Relatorio de Estagio

UNIVERSIDADE DE LISBOA
FACULDADE DE FARMCIA
RELATRIO DE ESTGIO E MONOGRAFIA
MESTRADO EM ANLISES CLNICAS
Diana Isabel Heitor Delgado
LISBOA 2011
UNIVERSIDADE DE LISBOA
RELATRIO DE ESTGIO
LABORATRIO NOVA ERA-LUZ
ORIENTAO: DRA. MARGARIDA MENDES
MESTRADO EM ANLISES CLNICAS
Diana Isabel Heitor Delgado
LISBOA 2011
L A BO R AT R IO NO V A E R A
No mbito do Mestrado em Anlises Clnicas da Faculdade de Farmcia, foi solicitado

pela Coordenadora e Orientadores do Mestrado a realizao de um estgio nas
valncias de Bioqumica, Imunologia e Hematologia.
Assim, elaborei este relatrio que tem como objetivo sistematizar a informao
disponvel e demonstrar a boa compreenso das atividades realizadas. Com isto
pretendo demonstrar os conhecimentos que me permitam completar com xito o
Mestrado em Anlises Clnicas.
Mestrado em Anlises Clnica
Diana Delgado
NDICE
AGRADECIMENTOS .................................................................................................................... 8
BREVE DESCRIO DO LOCAL DE ESTGIO ......................................................................... 9
DESCRIO GERAL DO ESTGIO - RESUMO ....................................................................... 11
GENERAL DESCRIPTION OF SUPERVISED PRACTICAL TRAINING - ABSTRACT ............. 12
AMOSTRAS BIOLGICAS ESTUDADAS .................................................................................. 14
SANGUE .................................................................................................................................. 14
URINA ...................................................................................................................................... 15
CIRCUITO ANALTICO ............................................................................................................... 16
AMOSTRAS DE URINA .......................................................................................................... 16
AMOSTRAS DE SANGUE ...................................................................................................... 16
FASES DO CIRCUITO ............................................................................................................ 16
COLHEITAS ......................................................................................................................... 18
COLHEITAS DE SANGUE ............................................................................................... 18
COLHEITAS DE URINA ................................................................................................... 18
CONSERVAO ..................................................................................................................... 19
TRANSPORTE ........................................................................................................................ 19
BIOQUMICA ............................................................................................................................... 20
EQUIPAMENTOS ANALTICOS - MTODOS E TCNICAS UTILIZADOS ........................... 20
AUTION MAX AX-4280 ........................................................................................................ 20
ANLISE DO SEDIMENTO URINRIO MICROSCPIO TICO .................................... 24
OLYMPUS AU400 ................................................................................................................ 26
TESTES REALIZADOS .................................................................................................... 26
Diana Delgado
IMUNOLOGIA.............................................................................................................................. 46
ADVIA CENTAUR ................................................................................................................ 46
VIDAS BIOMERIEUX ........................................................................................................ 65
MINICAP .............................................................................................................................. 70
ELETROFORESE CAPILAR ............................................................................................ 70
TESTE PARA DETEO DA BRUCELOSE BRUCELLOSLIDE TEST ........................... 73
TESTE PARA DETEO DE TREPONEMA PALLIDUM VDRL RPR NOSTICON II ...... 74
TESTE PARA DETEO DE FATOR REUMATOIDE WALLER ROSE POLYARTEST
FUMOUZE ................................................................................................................................ 74
HEMATOLOGIA .......................................................................................................................... 75
SYSMEX XT 180i ................................................................................................................. 75
HEMOGRAMAS ............................................................................................................... 75
HEMATOPOIESE ......................................................................................................... 75
GLBULOS VERMELHOS (GV) OU ERITRCITOS .................................................. 77
GLBULOS BRANCOS OU LEUCCITOS ................................................................ 77
PLAQUETAS ................................................................................................................ 84
CITOMETRIA DE FLUXO ................................................................................................ 85
CONTAGEM E DIFERENCIAO DAS POPULAES DE GLBULOS BRANCOS .. 86
CONTAGEM DE GLBULOS VERMELHOS E PLAQUETAS ........................................ 86
NDICES HEMATIMTRICOS ...................................................................................... 86
Diana Delgado
SYSMEX CA 500 ................................................................................................................. 87
COAGULAO ................................................................................................................ 88
TEMPO DE TROMBOPLASTINA (TP) ............................................................................ 90
TROMBOPLASTINA PARCIAL ATIVADA (APTT) ........................................................... 91
FIBRINOGNIO ............................................................................................................... 91
ADAMS A1C HA8160 .......................................................................................................... 92
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESSO ........................................................ 92
VESMATIC 30/30 PLUS ...................................................................................................... 93
VELOCIDADE DE SEDIMENTAO GLOBULAR .......................................................... 93
HB GOLD ............................................................................................................................. 95
CONTAGEM DE RETICULCITOS .................................................................................... 96
CONTAGEM DE PLAQUETAS (CMARA DE PLAQUETAS) ............................................ 97
CRIOAGLUTININAS ............................................................................................................ 97
CRIOGLOBULINAS ............................................................................................................. 98
TIPAGEM SANGUNEA SISTEMA AB0 e Rh .................................................................. 98
ESFREGAOS SANGUNEOS E COLORAO DE MAY-GRNWALD-GIEMSA ........... 99
PESQUISA DE CLULAS FALCIFORMES......................................................................... 99
TEMPO DE HEMORRAGIA- MTODO DE DUKE............................................................ 100
TEMPO DE COAGULAO .............................................................................................. 100
CONTROLO DE QUALIDADE .................................................................................................. 101
OLYMPUS AU 400 ................................................................................................................ 103
AUTION MAX AX 4280 ....................................................................................................... 103
ADVIA CENTAUR .................................................................................................................. 103
VIDAS .................................................................................................................................... 104
Diana Delgado
MINICAP ................................................................................................................................ 104
SYSMEX XT 180i .................................................................................................................. 104
SYSMEX CA 500 ................................................................................................................... 104
ADAMS A1C HA8160 ............................................................................................................ 104
VESMATIC 30/30 PLUS ........................................................................................................ 104
HB GOLD ............................................................................................................................... 104
CRITRIOS DE VALIDAO TCNICA .................................................................................. 105
CONCLUSO ............................................................................................................................ 106
BIBLIOGRAFIA.......................................................................................................................... 107
MONOGRAFIA DIAGNSTICO LABORATORIAL DO EBV ............................................... 109
Diana Delgado
NDICE DE FIGURAS
Figura 1- Quadro de Pessoal ........................................................................................................ 9
Figura 2 - Organograma .............................................................................................................. 10
Figura 3 - Cronograma de Estgio .............................................................................................. 10
Figura 4 - AUTION MAX AX-4280............................................................................................... 20
Figura 5 - OLYMPUS AU400 ...................................................................................................... 26
Figura 6 Ensaio Imunoturbidimtrico ....................................................................................... 43
Figura 7 - ADVIA CENTAUR ....................................................................................................... 46
Figura 8 - VIDAS ......................................................................................................................... 65
Figura 9 - MINICAP ..................................................................................................................... 70
Figura 10 - Representao em bandas e grfico de uma eletroforese normal das protenas ... 73
Figura 11 SYSMEX XT 180i ..................................................................................................... 75
Figura 12 Processo de formao das clulas sanguneas ...................................................... 77
Figura 13 - Eritrcito .................................................................................................................... 77
Figura 14 Processo de Formao dos Leuccitos e dos Eritrcitos ........................................ 78
Figura 15 - Neutrfilo ................................................................................................................... 79
Figura 16 - Formao do Linfcito maduro ................................................................................. 81
Figura 17 - Macrfago ................................................................................................................. 83
Figura 18 - Formao dos moncitos ......................................................................................... 84
Figura 19 - Moncitos .................................................................................................................. 84
Figura 20 Esquema da Citometria de Fluxo............................................................................. 85
Figura 21 - SISMEX CA 500 ....................................................................................................... 87
Figura 22 Cascata da Coagulao ........................................................................................... 89
Figura 23 Fibrinlise ................................................................................................................. 90
Figura 24 - ADAMS A1C HA8160 ............................................................................................... 92
Figura 25 - VESMATIC 30/30 PLUS ........................................................................................... 93
Figura 26 Fenmeno de Rouleux .............................................................................................. 94
Diana Delgado
Figura 27 HB GOLD ................................................................................................................. 95
Figura 28 Exemplo de um grfico normal ................................................................................ 96
Diana Delgado
AGRADECIMENTOS
Agradeo:
Faculdade de Farmcia por ter concebido e posto em prtica este mestrado.

Prof. Doutora Cristina Marques, como Coordenadora do mestrado.
A todo o quadro de pessoal do Laboratrio Nova Era, em particular Orientadora do
estgio, Dr. Margarida Mendes.
A todos os Docentes, pelo interesse e conhecimentos que nos dedicaram e
transmitiram.
A todos os meus familiares, em especial aos meus pais, tios, padrinhos e primas pelo
apoio e confiana demonstrados para comigo.
A todos os meus amigos, pelo apoio e motivao que sempre me deram.
Sem eles, seria muito mais difcil chegar at aqui.
A Todos, os meus sinceros agradecimentos
Diana Delgado
BREVE DESCRIO DO LOCAL DE ESTGIO

A Clnica Mdica e Laboratorial Nova Era iniciou a sua atividade nas atuais instalaes
em maio de 1999. Destacou-se
Destacou se nas Laranjeiras por se tratar de um laboratrio
construdo de raiz e, ao mesmo tempo, com uma rea dedicada s consultas mdicas
de diferentes especialidades.
O atual Diretor Tcnico
ico do laboratrio, o Dr. Jos Lus Viana (Especialista em Anlises
Clnicas), encontra-se
se no Laboratrio desde 1999.
Em maio de 2007 deu-se
se um novo passo na Clnica Mdica e Laboratorial Nova Era
mediante a sua integrao no So Joo de Deus | Grupo de Sade.
Sa
O laboratrio acima referido tem o quadro de pessoal representado no grfico e
recebe diariamente uma mdia de 150 amostras.
Figura 1- Quadro de Pessoal
A Clnica Nova Era, mais detalhadamente o Laboratrio de Anlises Clnicas,

Cl
est
organizada estruturalmente da seguinte forma:
Diana Delgado
Conselho de
Administrao
Diretor Geral: Dr. Paulo Freire
Clnica
Nova Era
Laboratrio
Nova Era
Diretor Geral: Dr. Paulo Freire

Diretores Tcnicos: Dr. Jos Lus Viana
Dr. Margarida Mendes
Seco de
Imunologia
Seco de
Bioqumica
Seco de
Hematologia
Seco de
Microbiologia
Figura 2 - Organograma
No decorrer do estgio, realizaram-se as atividades indicadas no cronograma:
Figura 3 - Cronograma de Estgio
Diana Delgado
10
DESCRIO GERAL DO ESTGIO - RESUMO

