont inexactes, parce qu'on nglige
Pour russir, il faut suivre scruquelque prcaution essentielle.

les indications que nous venons de donner et bien
puleusement
s'exercer avec du sang normal, avant de numrer du sang pathologique.
les
Ne
rsultats
ne signifie rien et que

pas oublier qu\in chiffre isol
ne dmontrent quelque chose que lorsqu'ils sont
constante est moins nuisible que

comparables. Une lgre erreur
des erreurs variables qui empchent toute comparaison.
trs suprieurs
dernier
ce
peut rendre de grands
rhmatocrite; pratiquement,
Thoriquement,
les
compte-globules sont
un ccnlrifugeur deux vitesses,

1. Cet appareil ue peut fonctionner qu'avec
dont la seconde peut fournir 12 000 tours la minute (fig. 253).
M. L.vxGEROx.
''t
METHODES SPECIALES
642
services, cause de
la
rapidit de
la
iiimiralion et parce
qu'il
donne une apprciation suffisamment approche. Mais, avec

instrument,
encore
qu'avec
les
compte-globules,
s'astreindre oprer toujours scrupuleusement dans les
plus
il
cet
faut
mmes
conditions, pour que les rsultais soient comparables. En outre,

les indications de ihmatocrite se trouvent fausses, lorsqu'il y a
des variations dans les dimensions des hmaties, au cours de certains tals pathologiques. On peut cependant tirer de ce fait des
conclusions trs prcises et trs utiles, puisque, dans ce cas,

Fcart entre Thmatimtre et le compte-globules est proportionnel
aux variations de volume des hmaties. L'hmalocrite donne alors
leur diamtre
que
la
moyen
plus rapidement et presque aussi srement
globulimtrie.
Numration des liquides pauvres en lments,
tels que le
employer des cellules grande capade Fuchs-Rosenthal (3 mm^) ou de Nageotte
liquide cphalo-rachidien
cit telles
que
celles
mm^) et numrer le liquide tel quel, non dilu.

La numration nous renseigne
Formule leucocytaire.
(10
hmaties et des leucocytes et sur le

nombres
on peut mme, comme nous l'avons
deux
ces
de
rapport
vu, numrer les osinophiles. Mais, pour connatre la proportion
de chaque varit de leucocytes, il faut faire la formule leucocytaire qui donne le pourcentage de chacune de ces varits.
sur
chiffre absolu des
le
Comme
la
numration, l'tablissement de
la
formule leucocy-
une opration trs simple en apparence, mais qui est

de nombreuses causes d'erreur, de telle sorte que les
sujette
sont rarement dignes de confiance.
obtenus
rsultats
L'tablissement d'une bonne formule suppose d'abord des frottis
taire est
Il faut
que la goutte de sang
irrprochables et surtout complets.
soit sortie du doigt sans pression, qu'elle soit petite et tale en
entier.
On comprend que
faits
si
une partie de
la
goutte a t entrane
lame par la lamelle, la formule est fausse. Les frottis

avec une carte de visite ou un papier donnent fatalement des
hors de
la
formules leucocytaires entaches d'erreur, car le papier retient

une partie des lments. Le frottis doit tre color par une
mthode panoptiq lie (Pappenheim ou panchrome) (pii permet de
reconnatre, sur
une seule prparation, toutes
les varits
de leu-
cocvtes.
Pour tablir la formule leucocytaire, on explore donc mthodi chariot, de prfrence sur
quement un frottis, avec la platine
EXAMEiN DES LIQUIDES ORGANIQUES

dans
les bords et vers rextrmit,
uniformment
rjjartis.
les
643
zones o les leucocytes sont
Rejeter l'extrmit o
les
leucocytes
sont lasss les uns contre les autres et o on ne trouve
que
les
grandes formes. Prparer une feuille de papier divise en colonnes,

suivant les types leucocytaires cju'on admets Chaque leucocyte
rencontr est marqu par un trait, dans la colonne laquelle il
correspond. On en pointe le plus grand nombre possible, en
diverses zones du frottis
on s'arrange pour en avoir au moins 100

trs simple donne le pourcen-
ou un multiple de 100 et un calcul

tage de chaque varit.
Mathis ont propos un procd rapide trs commode -. On

part, dans une bote, 500 perles de verre (ou pois,
haricots, billes, etc.), et, d'autre part, autant de botes vides que de types
leucocytaires. L'oprateur nomme haute voix les leucocytes au fur et
mesure qu'il les rencontre et un aide met chaque fois une perle dans
la bote correspondante. Quand les 500 perles sont puises, on compte
les perles de chaque bote, sauf dans celle qui renferme le plus de
perles. On tablit le pourcentage en divisant par 5 et on a le chiffre des
Seguin
prpare,
et
dune
polynuclaires par soustraction.

Schiiffner ^ numre et fait
opration, en diluant avec
la
formule leucocytaire en
une seule
NaCl
4 gr.
3
Acide phnique
Formol
Borax
Eau
0,tO
000
1
distille
cm3 de
cette solution, on ajoute 1 2 gouttes de bleu polychrome.

prend simplement du Giemsa dilu avec du formol 5 p. 100
goutte pour 1 cm-\).
10
Stitt''-
(1
La formule des neatrophiles cVaprs Arneth se pratique de la mme

manire. On peut employer simplement une lame colore par la
mthode de Sabrazs.
CYTODIAGNOSTIC
n'y a pas proprement parler de technique spciale pour le
cytodiagnostic. Les procds de fixation et de coloration sont
Il
les
mmes que pour
le
sang.
On
tale
le
liquide examiner,
1. Ces types varient avec les coles; il m'est impossible de traiter

question, qui sort du domaine de la teclinique.
2. Ann. d'Injg. et de md. coloniales, XIII, p. 338, 1910.
3. Mnch. med. Woch., n 27, 1911.
4,
Philippine Journ. of
se.
Med., V,
p. 233, 1910.
ici
cette
'
644
directement
Irifngation
Le liquide
Irice.
Il
(purulent on sro-pnrnlent), aprs censrenx ou sro-fibrineux.
est pais
s'il
s'il
MTHODES SPCIALES
est
est
rcolt
faut en avoir
suffire
la
|onctioii
i)ar
15
20
cm\
exploratrice ou
mais
rigueur, notamment lorsqu'il
s'agit
vacua-
2 cm^ peuvent
d'une ruption
vsico-buUeuse ou du liquide d'un vsicatoire. Ce dernier liquide

ne devra pas tre prlev aprs plus de douze heures, car la
formule cytologique change rapidement.

Le procd de choix est la centrifugation immdiate^ avant
que la coagulation ne se soit produite. On est sr d'avoir ainsi tous
lments cytologiques. Pour se dbarrasser des hmaties trop
les
abondantes, hmolyser par l'alcool au tiers (Loeper et Louste) qui

conserve les autres lments.
La dfibrination immdiate
se fait en versant le liquide dans

garni de billes de verre et strilis; on agite
jusqu' coagulation complte de la fibrine (cinq minutes environ).
Cette opration ne change pas, pratiquement, la composition du
un
petit
ballon
La d/ibrination tardive se pratique de mme

on
verse liquide et coagulum dans le flacon garni de billes et on
:
liquide.
pendant dix minutes, pour dissocier le coagulum.

Dcanter doucement le liquide, centrifuger fond (jusqu' ce
agite
ne contienne plus d'lments visibles au microdcanter

compltement en retournant le tube (Widal), taler
scope),
le culot ou l'examiner l'tat frais (colorations vitales). La meille liquide
que
leure coloration des frottis desschs est celle qu'on obtient avec
mthode panoplique ou
la
le
panchrome de Pappenheim. Les
sont suprieurs ceux de toutes les autres mthodes.

numration des cellules (p. 638) et la formule des espces
rsultats
La
(formule cytologique) se font
comme pour
le
sang.
la ponction
lombaire se pratique avec de grosses aiguilles, de prfrence en
platine, de 8 10 cm. de longueur et de 2 mm. de diamtre. Bien
Liquide cphalo-rachidien.
vrifier leur permabilit.
crtes iliaques
Reprer
Rappelons que
la
ligne tangente
aux deux
cette ligne passe par l'apophyse pineuse de la
appuyer l'index gauche sur cette apophyse.

quatrime lombaire
Ponctionner soit entre la quatrime et la cinquime lombaire, soit
entre la cinquime lombaire et la premire sacre (position assise
:
ou couche, dos bien arrondi) ^ Recueillir

1.
Nous ne pouvons donner
qu'en
noter
les
points
ici
le
essentiels.
le
liquide dans trois
dtail de cette opration; nous ne faisons
Chez
le
Chien, reprer la septime
lom-
645
tubes diffrents (sang)

on a rarement besoin craspirer avec la
Ne jamais enlever plus de 10 cm^ Centrifuger fond,
pendant dix minutes, dans des tubes extrmit trs troite.
:
seringue.
Dcanter fond en retournant

remplir une
le
tube, tenir le tube retourn et
pipette par capillarit avec le culot; taler

sur plusieurs lames en dcrivant des cercles avec l'extrmit
de la pipette, scher et colorer au Pappenheim ou au panfine
chrome.
Examen du
pus.
L'talement du pus doit tre
prcautions particulires,
lisables.
Il
si
on ne veut pas avoir des
fait
avec des
frottis iniili-
ne faut jamais craser le pus entre lame et lamelle ou

on doit Ttaler comme une goutte de sang
entre deux lames
mais en ayant soin ^'appuyer trs lgprement la

lamelle, de manire ne pas craser les leucocytes. On peut aussi
(fig.
241),
pratiquer l'talement avec
le
fil
de platine ou Textrmit d'une
pipette.
La coloration se fera de prfrence par la mthode panoptique

de Pappenheim, qui colore tout, mme les Bactries. Le diagnostic de ces dernires se fera par les mthodes bactriologiques
(p. 687), mais la mthode panoptique donne une fixation et une
coloration trs suprieures, pour juger de la formule
leucocytaire
elle seule
permet
la
recherche
et la
dtermination des Pro-
tozoaires.
Ne
pas oublier de pratiquer V examen Vtat frais, entre lame

lamelle, en diluant le pus dans la solution physiologique s'il
est trop pais. On reconnat ainsi certaines
mycoses, l'actinomyet
cose, les
Amibes,
etc.
EXAMEN DES CRACHATS

Les crachats doivent tre examins aussi
frais
que
possible.
On
commence par les verser dans une grande bote de Ptri, pour
pratiquer Yexamen macroscopique sur fond noir et sur fond blanc
baire, dont l'apophyse pineuse est au-dessous de la ligne des deux crtes
pour ponctionner dans le sixime espace, enfoncer l'aiguille presque
iliaques
verticalement sur l'apophyse de la septime lombaire; pour ponctionner dans
l'espace lombo-sacr. piquer trs obliquement le long de l'apophyse de la premire sacre (Lpinay, Rcv. pathol. comparce, p. 355, 1911). Chez le Cheval, piquer
entre la dernire lombaire" et la premire sacre, d'avant en arrire et un peu
obliquement, enfoncer de 13 15 cent. (Prvt. Brissy et Barbier. Bull. Soc.
:
centr. mil. vtr.. p. 77, 1911).
MTHODES SPCIALES
646
228). On noie la rpartition des parties purulentes, spiralces,

des moules bronchiques, on retire les dbris alimentaires, etc.
examen Vtat frais est indispensable, surtout pour la
(fig.
recherche des parasites
et
de leurs ufs
on
le
pratique en exa-
minant simplement une parcelle entre lame et lamelle. Diluer au

besoin dans la solution physiologique, ou dans Teau formole qui
permet d'obtenir d'emble des prparations persistantes, par lutage

au lut de Kronig. On peut faire aussi des colorations extemporanes au Lugol ou avec un colorant basique (azur II 1 p. 1 000,
bleu de mthylne l p. 500).
L'talement prsente souvent de grandes difficults. On peut
oprer comme pour le sang, avec une lame et une lamelle, mais
en procdant par - coups et en hachant en quelque sorte la
matire taler. Contrairement ce que nous avons dit pour le
sang, on peut s'arrter, reprendre et mme revenir en arrire. On
peut aussi taler avec un fort fil de platine aplati en spatule

l'extrmit (fig. 262, a)
on arrive facilement, par ce moyen,
:
dissocier des crachats trs pais.
Ne jamais
craser entre lame et
lamelle ou entre deux lames, car on rend mconnaissables

plupart des lments.
Aprs talement, on dessche

agitation Tair,
comme pour
le
le
la
plus rapidement possible par
sang.
La coloration, pour l'tude gnrale des crachats, se fera par

mthode panoptique ou le panchrome de Pappenheim. On met
ainsi en vidence tous les lments, avec leurs ractions chromala
notamment les osinophiles qui sont quelqueabondants (asthme). En outre, pour V tude de la mucine,
indispensable de colorer par les ractifs de cette substance
tiques particulires,
fois trs
il
est
673). Un des meilleurs est le bleu polychrome de Unna ', qui

colore mtachromatiquement la mucine en rouge.
La mtachromasie est plus sensible la lumire artificielle qu'
la lumire du
jour. Le bleu de Unna met en vidence non seule(p.
ment
le
mucus
hyalin, mais encore des rticulums
mucineux
mtachromatiques, provenant de cellules bronchiques dgnres

et souvent pris pour de la fibrine, dont ils n'ont aucune des ractions (de Jong).
avec
le
La
fibrine se colore
bleu de Unna.
en bleu gristre ou verdtre
Enfin, ce dernier ractif colore en bleu
1. Israt'ls de
Jong, tude hislo-chimique et cytologique dex crndiats. Thse de
Paris (mdecine), 156 p., 1 pi., 1907. De Jong recommande la tlxation pendant
une minute par l'acide chromique 1 p. 100, avant la coloration au bleu de Unna.

non en rouge,
violet, et
la
647
substance sro-albumineuse qui forme
fondamentale de certains crachats. Les granulations que

renferment certaines cellules pourront tre caractrises par les
la partie
du fer (pigment ferrique, p. 675), de la graisse, etc. Les

grains antliracosiques sont insolubles et opaques, aussi bien en
lumire ordinaire qu'en lumire polarise.
ractions
En rsum,
bleu de
le Romanovsky donne la cytologie du crachat, le

Unna renseigne sur son histochimie les recherches bac;
triologiques seront pratiques par les mthodes ordinaires (p. 689).
EXAMEN DES URINES

Comme pour les autres liquides organiques, nous nous tiendrons
strictement au point de vue de la technique microscopique. Il
ne faut pas oublier que les sdiments urinaires renferment, non
seulement des lments minraux, mais encore des corps ligures
trs dlicats, qui doivent tre fixs et colors avec soin.
Gomme
les lments en suspension dans les urines pathologiques

presque toujours dissmins dans une grande quanlit de
li(juide, toutes les mthodes d'examen reposent sur une centrifu-
sont
galion pralable. Cette opration

pratique
le
plus
tt possible,
est
indispensable et doit tre
pour soustraire
les
lments figurs
aux altrations produites par la fermentation. Il faut donc rejeter

absolument la sdimentation simple et centrifuger les urines
aussitt aprs leur mission.
Les conditions esscnLielles d'une bonne centrifuCentrifugation.

galion sont les suivantes
1" quilibrer avec soin les lubos. Pour cela, il est indispensable de les
mettre sur les plateaux d'une balance, dans des supports appropris
(tubes de bois, de carton) et d'g-aliser leur poids le plus soigneusement possible. Si tout le liquide centrifuger est dans un seul tube,
remplir l'autre avec de l'eau, mais ne jamais employer de matires
solides (grenaille de plomb). Lorsque les tubes ne sont pas parfaitement
quilibrs, il se produit des trpidations, trs nuisibles aux engrenages
et au dpt rgulier des sdiments. Le mouvement doit tre doux et
uniforme, sinon il faut vrifier l'quili]re, non seulement avec les
:
tubes, mais encore avec les tuis porte-tubes.

2 Le dmarrage et l'arrt doivent tre lents et progressifs, sinon les
remous produits remettent partiellement les sdiments en suspension.
Pour arrter, le mieux est de lcber la manivelle ou d'interrompre la
force motrice et de laisser l'appareil s'arrter seul.

Ces recommandations s'appliquent tous les modles de centrifugeurs.
648
METHODES SPECIALES
Les centrifug-eurs les plus commodes sont ceux (jui ont deux vitesses,
une pour riimatocrite (10 000 tours), l'autre pour l'urine, les crachats,
le lait, etc. (3 000 tours la minute)
(flg'. 253). Pour centrifuger de grandes
quantits de li({uidc, on emploiera un
dispositif il quatre tubes (flg. 2.34). Ces
appareils se recommandent au travailleur isol; mais, dans les grands laboil
y a avantage avoir des
centrifugeurs lectriques qui travaillent
de
automaticjuement (centrifugeurs
Jouan).
ratoires,
Traitement des sdiments uri-
naires.
Avec
que celui de
en retournant
ensuite
ou
el
cen-
dcanter
On
tubes.
les
procder
diffrentes
appareils tels
ligure 253,
minutes
tiois
trifuger
les
la
de
deux
bien
on
peut
faons
tale
le
culot sur des lames, avec les prcau-
ou bien on
tions ordinaires,
d'abord el on
Ccntrifugcur
de Krauss
deux vitesses. Au-dessus des
deux tubes on a tigur l'hma-
Fig. 253.
tocrite.
le
le
fixe
lave par centrifu-
gaiion, puis on l'tal.

Je prfre la premire
mthode
qui, lorsqu'elle est applique avec

soin, donne d'excellents rsultats et
permet
la
novsky.
exactement
procde
comme pour
de
Roma-
coloration par le
On
le
sang, en avant soin
faire l'talement trs
lgrement,
pour ne pas craser et rendre mconnaissables les lments dlicats.

Il
donc appuyer
faut
trs
peu
la
lamelle et plutt taler par capillarit

Fig. 254.
Appareil quatre tubes
centrifuger de
quantits de liquide.
pour
grandes
en
la
poussant de droite gauche.
eommc
il
CSl
(lit
p.
*
626
(fig.
^
"
242).
'
Pour la fixation avant talement, Brandeis emploie le Flemming

mais je reproche ce ractif de rendre les colorations difficiles et je
prfrerais le sublim actique ou, mieux encore, le Bouin. Borne et
Vadam 2 traitent d'abord l'urine par l'acide actique, pour liminer le
*
1.
2.
Jonrn. de md. de Bordeaux, p. 213. 1910.

Presse mcdicnle, 25 mars 1903.

carbonates et les phosphates, puis
avec 2 ou 3 cm'^ du liquide suivant
ils
649
centrifugent et agitent
culot
le
Borate de sodium
Acide borique
Bianc d'uf
2 p. 100
>
aa
frachement prpar, (jui dissout les urales et hxe les lments figurs;
on centrifuge de nouveau et on examine le culot directement ou aprs
talement, dessiccation et coloration.
le procd
employ, il ne faut pas oublier que
culot Vtat frais est d'une importance capitale
diagnostic des maladies parasitaires (Protozoaires, filariose,
Quel que
soit
Yexamen du
pour
le
bilharziose, etc.)
En ce qui concerne la bilharziose, ne pas oublier que les ufs
sont souvent localiss dans les petits caillots rendus la fin de la
miction.
Cet examen est indispensable aussi pour Ttude des cylindres,

qui sont mconnaissables sur les prparations sches.
L'clairage fond noir (p. 208) pourra rendre des services aux
oprateurs trs exercs, connaissant fond l'examen microscopique des urines. Pour le dbutant, il ne peut tre qu'une source
d'erreurs.
Au
contraire, la
dmontre bien
dixime
les
mthode l'encre de Chine
cylindres.
Employer
de
l'encre
(p.
699)
au
dilue
(p. 700).
Les recherches baclcriologigues seront
niques spciales.
faites d'aprs les
tech-
Recherche de la graisse dans l'urine.

Importante en cas
de chylurie et de lipurie. Mlanger quelques centimtres cubes
d'urine avec volumes gaux d'alcool OO^'et de solution alcoolique
concentre de Sudan 111. Examiner le prcipit au microscope,
au besoin en
le
lavant a
l'alcool
sous la lamelle. La graisse se
en rouge, tandis que l'albumine reste incolore. Ne pas

confondre la chylurie (urine laiteuse) avec la hpurie, dans laquelle
les gouttelettes huileuses se rassemblent la surface sans s'mulcolore
sionner.
On
avec
a propos plusieurs mthodes pour faire des prparations durables

sdiments urinaires. Skutetsky - les monte la glycrine glatines
les
K. Stoevesandt, Darstelluug von Urincyliiidern mittelst das Tuscheverfalircn.

med. Woch., W' 52. 1909.
Skutetsky, Die Herstellung von Dauerprilparaten der Ilarnsedimento. Dtsch.
med. Woch., XXXVI, p. n60-176-2, 1910.
1.
Btsc/i.
2.
650
MTHODES SPCIALES
conserve sec. 11 traite les urines neutres et acides par un

p. 100 et
mlange de 20 cm^ de solution aqueuse de rouge neutre
de 10 gouttes de solution alcoolique de violet de mthyle les cylindres
cireux se colorent en bleu, le reste en rouge.
Les urines acides sont traites par le crocein-scharlach JB en solution
dans l'alcool 70". Enfin, il emploie le procd Tencre de Chine (p. 699)
qui lui a donn de bons rsultats il fait un mlange de deux parties
d'eau pour une partie d'encre et ajoute ce mlange la glycrine
glatine, dans Laquelle il monte le sdiment.
OU
les
CHAPITRE V
TECHNIQUE HISTOLOGIQUE
LMENTAIRE
Il ne
peut tre question ici de donner un aperu, mme sommaire, de la technique liislologique.
En effet, pour indiquer avec prcision la manire de colorer les
divers organes
structure,
il
de mettre en vidence leurs particularits de

ne concorderaient
et
faut introduire des descriptions qui
plus avec Tesprit exclusivement pratique et technique de cet

Je
ouvrage.
suppose que le lecteur possde les notions
d'hislologie indispensahles et,
et
gnrales
spciales
des cas.
majorit
Il
que
existe
je
dans ces conditions, les mthodes

dcris suffisent dans l'immense
d'excellents
ouvrages,
franais
et
dans
lesquels on Irouvera les indications de micrographie applique, ncessaires pour des tudes purement histologiques. Je ne me place donc pas ici au point de vue de l'hislolo-
trangers,
mais celui du chercheur, du naturaliste et du mdecin,

qui observe et exprimente et qui veut pouvoir lire facilement les
coupes excutes dans les organes d'animaux en exprience. Les
gisle,
hislologistes choisissent leur matriel,

tel
ou
tel
en s'attachant aux types chez
tissu est plus facile voir.
lesquels
L'exprimentateur
est forc de tirer
parti d'un animal quelconque, qu'il est contraint
d'tudier pour des raisons de rceptivit; il doit donc se contenter
de mthodes histologiques ])lus gnrales, convenant la plupart

des cas. Aussi, je limite mes indications quelques mthodes trs
simples, [)lutt topographiques, permettant la lecture facile des
coupes.
Tissu conjonctif.
Ce
tissu
forme
fondamentale de tous les organes, aussi

rencontrer partout dans les coupes. En outre,
la partie
faut-il s'attendre le
MTHODES SPCIALES
652
joue un rle considrable dans les organes sclross. Il est donc

le mettre en vidence et de le diffrencier du tissu
il
ncessaire de
musculaire
lisse.
jonctif, les fibres
fibres
Il
faut,
en outre, distinguer, dans
conjonctives proprement
lastiques (lastine),
et
les cellules.
dites
con-
le tissu
(collagne),
les
Parmi ces dernires,
nous devons surtout savoir mettre en vidence
les
plasmoc}
tes
les labrocytes et les leucocytes osinophiles.
Collagne.
Les mthodes lectives ont pour objet de
le
distinguer des fibres lastiques et des prolongements protoplasmiques des cellules conjonctives. Ces mthodes reposent sur la
facult que possde le collagne de se colorer par certains com-
poss sulfons de la rosaniline,
notamment par deux
colorants
acides, la fuchsine acide (p. 398) et le bleu d'aniline (p. 400).
Nous avons dj donn, parmi les mthodes gnrales, un cernombre de procds trs favorables pour la mise en vidence
tain
du collagne. L'hmatine-osine
et les chromolropes peuvent

correctement employs (p. 418 et 421). Le
safran (p. 423), le vert lumire (mthodes de Prenant, p. 423
et de Masson, p. 426), le picro-carmin d'indigo donnent aussi
suffire, lorsqu'ils sont
d'excellentes coloration du collagne.
Comme
le
mthodes plus particulirement lectives, nous avons

la fuchisme acide^ et les
(p. 421), procd
van Gieson
mthodes aux bleus d'aniline. Nous avons dj dcrit (p. 424)

trichromique de P. Masson. qui fournit certainement la coloration la plus lective connue pour le collagne. Les mthodes
de Blochmann et de Schuberg (p. 529) sont appUcables au tissu
le
coloration par l'hmatoxyhne ferrique

place du carmin boracique. Nous donnons, en
conjonclif, surtout aprs
de Weigert,
la
mthode de Gurtis, qui est aussi trs lective, mais qui

l'inconvnient d'employer l'acide picrique, ractif qui finit
toujours par diffuser d'une manire fcheuse.
outre, la
Parmi les diverses mttiodes proposes

Mthode de Ciirtis-.
par Curtis, je ne retiendrai que celle du noir-naphtol B, qui, mon
avis, est la plus simple et la plus dmonstrative.
mthode habi1. Dbarrasser les coupes de la paraffine suivant la
tuelle et colorer les noyaux dans la safranine aniline (p. 393).
2. Rincer Teau, puis goutter soigneusement l'excs d'eau.
3. Verser sur la lame le mlange suivant
:
Voir
p. 654, note 3.
F. Curds, Mthode de coloration lective
biologie, LVIII, p. 1038-1040, 1905.
1.
2.
du
tissu conjonctif, C. R. Soc. de
TECHNIQUE HISTOLOGIQUE LMENTAIRE

A.
C
B.
l
'
653
Solution sature d'acide picrique dans l'eau distille.

80 cm-^
Eau distille
20 gr.
Glycrine
1
Noir naphtol B
9 parties de A avec une partie de B.

Laisser agir trois cincj minutes.
4. Sans laver l'eau, dilfrencier par l'alcool absolu, jusqu' ce ([u'il
ne s'chappe plus de couleur rouge et que les parties conjonctives
ressortent en bleu, sur le fond jaune de la prparation.
5. Arrter la diffrenciation en plongeant dans le tolune, puis monter
Mlanger
au baume.
Dans une prparation russie,
les noyaux sont rouges, les protoplasmes

collagne d'un beau bleu noir. Je considre cette
mthode comme une des plus prcises pour l'tude des sclroses.
Dnbreuil
emploie les bleus d'aniline dits n"* 1, 2 et 3 (bleus
Zachariads -). Colorer par la safranine aniline, diffrencier par l'alcool
60, puis laver l'eau et goutter. Verser sur la lame le mlange
suivant
et l'lastine
jaunes,
le
'
1
p. 200 de bleu pour
sat. d'acide picrique
Sol. aq.
micrographie, n"
2.
4 cm^.
46
Laver l'eau, diffrencier dans l'alcool absolu, laver au xylol et

monter au baume 3.
Parmi les trs nombreuses mthodes proMthode de Unna'*.
poses par Unna. nous n'en retiendrons que deux, celle du bleu
polychrome et de l'orcine, dcrite p. 429, et celle du bleu d'aniline-
orcine
Colorer les coupes dans
:
heures
le
mlange suivant pendant une douze
Orcine
Wasserblau
Glycrine
Eau
distille
Alcool
gr.
0,25
10
30
60
-95
Diffrencier par l'alcool ordinaire ou mieux l'alcool chlorhydrique

1 p.
100. Le collagne est bleu, l'lastine, les muscles et les proto-
plasmes prennent
le
ton rougetre de l'orcine.
Le picro-bleu, emploi de ce ractif pour la coloration spcifique

conjonctives, application l'tude du tissu rticul du ganglion
lymphatique. Bibliogr. anatomique. C. R. de CAssoc. des anatomstes, YI, p. 62-66,
1.
des
G. Dubreuil,
fibrilles
1904.
2.
Usines de produits chimiques
Iâfayette, Paris.
3. On peut conseiller encore les
et Bettcndorf et
4.
matires colorantes de St-Denis,
105,
rue
(p. 527), de Blochmann

529), au bleu d'aniline. Toutes ces mthodes
de Schuberg (p.
collagne en bleu.
Voir de longs dtails dans Monalsh.
colorent
et
et
mthodes de Mallory
le
XXXIV,
1902.
f.
prakt. Dermat., XYIII et XIX, 1894
MTHODES SPCIALES
654
Fibres lastiques.
l'acide
que
les
onl
Elles
osmique, par lequel
une grande
elles se colorent
affiiiil
pour
vite
beaucoup plus
autres tissus. Elles rsistent Taction des alcalis caus-
tiques (soude et potasse). Les deux principales mthodes de coloration sont celles de Unna par Torcine et de Weigert par la
fuchsine-rsorcine.
Mthode orcine.
(Mthode de Taenzer modifie par Unna).
Colorer les coupes, pendant quinze minutes environ, dans une solution
d'orcine 1 p. 100 dans l'alcool chlorhydriquc 1 p. 100. On peut
chauler trs lgrement (30"). Laver l'alcool chlorhydrique et monter
au baume. On peut colorer les noyaux l'hmalun avant ou aprs avoir
diffrenci par l'alcool acide.
Mthode de Weigert^.
Le
ractif de
Weigert se prpare en
prcipitant par le perchlorure de fer une solution de rsorcine et de

fuchsine. On dissout, dans 200 cm^ d'eau bouillante, 2 gr. de fuchsine
et 4 gr. de rsorcine; on ajoute 25 cm^ de perchlorure de fer 30 p. 100
et on laisse bouillir quelques minutes, tout en remuant avec un agita-
Dissoudre le prcipit (sans le laver, pour qu'il y ait une

trace de perchlorure de fer) dans 200 cm^ d'alcool 90" chaud
aprs
refroidissement, ajouter 4 cm^ d'acide chlorhydrique. Ce mlange ne
les
Colorer
six
semaines'^.
conserve
trente
se
coupes pendant
que
soixante minutes, laver l'alcool et au xylol et monter au baume. Les
teur. Filtrer.
fibres lastiques sont d'un bleu fonc pres([ue noir.
On
peut colorer
les
noyaux au carmin avant ou aprs, ou associer cette coloration

l'hmatine-van Gieson, au picro-bleu de Curtis ou de Weigert, etc.
'^
Plasmocytes (Plasmazellen).
ments, Unna recommande de fixer
de ne jamais
les
sels mtalliques.
Pour bien tudier
les tissus Falcool
ces l-
absolu et
mettre en contact ni avec du tannin, ni avec des

Cependant, on obtient encore de bonnes colora-
lions avec les fixateurs ordinaires.
Pour
la coloration, on peut employer les procds suivants

Mthodes de Unna au bleu polychrome et ther glycrique
mthode
(p. 427) au bleu polychrome et orcine (p. 429)
l'osine-bleu de toluidine (p. 429); mthode panoptique et pan:
chrome de Pappenheim (p. 405 et 411).

Leurs granulations basophiles se
Labrocytes (Mastzellen).
colorent mtachromatiquement avec le bleu ])olychrome de Unna,
1.
Weigert, Ceber eine Mthode zur Frbung elasticher Fasern. Centralbl.

IX, p. 289-292, 1898.
Ce produit est vendu tout prpar par Griibler. Fischer {Virchow's Arehiv,
C.
allg. Pathol. u. path. Anat.,

2.
CLXX,
p. 285,
1902 et
CLXXIl.
p.
517,
1903)
nomme
ce mlange fuchsline.
On
peut l'additionner de Scharlach R, pour colorer en mme temps les graisses.

3. Ce mot a t introduit dans la nomenclature
par le Prof. R. Blanchard, de
mme que celui de labrocyte (p. 366, note 1).
TECHNIQUE HISTOLOGIQUE ELEMENTAIRE

oiiliochromatiquement avec
novsky.
Un
basiques et le Romamettre en vidence est la
colorants
les
moyens de
des meilleurs
655
les
mthode de Unna au bleu polychrome et ther glycrique (p. 4-27)

panchrome de Pappenheim donne une mtachromasie moins
accentue, mais dmontre mieux les autres lments des tissus.
;
le
Leucocytes osinophiles.
ration, dans lesquelles
trs bien
entre
Tontes
les
un colorant
mthodes de colo-
acide, les dmontrent
mme du Romanovsky apjdiqu
en est de
il
il
aux coupes.
on recherche spcialement ces lments, on emploiera

Pourtant,
la mthode de Martinotti
colorer les coupes Thmalun de
si
'
Mayer, laver et virer au bleu, puis colorer douze vingt-quatre

heures dans une solution trs dilue d'osine bleutre l'eau de
Griibler-
100
(p.
1. p. 100 dans 50
mre d'osine dans un mlange
399) (2 gouttes de solution
cm-^ d'eau). Faire la solution
de trente parties de glycrine pour soixante-dix parties d'eau. On

peut aussi surcolorer avec cette solution mre 1 p. 100 et
rgresser d'abord dans l'eau, puis dans l'alcool 70 (p. 419).
Kreibich ^ colore les leucocytes osinophiles dans les tissus
Il fait une solution de
suprarnine et d'pir1000 et y colore des coupes par conglation, fixes ou
non, pendant une deux heures l'tuve 37. Les noyaux
par l'adrnaline.
nane
1 p.
restent incolores, mais les granulations osinophiles se colorent en
brun fonc
Les
trs rfringent,
granulations
clair.
La mthode ne
Hmaties.
mthodes o
(p.
par l'imprgnation argentique.
sont colores
en brun jauntre
parait pas russir avec les frottis.
Trs
entre
il
comme
neutrophiles
bien
mises en vidence par toutes les

la mthode de Mann
un colorant acide
430) les colore d'une faon particulirement nette *.

Graisse et tissu adipeux.
Sur les coupes, le
tissu adi-
gnralement sous la forme d'un fin rseau

mailles,
larges
parce que le contenu des cellules adipeuses a t
peux
se prsente
dissous par les ractifs employs pour l'inclusion la paraffine.

Cet accident se produit mme avec des pices fixes par un liquide
1.
iciss.
2.
3.
Martinotti. Tecnica dlia dimostrazione dlie cellule eosinofile. Ztschr.

xUicr.,
XXVI,
d'une autre osine, voir p. 399 des conseils ce sujet.

Kreibich, Leukocytendarstellung im Gewebe durch Adrenalin. Wien. klin.
Woch., XXIII,
4.
f.
p. 4-28, 1909.
Ou
p. 701-702, 1010.
Pclagatti obtient une lection trs spciale avec Tlilianthine en solution

p. lO dans le tannin 5 p. 100. Sa mthode est assez complique {Folia
hxmatolofiica,
I,
p. 207, 1905).
MTHODES SPCIALES
656
renfennaol de Tacide osmique. Les graisses osmies sont surtout

solublesdans l'essence de trbenthine, i'theret la crosote (Flem-
ming);
le
xylol, le chloroforme et Tessence
de
girolle sont
moins
actifs; Tther de ptrole ne les dissout que trs difficilement

(Wlassak). Il faut bien savoir aussi que tout ce que l'acide osmique
n'est pas de la graisse et que les diverses graisses se
colorent ingalement (voir microchimie, p. 073).
Voici comment Mulon
conseille d'oprer, pour rechercher la
colore
graisse dans
les
tissus par
l'acide
osmique
au Bouin,
fixer
colorer des fragments trs minces, pendant quarante-huit heures,

dans l'acide osmique 2 p. 100 et passer par les alcools imprgner
;
dans Tther de ptrole pendant quarante-cinq minutes 35*^

(attention au feu), puis dans la paraffine 50 pendant trente
minutes. Coller les coupes l'eau, enlever la paraffine par l'ther
de ptrole et monter
l'huile de paraffine.
la
glycrine ordinaire ou glatine ou
Outre l'acide osmique, nous possdons encore deux substances

colorantes qui permettent de mettre la graisse en vidence
sont le Sudan III et le Scharlach R (Fettponceau).
ce
Le Sudan III, introduit dans la technique par Daddi -, est

une poudre rougetre, insoluble dans l'eau, soluble dans l'alcool
et les graisses. On en fait une solution sature dans l'alcool 70".
On colore des coupes de tissus non fixs ou fixs au formol ou au
Bouin et coups par conglation. Laver l'alcool 70-, puis examiner dans la glycrine ordinaire ou glatine. Les globules graisseux sont colors en rouge orang.
Sudan, colorer l'hmalun.
On
peut, avant de faire agir le
Le Scharlach R s'emploie, d'aprs Herxheimer^, en solution

dans un mlange parties gales d'alcool 70 et d'actone. Voici
comment procde Mulon {loco citato) fixer au formol sal ou
:
au Bouin, couper par conglation, colorer deux minutes par le

Scharlach, laver rapidement l'alcool et monter la glycrine.
La graisse
est colore
en rouge. (Voir d'autres dtails
p.
673.)
1.
p. Mulon, Action de l'acide osmique sur les graisses. Histochimie et
teclmique, C. R. Association des Anatomistes, VI, p. 1-2-23, 1904; Bibl. a)iatpmique,
XIII, p. 208-213.
Voir aussi Riedder, Beutsc/ies
2. Arch. ital. bioL. XXVI, p. 143, 1896.
Archiv f. klin. Med., 1897.
3. Ztschr. f. loiss. Mikr., XXI, p. 57, 1904. Consulter aussi Fischer, Ueber die
Fettfarbung mit Sudan III und Scharlach R. Ctrlbl. f. allg. Pathol. u. paihol.
Anat., XIII, p. 943-916, 1902.
TECHNIQUE HISTOLOGIQUE ELEMENTAIRE
657
Tissu cartilagineux.
la subslance fondamentale du cartiun
certain nombre de colorants, notamchromotrope pour
Nous savons
lage est
ment
(p.
367) que
la thionine, le
bleu de toluidine,
et
tous les colorants mla-
colorent en rouge, puis pour

eu
colore
la
safranine
la
jaune. Ces ractions sont utiles
qui
connatre pour dceler le cartilage dans les coupes.
chromatiques bleus
et violets
la
qui
Tissu osseux.
On se reportera au chapitre de la dcalcification (p. 262), en

n'oubliant pas que les pices doivent tre fixes avant d'tre
dcalcifies; on les traite ensuite comme les autres tissus.
La moelle osseuse prsente un
et
qu'organe hmatopoitique
Protozoaires
on
peut
en tant
ctc). On peut tudier

en coupes. Sur le vivant,
(Plasmodium, Leislmiania,
moelle osseuse,
la
intrt tout particulier,
lieu de multiplication de certains
soit
la
prlever
mthode expose
p.
en
frottis,
moelle
497
avec
soit
un
petit
cette opration
trpan,
est
suivant
la
inoffensive, lors-
qu'elle est excute avec soin.

Les frottis doivent tre excuts avec dlicatesse,
pour ne pas
craser les lments qui sont trs fragiles. On procde par apposition, avec la surface de section de l'os ou un petit fragment de
moelle qu'on tient au bout d'une pince. On peut aussi taler la
moelle avec une aiguille ou un fil de platine, en diluant au besoin
avec un peu de solution physiologique. Scher rapidement. Colorer

par la mthode panoptique ou le panchrome de Pappenheim. On
peut aussi faire des
colorer par le
frottis
Romanovsky
humides,
(p.
les fixer
au Bouin
et les
413) ou Ihmatoxyline ferrique
(p. 376).
coupes, on extrait de petits fragments de moelle et on

au Bouin. Branca emploie le mlange de Tellyesniczky
282) auquel il ajoute 20 p. 100 de formol.
Pour
les
les fixe
(p.
Foie, rate et ganglions lymphatiques.

