TECNICA ANALITICA PARA LA DETERMINACIN DE NITRGENO TOTAL KJLEDAHL

EN AGUAS RESIDUALES (N-NH3 Y N-org)

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PRINCIPIO DEL METODO

Analticamente, el nitrgeno orgnico y amoniacal puede determinarse conjuntamente y
referirse como Nitrgeno Total Kjeldahl, un trmino que indica la tcnica usada en la
determinacin.
El mtodo Kjeldahl determina nitrgeno en el estado trinegativo, por tanto no tiene en
cuenta el nitrgeno que se encuentra en forma de azida, azina, azo, hidrazona, nitrato,
nitrito, nitrilo, nitro, nitroso, oxima y semicarbazona.
Acorde al mtodo la presencia de cido sulfrico (H 2SO4), sulfato de potasio (K2SO4) y
sulfato de cobre (CuSO4), como catalizador, convierten el nitrgeno amino de cualquier
material orgnico a amonio. El amoniaco liberado tambin es convertido a amonio, luego
se adiciona base y el amoniaco es destilado del medio alcalino y absorbido en acido brico
o sulfrico. El amonio liberado puede ser determinado colorimtricamente, por electrodo
selectivo o por titulacin con una solucin estndar de cido (Apha, 1998).
Acorde a lo descrito el mtodo Kjeldahl puede ser divido en tres procesos:
-

Digestin: La descomposicin del nitrgeno orgnico en la muestra se logra empleando

una solucin acida. El resultado final es una disolucin de sulfato de amonio.
Norg + H2SO4 (NH4)2SO4 + H2O + CO2

Destilacin: Es la adicin de un exceso de lcali a la mezcla acida de digestin para

convertir el NH4+ en NH3, seguido por la ebullicin y condensacin del NH 3 gas el cual es
recibido en una disolucin de concentracin conocida de acido brico.
(NH4)2SO4 + 2NaOH 2NH3 (g) + Na2SO4 + 2H2O
NH3 (g) + H3BO3 NH4+:H2BO3- + H3BO3

Cuantificacin: La cantidad de nitrgeno en la muestra puede ser calculada de la cantidad

de iones amoniaco (amonio) en la disolucin de cido brico de concentracin conocida.

APARATOS Y EQUIPOS
Todo el material usado en esta medicin debe ser exclusivo para este procedimiento. Los
detergentes con base de hidrxido de amonio o amoniaco no deben usarse para la
limpieza de este material.
Si se considera necesario (residuos adheridos al matraz, manchas, etc.) remojar durante 1
hora en disolucin de acido sulfrico 10% y enjuagar con abundante agua.

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Balanza analtica
Tubos de vidrio Kjeldahl de 250 mL
Pipeta total o parcial de 10 mL
Probeta de vidrio de 100 mL
Digestor TT625 Gerhardt
Turbosog (Scrubber vapores corrosivos) Gerhardt
Destilador Vapodest 30 s Gerhardt
Piedras de ebullicin
Matraz erlenmeyer de 250 mL
Bureta automtica

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REACTIVOS

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Agua destilada (pH: 5.0 -8.0)

Hidrxido de sodio (NaOH)
cido sulfrico concentrado (H2SO4)
cido brico (H3BO3)
Indicador rojo de metilo (C15H15N3O2)
Indicador azul de metileno (C16H18N3SCI)
Indicador naranja de metilo (C14H14N3NaO3S)
Alcohol etlico (CH3CH2OH)
Sulfato de cobre II anhidro (CuSO4)
Sulfato de potasio (K2SO4)
Tiosulfato de sodio pentahidratado (Na2S2O3 x 5H2O)
Carbonato de sodio anhidro (Na2CO3)
Cloruro de amonio (NH4Cl)
cido sulfmico (H2NSO3H)
Tetraborato de sodio decahiddrato (Na2B4O7x10H2O)

SOLUCIONES

Mezcla de indicadores
Pesar 200 mg de indicador rojo de metilo y diluir a 100 mL con alcohol etlico. Pesar 100
mg de indicador azul de metileno y diluir a 50 mL con alcohol etlico. Mezclar ambas
soluciones en frasco de vidrio. (Preparar mensualmente).

Disolucin indicadora de cido brico

Pesar 20g de H3BO3 y disolver en 500 mL de agua destilada, aadir 10 mL de mezcla de
indicadores (Solucin 4.1) y diluir a 1L. Guardar en envase plstico libre de boro. (Preparar
mensual).