No mbito deste mestrado, realizei este estgio que se dividiu em quatro partes:
- Colheitas Fase pr analtica;
- Anlises Bioqumicas a amostras de sangue e urina;
- Anlises Imunolgicas a amostras de sangue;
- Anlises Hematolgicas a amostras de sangue;
No dia 2 de agosto de 2010, iniciou-se o estgio, s 8:00, na Sala de Colheitas deste
laboratrio, onde tudo correu dentro da normalidade, sendo que a metodologia
aplicada foi a puno venosa com agulha e seringa.
Houve uma permanncia na Sala de colheitas das 8:00 s 11:00h, todos os dias,
durante todo o tempo em que decorreu o estgio (de 2 de agosto a 22 de fevereiro).
Aps a realizao das colheitas de sangue, durante cerca de trs meses, das 11:00 s
17:00, efetuaram-se anlises bioqumicas a amostras de sangue e urina. Estas
anlises realizaram-se atravs do uso de dois equipamentos, o Aution Max AX4280
(realiza a anlise qumica das urinas frescas atravs de reaes qumicas que
ocorrem nas reas da tira de teste e provocam alteraes da cor, as quais so depois
lidas por reflectncia no aparelho) e o Olympus AU400 (no qual a metodologia usada
na medida da maioria dos analitos a espectrofotometria).
No quarto e quinto ms, durante cerca de 5 horas dirias, realizaram-se anlises
imunolgicas, atravs do uso de trs equipamentos, o Advia Centaur (usa como
metodologia os ensaios imunoenzimticos e a tecnologia quimiluminomtrica), o
VIDAS (utiliza uma associao de mtodos imunoenzimticos com uma deteo final
em
fluorescncia)
MiniCap
(eletroforese
capilar
para
realizao
de
proteinogramas).
No sexto e stimo ms, durante cerca de 5 horas dirias, realizaram-se anlises
hematolgicas em amostras de sangue, atravs do uso de cinco aparelhos, o Sysmex
XT1800i (utiliza a tecnologia de citometria de fluxo para a realizao de hemogramas),
o Sysmex Ca500 (utilizado para a realizao de anlises coagulao sangunea, que
utiliza uma metodologia de deteo de luz difusa e um mtodo colorimtrico), o Adams
A1C HA8160 (utilizado para o doseamento da hemoglobina glicada, atravs de
cromatografia liquida de alta presso), o VesMatic 30/30 Plus (mtodo mecnico e
leitura por infravermelhos, para determinao da velocidade de sedimentao) e o Hb
Diana Delgado
11
Gold (realizao de eletroforeses de hemoglobinas por cromatografia de troca

catinica).
A realizao deste estgio permitiu aplicar de forma sistematizada os conhecimentos
adquiridos ao longo do mestrado, produzindo os dados necessrios para fornecer os
resultados das anlises aos utentes e ajudando os clnicos a estabelecer diagnsticos.
GENERAL DESCRIPTION OF SUPERVISED PRACTICAL TRAINING ABSTRACT

Under this master, I went through a supervised practical training which was divided into
four parts:
- Sample collection Preanalytical phase;
- Biochemical analysis of blood samples and urine;
- Immunologic analysis of blood samples;
- Hematological analysis of blood samples.
On August 2, 2010, the practical training began at 8:00 in the laboratory, where
everything went within normal limits. The methodology applied was venipuncture using
needle and syringe.
There was a permanence in the laboratory from 8:00 to 11:00 every day, throughout
the entire duration of the training (from 2 August to February 25).
After blood and urine sample collection, and for about three months, from 11:00 to
17:00, biochemical analyses were carried out on samples of blood and urine. These
tests were performed by using two devices, the AX4280 Aution Max (performs
chemical analysis of fresh urine by chemical reactions that occur in the areas of test
strip and cause discoloration, which are then read by reflectance device) and the
Olympus AU400 (in which the methodology used in the measurement of most analytes
is spectrophotometry).
In the fourth and fifth months, for about 5 hours a day, there were immunological
analysis, through the use of three devices, the Advia Centaur (used as the
methodology and quimioluminometric technology enzyme immunoassays), VIDAS
(uses a combination of immunoenzymatic methods with a final detection in
fluorescence) and MiniCap (capillary electrophoresis to perform Proteinograms).
In the sixth and seventh month, for about 5 hours a day, hematological tests were
performed on samples of blood, through the use of five sets, the Sysmex XT1800i
(uses the technology of flow cytometry to perform blood counts), the Sysmex Ca500
Diana Delgado
12
(used for the analysis of blood clotting, which uses a methodology for detection of
scattered light and a colorimetric method), the A1C Adams HA8160 (used for the
determination of glycated hemoglobin by high pressure liquid chromatography), the
VesMatic 30/30 Plus (mechanical method and infrared reading, to determine the
sedimentation rate) and Hb Gold (performing hemoglobin electrophoresis by cation
exchange chromatography).
The conclusion of this training led to the implementation in a systematic way of the
knowledge acquired during the master, producing the data needed to provide the
analysis results to users and helping to establish clinical diagnoses.
Diana Delgado
13
AMOSTRAS BIOLGICAS ESTUDADAS

SANGUE
O sangue um tecido conjuntivo, liquido, constitudo por bilies de clulas suspensas
num lquido aquoso. Abastece de oxignio e nutrientes todas as partes do organismo e
remove os produtos residuais para excreo. Fornece tambm calor ao corpo e
ajuda-o a defender-se dos ataques de organismos invasores. Passa por todas as
clulas vivas, distribuindo os nutrientes essenciais e recebendo os produtos de
excreo para serem eliminados.
O volume total de sangue no adulto de 5/ 6 litros, ou 7 a 8% do seu peso corporal.
Aproximadamente, 45% do sangue composto pelos elementos celulares: os glbulos
vermelhos (ou eritrcitos ou hemcias), os glbulos brancos (ou leuccitos) e as
plaquetas (ou trombocitos). Os glbulos vermelhos contm a hemoglobina, que
transporta o oxignio; os glbulos brancos defendem o organismo de substncias
estranhas (e.g., agentes infeciosos) e as plaquetas possuem como principal funo o
controlo de hemorragias7.
Os restantes 55% do sangue constituem a poro fluda do mesmo, em que 90%
gua e 10% composto por protenas (albumina, globulina e fibrinognio), glcidos,
vitaminas, hormonas, enzimas, lpidos e sais minerais. Quando se utiliza um
anticoagulante, a frao lquida do sangue chamada plasma e contm fibrinognio.
Se no for usado qualquer tipo de anticoagulante, chamada soro e no contm
fibrinognio, uma vez que este foi consumido aquando da formao do cogulo. De
uma forma generalista, diz-se que o sangue composto pelos elementos figurados
(clulas) e por plasma.
Como o sangue circula por todo o corpo, o oxignio transportado dos pulmes para
os tecidos, os produtos da digesto so absorvidos no intestino e transportados aos
diversos tecidos. As clulas sanguneas tambm podem ser transportadas para
debelar infees ou participar na coagulao. Ao mesmo tempo os produtos
metablicos dos tecidos so lanados na corrente sangunea para que possam ser
reutilizados ou excretados, pela pele, rins e pulmes.
Diana Delgado
14
URINA
A urina um lquido orgnico de cor amarelada produzido pelos rins que transporta
produtos residuais dissolvidos. Cerca de 95% da urina constituda por gua. O resto
formado principalmente por sais minerais dissolvidos e uma substncia denominada
de ureia que contm azoto. A ureia produzida pelos rins e a sua quantidade
regulado por hormonas. Se o sangue estiver excessivamente concentrado, a glndula
pituitria aumenta a produo da hormona antidiurtica (ADH), o que diminui a
quantidade de urina e conserva a gua. Se o sangue estiver demasiado diludo os
nveis de ADH descem e aumenta a produo de urina. A urina encontra-se isenta de
bactrias7.
A urina Tipo II ou urina fresca geralmente requisitada para exames de rotina, sendo
preferencialmente feita a anlise com a primeira urina da manh, uma vez que tem
como vantagem ser mais concentrada, permitindo assim a deteo de substncias e
elementos figurados que podero no estar presentes em amostras aleatrias (por
estarem diludas).
O objetivo da urina de 24 horas permitir detetar alteraes de parmetros
bioqumicos especficos, que de outra forma no seriam reveladas. A necessidade de
utilizao da urina de 24 horas deve-se ao facto de o organismo no excretar todas as
substncias mesma velocidade. A sua excreo est sujeita a inmeras
interferncias, nomeadamente, a dieta alimentar, a atividade fsica e o stress, existindo
picos de maior libertao das substncias. Deste modo, efetua-se a colheita de todo
o volume de urina eliminado por um perodo de 24 horas, de forma a abranger a
eliminao de todos os elementos em estudo.
Diana Delgado
15
CIRCUITO ANALTICO
AMOSTRAS DE URINA
As amostras de urina so transportadas ao laboratrio de forma e a temperatura
adequadas1, pois a permanncia temperatura ambiente pode levar a alteraes, tais
como: o aumento do pH devido degradao da ureia pelas bactrias, levando
produo de amnia; a diminuio da glucose (se presente) pela ao das bactrias; a
diminuio dos corpos cetnicos devido volatilizao; a diminuio da bilirrubina pela
ao da luz ( fotossensvel); o aumento da turvao por proliferao bacteriana e
possvel precipitao de cristais amorfos e a desintegrao dos elementos figurados
(eritrcitos, leuccitos e clulas).
As amostras devem ser corretamente identificadas, sendo possvel nessa
identificao a distino entre as urinas frescas e as urinas de 24 horas, de forma a
evitar eventuais erros, e devem estar acompanhadas da respetiva requisio
preenchida pelo mdico requisitante e onde se podem ver as anlises pedidas.
Aquando da receo da urina, o tcnico deve verificar se est corretamente
identificada, caso contrrio a amostra rejeitada e a identificao deve ser feita
sempre no frasco e nunca na tampa12.
AMOSTRAS DE SANGUE
As amostras de sangue so transportadas ao laboratrio de forma e temperatura
adequadas. Devem ser colhidas para tubos que contenham os anticoagulantes
especficos ou para tubos sem anticoagulante, sendo posteriormente realizada a
preparao da amostra de acordo com as anlises requisitadas12.
FASES DO CIRCUITO
Para se compreender o funcionamento de um laboratrio de Anlises Clnicas,
necessrio o conhecimento de todo o circuito analtico.
O circuito analtico todo o percurso, de amostras biolgicas que tem como finalidade
o estudo dos seus constituintes. Divide-se em trs fases distintas, sendo que a
primeira fase, a Fase Pr Analtica, seguida da Fase Analtica e por fim a Fase
Ps Analtica.
1
A urina aps a colheita deve ser enviada ao laboratrio num perodo mximo de duas horas. Se no for possvel h
que conserv-la no frio.
Diana Delgado
16
A Fase Pr Analtica inicia-se atravs do contacto entre o clnico e o doente, do qual