Ces organes seront tudis, non seulement au moyen de coupes,
mais encore avec des frottis par apposition, excuts avec l'orM. Langeron.
42
MTHODES SPCIALES
658
savoir que le frotlis ordinaire, fait en

un morceau d'organe sur une lame, est un procd
barbare qui ne montre rien que des lments crass. Au contraire, le frottis par apposition se fait en appliquant, sur la lame,
gane
frais.
faut bien
Il
frottant
frache d'un fragment d'organe et en appujant

sans
frotter^ de manire obtenir un vritable
lgrement,
des
cellulaires qui adhrent la surface du
lments
dcalque
une section
dcalques sur la mme lame,

de section. Il est important de bien
scher celte surface, de manire ne pas avoir simplement un
frottis de sang.
verre.
On
faire ainsi plusieurs
peut
mme
avec une
surface
Ce procd est applicable tous les organes parenchynianotamment au foie, la rate, au pancras, aux ganglions
lymphatiques et mme aux centres nerveux (p. 659). Les frottis
sont desschs ou fixs humides (p. 413).
teux,
Les colorations
plus intressantes des frotlis et des coupes

lymphatiques et hmalopoitiques sont celles qu'on
d'organes
obtient avec le
panoptique ou
les
Romanovsky. Employer de prfrence

panchrome de Pappenheim.
la
mthode
le
Tissu nerveux.
Nous avons dj expos
des
p.
433, deux mthodes d'imprgnation

Nous passons sous silence les
neurofibrilles.
argentique
mthodes de colorations vitales, qui ne sont pas du domaine de la
pratique courante et dont l'expos nous entranerait des dve-
loppements hors de proportion avec le cadre de cet ouvrage '.

Un des meilleurs procds de fixation des centres nerveux,
pour le travail courant, consiste employer l'alcool-formol (p. 286)
ou encore, plus simplement, le formol 10 p. 100-. Ce dernier
procd
supprime l'inconvnient
du
chromage
et
permet de
1. Voir ce sujet Micliailov, Die Anwcndung des Metliylenblaus in der Neurologie. Ztschr. f. vnss. Mikr., XXVII, p. 1-21, 1910. On y trouvera l'expos des
colorations vitales et de la fixation du colorant et des tissus par le molybdate
d'ammonium
formol.
Loyez, Coloration l'hmatoxyline ferriquc de pices nerveuses simplement
formoles et incluses au collodion. C. II. Soc. de biologie, LXIX, p. 511 et
Mann a dj fait remarquer depuis longtemps [Ztsckr. /'. viss Mikr.,
517, 1910.
XI, p. 494, 1894) que l'alcool absolu ou 95 fixe assez bien les cellules nerveuses
au repos, mais non celles qui sont en activit, parce que ces dernires sont
gorges de lymphe et ont un noyau volumineux. L'action dshydralantc de
l'alcool y produit des contractions normes.
2.

couper
sec
un hmisphre
On
peut, sur la
l'hmaline-osine
On
mme
une
au collodion.
srie de colorations
\ au
peut tudier
la
d'aprs le
frottis faits
entier, aprs inclusion
pice, faire
659
Nissl, au Weigert modifi, etc.

forme des cellules nerveuses au moyen de
procd de Ira van Gieson -. On crase dou-
et lamelle, un petit morceau de suhstance grise

pois (p. 542). On tale ensuite, en tirant doucela lamelle tout le long de la lame. Colorer au Nissl ou au
cement, entre lame
comme un
gros
ment
Romanovsky.
Coloration de la myline. Mthode de Weigert modifie par
Fixer au formol 10 p. 100 et inclure au collodion (la myline
Loyez.
2.
pendant l'inclusion la paraffine).

Mordancer vingt-quatre heures dans l'alun de
Laver rapidement.
3.
Colorer vingt-quatre heures
disparatrait
1.
par l'hmatoxyline de Weigert
Hmatoxyline
Alcool 93
Solution sature de carbonate de lithium
Eau
ry
37''
fer 4 p. 100.
1 gr.
10 cm3.
.
90
distille
Mlanger A et B.
4. Laver l'eau.
dans l'alun de fer 4 p. 100,
5. Diffrenciation. Premier temps
jusqu' ce que la substance grise se dessine en plus clair.
Deuxime temps dans le diffrenciateur de Weigert en suivant au
microscope
Ferricyanure de potassium
Borate de sodium
Eau
6.
7.
2 gr. 5
2
200 cm^.
distille
Laver Feau, puis l'eau ammoniacale, puis encore l'eau.

Alcools, xylol, baume. Les gaines de myline sont noir bleu,
le
reste bruntre.
Coloration de la nvroglie. Mthode d'Angade et Morel.

1. Fixer quatre jours froid ou quarante-huit heures 37 dans
Sol. aq. de sublim
^
Liquide de Fol
7 p. 100
partie.
3 parties.
1. Dans les coupes do moelle, colores l'hmatine-osine, ou trouve dans

certains cas, par exemple dans le paludisme, des corps dits amylodes qui se
colorent en bleu et forment des masses arrondies contour mal dfini. Ces
corps donnent les ractions de la matire amylode (p. 6^2).
2. Centralbl. fier BakterioL, Oriy., XLIII, p. 205-206, 1907.
3. Le liquide de Fol est ainsi constitu
2 parties d'acide osmique 1 p. 100;
5 parties d'acide actique 2 p. 100; 25 parties d'acide chromique 1 p. 100 et
:
68 parties d'eau distille.
MTHODES SPCIALES
660
Ghang-er le fixateur autant de fois qu'il se trouble, puis laver deux

heures l'eau courante et inclure la paraffine.
2. Colorer les coupes dans une solution aqueuse sature de bleu
Victoria, pendant vingt-quatre heures froid.
3. Sans laver, porter pendant dix minutes dans le Lugol, puis laver
rapidement et scher au buvard.
4. Diffrencier sous le microscope par le xylol aniline
:
Xylol
Aniline
Laver au xylol et monter au baume. Les fibrilles et noyaux nvrog-liques sont colors en violet fonc. On peut colorer ensuite les autres
lments par l'osine i.
Coloration des cellules nerveuses.

Comme procd gnral on
peut employer la mthode de Mann (dite de Dominici) Tosine-bleu
de toluidine (p. 429) ou la mthode de Mann proprement dite au bleu
de mthyle-osine (procd lent, p. 430).
Pour l'tude des corps tigrodes ou basophiles, on devra employer la
mthode de Nissl dont une des meilleures modifications est celle de
de Gothard 2
1. Fixer par l'alcool-formol (p. 286) et inclure la celloidine ou la
:
paraffine.
2. Colorer pendant trente minutes vingt-quatre heures dans le bleu
polychrome de Unna.
3. Laver rapidement l'eau, scher au buvard et diffrencier dans le
mlange suivant
:
Alcool absolu
16 vol.
5
Xylol
Crosote de htre
Essence de cajeput
5
4
'
Laver au xylol
et monter l'huile de cdre.

encore, plus simplement, surtout pour les coupes la
paraffine, qui sont difficiles scher au buvard, diffrencier par l'ther
glycrique qui donne des rsultats au moins aussi bons (jue le mlange
4.
On peut
de de Gothard.
J'ai dj expos, p. 433, la mthode

Imprgnations argentiques 3.
Ramon y Cajal pour Timprgnation des neurofibrilles. Voici comment on peut la modifier pour les autres cas particuliers. Ces modifications donnent des imprgnations beaucoup plus pntrantes, permet-
de
tant d'utiliser des pices de 3
1.
mm.
d'paisseur.
La place nous manque pour donner
particulires la nvroglie.
2. De Gothard, Modifications la
les
mthodes de Weigert
mthode de
et
Nissl. C. B. Soc. de
de Benda
biologie,
p. 530, 1898.
3. Je ne dcris pas la mthode de Golgi au chromate d'argent qui est en
dehors de la pratique courante et ncessite un procd particulier pour le montage des coupes. Ne pas confondre cette mthode avec la nouvelle mthode do
Golgi
(p. 511)
pour l'appareil rticulaire interne.
661
fragments pendant vingt-fjuatre heures

dans l'alcool absolu et procder comme il est dit p. 434, avec cette seule
diirrence que le bain rducteur devra tre additionn de 0,50 p. 100 de
sulfite de sodium.
Durcir vingt-quatre heures dans l'alcool
Fibres sans myline.
absolu, additionn de 0,25 1 p. 100 d'ammoniaque. Laver quelques
minutes l'eau distille et imprgner trois cinq jours 37 dans le
nitrate d'argent 1,5 p. 100. Continuer comme prcdemment.
Durcir vingt- quatre heures dans
Arborisations pricelliilaires
du formol 25 p. 100, additionn de quelques gouttes d'ammoniaque
(0,50 p. 100 au plus). Laver longuement Feau courante (6-12 heures).
Fibres myline.
Fixer
les
Imprgner'comme
il
il
est dit p. 434.
Pour amliorer la teinte des coupes obtenues par toutes ces variantes,
est bon de les virer au virage de Cajal
:
Eau
100
Sulfocyanure d'ammonium
Hyposulfite de sodium
Ajouter, au
moment de
cm
3 gr.
3
l'emploi, 4 5 cm-' de chlorure d'or 1 p. 100.

Mthode de Golgi, p. 511 ( la fin,
Appareil rcticulaire interne.

colorer au carmin alun).
Mthode de Cajal
fixer vingt-quatre heures dans le formol
10 p. 100, laver quatre heures Teau courante, puis imprgner comme
plus haut.
:
il.
Il
est assez difficile d'obtenir
aprs inclusion
la
de bonnes coupes totales de Toeil,

il va sans dire
que les coupes
paraffine, et
toujours trop paisses. Avec la paraffine, les

cueils
sont d'aboi\l le durcissement excessif du crisprincipaux
cellodine sont
la
tallin,
puis le dcollement de la rtine.
Il
ne faut donc esprer un
bon
rsultat qu'avec des yeux de trs jeunes animaux. La fixation

^
recompeut tre faite avec un liquide quelconque. Cantonnel
mande les liquides isotoniques par exemple, ajouter gr. 67 de

chlorure de sodium 50 cm'^ de sublim saturation pour la
:
conjonctive et
la
corne et
gr.
Pour dpigmenter, employer
la
30 pour les membranes internes.

mthode d'Alfieri (p. 451). Colorer
de prfrence l'hmaloxyline ferrique, avec coloration de fond

l'orange G.
Peau.
La peau est un des tissus au niveau duquel on pratique le plus
souvent des examens microscopiques, soit pour le diagnostic
1
Archices d'opJUhahnologie, 1909.
MTHODES SPCIALES
662
des dermatoses, soit
au point de vue histologique
et
cytolo-
gique ^
En ce qui concerne la peau liuniaine, les fragments sont prlevs sur des pices opratoires ou par biopsie. Dans ce dernier
cas, il faut avoir soin de prlever assez profondment, pour avoir
une ide bien exacte de
la
lsion examiner.
Pour
les biopsies
au clilorure d'lhyle suffit; elle n'a pas

inconvnients de Tinjection de cocane qui altre toujours les
superficielles Taneslbsie
les
cellules.
n'en est pas de
mme
pour les prlvements profonds

cocane est indispensable et n'a pas
le temps de modifier toute l'paisseur des tissus.
La fixation doit tre pratique, autant que possible, au moment
Il
et tendus,
pour lesquels
la
du prlvement. Le Bouin
est le
Au
meilleur fixateur.
cas o on
aurait transporter ou expdier la pice prleve, avoir soin

de ne pas l'emballer dans une substance absorbante (compresses
en
toile
baignent
ou en gaze), qui enlverait aux tissus les liquides qui les

et favoriserait le desschement. Envelopper simplement
fragment dans un peu de taffetas gomm, ou mieux l'insrer

dans un petit tube bien sec et bouch avec un lige neuf.
Pour l'tude purement histologique de la peau, les fragments
le
de choix sont ceux qui proviennent d'excisions opratoires de la

Il
y a toujours sur les bords des parties saines, sur les-
lvre.
quelles on peut tudier la fois, la muqueuse, la peau et les

bulbes pileux.
L'inclusion de la peau ncprsente pas de difficults spciales
le seul cueil qu'on ait redouter est le durcissement exagr
:
des pices.
On y
obviera en se servant de tolune et non de xylol

Il faudra aussi ne
pas craindre de prolonger
pour l'imprgnation.
bain de paraffine pendant dix douze heures.

prcautions, on aura rarement des insuccs.
le
Les mthodes de coloration sont
trs
En
observant ces
nombreuses
la
mthode
l'hmatine-osine est le procd fondamental, mais on pourra

employer toutes les autres, y compris celles qui sont spciales au
tissu
conjonctif,
recommande
suivant
surtout
la
la
nature de
la
mthode au safran
lsion
tudier;
je
423) ou le trichromthode au bleu poly(p.
mique de Pierre Masson (p. 424) et la

chrome de Unna (p. 427). On fera, s'il y a lieu,
la fibrine par une mthode
approprie (p. 674).
1.
Rubens Duval, Cytologie des inflammations
(mdecine), in-8" de ÎQ p., 3 pi., 1908.
la
cutanes.
recherche de
Thse
do
Paris
TECHNIQUE HrSTOLOGIQUE LMENTAIRE
663
Examen des squames.

L'examen des squames et des crotes a
une importance capitale pour le diagnostic de toutes les maladies
cutanes.
Prlvement
soit la pince,
de prfrence
la
pince piler,
soit
par
une lame de verre qu'on tient incline 45" et avec

la(iuelle on racle de bas en haut. Le produit du raclage est recueilli
sur une autre lame qu'on place perpendiculairement la peau. L'aspect
et l'tendue des lambeaux, l'abondance de la graisse donnent dj de
prcieuses indications. Les squames normales sont formes de cellules
cornes, non nucles, peu adhrentes entre elles. Au contraire, les
squames sborrhiques sont trs grasses et s'enlvent en larges lambeaux les squames pityriasiques forment de petits lambeaux renfermant des cellules nucles, etc.
raclage avec
Dissocier si les squam.es sont trop paisses.

Dgraisser par le mlange alcool-ther parties gales ou par le
chloroforme. Cette opration est indispensable pour permettre la pntration du colorant.
Fixation par l'acide actique cristallisable 50 p. 100 ou par l'acide
formique, l'bullilion. On peut vaporer lentement chaud ou mieux
retirer les
squames et les laver l'eau distille.

un colorant basique, de prfrence
le bleu polychrome
bleu boracique de Sahli (p. 391) ou l'azur II alcanis (p. .389). On peut alors diagnostiquer la nature pavimenteuse ou
leucocytaire des squames. On devra aussi, dans certains cas, rechercher la fibrine (p. 674).
Laver leau, passer par les alcools, le xylol et le baume.
La recherche des parasites (Acariens, Champignons) se fait surtout par
l'examen extemporan dans la potasse 40 p. 100 et mieux encore
dans les liquides de Amann (p. 579 et 715).
Rcolte par expression ou raclage
Examen des exsudais cutans.
avec la lame de verre. taler, scher, fixer et colorer. La recherche des
graisses est trs importante. Voir p. 673 les procds employer pour
les dceler et pour distinguer les olines, les palmitines, les acides gras
Coloration par
de
Unna
ip. 427), le
libres, les graisses neutres, les lcithines, etc.
CHAPITRE
VI
TECHNIQUE CYTOLOGIQUE
Il
n'y a pas proprement parler de technique cytologique car,

les cytologistes n'emploient pas, sauf pour certains cas
au fond,
spciaux, de procds particuliers. Le premier. point est d'obtenir

des lixations aussi parfaites que possible, avec du matriel bien
frais
ensuite,
il
faut pratiquer des colorations soignes avec des
mthodes rationnelles.
Si on entend par cytologie Vanaiyse chromatique, toutes les
cet ouvrage sont des mthodes cytolo-
mthodes indiques dans
giques.
Cette analyse peut envisager la rpartition des divers tissus
dans les organes et la coloration lective de certains d'entre eux.
Nous
utiliserons
alors
les
mthodes topographiques dont
les
principales sont riimaline-osine, le trichromique et le safran

de Pierre Masson, le van Gieson, les colorants du tissu lastique, etc.
Si cette analyse a pour but de rechercher la nature des lments cellulaires qui composent les tissus, nous emploierons les
mthodes cytologiques proprement dites, mais, ici encore, nous

devons faire une distinction, suivant que nous tudierons de prfrence les ractions chromatiques du noyau ou du cytoplasme et
de ses enclaves, ou bien la structure fine de la cellule. Un bon
exemple du premier cas nous est fourni par les immortels travaux d'Ehrlich sur les granulations leucocytaires, travaux qui ont
t le fondement de l'analyse chromatique cytologique et non
plus seulement topographique. Les divers perfectionnements de
mthode de Romanovsky,
la
que nous les avons exposs dans

les pages prcdentes,
reprsentent pour nous la plus haute diffrenciation actuelle de cette forme de l'analyse chromatique.
tels
6C5
Dans
ne
une diffrenciation poli/ch'ome, correspondant des affinits chimiques prosecond cas,
le
il
non encore
bables, mais
s'agit plus d'obtenir
dfinies.
On
s'efforce,
mettre en vidence des dtails de structure

coloration
au contraire, de
peu importe que
monochrome, pourvu f}ue la diffrenciation

obtenue. Je crois que l'ancienne distinction entre
colorants nuclaires et colorants cytoplasmiques a fait son temps,
la
structurale
soit
soit
au moins en ce qui concerne
les
tudes cytologiques proprement
de fond, sont trs utiles, ou mme

tudes topographiques, elles sont plutt
dites. Si les colorations, dites
indispensables, pour les
gnantes en cytologie.
plus s'eiacer.
En
outre, la distinction classique entre le
domaine cvloplasmique tend de plus en

Non seulement le cytoplasme prend une part
domaine nuclaire
et le
importante aux mouvements nuclaires, mais encore il est de plus

en plus certain qu'il renferme des formations particulires, dont
le rle est
Or
peine entrevu, mais se rvle dj
comme
essentiel.
d'ergastoplasme, de mitochondries, d'appareil rticulaire, etc., ne sont pas colorables par les
ces formations,
(ju'il
s'agisse
colorants dits cytoplasmiques
La technique cytologique proprement dite, au sens le plus troit

du mot, tend se spcialiser dans ces mthodes monochromes
qui colorent lectivement les particularits structurales du corps
cellulaire
elle comprend donc aussi bien des mthodes de colo:
ration proprement dites
de
que les imprgnations mtalliques, types

mthode monochrome.
Rappelons que la mthode cytologique fondamentale est la
la
coloration r/imaloxi/line ferrique, avec ou sans coloration de

fond. Mais cette mthode s'adresse surtout aux formations nuclaires,
elle
doit tre complte par des procds permettant de colorer
d'autres appareils
que nous
allons passer rapidement en revue.
Appareil rciculaire interne.

Imprgner par la mthode spciale
de Golg-i (p. 511). Cet appareil a t vu, non seulement dans les cellules
nerveuses, mais encore dans une foule d'autres lments normaux ou
pathologiques, si bien qu'il parait devoir tre considr comme un
organe essentiel de la cellule.
Un rcent travail du D' Aldo Perroncito fait connatre les phnomnes trs particuliers qui prsident la division de cet appareil et
'
nous apprend qu'un Mollusque,

1.
dans
trs
commun dans
les
eaux douces,
le
A. Perroncito. Mitochrondrcs, chroniidies et appareil rticulaire interne

les cellules spcrmatiques. Le phnomne de la dictvokinse. Arc/t. iial. de
bioL, LIV, p. 307-345, 3
pi.,
1911.
METHODES SPECIALES
666
Vivipanis viviparus {Paludina vivipara), prsente, dans son testicule, un

matriel remarquable pour l'lude de ces formations. Ce Mollusque est
un petit Gastropode opercul, dioquc, h coquille conique surbaisse,
sept tours de spire trs saillants, et orne de trois bandes spirales brun
fonc. Il prsente deux longs tentacules ingaux.
Pour mettre en vidence ce protoplasme suprieur,
Ergastoplasme.
propre aux cellules scrtrices i, on emploie les fixateurs ordinaires et,
de prfrence, des colorants basiques (bmatoxyline, safranine, bleu
de toluidine, bleu polychrome, etc.).

Le procd le plus lectif est celui de Benda. On
Mitochondries
fixe huit jours dans le Flemming- fort, en ayant soin d'employer de trs
petites pices. On lave une heure l'eau courante, puis on procde au
mordanage ou chromisation secondaire.
un bain de vingt-quatre
Cette opration comprend deux temps
"-.
heures, dans un mlange parties gales d'acide pyroligneux pur et

d'acide chromique 1 p. 100, puis un autre bain de vingt-quatre heures
dans le bichromate de potassium 2 p. 100. On lave ensuite l'eau
pendant vingt-quatre heures, puis on inclut la paraffine. Couper

5
coller l'eau distille et mordancer vingt-quatre heures dans
l'alun de fer 4 p. 100. Laver rapidement et colorer vingt-quatre
heures dans le sulfalizarinate de sodium (eau distille additionne de
[;.,
alcoolique de ce sel jusqu' couleur ambre). goutter

au krystalviolet aniline
sol.
et
colorer
Krystalviolet saturation dans l'alcool 70

Alcool 70", chlorhydrique 1 p. 100
Eau d'aniline sature
vol.
tendre de son volume d'eau au moment de l'emploi. Colorer cinq

minutes chaud, diffrencier une minute dans l'acide actique
30 p. 100, puis l'alcool absolu (moment dlicat) et monter au baume.
Les mitochondries sont violet intense, le reste brun rouge plus ou
moins fonc.
Tout rcemment, E, Laguesse a- propos une mthode pour la coloration vitale des mitochondries (chondriosomes) par le vert janus 3.
Cette coloration est lective, mais inconstante.
Les meilleures mthodes, pour l'tude de la karyokiKaryokinse.
nse, sont l'hmatoxyline ferrique de Heidenhain (p. 377), le trichromique de Cajal (p. 420) et en gnral les mthodes par les colorants
basiques.
A titre d'exemple d'une mthode embryologique, je donnerai la

mthode de Pierre Masson pour l'lude de l'volution des ufs de VAscaris
megaiocephala du Cheval. Ce matriel, trs facile trouver, est excellent
pour dmontrer tous les stades de la maturation, de la fcondation et de
la
segmentation.
Sectionner les oviductes
1.
et les
plonger dans un tube d'alcool au
1. Prenant. Sur le
protoplasme suprieur (archoplasme, kinoplasme, ergastoplasme). tude critique. Journ. de l'Anat. et PhijsioL, XXXIV et XXXV, 1898-1899.
Les mitochondries et l'ergastoplasme, ibid., XLVI, p. 217-285, 1910.
2. Faur-Fremiet. tudes sur les mitochondries des Protozoaires et des cellules sexuelles. Arch. Anat. viicr., XI, p. 457-648, 4 pi., 1910.
3. C. R. Soc. de biologie, LXXIII,
p. 150, 1912.
661
tiers,
maintenu Ttuve
o nagent
les
coagule Talbumine du liquide

que ceux-ci n'ont aucune tendance
37. L'alcool
ufs, de sorte
s'chapper.
2. Prlever d'heure en heure des fragments de 5 mm. de longueur et
les fixer dans le Gilson (p. 284) pur ou additionn d'un tiers d'alcool
absolu. La fixation dure trente minutes; on laisse ensuite vingt-quatre
heures dans de l'alcool absolu lgrement iod, puis on lave pendant
deux heures dans l'alcool absolu renouvel deux ou trois fois.
3. Porter les fragments dans le tolune pur, o ils s'claircissent
rapidement, pais dans un petit cristallisoir ou un verre de montre,
rempli d'une solution de paraffine dans le tolune, fondant vers 35.
Abandonner tel quel, sans couvercle, dans l'tuve 37 pendant
plusieurs jours.
Quand la masse s'est rduite et commence

immerger les pices dans de la paraffine 45, en les
agitant doucement pour favoriser la pntration. L'opration ne doit pas
4. Inclusion dfinitive.
cristalliser,
durer plus d'une ou deux minutes. Refroidir la paraffine aussi rapidement
que possible.
5.
Colorer les coupes par la mthode de Heidenhain
(p. 377).
CHAPITRE VU
ANALYSE CHROMATIQUE
ET MlCROCH]MIE
Analyse chromatique et microcliimie sont deux mthodes qu'il
importe de ne pas confondre. La microchimie proprement dite
devrait avoir pour but de caractriser les corps par des ractions
chimiques, explicables par les lois de la chimie macroscopique.
L'analyse chromatique, au contraire, se borne gnralement
dceler certains corps par des coloralions la vrit spcifiques,
mais non expliques au point de vue chimique et qui ne nous

donnent aucun renseignement sur la nature du corps ainsi rvl.
Prenant a bien fait ressortir cette importante distinction, dans
une tude d'ensemble \ au dbut de laquelle il met en garde les
histologistes conlre l'abus qui est fait du mot microchimie.
Inversement, il ne faut pas tablir une distinction fondamentale
entre ces deux mthodes, car
des
ractions
chapitre, les
la
microchimie emprunte souvent
Aussi runissons-nous, dans le mme

ractions de divers ordres (solubilit, prcipitation,
colorantes.
coloration) qui permettent de caractriser certains lmenls des

tissus, que ces ractions soient empiriques ou qu'elles correspondent des entits cliimiques dtermines. Nous tudierons
donc d'abord
culires
aux
les ractions
|)rincipales
gnrales, puis celles qui sont partisubstances qu'on ]cut tre appel
dceler dans les tissus.
Ractions gnrales.
1.
et
Alcalinit, acidit et neutralit.
les
colorations
vitales,
on
emploie
les
Pour
les tissus frais
ractifs
ordinaires
1. A. Prenant, Mthodes et
rsultats de la microchimic. Joiini. de l'Anat. et
de la PhysioL, XLVI, p. 313-401, 1910.
ANALYSE CHROMATIQUE ET MICROCIIIMIE

de
la
chimie (tournesol,
rouge
neutre,
rouge
congo,
669
etc.,
p. 252).
Un
ractif
empirique
et assez
ennuyeux prparer, mais qui donne de
Chou rouge (Brassica oleracea var. crispa).

avec les corps neutres, rouge violac lorsque la
raction est faiblement acide, pourpre lorsqu'elle est acide, jaune rougetre lors(|u'elIe est fortement acide. Les substances alcalines le font
virer au bleu pur ou verdtre et les alcalis forts le dcomposent, en lui
donnant une couleur jaune orange. Dans ce dernier cas seulement, la
l)ons rsultats est la teinture de
Ce liquide
est violet
teinte n'est pas rversible par neutralisation.

Pour prparer cette teinture ^, on hache les feuilles et
on les met
dans de l'eau qu'on chauffe lentement -|- 45-55''C. La matire colorante diffuse dans l'eau; lorsque la teinture parait assez fonce, on la
dcante et on la fait bouillir, pour la dbarrasser des albuminoides. On
ajoute une trace d'acide salicylique pour empcher la putrfaction. On
peut aussi faire simplement une macration alcoolique poids gaux,
comme le conseille Arnoldovs et, dfaut de Chou rouge, on peut
employer le jus d'Orange sanguine, additionn de son volume d'alcool.
Ces ractifs doivent agir pendant quelque temps sur des coupes de
tissus frais ou fixs par l'alcool. Ils conviennent aussi bien pour les
cellules vgtales
que pour
les cellules
animales.
Pour les tissus fixs et pour les coupes aprs inclusion, on

emploie des matires colorantes fonction acide ou basique.
Quelle que soit Texplication qu'on adopte pour expliquer le
phnomne des
teintures (p. 353), il y a des faits indiscutables,

en
faveur de rinterprtation chimique et qui fourqui plaident
nissent de srieux lments de diagnostic.
Vaicalinit peut tre recherche par la raction de Mylius

riodosine"; on dissout ce corps dans Tther ou le chloroforme et
on le met en contact cinq minutes avec les coupes aussi prives
d'eau que possible, dans des vases de verre parfaitement nettoys \
Au contact des bases, il se forme un prcipit rouge d'rythrosine.
Pour conserver la prparation, on lave Tlher plusieurs

monte au baume parfaitement neutre, car laction
rductrice du baume ordinaire dcolorerait rapidement les coupes.
reprises et on
1.
p.
Strasburger, Das botanische Practicum,
4"
dit.,
lna, Fischer, 1907; cf.
Ul.
Arnoldov, Busski Vratch, p. 480, 1906.

L'iodosine est la ttraiodo-fluorescinc, radical acide, de couleur jauntre,
le sel de sodium est rrythrosine (p. 399
4. Les silicates alcalins du verre s'isolent peu peu, au point de former la
surface des lames une gaine alcaline qui donne la raction de Mîius. Les
lames qui servent pour ces expriences doivent donc tre laves avec un acide,
par exemple le mlange de bichromate de potassium et d'acide sulfiiriquc (p. 231),
suivi de lavages l'eau distille.
2.
3.
dont
MTHODES SPCIALES
670
D'aprs Pappenheim, le bleu de Nil BB benzyl est encore

plus sensible. On peut employer aussi les mlanges acides, tels
que le bleu de mlhyle-osine de Mann, qui se fixe sur les l-
ments basiques (acidophiles).

L'acidit est encore plus facile dmontrer, cause de Tabonet de la sensibilit des colorants
basiques. Signalons,
dance
comme composs
acides (basopliiles)
granulations de Nissl dans
la
chromatine nuclaire,
les
les cellules
nerveuses, le mucus, etc.

Tous les colorants vitaux, qui sont basiques, mettent en vidence
des composs fonction acide.
La yieutralit est dcele par les colorants neutres.

Pour que ces ractions russissent, il faut oprer dans des conditions particulires, notamment en ce qui concerne les fixateurs,
ne pas oublier que certains d'entre eux, ainsi que certains
et
mordants, peuvent produire l'inversion de
la
coloration.
donc employer, pour ces recherches, des fixateurs

rents (alcool, formol, acide picri(iue).
La mtachromasie peut, dans certains
cas,
Il
faut
dits
indiff-
donner
d'utiles
Nous avons vu que Hansen (p. 368) explique chimiquement ce phnomne et que, d'autre part, Pappenheim (p. 368
et 403) admet deux sortes de mtachromasie l'une basophile,
indications.
Tautre neutrophile.
2. Corps rducteurs et oxydants.

Le pouvoir rducteur
du protoplasme peut tre dcel par la formation de leuco-composs, aux dpens des colorants vitaux (rouge neutre, bleu de
mthylne).
Les corps oxydants (oxydases) sont beaucoup plus faciles
dmontrer.
Le principal
ractif est
la
teinture alcoolique de gaac*
qui
prend une coloration bleue en prsence des oxydases. Il y a deux

cas distinguer
les oxydases vraies bleuissent directement la
:
teinture etlesperoxydases seulement aprs addition d"eau oxygne.

On peut employer aussi divers phnols qui virent la pyro:
catchine et
le
gaacol au rouge grenat,
thymol au rose,
phnolphtaline au rouge, etc.
le
le
pyrogallol au rouge orange, la

Le rcent procd de Schultze est trs sensible mais ne donne
qu'une coloration fugace

frais ou les coupes
frottis
*l.
traiter
pendant quinze minutes
fixes au formol, par
les
une solution
Cette teinture doit tre frache, faite avec de l'alcool absolu

parfaitement pur
une couleur brun fonc.
et avoir
ANALYSE CHROMATIQUE ET MICROCHLMIE

100 de naphlol
1 p.
a, acklilioniie
671
de deux gouttes de lessive de
soude, puis, pendant cinq minutes, par une solution i p. 100

de dimlhylparaplinylnediamine. Laver et examiner dans Feau
ou
la
glvcrine. Colore les leucocytes de la srie mvlode.
3.
Distinction du protoplasma
mort
et vivant.
Gela
revient pratiquer les colorations vitales (voir ce sujet p. 248,

ainsi
que
la vitalit
mi'tliode
la
d'Achard
et
Ramond pour
le
diagnostic de
des leucocytes, p. 625).
Ractions spciales.
faut d'abord librer ou
le fer combin, puis le

on traite les coupes par l'alcool
acide (acide sulfurique 4 p. 100 ou acide azotique 3 p. 100 dans
l'alcool 95). On lave l'alcool pur, puis l'eau distille et on traite
pendant cinq minutes par un mlange parties gales de fcrrocyanure
Fer.
Il
Pour dmasquer
caractriser.
le
dmasquer
fer,
(frachement prpar) et d'acide chlorhydrique

peut aussi faire ag-ir successivement ces deux ractifs
(ferrocyanure suivi de glycrine chlorhydrique). Au contact du fer il se
forme du bleu de Prusse (voir aussi p. 681). D'aprs Prenant, cette raction est la plus sre: elle russit aprs tous les fixateurs et permet de
faire ensuite des colorations, par exemple par la safranine. On peut
employer aussi le sulfocyanure de potassium qui donne, avec les sels
de fer au maximum, une coloration rouge intense et caractristique.
Cuivre.
Aprs fixation par Talcool, le ferrocyanure de potassium
de potassium
0,5 p. 100.
1,5 p. 100
Ou
donne une coloration rouge. La diphnylcarbazide est trs sensible

(Cazeneuve) et donne une coloration violette.
fixer les tissus par l'alcool
Mthode de Mac Callum
Phosphore.
et les traiter dix minutes, 35", par une solution de molybdate d'ammonium acidule par l'acide azotique, puis laver l'eau. Il se produit du
phosphomolybdate d'ammonium qui se colore en vert (oxyde de molybdne), au contact d'une solution frache de chlorhydrate de phnylhydrazine 1 4 p. 100. Le molybdate seul ne donne rien avec ce ractif
ou seulement une coloration bruntre. Voir d'autres mthodes,
729.
p.
Autant ces sels sont faciles caractriser

de calcium.
macroscopiquement, autant les procds microchimiques sont douteux
et incertains. Un des meilleurs est celui de Grandis et Mainini surcolorer dans la purpurine en solution alcoolique, puis traiter par la
solution de chlorure de sodium qui donne, au contact des sels de chaux,
du chlorure de calcium. Ce dernier prcipite la purpurine. On monte
ensuite au baume. Il faut savoir aussi que l'hmatine colore en violet
intense toutes les parties des tissus en voie de calcification.
La coloration bleue par l'iode (liquide de Lugol pur ou
Amidon.
dilu) est trop connue pour qu'il soit ncessaire d'insister.
Sels
1.
^2.
Proc. Roy. Soc, LXIII, p. 467, 1898.

Arch. ital. de biol., XXXIV, p. 73-78, 190.
METHODES SPECIALES
672
Ce corps prend, avec la solution iodo-iodure, une

Glycogne L
coloration brun acajou caractristique. Il faut employer des tissus fixs
l'alcool, cause de la solubilit du glycogne dans l'eau.
L'iode peut tre employ sous forme de gomme iode (mthodes
d'Ehrlich, de Brault) ou de glycrine iode (Barfurth). La gomme iode
se prpare en ajoutant, 200 cm^ de solution de gomme arabique,
1 gr. d'iode et 10 gr. d'iodure de potassium dissous dans 30 cm3 d'eau.
La coupe, faite dans les tissus fixs l'alcool et inclus ou non, est
recouverte de gomme iode. Aprs quinze minutes, on applique une

lamelle sur laquelle on pose un poids. Les prparations sont permanentes, mais celles la glycrine iode ne le sont pas. On peut traiter
de mme le, sang en frottis desschs ou simplement mlang la
gomme
iode.
coupes au carmin, dshydrate, puis colore le

glycogne en trois cinq minutes par le xylol iod phniqu. Pour
prparer ce dernier, mlanger parties gales de Lugol et de xylol
phniqu ( 1 p. 3) et puiser avec une pipette le xylol iod qui surnage.
En cas de surcoloration, laver au xylol phniqu. Monter au baume.
Fischer prcipite le glycogne par le tannin 10 p. 100. On y plonge
pendant dix minutes, au sortir de l'alcool, des coupes la paraffine de
tissus fixs l'alcool. Laver ensuite au bichromate de potassium,
Driessen colore les
10 p. 100. On
1
p. 100 qui permet d'liminer le tannin, puis
peut alors laver l'eau, car le glycogne est devenu insoluble. Colorer
la safranine aniline et monter au baume. Le glycogne seul est
d'abord
rouge
brillant.
Dgnrescence amylode.
1.
Raction de Viode.
La matire amy-
rapproche du glycogne par la teinte brun acajou qu'elle prend

au contact de l'iode; mais elle s'en distingue parce qu'elle est insoluble
dans l'eau, ne prcipite pas par l'alcool et ne disparat pas aprs la
mort. On traite simplement les coupes ou les tissus par le Lugol et on
observe dans l'eau iode.
lode se
2.
L'acide sulfurique 1 p. 100

Raction de Vacide sulfarique iod.
au bleu violac ou au noir verdtre la teinte que le glycogne
fait virer
a prise au contact de
3.
l'iode.
Raction mtachromatiquc.
On
peut utiliser aussi les proprits
mtachromatiques de la matire amylode (p. 366); si on colore par le

violet de mthyle ou de gentiane, les parties dgnres sont rouges;
avec la thionine et le crsyl violet RR elles sont bleues; avec le vert
de mthyle, le vert d'iode, elles sont violettes. 11 ne faut pas oublier
que la mtachromasie peut disparatre par l'action de l'alcool absolu
et que, pour le diagnostic de la dgnrescence amylode par ce procd, il faut examiner les coupes dans l'eau, le sirop de lvulose ou le
sirop d'Apathy. La topographie des lsions doit toujours tre tudie
avec la mthode l'hmatine-osine.
Ressemble la collode, se gonfle par
Dgnrescence hyaline.
l'acide actique, se colore par le carmin neutre. On peut la dceler par
la mthode de Kiihne
les tissus fixs l'alcool sont colors, au sortir de
l'alcool, dans un mlange de neuf parties de solution alcoolique sature
1.
Outre le travail de Prenant cit plus haut, voir encore
Vastarini {Atti d. H. Accad. mecl.-c/iir. di NapoU, 1909) et de P.
f. oiss. Mikr., p. 513, 1909).
les
revues de
Mayer
{Ztschr.
ANALYSE CHROMATIQUE ET MICROCHIMIE
673
d'une partie d'une solution de carbonate d'ammonium

1 p. 100. On lave et on passe deux minutes au Lugol, puis on diirencie par une solution sature de fluorescine dans l'alcool absolu.
Xylol. Baume. Les parties dgnres se colorent en rouge, le reste en
de cristal violet,
et
violet ple.
L'hmatine-osine met
de ces parties dgnres.
bien en vidence
trs
la
structure vitreuse
Se gonfle dans l'acide actique, se

Dgnrescence collode.
brun (sans rduction) par l'acide osmique, en verdtre par la
thionine et le bleu de Unna. En somme, il n'y a pas de raction carac-
colore en
tristique de cette dgnrescence.

La tumfaction trouble est assez mal caractrise par la prsence de
dbris granuleux qui prennent tous les colorants. A l'tat frais, les
noyaux disparaissent par l'action de l'acide actique; les colorants

(Sudan III) et les dissolvants des graisses ne donnent aucun rsultat.
La ncrose est surtout acidophile et se colore d'une faon diffuse.
Nous avons dj dcrit (p. 65.d) la
Dgnrescence graisseuse.
manire de colorer les graisses dans les tissus. En ce qui concerne
de Vacide osmique, ajoutons que, d'aprs les rechercbes de Mulon

permet de distinguer deux groupes
unes noircissent fortement et sont
riches en trioline, les autres (par exemple les lcithines) prennent
seulement une teinte bistre, parce qu'elles sont pauvres en oline et
l'action
(cites plus haut p. 6oG), ce corps

les
parmi les graisses animales
:
constitues surtout par la tripalmitine et la tristarine. En outre, ces

dernires noircissent au moment du passage l'alcool (coloration
secondaire) et demeurent pourtant trs sensibles l'action des dissolvants. Pour reconnatre la nature d'une graisse, Mulon conseille de
fixer au Bouin, de couper par conglation, de colorer vingt-quatre heures
par l'acide osmique, de laver six heures l'eau distille et de laisser
vingt-quatre heures dans l'alcool. On examine dans la glycrine, on

compare d'autres coupes non passes par l'alcool et on juge de la
richesse en oline.
Acides gras libres.
Us forment avec
l'actate de cuivre
un
sel
vert insoluble. On peut donc, d'aprs Benda, fixer dans du formol

10 p. 100, additionn de 1 p. 100 d'actate de cuivre, puis, aprs deux
quatre jours, couper par conglation, colorer la graisse au Sudan et
les noyaux l'hmatine. Les cristaux d'acides gras seront verts. En
outre les acides gras prennent le Gram, ce qui les distingue encore des
graisses neutres.
Verser sur les coupes de l'acide sulfurique

Cholestrine.
la cholestrine se colore en rouge carmin. La couleur est
30 p. 100
bleue si on a trait d'abord par le Lugol.
Se colore en bistre par l'acide osmique et prsente la
Lcithine.
coloration secondaire aprs passage l'alcool. Sur des coupes fraches,
en lumire polarise, elle parat birfringente au bout de quelques
:
instants.
Cette substance n'est pas gonfle par l'acide actique,

Mucine.
mais rtracte sous forme de tranes brillantes. Un autre caractre
essentiel est sa mtachromasie elle se colore en rouge avec le violet de
mthyle, la thionine, le bleu de toluidine, le bleu polychrome de*
;
Unna (p.
Un des
427).
meilleurs ractifs du
M. Langeron.
mucus dans
les
coupes est
le
muci-carmin
43
METHODES SPCIALES
674
i. Voici coinnieiit P. Massoii - conseille de l'employer

fixer au
colorer par riimatoxyline ferri([ue de Weigert, diffrencier
dans l'alcool chlorhydricjue, laver l'eau, puis colorer deux heures
froid, dans une solution a([ueuse d'auranlia 1 p. 100. Laver et colorer
de Mayer
Bouin,
encore deux heures froid dans le muci-carmin de Griibler 1 p. 100.

