OBJETIVO

MARCO TERICO
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metablica de estos es tan grande que la variedad de
medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para
todos ellos, ni siquiera refirindonos a las bacterias con exclusividad.
CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
A continuacin se da una idea general sobre algunos de los constituyentes habituales de
los medios de cultivo.
AGAR.
Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar
bacteriolgico el componente dominante es un polisacrido que se obtiene de ciertas
algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepcin de algunos
microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se
licua alrededor de los 100C y se gelifica alrededor de los 40C, dependiendo de su
grado de pureza.
EXTRACTOS
Su preparacin consiste en que ciertos rganos o tejidos animales o vegetales (p.e.
carne, hgado, cerebro, semillas, etc.) son extrados con agua y calor y posteriormente
concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son a
menudo empleados en la elaboracin de los medios de cultivo. Los ms utilizados son el
extracto de carne, de levadura y el de malta.
PEPTONAS.
Son mezclas complejas de compuestos orgnicos, nitrogenados y sales minerales, que se
obtienen por digestin enzimtica o qumica de protenas animales o vegetales (soja
casena carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en ppticos y aminocidos, pero pueden
ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales.
FLUIDOS CORPORALES.
Con frecuencia es necesario aadir a los medios de cultivo de algunos patgenos
sustancias como sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguneo, sobre
todo para conseguir el primer aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede
ser esterilizada, y por tanto debe de ser obtenida en condiciones aspticas directamente
de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo despus de que este haya sido auto

clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que
tambin aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas
bacterias. Un ejemplo podra ser la catalasa presente en las clulas sanguneas destruye
el perxido de hidrgeno que algunas bacterias que no poseen este enzima acumulan
como producto del metabolismo del oxgeno.
SISTEMAS AMORTIGUADORES.
Para mantener el pH dentro del rango optimo del crecimiento bacteriano a veces, es
necesario aadir algunos componentes al medio de cultivo. Debido a que la mayora de
las bacterias son neutrfilos, se suelen emplear sales del tipo de los fosfatos bisodicos
bipotsicos u otras sustancias como las peptonas para prevenir la desviacin del pH.
INDICADORES DE PH.
Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a fermentaciones u otros
procesos, se hace necesario a veces aadir indicadores acido-base que nos lo indiquen.
AGENTES REDUCTORES.
Con el objetivo de crear en los medios de cultivo condiciones que permitan el
desarrollo de los grmenes microaerofilos anaerobios se aaden estos agentes
reductores siendo, los ms empleados la cistena y el tioglicolato entre otros.
AGENTES SELECTIVOS.
La adicin de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede convertirlo en
selectivo. As, por ejemplo, la adicin de cristal violeta, sales biliares, azida sodica,
telurito potsico, antibiticos, etc., a la concentracin adecuada har que acten como
agentes selectivos frene a determinados microorganismos.
4 TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS GENERALES.
Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO.
Son aquellos que favorecen el crecimiento de u determinado tipo de microorganismo
sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los dems.
MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los dems.
MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de manifiesto
propiedades que un determinado tipo de microorganismos posee.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

En la actualidad, la mayora de los medios de cultivo se encuentran comercializados;
normalmente bajo la forma de liofilizados a los que es preciso rehidratar. En estos casos
la preparacin del medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada
del mismo y disolverla en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las
sustancias termolbiles, se esterilizan por filtracin y se aaden al resto de los
componentes despus de que estos hayan sido previamente esterilizados en el autoclave
y enfriados a temperatura ambiente a 40-50C si se trata de medios con agar. Antes de
su esterilizacin los medios lquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos,
matraces, etc.). Si es un medio slido y se ha de distribuir en tubos en matraces ser
necesario fundir el agar en bao Mara u horno microondas, una vez fundido y
homogenizado, se distribuye en caliente a los tubos matraces (no en placas Petri) se
tapa y se esteriliza en el autoclave. Una vez finalizada la esterilizacin los medios se
dejaran enfriar a temperatura ambiente y en el caso de medios slidos contenidos en
tubos debern, en su caso, inclinarse para que al solidificarse adopten la forma de agar
inclinado pico de flauta (slant) si tal es su finalidad. 5 Las placas de Petri se preparan
vertiendo el medio fundido y estril dentro de ellas y en un ambiente asptico (por
ejemplo en la proximidad de la llama de un mechero Bunsen) es conveniente
homogenizar el medio en el transcurso de la operacin para evitar que el agar sedimente
en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas las placas. Tambin es
posible conservar el medio destinado a preparar placas Petri solidificado y estril en
tubos que se fundirn al bao Mara en el momento de la preparacin de las mismas.
Los caldos y medios slidos pueden conservarse, una vez esterilizados, a temperatura
ambiente pero para reducir su deshidratacin y el consiguiente cambio en las
concentraciones de sus componentes es preferible conservarlos a 4C.

CULTIVO EN AGAR INCLINADO

Rotule el tubo con su nombre, el nombre del germen que va inocular y la flecha en que
se hace el inoculo. Con la mano derecha tome la aguja de inoculacin y flamela. Sin
soltarla, djela enfriar. Sostenga el tubo con el cultivo en la mano izquierda, remueva el
tapn con el meique de la otra mano y sostngalo de tal manera que no toque ninguna
superficie. Flamee la boca del tubo. Retire con el agua de inoculacin una porcin de la
colonia. Flamee nuevamente la boca del tubo. Tpelo y descrtelo. Toma el tubo a
inocular, destpelo, flamelo e inoclelo, haciendo una estra en su superficie en lnea
recta. Flamee de nuevo la boca del tubo, tpelo y colquelo en la gradilla. Antes de
descartar la guja de inoculacin, esterilcela. Incube a 37 grados centgrados por 24 a 48
horas.