resulta por parte do mdico o pedido de anlises como meio auxiliar de diagnstico.
Aps o pedido que realizado recorrendo ao preenchimento de requisies,
dependendo do fluido corporal e da anlise pedida, o tcnico de anlises clnicas ou o
prprio paciente faz a colheita do fluido humano pretendido, sendo os mais frequentes
o sangue e a urina.
As colheitas de Sangue, no laboratrio Nova Era, so realizadas pelo tcnico de
anlises clnicas e efetuam-se na sala de colheitas do mesmo e nos postos de
colheitas. Seguidamente, realizado o transporte das amostras ao laboratrio.
Aps a chegada das amostras ao laboratrio, procede-se introduo de dados no
sistema informtico e preparam-se as amostras12.
Na Fase Analtica realiza-se a anlise propriamente dita das amostras em estudo e
medida que os resultados saem, so enviados para o sistema informtico utilizado
pelo laboratrio (sistema e-DeiaLab Slice).
Na Fase Ps Analtica realizam-se os clculos necessrios para que o tcnico possa
dar resultados provisrios e efetuar a validao tcnica. Seguidamente realiza-se a
validao mdica e por ltimo enviam-se os resultados definitivos ao utente ou ao
mdico requisitante, de forma a este estabelecer um diagnstico definitivo e realizar
uma proposta teraputica.
O Fluxo Intra Laboratorial consiste, na fase pr-analtica, na receo de produtos e
requisies, na introduo de dados pessoais e demogrficos e no pedido e
preparao da amostra. Na fase analtica, faz-se a execuo da anlise. Na fase psanaltica, realizam-se clculos para emisso de resultados provisrios, efetua-se a
validao tcnica, a validao mdica e o envio posterior de resultados definitivos.
Entende-se por validao, a confirmao, atravs de exames e apresentaes de
provas objetivas, de que os requisitos especficos, relativos a uma dada utilizao, so
cumpridos. A validao tcnica consiste em validar a execuo tcnica, os reagentes,
os equipamentos e as amostras. A validao mdica consiste em avaliar a coerncia
dos resultados entre si, a coerncia dos resultados ao longo do tempo e a coerncia
dos resultados com a informao clnica.
Diana Delgado
17
COLHEITAS
de extrema importncia, seja qual for a anlise pedida, que a requisio possua uma
identificao correta e inequvoca do doente, informao clnica relevante e que os
exames requisitados estejam descritos de forma clara.
A colheita deve ser realizada por pessoal habilitado e treinado a pessoas saudveis ou
doentes, sejam homens, mulheres ou crianas. A quantidade de amostra a colher e o
recipiente para a colocar dependem dos estudos que se vo efetuar e dos meios
tcnicos que se vo usar. O material utilizado deve ser adequado ao pedido e s
caractersticas do doente/utente.
COLHEITAS DE SANGUE
Para a colheita de amostras de sangue, ao contrrio do que pode acontecer com

outras amostras orgnicas (como a urina), imprescindvel a interveno do tcnico, o
que implica um contacto com o utente. Sendo importante que o tcnico lhe transmita
confiana e tranquilidade. Quando o utente uma criana, estes cuidados devem ser
reforados, uma vez que muito importante conquistar a sua confiana, antes da
realizao da colheita, para isso fundamental, explicar-lhe o que se vai suceder.
As
amostras
de sangue so,
normalmente,
colhidas
de veias.
Nalgumas
circunstncias pode recorrer-se a colheitas capilares (ps e dedos das mos), mais
usadas em recm-nascidos. Quando o utente no possui acessos venosos, pode
recorrer-se puno arterial.
COLHEITAS DE URINA
Na primeira urina da manh, o utente deve urinar quando se levanta para um

recipiente limpo cerca de 100 a 200ml. A urina deve ser enviada ao laboratrio no
mximo duas horas aps a colheita.
Uma amostra colhida aleatoriamente pode substituir a primeira urina da manh, no
entanto pode levar alterao de alguns resultados devido atividade fsica e
ingesto de alimentos. Pode estar diluda e dar falsos resultados negativos de
proteinria.
Uma anlise a uma urina fresca permite avaliar a capacidade de concentrao do rim
e, no caso de pesquisa de proteinria ortosttica ou teste de gravidez, fundamental
que seja a primeira urina da manh.
Diana Delgado
18
A colheita de urina da responsabilidade do utente, embora o tcnico possa ter de o

instruir sobre o procedimento. No entanto, em caso de doentes algaliados, a
responsabilidade do enfermeiro.
Relativamente urina de 24 horas cabe ao tcnico de anlises clnicas instruir o

utente como deve proceder para efetuar a colheita desta urina.
H doseamentos (p ex. as catecolaminas e o cido vanil-mandlico) que necessitam
de um conservante. o laboratrio que o fornece e dever ser colocado no recipiente
de recolha aps a primeira mico12.
CONSERVAO
Na conservao da amostra necessrio respeitar as normas de higiene e segurana,
o tempo e a temperatura adequados ao produto e ao tipo de exame. Deve-se guardar
o material potencialmente de risco em reas especiais e caso a amostra seja deixada
temperatura ambiente, esta exposio no deve ser excessiva. O frigorfico deve
estar sempre limpo e organizado.
TRANSPORTE
O transporte deve ser adequado s caractersticas da amostra, anlise e distncia
a percorrer. As amostras devem estar bem rolhadas e acondicionadas e a temperatura
de transporte deve ser o mais prximo possvel da temperatura de conservao.
Diana Delgado
19
BIOQUMICA
EQUIPAMENTOS ANALTICOS - MTODOS E TCNICAS UTILIZADOS
AUTION MAX AX-4280
Este equipamento usado para

a realizao de uma anlise
semiquantitativa e em alguns
parmetros
quantitativa
densidade, turbidimetria ao
pH, aos leuccitos, aos nitritos,
s protenas, glucose, aos
corpos
cetnicos,
ao
urobilinognio, bilirrubina e ao
sangue em amostras de urina
fresca.
Figura 4 - AUTION MAX AX-4280
um sistema completamente
automtico, com leitura de cdigo de barras, em que as amostras de urina so
pipetadas por uma agulha e posteriormente dispensadas gotas de urina, de modo
automtico, em tiras-teste (URIFLET S). necessrio para a determinao um volume
de 2.0 mL. As tiras-teste so lidas automaticamente pelo aparelho, no sendo
necessria a leitura visual, diminuindo assim erros de leitura por parte do tcnico. Este
aparelho tem a capacidade de analisar 225 amostras/hora e o tempo de reao das
tiras-teste de aproximadamente 60 segundos11.
Tal como referido anteriormente para a realizao desta anlise usam-se tiras reativas
que contm zonas absorventes, impregnadas com reagentes especficos para cada
analito.
Aquando da colocao da amostra de urina fresca nas reas das tiras, ocorre uma
reao qumica, que produz uma mudana de cor, a qual detetada pelo mtodo de
refrao dupla por duas lentes.
Na unidade tica, so irradiados sobre as zonas de reao da tira-teste, dois
comprimentos de onda diferentes (exceto na determinao do sangue que feita s
por um comprimento de onda). A luz refletida recebida por trs detetores e a
combinao dos diferentes comprimentos de onda diferente para cada parmetro.
Diana Delgado
20
Os resultados so automaticamente calculados e posteriormente impressos no

relatrio em termos de normal", "neg." pos." ou valores de concentrao. Tal como
os resultados obtidos por comparao visual de cor, cada valor impresso corresponde
a um intervalo de concentraes definido.
O princpio de cada um dos parmetros semiquantificados por este equipamento :
pH
A zona de teste contm os indicadores vermelho de metilo, fenolftalena e azul de
bromotimol, que reagem especificamente com os ies H+. Os valores de pH mais
frequentes da urina recente de indivduos saudveis variam entre 5 e 65.
Leuccitos
O teste revela a presena de esterases granulocitrias. Estas esterases decompem
um ster indoxlico em indoxil, que reage com um sal de diaznio, produzindo um
corante violeta. A presena de bactrias, tricomonas ou eritrcitos na urina no afeta a
reao5.
Nitritos
O teste baseado no princpio da prova de Griess e especfico para nitritos. A
reao revela a presena de nitritos e, indiretamente, de bactrias produtoras de
nitritos na urina, atravs de uma colorao rosa-vermelha da zona de teste. Uma
ligeira colorao rosa j indica bacteriria significativa5.
Protenas
O teste baseia-se no princpio do erro proteico de um indicador de pH. A reao
particularmente sensvel albumina. A quinina, quinidina, cloroquina, tolbutamida e
um pH elevado (at pH 9) no afetam o teste5.
Glucose
A determinao da glucose baseada na reao especfica da glucoseoxidase/peroxidase (mtodo GOD/POD). O teste independente do pH e da
gravidade especfica da urina e no afetado pela presena de corpos cetnicos5.
Corpos Cetnicos
O teste baseia-se no princpio da prova de Legal. A sensibilidade para o cido acetoactico superior da acetona5.
Diana Delgado
21
Pigmentos Biliares Urobilinognio

Um sal de diaznio estvel reage quase instantaneamente com o urobilinognio,
originando um corante azoico vermelho. O teste especfico para urobilinognio e no
est sujeito aos conhecidos fatores de interferncia da prova de Ehrlich5.
Bilirrubina
O teste baseia-se na ligao da bilirrubina a um sal de diaznio. Uma colorao
ligeiramente cor-de-rosa j constitui um resultado positivo, ou seja, patolgico. Outros
constituintes da urina produzem uma colorao amarela de intensidade varivel5.
Hemoglobina
A ao, semelhante peroxidase da hemoglobina e da mioglobina, catalisa
especialmente a oxidao do indicador atravs do perxido de hidrognio orgnico
contido na zona de teste, originando uma colorao azul-esverdeada5.
Densidade
Obtm-se medindo os ngulos de refrao da luz que passa por um prisma triangular
que contm a amostra de urina. D-se o nome de refractive index method.
Obtm-se pela seguinte frmula: SGx = (SGH SGL).(Kx KL) / (KH KL) + SGL
(frmula 1)
Em que:
SGH: densidade especfica da soluo baixa
SGL: densidade especfica da soluo alta
SGx: densidade especfica da amostra
KH: coeficiente de posio da soluo alta
KL: coeficiente de posio da soluo baixa
Kx: coeficiente de posio da amostra
O ndice de reflexo da luz muda de acordo com a temperatura da amostra, ento o
valor da densidade especfica corrigida pela seguinte frmula: SGt = SGx + (TSAM
TSTD) Ct(frmula 2)
Em que:
SGt: densidade especfica aps a compensao da temperatura
SGx: densidade especfica obtida pela frmula 1
TSAM: temperatura da amostra
TSTD: temperatura da soluo low
Diana Delgado
22
Ct: coeficiente de temperatura (SG 0.001/3C)