Rincer et colorer trente secondes dans le carmin d'indigu picrique
(0,10 p. 100 de sol. aq. sat. d'acide picrique). Laver deux minutes dans
l'eau actifle (2 gouttes p. 50). Alcool
00'',
alcool absolu, diffrencier
douze vingt-quatre heures dans le xylol. Le tissu conjonclif est bleu,

le mucus rouge vif, les muscles sont jaunes et les noyaux noirs.
on le
Un autre ractif du mucus est la inuchinatine de Mayer
prpare comme le glychmalun (p. 370), en employant les produits
'^
suivants
Hmatine de Geigy
Glycrine
Eau
distille
Chlorure d'aluminium
gr. 2.
40
60 cm3.
gr. 2.
Ce liquide, employ pur, colore lentement le noyau et le cytoplasme,

mais trs rapidement et en bleu violac intense le mucus et le contenu
des cellules caliciformes.
Le trichromique de Prenant (p. 423) est excellent aussi. Fixer au
Bouin. Colorer fortement par l'osine, puis l'hmatoxyline ferrique.
Colorer rapidement (deux trois secondes) par le vert lumire en
solution hydro-alcoolique concentre. Diffrencier l'alcool. Le mucus
est color
en
vert.
Gonfle par l'acide actique qui la rend homogne; forme

Fibrine.
des rseaux par coagulation (p. 642). Se colore gnralement par les
couleurs acides. Pour la dilfrencier dans les coupes, employer la
mthode de Weigert fixer l'alcool, colorer dix minutes dans le violet
de gentiane saturation dans l'eau d'aniline, laver l'eau, passer
:
le Lugol, scher au buvard et diffrencier dans

pure ou tendue de son volume de xylol. Laver au
xylol et monter au baume. La fibrine est colore en violet fonc.
Herxheimer* colore vingt secondes sur lame par une solution aqueuse
d'alizarine 2 p. lUO, puis traite une minute par l'actate d'uranyle
2 p. 100. Laver l'eau, alcools, xylol, baume.
Voir p. 654, les ractions caractristiques de l'orcine et
lastine.
de la fuchsline. Insoluble dans les acides et les alcalis dilus. Soluble
dans l'acide chlorhydri({ue concentr. Difficilement soluble par digestion
cinq minutes dans

l'huile d'aniline
artilicielle.
lment essentiel des fibres conjonctives des Vertbrs.

Collagne.
Insoluble dans les acides tendus et les alcalis concentrs. Se gonfle
dans les acides et les alcalis dilus. Rsiste la digestion tryptique
mais se dissout dans la pepsine chlorhydrique. Pour les ractions
colorantes, voir p. 652.
3IUth. zoul. Station Ncapel, XII, p. 3-20. 1896.
Bull. Min. Soc. anat., XH, p. 901-905, 1910.
Mitth. zool. Station Neapel, Xll, p. 307, 1896.
4. Munch. med. Wocli., n" 33, 1909.
1.
^2.
3.
ANALYSE CHROMATIQUE ET MICROGHIMIE
675
Existe chez beaucoup d'Invertbrs, chez certains Protozoaires et certains Champignons. Insoluble dans les acides minraux
dilus, les alcalis concentrs, l'oxyde de cuivre ammoniacal (ractif de
Schweizer). Soluble dans les acides minraux concentrs et les hypochlorites de potassium et de sodium en solutions concentres. L'iode,
en solution dans le chlorure de calcium (chlorure de calcium 16,
eau 4, iodure de potassium 0,5, iode 0,05), la colore en rouge violac.
Chitine.
Les acides minraux concentrs la transforment en glucosamine.

Substance jauntre, semi-liquide, qui caractrise les
leidine.
cellules des couches superlicielles du corps muqueux. Se prsente sous
forme de granulations qui rduisent l'acide osmique. Se colore lectivement en -rouge intense par le rouge congo en solution aqueuse
la couleur vire au bleu par les acides faibles. En colorant par
I p. lUO
kratohyaline bleue.
72-3, noie 4).
Forme la masse principale des ongles, cbeveux,
Kratohyaline.
poils, couche corne, etc. Se distingue de l'ledine parce qu'elle ne se
colore ni par le congo, ni par l'alkanna, mais par l'hmatoxyline et le
carmin. Elle est insoluble dans les acides dilus et les alcalis et rsist
la digestion artificielle.
Il s'agit souvent de distinguer le pigment paluden
Pigments.
i
(hmozoine) de la mlanine. Brovvn a indiqu les ractions suivantes
les oxydants, tels que le permanganate de potassium et l'eau oxygne,
dcolorent la mlanine, mais non le pigment paluden. Ce dernier est
soluble dans la potasse alcoolique tandis que la mlanine ne l'est pas.
II faut savoir en outre que le pigment paluden est birfringent (p. 521),
qu'il est soluble dans le sulfhydrate d'ammoniaque et qu'il ne donne
le
congo
et l'hmatoxyline, l'ledine est rouge, la
L'ledine se colore aussi par la teinture d'alkanna (p.
la raction du fer.
Le pigment ocre, qu'on trouve dans les organes des paludens, des
malades atteints de cirrhose de Hanot, etc., n'est pas soluble dans la
potasse et donne la raction du fer (p. 671).
Dans les ancien foyers hmorragiques, on trouve des
Bilirubine.
cristaux, en forme de rhombodres ou de fines aiguilles, qu'on dsignait
autrefois sous le nom dlimatodine il est dmontr maintenant que ce
corps est identique la bilirubine. Ces cristaux sont insolubles dans
l'eau, trs peu solubles dans l'alcool, l'ther, l'acide actique, trs
soluhles dans le chloroforme. Us sont solubles dans l'ammoniaque, la
les cristaux
potasse et la soude. L'acide azotique agit comme oxydant
s'entourent d'une zone verle, due la transformation de la bilirubine
en biliverdine. Ce corps ne donne pas la raction du fer, mais on trouve
aussi, dans les foyers hmorragiques, du pigment ferrugineux dcelable par la raction du bleu de Prusse (p. 671).
Hmine.
L'hmine, ou chlorhydrate d'hmatine, a une grande
importance pratique, car elle permet de dterminer la prsence du sang,
lorsque celui-ci n'est pas reconnaissable l'examen microscopique
direct. S'il s'agit, par exemple, de sang dessch, on l'humecte avec
une solution concentre de chlorure de sodium et on ajoute de l'acide
actique cristallisable. On chauffe lgrement, sans faire bouillir, et on
laisse refroidir. 11 se produit une double dcomposition, qui donne
naissance de l'actate de sodium et de l'acide chlorhydrique.
pas
1.
Journ. exper.
yned.,
XIII, p.
-290,
1911.
MTHODES SPCIALES
676
Celui-ci se
combine l'hmatine pour former de Thmine, qui
prcipite
sous forme de tablettes rhombodales angles aigus, de couleur bleu

noirtre (cristaux de Teichmann). Oprer sous lamelle, pour rendre
l'vaporation plus lente et avoir des cristaux plus volumineux.
Cette substance est mtachromatique. D'aprs A. Meyeri,
Volutine.
pour distinguer, dans les Bactries, le noyau des grains de volutine,
colorer par le bien de mthylne, puis traiter par l'acide sulfurique
1
p. 100. Le noyau et le cytoplasme se dcolorent, la volutine seule
reste colore.
1.
A. Aleyer, Die Zelle dev Bakterien. Jena, Fischer, 1912.
CHAPITRE
MTHODE
VIII
DES INJECTIONS
PHYSIOLOGIQUES^
Les injections de substances colores solides ou liquides,
elTeclues dans la cavit gnrale ou le systme circulatoire des
animaux
gistes,
vivants, ont t utilises, surtout par les histo-pliysiolole but de faciliter l'tude de la
phagocytose et de
dans
Texcrtion-.
Les corps
colors injects
lant des substances trangres
l'organisme, se
comportent physiologiquement
normaux
l'activit
de
vitale
(lments
comme
ou
vieillis
les
dchets
mortils,
produits d'excrtion normaux, toxines, etc.). Ils sont, par raction

dfensive de
Tindividu, ra|)idement limins. Les cellules
I)hagocytaires capturent les particules solides et les cellules
excrtrices soutirent de l'organisme les liquides colors injects.
Dans les deux cas, les lments actifs se chargent des ractifs
employs, ils se colorent donc et, de ce fait, ils sont facilement

mis en vidence. En suivant pas pas les diverses phases des
phnomnes, on peut saisir le mcanisme de la phagocytose et
de Texcrtion.
En rsum,
l'emploi judicieux et critique de
injections physiologiques
permet
la
mthode des
Je dois l'aimable obligeance de M. le Professeur Bruntz les documents

que renferme ce chapitre. Je suis heureux de lui en tmoigner ici toute ma recon1.
naissance.
2. Pour la recherche
des organes excrteurs, indpendamment des injections
physiologiques, on peut obtenir quelquefois de trs bons rsultats, avec certaines
espces animales, en les faisant vivre dans de l'eau colore ou tenant en suspension une poudre colore (carmin) ou encore en arrosant leur nourriture avec
une solution colore (bleu de mtliylnc). Une petite quantit des colorants peut
tre absorbe, passer dans le sang et aller s'accumuler dans les
organes excrteurs. Cette mthode de recherches est trs
prcieuse, elle est essayer quand
les animaux sont de trop petite taille
pour pouvoir tre injects.
MTHODES SPCIALES
678
D'ludier
le
mcanisme de
trangres l'organisme;
2" De dcouvrir des cellules
isoles
des substances
phagocylaires ou excrtrices,
ou groupes en organes;
De
rliminatioii
reconnatre
le
rle liminateur d"organes
connus pour
possder d'autres fonctions.

L'limination d'un colorant inject a t aperue pour la premire
par Ghrzonsczewski (1864). Cet auteur, ayant inject du carmin
ammoniacal dans les veines d'un Chien, dans le but d'tudier l'anatomie du rein, constata que le ractif s'liminait. Les premiers auteurs
ayant utilis la mthode des injections physiologiques furent Heidenhain (1874), von Wittich (1875), Nussbaum (1878), etc., qui exprimentrent chez les Vertbrs mais la mthode fut galement employe
de bonne heure chez les Invertbrs par Schindler (1878), Solger (1881),
Kovalevsky (1889), etc. Il faut renoncer citer tous les auteurs qui, au
cours de leurs recherches, utilisrent la mthode des injections physiologiques. Ceux qui s'occuprent principalement de la technique et qui,
l'aide de la prcieuse mthode dont nous parlons, firent des travaux
d'ensemble, sont peu nombreux, ce sont surtout Kovalevsky i, Gunot ~
fois
et
Bruntz
-^
Pour exprimenter,
il
faut
i Faire choix des ractifs colors solides ou liquides injecter,

suivant qu'on veut tudier la phagocytose ou l'excrtion;
2 Pratiquer les injections.
I.
- RACTIFS
utilisables
sont assez nombreux. Ils doivent
1*^ n'tre
aux exigences suivantes
pas ou presque pas
2
ne
se
dans
pas
dcomposer
l'organisme, ne pas se
toxiques;
dissoudre (quand il s'agit de recherches concernant la phagocytose)
Les
ractifs
satisfaire
Kovalevsky, Beitrag zur Kentniss der Exkretionsorgane. Biol. CenSur les organes excrteurs chez les Arttiropodes terIX, p. 33, 1889.
restres. Coiifir. internat, de zool. Moscou, 'i" session, 1" partie, p. 187, 1892.
'i.
L. Cunot, tudes physiologiques sur les Gastropodes pulmons. Arch. de
ludes physiologiques sur les Oligochtes. Arch. de
biol., XII, p. 683, 1892.
L'excrtion chez les Mollusques. Arch. de biol., XVT,
biol., XV, p. 79, 1898.
1.
A.
tralbl.,
p. 49, 1900.
tudes physiologiques sur les Orthoptres. Arch. de biol., XIV,

Les globules sanguins et les organes lymphodes des Invertbrs.
Arch. anut. micr., I, p. 153, 1897.
Contribution l'tude de l'excrtion chez les
Sur le rle excrteur des celArthropodes. Arch. de biol., XX, p. 217, 1904.
3.
L. Bruntz,
p. 293, 1896.
lules (nphrocytes) qui liminent les liquides colors des injections physiologiques. Ann. se. nat. Zool., X, p. 265, 191U.
MTHODE DES INJECTIONS PHYSIOLOGIQUES

OU ne pas
se prcipiter (lorsqu'il s'agit de
679
recherches concernant
Texcrtion) 3 tre trs vivement colors, afin que Texprimentateur ne soit pas oblig d'en injecter une grande quantit, ce qui,
;
dans ce cas, troublerait Tquilibre des liquides de l'conomie.

Dans la pratique, on n'emploie qu'un petit nombre de ractifs,
que nous citons dans leur ordre d'importance, en distinguant
la
phagocytose, de ceux qui servent
pour
l'tude de la phagocytose.
ceux qui servent l'tude de

l'tude de l'excrtion.
Ractifs colors
A.
Encre de Chine.
Ce
prpare au
ractif se
moment du
besoin, l'aide d'un bton d'encre solide qu'on triture dans un

verre de montre, avec un peu d'eau ou de srum arlificiel. Les
encres sont celles qui fournissent les particules les

comparaison entre diverses encres peut se faire au
meilleures
plus fines; la
faut
Il
microscope.
viter
commerce, sauf celle qui

L'encre
Chine
de
d'employer
est destine la
est
le
meilleur
encres liquides
les
mthode de Burri
ractif
(p.
du
699).
employer dans la
le manie-
recherche des organes phagocytaires, c'est celui dont
ment
est le plus facile.
Poudre de carmin.
morceaux.
carmin en
On
Dans
prpare
le
le
commerce, on trouve
ractif en
le
pulvrisant le
carmin dans un mortier, en tamisant finement le produit et en le

mettant en suspension dans de l'eau dislille. On prpare un
ractif plus
fui,
en faisant dissoudre du carmin dans de l'eau
en vaporant le liquide l'tuve. Pendant cette

opration, le carmin se prcipite. Le prcipit est
ammoniacale
dernire
et
un
lav et mis en suspension dans de l'eau

obtenir le prcipit de carmin
galement
peut
en ajoutant, la solution ammoniacale, de l'acide actique tendu,
en vitant de redissoudre le carmin.
Le tournesol pulvris et finement tamis, mis
TournesoL
recueilli sur
filtre,
On
distille.
eu suspension dans de l'eau, conslitue un ractif prcieux, parce

la coloration des particules phagocytes indique, par virage,
raction des cellules phagocytaires. Le tournesol est un produit
dont on ne peut injecter que de petites quantits, car il est
que
la
toxique,
comme
galement
le
tournesol d'orcine de de Luynes, qu'on peut
utiliser et qui prsente l'avantage d'tre plus sensible.
MTHODES SPCIALES
680
Ce ractif s'extrait de
Noir de Seiche (Encre de Seiche).
la poche de noir du Sepiu offidualis. Les Seiches pclies sont
conserves sec, pour qirelles ne rejettent pas leur encre. A la
suite d'une dissection des animaux morts, on retire les poches,
le contenu dans un rcipient. On laisse desscher
pour Tusage, au moment du besoin, on triture dans de
l'eau un peu de la masse pulvrulente.
dont on vide
Tencre
et,
On peut encore
utiliser,
moins recommandables,
comme
tels
amidon de
que
divers produits beaucoup

bleu de Prusse, le vermillon, un
mis en suspension dans de Teau. Ces
ractifs,
le
petite taille (riz), etc.,

ractifs, ainsi que ceux que nous avons numrs plus haut, se retrouvent en place dans les cellules, sur des coupes histologiques. On a
les injections de lait, d'mulsions huileuses, de
spermatozodes et d'hmaties. Un meilleur procd consiste injecter
des bouillons de culture de Bactries, autant que possible de grande
taille. Avant leur destruction, il est facile de retrouver les Bactries
dans les cellules phagocytaires, en utilisant les colorants usits en bac-
employ galement
triologie.
B.
Ractifs colors
pour
l'tude de l'excrtion.
Carmin ammoniacal (Carminate d'ammoniaque).
Ce
en pulvMsant le carmin dans un mortier. On y

ajoute assez d'eau pour former une pte fluide et ensuite quelques
gouttes de la solution ammoniacale du commerce, en quantit
suffisante })Our dissoudre le carmin puis on tend la liqueur avec
ractif se prpare
de l'eau, de faon obtenir un ractif trs liquide et trs color.

La solution se conserve ainsi. Au motnent du besoin, on en
la
prlve une partie, qu'on vapore lentement l'tuve jusqu'
on
On
laisse
de
l'odeur
ammoniacale.
totale
refroidir,
"disparition
on utihse de suite.
Le carmin ammoniacal
filtre et
a t trs em}doy par tous les auteurs

ayant tudi l'excrtion. Ce ractif est trs prcieux car, aprs
fixation, il demeure en place dans les cellules excrtrices et
se retrouve
sur des prpaiâlions bistologiques, si on a eu soin

peu ou pas acides (le meilleur employer
d'utiliser des fixateurs

est la solution
aqueuse sature de sublim). Les coupes peuvent
tre colores par une solution aqueuse tendue d'hmaloxyline;

la coloration devra tre surveille, car il faut viter les dcolorations l'alcool acide.
Les coupes peuvent tre colores aussi
l'hmatoxvline et au vert lumire ou au brun de Bismarck.
681
Carmin
La solution aqueuse assez concentre

d'indigo.
carmin d'indigo donne de bons rsultats dans Ttude de
Texcrlion. Ce colorant ne se dissout pas dans Teau sale et,
de
comme
carmin ammoniacal, il se prcipite quelquefois aprs

Le carmin d'indigo n'est gnralement pas visible en
place dans les cellules excrtrices, car il s'limine souvent
Ttat de leucodriv, mais il se retrouve dans la lumire des
le
l'injeclion.
organes liminateurs, sur le frais et sur les coupes histologiques.

Dans ce dernier cas, la- fixation doit tre faite Falcool absolu.
de
Le collage des coupes sur les lames s'eiectue par le collodion

Schllibaum (p. 350). Pour colorer, user d'une solution
d'osine dans Talcool absolu.
Tournesol soluble.
Ce raclif se trouve dans le commerce; il
donne avec l'eau une solution limpide, qui n'est pas toujours trs bien
supporte par les animaux auxquels on Tinjecte, mais qui prsente
l'avantage d'indicfuer, par virage, la nature de la raction chimique
des cellules excrtrices.
Colorants artificiels.
Parmi
les
nombreux
colorants artificiels
qu'on emploie en solution dans la solution physiologique, l'eau de mer,

le sang de l'animal injecter, ou beaucoup j)lus simplement dans
le bleu de mthylne, la fuchsine acide, la
l'eau, les plus usits sont
.
la
vert
lumire, le vert d'iode, le rouge Congo,

VEchtroth, Valicarine, etc.
Le bleu de mthylne, limin par certaines cellules, peut se retrouver
sur des prparations fixes et sur des coupes histologiques. Fixer les
pices au molyhdate d'ammoniaque (solution aqueuse 5-8 p. iOO) ou
au chlorure de platine (solution aqueuse 1 p. 100) ou l'aide de
safranine,
vcsuvine,
le
employs pour l'tude hislologique du systme nerveux par la mthode d'Ehrlich. Colorer les coupes au carmin boracique.
La fuchsine acide, l'alizarine et le rouge Congo limins, indiquent
ractifs plus lins,
la raction des cellules excrtrices.
En
milieu alcalin, la fuchsine acide
se dcolore
compltement (p. 398) et se recolore en rouge vif par addition d'acide actique. Dans le mme milieu, l'alizarine prsente une
teinte violace, le rouge Congo une coloration rougetre. En milieu
acide, l'alizarine passe au jaune ou au rouge orang et le rouge Congo
prend une coloration bleutre (p. 252).
Indpendamment des ractifs colors cits, on peut employer aussi,
dans les recherches concernant l'excrtion, des injections de solutions
aqueuses de sels organiques de fer (laclate, tartrate, saccharate, etc.).
Ces sels sont fixs par les cellules excrtrices; celles-ci sont facilement
mises en vidence, lorsqu'on les traite de faon obtenir la raction
du bleu de Prusse. La technique est la suivante injecter une petite
quantit d'une solution concentre d'un sel de fer; sacrifier l'animal
douze quinze heures aprs, dissquer et arroser les tissus avec
:
une solution aqueuse de ferrocyanure de potassium 1,50 p. 100.

Laisser agir pendant un quart d'heure, puis verser sur la
prparation
de l'acide chlorhydri([ue tendu (0,5 p. 100); laisser agir pendant un
METHODES SPECIALES
682
quart d'heure, laver l'eau sale et fixer au sublim. Coloration des

coupes au carmin boracique.
Dans Ttude exprimentale des organes excrteurs, on utilise quelquefois, en injections, des mlanges de deux solutions colores (par
exemple, carmin ammoniacal et carmin d'indigo). Ces mlanges ne

doivent naturellement pas donner de prcipits.
Enfin, les mlanges de poudres et de liquides colors (par exemple,
encre de Chine et carmin ammoniacal) sont aussi trs employs, ils sont
indispensables la recherche des cellules la fois excrtrices et phagocytaires (nphro-phagocytes de Bruntz).
II.
En
PRATIQUE DES INJECTIONS
ce qui concerne
la
pratique des injections, aucune
rgle
gnrale ne peut tre formule. Suivant la taille des animaux

avec lesquels on exprimente, on utilise les seringues ou, le })lus
souvent,
un simple tube de verre effil (voir pipette double effiLa pointe doit tre plus ou moins fine et plus
lure, p. 486, note 1).
ou moins
rsistante, suivant la taille de l'animal et l'paisseur de
En s'aidant d'une loupe, on peut, quand on a acquis

une certaine habitude, injecter des animaux excessivement petits.
On doit faire des blessures aussi lgres que possible et viter toute
ses tguments.
perte de sang.
L'injection se
soit
mme
suivant les cas, soit dans la cavit gnrale,
fait,
systme circulatoire sanguin ou lymphatique. L'endroit

de l'injection est dtermin par des considrations anato-
dans
le
miques.
Les quantits de ractif injecter varient aussi avec la taille et
la rsistance des animaux; elles doivent toujours tre assez petites
pour ne pas troubler profondment l'tat physiologique de l'organisme. Certaines espces sont particulirement sensibles l'action
de quelques
ractifs.
Pour qu'une exprience
soit
bien russie, l'animal ne doit pas

il doit se remettre
sembler souffrir de l'injection ou, du moins,

trs vite.
Il est
quelquefois avantageux, pour obtenir des prparations
bien dmonstratives, de faire subir, un mme animal, deux
injections, soit
du
mme
ractif,
soit
de
ractifs
diffrents.
La
premire injection charge surtout les organes excrteurs ouverts

va s'accumuler de prfrence
(reins, foie), tandis que la seconde
dans
les cellules closes
ou nphrocytes.
III.
RSULTATS
683
DES INJECTIONS
PHYSIOLOGIQUES
La phagocytose des parlicules solides injectes est toujours
rapide et quelquefois complte au bout de quelques minutes, si la
quantit de ractif utilis n'a pas t trop forte.
L'limination des liquides colors par les cellules
s'effectue plus
ou moins
vite,
excrlrices
suivant les espces animales consi-
du ractif employ. En r-'^gle gnVertbrs liminent plus vite que les Invertbrs et les
dres, et suivant la nature

rale,
les
animaux
chaud plus vite que ceux sang froid. Le carmin

rapidement excrt, le carmin ammoniacal Test
plus lentement; dix minutes peuvent suffire Tlimination du
premier ractif, alors que six douze heures sont quelquefois
sang
d'indigo est trs
ncessaires pour Tlimination du second.

La marche de Flimination des ractifs
suivie chez des
animaux transparents. Par
injects peut tre

suite de la circulation
du ractif, peu de minutes aprs l'opration, Tanimal se montre

uniformment color, puis la dcoloration se fait plus ou moins
vite, et, au bout d'un certain temps, seuls demeurent colors les
cellules ou les organes fixateurs du ractif (sauf quelques causes
d'erreurs signales plus loin).
L'examen des cellules et des organes peut se faire sur le vivant,
si les animaux sont
transparents, ou sur des dissections dans le cas
contraire. Les tissus peuvent tre examins sur le frais, dans
une
goutte de sang ou de solution physiologique, ou, dans certains cas,

aprs fixation et mme sur des coupes histologiques. Les cellules
phagocytaires renferment les particules solides dans les mailles ducytoplasme ou dans de fines vacuoles. Les cellules excrtrices
montrent
les Hquides colors fixs dans une ou plusieurs vacuoles

ou sur des boules ou grains de scrtion.
IV.
LES CAUSES D'ERREURS
Les injections physiologiques ne donnent de rsultats lidles

qu'entre des mains parfaitement excerces.
Pour
par
viter
une mauvaise interprtation des donnes fournies
les expriences, diffrentes
causes d'erreurs sont signaler.
MTHODES
684
SPfclGIALES
En ce qui concerne la phagocytose, des embolies formes

d'amas de globules sanguins, ayant captur les particules solides,
peuvent tre prises pour des organes pbagocytaires. Ce fait est
d'autant plus frquent que, pour des raisons anatomiques et
aux
physiologiques, les embolies se reproduisent gnralement
mmes
endroits.
Quelquefois, une partie du produit inject se dissout et s'limine

alors par des cellules excrtrices qui peuvent tre prises, tort,
pour des lments pbagocytaires.
Ainsi,
les
bmaties
cdent
toujours de Thmoglobine et souvent aussi une petite quantit de

carmin inject se dissout la faveur de l'alcalinil du sang.
En ce qui concerne Vexcrtion, il faut se mettre en garde
contre les phnomnes d'absorption, de phagocytose, de coloration

diffuse et de coloration instantane.
Pour viter l'absorption des ractifs colors, il faut empcher

animaux injects de se lcher ou de boire le ractif et il faut
les
aussi ne pas pousser les injections dans le tube digestif ou dans
organes glandulaires qui en dpendent.

peut arriver, par suite de ractions entre substances collo-
les
Il
dales, que les ractifs employs la recherche des organes

excrteurs prcipitent dans le corps de l'animal. Ces prcipits
sont capturs par des cellules pbagocytaires, qui ne doivent
pas
tres
prises
pour des lments
excrteurs.
Avec un peu
d'habitude, on distingue facilement, par comparaison, un ractif

(le carmin par exemple) phagocyt, du mme ractif excrt.
Quelques solutions colorent souvent d'une manire
diffuse des
formations spciales, lments cellulaires ou non. Par exemple, le

carmin ammoniacal colore trs lectivement la substance fonda-
mentale du cartilage,
le
chorion des ufs
et certaines fibres
con-
jonctives; le bleu de mthylne se fixe sur le systme nerveux; la

garance sur la substance fondamentale des os, etc. Dans ces cas,
la
substance colorante n'a pas t excrte; il s'agit l de colorafournies par un simple phnomne de teinture,
tions dituses,
rsultant,
comme
la
plupart de ces phnomnes, de
la
prcipitation
de granules collodaux.
Quelques ractifs, le bleu de mthylne, le rouge neutre, etc.,

en prsence d'lments cellulaires frais, peuvent colorer
mis
des granulations cytoplasmiques. Ces colorations sont brutales,

instantanes
ce sont encore des phnomnes de teinture et non
:
des })hnomnes de scrtion. Ces

phnomnes de teinture ne
685
sont du reste possibles que chez des cellules tues ou rendues

malades par des ractifs.
Une longue pratique de la mthode des injections physioloUne

gique, a conduit Bruntz formuler le principe suivant
cellule, colore la suite d'une injection pliysiologique, sera
:
dclare excrtrice
si
le
colorant inject a t fix lective-
dans une ou plusieurs vacuoles, soit sur des boules ou

des grains de scrtion; 2 si la cellule est demeure bien vivante
chez un individu parfaitement sain. Les cellules, dont les noyaux
ment,
soit
ou le cytoplasme ou quelquefois des granulations se sont colors

d'une manire diffuse, sont des cellules mortes ou malades; 3 les
phnomnes de fixation des colorants, quoique rapides dans certains
cas,
ne se sont pas produits instantanment. C'est
vritable processus glandulaire.
Tindice d'un
CHAPITRE
IX
TECHNIQUE MICROSCOPIQUE
MDICO-LGALE
Recherche du sang.
Examiner
les taches
de sang
frais
en
solution physiologique ou dans le liquide de

Marcano (p. 63^), mais jamais dans l'eau distille qui dtruit les
hmaties. Mesurer les globules pour les dterminer. Les taches
les diluant
dans
la
anciennes pourront tre dissocies sur lame, dans la potasse

30 p. 100 ou le Hquide de Pacini (eau 300, glycrine 100, chlorure
de sodium 2, sublim
d).
Enfin on fera
raction des cristaux
la
et la graisse empchent cette raction

(p. 675). La rouille
de russir. Ces recherches sont souvent hrisses de difficults et
d'hmine
faire de nombreuses expriences comparatives, avec

du matriel d'origine connue. Les taches de sang digr par les
on fera bien de
Arthropodes piqueurs ne renferment plus d'hmaties reconnaissabls.
La mthode spectroscopique
les
et
celle des prcipitines
devront
renseignements fournis par le microscope.

des poils.
L'emploi des milieux claircissanls de
complter
Examen
Amann pourra
rendre de grands services; ils donnent des prmoins

parations
fragiles et plus durables que la potasse ou que
les acides (acide
azotique dilu). Les parties mettre en vidence
sont les cellules cuticulaires, la couche

mdullaire.
Chez
VHomyne^
les
poils sont hsses,
cuticulaires ne sont pas saillantes.
plus dveloppe que

1.
in-8<>
Lambert
de 236
la
et Balthazard,
p., 34 pi., 1910.
moyenne
et la
substance
cellules
parce que les
La couche
corticale est
beaucoup
substance mdullaire; cette dernire est
Le poil de l'Homme
et des
animaux. Paris, Steinheil,
TECHNIQUE MICROSCOPIQUE MEDICO-LEGALE

souvent
dans
Au
trs
peu
visible.
11
687
n'y a pas de changements brusques
la coloration.
contraire, chez les
animaux,
gnralement den-
le poil est
des cellules culiculaires, la substance mdulpar

laire est trs visible et il y a des variations de couleur trs brusques.
tel
les saillies
Les coupes de poils se font trs bien aprs inclusion dans la

La dtermination repose sur des comparaisons avec des
paraffine.
chanlillous types.
Examen
Voici quelques mthodes

des taches de sperme.
les
donnes
fournies par Texamen
rcentes, qui complteront
direct des taches dissocies dans Facide actique 5 p. 100, ou
la solution
physiologique.
l'encre de
Chine
Mthode
Mthode de Gasis'.
fragments
sublim
et les faire
1
p.
700).
(p.
Kajima*, pour examiner le produit de

solution physiologique ou Feau actifie.
la
Prconise par
macration dans
la
Dcouper l'toffe tache en petits

macrer cinq minutes dans quelques cm^ de
100, acidul par l'acide chlorhydrique. Presser
doucement avec un agitateur. Prlever une goutte, taler, scher,

colorer une minute Fosine 1 p. 100. Dcolorer quelques
secondes dans lodure de potassium 1 p. 100.
Mthode de de Dominicis ^
Plonger les fragments de tissu
dans une solution frachement prpare de 1 cgr. d'osine dans

6 cm^ d'ammoniaque. Chauffer lgrement, dissocier, puis chauffer
de nouveau sous lamelle, jusqu' vaporation de
liquide. Ajouter de l'ammoniaque pure et luler.
Mthode de Baecchi \
Colorer
la
moiti
du
le tissu,
pendant vingt-cinq
aqueuse concentre de
fuchsine acide, puis dcolorer jusqu' teinte rose ple dans l'alcool
trente
secondes,
dans
chlorhydrique ( 70)
une
1 p.
solution
100.
Dshydrater, dilacrer dans le xylol et monter au baume.

Quelle que soit la coloration employe, Solger-^ conseille de
recouvrir les frottis desschs d'une mince couche de collodion
ricin ( 1 p. 2), de manire empcher les spermatozodes de se
dcoller et d'chapper ainsi aux recherches. Aprs dessication, laver
l'alcool
1.
2.
3.
4.
5.
90 pour enlever Fhuile, puis laver
Sei-i-Kwai. Mdical journal, okio, 30 avril 1910.

Dtsch. med. Woch.. n 99, 1910.
Derl. klin. Work., 14 juin 1909.
Gazz. degli Ospedali, p. 841, 1909.
Dermat. Centrlbl., XV, p. 3-2-2, 1912.
Feau
et colorer.
TROISIEME SECTION
TECnj^JQUE
Nous runissons dans
cette
BOTAlSIlQll'E
section les procds
techniques
particuliers aux Bactries, aux Champignons et aux vgtaux

suprieurs. Ces procds sont peu nombreux, parce que la
technique tend de plus en plus s'unifier. Au point de vue cyto-
mmes pour les animaux

La technique botanique ne peut donc gure
rclamer, comme mthodes spciales, que les procds de culture
logique, les procds gnraux sont les

et
(et
pour
les plantes.
encore
ils
sont
communs
avec ceux qu'on emploie pour les
Protozoaires) et que les procds de coloration, qui servent caractriser la membrane vgtale et certains drivs du protoplasme.
Les mthodes que nous allons indiquer sont donc plutt des tours
de main, particuHers tel ou tel groupe. Elles ne sont ni plus ni

moins spcialises que les mthodes destines aux recherches sur
les
Vers ou
les
Arthropodes.
Quand on
se livre
Ttude d'un
groupe quelconque d'tres vivants, les procds gnraux se prcisent de plus en plus, si bien que la technique fine de chaque
groupe ncessiterait de trs longs dveloppements; mais il n'y a
pas, fondamentalement, plus de diirence entre la technique de
deux groupes aussi dissemblables que les Vers et les Arthropodes,
qu'entre
la
technique zoologique
et la
technique botanique.
CHAPITRE PREMIER
TECHNIQUE BACTRIOLOGIQUE
Nous serons trs bref sur ce chapitre, qu'on trouvera trait avec
de grands dtails dans d'excellents ouvrages classiques *. Nous
ne donnerons donc qu'une sorte d'aide-mmoire des colorations
les plus usuelles, en insistant sur les
procds nouveaux. Il est
bien entendu que, pour nous, la technique bactriologique est
limite
aux procds d'tude des Bactries proprement
dites,
l'exclusion des Protozoaires et des
Champignons.
compltement de ct les mthodes de culture,
nous bornant aux examens les plus courants.
La mthode fondamentale^ en bactriologie, est celle des
Nous
laissons
le produit examiner est tal en couche mince

sur une lame propre, dessch rapidement, fix, puis color. La
coloration des Bactries dcnu les coupes se fait gnralement par
frottis desschs
mmes mthodes que pour les frottis.

Il
Principes de la coloration des Bactries.
n'y
de mthodes spciales pour la coloration des Bactries on
les
simplement
les
procds histologiques gnraux
et
a pas
utilise
principalement
mthode des colorants basiques (p. 382). La mthode de

Jiomanovsky colore admirablement toutes les Bactries; elle constitue souvent un procd de recherche excellent, quoique gnralement mconnu.
les
L'extrme rsistance des Bactries aux agents destructeurs a

peu peu l'emploi de mthodes brutales, aggraves encore
favoris
par l'inexprience de beaucoup d'oprateurs. Les Bactries rsistent tant bien que mal au flambage, l'bullilion, etc., mais
les
1.
autres
lments du
pus ou
des
liquides
organiques
sont
Bard, Prcis des examens de laboratoire, et Bezanon. Prcis de microbiologie
clinique. Paris, INIasson, Collection des prcis
M. Langerox.
mdicaux.
44
MTHODES SPCIALES
690
dlruils ou rendus mconnaissables. Les rsullals
oUenus
seraient
en procdant avec un peu de soin, on

lments leucocytaires ou autres. La mthode de
autremenl inslructifs
mnao;eait les
si,
Romanovsky (procd panoptique
et
panchrome de Pappenheim)
permet justement d'obtenir, avec le minimum de manipulations,

la meilleure conservation possible de tous les lments et de leurs
les
les Bactries. Bien entendu, elle ne peut remplacer

procds de dilfrenciation, destins mettre en vidence telle
ou
telle Bactrie.
rapports avec
La thorie de
seulement
ici
raction de
mthode de Gram
la
qu'il
a t laite p. 394; notons
chez les Bactries, paralllisme entre
a,
la
Gram d'une
Talcali-rsistance et
part et, d'autre part, Tacido-rsistance,

rsistance au ferment digestif.
la
mthode de Gram donne un rsultat incermthode de Claudiiis (p. 396) tire

d'embarras. Dans les deux cas la diffrenciation est suffisante
fois
Chaque
que
la
tain et laisse des doutes, la
lorsque, dans les leucocytes, le noyau seul reste color.
Fixation.
frottis
11
est d'usage
renfermant
des
courant de fixer la flamme
Bactries.
En
principe, ce procd
les
est
il est
gnralement trs mal appliqu
transform en llambage. A l'origine, on oprait presque exclusivement sur lamelles, ce qui facilitait beaucoup la fixation par
excellent, mais, en piati({ue,

et
1^ chaleur,
fois
comme
suivant le procd classique
passer
la
lamelle trois
flamme d'un bec Bunsen, d'un mouvement lent,

on coupait du pain. Actuellement, on tale plutt les
dans
la
si
produits sur lames, ce qui rend la fixation la flamme bien plus

difficile pratiquer. Valcool mthy ligne fixe trs bien en
quelques
secondes
on arrose
Prlvement.
le frottis
avec ce ractif et on laisse vaporer.
Les liquides examiner doivent tre puiss
^g^
Fig. 255.
- Fabrication des
b,
pipettes striles, a. tube strilise en rserve;

c, pipette isole.
tube tir;
dans des pipettes strilises. Pour les fabriquer, on coupe un

morceau de tube de verre de 5 6 mm. de diamtre en fragments
de 20 cm. de longueur (cinq fragments dans un mtre). On
bouche
les
deux extrmits avec un tampon d'ouate
(fig.
255, a).
On
691
TECHNIQUE BACTERIOLOGIQUE
au four Pasteur ou Fautoclave; on peut ainsi conserver

ff[
transporter facilement une provision de tubes
strilise
et
tire au moment de Temploi.

prlvements, faire un tranglement en
arrire du coton, sans le brler (iig. 256, B), puis
faire un eftilure au milieu du tube, de faon
striles,
Pour
qu'on
les
obtenir deux pipettes (tig. 255, h). W sera facile

ensuite de sceller les deux parties effiles et d'en-
fermer
le
prlvement dans
certains cas, on emploiera

la
fabriquer, on
fortement
porte
faire
la
(fig.
258).
moyenne
partie
Dans
renfle.
pipette boule pour

par fermer un morceau
la
commence
de tube en TelTilant
la partie
-B
On
chaute ensuite
et,
lorsqu'elle
est
au rouge^ on souffle la boule. On peut

ensuite un tranglement en arrire de la
place rserve au
tampon de coton.
Travail du verre.
La fabrication des pipettes ordinaires et lioules est une opration trs facile. Tout le
secret consiste avoir une flamme assez chaude, bien
rgle et tourner continuellement le verre entre les
doigts, tant qu'il est dans la llamnie; ne le retirer
v
'''
qu'au moment de l'tirer ou de le souftler, ces deux

oprations devant toujours tre elfeclues en dehors de
la flamme. Le chalumeau gaz n'est pas indispensable,
on opre trs bien avec un bec Bunsen ordinaire
(lig. 2.j7). Si on n'a pas le gaz, on se servira d'une lampe
olipyle (lampe souder) alimente par l'essence minrale. Les lampes alcool donnent une flamme relativement froide, avec laquelle on ne peut travailler que des
tubes en verre mince et bien fusible. Il existe de petits
chalumeaux
de Goster,
alcool trs pratiques, soit le
soit le petit
chalumeau
appareil trs puissant et trs com-
mode, imagin par Souel de Lyon
'.
Examen du
pus. Coloration des Gonocoques

Faire les frottis,
et des Bactries pyognes.
comme
il
îg. 256.
645, en prlevant le plis avec une

ou un fil de platine flamb -. Colorer
est dit p.
pipette strile
au Romanovsky (p. 404), l'azur II alcalinis

(p. 389) par la mthode de Sabrazs (p. 625) ou par
pi-
ses^^'C uchondecoton
-,
'^
ment.
le
bleu de
trouve Paris, chez Cogit.

fil de
platine, faire rougir l'extrmit d'un agitateur et
y enfoncer le fil de platine tenu avec une pince et pralablement rouf^-i.
1. .Se
2.
Pour emmancher un
METHODES SPECIALES
692
loluidine en solution dans Teau distille (Tliiry). Comme contrle,

et recolorer le fond parle Ziehl
pratiquer le Gram-Nicolle (p. 394)
comme le Gonocoque ne prend pas le Gram, il se colore
froid
:
en rouge tandis que
les Streptocoques et
Staphylocoques se colorent en violet.
Examen des fausses membranes.
les
Recherche du Bacille de
la diphtrie.
et fausses
L'examen des mucosits
membranes qui recouvrent les muqueuses

a
une grande importance clinique. Pr-
la spatule de platine (fig, 262)

ou mieux avec un couvillon. Ce dernier
lever avec
est fait
Fig. 257.
veilleuse.
avec un
de
fil
fer,
dont une extr-
Bec Bunsen
Modle Cogt.
mit est entoure d'un peu d'ouate, en

forme de tampon long et troit, et dont
l'autre extrmit est tordue
On
introduit le tout dans
un tube
essai
en boucle.
bouch au coton
et
on
strihse.
Avec
exsudais ainsi prlevs, on
les
un
fait
frottis
(P7=~^~ -^^^
Fig. 258.
_ -_
^^|^-
'
(ou une cul-
colorer par le
Romanovsky le Ziehl
ture)
dilu, l'azur
Pipette boule.
lin
ou
le
II
alca-
blcU
loluidine (Thiry).
de
Ce
trs bien le Gram. On peut faire des coupes trs

dmonstratives avec les fausses membranes.
Bacille prend
Examen
culose.
des crachats. Recherche du Bacille de la tuberMthode classique.