Solucin de hidrxido de sodio 0,1N

Pesar 4,0 g de NaOH y disolver en 500 mL de agua destilada, dejar enfriar hasta
temperatura ambiente y llevar a 1L con agua destilada.

Disolucin de tetraborato de sodio (0,025M). Pesar aproximadamente pero con precisin

9,50 g de tetraborato de sodio decahidratado en 50 mL de agua y llevar a 1 L con agua
posteriormente.

Solucin amortiguadora de boratos

Aada 88 mL de la solucin de NaOH 0,1N (vase 4.3) a 500 mL de solucin de tetraborato
de sodio (vase 4.4) y diluir a 1L con agua.

Reactivo de digestin (slido)

Mezclar 100g de Sulfato de potasio y 3g de Sulfato de cobre anhidro, quedando que quede
bien homogenizado.

Solucin reactivo 40% NaOH Na2S2O3

Pesar 400 g de NaOH y 20g de Na2S2O3. Disolver en agua destilada, dejar enfriar y diluir a
1L.

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Solucin titulante de cido sulfrico 0,02N

Preparar una solucin de H2SO4 0,1N diluyendo 3 mL de H2SO4 concentrado a 1L con agua
destilada libre de CO2. Diluir 200 mL de esta solucin a 1L con agua destilada. Estandarizar
el acido 0,02N contra una solucin de Na 2CO3 0,0200 N (1,060g de Na2CO3 anhidro secado
a 140C y diluido a 1L con agua destilada) + 2 gotas de indicador anaranjado de metilo.
Titular esta disolucin con H2SO4 0,02N hasta que indicador vire de amarillo a canela.

Solucin de anaranjado de metilo

Pesar 0,05g de anaranjado de metilo y diluir a 100 mL

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Solucin de Nitrgeno amoniacal (1000 mg N-NH 3/L)

Pesar 3,819 g de cloruro de amonio, disolver u diluir a 1L con agua destilada.

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Solucin 10% NaOH (Turbosog)

Pesar 100 g de NaOH y diluir a 1L.

PROCEDIMIENTO.
Los resultados ms fiables se obtienen en muestras frescas. Si un anlisis inmediato no es
posible, preservar las muestras para la digestin Kjeldahl por acidificacin a pH 1,5 a 2,0
con H2SO4 concentrado y almacenamiento a 4C. No utilice HgCl 2 porque este interferir
con la eliminacin de amoniaco.

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Determinacin de Nitrgeno Amoniacal por destilacin (Determinacin de Amonio)

Si la muestra contiene menos de 50 mg/L de N-NH 4 usar 100 mL de muestra, y en caso de
tener mayor concentracin de 50 mg/L de N-NH 4 tomar 50 mL de muestra y disponer en un
vaso pp de 250 mL. (Completar volumen a 100 mL)
Hacer un blanco de muestra con 100 mL de agua destilada
Ajustar el pH de las muestras a pH 7 con NaOH o H2SO4 segn corresponda.
Adicionar 5 mL de buffer Borato y ajustar pH =9,5. Usando NaOH o H 2SO4.
Disponer la muestra con pH ajustado en el matraz Kjeldahl de 250 mL.
Encender el destilador, y usar cuando el equipo este en READY
Para empezar a usar el equipo hacer un lavado con agua destilada, disponiendo para ello
100 mL de agua destilada en un matraz Kjeldahl.
Finalizado el lavado poner el matraz Kjeldahl en el destilador y 50 mL de solucin
indicadora en un matraz erlenmeyer de 250 mL. usar el programa NH4_AGUA (Duracin 6
min)
Transcurrida la destilacin, el destilado se recibir en el matraz erlenmeyer con solucin
indicadora. Se valora con H 2SO4 0,02N hasta que vire de verde a violeta. Registrar
volmenes gastados.
Si se desea hacer nitrgeno orgnico a la muestra, no botar el restante que quedo en el
matraz Kjeldahl posterior a la destilacin.
Si no efectuar el paso 5.14 dejar el equipo y material limpio para su prximo uso.
Determinacin de Nitrgeno Orgnico
Tomar 100 mL de muestra previamente destilada (muestra restante del 5.12), y aadir con
cuidado 5 g de reactivo de digestin y 10 mL de H 2SO4, agitar suavemente hasta disolucin
de la sal. Adicionar piedras de ebullicin.
Considere llevar siempre un blanco durante los pasos del mtodo.
Disponer en el rack de digestin, los tubos Kjeldahl. Considere que el rack est diseado
para 6 matraces Kjeldahl, por lo que siempre debe hacerse la digestin con el rack
completo y con muestra (matraces no deben estar vacios). En caso de no cumplir con las
muestras necesarias, considere llenar el espacio con muestras blanco para suplir el rack.
el rack siempre debe tener 6 matraces con muestra para la digestin.