Se amostra de urina contiver uma elevada quantidade de glicose ou protenas, isto vai
interferir com a medio da densidade, ento esta depois corrigida usando o valor da
concentrao de glicose e de protenas obtido pela medio das tiras-teste. Usa ento
a seguinte frmula: SG = SGt CGLU CPRO
Em que:
SG: valor da densidade especfica aps a compensao da glucose e das protenas
SGt: densidade especfica obtida pela frmula 2
CGLU: valor correo da glicose
CPRO: valor correo das protenas5.
Turbidimetria
medida usando luz difusa. Obtm-se pela seguinte frmula: T = (SS / TS SW /TW)
/K
Em que:
T: nvel turvo
SS: luz dispersa sobre a quantidade da amostra
TS: luz transmitida sobre o nvel da soluo de lavagem
SW: luz dispersa sobre o nvel da soluo de lavagem
TW: luz transmitida sobre o nvel de soluo de lavagem
K: fator de coeficiente5.
Tom de cor da urina
So analisados simultaneamente 23 tons, medidos por diferentes comprimentos de
onda (635nm; 565nm; 430nm; 760nm). Com estes comprimentos de onda obtm-se o
tom e a matiz da urina.
A matiz da urina obtm-se pela seguinte lista: Y: reflectncia a 430 nm M: reflectncia
a 565 nm C: reflectncia a 635 nm r: reflectancia a 760 nm O tom da urina calculado
atravs da seguinte frmula:
a: coeficiente de correo.
O resultado depois definido em trs nveis: LIGHT, Normal ou DARK. (Claro, normal
e escuro) 5.
Diana Delgado
23
ANLISE DO SEDIMENTO URINRIO MICROSCPIO TICO

Para alm da anlise urina realizada pelo Aution Max AX 4280, realizou-se tambm
a anlise do sedimento das urinas frescas, isto , o registo da presena de glbulos
vermelhos, glbulos brancos, cristais, bactrias, clulas epiteliais, cilindros, entre
outros. Anlise essa que foi efetuada atravs da visualizao em microscpio tico do
sedimento urinrio.
No sedimento urinrio podem existir:
Clulas
Podem ser visualizadas clulas de descamao ou de esfoliao espontnea,
epiteliais do rim ou do trato urinrio baixo e ainda clulas do sangue circulante
(leuccitos e eritrcitos).
As clulas de descamao so mais abundantes na mulher, por contaminao vaginal,
mas tambm se encontram no homem, devido a contaminao uretral. Estas clulas
apresentam um citoplasma abundante e ncleo pequeno.
As clulas epiteliais so clulas mais pequenas de ncleo maior, que em pequeno
nmero refletem a renovao celular normal2.
Cilindros
Os cilindros so formaes gelatinosas a partir de protenas que se formam nos
tbulos dos nefrnios. So compostos por mucoprotenas presentes na urina na forma
solvel, que em situaes de estase urinria precipitam, tomando a forma do local
onde se formam, poro distal do nefrnio e nos tbulos coletores.
Os fatores que contribuem para a sua formao so: a concentrao elevada de
protenas, a presena de sais e o pH baixo.
Os cilindros podem classificar-se de acordo com a aparncia da matriz (hialina,
granulosa e cerosa), pelas incluses (eritrcitos, leuccitos e clulas epiteliais renais)
e pelos materiais embebidos na matriz (finamente divididos, grosseiramente e
fibrinosos) 2.
Cristais
Os cristais so geralmente formados devido ingesto insuficiente de gua, uma dieta
rica em protenas ou alteraes no pH da urina.
A presena de cristais na urina, principalmente de oxalato de clcio, fosfatos/uratos
amorfos entre outros no tem relevncia clnica.
Diana Delgado
24
Os nicos cristais com relevncia clnica so:

- Cristais de cistina
- Cristais de fosfato magnesiano
- Cristais de tirosina
- Cristais de bilirrubina
- Cristais de colesterol
A presena de cristais de cido rico, se em grande quantidade, tambm deve ser
valorizada.
As urinas cidas tm uma maior propenso para o aparecimento de cristais de uratos
(Ca2+, Mg2+ e K+), de cido rico, de oxalato de clcio, de cistina, de tirosina e de
leucina (sempre patolgicos).
Nas urinas alcalinas so mais frequentes os cristais de fosfatos (fosfato triplo de
magnsio, amnia e CaCO3) 2.
Sedimento Anormal
Um sedimento considerado anormal quando apresenta:
- + de 5 eritrcitos ou leuccitos;
- + de 3 cilindros hialinos;
- 1 cilindro granuloso;
- + de 10 bactrias por campo;
- presena de fungos;
- presena de parasitas;
- cristais patolgicos;
- grandes quantidades de cristais normais;
- grandes quantidades de muco2.
Diana Delgado
25
OLYMPUS AU400
O OLYMPUS AU400 um
aparelho automtico com leitura
de cdigo de barras que faz
determinaes em amostras de
soro e urina. O soro utilizado
obtm-se fazendo a colheita de
sangue
para
tubos
sem
anticoagulante e posteriormente
centrifugados. Os analisadores
Olympus
calculam
automaticamente
concentraes
as
de
todos
os
Figura 5 - OLYMPUS AU400
parmetros que realiza, sendo que o princpio da anlise depende do analito que se
vai medir. Na maioria das anlises d-se uma reao, que provoca uma alterao de
cor, a qual lida fotometricamente por leitura das suas absorvncias11.
TESTES REALIZADOS
Glucose
Os hidratos de carbono fornecem glucose ao organismo. Esta o monossacrido mais
importante existente no sangue: a concentrao ps-prandial de 5 mmol de glucose
por litro. O substrato de glucose um fornecedor energtico indispensvel, que
suporta a funo celular. A degradao da glucose ocorre durante a gliclise. As
determinaes de glucose so utilizadas no diagnstico e monitorizao das doenas
do metabolismo dos hidratos de carbono, incluindo diabetes mellitus, hipoglicemia
neonatal, hipoglicemia idioptica e carcinoma das clulas dos ilhus do pncreas.
Princpio da reao: Ensaio colorimtrico enzimtico
A glucose fosforilada pela hexoquinase, na presena de ATP e ies magnsio para
produzir glucose-6-fosfato e ADP. A glucose-6-fosfato desidrogenase oxida a
glucose-6-fosfato para gluconato-6-fosfato, com a reduo de NAD+ para NADH.
O aumento da absorvncia a 340nm proporcional concentrao de glucose na
amostra5.
Diana Delgado
26
Ureia
A determinao de ureia constitui o teste mais amplamente utilizado para avaliao da
funo renal. Este teste frequentemente usado em conjugao com a determinao
de
creatinina
para
diagnstico
diferencial
de
hiperuremia
pr-renal
(descompensao cardaca, desidratao, aumento do catabolismo das protenas),

hiperuremia renal (glomurulonefrite, nefrite crnica, rins poliqusticos, nefroesclerose,
necrose tubular) e hiperuremia psrenal (obstruo das vias urinrias).
A ureia o produto de degradao final do metabolismo das protenas e aminocidos.
No catabolismo das protenas, estas so fragmentadas em aminocidos e
desaminadas. A amnia formada neste processo sintetizada em ureia no fgado.
Esta a via catablica mais importante de eliminao do azoto em excesso no
organismo humano.
Princpio do teste: Teste cintico Ultravioleta
A ureia hidrolisada na presena de gua e urease para produzir amnia e dixido de
carbono. O amonaco produzido na primeira reao vai juntar-se com 2-oxoglutarato e
NADH, na presena de glutamato-desidrogenase para produzir glutamato e NAD+. A
reduo da absorvncia de NADH proporcional concentrao de ureia5.
Creatinina
No metabolismo muscular, a creatinina sintetizada endogenamente a partir de
creatina e de fosfato de creatina. Em condies de funcionamento renal normais, a
creatinina excretada por filtrao glomerular. As determinaes de creatinina so
executadas para fazer o diagnstico e a monitorizao das doenas renais agudas e
crnicas, bem como para monitorizao da hemodilise. As concentraes de
creatinina na urina podem ser utilizadas como valores de referncia para a excreo
de alguns analitos (albumina, -amilase).
Princpio da reao: Ensaio colorimtrico cintico.
A creatinina forma um composto amarelo alaranjado quando se junta cido pcrico
num meio alcalino. A alterao na absorvncia a 520/820nm proporcional
concentrao de creatinina na amostra5.
cido rico
O cido rico o produto final do metabolismo das purinas no organismo humano. As
determinaes de cido rico so usadas no diagnstico e tratamento de diversas
perturbaes renais e metablicas (incluindo insuficincia renal, gota, leucemia,
Diana Delgado
27
psorase, subnutrio ou outras doenas que provocam fraqueza geral) e no

tratamento de doentes a receber frmacos citotxicos.
o cido rico convertido, pela enzima uricase, em alantona e perxido de
hidrognio. O H2O2 formado reage com N,N-bis(4-sulfobutil)-3,5-dimetilanina, sal
dissdico e 4-aminofenazona na presena de peroxidase para produzir um cromforo
que lido bicromaticamente a 660/800 nm. A quantidade de corante formado
proporcional quantidade de cido rico na amostra5.
Colesterol
O colesterol um esteroide com um grupo hidroxilo secundrio na posio C3.
sintetizado em muitos tipos de tecido, mas sobretudo no fgado e parede intestinal.
Cerca de do colesterol formado por sntese e tem origem na dieta alimentar. As
determinaes do colesterol so utilizadas para a despistagem do risco aterognico e
no diagnstico e tratamento de doenas que envolvem nveis elevados de colesterol,
bem como de perturbaes de metabolismo lipdico e lipoproteico.
Princpio da reao: Teste colorimtrico enzimtico
Os steres de colesterol de qualquer amostra so hidrolisados pela colesterol
esterase. O colesterol livre que produzido oxidado pela colesterol oxidase. Na
presena de fenol e de peroxidase produz-se um cromforo. O corante vermelho de
quinoneimina medido espectrofotometricamente a 540/600 nm5.
HDL Colesterol
As lipoprotenas de alta densidade (HDL High density lipoproteins) so responsveis
pelo transporte inverso do colesterol das clulas perifricas para o fgado. Aqui, o
colesterol transformado em cidos biliares que so excretados para os intestinos
atravs das vias biliares. clinicamente importante monitorizar o colesterol HDL no
soro, pois existe uma correlao inversa entre as concentraes sricas de colesterol
HDL a o risco de doenas cardiovasculares. Quando a concentrao mais elevada
protege contra as cardiopatias coronrias, as concentraes reduzidas de colesterol
HDL, sobretudo associadas a um nvel elevado de triglicridos, aumentam o risco
cardiovascular.
O anticorpo antilipoprotena -humana (reagente 1) liga-se s lipoprotenas, exceto
HDL (LDL;VLDL e quilomicras). Os complexos antignio-anticorpo formados
Diana Delgado
28
bloqueiam as reaes enzimticas quando adicionado o reagente 2. O colesterol