1" Recueillir 40 50 cnv' de
autant que possil)le^ dans un llacon

bien
large goulot
proi)re. Examiner les crachats sur fond noir
et
(fig. 228)
prlevei^ avec le fil de platine llamb, une parcelle
crachats frais, du matin
purulente, solide et paisse, grosse comme une forte tte d'pingle.

2 taler soit avec le fil de platine, soit en crasant la parcelle
entre deux lames qu'on fait ensuite glisser l'une sur l'autre en
sens contraire (ne jamais les sparer par arrachement). Ne pas
employer de lamelles, qui sont trop troites et trop fragiles.

3" Scher en agitant l'air.
4 Fixer en passant trois fois, face en dessus, dans la flamme
d'un bec Bunsen, d'un mouvement lent, comme si on coupait du
pain.
693
TECHNIQUE BACTERIOLOGIQUE
5"
Colorer par
le
Dposer sur
procd de Ziehl-Neelsen.
le
quelques gouttes de liquide de Ziehl (p 397). Tenir la lame

avec une pince de Debrand (lig. 266) et la porter sur la platine
chauffante (fig. 147) ou au-dessus d'une trs petite flamme.
frottis
Chauffer jusqu' apparition de vapeurs (pas plus loin! le liquide

ne doit pas bouillir) et retirer immdiatement du feu ds que les
Recommencer
vapeurs apparaissent.
puis laver longuement Tcau.
trois
fois
cette
va sans dire que
Il
la
opration,
prparalion
ne doit pas se desscher et que, si le liquide s'vapore,

hter d'en ajouter une nouvelle quantit.
il
faut se
6^ Dcolorer p^v l'acide azotique au tiers (eau distille 2 vol.,

acide azotique 1 vol.) ou par l'acide sulfuri(jue au quart, pendant
quelques secondes, puis laver grande eau. La prparation,
'
d'abord jauntre, redevient rose.

7 Dcolorer fond par l'alcool absolu, jusqu' teinte rose
peine visible, puis laver l'eau.
8" Colorer quelques instants par une solution aqueuse de bleu
de mthylne d'un
titre quelconque, plutt faible.

Laver, scher, examiner dans l'huile de cdre.
Les Bacilles sont colors en rouge, le reste en bleu
les Bacilles
dans
les parties
Mthode de Spengler
rechercher
minces.
l'acide picrique.
Faire un Ziehl (chauffer
trs peu), puis, sans laver, traiter la prparation pendant deux ou trois
secondes par l'alcool picrique (parties gales d'alcool On" et de solution
aqueuse sature d'acide picri({ue); lavera l'alcool 60"; dcolorer par

l'acide azotique lo p. 100 (30 secondes), laver de nouveau l'alcool
60, puis l'alcool picrique. Laver l'eau distille et scher.
Excellente mthode, trs rapide et mettant remarquablement les
vidence, mme sous leurs formes les plus diflicilement
Bacilles en
colorables.
Mthode de Gasis 3,
La mthode de Ziehl-Neelsen et les procds
analogues sont fonds sur Vacido-rsistance du Bacille de la tuberculose,
c'est--dire sur la proprit qu'il possde de se colorer par les couleurs
basiques et d'abandonner trs diflicilement ces couleurs sous Taction
des acides.
La mthode de Gasis
est base,
au contraire, sur V alcali-rsistance,
1. On a propos
acide citrique ou
l'emploi d'autres acides moins nergiques
tartrique 10 p. 100 dans l'eau, et surtout acide lactique 'J p. 100 dans l'alcool
(mthode de Ilauser). Ces produits ont une action moins brutale et sont beaucoup plus faciles employer. Malheureusement ils ne donnent pas toute scurit pour le diagnostic, car ils ne dcolorent pas les Bacilles accidentellement
acido-rsistants. La mthode de Ziehl-Neelsen donne seule une scurit absolue.
2. Dtsch. med. Woch., n" 9. -28 fvrier 1907.
3. Centiâlblatt fir Bakleriolocjic, Orig., L, p. 126, 1909.
:
METHODES SPECIALES
694
c'est--dire sur la proprit de se colorer par les colorants acides, additionns d'un mordant, et de retenir ce colorant malgr l'action des alcalis.
1. Additionner 5 cm^ de solution d'o.sine (osinc 1, alcool 5, eau 95)
d'un morceau de sublim gros comme une lentille et chauffer lentement jusqu' dissolution. Le colorant est transform en prcipit en
suspension.
2. Couvrir pendant deux minutes, avec ce liquide chaud,
fix la flamme.
3. Laver l'eau et dcolorer par
le
frottis
Soude caustique
lodure de potassium
Alcool 50 p. 100
0.5 gr.
1
100
cm3
jusqu' ce que la couleur rouge ait disparu et que la prparation

devienne grise. Laver fond l'alcool absolu.
4. Colorer le fond au bleu de mthylne.
Cette mthode, qui montre bien la structure des Bacilles, est assez
complique et dlicate et ne parait pas devoir dtrner le procd de
Ziehl 1. J'en dirai autant du procd de Much qui n'est qu'un Gram
modill, et de la mthode d'Hermann.
Ce procd, trs peu connu, mme en France,
Mthode de Biot-.
mrite d'tre signal cause de sa simplicit. On procde comme pour
le Ziehl-Neelsen, puis on renforce la coloration par une immersion de
quelques minutes dans le formol pur. Iês Bacilles prennent une belle
teinte violace, presque noire, qui dispense de faire une coloration
de fond.
Colorer au Ziehl-Neelsen froid,
Coloration dans les coupes.
pendant 15 30 minutes; si on craint l'action trop brutale de l'acide
azotique, employer la mthode de Khne-Borrel aprs coloration au Ziehl,
traiter la coupe, pendant quelques secondes, par le chlorhydrate d'aniline 2 p. 100, puis dcolorer par l'alcool absolu. Colorer le fond au bleu
de mthylne.
On
peut aussi employer la mthode de h>pengler
Mthodes d'enrichissement.
trs rares
dans
les
(p. 691).
Les Bacilles sont quelquefois
crachats ou localiss dans des parcelles qui
chappent Texamen. On a donc cherch des mthodes qui permettent d'enrichir, c'est--dire de concentrer tous les Bacilles dans
en entier et qu'on colore. Depuis

d'enrichissement ont pris une
ces
annes,
procds
quelques
importance considrable et ont donn naissance une littrature
un
trs faible culot, (ju'on tale
norme, ce qui,
d'ailleurs,
dmontre leur insuffisance
et
leur
imperfection.
1. Berger dans
Cenlralblalt fur Bakterioloijie, Orig., LUI, p. 174-208, 1910,
Rosenblatt, ibidem, LVIII, p. 173, 1911, Bohm, ibidem, LXII, p. 497, 1912, Macalister, Brit. med. journ., II, p. 111, 1912, ont donn de bonnes revues critiques des
divers procds de coloration du Bacille de la tuberculose, avec une abondante
bibliographie. Tous concluent la supriorit de la mthode de Ziehl-Ncclsen.
2.
Biot, isouvelle mtiiodc de coloration intensive des Bacilles de Koch.
C. li. Assoc. des anatomistes. Congrs de Lyon, p. 234-237, 190L
693
TECHNIQUE BACTEIUOLOCIQUE
L'enrichissement comprend deux temps
la sdimentation.
la
fluidlfcation des
crachats et
La fluidification peut tre produite
par Taction des alcalis

Les alcalis caustiques
tre
mieux
es
tels
ou
additionns d'eau de
peuvent
emplo}
quels
Javel
on ohtient ainsi un liquide lanc par Lhlenhuth sous le
soit
caustiques, soit par digestion artificielle.
nom (anlifoi'mine. Ce liquide brevet^, de couleur jauntre,

dissout la kratine, la chitine, la soie, mais non le coton, ni la
laine, ni les matires cireuses.
Protozoaires, mais
de
non
11
dissout aussi les Bactries et les
les Bacilles acido-rsistants
il
ne tue ni
tuberculose, ni les spores charbonneuses et permet

Tinoculation du culot, ce qui lui donne une grosse supriorit sur
le Bacille
la
procds aux alcalis simples. D'aprs hiry (communication

verbale). Veau de Javel seule donne d'aussi bons rsultats que
l'antiformine.
les
Un des meilleurs procds pour la digestion artificielle est

certainement l'i/io^copie de Jousset^ (i, ivo;, fibrine). Voici la
formule du liquide de Jousset
:
Pepsine
Glycrine
Acide ctilorhydrique pur 22"
Fluorure de sodium
Eau
distille
Prendre 1 cm^ de
deux trois heures
ractif
pour 10 cm^
2 gr.
10 cm^.
10
3 'r-
000 cm3.
de crachats, mettre
l'tuve 37, en agitant toutes les demiheures. Centrifuger et rechercher les Bacilles en talant et colorant le culots
Pour le sang on recueille 30 cm^ de ce liquide par ponction

veineuse, on laque dans ^00 cm^ d'eau distille strilise, on filtre
sur une compresse bouillie dans l'eau alcalinise et on lave le
:
1.
Uhlenhuth
et
Xylandcr. Untersuchungen liber Antiformin. Arch.
a. d. kais.
Gesundheitsamte, XXXII, p. 158, 1909.

2. On peut le prparer soi-mme en mlangeant parties gales d'hypochlorite
(le sodium (eau de Javel) et de soude caustique 15 p. 100.
Semaine
3. A. Jousset, L'inoscopie. Az-ch. de md. exprim., p. 289-305, 1903.
mdicale, 21 janvier 1903

4. Nemmser et Lissowska [Dtsch. med. VCoch., p. 1697. 1911) prfrent la digestion tryptique alcaline (5 cm' de crachats, 5 cm' de soude 0,4 p. 100, trypsinc
ou pancratine 0.1, chloroforme II III gouttes) oi> acide (5 cm' de crachats,
5 cm' d"MCl 0,4 p. 100, trypsine 0,1); ou bien encore l'oxydation en milieu acide
eau q. s. pour 10 cm').
(5 cm' de crachats, V-X gouttes d'acide perchlorique,
Toutes ces oprations se font Utuve 37". Centrifuger, taler.
METHODES SPECIALES
696
caillot l'eau distille (prcaution indispensable). Les caillots

fibrineux ross sont additionns de 10 30 cm^ de liquide inoscopique et traits comme plus haut.
La sdimentation prsente des difficults surtout avec les procds par les alcalis ou rantifornime, cause de la faible diffrence de densit qui existe entre les Bacilles et le liquide
d'homognisation. La densit du Bacille est de 1,010 1,080.
Il
densit du liquide,
le culot; soit employer des liquides lourds,
rcolter
et
centrifuger
centrifuger et rcolter les Bacilles la surface. Dans ce dernier cas
il est encore meilleur de les collecter dans un liquide trs lger'.
faut donc,
pour
Mthode de
l'aiitiformine
p. 100,
diminuer
la
-.
avec 20 cm^ d'antiformine

agiter et laisser reposer dix trente minutes en agitant de
Mlanger 10 cmS
1.
50
le collecter, soit
temps en temps.
2. Ajouter 30 cm3
de
cracliats
d'alcool 60^
pour abaisser
la densit,
puis bien
mlanger.
3.
Centrifuger en tubes
effils,
pendant trente minutes une heure
la centrifugeuse lectrifjue.
4. taler et colorer le culot.
du liquide, Jacobson ^ agite le

*
avec
de
la
(substance voisine des thers
ligrone
liquide homognis
de ptrole) ({ui remonte la surface en entranant les Bacilles; on les
recueille la limite (jui spare les deux couches. De l'avis gnral, ce
procd ne vaut pas la mthode de l'antiformine, telle que nous venons
de la dcrire d'aprs Schulte'^.
Pour
recueillir les Bacilles la surface
Recherche du Bacille de
Centrifuger Turine et taler
mthode
la
d' Ellermann
et
dans Turine.
le culot, ou mieux le traiter d'aprs
Erlandsen (excellente aussi pour
la tuberculose
centrifuger Furine fond, ajouter au culot quatre

volumes de carbonate de sodium 0,25 p. 100. Laisser vingtles crachats)
quatre heures Ttuve 37, puis dcanter
et
centrifuger. Le
1. Bezanon et Philibert. Importance de la notion de densit dans la recherche

du Bacille de Koch par homognisation du crachat. Progrs ntdical, 13 mai 1911.
2. Schulte, Methodik und Technik der neueren Verfahren zum Nachweis von
Tuberkelbazillen. iMed. Klinik., p. 17-2, 1910. Besanon et Philibert {Joco citato et
Bull. Soc. md. des hnp., 11 nov. 191*2) prfrent traiter les crachats dix minutes
chaud par la soude caustique ^crachats 10, eau 100, lessive de soude X gouttes);
ils
oprent ensuite comme Schulte.

R. Soc. de biologie, LXVII, p. 507, 1909.
3. C.
Bogasov {Ztschr. f. Tuberk., XV, p. 551, 1910) prfre l'ther de ptrole;

Koslow [Berl. klin. Wocli., n" 25, 1910) prconise un mlange d'ther et d'actone.
4.
5.
dans
Se mfier des Bacilles acido-rsistants provenant des enduits qui se forment

les robinets d'eau et les tuyaux de caoutchouc. Voir ce sujet Beitzke,
Berl. klin. Woch., n" 31, 1910.
697
mlang avec quatre volumes de soude caustique

100
on chaufTe au bain-marie jusqu' bullition. Cende Spengler
trifuger et taler le culots Colorer par la mthode
culot est
0,25
(p.
p.
693).
Lper et Louste hmolysent par

Bactrioscopie du sang.
Talcool au tiers. En prlevant au doigt, faire tomber 15 gouttes
de sang dans 15 cm^ d'alcool au tieis; par ponction veineuse,
contenant
aspirer 1 cm^ de sang dans une seringue de 20 cm-^
'^
19 cm^ d'alcool au tiers. Centrifuger. Ce procd conserve assez

On peut
bien les lments figurs autres que les hmaties.
aussi
le procd de Jousset (p. 695).
employer
Ce Bacille est trs acidoRecherche du Bacille de la lpre.

rsistant et se colore comme celui de la tuberculose. Pourtant, il se
colore froid par le violet aniline et rsiste Talcool azotique
10 p. 100. Dans ces conditions, le Bacille de Koeh se dcolore (Baum3 fait
remarquer qu'on trouve quelquefois des Bacilles
garlen). Bowman
il
acido-rsistants dans le mucus nasal, en dehors des cas de lpre
insiste en outre sur la ncessit de gratter la cloison et de ne pas se
:
contenter de l'examen du mucus.

Ce Bacille ne prend pas le Gram.
Recherche du Bacille pesteux.
Dans le cas o on voudrait conserver ou expdier des fragments de
conseille de
ganglions pour le diagnostic, voici comment Broquet
prlever strilement les ganglions et les mettre dans un
procder
flacon strilis, avec une quantit suffisante du mlange suivant
'
Eau
80
20
distille
Glycrine
Carbonate de calcium
s'y conservent suffisamment pendant treize jours. Pour

prlever un fragment, ponger au papier strilis, broyer
et mulsionner dans la solution physiologique et inoculer dans les
muscles de la cuisse 1 cm3 un Cobaye et un demi-cm-' deux Rats.
Les organes
le diagnostic,
Coloration des capsules des Bactries.
Les capsules des
Bactries sont assez difficiles mettre en vidence
on y arrive
quelquefois par une double coloration par le Gram et Tosine,

pour les Bactries qui prennent le Gram (Pneumocoques), ou
encore en employant le bleu polychrome de Unna, qui peut colorer
1. Ellermann
Riforma medica,
et
Erlandscu, Zischr.
p. 572, 1911.
1905.
/'.
Hyi/.,
LXI,
p. 219,
1903.
Martinelli,
'
2. Arch. de md. ecprr..

Lou.ste, Bactrioscopie et cytoscopie du sang
par Thmolyse immdiate. Thse de Paris (mdecine), 1906.
3. Bull. Manila med. soc, III, p. 89-90, 1911.
4. Annales Inst. Pasteur, XXIV, p. 888-894, 1910.
MTHODES SPCIALKS
698
mlachromatiquemenl la capsule. Bien entendu, le Romanovsky

donne d'excellents rsultats.
une revue critique de
Baehr et Kantor ont publi rcemment
cette importante questioii. Une des
meilleures mthodes est
certainement celle de Hamm-. Voici comment on procde
la
lixation doit tre faite d'aprs la mthode de Weidenreich (p. 628),
^
mais on suppriuie
ries cultives,
il
le
traitement an permauganate. Pour les Bactla culture non dans Peau, mais dans
faut diluer
un
liquide visqueux (srum sanguin, liquide d'ascite ou d'hydroNe jamais fixera la flamme, qui altre les capsules. Colorer
au Giemsa^, en chauffant trs lgrement. Les Bactries sont
cle).
bleues, les capsules roses,

On trouvera plus loin (p. 700) d'autres mthodes bases sur le
procd Tencre de Chine.
Pour colorer
le
Pneumocoque dans
les frottis,
on emploie gnralement
on colore le frottis pendant une ou deux

procd racide actique
minutes par le violet phniciu ou le Ziehl, on lave l'eau et on traite
rapidement par l'acide actique 1 p. 100; laver, scher et examiner
dans l'huile de cdre. On peut aussi, d'aprs M. Nicolle, colorer au
violet phniqu et dcolorer rapidement par l'alcool-actone au tiers.
La coloration dans les coupes est plus difficile ]e procd de Friedlander
(voir p. 365) consiste colorer les coupes, pendant vingt-quatre heures,
dans le liquide suivant
le
Fuchsine
Alcool absolu
Acide actique cristallis
Eau
100
distille
gr-
Aprs coloration, laver l'alcool, diffrencier deux minutes dans

l'acide actique 2 p. 100, puis laver l'eau distille, dshydrater et
monter au baume.
Coloration des spores.

la coloration, mais, une
Les spores rsistent nergiquement

fois colores,
retiennent fortement les
Les mthodes pour acido-rsistants leur conviennent

donc. Von Belegh colore louguement au Ziehl, lave l'eau, puis
couleurs.
''
colore deux trois minutes froid, par la solution concentre de

1. Ct. Baclir et .1. Kantor. A comparative study of methods for staining tho
capsules of Bacteria. Ctnitralblatt f. Bakt., Orif/.. LXIII, p. 120-1-28, 191-2.
'2.
Centralblatt f. Bakt., Orifj., XLIII. p. '287-303, 1 pi., 1907.
3. Je prfre le panchrome de Pappenheim.
4. CentralbL f. Bakt., Orig., LU, p. 550, 1909.
699
On
lave encore Teaii, puis on fait agir le Lugol dix

On dilrencie fond dans ralcool-actone (parlies gales pour les cultures; alcool 2, actone i pour les produits
pathologiques), laver Teau, scher. La gaine des acido-rsistanls
dahlia.
quinze minutes.
rouge, les spores sont noires.

ont montr que les spores tues se colorent
et Danila
en bleu dans un mlange de fuchsine et de bleu de mthylne,
est
Proca
tandis que les spores vivantes restent incolores.
Il
y a
un
pr-
moyen de contnMe des procds de strilisation.

Enfin Waldmann - les colore simplement par le bleu de mthylne
alcalinis (eau dOO cm-% bleu de mthylne 2 cgr., potasse 1 cgr.).
cieux
Coloration des cils des Bactries.
Ces colorations ne
russissent qu'avec les cultures pures et encore il est essentiel

d'observer certaines prcautions. Il faut employer des lames
rigoureusement propres, sur lesquelles les liquides s'talent

d'eux-mmes uniformment. Faire avec la culture et de l'eau distille
une mulsion peine trouble
et bien homogne. Dposer sur

de gouttes de cette mulsion et les laisser
d'elles-mmes. Laisser scher l'abri des poussires et ne
lame une
la
s'taler
On
pas fixer.
srie
olilient ainsi
une couche excessivement mince, dans
laquelle les Bactries sont bien spares.

L'imprgnation argentiqiie, par la mthode de Van Ermengen ou de
Yamamoto, est un excellent procd dcrit p. 506-507.
Ce procd est une simplification
Mthode de NicoUe et Morax.
de la mthode classique de Lffler.
1 Mordanage. Dposer sur la lame une grosse goutte d'encre de
fuchsine de Lfller, frachement prpare
de tannin 20 p. 80
sat. froid de sulfate ferreux.
Alcool absolu sature de fuchsine
Sol. aq.
...
10 cra^,
5
1
Ghauier quelques secondes sur une veilleuse, puis, ds que les vapeurs
mordant
le
apparaissent,
jeter
Recommencer
trois fois,
pince
(lig.
et
laver
doucement
la
pissette.
en essuyant la face infrieure de la lame et la

266) chaque fois, pour que l'encre de fuchsine ne les touche
pas, ce qui gterait l'opration.

2" Coloration au ZiehI. Laver, scher.
Mthode de Tencre de Chine.

Ghiue,
1.
2.
3.
tel
que nous
le
Le procd Tencre de
pratiquons maintenant, est d Burri^;
C. R. Soc. (le bioloi/ie, LXVIII, p. 307, 1909.

Derl. tierarzt. Woch., 13 avril 1911.
R. Burri, Das Tuscheverfahrcn. Jena, Fischer,
in-S"
de
4-2 p.,
3 pi., 1909.
METHODES SPCIALES
700
mais
est juslc
il
de dire que remploi de l'encre de Chine en
microscopie, pour Tlude des microorganismes, a t conseill par

Errera*, ds 1884, pour l'tude des contours des organismes
pourvus d'une capsule glatineuse.

Primitivement, Burri a cr son procd pour obtenir facile-
ment des cultures pures de Bactries, en partant d'une seule

cellule, isole dans une goutte d'encre et rendue ainsi facilement
visible.
Il
n'a pas tard en tendre l'application l'examen de
de microorganismes. Pour les diagnostics et les

recherches morphologiques, on mlange le liquide examiner
avec une goutte d'encre de Chine, on tale le tout sur une lame,
toutes espces
on
laisse scher et
on examine dans l'huile de cdre. Les micro-
organismes ressortent en blanc sur le fond noir ou bruntre de

l'encre le rsultat obtenu est peu prs le mme qu'avec l'clairage fond noir.
:
L'encre de Chine est prpare avec du noir de fume trs fin,

mis en suspension dans un liquide gommeux; le tout prsente
les caractres d'un liquide collodal. Les particules charbonneuses
excessivement fines et denses, aussi, aprs dessiccation,

donnent-elles l'impression d'un fond noir uniforme, mme aux
plus forts grossissements. Ces particules sont en suspension homosont
gne dans le liquide gommeux, mais elles sont facilement agglutines en flocons et prcipites, par exemple par les solutions
salines ou acides.
Toutes
les
encres de Chine ne conviennent pas. La meilleure

Wagner, dite Pelikantusche n 541,
parait tre celle de Glinther
vendue par Griibler, de
Lei})zig. Elle est trop paisse
pour tre
diluer de cinq fois- son volume

employe pure;
d'eau distille, rpartir par portions de 2 ou 3 cm^ dans des tubes
essai bien bouchs au coton et striliser deux ou trois reprises
il
faut
donc
la
pendant une heure 100. Laisser reposer ensuite au moins deux

ou trois semaines avant l'emploi ou au besoin centrifuger, de
manire avoir une suspension aussi fine que possible. Ne jamais
secouer les tubes, mais puiser avec une pipette strile ou une
anse de platine pralablement flambe. Il est essentiel que l'encre
parfaitement strile, autrement les organismes qui
dveloppent peuvent constituer de graves causes d'erreur.
reste
s'y
On
1. L. Errera, Sur l'emploi de Tencre do Chine en microscopie. Bull. Soc. belge

de micrôscopie, X, p. 478, 1884.
2. Ou seulement de moiti d'aprs Gins.
701
peut ajouter une trace de formol pour assurer la conservation.

Nous avons vu page 515 l'emploi de cette mthode pour le
diagnostic de la syphilis. Elle peut servir examiner toutes
espces de microorganismes. Gins^ s'en sert pour dmontrer les
cils du Bacille typhique et de certaines autres Bactries
pour
:
les
ccqjsules,
il
fixe
au sublim concentr
le
frottis
fait
comme
plus haut, lave Teau, puis colore la thionine phnique. Les

capsules sont incolores sur fond noir et les Bactries sont colo-
pour dmontrer les capsules, fait un Gram,

colore le fond la fuchsine acide, lave, sche et tale une couche
res. E. Rulison-,
d'encre sur
le frottis ainsi color.
Sangiorgi et Eisenberg"^ ont remarqu que les Bactries ne

prenant pas le Gram, prsentent, dans Tencre, une partie centrale
sombre, entoure par une bordure claire nettement dlimite.
^
"Jagic
se sert
du procd de Burri pour
faire
des prparations
dfinitives de Bactries agglutines.
Tout rcemment, Nitsche ^

placer Tencre de Chine par
et
le
Harrison
colla rgol.
ont popos de remLes images obtenues
sont plus fines, mais les prparations ne se conserveraient pas.

Enfin, divers auteurs remplacent l'encre de Chine par des solutions concentres de colorants qui ne prennent pas sur les
'
Bactries. Fischer
emploie le rouge congo, le bleu d'aniline, la

^
fuchsine
acide. Eisenberg
nigrosine,
propose un mlange de
3 parties de sol. aq. sat. de Chinablau avec 1 partie de sol. aq.
la
sat.
de cyanosine. Ce mlange se trouve dans le commerce (Grnom de Cyanochin. De mme que l'encre de Chine,
bler) sous le
ces colorants doivent tre parfaitement striliss et
sdim ents
avant l'emploi.
1. Centralbl. f. Ba/derioL, Oriij., LVII. p. 47-2-478, 1911. Prendre de l'encre
tendue de son volume d'eau.
2. Journ. amer. med. assoc, LIV, j). 14-26, 1910.
3. Centralbl. f. BakterioL, Orig., LY et LYI, p. 183, 1910.
4. ^Yien. med. Woch., p. 3-28, 1910.
5. Centrabl. f. BakterioL, Or/., LXIII, p. 575, 1912.
med. journ., II, p. 1547, 1912.

f. wiss. Mikr., XXYII, 1910. Centralbl. f. BakterioL, Rf., LI.
Centralbl. f. BakterioL. Bef., Beilage zur Band., LIY, p. 145, 1912.
6. Brit.
7.
8.
Ztschr.
CHAPITRE H
TECHNIQUE MYCOLOGIQUE
La
leclini(]ue m)^cologique tient, pour l)eaucoiip de points, de

technique bactriologique. En etet, Ttude vraiment scientifique des Champignons, et surtout des Champignons microscola
piques, repose sur la mthode des cultures pures. Les difficults

sont pourtant moins grandes que pour les Bactries et les prcautions moins rigoureuses, car les contaminations sont plus
faciles dceler,
en raison du volume des lmeuls
et
de leurs
caractres morphologiques bien dfinis.

Le cadre de ce volume ne me permet pas de m'tendre sur ce
chapitre, aussi, pour cette question comme pour les prcdentes,
me bornerai aux indications les plus essentielles.
je
Milieux de culture.
Lorsqu'on veut faire l'tude biologique complte d'un Champignon, il faut le cultiver sur un grand
nombre de milieux et tudier les modifications qu'il leur imprime.
Pratiquement, pour
diagnostic et l'tude morphologique, deux

^
la carotte
et un milieu glose.
le
sortes de milieux suffisent
On
soigneusement les carottes et on les
l'emjiorte-pice (fig. 259), ou simplement au couteau,

dcoupe
en prismes allongs, qu'on introduit dans des tubes spciaux
Carotte.
lave
260) ou simplement dans des tubes ordinaires.

Avoir soin de remplir d'eau l'ampoule infrieure jusqu' la base
du morceau de carotte. Pour les tubes ordinaires mettre un doigt
(fig.
d'eau. Striliser vingt minutes 120".
Milieux gloses.
Les milieux gloses types sont ceux de
1. Ou une racine analogue, dans les pa^ys o la carotte n'est pas connue. En
Europe, je considre la carotte comme suprieure la pomme de terre pour les
Ghampi
nons.
La betterave
est aussi trs favorable.
703
Saboiiraud
ces milieux, crs pour l'lude des teignes sont de

deux sortes.
Le milieu d'preuve est un milieu fortement sucr (4 p. 100),
sur lequel les Champignons des teignes prennent leurs formes
typiques le milieu de conservation est un milieu non sucr, des:
empcher les Champignons des teignes de se plomorphiser.

Outre ces deux milieux, j'en emploie un troisime, renfermant
tin
moiti moins de sucre (2 p. 100) que

favorable,
Pour
les
mon
le
milieu d'preuve et plus
pour beaucoup de Champignons.

cultures en milieu liquide ou en goutte pendante,
avis,
- Manire de dcouper ls pommes de terre ou

les carottes l'emporte-pice. a, emporte-pice; b.
manire de dcouper la carotte sur un disque de bois
Fig.
-259.
Tube
Fig. 260.
pour carottes.
ou de lige; c, cylindre dcoup par l'emporte-pice;

rf, les deux moitis du cylindre. D'aprs Bezanon.
on aura d'excellents bouillons sucrs en supprimant simplement

la glose dans ces formules. Aucun de ces milieux^ solides ou
liquides, ne doit tre neutralis.
Enfin, pour beaucoup de Moisissures, on obtient d'excellents
rsultats avec la glatine
Milieu d'preuve
aux pruneaux
Eau de source
Glucose masse de Glianut

Peptone granule de Chassaing
Glose coupe en petits morceaux
^
Ou maltose
000 cm'^.
40 gr.
10
18
brute de Chanut suivant les cas. Sabouraud a dmontr la supdos sucres bruts sur les produits chimiquement purs. Ces sucres, ainsi
que la peptone. se trouvent chez Cogit, Paris.
1.
riorit
MTHODES SPCIALES
704
Milieu de conservation
Eau de source
000 cm-^
Glose
18 gr.
Peptone granule de Ghassaing-
30
Glose sucre ordinaire
Eau de source
Glucose masse de Chanut

Peptoae granule de GliassaingGlose
000 cm^.
20 gr.
10
18
Glatine aux pruneaux

Faire tremper 10 pruneaux dans 250 cm3
d'eau pendant une nuit. Faire cuire feu doux pendant une ou deux
heures, dcanter, complter 250 cm^ et ajouter 15 p. 100 de glatine.
Faire fondre au bain-marie. Rpartir en tubes. Striliser vingt minutes
110. A la place de la glatine on peut mettre 1,8 p. 100 de glose.
Elle exige quelques prcauFabrication des milieux de culture.
tions trs simples, mais indispensables, ([ui ont t mises en lumire
:
par Sabouraudi.
1" Chauffage.
Mlanger tous les lments dans un grand ballon,

pendant une demi-heure, puis porter l'auto 120 avec une seule couronne de gaz,
laisser la glose s'imbiber

clave. Monter lentement
teindre ds qu'on atteint cette temprature.

2 Filtralion.
Quand l'autoclave est redescendu 100, ouvrir et
bien agiter le ballon pour mlanger exactement le contenu. Mettre
dans l'autoclave deux iDallons de un litre, munis chacun d'un entonnoir et d'un filtre pliss en papier Chardin. Rpartir la glose dans ces
deux entonnoirs. Ds qu'un des filtres ne laisse plus passer le liquide
que goutte goutte, on enlve l'entonnoir, on le remplace par un autre
garni d'un filtre neuf, au-dessus duquel on crve le filtre engorg.

L'entonnoir sale est lav et garni d'un autre filtre. On continue, en s'arrangeant de telle sorte que les filtres laissent toujours couler un filet
de liquide. On obtient ainsi une iiltration trs rapide, avec un dchet
insignifiant et on vite l'emploi de l'appareil liltrations chaudes dont
la lenteur est dsesprante. L'autoclave teint, mais encore chaud,
suffit pour maintenir la glose l'tat liquide.
Aprs Iiltration, on runit le tout dans un mme ballon et on agite
pour assurer l'homognit du liquide.
3" Reparution.
Avec un entonnoir dont la douille porte un tube de
caoutchouc muni d'une pince de Mohr et d'un tube efhl. Garnir
convenablement les tubes ou les matras coniques. Ne pas mouiller les
parties qui seront en contact avec le bouchon d'ouate. Boucher l'ouate
ordinaire, mais ne pas faire les bouchons trop serrs, car ils ne sche-
raient pas aprs la strilisation.
4 Strilisation.
Monter trs lentement 120 avec une seule couronne de gaz. Eteindre ds qu'on a atteint cette temprature. Aussitt
que la pression est tombe, retirer immdiatement les tubes et les
incliner en les soutenant avec un gros tube de verre (lig. 261).
1.
1908.
Annales de Dermatoloyie, p. 93, 1908.

Arch. de Parasitoloyie, XII, p. 33,
Maladies du cuir chevelu, III, Maladies cryptogamiques, Paris, Masson,
1910, p. 113.
705
Pendant toute
difier.
ne
11
dure des oprations,

faut donc s'interla
la
glose ne doit pas se
soli-
peu que ce soit,

aucun moment. Un litre de glose
donne environ cent tubes. Une
rompre,
si
glose glucose bien faite doit

tre transparente et de couleur
lgrement bleutre, ce qui indique
que le sucre n'a pas t caramlis.
La
Fig
261.
Manire
Cultures en tubes.
su f fil pour
C'est
la
le
faut
procd
qu'on parte des lsions, soit qu'on fasse

seulement un repiquage. L'ensemencement se
pratique avec les mmes prcautions que pour
Il
plupart des cas,
soit
les Bactries (fig. 263).
les
Bezanon.
glose maltose est beaucoup plus fonce.
ordinaire, qui
d'incliner
tubes pour solidifier la glose. D'aprs
employer des
fils
de platine assez rsistants, car les Champignons

forment souvent des enduits difficiles dissocier.
Des
trois
formes reprsentes par
la
figure 262,
droit et la spatule sont les plus favorables.

L'anneau ou anse * sera rserv pour la mani-
le
fil
pulation des milieux et des cultures liquides.
Le
repiquage
se
de
fera
prfrence
en
points spars, plutt qu'en stries. On obtient

ainsi de belles cultures concentriques. Au contraire, les cultures premires partant des lsions
devront tre faites en longue strie, de faon
dissminer les germes la surface du milieu
de culture
et
plus facile.
I:
rendre leur sparation ventuelle

caries
Ensemencer abondamment
produits pathologiques sont gnralement pauvres en germes.
Ne jamais capuchonnerles tubes et les laisser

presque toujours la temprature du laboratoire.
Conservation et envoi des cultures de
Champignons.
Pinoy
donn
ce sujet
abc
Fil?.
262.
modles de
Trois
de
lils
platine, a, spatule
6, anse r, aiguille.
;
des indications trs judicieuses

les cultures
de Champignons spores rsistantes (Ascomy:
Daprcs Bezanon.
1. C'est
ce que certains ouvrages franais appellent ose. Je crois inutile
d'adopter ce terme gerraaniiiuc. suirisammcnt traduit par le substantif anse.
2. Pinoy, Conservation et envoi dos cultures de
Cliampignons infrieurs. Bail,
.ôc. pat/iol. exof., II. p. 60-63. 1909.
M. Langeron.
45
METHODES SPECIALES
706
cles)
doivent
tre
parfaitement
expdies en tubes simplement
dessches
l)ouclis
ou
conserves
et
au coton. Pour
les
espces
on pourra conserver trs longtemps

ensemenant dans du bouillon sucr
spores fragiles (iMucorines),

les
cultures vivantes en les
(1 p, 100), sous une couche d'huile de vasehne (3 cm^ pour 10 cm''

de bouillon). Ne jamais expdier de tubes scells ou cachets,
renfermant des cultures sur milieu humide, car toutes les spores
germent en mme temps et les colonies meurent faute d'air.