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Antes de iniciar la digestin de las muestras debe encender la Turbosog para neutralizar
los vapores corrosivos del proceso de digestin de muestras. Esta debe estar funcionando
durante todo el proceso.
Encendida la Turbosog disponer los tubos en el rack, encender el digestor y usar el
programa Pr1. Que consta de dos pasos y tiene una duracin de 1h 20 min.
Prog. 1 30% potencia 60 min
Prog. 2 40% potencia 20 min
Una vez finalizada la digestin, esperar 30 min y apagar la Turbosog. Dejar que los
matraces se enfren.
Encender el destilador, y usar cuando el equipo este en READY
Para empezar a usar el destilador hacer un lavado con agua destilada, disponiendo para
ello 100 mL de agua destilada en un matraz Kjeldahl.
Finalizado el lavado poner el matraz Kjeldahl en el destilador y 50 mL de solucin
indicadora en un matraz erlenmeyer de 250 mL. usar el programa NTK_AGUA (Duracin
6 min)
Transcurrida la destilacin, el destilado se recibir en el matraz erlenmeyer con solucin
indicadora. Se valora con H 2SO4 0,02N hasta que vire de verde a violeta. Registrar
volmenes gastados.
Finalizado el proceso dejar el equipo y material limpio para su prximo uso.
Determinacin de Nitrgeno Total Kjeldahl (NTK)
Agregar 100 mL de muestra al matraz Kjeldahl. Si la muestra tiene:
NT 80 mg/L se adiciona 25 mL de muestra al matraz y se completa a 100 mL con H 2O.
80 NT 20 mg/L se adiciona 50 mL de muestra al matraz y se completa a 100 mL con
H2O.
NT 10 mg/L se adiciona 100 mL de muestra al matraz y se completa a 100 mL con H 2O.
Posteriormente adicionar 4 a 5 piedras de ebullicin, 5g de reactivo de digestin (sal azul) y
10 mL de H2SO4 concentrado. Agitar hasta homogenizar la muestra con los reactivos
adicionados.
Considere llevar siempre un blanco durante los pasos del mtodo. ( 5.20)
Disponer en el rack de digestin, los tubos Kjeldahl. Considere que el rack est diseado
para 6 matraces Kjeldahl, por lo que siempre debe hacerse la digestin con el rack
completo y con muestra (matraces no deben estar vacios). En caso de no cumplir con las
muestras necesarias, considere llenar el espacio con muestras blanco para suplir el rack.
EL rack siempre debe tener 6 matraces con muestra para la digestin.
Antes de iniciar la digestin de las muestras debe encender la Turbosog para neutralizar
los vapores corrosivos del proceso de digestin de muestras. Esta debe estar funcionando
durante todo el proceso.
Encendida la Turbosog disponer los tubos en el rack, encender el digestor y usar el
programa Pr1. Que consta de dos pasos y tiene una duracin de 1h 20 min.
Prog. 1 30% potencia 60 min
Prog. 2 40% potencia 20 min
Una vez finalizada la digestin, esperar 30 min y apagar la Turbosog. Dejar que los
matraces se enfren.
Encender el destilador, y usar cuando el equipo este en READY.
Para empezar a usar el destilador hacer un lavado con agua destilada, disponiendo para
ello 100 mL de agua destilada en un matraz Kjeldahl.
Finalizado el lavado poner el matraz Kjeldahl en el destilador y 50 mL de solucin
indicadora en un matraz erlenmeyer de 250 mL. usar el programa NTK_AGUA (Duracin 6
min)
Transcurrida la destilacin, el destilado se recibir en el matraz erlenmeyer con solucin
indicadora. Se valora con H 2SO4 0,02N hasta que vire de verde a violeta. Registrar
volmenes gastados.
Finalizado el proceso dejar el equipo y material limpio para su prximo uso.
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CALCULOS Y RESULTADOS

Calculo de concentracin de Nitrgeno amoniacal (N-NH4)

) x 280
( mgL )= ( VbVm
Vm 1

NNH 4

Donde:
Vb: Volumen (mL) gastados de titulante H2SO4 0,02N en blanco de muestra
Vm: Volumen (mL) gastados de titulante H2SO4 0,02N en muestra
Vm1: Volumen (mL) usados en destilacin de muestra.
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Calculo de concentracin Nitrgeno orgnico (N-Norg)