HDL quantificado atravs da presena de um sistema de cromognio enzimtico5.
LDL-Colesterol
As lipoprotenas de baixa densidade (LDL-Low Density Lipoproteins) desempenham
um papel fulcral na formao e desenvolvimento da aterosclerose e, especialmente da
esclerose coronria. As LDLs derivam das lipoprotenas de muita baixa densidade
(VLVL Very Low Density Lipoproteins) ricas em triglicridos atravs da ao de
vrias enzimas lipolticas, sendo sintetizadas no fgado. A eliminao das LDL do
plasma ocorre sobretudo atravs das clulas do parnquima heptico, por meio de
recetores especficos das LDL. As concentraes elevadas de LDL no sangue e o
aumento do seu tempo de permanncia, associados a um aumento de taxa de
modificao biolgica, resultam na destruio da funo endotelial e numa captao
superior do colesterol LDL pelo sistema moncitos/macrfagos e pelas clulas do
msculo liso nas paredes dos vasos sanguneos. A maior parte do colesterol
armazenado nas placas aterosclerticas deriva das LDL. Entre todos os parmetros
isolados, o colesterol LDL tem um valor preditivo clnico muito importante em relao
aterosclerose coronria. Por conseguinte, as teraputicas que visam a reduo lipdica
tm como principal alvo a reduo do colesterol LDL, que resulta num melhoramento
da funo endotelial e na preveno da aterosclerose, reduzindo a sua progresso e
evitando a rutura das placas.
Todas as lipoprotenas no LDL, so decompostas atravs da reao da colesterol
esterase e colesterol oxidase. O perxido de hidrognio produzido decomposto pela
enzima catalase. O LDL pode ento ser quantificado quando se adiciona um reagente
que vai inativar a enzima catalase5.
Triglicridos
Os triglicridos so steres do glicerol-lcool tri-hidratado com 3 cidos gordos de
cadeia longa. So parcialmente sintetizados no fgado e parcialmente ingeridos com
os alimentos.
A determinao dos triglicridos utilizada no diagnstico e tratamento de doentes
com diabetes mellitus, nefrose, obstruo heptica, alteraes do metabolismo dos
lpidos e inmeras outras doenas endcrinas.
Diana Delgado
29
Este teste baseia-se numa srie de reaes enzimticas conjuntas. Os triglicridos

so hidrolisados para produzir glicerol e cidos gordos. O glicerol hidrolisado atravs
de ATP na presena de glicerol quinase para produzir glicerol-3-fosfato. Este, por sua
vez, oxidado para produzir H2O2 e dihidroxiacetona fosfato. O perxido de hidrognio
reage na presena de peroxidase para produzir um cromforo que lido a 660/800
nm. O aumento da absoro proporcional ao contedo de triglicridos na amostra5.
Aspartato-aminotransferase (AST)
A aspartato-aminotransferase (glutamato-oxaloacetato-transaminase) pertence ao
grupo das transaminases que catalisam a converso dos aminocidos para os
correspondentes -cetocidos por transferncia de grupos amina; eles tambm
catalisam o processo reverso. A aspartato-amino-transferase encontra-se amplamente
distribuda pelos tecidos humanos. Embora as concentraes mais elevadas se
registem no msculo cardaco, tambm possvel detetar uma atividade significativa
no crebro, fgado, mucosas gstricas, tecido adiposo, musculatura esqueltica e rins.
A AST est presente tanto no citoplasma como nas mitocndrias das clulas. Em
casos que envolvem leses tissulares ligeiras, a forma predominante de AST a
libertada pelo citoplasma, com uma menor quantidade libertada pelas mitocndrias.
Nos casos de leses mais graves, observa-se libertao de uma maior quantidade da
enzima da mitocndria. Nveis elevados de transaminases podem indicar enfarte do
miocrdio, hepatopatia, distrofia muscular e leses orgnicas.
Princpio da reao: Teste Ultravioleta cintico
A aspartato aminotransferase catalisa a transaminao de aspartato e 2-oxoglutarato,
formando-se L-glutamato e oxolacetato. A adio de fosfato piridoxal mistura da
reao garante a atividade cataltica mxima da AST. O oxalacetato reduzido em
L-malato pela enzima malato desidrogenase, enquanto o NADH convertido em NAD+.
A reduo na absorvncia devida ao consumo de NADH medida a 340 nm e
proporcional atividade de AST na amostra5.
Alanina-aminotransferase (ALT)
A alanina-aminotransferase (glutamato-piruvato-transaminase) pertence ao grupo das
transaminases que catalisam a interconverso dos aminocidos e dos -cetocidos
por transferncia de grupos amina. Embora a maior parte da atividade se verifique no
fgado, tambm possvel detetar uma atividade significativa nos rins, corao,
musculatura esqueltica, pncreas, bao e tecido pulmonar. Nveis elevados de
transaminases podem indicar enfarte do miocrdio, hepatopatia, distrofia muscular e
Diana Delgado
30
leses orgnicas. S muito raramente que se observam aumentos sricos das

atividades da ALT, salvo no caso da doena do parnquima heptico, dado que a ALT
uma enzima mais especfico do fgado do que o AST.
Princpio da reao: Teste Ultravioleta cintico
O ALT transfere o grupo amino da alanina para o 2-oxoglutarato para formar piruvato e
glutamato. O piruvato participa na reao catalisada pelo LDH com o NADH para
produzir lactato e NAD+. A reduo da absorvncia devido ao consumo de NADH
medida a 340 nm e proporcional atividade de ALT na amostra5.
Gama-Glutamiltransferase (GGT)
A gama-glutamiltransferase utilizada no diagnstico e monitorizao das doenas
hepatobiliares. A atividade enzimtica da GGT , muitas vezes, o nico parmetro
onde se observa um aumento dos valores quando se analisam essas doenas e um
dos indicadores mais sensveis conhecidos.
A gama-glutamiltransferase tambm um teste de despistagem sensvel para
alcoolismo oculto. Observou-se um aumento da atividade de GGT no soro dos doentes
que necessitam de medicao a longo prazo com fenobarbital e fenitoina.
A alterao na absorvncia a 410/480 nm deve-se formao de 5-amino2-benzoato
e diretamente proporcional atividade de GGT na amostra5.
Fosfatase alcalina (ALP)

A fosfatase alcalina no soro consiste em quatro gentipos estruturais: o tipo fgadoosso-rim, o tipo intestinal, o tipo placentrio e a variante de clulas germinais. Ocorre
nos osteoblastos, hepatcitos, leuccitos, rins, bao, placenta, prstata e intestino
delgado. O tipo fgado-osso-rim particularmente importante.
Ocorre um aumento da atividade da fosfatase alcalina em todas as formas de
colestase, particularmente na ictercia obstrutiva. Tambm se encontra elevada em
doenas do sistema esqueltico, como a doena de Paget, hiperparatiroidismo,
raquitismo e osteomalacia, assim como nas fraturas e nos tumores malignos. Por
vezes, observa-se um aumento considervel na atividade da fosfatase alcalina em
crianas e jovens. provocada pelo aumento da atividade dos osteoblastos a seguir a
crescimento sseo acelerado.
Princpio da reao: Ensaio colorimtrico
A atividade da ALP determinada atravs da medio da taxa de converso p-nitrofenilfosfato em p-nitroferol na presena de ies magnsio, de zinco e de 2-amino2Mestrado em Anlises Clnica
Diana Delgado
31
metil1-propanol como aceitador de fosfato a pH 10,4. A absorvncia medida a

410/480 nm e diretamente proporcional atividade de ALP na amostra5.
Bilirrubina total
A bilirrubina um composto orgnico formado pelo sistema reticuloendotelial durante a
destruio normal e anormal dos glbulos vermelhos. As determinaes da bilirrubina
so utilizadas no diagnstico das doenas hepticas, na deteo da anemia hemoltica
e para avaliar os diferentes graus de ictercia.
Princpio da reao: Ensaio Fotomtrico e colorimtrico
Um sal diazico estabilizado reage com a bilirrubina conjugada e com a bilirrubina no
conjugada para formar azobilirrubina. A absorvncia a 540 nm deste composto
proporcional concentrao de bilirrubina total5.
Bilirrubina Direta
A bilirrubina produzida durante a degradao normal e anormal dos eritrcitos no
sistema reticuloendotelial. As determinaes de bilirrubina so utilizadas no
diagnstico de doenas hepticas, na deteo da anemia hemoltica e na avaliao do
grau de gravidade da ictercia.
Princpio da reao: Ensaio Fotomtrico e colorimtrico
Um sal diazico estabilizado (DPD) liga-se diretamente bilirrubina direta (conjugada)
num meio cido para formar azobilirrubina. A absorvncia lida 570 nm e
proporcional concentrao de bilirrubina direta na amostra5.
Protenas totais
As protenas plasmticas so sintetizadas sobretudo no fgado, clulas plasmticas,
gnglios linfticos, bao e medula ssea. No decorrer da doena, tanto a concentrao
de protenas totais como a percentagem representada por fraes individuais pode
apresentar desvios significativos dos valores normais.
A hipoproteinemia pode ser causada por doenas e perturbaes como perda de
sangue, caquexia aftosa, sndroma nefrtico, queimaduras graves, sndroma de
reteno de sal e Kwashiorkor (deficincia proteica aguda).
Pode observar-se hiperproteinemia em casos de desidratao grave e doenas como
o mieloma mltiplo. As alteraes da percentagem relativa de protenas plasmticas
podem ser provocadas por uma modificao da percentagem de uma frao proteica
plasmtica. Muitas vezes, nestes casos, a quantidade de protenas totais no sofre
quaisquer tipos de alterao.
Diana Delgado
32
A razo A/G vulgarmente utilizado como ndice de distribuio das fraes de