Ces matras sont des petits flacons
Cultures en matras.
au
fond
coniques d'Erlenmeyer,
desquels on coule un mince disque
de glose. Au centre on fait un ensemencement en piqre. On
obtient ainsi de magnitiques cultures circulaires,
Fig. 263.
Manire d'ensemencer
les
trs caractris-
tubes do glose. D'aprs Bezanon.
donner aux Champiun espace libre bien plus
tiques. L'avantage de ces rcipients est de
gnons un cube
d'air plus considrable et
grand.
Cultures en cellules.
La mthode des cultures en gouttes
elle seule
pendantes est la mthode cardinale de la mycologie
:
permet d'observer
quels repose toute
In situ les
la
organes de fructification, sur
les-
systmatique.
En effet, l'examen direct, par dilacration des cultures, ne

montre gnralement que des dbris dissocis. On y reconnat
bien les organes caractristiques, mais ils ont gnralement perdu
tout rapport avec
mmoire
de botes
Au
miheu
le
myclium. Je ne
mentionnerai que pour
procd du dcalque (Klatsch) qui

de Pelri et ne donne pas de meilleurs
le
ncessite l'emidoi
rsultats.
contraire, la culture en cellules, en gouttes pendantes ou sur

solide, permet de suivre pas pas le dveloppement du
myclium, d'observer l'apparition des appareils de

et enfin
de fixer
la
fructification
culture en prparation dfinitive, au
moment
favorable.
La mthode des cultures en gouttes pendantes,
(elle
que nous
l'appliquons, est
due
Van Tiegliem
'07
Le Monnier
et
*,
qui Tont
employe pour leurs belles recherches sur les Mucorines. Elle

consiste essentiellement cultiver les Champignons dans une
solide ou
goutte de milieu
la face infliquide, place
rieure d'une lame ou d'une

lamelle reposant sur une celen verre (fig. 139 et
Culture
Fig. 264.
lule
264). Celle-ci est forme par

un anneau de verre (fig. 138)
technique
me
laquelle je
sur
coll
suis arrt
une lame. Voici
20 mm. de diamtre, de faon
pouvoir
les recouvrir
22x22.
avec
Je fais fondre
la
-.
Elle consiste
Prparation des cellules.
sur les lames au moyen du lut de Kronig
choisis des anneaux de
(p. 447). Je
18
en cellule sur lame.
Original.
coller les
anneaux
des lamelles
un peu de
lut
dans une petite capsule de mtal ou de

porcelaine place sur la platine chauffante
dans le lut fondu la
(fig. 147). Je plonge
tranche de Tanneau de verre, je la pose

sur une lame, je porte le tout un instant
sur la platine et j 'appuy fortement pour
assurer l'adhrence parfaite.
Au moment
on
les
flambe
de se servir de ces cellules,

et on les retourne sur un
celui de la figure
support analogue
D'autre part, la lame
Pipette coude
pour ensemencement des
Fig. 265.
267.
cultures en cellule.
Ori-
sur laquelle on
ginal.
est flambe
l'ensemencement
pratiquera
et retourne sur le mme support ou simplement tenue, face
flambe en dessous, avec la
pince
Debrand
(fig.
266).
Lorsqu'on emploie un milieu

en dpose une
solide, on
trace au-dessous
de
1.
2.
la
lame avec
-266.
Pince
de Debrand,
du milieu
la
spatule de platine.
Ann. des se. nat., (5), XVII, p. -263,

Landrieu a propos rcemment un
les cultures cellulaires.
pour
Les mycoses oculaires, Paris.
3. II est
Fig.
Pour
les
milieux liquides,
1873.
petit appareil en verre invent par lui

Voir ce sujet sa thse de doctorat en mdecine,
191-2; cf. p.
-38.
plus facile d'oprer avec des lames, mais, lorsqu'on doit suivre la cul-
METHODES SPCIALES
708
est bon d'employer une pipette coude (fig. 265). La goutte

ne doit tre ni tro[> petite, car elle s'vaporerait facilement, ni
il
grosse, car elle pourrait loucher les bords de la cellule.

dj dit (p. 244) que, sur les lames flambes, les liquides
ont une fcheuse tendance s'taler. On peut, pour obvier
Iro})
J'ai
cet inconvnient, sortir les
allumer
le
liquide et
lames de
le laisser
'l'alcool et,
sans les essuyer,
brler.
Ensemencement.
L'idal, pour une culture en cellule, est
d'ensemencer une seule spore. Malheureusement l'obtention de
unique est un procd long et dlicat. Pour y parvenir,
une mulsion de spores, en s'arrangeant de manire
ce que chaque goutte renferme une spore. On dpose des gouttes
sous une srie de lames llambes et on choisit au microscope
cette spore
il
faut faire
renfer-
celles
(|ui
ment
une seule
spore.
On
Fig.
peut gnrale-
ment
267.
Support en baguettes de verre pour

rations et ensemencements.
Original.
d'une culture pure. Il suffit alors

nombre de spores. Pour cela, on
colo-
se
dispenser
UC Cetie preCaUllOU,
surtout si on part
.
d'ensemencer un
'
trs
petit
une premire mulsion

de spores sous une lame flambe et on prlve une trace de
cette mulsion qu'on ensemence sous la lame prpare.
Prendre une des cellules, la retourner et la
Fermeture.
fait
poser face en dessus sur la table. Sans tarder, appliquer la lame

ensemence sur la cellule, en mettant la goutte bien au milieu et
en prenant bien soin qu'elle ne puisse toucher les bords de l'anneau de verre. On peut fermer la vaseline qu'on applique au
pinceau, en tenant le petit appareil entre le pouce et l'index. Je
trouve prfrable de lu ter la paraffine tendre qu'on applique
avec le fer lu ter (fig. 181). Il peut tre avantageux, dans certains cas, de mettre au fond de la cellule une goutte d'eau stri-
pour viter le desschement. Il faut savoir que, mme la

temprature ordinaire, cette eau se condense sur la lame suprieure et augmente peu peu le volume de la goutte.
lise,
ture
un
grossissement (300 diam.) il est indispensable d'oprer sur

permettent seules l'emploi d'objectifs court foyer. Dan.s ce cas, on
fixe la lamelle dans une pince de Cornet ou de Debrand et on fait ainsi trs
commodment l'ensemencement en dessous, exactement comme pour une lame.
lamelles, qui
fort
709
TECHNIQUE MYGOLOGIQUE
Conduite de
la culture.
Il
faut toujours
l'aire
un
assez
grand nombre de cellules, cause des insuccs invitables (desschement ou talement des gouttes). Les cultures la temprature
ordinaire russissent gnralement sans difficult.
mme
de
Il
n'en est pas
de celles des
Gham])ignons Ihermophiles, qu'on est

oblig de pratiquer Ttuve. Quand on juge que la culture
est suffisamment dvelopj)e, on dtache la lame, on la retourne
face en haut et on la
met scher
Ttuve 37
elle est alors
prte subir la coloration (Sabouraud).
Cultures sec.
qui
se
Depuis
bien longtemps, les mycologues

occups de Champignons filamenteux ont tch
sont
Culture sche
Fig. 268.
on tube. D'aprs de
Bcurmann
et Gougcrot.
Culture sche
Fig. 269.
sur lame pique dans
la glose. D'aprs de
Beurmann otGougerot.
d obvier
la difficult
Culture sche
en cylindre Borrel. D'aprs de Beurmann et
Fig. 270.
Gougerot.
d'observer les cultures en tubes et
Tennui
de prparer des cultures en cellules. Unna parat tre le premier

qui ait rsolu la question par la mthode des cultures dites sches
ou sec ^
Il
enseir.enrait les
CJiampignons sur
le
bord d'une
gouttelette du milieu solide, place soit sur une lame, soit dans
un tube et observait le dveloppement du myclium sur le verre
sec. Ce procd a t repris rcemment, pour Ttude de la sporotrichose, par de Beurmann et Gougerot qui lui ont donn le nom
1.
p.
Unna, Die Zchtung der Oberhautpilze. Monatsh. f. jirukt. Dermat., VII,

1888.
Zur Untersuchungstechnik der llyphomyccten. Centralhl. f.
465,
/?/.7eno;., XI. p. 1-9, -JO-ll. 1892.
METHODES SPECIALES
71
de procd des lames sches ils placent une lame de verre dans
un tube garni d'un doigt de bouillon sucr (fig. 268), ils la piquent
dans un tube de glose sucre (fig. 269), ou mieux encore dispo'
sent trois paires de lames dans un tube Borrel (fig. 270), en les
maintenant cartes par un lige entaill '. Aprs strilisation de
Tappareil, on
Champignon dans le liquide et le long

myclium se dveloppe sur ces lames, sous
toiles, quelquefois trs caractristiques. Ce
ensemence
des lames de verre;
forme de colonies
le
le
procd est bien plus expdilif que celui des cultures en cellules,
mais il est aussi moins rigoureux; le dveloppement des colonies
est livr
Il
au hasard
et
est difficile
il
est impossible de faire des cultures
Mthodes d'examen.
Nous
de les suivre au microscope.

en partant d'une seule spore.
ne saurions assez rpter que

mthode des frottis ne convient pas pour les Champignons.
C'est une erreur, malheureusement trop rpandue parmi ceux
la
qui ne sont pas botanistes et mycologues de profession, de croire

que les Champignons doivent tre traits par les mthodes bactriologiques. Les frottis ne peuvent donner aucune ide de la
morphologie des Champignons, parce que leur confection fragmente le myclium, dtache les spores et brise les ramifications.
part quelques exceptions,

donnent que de trs mauvais
colorants
bactriologiques ne
qu'ils sont beau-
rsultats, parce
nergiques. Lorsqu'on recherche des Bactries, on

de les colorer le plus intensment possible peu importe
diffrenciation de la membrane ou du protoplasme, pourvu qu'on
coup
trop
s'efforce
la
les
la forme de l'organisme et ses ractions colorantes

de
Gram, acido rsistance). Pour les Champignons, il
(raction
les caractres de la membrane, des cloien est tout autrement
reconnaisse
sons, etc., ont
une grande importance systmatique. En
outre,
ce sont des vgtaux fragiles qui, gnralement, ne suiportent
pas sans dommage les procds un peu violents des bactriologistes
(fixation la flamme, dessiccation, etc.). A part les Microsiphons
qui, pour certains points, se rapprochent des Bactries, les Champignons rclament une technique dlicate.
Lorsqu'on les tudie dans les tissus, ceux-ci doivent tre traits
par les mthodes histologiques, mais, lorsqu'on examine des Champignons en cultures ordinaires ou cellulaires, il faut viter les
manipulations qui ))euvent contracter et dformer les filaments
1.
p. Chevallier a heureusement modifi ce dispositif en sulislituant au lige
entaill un lictit tube de verre.
71
mycliens el les spores. Ici, deux cas peuvent se prsenter ou

bien on veut faire l'lude c\ tologique du Champignon, et alors les
procds employer sont exactement les mmes que ceux de la
:
cytologie animale ', pour la iixalion. Tinclusion et la coloration;

ou bien on veut simplement faire l'lude morphologique, et alors
il faut examiner le
Champignon dans un liquide appropri, qui
claircisse ses lments tout
en conservant leur forme. C'est dans
ce liquide que devront tre excuts les dessins qui sont la base
de toute bonne description systmatique. Le montage au baume
dforme gnralement les Champignons. Il est

monter
de
en milieu liquide ou la glycrine glaline,
prfrable
ceux qui n'ont pas l traits par les mthodes histologiques.
est trs dlicat et
Coupes de cultures.
difticiles
obtenir
et
Lorsque
que
les cultures cellulaires sont
la dilacration
des cultures ordinaires
ne donne pas de bons rsultats, la meilleure mthode est alors de

fixer la culture en masse, par un fixateur hislologique, de prfrence par le liquide de Duboscq-Brasil, qui mouille trs bien les
Champignons. On extrait alors la culture du tube ou du matras
exactement comme une pice hislologique, mais en

bien
de ne pas lser la couche myclienne. Les coupes
soin
prenant
russissent trs bien avec la carotte et avec la glose. On fait des
et
on
la traite
coupes un peu paisses, de manire bien voir l'insertion des

conidies. Colorer de prfrence au bleu de Unna, avec diffrenciation par l'lher glycrique.
Recherche des Champignons dans les tissus.

Lorsqu'il
de Champignons filamenteux, le meilleur procd de
s'agit
recherche est l'examen des tissus dans la potasse 40 p. 100
714 l'examen des teignes). Lorsque le Champignon n'existe
pas, dans les tissus, l'tat filamenteux, la recherche directe est
gnralement inutile: il est prfrable de recourir d'emble la
culture. C'est le cas de la sporotrichose et en gnral des mycoses
(voir p.
On peut arriver cependant dceler ces Champignons

fragments de tissus fixs, inclus, puis colors par un
colorant basique, par exemple le bleu polychrome de Unna
gnralises.
dans
les
associ l'osine (p. 429)

(p. 427) ou le bleu de toluidine, seul
l'hmatine-osine donne quelquefois aussi de bons rsultats.
Nous tudierons plus loin les cas particuliers.
1.
Un modle
d'tudes cytologiques est le travail de Maire, Recherches cijtodo Paris sciences), in-S"
lof/iques et taxonomirpies sur les Basidionnjcles. Thse

de -209 p., S pi., 1902. Bull. Soc. mijcol. de France. 190-2.
MITHODES SPCIALES
712
Quoi qu'il eu soil, daus lous les cas de mycoses, ou fera bien de
couserver d'une part du matriel sec dans des tubes striles,
d'autre part du matriel fix par uu fixateur histologique, de
prfrence
liquide de Bouin.
et coloration des
le
Examen
Champignons filamenteux.
Qu'il s'agisse d'une culture ordinaire dissocie ou d'une culture

cellulaire, il faut dbarrasser les filaments mycliens de l'air qu'ils
emprisonnent entre eux,
Un
des
les claircir et
meilleurs milieux
lactopJiiol de
Amann
(p.
au besoin
les colorer.
d'observation est certainement le
444).
Il
suffit
souvent d'examiner
le
Champignon dans ce liquide ])0ur tudier parfaitement sa morphologie. Ce procd prsente Tavanlage de ne masquer aucun des
dtails de la
membrane. Pour
les bulles d'air,
suffit
le
matriel dessch et pour chasser
de chauffer doucement
la prparation, jusqu' apparition de bulles, de faon chasser l'air et rendre leur

turgescence aux filaments mycliens. On peut monter les prparations dans ce mme liquide en lutant au lut de Kronig (p. 447).
il
Le meilleur colorant pour ces prparations est le bleu coton

qu'on emploiera, suivant les cas, en dissolution 1 p. 100 dans
l'eau ou 0,5 p. 100 dans le laclophnol. A mon avis, le bleu
au lactophnol est trs suprieur au bleu lactique. Les recherches
de Guguen^ ont montr que le meilleur bleu coton est le bleu
de Poirrier (Socit anonyme des matires colorantes de
C4B
Saint-Denis). Le bleu au lactophnol colore soit la membrane,

surtout lorsqu'elle renferme de la callose, soit le contenu protoplasmique des filaments. Aprs coloration, on lave l'eau et on
monte au lactophnol, ou
gnation
la glyciine glatine, aprs
impr-
])ar le
lactophnol.
Dans certains cas, on emploie avec avantage le Sudan III
en solution dans le lactophnol (solution concentre chaud), qu'on
peut additionner d'un millime de bleu coton, comme le conseille
Guguen. On met ainsi en vidence des matires grasses ou au

moins sudanophiles. On peut aussi se servir avec avantage du
^
triple colorant de Guguen
(acide lactique 100, Sudan III, 0,1,
dissoudre chaul et ajouter 0,1 de bleu coton et 30 gouttes de
1.
Pinoy a propos
le
milieu suivant
ITjdrate de ehloral 40 gr., glyc-
rine 20 gr., eau 20 gr., solution alcoolique d'actate de

Filtrer. Bull. Soc. pat/toi. exot., 11, p. G2, 1909.
Bull. Soc. mj/color/iqite de France.
a. Ibidem, XXIT, p. 224-22C, 1900,
2.
XXI,
plomb
p. 42-16, 1905.
2 p. 100, 10
cm\
713
teinture d'iode; conserver l'abri de la lumire) qui met en vi-
dence
la fois les graisses,
Tamidon
et le
glycogne.
Il nous est
Inoculations exprimentales.
impossible de
donner ici le dtail des mthodes d'inoculation particulires
l'tude de chaque mycose. C'est d'ailleurs un champ dans lequel
l'ingniosit de l'exprimentateur devra se donner libre cours. Le
temps n'est plus o l'on injectait des doses massives de spores

dans les veines d'un Lapin ces procds, un peu violents, sont
trop loigns des voies plus discrtes que suit la nature pour pro:
duire l'infestation de Torganisme animal ou humain.

Une heureuse tendance se rapprocher de ces voies naturelles
montre depuis quelques annes. Je n'en donnerai pour

la russite des tentatives de Pinoy pour reproduire
exprimentalement certains myctomes. Ce succs est d, d'un
s'est
exemple que
cot au choix de l'animal rceptif, en l'espce
autre ct, au
animal.
L'tude
mode
le
spcial d'inoculation, dans
Pigeon,
la
et,
d'un
patte de cet
exprimentale des mycoses prsente des difficults

ce sont en effet des maladies souvent locales, au
particulires
moins au dbut.
ne
11
dans
d'introduire
la
suffit
pas toujours, pour les reproduire,
circulation
ou
dans
le
pritoine
l'agent
pathogne, sous une forme quelconque. Nous ne savons pas au

au
juste quel tat se trouve, dans la nature, le Champignon,
moment o
il
pntre dans l'organisme. Cet tat favorable peut

ou de conidies ou encore de myclium dve-
tre celui de spores
lopp dans des conditions particulires. C'est ce que Pinoy ralise

en inoculant, dans les pattes des Pigeons, des cultures touffes
sous l'huile de vaseline.
11 faut ensuite trouver,
])our chaque Champignon, un animal
rceptif: ainsi, le Lapin se prte aux mycoses aspergillaires gnralises, le Pigeon aux mycoses localises dans la patte, le Rat fait
facilement de l'orchite sporotrichosique, le Cobaye convient

pour l'tude exprimentale des teignes, etc.
Enfin, il faut choisir le meilleur mode dnoculation, en se
trs
rapprochant autant que possible des moyens naturels. Or
il
est
Champignons pntrent presque toujours dans

la
voie cutane, beaucoup plus rarement par les
l'organisme par
voies respiratoire ou digestive. Pour les mycoses gnralises, on
emploiera la voie sous-cutane, sanguine ou pritonale. Pour les
probable que
mycoses
les
localises,
on emploiera uniquement
la
voie sous-cutane
MTHODES SPCIALES
714
on aura souvent avantage, au lieu d'iuoculer la seringue une

mulsion de spores, insrer sous la peau de petites chardes ou
des fragments de
le
Champignon
Bambou, sur
lesquels on aura auparavant cultiv
exprimenter.
En cas de succs, il est absolument indispensable d'oblenir

des rtrocultiires, en partant des lsions obtenues. C'est la seule
preuve irrfutable de la russite de Texprience.
Blastomyctes.
Les cultures seront examines dans
le lactophnol et colores
peut aussi faire des frottis et les colorer, soit
au Romanovsky, soit au bleu coton en solution aqueuse 1 p. 100,
l'azur II alcalin, etc. Dans les frottis d'organes et dans les
au bleu coton.
On
coupes, on pourra les rechercher par la mthode de Gram. L

bleu de toluidine en solution dans l'eau distille (Vuillemin et
Potron) colore bien la membrane, surtont dans les coupes de tissus.
L'action pathogne sera tudie
le
plus souvent par inoculation
intra-pritonale au Lapin ou au Cobaye.
Pour obtenir des asques avec les Levures, faire des cultures soit
sur blocs de pltre, soit sur milieu trs peu sucr
(eau 100,
glose 1, peptone 1, glucose O.^lo), ou mieux encore sur des
'
lames en terre de pipe (Thiry) plongeant, dans un tube essai,

dans quelques cm"^ de ce dernier liquide prpar sans glose.
Champignons des
teignes^.
1. Prlever les
poiis, squames ou cheveux avec la pincepiler
ou par raclage avec une lame. Conserver entre deux lames flambes, enveloppes dans une feuille de papier portant les indications
manuscrites. Cette rserve peut fournir pendant longtemps des

cultures pures ou du matriel de diagnostic.
2. Diagnostic.
men extemporan
La mthode classique consiste faire l'exala potasse 30

p. 100 (eau 70, potasse en
dans
pastilles 30). Mettre le
cheveu ou
la
squame
entre lame et lamelle,
Gorodkowa, Uober das Vcrfahren rasch die Sporcn vou Ilofepilzen zii
gcwinncn. Bull, jardin iuipvial Sainl-Pctcrsiourij YIII, p. 165, 1908.
5. Tous les dtails qui vont suivre (sauf la nouvelle mthode (|ue je
propose
pour le diagnostic) sont emprunts l'ouvrage du D'" Sabouraud, Maladies du cuir
chevelu.., III, Maladies cryptogamiques. Les leir/nes. Paris, Masson. in-8" de 8r5 p..
1.
28
pi., 1910.
715
TECUiMQUE MYCOLOGIQUE
cliauITer avec prcaution jusqu'

de polasse
la prparation telle quelle, aprs
Examiner
bulles.
de
apparilioii
avoir essuy les bords avec des bandelettes de buvard. Diapbragmer
dans
soliilion
la
fortement.
n'est pas facile, aprs le traitement par la potasse, d'obtenir
Il
les comparai])rparations permanentes indispensables pour

sons.
les
Je prfre beaucoup, pour le diagnostic,

Nouvelle mthode.
cheveux ou les squames par un des claircissants de
Amann. Le lactophnol n'claircit pas assez le meilleur milieu
employer est le chlorallactophnol (p. 724). Si les cheveux sont
traiter les
trs
opaques, prendre le chlorallactophnol salicyl

Chauffer trs lgrement pour faciliter la pntration.
ainsi,
des
instantanment,
claircies
que par
sont pas dissocis.
la
prparations
jiolasse et
Le cheveu
au
725).
([).
On
obtient
moins aussi bien

les lments ne
dans lesquelles
est
simplement ramolli, mais ne
s'crase pas.
ces prparations permanentes, on peut les monter

en lutant simplement la lamelle au lut de Kronig. On
du
peut aussi enlever la lamelle, absorber Tclaircissant avec
buvard et le remplacer par du chloralphuoL puis par de la trbenthine de Venise ou du baume. L'opration ne demande que
Pour rendre
telles quelles,
quelques instants
et les
cheveux
sont peu fragiles.

3. Prparations colores de
trois
cheveux
et
bien car
ils
de squames. Mthode
Dgraisser au chloroforme, faire bouillir deux

minutes dans Tacide formique, laver l'eau distille,
de Sabouraud.
ou
la sup}ortent trs
colorer une minute au bleu de Sahli (p. 391), laver, dshydrater,
monter au baume.
4. Mthode d'ensemencement.
Tout
le secret
de
la
russite
consiste dans V ensemencement parcellaire sur le milieu d'preuve

la partie parasite du cheveu ou du
(p. 703)
en parcelles aussi petites que possible,
tre
divise
donc
devra
poil
sur une lame tlambe, avec un scapel strile. Les fragments,
saisis avec le fil de platine flamb puis humect sur la glose, sont
de Sabouraud
disposs dans les tubes,
fragmentation
est
un centimtre Tun de
l'autre.
Cette
les lindispensable pour mettre en libert

condition sans laquelle la culture ne serait
ments du myclium,
pas possible.
Poir riierps
circin, on
fait
sourdre du pus ou (W
la
srosit
MKTHODES SPECIALES
716
qu'on ensemence. Si
la
lsion est sche,
on racle des squames
qu'on ensemence.
qu'on fragmente
Sabouraud recommande de faire de nombreux tubes (5 ou 6 au
moins) el de n'ensemencer que 5 ou 6 parcelles sur chaque tube.
el
Laisser les tubes non capuchonns la temprature ordinaire, ou

au plus l'tuve 25. Pour conserver les cultures avec leur
forme ty|ique et viter l'apparition du plomorphisme, il faut
repiquer sur miheu de conservation (p. 704).

5. Inoculations exprimentales.
Le Cobaye est l'animal
de choix, mais il est immunis par une premire inoculation.
Tondre entre
les deux paules, charger de culture une aiguille

mousse flambe, insrer le Champignon dans le derme. Le traumatisme est guri en cinq' jours; les lsions apparaissent vers le
huitime jour
C'est vers le
et gurissent spontanment au bout d'un mois.

quinzime jour qu'on trouve le |)lus de poils malades,
la base. On peut aussi inoculer des poils

mais
en
malades,
ayant soin de ne prendre que la base, pour
parasits
surtout
viter les Moisissures banales qui souillent l'extrmit.
Myctomes.
Le diagnostic des myctomes
doit toujours se faire par l'examen

des grains dans la potasse, chaud ou froid
ce procd permettra de reconnatre la prsence des filaments mycliens, d'craser
:
forme, etc. Pour les myctomes Discoon

aussi
faire
des frottis avec les grains et colorer
pourra
mijces,
un examen l'tat frais bien
par l'azur II alcalin ou par le Qram
les grains, d'tudier leur
avec ou sans potasse, montrera toutefois beaucoup plus de

choses que ces frottis, o les lments sont dissocis et fragments.
fait,
Il
faut
toujours fixer
histologiquement des pices.
Pour
les
coupes, on emploiera d'abord la coloration l'hmatine-osine

qui permettra de juger des ractions des tissus. Si le Champignon
ne se colore pas, on compltera la coloration en faisant un Qram

ordinaire ou modili d'aprs Lignires (p. 717). Bien entendu, les
pices seront lixes au Bouin comme d'habitude. La dtermination
du Champignon ne peut se faire que par les cultures.
Si on pense avoir isol l'agent pathogne, il faudra exprimenter
1.
E. Briimpt. Les
XXI,
1906.
myrtomos. Arch. de
parasitolorjie.
X.
p.
489-579. pi. XII-
TECHNIQUE MYGOLOGIQUE
717
par inoculations locales (inlhoile de Pinoy, p. 713), de pifrence par insertion sous la peau de fragmenis de Bambou, pines,
on a obtenu des cultures.
aiguillons, etc., sur lesquelles
Actinomycoses.
L'tude
pratique des actinomycoses comprend le diagnostic,

les cultures.
Texamen des coupes et

Examen du pus.
La recherche des grains dans
le
pus ne
prsente gnralement aucune difficult il suffit d'taler un peu

de pus sur une lame et d'examiner l'il nu ou un faible gros:
sissement.
On
isole les grains
avec une aiguille, on
les
transporte
dans une goutte de solution physiologique et on examine entre

lame et lamelle en crasant lgrement. En diaphragmant convenablement, on voit trs bien l'aspect miiriforme des grains et,
dans
plus crases, les filaments et les massues.

veut
isoler une certaine (piantit de grains, on peut,
Lorsqu'on
comme le fait Lignires, traiter le pus par la potasse 10 p. 100,
les portions
centrifuger et laver
le
dpt plusieurs reprises.
Coloration du pus.
La coloration des Champignons de l'actinomycose prsente une difficult particulire, parce qu'il faut
mettre en vidence les filaments mycliens et les massues. On
profite
nent
le
de ce que les filaments sont fortement basophiles
Gram,
prennent pas
et
pren-
que les massues sont plutt acidophiles et ne

Gram. On pourra donc faire d'abord un Gram, par
tandis
le
mthode ordinaire, puis colorer le fond et les massues par l'osine 1 p. 100 ou mieux par la fuchsine acide 1 p. 100, ou
encore par la fuchsine phnique de Ziehl, mais sans chauffer. La
fuchsine acide prsente l'avantage de donner une coloration intense
on arrte la
et de permettre une diffrenciation facile par l'eau
la
diffrenciation en lavant l'eau acidule par l'acide actique.

On peut faire des coupes de pus trs instructives, en laissant
tomber de grosses gouttes de pus dans du Bouin et en traitant

ensuite comme un fragment de tissu.
Coloration des coupes.
De trs nombreuses mthodes ont
t proposes \ mais aucune n'est parfaite. Celle qui m'a donn
1. Voir notamment la rovuc de P. Chausse, Mthodes de coloration communes

l'actinobacillose. l'actinomycosc et la l)otryomycose. Anii. Institut Pasteur,
XXIII, p. 503-508, 1909. D"aprs Lignires. la meilleure mthode pour colorer
V Actinobacillp est le Romanovskv.
METHODES SPECIALES
718
les meilleurs rsuUats est encore celle de Lignires* que j'emploie
comme
1.
il
suit
Colorer l'hmaliae, diffrencier et virer
tude (p. 374).

2. Colorer au violet pliniqu (p. 39i) pendant
comme
trois
d'habi-
minutes
froid.
3.
Laver rapidement Teau.
4.
Faire
agir
5.
Sans
laver,
Lugol (p. 395) pendant une minute.

dcolorer par la solution de Lignires
le
Alcool
40 cm-^.
Actone
Acide acli(iue cristallisable
ôl. aq. sat. de fuchsine acide
10
VI gouttes.
coupe prenne une coloration rouge vif et que

d'actinomycose restent seuls colors en violet (surveiller
jusqu' ce que
les grains
la
au microscope).
6. Diffrencier dans de l'eau propre, jusqu' ce que les massues apparaissent en rouge vif sur un fond rose trs clair. A ce
moment, laver l'eau actifie pour arrter la dcoloration.
7.
On
et les
Alcool absolu, xylol, xylol actique (p. 422), baume.

peut aussi faire un Gram ordinaire et colorer ensuite
massues par Tosine, en diffrenciant
ou par
rubine acide 1
la
p.
comme
il
100, en diffrenciant
le
fond
est dit p.
419
comme
plus
haut.
la prparation est bien russie, les noyaux sont violaprotoplasmes ross, le collagne et les massues rouge vif,
filaments mycliens bleu violet trs fonc. Si on a soin d'ac-
Lorsque
cs, les
les
tifier le xylol, la
conservation est assez bonne.
L'isolement est diflicile cause de la prsence des

Cultures.
autres Bactries, mais c'est le seul procd qui permette d'idenlilier
srieusement les Discomyces ~. Les cultures arobies se font sur glose
sucre 1 p. 100 dans les conditions, ordinaires. Pour les cultures
anarobies, on emploiera le procd suivant
1. Prendre les grains dans des lsions fermes, puis les laver au
:
bouillon strile ou l'eau strile.

2. Choisir un grain et l'craser entre deux lames. Pour l'actinomycose
du Buf, vrifier si ce grain renferme bien des filaments, en exami-
nant dans
l'eau strile.
Arch. de parasitologie. VIL p. 444. 1903.

et Pinoy. Sur une nouvelle forme de discomycose cutane. Ann. de
dermat. et de ayphU., X, p. 417-43-2, 1909.
1.
2.
Ravaut
719
produit de la dissociation dans un tube de glose ordip. lUO de dextrose et liqulie 40 ou 45". Bien
naire, additionne do
le produit dans toute la masse
ag'iler avec le lit de plaliue, pour rpartir
du milieu de culture. Laisser refroidir sans incliner. Mettre l'luve
37". Les colonies se dveloppent en deux huit jours dans la profondeur de la glose.
4. Repiquage. Extraire la glose du tube et prlever les colonies en
la dcoupant avec une forte spatule de platine. Choisir les colonies au
microscope, en examinant les fragments entre lame et lamelle llambes,
un faible grossissement. Laver nouveau dans du bouillon strile.
Ensemencer comme prcdemment, dans la profondeur de la glose,
et mettre l'tuve.
Pour faciliter ces oprations, employer des tubes de Burri, ouverts
aux deux extrmits et ferms d'un cot par un bouchon de caoutchouc
il est facile d'en extraire le
cylindre de glose.
Lorsque les grains sont trs souills de Bactries, on prati([ue le
premier ensemencement comme il a t dit plus haut et, en outre, on
met quel([ues grains, bien lavs, dans des tubes secs et striles qu'on
garde l'obscurit et la temprature ordinaire, pendant deux ou trois
semaines. On fait ensuite des ensemencements avec ce matriel conserv, aprs la mort de la majorit des Bactries.
Semer
3.
le
Sporotrichose.
Le diagnostic ne peut
trs difficile
de dceler
que sous
il
n'existe
la
lre fait
que par
les cultures, car
il
est
Chaupignon dans les pus des lsions,

forme d'lmenls ovodes dissocis, ou
le
conidies-levures. Pourtant, Pinoy et iMagrou ont obtenu de bonnes

colorations de ces conidies-levures avec la mthode de Glaudius
(p.
396), lgrement modifie par Brdr; les temps sont simple-
ment augments vingt minutes pour la coloration au violet et

dix minutes de contact avec la solution picrique.
Dans les lsions fermes, on puise le pus ou
Prlvement.
:
la srosit
sanguinolente avec une seringue strilise. Pour les

on ensemence le pus qui est sous la crote ou
lsions ouvertes,
bien on nettoie Teau bouillie et on

les
fait
sourdre del srosit
cultures ainsi obtenues sont presque toujours pures
d'em-
ble.
Ne pas craindre d'ensemencer largement en strie et de faire de

nombreux tubes (au moins cinq ou six). Ensemencer sur glose
non capuglycosede Sabouraud ou sur carotte. Laisser les tubes
chonns la temprature ordinaire. Les colonies typiques apparaissent du cinquime au douzime jour.
dfaut de milieux de culture, on peut conserver
le
pus peu-
MTHODES
720
(lanl(jiiel(iiies
se dveloppe
Sl'ECIALES
jours dans des tubes secs et striles. Le Champignon

souvent trs bien dans ces conditions sur le verre
sec.
Il
faut bien savoir, et c'est sur quoi on n'a pas assez insist, fjue
toile qui se dveloppe n'est pas forcment une
toute colonie
Le diagnostic ne sera certain qu'aprs

microscope des caractres morphologiques du
Champignon. Les cultures bien dveloppes sont assez caractristiques, mais, en bonne mycologie, les caractres macroscopiques
colonie de Sporotrichtim.
vrification
au
ne suffisent pas pour
une dtermination. La
faire
microscopique pourra se
faire
sur les
vrification
colonies dveloppes
au
eu soin, comme le recommande

de
laisser
couler
une
goutte de pus le long de la paroi
Gougerot,
du tube, vers le point de rencontre de la glose et du verre. On
contact du verre, surtoul
si
on
peut aussi ensemencer tout en haut de la glose, mais, en ce

point, on risque de voir les colonies se desscher rapidement.
Pour tudier la morphologie des Sporoirichum, il faut absolument faire des cultures sur lames sches, ou mieux des cultures
en cellules. Les meilleurs colorants sont l'azur
II
alcalin et le bleu
coton. Monter au lactophnol ou la glycrine glaline.

Pour Vtude exprimentale, l'animal le plus sensible est le
Souris), chez lequel on obtient soit une orchite sporotrichosique, soit des lsions gnralises. Pinoy et Magrou ont
Rat (ou
la
obtenu rcemment l'orchite caractristique, chez le Cobaye, par

simple insertion dans le testicule d'un crin charg de pus sporotrichosique trs pauvre en lments parasitaires. Il y a l un procd de diagnostic qui peut rendre des services dans les cas douteux l'animal est aneslhsi, un des testicules est abaiss dans
:
sa bourse,
on cautrise au
de sortie, puis on passe

dire
que
trls
les rsultats
le
rouge le point d'entre et le point

crin travers le testicule. 11 va sans
fer
exprimentaux doivent toujours
tre con-
par des rtrocullures.
1. Pinoy et Magrou, Sur une mthode do diagnostic possible do la sporotrichose

H. Soc. de biologie, p. 387, 4 nov. 1911.
par inoculation directe de pus au Cobaye.
Pino}' et Magrou ont tent cette exprience la suite du succs obtenu par
en
inoculant
au
avec
le
mme
Magrou,
Cobaye,
procd, le Botryocoque de la
botryomycose cquine.
C. R. Soc. de biologie, p. -^^l,
18 fv. 1911.
CHAPITRE
III
HISTOLOGIE ET CYTOLOGIE
VGTALES
Il
peut tre utile pour le micrographe,
de savoir examiner extemporanment
et
et
mme
pour
le
mdecin,
colorer une coupe de
vgtaux ou de rechercher un Champignon parasite dans

plante. Aussi, je donnerai quelques indications trs sommaires
tissus
une
de technique botanique lmentaire.

Fixation.
Elle diffre suivant le but qu'on se propose. Pour
les recherches cytologiques, on se sert des fixateurs
histologiques;
pour les travaux anatomiques, il suffit de conserver le matriel

dans Talcool ^ ou dans un mlange parties gales d'alcool, de
glycrine et d'eau.
Les tissus vgtaux peuvent tre inclus la

en coupes sries, exactement comme les tissus
animaux, pourvu qu'ils ne soient pas trop lignifis.
Inclusion.
paraffine et dbits
Pour un examen
rapide, ce
mode
d'inclusion n'est pas ncessaire
on obtient d'excellentes coupes au microtome main ou au microtome de Lelong, aprs enrobage dans la moelle du sureau (p. 327).
Pour couper les objets durs {bois, graines), il faut prendre un
fragment; humecter
petit
de
la
glycrine,
suivant
la
le
surface de section avec de l'eau ou

cas; faire des coupes aussi
minces
que possible et de trs peu d'tendue, pour ne pas casser le

tranchant du rasoir. Prendre une lame solide, dos large
(fig.
155, y) et faces planes. Ne pas attaquer l'objet par la tranche,

la surface. Si le couteau
pntre trop, le retirer sans
mais par
1. Si le matriel vient durcir au

point d'tre trs fragile, il sui'rit, pour le
ramollir, de le plonger quelque temps dans leau. On peut le remettre ensuite
dans l'alcool fort, sans qu'il redevienne friable (de Vries).
M. Laxgkcdn.
Prcis de Mioroscopie.
-iO
722
INIKTHODES SPCIALES
essayer d'achever
la
risquerait crabimer
comme
coupe, car celle-ci serait Irop

trauciiaut En ayant soin de
le
[iaisse
el
ou
tirer le rasoir
on arrive enlever de petits copeaux

surtisamment tendus pour Texamen microscopique.
Les matriaux lignifis, conservs dans Talcool, peuvent tre
trs
il
a t dit p. 'SH,
minces
et
ramollis suffisamment par
un mlange
parties gales d'alcool et
de glycrine. Couper avec un rasoir dos trs large
(tig.
155, y)
et faces planes.
Pour
inent,
rincliision la paraffine d'objets
il
est indispensable
non
fixs histologique-
de prendre des tissus parfailenienl
frais
bien lurgides et de les dshydrater trs progressivement, en

commenant par de l'alcool 25, auquel on ajoute peu peu de
l'alcool 95 par petites portions et en agitant soigneusement.
et
Les coupes d'anatomie vgtale ne peuvent gnralement pas

en eflet, les cellules doivent tre vides
tre colles sur lames
par l'hypochlorite de sodium

pas
et la
plupart des colles ne rsistent
ce ractif. x\ussi, la [)lupart
coupes non colles,

sureau.
faites
Bain d'hypochlorite.
chlorite de
la
Il
du temps, emploie-t-on
paraffine ou dans la
est essentiel
sodium ou de potassium
et
non
les
moelle de
d'employer l'hypo-
l'eau de Javel ordinaire,
qui n'est gnralement qu'une solution trs impure d'hypochlorite

de chaux. On pourrait toutefois prcipiter la chaux par le carbonate de sodium ou de potassium et employer
11
rile,
la
liqueur
filtre.
ne faut pas prolonger trop longtemps l'action de l'hypochlosurtout avec les tissus jeunes qui |)ourraient tre dtruits.
La dure des bains variera donc de quelques secondes
cinq ou
dix minutes.
l'eau acidule par l'acide actique ou dans
de soude, puis l'eau ordinaire.
1" Carmin et vert d'iode.
La mthode clasColoration.
Laver ensuite dans

le bisulfite
sique est la double coloration par

(ou le bleu de mthylne alun).
le
carmin alun
et le vert d'iode
Colorer une heure au moins au carmin alun de Grenacher (p. 371).

Laver rapidement l'eau.
3 Colorer quelques secondes, dans un verre de montre renfermant
quelques centimtres cubes d'eau laquelle on a ajout un peu de vert
1
2"
d'iode.
4"
1.
Monter
Sauf
la glycrine glatine
la glatine forraolc
ou au sirop d'Apathy.
de P. Masson
(p. 346).
HISTOLOGIE ET CYTOLOGIE VGTALES

Les lments
lignifis sont
deux couleurs
parfait.
vert solide
la
et
Bleu
colors eu beau vert, le reste en
les prparations sont trs belles et le contraste
rouge carmin;
2"
12^
de
mthode donne,
Le
mme
deltapurpurine.
mthylne
mon
avis
des
rsultat peut tre obtenu avec le
et rouge de ruthnium.
Cette
\ des rsultats encore plus beaux, et
peut tre employe facilement avec

sur lames.
les
coupes
la
paraffine colles
1 Colorer cinq dix minutes dans le bleu de mthylne alun - (bleu

de mthylne 1, alun 10, eau 100), laver l'eau.
2 Colorer cinq dix minutes dans la solution de rouge de ruthnium.
Ce sel (sesquichlorure de ruthnium ammoniacal), dont le prix est trs
lev (60 fr. le gr.), se vend par dcigrammes, sous la forme d'une
poudre brun rougetre, soluble dans l'eau et dans la solution d'alun
mais non dans l'alcool et la glycrine.
Comme sa solution aqueuse ne se conserve pas, on la prpare
extemporanment, en ajoutant une trace de ce corps quelques
centimtres cubes d'eau distille, dans un verre de montre, de manire
obtenir un lifjuide rouge fonc.
3 Monter au baume, au sirop d'Apathy ou la glycrine glatine.
Le
sclrenchyme en violet, le bois

parenchymes en rose plus ou moins fonc.
Mthode de Petit ^. Colorer le lige en rouge par la
lige se colore en vert, le
en bleu,
3
les
teinture d'alkanna*; laver rapidement Talcool et colorer le bois

en vert par le vert d'iode alcoolique, puis laver l'alcool; colorer
la cellulose
en jaune par l'action successive de solutions aqueuses

plomb et de bichromate de potassium, avec lavage
d'actate de
l'eau distille entre les deux.
Monter
sirop d'Apathy ou au baume.