Estafilococo Aureus
Staphylococcus aureus es un importante patgeno causante de infecciones adquiridas
en la comunidad y hospitalarias. S. aureus constituye uno de los patgenos ms
frecuentemente aislados en infecciones sanguneas, en infecciones de piel y partes
blandas y en neumonas. Desafortunadamente, este patgeno ha ido desarrollando
resistencia a los antimicrobianos de un modo muy eficiente. Desde el primer
aislamiento de S. aureus resistente a la oxacilina (SAOR) obtenido en Inglaterra en
1961, se ha ido incrementando el nmero de casos de aislamientos resistentes hasta
llegar a la actualidad, en la que este microorganismo se encuentra distribuido en todo
el mundo en porcentajes variables. Tanto es as, que en la actualidad SAOR constituye
un patgeno hospitalario frecuente, que produce estancias en el hospital ms largas y
costos de salud crecientes, con una proporcin de mortalidad alta. De esta forma, se
hace necesario el reconocimiento temprano de pacientes colonizados o infectados con
SAOR para seleccionar la terapia antimicrobiana precisa y tomar la decisin de
comenzar procedimientos de aislamiento. Adems, SAOR de origen hospitalario
(SAOR-H) muestra resistencia a mltiples antibiticos, con lo que se limitan las
alternativas teraputicas y quedan los antiguos antimicrobianos, como los
glucopptidos, como una de las pocas opciones vlidas para el tratamiento de
infecciones graves, o bien antimicrobianos como la tetraciclina, la doxiciclina, la
rifampicina y la trimetoprima-sulfametoxazol . Los nuevos antimicrobianos como el
linezolid y la tigeciclina podran ser de utilidad en reemplazo de los glucopptidos en
determinadas situaciones. De esta forma, se ha ido incrementando el uso de
vancomicina en infecciones graves, con lo que se va generando una presin selectiva
para el desarrollo de resistencia a este antibitico.

PARTE EXPERIMENTAL:

Tcnica de trasplante:
1- Esterilice la aguja de kolle hasta que se ponga al rojo.

2- Destape el tubo con la cepa y pasarlo por la llama del mechero unas
dos o tres veces.

3- Introducir la aguja de kolle y tomar el inoculo.

4- Flamee nuevamente la boa del tubo y taponarlo convenientemente.

5- Tomar el tubo con el medio virgen, destaparlo y

flamearlo 2 o 3 veces a la llama del mechero.
6- Introducir la aguja de kolle y extender la masa
microbiana depositando suavemente en la
superficie del agar, haciendo una estra en
zigzag en toda el rea expuesta.
7- Flamee nuevamente la boca del tubo y
taponarlo
8- Esterilice en la llama del mechero la aguja de
kolle hasta que se ponga al rojo.
9- Ponga en estufa de incubacin a la
temperatura ms favorable y por un tiempo
conveniente. Por ejemplo a 37C / 24h.
Rotulando claramente para no confundirlo con
otros cultivos.

DISCUSIONES
Segn BARRETO, Miriam. 1994 En biologa, y especficamente en
microbiologa, un cultivo es un mtodo para la multiplicacin de
microorganismos, tales como bacterias, hongos y parsitos, en el que
se prepara un medio ptimo para favorecer el proceso deseado para
ello se utiliza los siguientes tcnicas mtodo de estras, francs y
extensin en superficie.
Se realizaron 2 tcnicas para sembrado de cultivo: en medio solido
(con agar nutritivo), en medio lquido y solido en placa (con estriado
simple y en cuadrantes), con 4 bacterias para despus dejar incubar
las bacterias, aplicando correctamente para no eliminar los
microorganismo.
Segn CARPENTER, Philip. 1969. Bacteria Staphylococcus Aureus
su superficie y crecimiento es facultativo ,opacidad nula, sedimento
compacto, forma cocos y agrupacin racimos
Una vez incubadas las bacterias se observaron sus caractersticas
macroscpicas culturales; Los resultados de estas observaciones
realizadas se pueden ver que segn el autor CARPENTER, en la que se
puede observar que cada una de ellas no tiene la forma de cocos pero
en su agrupacin es en racimos esta agrupado en un mismo eje.

CONCLUSIONES

El crecimiento bacteriano realizado en la siembra en placas por

estra no fue claramente observable.
El crecimiento microbiano obtenido en la siembra por puncin
manifiesta la existencia de microorganismos aerobios.
En la siembra por estra se desarroll un tipo de crecimiento filiforme.
Por medio de esta prctica se logr utilizar las tcnicas aprendidas
durante el transcurso del curso. Se logr aprender a realizar algunos
de los mtodos que existen para cultivar bacterias y de esta manera

observar sus caractersticas tanto macroscpicas como

microscpicas e interpretacin de las mismas, con lo que se observ
que para cada bacteria existen caractersticas diferentes que son las
que las identifican y diferencian de otras bacterias, por lo que de esta
manera se le puede llegar a identificar con su correcta siembra y
observacin para anlisis posteriores o simplemente para la
identificacin de una bacteria en algn medio u organismo.
BIBLIOGRAFA

BARRETO, Miriam. 1994. Manual Prctico de Microbiologa

General. Canoabo
CARPENTER, Philip. 1969. Microbiologa. 2da Edicin. Editorial
Interamericana, S.H. Mxico.
PELCZAR. 1990. Microbiologa. 2da Edicin. Editorial. Mc Graw-Hill.
Mxico.
Lowy F. Antimicrobial resistance: the example of Staphylococcus aureus. J Clin
Invest 2003; 111: 1265-73