albumina e globulina. Podem observar-se alteraes marcadas desta razo no caso
de cirrose heptica, glomerulonefrite, sndroma nefrtico, hepatite aguda, lpus
eritematoso e ainda em determinadas inflamaes agudas e crnicas. As
determinaes das protenas totais so utilizadas no diagnstico e tratamento de uma
srie de doenas que envolvem o fgado, os rins ou a medula ssea, bem como outras
perturbaes metablicas ou nutricionais.
Princpio da reao: Ensaio fotomtrico
Ies de uma soluo alcalina, reagem com as protenas e polipeptdeos para produzir
um complexo de cor violeta. A absorvncia a 540/660 nm diretamente proporcional
concentrao de protenas na amostra5.
Ferro Srico
A concentrao de ferro no corpo humano , normalmente, cerca de 40-50mg Fe/Kg;
as mulheres, tipicamente, tm menor quantidade de ferro do que os homens. A
maioria do ferro est contida em compostos necessrios para a atividade metablica
normal.
O compartimento de ferro funcional inclui cerca de 30 mg Fe/Kg como ferro
hemoglobnico contido nos glbulos vermelhos circulantes e uma quantidade adicional
de 6-7mg Fe/Kg presente em muitos tecidos, na mioglobina, numa variedade de
enzimas hmicos (citocrmios, catalases, peroxidases) e em enzimas no hmicos
(ribonucleotdeo redutase, metaloflavoprotenas, etc.). O ferro de transporte consiste
numa pequena frao (<0,5%) do ferro corporal total, em trnsito para satisfazer as
necessidades dos tecidos. Est ligado transferrina no plasma e nos lquidos
extracelulares. O ferro restante (5-6mg Fe/Kg nas mulheres, 10-12 mg Fe/Kg nos
homens) o ferro de armazenamento, na forma de ferritina e hemossiderina,
principalmente nos hepatocitos e nos macrfagos do fgado, medula ssea, bao e
msculo, disponvel como uma reserva prontamente disponvel no caso de perdas
sanguneas.
O ferro plasmtico e a saturao da transferrina (razo entre o ferro plasmtico e a
capacidade total de fixao do ferro), constituem uma medida do fornecimento de ferro
aos tecidos. Aps o ferro dos depsitos se esgotar, o ferro srico diminui; uma
saturao da transferrina <16% frequentemente um critrio de eritropoiese deficiente
em ferro. Em contraste, o ferro plasmtico e a saturao da transferrina no esto
sempre elevados, como na fase inicial da sobrecarga transfusional em ferro, quando o
ferro dos depsitos est elevado dentro dos macrfagos, embora a saturao da
Diana Delgado
33
transferrina possa aumentar com a sobrecarga parenquimatosa em ferro. A

interpretao da saturao da transferrina complicada pelas flutuaes substanciais
circadianas de ferro plasmtico, assim como pelas variaes dia a dia> 30%. Para
alm disso, o ferro plasmtico diminui na infeo, inflamao, neoplasias malignas e
deficincia de ascorbato, mas aumenta na ingesto oral de ferro, nas anemias
aplsica e sideroblstica, eritropoiese ineficaz e doena heptica.
Princpio da reao: Ensaio fotomtrico
Num meio cido, o ferro ligado transferrina decompe-se em ies de ferro livres e
apotransferrina. O cido hidroclrico e o ascorbato de sdio convertem os ies de ferro
no
estado
ferroso.
Os
ies
ferrosos
reagem
depois
com
TPTZ
[2,4,6-Tri-(2-pyndyl)-5-triazina] para formar um complexo de cor azul que pode ser

medido bicromaticamente a 600/800 nm. O aumento da absorvncia diretamente
proporcional quantidade de ferro ligado transferrina registada5.
CK
A creatina-quinase (CK) uma enzima dimrica que existe em quatro formas
diferentes: uma isoenzima mitocondrial e as isoenzimas citoslicas CK-MM (tipo
msculo esqueltico), CK-BB (tipo crebro) e CK-MB (tipo miocdio).
A determinao da atividade da CK e respetivas
isoenzimas um elemento
importante no diagnstico e monitorizao do enfarte do miocrdio e miopatias, tais

como, a distrofia muscular progressiva de Duchenne.
Aps leso do miocrdio, semelhana do que acontece com o enfarte agudo do
miocrdio, a CK libertada pelas clulas lesadas. Em casos recentes pode-se
encontrar uma atividade de CK aumentada cerca de 4 horas aps o enfarte. A
atividade de CK atinge o seu mximo aps 12 a 24 horas, voltando ao valor normal ao
fim de 3 a 4 dias.
Princpio da reao: Teste ultravioleta/cintico
A CK catalisa reversivelmente a transferncia de um grupo de fosfatos do fosfato de
creatinina para ADP, para formar creatinina e ATP como produtos. Com a interveno
de outras reaes em que participam as enzimas HK, G6P-DH, vai haver formao de
NADPH e 6-fosfoglutonato. O aumento da absorvncia a 340/660 nm, devido
formao de NADPH diretamente proporcional atividade de CK na amostra5.
Diana Delgado
34
Lactato Desidrogenase (LDH)

As delimitaes da LDH so realizadas para o diagnstico e tratamento de
hepatopatias como hepatite viral aguda, cirrose e carcinoma metasttico do fgado,
cardiopatias como enfarte do miocrdio e tumores renais e pulmonares.
Princpio da reao: Teste UV/Cintico
O LDH catalisa a oxidao do lactato a piruvato juntamente com a reduo de NAD+ a
NADH. O aumento de NADH medido a 340 nm e diretamente proporcional
atividade enzimtica na amostra5.
Amilase
Estas enzimas, capazes de cindir as ligaes 1-4 do amido, so produzidas pelo
pncreas e pelas glndulas salivares. Passam para o soro de cada vez que uma
obstruo dos canais ou uma necrose celular aumenta a sua concentrao no espao
intersticial periglandular.
A amlase srica eliminada no soro em algumas horas, principalmente por via
urinria.
Princpio da reao: Ensaio Fotomtrico
O substrato CNPG3 reage diretamente com a alfa-amilase e liberta 2-cloro4-nitrofenil.
O resultante da absorvncia a 410 nm diretamente proporcional atividade de alfaamilase da amostra5.
Transferrina
A transferrina medeia a troca de ferro entre os tecidos corporais. Uma vez absorvido o
ferro liga-se transferrina plasmtica. Cerca de 80% do ferro em trnsito (cerca de
24mg Fe/dia) captado pelos precursores eritroides na medula ssea; a maioria deste
(17mg Fe/dia) torna-se ferro hemoglobnico nos glbulos vermelhos circulantes. Os
restantes 20% do ferro transportado pela transferrina incluem: a troca de ferro com os
hepatocitos (5mg Fe/dia), o movimento entre os compartimentos plasmtico e
extravasculares da transferrina (cerca de 3mg Fe/dia), a troca entre a transferrina
extravascular e os tecidos parenquimatosos (cerca de 2mg Fe/dia) e a troca externa
limitada de ferro atravs das perdas obrigatrias e absoro de ferro do tubo digestivo
(cerca de 1e 1,5mg Fe/dia, para os homens e mulheres, respetivamente).
um indicador das reservas corporais de ferro muito menos sensvel do que a ferritina
plasmtica. , geralmente, medida nos laboratrios clnicos como capacidade total de
fixao do ferro. A transferrina pode aumentar com a depleo do ferro das reservas e
diminuir com a sobrecarga em ferro, mas no um ndice consistente de confiana
Diana Delgado
35
porque os seus nveis so alterados por outros fatores. A inflamao, a infeo, as

neoplasias malignas, a doena heptica, o sndrome nefrtico e a m-nutrio tambm
deprimem os nveis de transferrina, enquanto a gravidez e os contracetivos orais
aumentam os seus nveis.
Princpio da reao: Ensaio Imuno-turbidimtrico
A transferrina humana reage especificamente com anticorpos transferrina antihumanos para produzir agregados insolveis. A absoro destes agregados
proporcional concentrao de transferrina na amostra5.
Ferritina
A ferritina uma protena major de armazenamento, composta de 24 subunidades.
Existe em, praticamente, todas as clulas. Constitui uma reserva acessvel de ferro
para a sntese dos compostos funcionais contendo ferro e um meio de sequestrar o
ferro numa forma solvel, aparentemente no txica. especialmente abundante nas
clulas com papel especializado na sntese de compostos contendo ferro (precursores
eritroides) e no metabolismo e armazenamento do ferro (macrfagos e hepatocitos).
O seu catabolismo pode resultar na digesto do invlucro proteico com reutilizao do
ferro do core ou em converso para hemossiderina, um composto amorfo de
armazenamento, insolvel em gua, com maior contedo em ferro e menor turnoverdo
que a ferritina.
Concentraes diminudas de ferritina plasmtica tm grande valor na deteo da
deficincia em ferro. As concentraes de ferritina plasmtica diminuem com a
depleo dos depsitos de ferro. As nicas situaes conhecidas que podem diminuir
as concentraes de ferritina plasmtica, independentemente de uma diminuio dos
depsitos de ferro, so o hipotiroidismo e a deficincia de ascorbato. Concentraes
aumentadas de ferritina plasmtica podem indicar aumento dos depsitos de ferro,
mas o aumento da ferritina plasmtica pode ser devido a uma variedade de situaes,
independentemente do ferro corporal. A ferritina plasmtica uma protena de fase
aguda, sendo o aumento da sua sntese uma resposta inespecfica, parte dos efeitos
sistmicos da inflamao. O seu aumento pode ser devido a: febre, infees agudas,
artrite reumatoide e outras doenas inflamatrias crnicas. As leses agudas e
crnicas do fgado, assim como de outros tecidos ricos em ferritina, pode aumentar a
ferritina plasmtica como um processo inflamatrio ou por libertao das ferritinas
tissulares das clulas parenquimatosas lesadas.
Diana Delgado
36
medida a diminuio da intensidade da luz transmitida (aumento da absoro)

atravs de partculas suspensas na soluo como resultado de complexos formados
durante a reao antignio-anticorpo5.
Magnsio
O magnsio e o potssio so importantes caties intracelulares. O Mg+ um co-fator
de muitos sistemas enzimticos. Consequentemente, todas as reaes enzimticas
dependentes de ATP requerem Mg2+ como co-fator do complexo ATP-magnsio.
Aproximadamente 69% dos ies magnsio esto armazenadas nos ossos. Os
restantes fazem parte do metabolismo intermedirio, estando cerca de 70% presentes
na forma livre, ao passo que os outros 30% se encontram ligados a protenas
(especialmente albumina), aos citratos, ao fosfato e a outros formadores de
complexo. O nvel srico de Mg2+ mantido constante dentro de limites muito estreitos
(0,65-1,05 mmol/l). A regulao tem lugar principalmente por via renal, especialmente
atravs da poro ascendente da ansa de Henle.
Este ensaio utilizado para diagnosticar e monitorizar a hipomagnesemia (deficincia
de magnsio) e hipermagnesemia (excesso de magnsio).
Numerosos estudos demonstraram uma correlao entre a deficincia de magnsio e
as alteraes da hemostase do clcio, potssio e fosfato que esto associadas a
perturbaes cardacas, como o caso das arritmias ventriculares que no podem ser
tratadas atravs de teraputicas convencionais, da sensibilidade aumentada
digoxina, dos espasmos da artria coronria e da morte sbita. Entre outros sintomas
concomitantes incluem-se as perturbaes neuromusculares e neuropsiquitricas. A
hipermagnesemia observada na insuficincia renal aguda e crnica, nos casos de
excesso de magnsio e na libertao de magnsio no espao intracelular.
Princpio da reao: Mtodo Fotomtrico
Mtodo direto no qual os ies magnsio formam um complexo colorido com azul de
xilidil numa soluo fortemente bsica. A cor medida a 520/800 nm e proporcional
concentrao de magnsio na amostra5.
Clcio
O teor de clcio num adulto corresponde ligeiramente a mais de 1 kg (25000 mmol),
ou seja, cerca de 2% do peso corporal. Deste, 99% est presente sob a forma de
hidroxiapatite de clcio nos ossos e menos de 1% est presente no ECS (espao
extracelular) ou ICS (espao intracelular) extrasseo. O nvel de clcio no soro no ECS
(aprox. 100 mmol) est em equilbrio dinmico com a frao rapidamente permutvel
Diana Delgado
37
de clcio sseo. Os ies de clcio afetam a capacidade de contrao do corao e da