4 Violet neutre de Godfrin
de violet neutre de Casella

sont colors en rouge brun, le
1.
fig.,
au
Faire une solution aqueuse

5000. Les composs pectiques
bois et le lige en violet fonc. La
'.
1 p.
M. Langcron, Monographie du genre
in-S" de 160 p., 5^
la glycrine glatine,
Aleurites.
Thse de Paris (mdecine),
1902.
2. L'alun joue le rle de mordant et rend la coloration au bleu de mtliylnc

plus stable.
Bull. Soc. bot. de France, L,
3. C. R. Soc. de biologie, LV, p. 507, 1903.
p.
181, 1903.
[Journ. de bt., VI, p. 447, 1890) conseille de prparer

10 g-r. d'alkanna pulvris par 30 cm^ d'alcool
absolu, filtrer et vaporer Ttuve. Dissoudre le rsidu dans 5 cm' d'acide actique
cristallisable, puis ajouter 50 cm' d'alcool 50 p. 100 et filtrer aprs vingt-quatre
heures. Si, pendant la coloration des coupes, un prcipit avait tendance se
4.
Voici
comment Guignard
la teinture
d'alivanna. puiser
former, ajouter un peu d'alcool 50 p. 100.

5. Bidl'. Soc. bot. de France, XLVI, p. 321, 1899.
METHODES SPECIALES
724
cellulose, la callose et la ciiline
ne se colorent pas. Ce seul
ractif
permet donc, en s'aidant de ranalomie, de caractriser tous

lments d'une coupe.
En
alun
rsum^ avec
et le
Sudan
les
rouge de ruthnium, le bleu de mthylne

on peut mettre en vidence toutes les parties
le
III
essentielles des tissus vgtaux, dans les coupes traites pralable-
ment par
riiypochlorite de sodium.
A. la
peut suffire seul.
Montage
non colors.
d'objets
rigueur,
ment de recherches anatomiques, les

ncessaires. Une foule d'objets peuvent
ainsi sans coloration^ qu'il s'agisse de
et
neutre
le violet
Lorsqu'il s'agit simplecolorations ne sont pas
examins
tre
coupes ou de
monts
et
petits
organes
vgtaux entiers.
Pour ces oprations, je conseille vivement d'employer les

mthodes de Amann (p. 575, note 2), qui donnent d'excellents
rsultats et pargnent
Le ramollissement
fait
trs
bien dans
beaucoup de temps.
et le
le
gonflement du matriel dessch se

de
(p. 444) pur ou tendu,
lactophnol
prfrence chaud. Le chlorallactophnol

Hydrate de chloral crist
Acide plinique crist
Acide lactique pur
2 parties
1
.......
donne encore de meilleurs
maximum, employer
le
rsultats.
lactochloraJ
en poids.
Pour obtenir
^
le gonflement
mlange parties gales
d'hydrate de chloral et d'acide lactique.
Le matriel frais peut
tre fix et dshydrat trs
rapidement
le chloralchlorophnol (p. 575). Le

chloralphnol
est
mis
admirablement
en vidence et les tissus les plus
noyau
aqueux sont dshydrats sans contraction. On opre sur lame et,
par
et
le
pour
les
objets pais, lignifis ou fortement colors, on chauffe
lgrement.
On
renouvelle une ou deux
fois le liquide,
en
l'aspi-
rant chaque fois avec des bandelettes de buvard. Finalement,
on remplace peu peu le chloralphnol par du baume au xylol.

Le tout ne dure que quelques minutes.
Pour claircir des objets lignifis et trs fortement colors, on
ajoute au chlorallactophnol du salicylate de sodium K On obtient
ainsi un des plus puissants claircissanls qui existent
:
1.
XI,
Le
salicylate de sodium a t prconis jiar l^cnz [Zi'itschr, f. iviss. Mih'r..

Dissous dans son poids d'eau, il donne un liquide neutre, non
p. 16-21, 1894).
725
Hydrate de chloral crisl

Acide i)lini(}ue crist
Acide lacti(iue pur
Salicvlate de
4
4
2
sodium
Milieux cupriques.
Pour conserver
la
couleur verte de
la
chlorophylle, il sullil d'ajouh;r aux milieux de Amauu 2 p. 1000

de chlorai-e de cuivre pralablement dissous dans un peu d'eau.
Microchimie vgtale.
Je
me
bornerai
indiquer des
ractions simples, permettant de reconnatre les principaux composs qu'on peut avoir caractriser dans des vgtaux. Je ne
puis donner
bibliographie de toutes ces ractions, mais je dois
la
dire qu'en ce qui concerne les mend)ranes, la majorit de nos

connaissances est due aux belles recherches de Mangin. Pour les
ractions gnrales, se reporter aux indications de la p. 668.
Aleurone.
Se colore
en jaune par l'iodure de potassium iod (eau

de Millon.
100, iodure de potassium 0,5, iode 1), en rouge par le ractif

Donne les ractions des matires albuminodes.
Ces corps ne donnent pas de ractions absolument

Albuminodes.
caractristiques, aussi faut-il toujours essayer plusieurs ractifs pour les
reconnatre srement. Il est bon de fixer d'abord l'objet par l'alcool
absolu, qui durcit les tissus et dissout un certain nombre de substances
(rsines, graisses, chlorophylle, alcalodes, tannins) qui pourraient
troubler les ractions. Il est bon (jnelquefois d'ajouter l'alcool 5 p. 100
d'acide tartrique (Errera) pour coaguler les albuminodes.
Les principaux ractifs sont les suivants, par ordre de sensibilit
dcroissante
iodure de potassliiin iod, coloration jaune;
cosine en solution aqueuse trs faible, coloration rouge;
ractif de Millon ', coloration rouge (qui se produit aussi avec cer:
certains composs aromatiques);

coloration jaune, obtenue par l'action de
l'acide azotique concentr: celte coloration devient plus fonce par addition d'ammoniaque:
acide pliosphoniolybdiqiie-, coloration jaune, obtenue en une ou deux
heures.
sulfate de nickel en solution concentre dans l'ammoniaque, coloration
taines
gommes
raction
et
xanthoprotqiie,
jaune ou bleue, cette dernire passant l'orang par l'action de la

potasse (raction de Guezda); le tannin se colore peu prs de mme;
mais la couleur ne vire pas par la potasse;
avide d'eau, ni caustique, ni toxique, miscible l'acide phnique et l'essence
de girofle. Il gonfle l'amidon et n'empche pas la raction de l'iode.
dissoudre du mercure dans
1. Ce ractif doit tre prpar extemporanment
son poids d'acide azotique, puis tendre d'un gal volume d'eau distille.
2. On emploie cet acide sous forme de phosphomolybdate de sodium dissous
dissoudre 1 gr. de phosphomolybdate de sodium dans un
dans l'acide azotique
mlange de 90 gr. d'eau distille et de 5 gr. d'acide azotique concentr. Filtrer
de
aprs quelques jours
repos.
:
METHODES SPECIALES
726
traiter les coupes par une solution assez concentre

rcaclion du biurct
de sulfate de cuivre, laver une heure l'eau, puis traiter par la potasse
concentre. La coloration obtenue varie du rougetrc au violac, suivant
la nature des albuniinodes.
:
part les colorations fournies par Tiodc, Tosine, et l'acide azotique,

donnent des prcipits colors, opaques, assez longs
se produire. Comme pour toutes les oprations microchimiques, la
russite et Tapprcialion du rsultat sont choses dlicates, qui exigent
les autres ractions
une ducation pralable.

Se colore en
Amidon.
bleu par l'iode qu'on emploie sous forme

d'iodure de potassium iod; croix noire en lumire polarise (p. 206).
Pour la recherche de l'amidon dans le matriel dessch, traiter par
l'acide lactique aucjuel on ajoute un peu d'iode (Lagerheim). Les tissus
reprennent leur volume primitif.
Insoluble dans l'oxyde de cuivre ammoniacal. Se colore
Gallose.
par la coralline sode (en solution dans le carbonate de sodium
30 p. 100; au besoin diffrencier ensuite par le carbonate de sodium
4 p. 100), les bleus d'aniline solubles l'eau (particulirement le bleu

colon C 4 B de Poirricr, le bleu brillant, etc.). Les bleus doivent tre
employs en solution acidule par 3 p. 100 d'acide actique.
Se colore en bleu par les acides sulfuricjue et azotique

Garotine.
concentrs et par le mlange d'acide chlorhydrique et de phnol.
Soluble dans le sulfure de carbone avec une belle couleur rouge sang.
Pour
le plochroisme, voir p. 207.

Les ractions de la cellulose sont quelquefois assez difCellulose.
ficiles oblenir. En effet, elles ne se manifestent clairement qu'aprs
transformation de cette substance en matire amylode. Cette transformation se produit sous l'influence des chlorures mtalliques, des acides
minraux ^âcide phosphorique iod de Mangin) et surtout des alcalis
caustiques. L'iode, aprs action de l'acide sulfarique, donne une colo-
ration bleue. Les chlorures de zinc, de calcium et d'aluminium (Mangin)

iods 1 donnent une coloration violette
cette raction classique est
quelquefois trs difficile obtenir, cause de la lenteur avec laquelle
:
agit le chlorure mtallique. Le chlorure de zinc trop concentr ne donne

rien. Vis--vis des colorants, la cellulose (transforme) est acidophile et
prend de prfrence des couleurs azoques rouge congo (en solution

dans l'ammoniaque tendue 25 p. 100) benzopurpurine, deltapurpu:
en bain alcalin; orseilline BB -, rouge d'orseille A, azorubine, en

bain acide. Soluble dans l'oxyde de cuivre ammoniacal 3 (ractif de
rine,
Schweitzer).
Le chlorure d'lain iod (Mangin) donne une coloration bleue qui
permet de distinguer la cellulose de l'amidon; ce dernier se colore en
violet par le mme ractif. On le prpare en dcomposant par trs peu
d'eau le chlorure d'lain fumant; on ajoute un peu de solution aqueuse
d'iode et de chlorure de |otassium.
La
cellulose des
Champignons
est bien diffrente parce qu'elle est
gn-
1. A 10 cm' do soutioa
sirupeuse de ces chlorures, ajouter 5 dcigr. d'iodure
de potassium et 1 dcigr. d'iode. Conserver en flacons jaunes.
2. Voir p. 730, note 3.
3. Se prpare en arrosant
d'ammoniaque de la tournure de cuivre. Doit dissoudre le coton.
727
mlange d'une grande quantit de cldtinc, aussi ne donneaucune des ractions prcdentes.
I/hinalun colore plus ou moins toutes les celluloses non lignifies.
Le Sudan III en solution alcoo!i(jue les
Membranes cutinises.
raleinent
t-elle
'
colore en rouge intense, la cyanine en bleu.
En f^nral, les colorants directs de la

Membranes lignifies.
laine et de la soie colorent bien le bois, tandis que les colorants directs
du coton colorent les parties non lig^nifies. 11 est bon de fixer la couleur par un bain d'alun 10 p. lUO. Les meilleures colorations, pour
mettre le bois en vidence, sont les suivantes safranine aniline (diirenciation dans l'alcool cblorbydriquc); carmin alun et vert d'iode, vert
de mthyle ou bleu de mthylne (p. 722): vert solide et dellapurpurine (p. 723); on peut encore colorer les coupes pendant quinze minutes
dans une solution alcoolique concentre de cyanine, laver l'alcool,
puis colorer quinze minutes dans une solution de rouge congo dans
:
l'ammoniaque
5 p. 100, alcool, xylol,
baume. Les membranes
lignifies
sont bleues, les autres rouges,

La fuchsine ammoniacale donne aussi une bonne coloration du bois,
du suber et de la cutine on sature d'ammoniaque une solution alcoolique de fucbsine, jusqu' obtention d'une coloration jaune paille. Cette
solution ne se conserve que pendant quelques jours. Colorer quelques
minutes, laver l'eau distille, puis l'eau actifie, et colorer de
nouveau, pendant quinze minutes, par le bleu de mthylne. Monter au
baume. Notons enfin que le bois et le suber prennent le Gram.
:
Les ractions caractristiques de la lignification sont les suivantes

coloration pourpre intense par l'action successive de la phloroglucine en
solution alcoolique puis de l'acide chlorhydrique tendu: coloration
jaune par le sulfate d'aniline suivi de l'acide sulfurique tendu. La
solution aqueuse de fuchsine donne, aprs diOerenciation par l'alcool
picriqu (une partie de solution alcoolique sature pour deux parties
d'eau), une coloration exclusive du bois.
Se colore en rouge par le Sudan III et la teinture d'alkanna,
Lige.
en bleu par la cyanine en solution acjueuse, en brun par l'iode et l'acide
sulfurique. 11 est insoluble dans l'oxyde de cuivre ammoniacal.
Il se colore lectivement dans le violet de
gentiane ammoniacal ou le
vert acide ammoniacal
on les prpare en ajoutant peu peu de l'ammoniaciue une solution alcoolique de ces colorants jusqu' dcoloration
presque complte. Aprs une aciion de (juelques minutes, on lave
l'acide chlorhydrlcjoe 5 p. 10) pour dillcrencier la couleur; en lavant
simplement l'eau, le bois reste color.
Avec le vert acide, on peut faire une double coloralion, en ajoutant
extemporanment, la solution ammoniacale, un peu de solution
aqueuse concentre de rouge congo. On colore cinq minutes, puis on
lave l'eau. Le bois et le suber sont verts, le reste jaune.
Ils se comportent comme des acides et
Composs pectiques.
prennent les colorants basi(]ues (de prfrence en solution acidule par
1
p. 100 d'acide actique) mais non les colorants acides comme la cellulose. Le meilleur ractif de ces composs est le rouge de ruthnium,
la coloration ainsi ohtenue se conserve trs bien dans le baume. Le
:
Ce ractif a t introduit dans la technique botanique

\.
(^Malpighia, XII, 1898. trs nombreux dtails dans ce mmoire).
par Buscalioni
METHODES SPECIALES
728
violet neutre (p. 723) les colore en rouge bruntre. Le bleu de nnplilylne les colore nitachromatiquement.
la cellulose pure ne se colore pas par le bleu
Bactions diffrentielles
de mthylne et les matires pectiques ne prennent pas le congo
:
ammoniacal.
Tannin. Les composs lanniques se colorent en noir bleutre par
le perchlorure de fer, en brun par le bicliromate de potassium, en
rouge
la potasse, en bleu fonc par le bleu de mthylne. Ce dernier
colorant donne une raction trs nette, mme en solution trs tendue
(1 p. 500000), avec des tissus frais, mais il ne faut pas oublier qu'il colore
par
mme
de
la
phloroglucine.
Le ractif le plus commode est le Sudan III en

solution alcoolique, qui les colore en rouge vif (ce ractif colore aussi
les cires, les rsines, la cutine, la subrine et le latex, mais ne colore ni
Matires grasses.
la cellulose, ni la lignine, ni les mucilages). On peut faire une double

coloration par le bleu de mthylne et le Sudan (A. Meyer). Fixer
Tobjet sur la lame par une goutte de solution formole, ajouter une
goutte de bleu de mthylne 0,5 p. 100 et colorer dix minutes;
colorer ensuite par le Sudan alcoolique, en surveillant au microscope.

Les huiles grasses se colorent en rouge par le Sudan
Huiles.
sont insolubles dans l'acide actique et en partie solubles dans

l'alcool: les huiles thres se dissolvent dans l'acide actique et
Talcool, elles se colorent en bleu par la cyanine.
Elles se colorent en rouge par le Sudan III et la teinRsines.
ture d'alkanna.
11 y en a deux sortes
les gommes pectiques qui se
Gommes.
colorent comme les mucilages pectiques (rouge de ruthnium) et les
gommes cellulosiques (gomme adragante) qui se colorent la fois par
le rouge de ruthnium et par les colorants de la cellulose.
Les vraies gommes ne se colorent pas par la coralline sode et
prennent une couleur rouge intense avec le mlange de phloroglucine
et d'acide chlorhydrique. Lutz distingue les gommes de la cellulose par
l'action successive du rouge neutre de Cassella
et du vert acide J3E elles
'
de Poirrier
la
gomme
est rouge, la cellulose
pure verte.
Les mucilages cellulosiques (les plus rares, salep)

Mucilages.
prsentent les ractions de la cellulose, ils sont birfringents; les mucilages pectiques (les plus frquents, se gonflent et donnent des solutions
filantes) se colorent par les colorants basiques et par le rouge de
ruthnium (bonne conservation dans le baume); les mucilages callosiques se dissolvent sans se gonfler, se colorent par la coralline sode
et le bleu d'aniline en solution actifle, mais non par les colorants
basiques. La distinction n'est pas toujours facile, cause des mlanges
frquents de ces mucilages entre eux et avec les gommes.
Inuline.
Nous avons dj mentionn (p. 207) les proprits optiques
des sphro-cristaux d'inuline, obtenus en faisant macrer dans l'alcool
des fragments un peu pais de tubercules de Dahlia. L'inuline ne se
distingue optiquement des sphro-cristaux de phosphate de calcium que
par une birfringence plus forte. On peut encore caractriser chimi([uement ces sphro-cristaux en traitant les coupes d'abord par le naphtol a
gr.
2.
p-r.
dans 20 cm' d'alcool et 30 cm' d'eau.

20 dans 20 cm' d'alcool et 30 cm' d'eau.
2i
729
le thymol en solution alcooli(iue 15 p. 100, puis par l'acide sulfurique concentr. La coloration obtenue est le violet fonc avec le nnphtol
et le pourpre fonc avec le thymol. On peut aussi traiter les coupes
froid par une solution alcoolique d'oreine ', puis chaud par l'acide
ou
coloration rouge orang.

hlorhydrique
Molisch les caractrise comme l'inuline par l'action sucSucres.
cessive du naphlol a ou du thymol et de l'acide sulfurique concentr.
La raction est nette et rapide (deux minutes), avec la saccharose, la
:
maltose, la dextrose et la lvulose; elle est moins rapide

avec les autres hydrates de carbone, qui doivent d'abord
en sucre par l'action de l'acide sulfurique. Celte raction est trs sensible, elle permet de dceler 0.00001 p. 100 de sucre.
Ce sel se prsente gnralement sous forme
Oxalate de calcium.
de raphides ou de druses (masses hrisses de pointements cristallins)
ces cristaux sont insolubles dans l'eau et dans l'acide actique, assez
solubles dans l'acide chlorhydrique. L'acide sulfurique les transforme
( chaud) en une masse d'aiguilles de gypse (sulfate de calcium). Pour
distinguer l'oxalate de calcium du sulfate de calcium, employer une
ce ractif
solution de chlorure de baryum dans Tacide chlorhydrique
dissout l'oxalate et donne avec le sulfate un prcipit de sulfate de
baryum. En lumire polarise, les cristaux d'oxalate de calcium peuvent,
sous certaines orientations, ne pas s'illuminer entre les niois croiss.
Voir p. 671 la mthode de
Phosphore et phosphate de calcium.
Mac Callum. On peut aussi, d'aprs Lilienfeld et Monti, traiter les
lactose,
la
(15 30 minutes)
tre transforms
coupes par
le
molybdale d'ammonium pendant une heure au plus,
les
laver avec soin, puis les plonger dans une solution 20 p. 100 d'acide
au
pyroiâllique. La coloration des parties phosphores varie du jaune
On peut conserver les prparations dans le baume.

Le molybdate d'ammonium seul donne bien un prcipit jaune caracla
tristique avec les phosphates, mais il ne faut pas le confondre avec
raction xanthoprotique, due l'acide azotique du ractif. Le tartrate
de potassium empche la formation du prcipit.
Enfin une raction trs sensible est celle du phosphate ammoniacomagnsien. Traiter les coupes par un mlange de 25 vol. de sol. aq.
noir.
conc. de sulfate de
d'ammonium,
2 vol. de sol. aq. conc. de chlorure

obtient des cristaux caractristiques en
magnsium,
15 vol. d'eau.
On
forme d'X ou de couvercle de cercueil.
Quinine.
D'aprs Pozzi-Escot, ce corps donne, avec le chlorure de
platine, des granulations fortement birfringentes.
Ractions des principaux colorants

Alkanna (teinture)
lige, matires grasses, rsines.
:
Bleu coton
callose.
Bleu de mtliylne
tannin ahin bois et suber.
Carmin alunc membranes non lignilies.
:
pw
Congo bleuit avec les acides; Conjo ammoniacal

CoralUne sode callose (coloration fugace).
:
cellulose,
1. L'orcine est le princiiic colorant de Torseille. Cette dernire est le produit

brut de la fermentation des Licliens orseille (p. 401). au contact de l'air, de
Tammoniaque et de la chaux. Ne pas confondre avec Vorcine qui est produite
aux dpens de
l'orcine
par l'action combine de
Persio est de l'orseille sctie et pulvrise.
l'air et
de l'ammoniaque. Le
Mlh[IODES SPKCIALIiS
730
Cyanine
suber^
bois,
membranes
cuLinises,
laoplasles,
huiles
lhres.
Dellaparpurine (alcalinise) membranes non lignifies.

Fuchsine ammoniacale
bois, suber, culine.
bois, gommes, inuline (coloraPhlovoijlucine et acide chlorliydriqiie
tion fugace).
Bouije de ruthnium
composs pecliques.
bois et suber.
Safranine
Sudan III colore lectivement
suber. cutine, graisses, rsines,
huiles, cires; ne colore ni les tannins, ni les membranes non sub:
rifies.
Vert d'iode, vert de mthyle, vert solide

bois et suber.
Violet neutre
composs pectiques, bois et suber.
:
Mthode de Gram
bois et suber.
les fois
qu'il ne s'agit pas de
lactophnol de Amann rend les plus
grands services, quel que soit le groupe de Cryptogames qu'on
dsire tudier. Non seulement ce ractif facilite la conservation et
Cryptogames.
Toules
recherches cytologiques,
l'tude microscopique
le
du matriel
frais,
mais encore
il
permet de
restaurer, d'une manire surprenante, le matriel dessch, conserv dans les herbiers. L'imbihilion par le lactophnol froid,
ou, dans certains cas, chaud et mme l'bullition, rend aux

cellules leur turgescence et restitue aux organes la forme qu'ils
Ce liquide est donc indispensable })Our toutes

recherches de morj)hologie. Les prparations ainsi obtenues se
conservent indliniment; il suffit de les luter au lut de Krnig.
Les recherches cytologiques se feront par les mthodes habituelles; en outre, pour l'tude des lments sexuels mobiles
avaient l'tat frais

les
(anthrozodes),
la
mthode des
frottis
humides pourra rendre de
signals services, condition que ces lments soient en suspension dans une petite quantit de liquide.
Pour
les
se
reporter
la technique mycoloseulement quelques dtails sur

Champignons dans les lissus vgtaux.
Champignons^
702
720). J'ajouterai
gique (p.
la manire de colorer
les
Cette mthode^
s'applique surtout aux Peronospores et utilise

la richesse en callose de leur membrane. Les fragments -, frais
ou desschs, sont
bouillis
dans
l'alcool
pour enlever
l'air.
Blan-
chir pendant six douze heures dans l'acide chlorhydrique au

tiers, additionn de 5 p. 100 de chlorate de potassium. On conMangin. Bull. Soc. hist. nat. Auiiin, YIII. 1895.
Si les coupes sont dj excutes, il suffit de les passer l'eau de Javel,
puis de les laver, avant le traitement par la potasse alcoolique.
1.
2.
HlSTOLOGIlL ET CYTOLOGIE VGTALES

serve ensuite dans l'alcool.
731
Au luomeut
de colorer, ou Iraile i)eupotasse en solution concentre
danl une heure au moins par la

dans l'alcool. On colore ensuite dans Tacide actique, auquel on
ajoute quelques gouttes de solution aqueuse d'orseilliue BB et
^
de bleu d'aniline, de manire obtenir un liquide

coloration, on remplace peu peu le colorant par
violet.
la
Aprs
glycrine.
On peut
heures par un mlange de benzoazurine ou d azurine brillante et de rosaazurine, en dissolution dans
Le mjxlium
est bleu, les parois cellulaires sont roses.
aussi colorer
deux ou
trois
carbonate de sodium 20
le
p.
100. Laver l'eau
et
observer
glycrine, tendue avec une solution de sulfate de

cuivre 2 p. 100 qui fixe les couleurs. Le myclium est rose, les
dans de
la
parois cellulaires bleues.

fixe le matriel au
Kiilpin Ravn
Flemming (ou sinon mordance
dans Tacide chromique 1 p. 100). 11 colore quinze vingt heures

dans une solution concentre d'orseilline dans Tacide actique
Feau, puis colorer une ou deux heures dans une
p. 100. Laver
solution concentre de bleu d'aniline dans Facide actique 3 p. 100.
Laver
et
diffrencier dans Talcool 90'.
baume. Par
cette
mthode, on colore aussi
Les filaments mychens sont bleu fonc,
le
les parois cellulaires
plante nourricire bleu clair, les noyaux et
la
Alcool absolu, xylol,

contenu des cellules.
de
le
cytoplasme rouges.
peut encore, plus simplement, d'aprs Nol Bernard, colorer
bleu d'aniline, aprs macration dans Thydrate de chloral
On
au
sirupeux.
Pour
les collections
macroscopiques de Champignons, Lutz^ a
indiqu une srie de liquides qui permettent de conserver assez

bien les couleurs des espces charnues.
Je ne dirai qu'un
mot au
inclure la paraffine,
car
on ne peut les
sujet des Lichens
deviennent si cassants qu'il est
:
ils
impossible de les couper. Si on ne veut pas faire de coupes dans

la moelle de sureau, il faut, pour les recherches cytologiques, les
durcir les blocs dans un mlange de

10 parties de glycrine pour 1 partie d'alcool 93 la consistance ainsi obtenue est parfaite (Bauer).
inclure au collodion et
1.
L'orseilline
BB
est
un colorant azoque artificiel. Ne pas confondre avec

chose que l'Echtroth ou ccrasine. ni avec Torcine
l'orcelline n" 4, qui n'est autre

et l'orcine (p. ~r29, note l).
2.
3.
Strasburger, Bas botanische PrakLikum. Jena, Fischer, 4*

Bull. Soc. mycol. de France, XVII. p. 30-2-307.
dit., 190-2
cf. p. 685.
mi':tiiodes
3 2
spciales
Les Al(jues ne doivent jamais lre conserves- dans du formol.

emploiera de prtrence Talcool picriqu. Pour les petites
espces, le procd de la quinone (p. (il7) est excellent.
On
Le lactophnol
et
bons rsultats. Pour
autres milieux de
les
(]). 725).
autre formule est
Amann donnent
Algues vertes, employer
les
de trs
mlanges
cuj)riques
Une
le
lactophnol cuprique de
Amann
oO gr.
95
Lactoptinol
Eau
Chlorure de cuivre
Actate de cuivre
2
2
ajouter 5 10 p. 100 de ce liquide Peau qui renferme les Algues

vertes
celles-ci sont fixes et peuvent tre conserves ainsi trs
:
longtemps.
Les Algues peuvent tre moules en prparations microsco]ques soit dans le lactophnol ordinaire, soit dans la glycrine
giatine, aprs imprgnation par le lactophnol. On peut faire
agir ce dernier ractif, soit sur le matriel fiais, soit sur des
Algues pralablement fixes par Pacide picriqu, en solution

aqueuse ou alcoolique, ou par la quinone.
La dcalcification est ncessaire pour les espces qui sont
incrustes de carbonate de calcium. Le principe de cette opration
est le
mme
que pour
les
tissus aniiuaux (p. 262), c'est--dire
Algues avant de les soumettre Paclion du

dcalcitiant, ou combiner les deux oprations, de manire produire en mme temps la fixation et la dcalcification. En outre,
qu'il faut fixer les
pour
la
bonne
sels calcaires
russite,
il
est indispensable
soit eflectue
que
la dissolution
des
lentement, autant que possible sans
dgagement violent de bulles gazeuses.

Pour les Algues, le meilleur dcalcifiant
tique tendu; on en fait une solution 5
parat tre Pacide acp.
100 dans Peau ou
solution aqueuse sature d'acide picriqu. On suspend les

dans
une grande quantit de ce li(juide et on les y laisse
Algues
jusqu' dcalcification complte, en renouvelant au besoin deux
dans
la
ou trois fois le liquide acide. On peut dcalcifier aussi par le

lactophnol (simple ou cuprique) 5 \). 100.
Le procd employer dj)end des circonstances. Pour de petits
non pralablement, on peut oprer

lactophnol tendu. Pour les objets volumineux,
objets dj dissocis, fixs ou
sur lame, avec
le
HISTOLOGIE ET CYTOLOGIE VEGETALES

l'acide actique est prfrable. C'est le
servi dans
mes recherches sur
733
procd dont
les tufs calcaires
je
*
;
me
suis
pu inclure
j'ai
la parafline et dbiter en coupes sries le matriel ainsi o])tenu.

La conservation est suffisante i)our les recherches de svstma-
tique;
il
est facile, sur
de
telles
coupes, d'essayer toutes sortes de
colorations. Lorsqu'on a soin d'inclure la paraffine tendre (Ao*^)

et de faire les coupes assez paisses (20 30 a), on peut suivre
sur une grande distance la plupart des filaments. Nanmoins, il
faut toujours complter l'tude de ces coupes par des dissociations
soigneuses, excutes avec des portions correspondantes du matriel dcalcifi.
Je borne l cet expos trs rapide des rudiments de
botanique. Dans un ouvrage
la
technique
faisant partie d'une collection
mdi-
ne m'est pas possible d'insister davantage sur des questions

qui sont du ressort de la botanique pure. Le lecteur qui dsire
approfondir ses recherches dans ce sens, trouvera des renseigne-
cale,
il
ments
trs
volume,
complets dans les ouvrages cits,

dans la bibliographie gnrale.
soit
dans
le
cours du
soil
L 'SI. Langeron, Flore fossile de Szannc, 3* fascicule, Nouvelles considrations sur les formations travertineuses anciennes et contemporaines. Bull. Soc.
hist. nat.
d'Autun,
XV,
p. 59-83, pi.
III-V, 190?.
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Strasburger,
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Das
botanische
Praktikum.
4"^
dition,
Jena,
TABLE ALPHABET lOUE
Les chiffres
gras
pQf/e o se troore l'tuih spciale

de l'objet metdioim.
incfiquent In
Albuminodes, 725.
Aberration chromatique,
des lentilles, 50.
51, 54.
Alcool (table de dilution), 301,

actone de Nicolle, 395.
('remdes). 51.
de sphricit, 51, 5-2.

Acantliia lectularia. 495.
Acanthocphales,
5G2, 573.
Acariens, 57S.
Accentuateurs, 364.
Actone. 276, -286, 303, 395.
Achromatisme,
Acide actique,
5-2.
271,
365.
azotique. 263, 693.

chlorique. 450.
phnique, 365.
phosphomolybdique, 424,
397.
sulfureu.x:, 264.
Alfieri (dpigmentation), 451.

Algues, 731.
le verre), 455.
Alun, 363.
de Ter, 363.
Amann (milieux d'observation), 444.
Ambhjstefjium ripariinn, 489.
Amibes,
Amidon,
471.
726.
671,
(polarisation),
Amba mris, 472.
coli, 472.
Umax, 472, 477.
Acidit, 668.
Acido-rsistance, 693.
717.
Activit leucocytaire, 625.

Adelea zonula, 526.
206-.
Amphochroraes (colorants),
Amylode, 366, 672.
Analyse chromatique, 668.
Adsorption, 354.
Ati'tage des rasoirs, 322.
Agalli, 513.
flxateurs, 270.
357.
Analyseur, 197, 202.

Anesthsie, 456.
des cellules, 296.
sous lamelle. 537.
Anglade et Morel (nvroglie), 659.
Agents
525.
Agitation, 257, 550.

Aiguilles. 254.
Aiguisage des rasoirs,
274. 286, 301.

276, 690.
506, 725.
Acides gras, 673.
Aygreguta,
thylique.
Aluminium (crayon pour
oxalique. 451, 476.
Actinomycose,
tiers, 258.
chlorhydriquc, 375, 418.

ther,286.
lactique, 556, 570. 693.

osmique, 272, 279.
271.
.302.
Alkanna, 675, 723.

Altrations des lames et lamelles. 238.
des lentilles. 143.
chromique, 271.
picrique.
au
mthylique,
Aleurone, 725.
50.
241,
Alcalis caustiques, 258.

Alcalinit, 669.
Alcali-rsistance, 693.
322.
Albuminatc d'argent, 508.

Albumine de Mayer, 345,
Angle d'ouverture,
349.
46.
limite, 48.
Angstrm
(unit), 59.
13
TABLE ALPHABETIQUE
Balantidium
Anguille,- 488.
Anguillules,
Aniline, 365.
5"L
entusooii. 532.
Balbiani, 529.
Balb'uDiia r/igaii/ea, 529.
Animaux marins,
Baldrey et Mitchcll, 524.
-296.
Anisotropc, 19'5.
Ankyloslonies, T)?!.
Balfour, 632.
Antiirozodes.
Ballenger, 505.
Ballon de verre pour clairage, 32.
Antiforminc,
Apathy
Buchanan, 507.
'/oO.
697),
096.
443,
(sirop),
Barach, 516.
Barbeau, 528.
Barres de Leuckart, 309.
418.
Aplantismc, 5-2.
Apochromats, 77.
Appareils accessoires,
Baschieri, 542.
Bass. 565.
Batteries de tubes Borrel, 318.
2-27.
d'afftage, 322.
dessiner, 116.
dessiner miroir, 118.
dessiner d"Abbc, 118.
Baume du
Canada,
d'clairage, 25, 136, 143, 158.

pour tailler les blocs de paraffinci
331.
rticulaire interne, 511, 661,
Argas, 579, 585.

Argasins, 584.
Argent (imprgnations
432,
Baumwollblau,
Beauchamp
665.
(de), 537.
mtalliquesM
506, 509.
140.
et Philibert, 696.
Bichlorure de mercure, 272.

Bichromates, 272.
Bile (procd de la), 607.
Bilirubine, 675.
l>inoculaires. 113.
694.
Artbropodes, 574.
Biot, 365,
Artifices d'clairage, 73.

Ascaris mpi/alocephala, 666.
Asilides, 598.
Astrai/aliis iragncarithus, 533.
Birfringence, 194.
Bitume de Jude, 449.
Auto-agglutination des
Autopsies, 515.
Auxochrome,
Axes d'lasticit,
hmaties, 492.
250,
II, 250,
389, 470.
364, 389,
de nithylcne, 367,
Azurine
Bleu d'aniline, 400.

boracique de Manson. 365, 391.
boracique de Sahli, 365, 391.
470.
386.
brillante, 730.
393.
524.
Bacille de la diphtrie, 692.
de
la lpre. 697.
pesteux, 697.
de la tuberculose, 692.
de la tuberculose dans l'urine, 696.
Bacillus hastilis, 515.
Bactries, 689.
B
Babes (safranine),
Azurophile, 388.
Babsies, 519,
Blastomjfctes, 714.
Blcpharocrids, 613.
195.
Azorubinc, 726.
I,
Blanchiment, 450.
Blaps mortisaga, 526, 527.
Blatte, 472.
357.
461,
400.
Benzoazurine, 730.
Benzopurpurine, 726.
Beurmann (de) et Gougerot, 709.
Bezanon
Armoires pour microscopes,

Arneth (leucocytes), 643.
436,
Benoit-Bazille, 449, 578.
de Sergent, 592.
Arborisations pricellulaires, 661.
Azur
420,
464.
pyognes, 691.
Bactrioscopie du sang, 697.

Bague de correction, 86.
linlnniidiHii} coli, 473, 531.
Borrel, 388.
coton, 40Q. 712, 729.
coton au lactophnol, 712.
de crsyl brillant, 250, 469, 505.

l'eau, 400.
de Kiihne, 392.
de Luffler, 364, 392, 505.
lumire, 400.
de Lyon, 400.
de mthyle, 385, 400, 430.
de mthylne, 250, 251, 356, 384.
pour micrographie de .Saint-Denis,
100.
de
de
de
de
naphtylne, 728.
Nil, 250.
nuit, 400.
Paris, 400.
polychrome de Unna,
388,
390,
427.
polychrome de Martinotti, 384.
polychrome
et orcine, 429.
TABLE ALPHABETIQUE
Bleu dctoluidine,366,
384, 429, Oi,
711.
Victoria, 396.
Bleus basiques, 384,
acides,
400.
Blochmann,
505.
425, 529.
Blocs de pltre, 714.

Bocaux lames et lamelles, 235.
Bodo acertx,
479.
Bois (coloration), 727.
(coupes), 722.
Botes Insectes, 590.

en papier pour inclusions, 310.
BoUes Lee, 31.
Bombinator igneus,
532.
Capsules des Bactries, 365, 697, 700.

d'tain pour inclusions, 309.
Capture des Insectes, 506.
des Moustiques, 600.
des Ixodids, 579.
Carbonate d'azur de Unna, 391.
Carmalun do Mayer, 370.

Carmin, 369, 679.
actique de .Sclincider, 372.
alun dcGrenacher, 371, 722.
ammoniacal, 680.
au borax alcoolique de Grenaeher,
370,
chlorhydrique alcoolique, 371.
d'indigo, 400,
6S1.
et vert d'iode, 722.
4-26,
padiypus, 532.
Bonnet
737
Carminate d'ammoniaque, 680.
cliinois, 493.
Borate de sodium, 365.

Borrcl et Bnrnet, 506.
Bouteilles cyanure, 588.
Bouton d'Orient, 495.
Carotte, 207.
(milieu de culture), 702,
Caroline, 207.
Brachycres, 596.
Bracliyclium crassicolle, 570.
Brandesia turgida. 570.
Bras porte-loupe, 111.
Breinl et Moore, 482.
Cartons volets pour prparations, 441
Brillantkresylblau, 250, ^Q. 505.
476.
culture des Trypanosomes, 500.

volution des Trypanosomes, 487.
Helminthes, 568.
Ixodids, 583 588.
oculaire, 102.
de Ramsden,
102.
Cercopithecus
fiiliginosiis, 493.
Certes, 537.
Trichine, 573.
Cestodes, 550, 570.

Chaleur (fixation par la), 270.
Chalumeau gaz, 691.
alcool. 691.
Tn/panosoma Cruzi, 491, 495.
Chambres claires,
Puces, 595.
Punaises, 593.
viridis. 532.
Bulles
en verre, 244, 438.

Cellulose, 207, 726.
rubcr, 493.
Hymnoptres parasites, 614.

Infusoires, 537, 538.
Bruntz, 677.
532.
Bii.fo cahimita,
la platine chariot, 15.

CentrifugatioD, 261, 564, 614, 647.
Cenitopogon, 613.
Cercle de Biot, 102.
Brossage, 257.
d'air, 420,
Cellodine, 315.
Cellules en carton, 244.
en papier, 438.
.Centrage de
Brochet, 528.
Broquet, 697.
Brumpt Amibes,
Cartilage, 657.
441,
'i65.
aspect dans l'eau, 148.

aspect dans le baume, 151.
Burri, 515, 699, 719.

Buscalioni, 727, note 1.
116,
123.
1.38,
d'Oberhauser,
127.
Chambre gradue de Thoma,
coulisse, 24.
Cajal trichromique, 42.

imprgnation des neurofibrilles. 433.
Chat, 456, 476.