NNorg

mg ( VbVm ) x 280
=
L
Vm 1

( )

Donde:
Vb: Volumen (mL) gastados de titulante H2SO4 0,02N en blanco de muestra
Vm: Volumen (mL) gastados de titulante H2SO4 0,02N en muestra
Vm1: Volumen (mL) usados en destilacin de muestra.
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Calculo de concentracin de Nitrgeno Total Kjeldahl (NTK)

NTK

) x 280
( mgL )= ( VbVm
Vm 1

Donde:
Vb: Volumen (mL) gastados de titulante H2SO4 0,02N en blanco de muestra
Vm: Volumen (mL) gastados de titulante H2SO4 0,02N en muestra.
Vm1: Volumen (mL) usados en destilacin de muestra.
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Considere que:

NTK

( mgL )=[ N NH 4 (mg/ L)]+ [ N Norg(mg/L)]

NNorg

( mgL )= NTK ( mgL ) NNH 4 (mg/ L)

INTERFERENCIAS

Nitratos

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Durante la digestin, el nitrato en concentraciones por arriba de 10 mg/L puede oxidar parte
del amoniaco liberado produciendo N 2O y dando lugar a una interferencia negativa.
Cuando se encuentre presente materia orgnica reductora, el nitrato puede reducirse a
amoniaco, resultando una interferencia positiva. La reaccin entre el nitrato y el amoniaco
puede prevenirse con el uso de una resina de intercambio inico (en forma de cloruros)
para remover el nitrato.
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Si la muestra contiene una gran cantidad de sales o materia inorgnica que se disuelvan
durante la digestin, la temperatura podra alcanzar los 400 C; esta temperatura es el
punto piroltico menor del nitrgeno. Para prevenir que se presenten ests altas
temperaturas, aadir ms cido sulfrico para mantener el balance sal-cido. No todas las
sales incrementan la temperatura hasta 400 C, por lo cual la adicin a la muestra de 1 mL
de H2SO4 / g de sal proporciona resultados aceptables. La adicin de cido debe hacerse
por igual a la muestra, blanco y estndares. Tener cuidado con la cantidad de cido
adicionado ya que un exceso disminuye la temperatura de destilacin por debajo de
380 , lo cual resulta en una digestin y recuperacin incompleta.

Grandes cantidades de sales o slidos pueden causar golpeteo durante la destilacin. Si

esto ocurre aadir ms agua de dilucin despus de la digestin.

Materia orgnica:

Durante la digestin, el H2SO4 oxida la materia orgnica a CO 2 y H2O. Si estuviera presente

una gran cantidad de materia orgnica, se consume mucho cido; para prevenir esto
aumentar la proporcin de sal-cido y la temperatura de digestin. Si est presente una
gran cantidad de materia orgnica, resulta en perdida piroltica del nitrgeno. Para prevenir
est situacin aadir al matraz de digestin 10 mL de H2SO4 concentrado por cada 3 g de
DQO. Alternativamente, aadir 50 mL ms de reactivo de digestin por cada gramo de
DQO. La adicin de ms cido puede ocasionar la necesidad de aadir ms reactivo
hidrxido-tiosulfato de sodio para lograr el pH alto requerido para la destilacin.

Dado que los reactivos pueden contener trazas de amoniaco, trate el blanco de reactivos
igual que las muestras.

El cloro residual reacciona con el nitrgeno amoniacal. Se puede remover agitando la

muestra o dejndola expuesta a la luz solar por al menos 1 h.

REFERENCIAS
-

4500-Norg B Macro-Kjeldahl Method, American Public Health Association, Standard

Methods for The Examination of Water and Wastewater, APHA, AWWA, WEF, USA, 21th
Ed., 2005, pp 4-103 a 4-111.

I-3520-85 Nitrogen, ammonia, colorimetric, distillation-nesslerization, Methods for the

determination of inorganic substances in water and fluvial sediments, Techniques of waterresources investigations of the United States Geological Survey, Book 5, Chapter A1.

A powerful Kjeldahl nitrogen method using peroximonosulfuric acid, Hach, C. Cliford,

Brayton V. Scott, Kopelove, B. Alan, Journal Agricultural Food Chemistry, 1985, 33, pp
1117-1123

Estimation of nitrogen by the Kjeldahl method. Nature of the action of Selenium, Industrial
and Engineering Chemistry, Sreenivasan, V., Sadasivan, V., Indian Institute of
Science,1939, 11(6), 314-315.

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