musculatura esqueltica e so essenciais para o funcionamento do sistema nervoso.
Alm disso, os ies de clcio desempenham um papel importante na coagulao
sangunea e na mineralizao ssea. No plasma, o clcio est ligado numa grande
proporo s protenas (cerca de 40%), estando 10% presente sob a forma de
complexos inorgnicos e 50% como clcio livre (ionizado). O equilbrio do clcio no
organismo regulado pela hormona da paratiroide (PTH), calcitriol (CT) e calcitonina.
O teste usado para o diagnstico e monitorizao da hipocalcemia (deficincia de
clcio) e hipercalcemia (excesso de clcio) no soro. O sintoma caracterstico da
hipocalcemia o ttano latente ou manifesto e osteomalacia.
A hipocalcemia causada pela ausncia ou deficincia do funcionamento da
paratiroide ou deficincia da sntese da vitamina D. A hipercalcemia provocada por
um aumento da mobilizao de clcio no sistema esqueltico (osteoporose) ou por um
aumento da absoro intestinal. A maior parte dos casos so causados pelo
hiperparatiroidismo primrio (pHPT) ou metstases sseas do carcinoma da mama,
prstata ou tiroide e carcinoma brnquico.
A grande importncia da determinao do clcio na urina reside na diferenciao entre
hipercalciria e hipocalciria e no esclarecimento de nefrolitase.
Princpio da reao: Teste Fotomtrico
Baseia-se na reao de ies clcio com Arsenazo III para formar um complexo de cor
roxa intensa. A absorvncia do complexo medida a 660/700 nm. O aumento da
absorvncia da mistura diretamente proporcional concentrao de clcio da
amostra5.
Fsforo
88% da quantidade de fsforo existente no organismo situa-se no osso, sob a forma
de fosfato de clcio, como a apatite Ca2+ [Ca3(PO4)2]32-. A restante quantidade est
envolvida no metabolismo intermdio dos hidratos de carbono e em substncias
fisiologicamente importantes como fosfolpidos, cidos nucleicos e ATP. O fsforo
encontra-se no sangue sob a forma de fosfato inorgnico e de cido fosfrico
organicamente ligado. A fraca quantidade de fsforo orgnico extracelular encontra-se
quase exclusivamente sob a forma de fosfolpidos. A razo fosfato/clcio no sangue
de cerca de 6:10. Um aumento do nvel de fsforo provoca uma reduo do nvel de
clcio. O mecanismo influenciado por interaes entre a paratormona e a vitamina D.
Diana Delgado
38
O hipoparatiroidismo, a intoxicao por vitamina D e a insuficincia renal associada a

uma reduo da taxa de filtrao glomerular do fosfato provocam hiperfosfatemia. A
hipofosfatemia ocorre no raquitismo, no hiperparatiroidismo e no sndroma de Fanconi.
Princpio da reao: Ensaio UV Fotomtrico
O fsforo inorgnico reage com molibdato para formar um complexo heteropolicido. A
absorvncia lida a 340/380 nm e diretamente proporcional concentrao de
fsforo inorgnico na amostra5.
Albumina
A albumina uma protena sem hidratos de carbono, que constitui 55-65% das
protenas plasmticas totais. Liga-se e solubiliza diversos compostos como, p. ex.,
bilirrubina, clcio e cidos gordos de cadeia longa. Alm disso, a albumina capaz de
ligar os ies txicos de metais pesados bem como um grande nmero de produtos
farmacuticos. Por este motivo que as concentraes de albumina mais baixas no
sangue tm um efeito significativo sobre a farmacocintica.
A hiperalbuminemia tem pouco significado em termos de diagnstico, salvo em caso
de desidratao. A hipoalbuminemia ocorre em muitas doenas, sendo causada por
diversos fatores: sntese debilitada quer em resultado de uma doena heptica, quer
devido a uma diminuio da ingesto de protenas; aumento do catabolismo devido a
leses tissulares (queimaduras graves) ou inflamao; m absoro de aminocidos
(doena de Crohn); proteinria em consequncia de sndroma nefrtico; perda de
protenas
atravs
das
fezes
(doena
neoplsica).
Nos
casos
graves
de
hipoalbuminemia, a concentrao mxima de albumina no plasma de 2,5 g/dl.

Devido reduzida presso osmtica do sangue, a gua atravessa os capilares
sanguneos e penetra no tecido (edema). A determinao da albumina permite a
monitorizao da suplementao diettica num doente controlado e funciona tambm
como um teste excelente de funo heptica.
A albumina vai reagir com verde de bromocresol para formar um complexo corado, a
absorvncia deste complexo medida a 600/800 nm e proporcional concentrao
de albumina5.
Imunoglobulina A (IgA)
A Imunoglobulina A (IgA) um anticorpo. Representa 15-20% das imunoglobulinas do
soro humano. No homem, mais de 80% da IgA ocorre sob a forma monomrica e est
presente no sangue nesta forma.
Diana Delgado
39
A IgA a imunoglobulina predominante em secrees: saliva, lgrima, leite, mucosas

do trato gastrointestinal, trato respiratrio e genitourinrio. Nestas secrees ela unese a um componente secretor (70.000 daltons), formando a IgA secretora. Esta
composta por 2 unidades ( dimrica) ligadas a uma cadeia J unida na sua poro FC
no componente secretor. A funo desse componente proteger a molcula das
enzimas hidrolticas (destrutivas).
As principais funes da IgA reside na ativao das reaes inflamatrias,
desempenha um papel importante na proteo do trato respiratrio, genitourinrio e
gastrointestinal contra infees. Indivduos com dfice de IgA secretria tm tendncia
para sofrer com mais frequncia de infees das mucosas e doenas autoimunes.
Indivduos com ausncia de IgA sofrem de problemas reumticos e linfomas com uma
incidncia superior.
Princpio da reao: Ensaio Imuno-Turbidimtrico
A IgA humana vai reagir especificamente com uma soluo antissoro com anticorpos
anti-IgA para produzir agregados insolveis. A absorvncia proporcional
concentrao de IgA na amostra5.
Imunoglobulina G (IgG)
A Imunoglobulina G (IgG) um anticorpo. uma imunoglobulina monomrica simples
de 150.000 daltons, cadeias pesadas tipo G, que perfaz 80% das imunoglobulinas do
organismo. Esta imunoglobulina particularmente importante na defesa a longo prazo
do organismo contra infees, j que apresenta uma resposta mais lenta e mais
sustentada que a IgM a um estmulo antignico primrio. Contudo os nveis aumentam
rapidamente e cedo quando o organismo exposto novamente ao mesmo estmulo
antignico. a nica imunoglobulina que passa a placenta e por isso importante na
defesa das crianas contra as infees.
A IgG humana vai reagir especificamente com uma soluo antissoro com anticorpos
anti-IgG para produzir agregados insolveis. A absorvncia proporcional
concentrao de IgG na amostra5.
Imunoglobulina M (IgM)
Esta Imunoglobulina perfaz aproximadamente 10% do conjunto de imunoglobulinas.
Apresenta uma estrutura pentamrica, sendo que as cadeias pesadas individuais tm
um peso molecular de aprox. 65.000 daltons e a molcula completa tem um peso de
970.000! As 5 cadeias so ligadas entre si por pontes dissulfeto e por uma cadeia
Diana Delgado
40
polipeptdica inferior chamada de cadeia J. A IgM encontrada principalmente

intravascularmente, sendo uma classe de anticorpos "precoces" (so produzidas
agudamente nas fases agudas iniciais das doenas que desencadeiam resposta
humoral). uma protena que no atravessa a placenta (por ser grande) e inclui os
anticorpos naturais, por exemplo, grupo sanguneo AB0, Rh e anticorpos para IgG, por
exemplo, fatores reumatoides. A funo essencial da IgM na resposta imunitria a
aglutinao de elementos considerados patognicos e a ativao da via complementar
clssica.
A IgM humana vai reagir especificamente com uma soluo antissoro com anticorpos
anti-IgM para produzir agregados insolveis. A absorvncia proporcional
concentrao de IgM na amostra5.
PCR
A protena C reativa a protena clssica da fase aguda das reaes inflamatrias.
sintetizada pelo fgado e constituda por cinco cadeias polipeptdicas idnticas que
formam um anel com cinco membros, com um peso modelar de 120000 daltons. A
PCR o mais sensvel dos reagentes da fase aguda e as suas concentraes
aumentam rapidamente durante os processos inflamatrios. A PCR complexada ativa
o sistema de complemento, com incio em C1p. Depois, a PCR inicia a opsonizao e
a fagocitose das clulas invasoras, mas a sua funo principal ligar e desintoxicar
substncias txicas endgenas produzidas em resultado de leses tecidulares.
Os ensaios da PCR so utilizados para detetar processos inflamatrios sistmicos
(alm de alguns tipos de inflamao, como a SLE e a colite ulcerosa); avaliar o
tratamento de infees bacterianas com antibiticos; detetar infees intrauterinas
com amniurese prematura concomitante; diferenciar entre as formas ativa e inativa de
doenas com infees concomitantes, por exemplo, em doentes com SLE ou colite
ulcerosa; monitorizar terapeuticamente doenas reumticas e avaliar a teraputica
anti-inflamatria; determinar a presena de complicaes ps-operatrias numa fase
inicial, por exemplo, no caso de feridas infetadas, trombose ou pneumonia, e distinguir
entre infeo e rejeio do transplante de medula ssea.
A PCR reage especificamente com anticorpos anti-PCR para produzir agregados
insolveis. A absorvncia proporcional concentrao de PCR na amostra5.
Diana Delgado
41
Fator Reumatoide (RF)