Chenilles (conservation), 590.
Calcite, 194.
Chercheur MaUwood,
Calcium
Chien, 456.
ChironomiJs, 613.
(sels), 671:.
Calt'at, 518.
Chitine, 578,
Callithrix, 495.
Callose, 726.
M. L.^.NGERON.
675,
229.
727.
Chlamydozoaires, 510.
634.
gradue de Biirker, 634.

gradue de Maiassez, 639.
humide de Ranvier, 245.
Champ, 50.
Champignons, 702, 730.
Changeur d'objectifs
171,180.
d'Abbc. 118.
de Maiassez, 123.
de Dumaige, 125.
de Nachet, 125.
47
TABLE ALPHABETIQUE
738
Colorants naturels, 356.
Chloralelilorophnol, 575, 7-2i.

Chloraliactoplinol, 715, 724.
neutres, 357, 401.

nuclaires, 356.
vitaux, 249.
Coloration des Bactries, 689.
des capsules des Bactries, 697.
des cils des Bactries, 699.
725.
salicylc. 715,
Chloralose, 458.
Chloralphnol.
Chlore, 450.
575,
715, 724.
Ciilorique (acide). 450.
Chlorolorme, 304, 588.

Chlorure de zinc iod, 207, 726.
Choix d'un microscope, 134.
Colorations, 352.
Cholestrine, G73.
Chou rouge,
669.
Chrombeize, 364.
Clu'omogne, 357.
Chromophore, 357.
Chromotropes, 366.
Chroinotropes de Ilochst, 399, 421.
Cils des Bactries, 699, 700.
(les
Infusoires,
5.39.
Ciment de do Groot,
des spores des Bactries, 698.

ngative des Spirochtes, 506.
451.
Lataste, 454.
Cire pour lamelles, 242.
Clart de l'image, 49.
Classification des objectifs, 76.
Claudius (mthode de), 396, 690.
Cloche de verre pour microscope, 140.
457, 487.
Coccidies, 524.
Cobaye,
combines, 361, 417.

cytologiques, 359.
directes, 353, 359.
lectives, 359.
indirectes, 353, 359.
en niasse, 362.
mtachromatiques, 361, 366.
monochroniatiques. 361, 665.
orthochromatiques, 366.
panoptiques, 362.
post-vitales, 251.
progressives, 359, 382.

rgressives, 359, 392.
simples, 361.
simultanes, 361.
spcifiques, 359.
vitales, 248, 469, 534, 559, 624.
Colpidium coljwda, 534.
Coccidium cuniculi. 524.
Copolda cucullus, 534.
Schubert/i, 524.
Coccus cacti, 369.
Composs pectiques,
Cochenille, 369.
Coefticient micromtrique, 186.
Cnures,
551.
Collage des coupes au coUodion. 351.

des coupes par conglation, 330.
des coupes la paraffine, 343.
des coupes la paraffine au collodiou de Schllibaimi, 350.
des coupes la paraffine l'eau
albumineuse, 345, 460.

des coupes la paraffine l'eau
dis-
tille, 345.
des coupes la paraffine
la gla-
tine, 346.
Collagne,
652,
miroirs concentriques, 213.

parabolique de Siedentopf, 211.
Cne d'clairage,
40, 43.
Conglation, 270,
329.
Congo ammoniacal, 729.

Conorhmus infestans, 593.
674.
727.
Compresseurs, 243, 440.

Compression, 257, 440.
Compte-globules de Malassez, 638.
de Thoma, 633.
Concordance des objectifs, 91.
des oculaires, 92.
Condensateur, 26, 38, 42.
Abbe, 28, 136.
fond noir, 211.
meyistus, 495, 593.
Callargol, 701.
Colle pour chantillons de collections, 454.
Conservation des virus (Trypanosomes),
Colle pour tiquettes, 455.

Collodion, 339.
de Schllibaum, 350.
Contention, 456.
487.
Coprologio, 562.
Coralline sode,
CoUodionnage des coupes, 350.

Colonne du microscope, 18.
Colophane, 447.
Corps azurophiles, 388.
Colorants, 356.
acides, 356,
397.
382,
50J.
cytoplasmiques, 356.
indicateurs, 250,
252.
729.
de Guarnieri, 540.
de NeQ:ri, 540.
de Prowazek, 513.
Correction des aberrations, 52, 173.
artificiels, 356.
basiques, 356,
726,
par dfaut, 54, 57.

par excs, 54, 57.
Couleurs d'addition, 201.
d'interfrence, 199.
TABLE ALPHABETIQUE
Couleurs do polarisation, 201.
de soustraction, 201.
Coupes la cellodine, 339.

au coUodion, 339.
coloration
au Romanovsky,
262,
7.32.
Dchirures dans les coupes, 463.

Dcolorant do Lignicrcs, 718.
Dcoloration des coupes, 464.
414.
Deegener, 590.
par conglation, 329.

de cultures de Cliampignons, 711.
Dcetjen, 477.
main leve, 325.

au microtomo main, 327, 721.
Dgnrescence amylode, 672.
d'objets vgtaux, 721.

la paraffine, 330, 342.
en rubans, 336.
par usure et polissage, 341.
Crachats, 645, 692.
Crayons dessin, 131.

pour crire sur le verre,
73U.
Ctenocephalus serraticeps, 491.

Cuirs rasoirs, 324.
Cuivre, 671.
Cultures anarobies, 718.

des Ankjdostomes, 571.
des Anguillules, 571.
en cellules, 706.
des Champignons. 705.
Cutinc, 727.
Cuvettes dissection, 545.
460.
Diagnostic des dysenteries, 473.

des leishmanioses, 495.
du paludisme l'tat frais, 520.
-r sur frottis colors, 522.
de la syphilis, 512.
des trypanosomoses, 491.
Diamant-fuchsine, 396.
Diapason lectrique, i57.
25, 36, 47.
en gouttes pendantes, 706.

des Infusoires, 535.
sec, 709.
des Trypanosomes, 497.
en tubes, 705.
184.
347,
Culicides, 600.
Curvimtre,
578.
Dparaftiner,
des pices, 300.

Dessiccation, 270.
Dessin, 116.
Crustacs, 243.
Curtis (tissu conjonctif), 425,
hyaline, 672.
Delano, 501.
Deltapurpuriue, 723, 726, 729.
Demi-dessiccation, 257.
56.
Cryptogames,
collode, 673.
graisseuse, 673.
Dpigmeutation, 450.
Dermatoscope, 115.
Dshydratation des coupes, 419, 461,
Cristalviolet, 393.
Cropper. 522.
Crown-glass,
Dfinition, 49, 173.
Demodex,
455.
Crosote, 303, 557.

Crsylviolet RR, 366.
730
Dcalcification,
652.
Diaphragme,
de champ, 50.
cylindre,
26.
pour fond noir,
iris, 29.
tiroir, 26.
tournant, 25.
209,
211.
Diffrence chromatique de l'aberration

57, 78.
sphrique,
du
chromatique
de marche, 199.
grossissement, 57.
Cyanine, 730.
Cyanochin, 701.
Cyanure de potassium, 588.
Cylindres Borrel, 347.
Cynocphale, 493.
Diffrenciateurs, 360.
Cysticercodes, 552.
Cysticerques, 551.
Cysticercns fasciolaris, 570.
Dimthylamidoazobenzol,
pisiformis, 570.
Cytodiagnostic, 643.
Cytologie, 664.
vgtale, 721.
Diffrenciation, 360, 392.

Dilfraction, 61, 157.
Digestion
artificielle,
441.
Davidson, 505.
253.
Dipylidium caninum, 570.

Discoglossus piciits, 532.
Discomyccs, 716.
Dissection des Ixodins, 582.
des Moustiques, 607.
des Puces, 596.
des Punaises, 593.
Dammar,
695.
Diphtrie, 692.
Diplodiscns subclavatus, 570.
Diptres, 594.
Dahlia, 366, 505.
260,
Dilacration, 254, 261.
Dissociaieurs, i!58.
Dissociation, 254.
chimique, 258.
TABLE ALPHABETIQUE
740
Kosinate do bleu de toluidine, 404.
Dissociation mcanique, 254.
Disque color,
osine, 357, 398, 419.

et bleu de toluidine, 429.
33.
dpoli, 33.
Distance focale,
frontale, 50.
Dominici (fixateur), 283
(coloration),
420.
1.
(diffrenciation), 419.
Epaisseur des lamelles,
Doublets, 110.
Dubrcuil (tissu conjonclif),
Duperie, 517.
Dysenterie, l"-?.
86.
EpinepJiele janira, 176.

pingles Insectes, 589.
Errera, 700.
Ergastoplasme, 666.
Van Ermengen (imprgnation
1-25.
argen-
tique), 506.
Erythrosine, 399.
Kau
Esox lucius, 528.

Essence de cdre, 304, 305.
Estomac, 292.
tagre chaullante de Malassez, 307,
d'aniline. 3G5.
347.
bouillante, 270.
de Javel, 695, 722.
oxygne, 451.
Etalement des coupes la paraffine, 343.

286.
chelles fractionnes, 181.

micromtrique de Gebhardt. 183.
de Newton, 201.
central, 75.
fond noir,
208,
469, 513.
oblique, 29, 73.
couvillon pour fausses membranes, 692.
crans colors,
33.
oculaires, 166.
Eisenberc:, 701.
lasticit optique, 193.
Elastine, 674.
leidinc, 675.
levage des Ixodids,

des Mouches, 599.
3(j6.
Jiasruca, 573.
proteus, 573.
clairage, 25, 38.
de Unna, 427.
Etiquettes, 455.
tuve paraffine,
volution des Flagells, 487.

Examen des crachats. 645, 692.
l'tat frais, 239, 469, 519, 623.
des fausses membranes, 692.
en goutte pendante, 244.
en lumire oblique, 29.
mthodique des prparations avec
la platine chariot, 14.
chinocoques, 551.
Echinorhynchus artgustalus, 573.
ther,
glycriquc
dans la potasse, 714, 716.

du pus, 645, 691.
du sang, 491.
des urines, 647.
l-'xpriences avec la lame de difiraction d'Abbe, 66.
Exsudats cutans, 663.
582.
des Moustiques, 602, 605.

des Puces, 595.
des Punaises, 593.
limination do l'acide picrique,
285, 295, 348.

de la paraffine,
271.
347,
460.
699.
687,de Chine silicate, 455.

de Seiche, 680.
pour crire sur verre,
le
455.
cellules, 708.
des teignes, 715,

parcellaire, 715.
Entretien du microscope, 140, IH.

osinates, 402.
d'azur, 388,
402.
luter, 448.
Fermeture des bocaux,
454.
Fettponceau, 357.
Fibres lastiques, 654.
myline, 661.
nerveuses sans myline! 661.
Endothliums (imprgnation), 433.

Enrichissement, 694, 561, 563.
Enrobage la moelle de sureau, 721.
Ensemencement des
692.
Fer, 671.
Ellipse d'lasticit, 195.

Encre de Chine, 2U, 455, 515, 517, 679,
Fausses membranes,
Fantham, 592.
Fibrine, 674.
Filaires, 558.
Filet
fin,
602, 615.
pour Insectes, 596.
Fischer, 701.
Fixateurs alcalins, 269.
Fixation, 265.
rationnelle do Rubenthaler, 296.
des animaux marins, 296.
Flacons baume, 437.
TABLE ALPHABl!:TIQUE
Glugea anomala, 528.
Flagells, 479.
(fixateur), 280.
(coloration), 425.
Flemming
pour coupes main leve,
208,
noir,
Glycogne, 672.
Goldorange, 253, 397.
327.
Golgi, 511.
469, 513.
Fontana 'imprgnation argentique),
508.
Foraminifres, 619.
Formaldhydc, 276.
Formaline, 276.
chromique, 454.
Formation de l'image microscopique, 98.
Formol. 276, 286, 365.
Formule
d'.Vrnetli, 613.
691.
GorijoJera cygnoides, 571.
Gouttes au
gramme
(table), 446.
pendantes, 244, 706.

505.
l'urine, 649.
364,
394.
iodophiles, 626.
neutrophiles, 630.
Grgarines. 527.
Groot (ciment de de;, 454.
Grossissement, 170.
Grynfelt et Mestrezat (dpigmentation),
d'organes, 516, 657.
Fuchsine acide, 398.

ammoniacale, 727.
450.
Guarnieri, 540.
425.
phnique de Ziehl, 397,
dans
Granulations acidophiles, 630.

graisseuses sang), 625.
humides, 413, 523, 628.
396.
iode, 672.
Gonocoque,
Gram,
difl'raction, 61.
d'interfrence, 60.
basique.
728.
arabique (fermeturedes bocaux), 454.

efi'acer le crayon, 132.
Graisse, 655, 673.
Frottis par apposition, 657.

desschs, 405, 522, 626, 689.
pais, 492, 522, 560, 628.
Froid, 270,
Gommes,
G radie.
leucocytaire, 642.
Foyer, 4.
Francotte, 615.
Franges de
427.
Fluorine, 77.
Foie, 657.
Fond
lophii, 528.
Glycerinthermischung de Unna,
Glycrine glatine, 442, 556.
Glychmalun de Mayer, 376.
de Garazzi, 376.
Flint-glass, 56.
Fluidification, 695.
741
Glossines, 491.
Flacons compte-gouttes, 341, 410.
506.
Guguen,
712.
Guignard, 723.
Gunter, 505.
rubine, 396.
S, 398.
Wagner,
Fiillebom, 559, 572.
Giinther
Gale, 579.
Hadley, 525.
Hatmatococcus pluvialis, 355.
Uxmatoxglon campechianum,
Halipegus ovocaudatus, 571.
700.
H
Ganglions lymphatiques, 657.
Gasis, 687. 693.
Gastrosteus aculeatus, 528.
Glatine (colle pour coupes la paraf-
fine), 346.
glycrine, 442, 454.

glycrine de Kaiser, 442.
glycrine de Deane, 557.
571.
Harrison, 701, 541.
Hecht et Wilenko, 517.

Hoidenhain hmatoxyline ferrique,
509.
chromotropes, 421.
Hlianthine, 253.
Hliozoaires, 620.
Ghoreyeb,
Giemsa, 408.
mthode rapide,
Hall, 566.
Hamm, 698.
Haplometra cylindracea,
aux pruneaux, 701.

Glose sucre, 704.
373.
Hlix
410.
lioviensis, 525.
procd pour frottis humides, 413.

procd pour les coupes, 414.
procds pour les Spirochtes, 503.
Gigantorhynchus gir/as, 562.
Hmalun de Mayer, 374,
monilifornas, 562.
Gins, 516, 700.
Helohdclla algira, 490.
Hmatcinc, 373,
Globule de graisse, aspect dans l'eau, 151
pomatia, 480.
Helminthes, 510.
osine,
418.
418,
Hmato'idinc, 675.
460.
418.
377.
TABLE ALPHABETIQUE
742
Inclusion la glatine glycrine, 318.

des objets vgtaux, 721.
Ilmaties, 655.
Hmatine, 675.
Hmatoblastes, 630.
Hmatocrite, 640.
Hmatoxyline, 373,
la paraffine, 299.
Indice de rfraction, 147, 446.
de rfraction des verres d'optique
118.
acide d'Ehrlich, 376.

ferrique de Heidenhain, 377.
de Hmers, 377.
56.
Infusoires, 531.
inclusion, 312, 539.

Injections intravitales, 253,
de VVeigcrt, 379.
de Morel et Bassal, 380.
Hemiclcpsis marginnla. 188.
Hmine,
59-2.
518.
675.
Hmozone,
Hennoguy (procd
pour
coller
les
coupes), 319.
Herxheimcr,
505.
des coupes la paraffine, 337, 344.

des prparations, 463.
Interfrence, 60, 199.

Intestin, 291.
Inuline, 207,
Histologie vgtale, 7-21,

Huiles, 7-28.
de cdre, 83, 442.
728.
Inversion des colorations, 358.

Iode (action dcolorante), 464.
de paraffine. 415.
de ricin (pour immersion), 83.
Humeur aqueuse, 241.
Hydrolyse, 368.
(mordant),
lodosine, 399,
3i34.
669.
Irisations, 63.
613.
Hymnoptres,
locales, 716.
Inoscopic, 260, 695.

Insectes, 588.
Insuccs des blocs de paraffine, 313.
Hmogrgarincs, 519.
Hmosporidies,
interstitielles, 257.
physiologiques, 677.
Inoculations, 486, 493, 713, 716.
675.
Hmiptres,
677.
Isotonie, 269.
Hypochlorites, 722.
Isotrope, 193.
Ixodids, 579.
Ixodincs, 580. 582.
IxodipliiujHS Caucurtei, 614.
Image des corps lumineux par euxmmes, 62.
des corps
mmes,
non lumineux par eux-
62.
de diffraction, 63.
relle,
secondaire, 59, 62, 65.
virtuelle,
Immersion, 73.
eau, 83.
homogne, 83.
huile de cdre, 83.
au monobromure de
James, 522, 628.

Jannsenns (cran
5.
Jellinek, procd
picrique, 271, 285, 295, 348.

Joussct, 260, 695.
5.
K
naphtaline,
83.
--
du condensateur,
38, 214.
Imprgnation par un dissolvant de

paraffine, 303.
par la paraffine, 300.
mtalliques, 432. 506, 509, 660.
la

432, 506, 509. 660.
desl'argent.
ncurofiljrillcs, 433, 660.
^ des endothliums, 433.
par les sels de plomb, 509.
Inclusion, 298.
la ccUodine, 313.
mixte la cellodine et la paraffine, 317.
au collodion, 313.
la gomme glycrine, 318.
color), 33.
pour liminer l'acide
Kaiserling, 453.
Kala-azar, 495.
Karyokinse, 666.
Kratohyaline, 675.
Klatsch, 706.
Klossia helicina, 525.
Kohler (mthode
Kiilpin
Ravn,
de), 73.
731.
Kresylviolet R, 505.
Krnig
(lut),
447.
Krystalviolet, 393.
Labrocytes. 366, 654

Lactochloral. 724.
TABLE ALPHABETIQUE
Lactophnol de Amann, 444,
71-2,
1-U, 730.
Lame
intestinalis, 479.
de ditfractioa d'Abbe, 64, 66.
Lames,
234.
les coupes, 327.

Lignine, 727.
Ligrone, 696.
Limites de la rsolution, 71.
"206.
23L
la),
Limnxa
86.
albo-carbon, 33.
Lampe
pour micrographie. 33.

de
Ncrnst, 33, 209, 217.
ptrole, 33.
Landrieu, 707 note
575.
azur de mthylne, 388.

bleu coton au lactophnol, 712.
colorants neutres, 402.
cultures en cellules, 707.
dcalcification des Algues, 732.
diagnostic des teignes, 715.
levage des Moustiques, 605.
lactophnol, 445.
larves 'Orthocladius, 613.
luts, 447.
mthode d'Urriola, 520.

Nmatodes, 556, 557.
pche des larves de Moustiques. 602.
Stomoxes. 599.
Laques, 353, 373.

Largine de Lilionfeld, 508.
Larves do Cestodes, 551.
de Diptres, 599.
de Moustiques, 601.
de
de
de
de
Lindsay-Johnson, 281.
Lugol, 364,
Mann,
395,
413, 415.
285.
Perenyi,
282.
picronitrique de Mayer, 285.
de
de
de
de
Rousselet, 619.
Teliyesniczky, 282.
von Wasielewsky,
(mthode
de
coloration
699.
(bleu de), 364.

et Louste, 697.
Lombrics, 527, 573.

d'onde. 59, 192.
Lcithiac, 673.
Longueur
relle du tube, 102.

optique du tube. 102.
i97.
iropica, 498.
trisuica, 489.
et Potrzobowski,
Lemna
Lenartowicz
.502, 506.
Looss, 550, 553, 554, 571.

Lopliius piscatorius, 528.
108.
Lentilles, 2.
concaves, 5.
pour clairage, 32, 43,
Leporsky. 505.
Lesage, 477.
525.
Zenkcr, 284.
cils), 364,
Lper
fixation. 294.
Leucocytes basophiles.
osinophiles, 655.
iodophiles,
626.
Liquide amniotique,
de Borrel, 281.
de Bouin, 284.
do Carnoy, 284.
641.
cphalo-rachidien,
de Dominici, 283.
de Duboscq-Brasil, 285.
de Flemming, 280.
de Gilson,
284.
de van Gehuchten, 284.
do Hermaun, 281.
de Kloinenberg, 286.
Loffler
Latasto (ciment), 454.

Laurier-cerise, 589.
Leishmania (cultures),
indiffrents, 240.
physiologiques, 240.
Lit/iobius forftcatus, 524.
technique botanique, 723.
tufs calcaires, 733.

Lapin, 457.
Lavage aprs
(runcatiila, 570.
Lindner, 513.
Linguatulides, 578.
Liquides additionnels, 241.
conservateurs, 452.
d'examen, 210.
241.
2.
Langeron (Arthropodes),
425, 426.
727.
Lamelle,
84.
(influence de
paisseur,
86, 165, 215.
mensuration de l'paisseur,
en
236.
en glatine,
mica. 421.
400,
Lichtgriin, 383,
Lige,
pour
sches, 709.
sensibles,
743
Levaditi et Stanesco, 516.
Levures, 714.
Lzards, 519.
Lichens, 731.
orseille, 401.
cuprique, 73-2.
et Balthazar, 686.
Lambert
Lamblia
461, 557,
15.
651.
Lcvaditi et Manoulian. 510.
Loupes,
de Brewster, 109.
de Briickc, 110.
de Coddington, 109.
montes, 108.
de poche, 111.
de Steinheil, 110.
stroscopiques, 113.
Lovez. 659.
des
TABLE ALPHABETIQUE
744
Lugol, 364,
Lhe, 550.
Lumire
395,
Membranes
113, 415.
artificielle, 31, 37, 43.
polarise, 192.
du jour, 31.
Luts et vernis, 4
de Kronig, 447.
--
basophile, 368, 403.

neutrophile, 368, 403.
Mtazoaires, 545.
Lutz, 728.
Macacus cynomolgus,
Mthodes spciales, 467.

Mthode d'Achard et Ramond,
493, 518.
rhsus, 493.
Maire (R.), 426 note 1, 711 noie

Maladie du sommeil, 491.
Mallory, 425, 475,
1.
327.
Manceaux, 497, 499,

Mandelbaum, 505.
519.
Marett, 612.
Marmotte, 457,
Marqueurs, 228.
Maskenlack, 449.
Massou (P.) collage des coupes
346.
paraffine,
magenta vert lumire, 426.
muci-caraiin,
673.
nettoyage des lames, 237, 315.
ufs d'Ascaris, 666.
safran, 423.
trichromique,
652.
trichromique de Cajal, 426.
xylol actique, 422.
42-1,
Mastic de de Groot, 451.

Mastzellen, 366, 654.
Mathis, 500.
Matire amylode, 366, 672.
grasses (vgtaux), 728.
Maupas,
535.
Mayer albumine, 345,

^-
hmalun,
319.
371.
glj'chraalun, 376.
muci-carmin, 073.
chlore, 450.
May-Grnwald, 403.
Mcanisme de mise an point,
Mdecine lgale, 686.
Mlanges (voir liquides).
18.
fixateurs, 279.
Mlange de Giemsa, 403.
de van Gicson, 421.
de Ira van Gieson,
de May-Grdnwald, 403.
panchromc
de
de Romanovsky,Pappenheim,
403, 502.
5'25.
675.
Mlanine,
MJophages.
594.
411.
625.
543.
d'Agalli,
d'Alfiori (dpigmentation), 451.
de l'aucsthsie
sous lamelle, 537.
d'Anglade et Morel, 659.
de l'antiformine, 696.
d'Arneth, 643.
de Baecchi, 687.
de Balfour et Buchanan, 507.
de Bass, 565.
de Benda (safranine), 425.
(mitochondries), 666.
de Biffi,
519.
de Biot, 365, 694.
siuicus, 493.
Magenta, 396, 426.
S, 398.
vert lumire, 426.
de l'paisseur des lamelles, 86.

des paisseurs, 190.
Mesostoma Ehrenbergi, 240.

Mtachromasie, 361, 366, 670.
17.
cutinises, 727.
lignifies, 727.
Mensurations, 179.
la
de Blochmann, 425,
529.
de Breinl et Moore, 482.

de Burri, 515, 699.
de Cajal (trichromique), 426.
(imprgnation des neurofi433.
brilles),
de Glaudius, 396, 690, 719.
pour les coupes, 414.
de Curtis, 425, 652.
de Deetjen, 177.
de Dominici, 283, 129.
de de Dominicis, 687.
de Dubreuil, 425, 633.
d'Ellermann et Erlandsen, 696.
de l'encre de Chine, 516, 517, 699.
d'enrichissement, 694, 561, 563.
de van Ermengen, 306, 699.
d'Eysell, 609.
de Flemming, 425.
de Francotte, 617,
de Friedlandcr, 365, 698.
de Fiilleborn, 572.
de Gasis (crachats tuberculeux), 693.
de
509.
de Ghoreyeb,
687.
Gasis
rapide de (sperme),
Giemsa, 410.
de Giemsa pour frottis humides, 413.
de Giemsa pour les Spirochtes, 504.
de van Gieson, 421.
de Ira van Gieson, 525.
do Godfrin, 723.
de
511.
do Golgi,
Gram, 364, 394, 690, 730.
de
et Mcstrczat, 450.
de Grynfelt
Hall, 566.
TABLE ALPHABETIQUE
Mthode de Hamm,
de
de
de
de
Hiuser, 693.
Hoffmann et Halle, 504.
Jacobson, 096.
lavage de Jellinek,
S71,
285,
295. 348.
de
do
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
Jenner, 402, 403.
Kaiserling, 453.
Khne,
672.
Kihne-Borrel, 694.
Leishman,
413, 504.
Lentz, 541.
Levaditi et Manouliau, 510.
Lignires, 717.
Looss, 571.
Lofrter, 364, 506,
501.
699.
Mac-Ncal,
Mallory. 425, 475,
Mallory
et
527,
Wright.
529.
175.
Mann
(osine-bleu de toluidine),
Mann
(bleu de mthyle-osine),
430.
de Pappenheim (coloration
.509,
Schuberg. 529.
et Schroder,
Schuberg
529.
Schultze, 670.
et
Seguin
Mathis, 643.
Spengler, 693.
Stephens, 607, 609.
Taenzer-Unna,
Telemann. 565.
051.
Twort, 485.
Unna (collagne), 653.

d'Urriola, 520.
de Verratti, 511.
de Vescovi, ^29.
de AVeidenreich, 183, 506, 629.

de Weigert (fibres lastiques), 654.
de
Weigert (fibrine), 674.

Weigert (myline), 059.
Wrtz, 492.
Yamamoto, 507, 510.
quart d'onde, 2a6.
Microaquarium de Schaudinn,
246.
Microchimio, 068.
vgtale, 725.
Microfilaires, 558.
Micromtre
138.
171,
objectif,
138, 171, 184.

oculaire,
oculaire tambour, 189.
oculaire de Yls. 188.
Microtome coUodion, 339.
de Jung-Thoma,
339.
- de Lelong, 329, 721.
main,
721.
328,
de Minot, 331.
paraffine, 331.
de Peltrisot, 328.
179.
de Radais, 332.
de Ranvier, 328.
rocking, 332, 338.

Microscope, 1, 6.
vitale),
621.
panopiique de Pappenheim, 405,

504.
de Petit, 723.
de Prenant (triple coloration), 423.
de Ravaut et Poncelle, 508.
de Rodenwaldt, 559.
de Romanovsky, 387, 403, 404.
689.
503,de Rosenbusch, 483.
de Ross, 492, 522, 560, 628.
du sabot, 491.
de Sabrazcs, 625.
de Sabrazcs et Duperie, 512.
de Sand 'imprgnation des neuro435.
fibrilles),
de Schilling pour les coupes, J15.
624.
Zettnow, 508.
Ziehl-Neelsen, 693.
Mcthyhvasserblau, 400.
Mica, 421.
de Mann (hmalun et bleu de

422.
mthyle-osine),
de Martin et Lebceuf, 492.
de P. Masson (magenta vert-lu426.
mire),
424.
de P. Masson
de P. Masson au(trichromique),
safran, 423.
de Mayer (dpigmentation), 450.
de May-Grnwald, lu3.
de Meunier et Yaney, 617.
de Minassian, 510.
de Minchin, 483.
de Nastioukov, 153.
de Negri, 540.
de Neri, 542
do Newstead, 598.
de Nicolle et Morax, 699.
de Nissl, 660.
de Nissle
et Wagencr, 572.
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
429.
de
745
Mthode de Schilling-Torgau,
69S.
binoculaire, 113.
(choixs 134.
compos,
1.
(emploi), 160.
(entretien), 140.
inclinant, 11.
polarisant, 202.
prismes redresseurs,
113.
simple, 1, 108.
stroscopique, 113.
de voyage, 105, 139.

Milieu de conservation, 703.
de culture pour Champignons, 702.
d'preuve, 703.
glose-sang, 497.
de Griffon et Bezanon, 497.
TABLE ALPHABETIQUE
746
Milieu
r)00.
hmoglobinis.
do liquide
Mouton, 477.
de NicoUe, 477, 497.
de Novy-Neal. 497.
au sang chauff, 503.
Milieux de Amann, 241.
cupriques,
gloses, 702.
liquides, 444.
d'observation etde conservation, 436.
de Sabourand, 703.
solides, 436.
7-25.
Minassian, 510.
Mincliin, 483.
concave,
142.
Monobromure do naphtaline,
73,
Mordanage,
Nller, 491, 596.
bombycis, 528.
Notation des objectifs, 88.
des oculaires, 96.
Numration des lments du sang, 633.
des osinophiles, 637, 640.
des hmaties, 635.
des hmatoblastcs, 631.
des leucocytes, 637, 639.
des liquides pauvres en lments.
477.
159.
reculer les limites de
Muclimatinc, 674.
Muci-carmin, 673.
Mucilages, 728.
Mucino, 673.
la
642.
des Microfilaires, 561.

des ufs d'Helminthes, 568.
Nyclotlicrus cordifoyvnis, 532.
366, 673.
656,
673.
Objectifs, 46, 137, 141, 158, 169.
Narcotisation, 270.
Nastioukov, 453.
Observation microscopique,
Muscides, 598.
Museler, 456.
Myctomes,
716.
Myline, 659.
Myxidium Lieberkhni, 528.

Myxobolus Pfeifferi, 528.
Myxosporidies, 528.
432.
et Stachelin, 516.
Nosema
rsolution, 72.
Mucus,
Mulon,
foie, 496.
Nol Bernard, 731.
Moules pour inclusions, 309.

Moustiques, 600.
micromtrique, 19.

19.
ancien,
nouveau, 20.
rapide, 18.
du
de la rate, 496.
Nitsche, 701.
Nggerath
362.
362.
Mouvement brownien,
Nicolle (M.). 244. 395.

et Morax, 699.
506.
chromiqiies, 364.
Mouches volantes, 159.
Moyens de
(Ch.), milieu glose-sang, 497.

ponction aseptique du cur, 498;
Nitrate d'argent (imprgnations),
353,
Mordants, 353,
136, 461.
au lactophnol, 444, 461.

la glycrine gclatince, 442.
Mouton,
141.
des objectifs, 141.

des lames et lamelles, 237, 345.
Neurofbrilles
(imprgnation argon
tiquc\ 433, 435, 660.
Nissl, 660.
Nissle et Wagener, 572.
83.
agilis, 527.
Montage au baume, 420,
NicoUe
161.
Monocystis
(Sangsues), 490.
Neri, 542.
Nernst (voir lampe).

Nettoyage des oculaires,
Nicol, 196.
point, 19, 104, 137,
au point du condensateur, 39.

Mitochondries, 666.
Moelle osseuse, 657.
de sureau pour les coupes, 326, 721.
de sureau pour nettoyer les objectifs.
Nvroglie, 659.
34.
plan, 3J.
Mise au
Nmatocres, 600.
Nmatodes, 554, 571.
Nemmser et Lissowska, 695.
Nnuphars (Amibes), 471.
Neutralit, 668.
Miroirs, 25, 34.
Ncrose, 673.
Negri, 540.
achromatiques, 57, 76.

apochromatiques, 57, 77,
correction, 84.
monochromatiques, 79.
sec, 80.
immersion, 73, 80, 163.
171.
(altrations), 143.
(conservation), 143.
(nettoyage), 141.
(notation). 88.
145.
747
TABLE ALPHABETIQUE
Oculaires, 93, 138, 141, 158, 169.
champ quadrangulaire variable, 17.
compensateurs,
70,
95.
dessiner de Leitz,
d'Huyghens,
1-26.
93.
Paraffine, 299.
liquide, 445.
(lut),
449.
surchauffe, 306.
indicateur, 227.
Paramcies, 531.
micromtrique, 138, 17-2, 184.

micromtrique tambour, 189.
micromtriqne de Vls, 188.
Peau,
Pararosaniline, 394.
292,
661.
Pbrine, 528.
(nettoyage), 141, 158.
Pche au
(notation), 96.
Pectine, 7^7.
Pediculus vesti/nenli, 592.
Pelikantusche. 700.
intestinalis, 532.
Perry, 607.
Persulfate d'ammonium, 451.
ranarum^ 532.
Phalaj'is cancauensis, 518.

Phlbotomes, 612.
253.
Phlorogluciue, 264, ^30.

Phloxine, 399.
II, 253.
III, 397.
ammoniaco-magnsien,
IV, 253.
de dimthylaniline, 253, 397.

sanguine, 669.
Orcinc.
401,
602, 615.
Pntration, 50.
obtrigona, 536.
I,
filet fin.
Pepsine, 260.
Periplancta orienialis, 472, 528.
Permanganate de potassium, 4">1.
Pronospores, 730.
Porroncito (A), 665.
Opisthioyhjphe endoloba, 570.

Orange G, 397.
370.
de Ramsden, 94.
il, 661.
ufs d'Helminthes, 562.
Oiseaux, 457, 519.
Opak-illuminator, 227.
Opalina caudata, 532.
Paracarmin de Maj'cr,
429, 651, 729.
Orcellinc, 730, note 3.

Orcine, 729.
Ordres des couleurs de polarisation. 201.
Phosphate
de calcium, 207.
(acide), 424, 506.
Phosphoraolybdique
Phosphore, 671, 729.
Piorocarmin de Ranvier, 371.
Picro-indigo-carmin. 426.
Pied du microscope,
10.
Organes contractiles, 291.

non contractiles, 290.
Organismes spirales, 502.
Pierres aiguiser. 323.

d'Arkansas, 323.
du Levant, 323.
Ornitliodorus, 580, 581.
Pigments,
ocre, 675.
paluden,
729.
729.
675.
Orthorladius, 613.
Orscilline BB, 72o, 730.
207. 521, 675.
Pince Debrand. 707.

piquer, 500.
Os, 657.
Pinoy, 705.
et Magrou. 719.
Pipettes boule, GOl.
striles, 690.
Oscillaires, 471.
Ouistiti, 495.
Ouverture numrique, 49.

Oxalatc de calcium, 729.
Oxalique (acide), 451, 476.
Oxydases, 670.
Oxylithe, 151.
Piroplasmes, 519.
Piscicola (jeometra, 400.
Plan de polarisation.
107.
Plankton, 615.
Planorbis, 570.
Plantago psyllium, 533.

Plaques do gypse pour
Padda oryzicora, 518.

Pag unis, 526.
Pancliromo de Pappenheim.
Pancratine. 261.
Papier Chardin, 704.
dessin, loi.
411.
Pappenheim (coloration des coupes). 416.

(mlange panchrome), 411.
(mthode panoptique\ 405.
Parabolode. 212.
appareil
polarisation, 109, 205.
do Nobert, 176.
Plasmazcllen, 654.
Plasmocytes, 654.
Plasmodium
cijnomolgi, 518.
falciparum, 409.
malavis., 521.
relictum, 518.
vivax, 521.
de
TABLE ALPHABETIQUE
748
Proca et Vasilescu, 505.

Prosotocus confusiis, 570.
Platine, 12, 135.

carre, 12, 13, 13G.
chariot,
13, 135, 168.
Protozoaires, 468.
chauffante, 329, 246.

chauffante de Malassez, 307.
Psychodids, 612.
Puces, 594.
Punaises, 593.
Pupille d'mergence,
do Radais, 307.
Plehn, 519.
Pleistophora blatta?, 528.
Plochrosmc, 207.
Plrocercodes, 552.
Pleurogenes clavi(jei\ 570.
mdians, 570.
Pleurosiyma angulatum,- 63, 65, 66,
48, 102.
d'entre, 47.
Pupipares, 594.
543.
Prowazek,
Pupitre dessiner de Bernhard, 129.

dessiner de Leitz, 131.
dessiner de Giesenhagen, 131.
74,
76, 176.
Pus, 645,691.
Pus actinomycosique,
balticum, 74.
Plomb (imprgnations mtalliques),

Plumes dessin, 132.
Pneumocoque, 698.
Pneumoneces varicgatus,
717.
509.
Q
571.
similis, 571.
Poils, 686.
Quinine, 729.
Quinone, 617, 731.
Points d'bullition (table), 304.

Polarisation,
192,
521.
rectiligne, 195.
Polariseur, 197, 202.
Radiolaires, 620.
Polissage sur le cuir, 324.

des rasoirs, 321.
Pohjstomum integerrimum, 571.

Ponceau, 357.
Rage, 540.
Rahlmann, 544.
Raies de Frauenhofer,
Ponction aseptique du cur du Lapin,
Ramollissoir Insectes, 591.
Ramon
498.
du cur du Cobaye,
du
622.
y Cajal (trichromique), 426.

(imprgnation argentique), 433.
Rana
foie, 496.
esculenta, 532.
ganglionnaire, 492.
lombaire, 493, 644.
Rasoir, 319.
Rat, 457.
de la rate, 496.
Rate, 657.
Ravaut
veineuse, 623.
Porospora gigantea, 527.
Porte-aiguilles,
loupe, 111.
254.
Ractif de Millon, 725.

de Schweitzcr, 675, 726.
Raction du biurct, 726.
Portunus, 526.
Poulpe, 525.
Poumon,
292.
Pouvoir dfinissant,
49,
et Poncelle, 508, 516.
ordinaire, 196.
Rayon
extraordinaire, 196.
ultra-violets. 73.
Potasse, 241, 258, 364, 576.

Potron, 714.
59.
38,
173.
leuco-activant, 625.
rsolvant, 49, 58, 63, 71, 175.
pntrant, 50, 58.

sparateur, 58.
Prcipits, 463.
Rd avides,
Prhension, 456.
Prlvement des Bactries, 690.
des exsudais, 513.
des pices, 290.
du sang, 519.
Prenant (triple coloration),

Prisme de Nicol, 196.
Procds (voir mthodes).
Proea et Danila, 698.
microchimiques gnrales, 668.

spciales, 671.
-de Mylius, 669.
xantlioprotique,
725.
Rducteurs, 670.
de Cajal, 434, 511,
423.
593.
Rflexion totale, 48, 210.

Rfraction, 2, 152.
dans les lentilles, 3.
Refroidissement de la paraffine, 311.
Regaud (collodionnage des coupes), 350.
Rgulateur de temprature, 307.
Reitmann, 506.
Repassage sur
la pierre, 323.
des rasoirs, 321.
Reprage,
228.
TABLE ALPHABETIQUE
Rseau de
Rsines,
diffraction, 63.
colles, 346.
Sdimentation, 261, 564, 695.
Sdiments urinaires, 648.
7-28.
Dammar, 41L
Rsolution, 71, 175.
Seiche, 525.
Sels de calcium, 671.
Sepia. 680.
Sergent, 592.
Seringue de ^\'i^rtz, 493.
Rticulum fibrineux, 632.

Revolver. 22. 137, 104.
-171.
Rhizopodes,
Ricine, 516.
Srum
Robertson. 501.
Rodenwaldt, 559.
Romanovsky,
Rotifres, 243, 252,
Rouge de premier
404,
386, i03,
Rosaazurine, 7.30.
Rosaniline, 39L
Rosenbuscli, 483.
Ross, 492, 522, 560,
252.
neutre, 25u,
50^, 509.
Simulids, 613.
ordre, 199.
2S 1
613.
Singes, 457, 519.
387.
726.
252, 470, 524, 625.
pata, 493.
Sirop d'Apathy, 368, 443, 448.
de lvulose, 368, 444.

Soie bluter, 602, 615.
Soline, 218.
neutre de Casella, 728.
Solfrino, 396.
d'orseille A, 726.
Solger, 687.
Solubilit (table), 446.
de rutlTcnium,
Rousselet, 619.
723,
730.
Solution physiologique, 240.
Row, 500.
Rubans de coupes, 336.
Rubens Duval, 283, 429.
Rubine,
artificiel. 240.
de Frey, 241.
Silicate de potassium, 455.
Simonelli et Bandi, 504.
SimuUum,
628.
618.
du bleu de mthylne,
Congo,
749
Schage des coupes
396.
solides, 351.
Sources lumineuses,
31.
Souris, 457.
Spalteholz, 454.
acide, 398.
Spath d'Islande, 194.

Spectre secondaire. 57.
S., 398.
Rulison, 701.
Spengler, 693.
Sperme, 687.
Sphaignes (Amibes), 471.
Sphro-cristaux, 206, 728.
balanitidis, 500, 514.
Sabot (pour inoculation), 494.

Sabouraud. 703.
Sabrazs et Duperie, 512.
Saurefuchsin, 398.
Surerubin. 398.
Safran, 401. 423.
Safranine, 306. 392, 425, 730.
aniline, 365, 393.

de Babes, 393.
Spirochxta
Balbianii, 502.
buccalis, 515.
dentium, 515.
gallinariim, 502, 506.
(jracilis.
515.
plicatiliSj 502.
refringens, 506, 514.
Vincenti, 515.
vert-lumire, 425,
Spirochtes, 502.
Spores des Bactries, 698.
de Zwaardemaker, 393.
Sporotrichose, 719.
Safrosine, 399.
Salive (procd de
Sang,
621,
f^porozoaires, 518.
la).
478, 538.
686.
Squames,
663.
Statkewistch, 533.
Sangiorgi, 701.
Stomoxes,
Sangsues, 243, 573.
Stijlorhynchus longitôstris, 527.

Subrine, 727.
Sarcoptes, 579.
Sarcosporidies, 529.
Scharlach R, 357. 656.

Schilling (coloration des coupes), 415.
Schilling-Torgau, 624.
Schistosomum japonicum, 571.
Schllibaura (collodion), 350.
Schuberg et Schrder, 529.
Schulte, 693.
598.
Sublim actique,
283.
alcoolique de Schaudinn, 283.

corrosif, 272.
Sucres, 729.
Sudakewitch,
Sudan
505.
III. 253, 357, 505,
656,
712, 724,
727, 728, 729.
Sulfo-indigotatc de sodium, 400.
TABLE ALPHABKTIOUE
750
Sulfure de carbone, 304.
Sui-irella //cmma, 176.
Tolune, 304, 317.

Tournesol, 679.
nerveux (coloration vitale), 251
Systme
imprgnation,
Tabanides, 598.
Table de concordance des objectifs, 91.
de concordance des oculaires. 92.
de dilution de l'alcool, 301, 302.
des indices de rfraction, 446.
de Ngeli et Schwendencr, 72.
du noml)re do gouttes au gramme,
416.
des points d'bullition, 304.

de solubilit. 416.
des valeurs micromtriques, 187.
crassicollis, 570.
echinococcus, 570.
29.
pallidiim, 503,
209, 512.
Triacide d'Ehrlich. 361, 383,398.

Trichines, 548, 558, 573.
Trichomonas, 479.
Trichromique de Cajal, 426.
de iMasson, 424, 652.
- de Prenant, 423.
Trinitrophnol, 271.
Tropolino, 253.
Tnjpaiioplasma
helicis, 480.
593.
tjatnbieuse, 494.
i/ranulosnm, 480, 488.

iiopinatum, 490.
Lewisi, 480, 491.
rolatorium, 480.
491.
488.
des Bovids, 501.
Tubes Borrel,
317, 377.
de Burri, 719.
pour collections,
591.
do Joly. 318. 377.
du microscope, 18.
tirage (emploi), 87,
Tufs calcaires, 733.
Tumfaction trouble, 673.
histologique, 651.
mdico-lgale, 686.
mycologique, 702.
Teignes, 714.
Teinture d'Alkanna, 723.
de Chou rouge, 669.
137.
669.
rhlcnliutli, 695.
Tenebrio molitoi\ 527.
Trbenthine de Venise, 441,
480.
495,
Cruzi, 491,
Trypanosomes, 480,
do l'Anguille, 480,
botanique, 688.
coprologiquc, 562.
cytologique, 664.
hmatologique, 621.
d"Orange sanguine,
Telemaun, 565.
208, 224.
575.
Terpinol, 445.
Ultramicroscope,
cardio'ide, 225.
de Cotton et Mouton,
225.
fente, 225.
Terre do pipe, 714.

Test d'Abbe, 173.
Ultra-violets (rayons), 73, 79.
objet, 176.
Ttards, 243.
Unit d'AngstrOm, 59.

Unna (bleu polychrome), 427.
Thorie de l'image secondaire,

des teintures, 354.
Tliionine, 366,
383.
phnique de NicoUe, 383.
picrique, 512.
Thiry, 692.
tibia, 497.
512.
Trponme,
Tamisage, 504.
Tannin, 364, 728.
Tapotement, 261.
Taurocholatc de sodium. 506.
Tautomric, 3G7.
Technique bactriologique, 689.
serrata. 570.
Taenzer-Unna, 654.
Tambour du diaphragme-iris,
soluble, 681.
Trypanoplasmes, 481.
Tnipanosoma h'nicei.
Txnia
Trachome, 543.
Travail du verre, 691.
Trmatodes, 243, 553, 570.
Trpanation du fmur ou du
Treponema pallidulum. 515.
432.
59.
(cultures sches', 709.

(ther glycrique), 427.
(Glycerinathermischung), 427.
(tannin-orange), 398, 407.

Urines, 647.
Tissu adipeux, 655.
cartilagineux, 657.
conjonctif, 651.
nerveux, 658.
osseux. 657.
Vaccine, 540.
Valets, 13.
Valeurs micromctriques,
187.
TABLE ALPHABETIQUE
Van Gieson
751
(coloration du tissu con-
jonctif), 4-3].
Van Tieghem
Le Monnier,
et
707.
Verratti, 511.
Verniers, 14.
Wasielewsky
Vers, 545.
Vert acide, 728.
acide ammoniacal,
Weigert
diazine,
d'iode, 383,
Vert lumire, 383, 400, 425, 426.
de mthyle. 383.
de mthyle actique 365, 383.
solide et delta purpurine, 723.
7-27.
253.
7-2-2.
Vessie, 292.
Violet aniline, 365, 393, 505.
dahlia, 366, 505.
(von), 471, 477.
Wasserblau, 400.
Vernis pour tiquettes, 455.

Verres pour optique, 56, 57.
de gentiane, 393,
de gentiane ammoniacal.
hexamthj'l, 393.
de mth3le, 366.
de mthylne, 366, 389.
neutre de Godfrin, 723.
Vis micromtrique.
19,
(fibres lastiques), 654.

(fibrine), 674.
(hmatoxyline ferrique), 379.

(myline), 659.
(xylol phniqu), 351.

Wladissavlivitch. 513.
actique de P. Masson, 422.

phniqu de Weigert, 351.
7-27.
165, 168.
Yamamoto,
507.
Zabel, 516.
Volutine, 676.
Zettnow. 509.
Von Betegh, 698.

Vosseler (trbenthine de Venise), 442.
Vuillemin. 714.
Ziehl, 397. 506, 693.
661-11.
au
Xylol, 30J, 420.
505.
phniqu, 394, 505.

Virage de Cajal, 512.
de l'hmaiine, 418.
(collage des coupes
dion), 351.
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(safranine), 393.
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de mdicaments nouveaux signalons celle du Dioxydiamido-arsnobenzol,
avec l'indication de la technique. Le chapitre Srothrapie a t remani.
Un chapitre nouveau traite de la Vaccinothrapie. Les parties consacres
I'Electrothrapie, la Radiothrapie, etc., ont t revues par le docteur
Delherm. La iis'e des stations d'altitude a t revise.
Ainsi remani, ce Formulaire continuera justifier la faveur du public.
HUITIME DITION, REVUE ET AUGMENTE

DU
Trait lmentaire
nV vV
de
Par
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\V vV
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BINET, J.
TARDIF.
E.
7 Jr.
THERAPEUTIQUE CLINIQUE
BIBLIOTHEQUE DE THRAPEUTIQUE CLINIQUE

l'usage des Mdecins praticiens
[suite)
LES
Mdicaments usuels
Par
le
D^ Alfred
MARTINET
QUATRIME DITION, ENTIREMENT REVUE

j
vol. in-'"
Je og pages avec figures dans
le texte
/;
Les Aliments usuels

Composition
Par
le D' Alfred
Prparation
MARTINET
DEUXIME DITION, ENTIREMENT REVUE

1
voliiine iii-Q" de viii-352
pages avec figures
4,/r
Les
Agents physiques
usuels
(Climatothrapie Hydrothrapie
Crnothrapie Thermothrapie
Mthode de Bicr
Kinsithrapie
Electrothrapic
Par
les
Radiumthrapie)
D" A. MARTINET, A.
MOUGEOT,
'-^;J^
DESFOSSES, L. DUREY, Ch. DUCROCQUET, L. DELHERM, H. DOMINICI.
P.
vol. in-Q"
de xvi-633 pages, avec l'ufig.
et 3
planches hors
texte.
/;-
MDECINE DE L'ENFANCE
Trait des Maladies
<^
'
*-
*-
du Nourrisson
* * * * * ^
PAR
Le Docteur A.
LESAGE
Mdecin des Hpitaux de Paris.

I
volume in-^ de y\-^26 pages, avec 6> figures dans
Le
lecteur trouvera
dans
cet
le
texte
lO/r.
nouveaux sur
ouvrage des aperus
les gastro-entrites, la maladie spasmodkiue, la tivre de dsquilibre,

le coup de chaleur, la maladie d't, la scarlatine, l'albuminurie scarlatineuse, les cachexies et Tanesthsie du sevrage, la cachexie dermo-
lymphatique,les septicmies, la mningite crbro-spinale, lamningite

tuberculeuse. Ces observations sont le rsultat des recherches que le
D"" Lesage a
poursuivies depuis vingt-cinq ans; elles rendront aux
praticiens les plus signals services.
Vient de paratre
Confrences pratiques
sur ralimentation des Nourrissons
par P.
NOBCOURT
Facult de Mdecine de Paris,

Mdecin des Hpitaux.
Professeur agro-
la
Prface de M.
I
vol. in-6'%
de xvi-iSo pages, avec
le P^
2-\
Hutinel
figures dans
le
texte.
fr.
Trait des
Maladies de l'Enfance
DE UXIME DITION. REVUE ET AUGMENTE

J.
5
GRANCHER
vohcmes grand
in-Q avec
J.
1
figures dans
le texte.
COMBY
.....
ii2
fr.
HYGINE
Trait
Militaire
d'Hygine LEMOINE
I
par G. H.
Mdecin principal de premire classe
Professeur d'Hygine l'Ecole d'application du Service de Sant
militaire du Val-de-Grce
.Membre du Conseil suprieur d'Hygine de France
12 fr.
vol. .i,T. 1)1-8" de xxiv-758 pages, avec Qg Jg-ures, broch
.
Trait de
l'Inspection des Viandes

de
boucherie, des volailles et gibiers, des poissons,

crustacs et mollusques
par
vol.
grand
J.
RENNES
Ex-Inspecteur du Service sanitaire de la Seine,

Vtrinaire dpartemental de Seine-et-Oise
iii-'d de viii-36B pages avec 46 planches
15
/;.
BIBLIOTHQUE
thrapeutique
d'Hygine FONDE
PAR
le
PROUST
professeur
Chaque ouvrage, cartonn
toile
francs.
Vient de paratre
L'Hygine des Albuminuriques
(2
dition, entirement revue), par
D'' Maurice Springer, ancien chef de laboratoire de la Facult

de Mdecine la clinique mdicale de l'hpital de la Charit.
le
LHygine du Goutteux
L'Hygine de l'Obse
(2"
(2^ dition),
par
dition), par le
LHygine des Asthmatiques,
par
le
A. Mathieu.
A. Mathieu.
le D""
1)''
P' E. Brissaud,
Hygine et Thrapeutique thermales, par G. Delfau.

Les Cures thermales, par G. Delfau.
L Hygine du Neurasthnique 13*= dilion), par le ? G. Ballet.
L'Hygine du Tuberculeux {2" dition), par le D"" Chuquet.
Hygine et Thrapeutique des Maladies de la bouche {2" dition),
par
le D"'
Cruet.
L'Hygine des Maladies du cur, par le D-^ V\qc:e7.

LHygine du Dyspeptique (2'^ dition), par le D' Linssier.
Hygine thrapeutique des Maladies des fosses nasales, par
les D" Lubet-Barbon et R. Sarremoxk.
Hygine des Maladies de la Femme, par le D" A. Siredey.
Hygine du Syphilitique (2*^ dition), par le D"^ H. Bourges.
==
14
DIVERS
Assainissement
des Villes
Annuaire-statistique international
des Installations d'puration d'eaux d'gouts
par B. BE2AULT
Ingnieur sanitaire
8 fr.
gr. in-?> de viii-175 pages, avec 20 figiu-es dans le texte.
Ce volume contient l'tude des installations d'puration des eaux d'gouts
(Systme d'puration, systme d'gout, villes, population, volume des eaux,
en Allemagne, Rpublique Argencoit de l'installation, etc.) au i" juillet igi
tine, Australie,
Autriche-Hongrie, Belgique, Brsil, Canada, Danemark,
Egypte, Espagne, Etats-Unis d'Amrique, France et Colonies, Grande-Bretagne, Indes Anglaises, etc. Il contient galement les lois et rglements en
vigueur au sujet cle cette question d'assainissement dans la plupart de ces pays.
I
vol.
Recherches de Parastologe
et de
humaines
Par C.
et
Pathologie
animales au Tonkin
MATHIS
Mdecins-majors des
Prface de
I
vol. in-?)",
de viii-451
MM.
/>.,
et
LGER
M.
coloniales
troupes
A. Calmette et F. Mesnil
et 14 planclies. Reli toile.
avecjg.
25 Jr.
^
Le Vade-Mecum
*
du Mdecin-Expert
PAR
<^
^^
*-
A.
-^
t-
'^
ir
H-
LACASSAQNE
L.
THOINOT
Professeur de Mdecine lgale

la Facult de Paris
Professeur de Mdecine lgale

l'Universit de Lyon
I
^tr
voliune nz-io, de xii-265 pages, reli peau
fr.
Thrapeutique clinique de la Syphilis

A. CHATIN
Par E. EMERY
^^
Eaux
Mdecin des
Mdecin de Saint-Lazare
d'Uriage.
10 fr.
de viii-640 pages, avec figures
Ce volume est divis en deux parties la premire est consacre l'tude des
mdicaments antisyphilitiques, leur mode d'administraiion et au traitement
I
volume
in-?/
de la syphilis en gnral. Dans la seconde, les auteurs tudient les traitements

locaux des accidents cutans ou muqueux les plus habituels de la syphilis et
ses principales manifestations viscrales. Pour donner toute sa valeur a
l'expos du traitement, les auteurs n'ont pas hsit dcrire aussi brivement
que possible les ditrentes affections.
NEUROLOGIE
PSYCHIATRIE
LA PRATIQUE
NEUROLOGIQUE
-
***
vt-
*$*
"^
^^'
"^
'^''
^^
^^
^^
^J
^''
PUBLIEE SOUS LA DIRECTION DE
PIERRE MARIE
Professeur
la
Facult de Mdecine de Paris. Mdecin de la Salptrire.
TAR MM.
O CROUZON,
G.
DELAMARE,
DESNOS, Georges GUILLAIN, E. HUET, LANNOIS,

E.
LRI, Franois MOUTIER, FOULARD, ROUSSY.

Secrtaire de la Rdaction
A.
O.
CROUZON.
vol. ar. fn-8%
de xviii-1408
3o3 flg. dans

^
Reli
.
le
^.,
texte.
30 /r.
L'ide premire qui a dirig

les auteurs a t de taire dans
le sens le plus plein du mot un
trait de smeiolique, faire en
sorte qu'un mdecin, nullement
spcialis en quelque sens que
ce soit, puisse se trouver en
tat de pratiquer un examen
complet de tous les appareils
au point de vue de la pathologie nerveuse et de tirer de cet
examen toutes les consquences
qui en dcoulent.
Ils ont voulu d'ailleurs mettre
le praticien en mesure non seulement de poser le diagnostic
cliniqued'une maladie nerveuse,
mais encore pour en poser
le
diagnostic anatomique et ana-
lomo-pathologique.
le
Enfin,
prsent volume
contient un expos des notions
ps3'chiatriques indispensables
pour la clinique journalire, et

aussi tous les renseignements
ncessaires pour linternement
des alins.
Une Partie Thrapeutique
complte les conseils autoriss
les auLcui
auteurs bui
sur l'en
enuoiiucb par
donns
pai icb
semble de la smiologie nerveuse. La Pratique Neurologique a t trs
illustre. Plus de 3oo photographies, dessins, figures schmatiques, clairent
le texte et en rendent la lecture plus dmonstratfve.
t>
i6
PSYCHONVROSES
Les manifestations fonctionnelles
des Psychonvroses
Leur traitement par la Psychothrapie
Par
DEJERINE
J.
Professeur de clinique des maladies du systme nerveux

la Facult de Mdecine de Paris
Mdecin de la Salptrire, Membre de l'Acadmie de Mdecine
et E.
I
vol.
grand
GAUCKLER
Ancien interne des hpitaux.

in- de ix-56i pages, avec i pJancJie hors
texte..
Sfr,
Cet ouvrag-e rsume la doctrine que quelque trente annes de contact avec
les nvropathes a permis l'un des auteurs de se faire. Une premire partie
anaivse les diffrents troubles nvropathiques; une deuxime tudie lef
deux seules psychonvroses reconnues comme lgitimes par les auteurs la
neurasthnie et l'hystrie. La troisime est consacre au traitement. Les
auteurs ne reconnaissent qu'iuie psychothrapie lgitime la psychothrapie
par persuasion. Mais ajoutons qu'ils ne croient pas aux vertus du raisonnement. Ils maintiennent le rle prpondrant du sentiment qui rveille les
nergies, qui rend aux malades l'unit de vie, condition ncessaire de la
:
sant morale... et physique.
L'ducation de soi-mme
Par
le P'
TROISIME DITION.
DUBOIS,
professeur rUniversit de Berne
///me
dc 766 pages, broch
1)1-8"
^fr.
Les Psychonvroses
et leur traitement
Par e P-^ DUBOIS
moral
PRFACE DU PROFESSEUR DeJERINE

TROISIME DITION,
volume
in-S
de 56o pages
/r.
Manuel de
NEUROLOGIE OCULAIRE
PAR
LAPERSONNE
F. de
Professeur de clinique
ophtalmologique
A.
CANTONNET
Chef de clinique ophtalmolog-ique
la Facult de Mdecine de Paris.
carr de xvi-368 paês, avec 106 figures dans,

tiors texte en coileurs
T
iKil. iti-8
le texte et
une flanche
fr.
PHYSIOLOGIE
Vient de paratre
Pressions artrielles
et Viscosit
CIRCULATION
Par
le
sanguine
NUTRITION
Docteur Alfred
DIURSE
MARTINET
vol in-S^-de 2']3 pjcres avec 102 fig. en noir et en couleurs
Vient de paratre
fr.
Technique Opratoire
Physiologique
(TUBE DIGESTIF ET ANNEXES)
PAR
Albert
LE PLAY
Docteur es sciences et en mdecine,

Ancien chef de clinique mdicale la Facult de Mde:ine,
Chef de laboratoire l'Hpital Lannec.
Avec une prface de M,

[
vol. g-r.
in-'?j"
RICHET
Professeur Charles
le
de i5q pages, avec 182 fig. dans
le texte.
... 6
fr.
Trait de Physiologie
PAR
P.-J.
MORAT
5 volumes gr.
in-8,
Maurice
r
4.- ^
j
1 L niversite de
a VTProfesseur
Lyon.
r,
DOYON
Professeur adjomt la Facult

^^ Mdecine de Lyon.
avec figures en noir
et
en couleurs dans
le
Fonctions lmentaires. Prolgomnes, contraction.

TOME
Scrtion, milieu intrieur, avec 194 figures
IL
Fonctions d'innervation, avec 23 figures
TOME
TOME m. Foacdons de nutrition. Circulation. Calorification,
avec 173 figures.
de nutrition (suite et fin). Respiration,
TOME IV. Fonctions
texte.
I.
e.Kcrtion.
Digestion, absorption, avec 167 figures

Sous presse Tome V^ et dernier
Fonctions de relation et de reproduction
:
15
15
fr.
tr.
12
li.
12
Ir.
i8
DERMATOLOGIE
I
^
Prt ne ^
w. * ^ ^
Dermatologique
'^ ^' ^" ^^
^fl
^ ^
^" '^ ^' '^ "^
ERNEST BESNIER,
BROCQ,
L.
L.
JACQUET
Par mm. audry, balzer, barbe, barozzi, Barthlmy, bnard, ernest

besnier, bodin, brault, brocq, de brun, cou rtois-suffit, du castel,
a. castex, j. darier, dehu, dominici, w- dubreuilh, hudelo, l. jacquet, j eanselm e, j .-b. laffitte, lenglet, leredde, merklen, perrin.
raynaud, rist, sabouraud, marcel se, georges thibierge, trmolires, veyrires.
4 volumes relies toile formant ensemble 8870 pages^

823 figures en noir et de 8q planches en couleurs
illustrs de
et
.... 156
Tome
I,
36
sparment
fr.
... 40 fr
les applicaDERMATOLOGIQUE,
PRATIQUE
fr.
Tomes
II, III,
IV, chacun
Depuis la publication de la
tions lectrothrapiques ont acquis une grande importance. Aussi MM. BesNiER, Brocq et Jacquet ont-ils fait refondre entirement, en Janvier 1907,
l'article Electricit.
En outre, chacune des dermatoses justiciables de ces mthodes, on trouvera
les renvois et indications ncessaires.
MALADIES DU CUIR CHEVELU

Par
SABOURAUD
Docteur R.
le
Directeur du Laboratoire Municipal l'Hpital Saint-Louis
/.
Les Maladies Sborrhiques
SBORRHS, ACNS, CALVITIE

I
vol.
gr.
in-S" avec gi
//.
figures en noir
et
en couleurs.
Les Maladies Desquamatives
PITYRIASIS
et
10 /
ALOPCIES
PELLICULAIRES
1
vol.
gr. in-Q avec 122 figures en noir
IIL Les Maladies
et
en couleurs
Cryptogamiques
22
fr
30
fr
LES TEIGNES
I
vol.
gr.
/n-8 de vi-855
pages avec
43.3
fig. et 28 planches
HISTOLOGIE
19
MICROBIOLOGIE
OUVRAGE COMPLET:
Trait d'Histologie
PAR
PRENANT
A.
la
P.
Professeur
Facult de Mdecine de Paris.
L.
la
BOUIN
Professeur agrg
Facult de Mdecine de Nanc}'
MAILLARD
Chef des travaux de Chimie biologique

la Facult de Mdecine de Paris.
Tome
I
vol.
gr.
Tome
I
vol.
II
gr.
I:
in-?)",
CYTOLOGIE GNRALE ET SPCIALE

50
de 977 p., avec 791 fig. dont 172 en couleurs.
fr.
HISTOLOGIE ET ANATOMIE MICROSCOPIQUE
in-o" de\L-\icf)p., avec 5~2 fig.
dont
50
3i en couleurs.
/;
Technique du Diagnostic
par
mthode
la
DE DVIATION DU COMPLMENT
Par P.-F.
I
ARMAND-DELILLE
Ancien chef de clinique de

vol. n-?> de 200 p., 25 f.g. et
la

plancJie en couleurs, art..
fr.
Prcis Elmentaire
d'Anatomie, de Physiologie
et de Patiiologie
PAR
P.
RUDAUX
Ancien chef de clinique de
la
Facult de Mdecine.
DEUXIME DITION, ENTIREMENT REFONDUE

I
vol. in-Q".
de xxii-783 pages, avec
5.^8
fgures dans
le texte.
fr.
ANATOMIE
OUVRAGE COMPLET
Abrg d'Anatomie
PAU
P.
A.
POIRIER
Professeur d'Anatomie
la
B.
Professeur
Tome
T.
acrrti-c
CHARPY
Professeur d'Anatomie
a la Facult de Mdecine de Toulouse.
CUNEO
a la Facult de Mdecine de Paris.
- EMBRYOLOGIE -
OSTEOLOGIE - ARTHROLOGIE
MYOLOGIE.
ARII. COEUR
TRES VEINES LYMPHATIQUES CENTRES
NERVEUX NERFS CRANIENS NERFS RACHI
Tome
LIENS.
III ORGANES DES
SENS - APPAREIL DIGESTIF ET ANNEXES -
Tome
APPAREIL RESPIRA-
CAPSULES SURRNALES APPAREIL

URINAIRE APPAREIL
GNITAL DE L'HOMME
APPAREIL GNITAL
DE LA FEMME PRINE MAMELLES
TOIRE
Fig. cp3.
Schma de
la
gaine hypogasu-ique
(d'aprs xMarcillei.
PRITOINE.
volumes in-t^", formant ensemble 1620 pactes avec

976 figures en noir el en couleurs dans le texte^ riche^
ment
relis toile
50
fr.
ANATOMIE
POIRIER
P.
A.
CHARPY
Trait
d'Anatomie Humaine
Nouvelle dition, entirement refondue par
A.
CHARPY
NICOLAS
A.
ET
Professeur d'Anatomie la Facult

de Mdecine de Paris.
Professeur d Analomie la F"acull

de Jldecine de Toulouse.
Argaui Bvanca U. Col B. Cuno

Paul
Delbet Dieuljifc A. Driiault P. Fredet
Gosset M. Giiibc P. Jacques
Glantenay
Th. Jonnesco E. Laguesse L. Manouvrier P. Nobcourt
0. Pasteau M. Picou A. Prenant H. Riejfel Ronvire
Ch. Simon A. Soiili B. de V/'iesc Weber.
O.
Amodo
lin
-1.
G. Delamare
^4.
TOME
I.
Introduction. Notions d'embryologie. Ostologie. Arthro-
logie,825 flgu7'es {3' dition)

i"Fasc. Myologie.
II.
TOME
Embryologie. Histologie.
20
aponvroses, 35i figures (3 dition)

Fasc.
Angiologie (Cur et Artres). 240 figures, (3' dil.)
3" Fasc.
Angiologie (Capillaires. Veines), 83fig. {2" dition).
Les Lymphatiques. 126 figures (2 dition)
4* Fasc.
2"
I" Fasc. Systme

205 figures. {2' dition)
Fasc.
3*
Fasc.
2"
3'
IV.
(2
Tube
dition)
TOME
V.
fig.
{2"
dition).
121
figures
digest;f.
{:.'
(3"
dition)
...
dition)
Pritoine.
44O
I"
Fasc: Organes guito-ur.naires,
10
(0
(2
2
6
figures
431 ^^zo'es
tion)
2'
fr.
fr.
li'-
tr.
fr.
crniens et rachidiens). 228
210 figures
digestif,
tr.
2
Q
Encphale).
.
dition)
I" Fasc.
Fasc: Appareil respiratoire,

Annexes du tube
Fasc.
Moelle.
(Mningres.
Systme nerveux (Encphale), i3i

Systme nerveux (Nerfs. Nerfs
figures.
TOxME
nerveux
4
8
TOME III.
fr-
Peauciers et
'-
fr.
fr.
{2'
fr.
(2' di-
20
fr.
Fasc.
Tgument externe et drivs. Appareil de
la vision.
Muscles et capsule de Tenon. Sourcils, paupires,
conjonctive, appareil lacrymal. Oreille externe, moyenne et interne.
Embryologie du nez. Fosses nasales. Organes chromaffines. 71 figu:
Organes des sens.
25
res {2' dition)
L'ouvrag-e
complet
lomes en i3 fasau prix de 171 fr.
(5
cicules) est en vente
fr.
22
ANATOMIE
CHIRURGIE
Vient de paratre
Prcis d'Anatomie
et de Dissection
Par H.
ROUVIRE
Professeur agrg la Facult de Mdecine de Paris.

Prface de A. Nicolas, Professeur agrg la Facult de Mdecine de Paris.
TOME
t
vol. in-8%
I.
de 481 pages,
[Tome II
et
TTE,
197 figures
dernier
COU,
dans
MEMBRE SUPRIEUR
le texte, la
plupart en couleurs. 12
fr.
pour paratre en Novembre 1912)
Ce volume est avant tout un livre d'enseignement Il a paru qu'il y avait

place pour un ouvrage qui tiendrait compte des ncessits du travail pratique et ainsi serait la fois descriptif et technique. Etant bien entendu que la
dissection
doit
tre
:
poursuivie par la mthode

topographique,
c'est--dire
doit
mna-
ger successivement tous

les lments d'un segment de l'organisme,
M. Rouvire a pens
qu'il ne fallait pas se
contenter d'indiquer
une
par
numration forcment
ce
aride,
qu'd va rencontrer, mais qu'il tait
ncessaire de l'avertir
au pralable des prinl'tudiant,
cipaux dtails d'ordre

concersystmatique
nant le segment considr, et de les lui montrer clairement par de
bonnes figures. De
I paroi externe
'orbite.
Section de l'apophyse zygomatique.
cette
manire, et par l'aide

d'un livre unique, l'lve
prendra d'abord une
connaissance gnrale,
sommaire mais provisoirement suffisante, de
largion, puis, ainsi do-
cument, pourra entreprendre la dissection en suivant les indicaiions du paragraphe de technique,

sans tre arrt par l'obligation de rechercher ailleurs la signification de ce
que son scalpel lui rvle.
M. Rouvire s'est efforc de faire avant tout un livre clair, rduit
l'essentiel et, pour tout dire, portatif, un vade-mecum d'amphithtre.
{Extrait de la Prface.)
CHIRURGIE
OUVRAGE COMPLET
Trait de
Technique Opratoire
PAR
CH.
MONOD
VANVERTS
J.
Chirurgien des hpitaux de Lille.

Ancien interne laurat des hpitaux
de Paris, Membre correspondant
de la Socit de Chirurgie.
rrofesseur agrg la Facult de Mdecine

de Paris
Chirurgien honoraire des hpitaux,
Membre de l'Acadmie de Mdecme.
DEUXIME DITION
ENTIREMENT
REFONDUE
s^
volumes grand
mant ensemble
paofes
dans
avec
le texte.
ii
233;
.
xn-20i6
figures
40
fi
Le tome I n'est plus rendu

sparment. Le tome II est
aux acheteurs du
vendu
18
tome 1
Condenser
les descriptions
fr.
sans
rien sacrifier de la clart, supprimer tout ce qui semblait tomb en

et
cela pour pouvoir
donner place certaines oprations
nouvelles ou d'autres intentionnellement omises dans la premire
dition parce que non encore consacres par l'usage, tel est le travail considrable qu'ont poursuivi
les auteurs dans cette deuxime
dition. La plupart des chapitres
anciens ont t remanis, quelques-
dsutude,
uns
mme
Fig. 695
Crsto-entrostomie extra-pritnale
pour exstrophie
des
uretres
librs.
du rectum
Abouchement
Les uretres
vsicale.
(Peters).
rectal
sont
La paroi antrieure sous-pritonalc

est ouverte.
compltement trans-
forms. Les index bibliographiques ont t intgralement mis au courant

en mme temps que nombre d'indications anciennes, et aujourd'hui sans
intrt pratique, taient
supprimes.
Enfin l'illustration a t la fois augmente et entirement revise
nombre de clichs dp la premire dition ont fait place des figures nouvelles.
-JZ
CHIRURGIE
PRCIS DE
Technique Opratoire
PAR
LES PROSECTEURS DE LA FACULT DE MDECINE DE PARIS
AVEC INTRODUCTION
professeur Paul BERGER

volumes in-8% cartonns toile anglaise souple.
Par
'-
le
couPratique
rante et Chirurgie
d'urgence, par \ icTOR Veau. 3^ dition,

revue et augmente.
Tte et cou, par
Lexormaxt.
Cii.
3^
revue
dition,
et
augmente.
Thorax
et
mem-
bre suprieur, par

A. ScHWARTZ,
revue
mente.
2"
et
tion,
Abdomen,
M. GuiB
revue
et
.3'^
di-
augpar
dition,
augmente.
uri-
Appareil
naire et appareil gnital de
l'homme, parPiER RE
Du VAL. 3^ dition, revue
et
augmente.
Appareil gni
tal de la femme,
i/par R. Proust, 2*^
iion, revue et augmente.
Membre
162.
Colpo-hystrectomie totale par voie vulvu-prinale, Agrandissement du champ opratoire par l'incision
de Schucliardt. On voit nctiemenl les bords des Releveurs.
Fig.
(R. Proust. Appareil gnital de la
femme.)
inf-
rieur, par Georges

Labey, 2" dition, revue et augmente.
Chaque
de plus de 200 figures, la plupart originales.
vol. illustr
.
4/;
50
CHIRURGIE
Vient de paratre
Technique chrurgfcale
infantile
INDICATIONS OPRATOIRES
OPRATIONS COURANTES
Par L. OMBREDANNE
chirurgien de l'Hpital Bretonneau.
vol. in-Q" de 342 pag-es, avec 210 figiwes.
Professeur agrg
Petite Chirurgfie
^^^^^^^^^^^^
fr.
^ ^ ^ ^
Pratique
PAR
Th.
TUFFIER
Professeur agrg
Chirurgien de l'Hpital Beaujon.
P.
DESFOSSES
Ancien interne des hpitaux de Paris,

Chirurarien du Dispensaire
de^la Cit du Midi.
TROISIME DITION, ENTIREMENT REFONDUE

10 fr
de xi-570 pages, avec 325 fig., cart. VangL
vol. petit in-8
â
Priode
^ ^ ^ ^ ^
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Chirurgien de l'hpital Saint-Antoine, Membre de la Socit de chirurgie.
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MDECINE OPERATOIRE
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Anatomie Normale
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ALBARRAN
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Professeur de clinique des Maladies des Voies urinaires
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Oto=Rhino=Laryngologie
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PAR LE
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Professeur de clinique dentaire l'Universit de Philadelphie

Directeur de "The Dental Cosmos"
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Docteur en chirurgie dentaire l'Universit de Philadelphie.
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Clinique et Opratoire
par Samuel
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Professeur de Clinique gyncologique la Facult de Mdecine de Paris,

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RIBEMONT-DESSAIGNES
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PAR MM.
G.
|
Professeur la Facult de .Mdecine

.\ccoucheur de l'hpital Beaujon
Membre de l'Acadmie de .Mdecine
LEPAGE
Professeur agrg a la Facult de Mdecine

de Paris
Accoucheur de l'hpital de la Piti
SIXIME DITION
AVEC 568 FIGURES DANS LE TEXTE, DONT 4OO DESSINES PAR M. RIBEMONT-DESSAIGNES
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sciences, professeur l'Universit catholique d'Angers.
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ancien chef de clinique la Facult de Paris (3" tirage).
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srum cuti et oplitalmo-raction la tuberculine), par le D""
;
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Les Sutures vasculaires, par L. i.ubert, professeur et J. Fiolle,
chef de clinique l'Ecole de Mdecine de Marseille.
L'Hrdit normale et pathologique, par le P' Ch. Debierre.
P. -F.
57.
58.
59.
60.
61.
62.
63.
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Pneumotomie.
mectomie.
Collapsthrapie.
Freund), par les D" Tuffier, professeur agrg la Facult
de Mdecine de Paris et J. Martin, chef de clinique chirurgicale la Facult de Montpellier.
La Rachicentse, par MM. P. Ravaut, mdecin des hpitaux de
Paris, Gastinel et Velter, internes des hpitaux de Paris.
Les Mtaux coUodaux lectriques en thrapeutique, par
MM. L. Bousquet et H. Roger, chefs de clinique la Facult
de Montpellier.
De la Nvralgie intercostale {Etude des symptmes accuss
par les malades), par le D"" W. Janowski.
Traitement du cancer inoprable, par le D' Tuffier.
La gymnastique respiratoire, par le D' P. Desfosses et
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M""^
65.
De
Burman-Oberg.
l'Incontinence d'Urine chez les enfants, par
Court ADE.
66 Les Poisons Tuberculeux
le
D"^
D.
et leurs rapports avec l'anaphylaxie

P. -F. Armand-Delille.
67. La Chirurgie des "Vsicules sminales, par les D" J. et P. Fiolle.
68. Traitement actuel du rhumatisme blennorragique, par E.
et l'immunit, par le
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Chauvet.
69.
Les "Vagues Utro-Ovariennes.
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de Bactriologie l'Universit de Rennes.
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organes respiratoires. Mthode d'exploration :

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Professeur la Facult de Paris.

Mdecin de l'hpital Boucicaut.
Mdecin
de l'hpital Saint-Antoine.
l'Htel-Dieu.
ROGER
FAURE
J.-L.
Professeur agrg
Chirurgien de l'hpital Cochin.
Professeur de Pathologie exprimentale

la Facult de Paris.
Mdecin de l'Hotel-Dieu
E.
LERMOYEZ
M.
DE LAPERSONNE
Professeur de clinique ophtalmologique
H.
LETULLE
M.
Professeur de clinique mdicale

Do5'en de la Facult
de Mdecine de Paris
Membre de l'Acadmie de mdecine.
BONNAIRE
F.
JAYLE
Ex-chef de clinique gyncologique

l'hpital Broca
Secrtaire de la Direction.
Professeur agrg
et Professeur en chei
de la Jlaternit.
Accoucheur
REDACTION
P. Desfosses et J. Dumont, Secrtaires de la Rdaction.

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Paris,
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de la Ville de Paris.
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de la Socit de Neurologie de Paris
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des principaux
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Ophtalmologie, par V. Morax, ophtalmologiste de

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Pathologie exotique, par Jeanselme, professeur agrg

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Paris. xxvi-yiO pages, 683 figures et 4 planches en couleurs.

Pathologie chirurgicale, par MM. Bgouin, Bourgeois, Pierre Duval,

Patholofjie chirurijicale gnrale. Maladies gnrales des tissus,

Tome II. Tte, Cou, TJiorax, par II. Bourgeois, oto-rhino-laryngologiste

Glandes mammaires, Abdomen, par MM. Pierre Duval,

Organes gnito-urinaires. Membres, par MM.

fesseur agrgea la Facult de Bordeaux, E. Jeanbrau, professeur agrg la

PAR LES PROSECTEURS DE LA FACULT DE MDECINE DE PARIS

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Tte et cou, par Ch. Lenormant. Troisime

suprieur, par A. Sgiiwartz. Deuxime dition.

par M. Guib. Troisime dition.

Appareil urinaire et appareil gnital de l'homme, par Pierre

par B, Proust. Troisime dition.

infrieur, par Georges Labev. Deuxime dition.

Chef des travaux de parasitologie Tlnstitut de mdecine coloniale,

PREFACE PAR M. LE PROFESSEUR R. BLANCHARD

Tous droits de reproduction, de traduction

Voil dix ans dj que

Laboratoire de Parasitologie de la Facult de Mdecine

botanique m'taient connus, je savais trouver en lui un

attente n'a pas

trompe il est devenu un trs habile micrographe,

des travaux pratiques

lui suggrer l'ide d'crire

par entendre raison.

plaisir de prsenter au public mdical, est incorpor par

diverses questions ou scientifiques ou praampleur

de botanique, de parasitologie, en un mot et d'une faon

des branches multiples qui sont du

Les livres de technique microscopique sont nombreux

ceux qui prsentent le plus ce caractre, s'obstinent

qu'aux procds vraiment nouveaux, avec

ses apprciations, car

pas seulement vrai

c'est tout aussi

C'est donc, dans

toute la force du terme, un livre

vcu et longuement mri que j'ai mission de prsenter