Os RF so anticorpos dirigidos contra determinantes antignicos no fragmento Fc da
IgG. Geralmente so anticorpos IgG. utilizado para o diagnstico da artrite
reumatoide.
O RF reage especificamente com a IgG em partculas de latex para produzir
agregados insolveis. A absorvncia proporcional concentrao de RF na
amostra5.
Antiestreptolisina O (TASO)
A estreptolisina O uma hemolisina produzida pelos Streptococcus do grupo A. Este
streptococcus do grupo A responsvel por infees bacterianas que provocam
doenas como febre reumtica aguda, pneumonia, faringite aguda, entre outras.
Os anticorpos antiestreptolisina O reagem especificamente com latex revestido com
estreptolisina O para produzir agregados insolveis. A absorvncia proporcional
concentrao de ASO na amostra5.
Apolipoprotena A1
As apolipoprotenas so os constituintes proteicos das lipoprotenas.
Estas classificam-se conforme a sua densidade de flutuao ultracentrfuga. A
apolipoprotena A1 o principal constituinte proteico das lipoprotenas de alta
densidade ( high-density lipoproteins HDL).
A apolipoprotena A1 ativa a enzima lecitina-colesterol-aciltransferase (LCAT), que
catalisa a esterificao do colesterol, aumentando a capacidade de transporte lipdico
das lipoprotenas. Os nveis de apolipoprotena A1 aumentam durante a gravidez,
doena heptica e aps a administrao de estrognios (p.ex., contracetivos orais). Os
nveis de apolipoprotena A1 diminuem na hipo--lipoproteinemia (p.ex, doena de
Tangier), colestase, spsis e aterosclerose.
Princpio da reao: Ensaio imunoturbidimtrico
A APO A1 reage especificamente com anticorpos anti-APO A1 para produzir
agregados insolveis. A absorvncia proporcional concentrao de APO A1 na
amostra5.
Diana Delgado
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Figura 6 Ensaio Imunoturbidimtrico
Apolipoprotena B
O fgado sintetiza lipoprotenas de muito baixa densidade (VLDL), as quais contm
principalmente triglicridos e colesterol. Na presena de lipoprotena lipase, os
triglicridos so hidrolisados, formando-se partculas LDL com uma grande proporo
de colesterol. A apolipoprotena B o principal constituinte das LDL. Cerca de um
tero das partculas LDL fornecem colesterol s clulas perifricas. Os outros dois
teros so metabolizados pelo fgado. A captao de LDL em todos estes tecidos
ocorre atravs dos recetores LDL. Os nveis de apolipoprotena B aumentam na
gravidez, hipercolesterolemia, defeitos dos recetores LDL, obstrues biliares,
hiperlipidmia de tipo II e sndroma nefrtico. Os nveis de apolipoprotena B diminuem
durante a doena heptica, - lipoproteinemia, spsis e administrao de
estrognios.
A determinao conjunta da apolipoprotena A1/apolipoprotena B, assim como o
clculo da razo apolipoprotena B: apolipoprotena A1, podem refletir um distrbio do
metabolismo lipdico e o risco de contrair aterosclerose ou doena coronria,
proporcionando deste modo uma excelente mais valia na determinao clssica do
colesterol HDL/LDL. Um nvel elevado de apolipoprotena A-1 (HDL) associado a um
nvel baixo de apolipoprotena B (LDL), correlacionam-se melhor com um risco baixo
para estas doenas.
A APO B reage especificamente com anticorpos anti-B para produzir agregados
insolveis. A absorvncia proporcional concentrao de B na amostra5.
Ionograma (sdio, potssio, e cloro)
Os eletrlitos afetam a maioria dos processos metablicos. Servem para manter a
presso osmtica e a hidratao de vrios fluidos corporais. Regulam as funes
Diana Delgado
43
cardaca e muscular e mantm o pH do organismo. Tambm se encontram como

co-fatores nas reaes enzimticas.
Princpio da reao: Mdulo ISE
O mdulo ISE integra eltrodos de membrana ter-coroa para sdio e potssio e uma
membrana de PVC para o cloro. desenvolvido um potencial eltrico de acordo com a
equao de Nernst para um io especfico. O potencial eltrico convertido em
voltagem e seguidamente nas concentraes de ies da amostra5.
Protenas na Urina
As determinaes das protenas na urina so usadas no diagnstico e tratamento de
doenas, como as doenas renais ou cardacas, ou perturbaes da tiroide, que se
caracterizam pela presena de proteinria ou albuminria.
A urina formada por ultra filtrao do plasma atravs da parede capilar glomerular.
As protenas com uma massa molecular relativa > que 40.000 dalton so praticamente
todas retidas, ao passo que quantidades mais pequenas passam facilmente na
filtrao glomerular.
Atravs da formao de um complexo vermelho com uma absorvncia mxima a 470
nm. A determinao baseada na mudana da absorvncia. Um complexo azul
prpura formado a 600nm. A absorvncia deste complexo diretamente
proporcional concentrao de protenas na amostra5.
Microalbuminria
Uma evidncia clnica da existncia de nefropatia o aparecimento de nveis baixos e
anormais de albumina na urina (20 g/min ou 30 mg/dia). um indicador importante
para a monitorizao da funo renal em pessoas diabticas (tipo I e II).
A albumina reage especificamente com anticorpos antialbumina para produzir
agregados insolveis. A absorvncia destes agregados proporcional concentrao
de albumina na amostra5.
Racio Proteinria/Creatinria
Esta determinao utilizada em alguns casos em que a colheita de urina de 24 horas
difcil de ser realizada, usando-se uma amostra aleatria de urina e procedendo-se
determinao individual da proteinria e da creatinria nessa mesma amostra.
Diana Delgado
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A concentrao de protenas na urina vem nas unidades de gramas/Litro, enquanto a

creatinina vem em miligramas/decilitro. Ento o primeiro passo passar a
concentrao das protenas para mg/dL, as mesmas unidades da creatinina. De
seguida dividir o valor da concentrao das protenas totais pelo valor da
concentrao de creatinina. O valor final do rcio dado em mg/dL.
Diana Delgado
45
IMUNOLOGIA
ADVIA CENTAUR
O ADVIA CENTAUR um aparelho

automtico com leitura de cdigo de
barras que faz determinaes em
amostras de soro. O soro utilizado
obtm-se fazendo a colheita de
sangue
para
tubos
anticoagulante
centrifugados.
Este
calcula
posteriormente
analisador
automaticamente
concentraes
sem
de
todos
as
os
parmetros que realiza.
Figura 7 - ADVIA CENTAUR
A tecnologia utilizada por este equipamento a quimioluminescncia em combinao

com a tecnologia de imunoensaio, sendo que a luz produzida pela reao indica a
quantidade de analito da amostra11.
A quimiluminescncia uma reao qumica que emite energia sobre a forma de luz
utilizando para isso como marcador o ster Acridnio (marcador direto no necessita
da adio de um catalisador ou substrato para se oxidar, no necessita de uma
incubao adicional para amplificar o sinal e efetua uma emisso rpida e intensa de
luz).
A ster Acridnio (EA) oxidada pelo perxido de hidrognio e a luz emitida
maximizada pela alterao de meio cido para meio bsico. Este marcador pode unirse covalentemente aos anticorpos permitindo por isso a utilizao complementar das
duas tecnologias.
Utilizam-se tambm partculas paramagnticas PMP - (cristais de xido de ferro que
so atrados por um campo magntico), estas partculas unem-se covalentemente
tanto a antignios como a anticorpos na fase slida, proporcionando uma superfcie de
reao muito maior 50x mais do que os tubos revestidos. So utilizadas para separar
o material ligado do no ligado.
Diana Delgado
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Imunoensaios utilizados: Reao Sandwich, Reao de Competio antignio ou

anticorpo marcado e Captura de Anticorpo.
Reao Sandwich
1 - Anticorpos ligados a ster de acridnio adicionam-se amostra, unindo-se ao
analito (antignio) que queremos medir;
2 - Adicionam-se as partculas paramagnticas unidas a anticorpos, que se vo unir
aos complexos antignio-anticorpo anteriormente formado;
3 - O EA no ligado separado e aspirado;
4 - O cido e a base so adicionados para iniciar a reao quimiluminescente e a
concentrao calculada de acordo com a luz emitida.
Reao de Competio antignio marcado

1 O antignio marcado com EA compete com o antignio da amostra por uma
quantidade limitada de stios de ligao ao anticorpo, o qual est unido
covalentemente a PMP;
2 Depois da incubao, a mistura de reao exposta a um campo magntico, em
que o EA no ligado separado e retirado;
3 O cido e base so adicionados para iniciar a reao quimiluminescente e a
concentrao calculada inversamente luz emitida.
Reao de Competio anticorpo marcado

1 O antignio unido a PMP compete com o antignio da amostra por stios limitados
da ligao no anticorpo marcado com EA;
2 Aps incubao, a mistura de reao exposta a um campo magntico, em que o
EA no ligado separado e retirado;
3 O cido e base so adicionados para iniciar a reao quimiluminescente e a
concentrao calculada inversamente luz emitida.
Captura de Anticorpo
Este mtodo utilizado quando o analito que se pretende medir um anticorpo, usa
um anticorpo especificamente dirigido ao anticorpo da amostra.
1 Adicionam-se amostra PMP unidas a um anticorpo especfico de IgM humana
(anticorpo anti IgM humana), assim os anticorpos da amostra so separados de outras
substncias que possam interferir;
Diana Delgado
47
2 Adiciona-se o antignio marcado com EA, que tem afinidade para os anticorpos da
amostra;
3 A frao no ligada separa-se da ligada e a concentrao medida atravs de
uma relao direta com a emisso de luz11.
TESTES REALIZADOS
Imunoglobulina E Total
A hipersensibilidade imediata de tipo I que, na classificao de Gell e Coombs, agrupa
a anafilaxia e as doenas atpicas, caracteriza-se por uma produo excessiva de
imunoglobulinas do tipo IgE (E de eritema). Estas IgE sensibilizam os mastcitos e os
granulcitos basfilos que, sob a sua influncia, rompem os grnulos, libertando os
mediadores implicados na reao alrgica. O doseamento das IgE totais permite
avaliar este fenmeno8.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur IgE Total um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em
dois locais que recorre tecnologia quimiluminomtrica direta, a qual utiliza
quantidades constantes de dois anticorpos para a IgE. O primeiro anticorpo, no
Reagente Lite, um anticorpo anti-IgE humana de cabra marcada com ster de
acridina. O segundo anticorpo, na Fase Slida, um anticorpo anti-IgE humana do
rato, que est ligado por covalncia a partculas paramagnticas5.
Folatos
O cido flico (ReGIu) consiste em 3 componentes bsicos: um derivado pteridina, um
resduo -aminobenzico e um resduo de cido L-glutmico. Antes do PteGIu
desempenhar o seu papel de coenzima, tem de ser reduzido nas posies 7 e 8 para
cido dihidroflico (H2PteGlu) e, depois, para cido 5,6,7,8-tetrahidroflico (H4PteGlu);
1 a 6 resduos adicionais de cido glutmico devem, ento, ser adicionados, atravs
de ligaes -peptdicas metade L-glutamato (H2PteGlun).
Os folatos esto amplamente distribudos na natureza em forma reduzida, os
poliglutamatos. A enzima conjugase, existente na mucosa intestinal, remove
progressivamente os resduos de cido glutmico de forma que os mono e diglutamatos so absorvidos pelo jejuno proximal. Parte do folato plasmtico
excretado na blis e reabsorvido no jejuno. Uma produo considervel do folato do
organismo est envolvida nesta circulao entero-heptica, pelo que, distrbios do
Diana Delgado
48
trnsito intestinal, que diminuem a quantidade absorvida, facilmente, induzem carncia

de folato.
As fontes mais ricas em folatos so vegetais (espinafre, alface, brcolos, vagens),
frutas (banana, melo e limo), cogumelos e protenas animais (fgado e rins). So
vitaminas extremamente termolbeis, ou seja, a cozedura por mais de 15 minutos
destri os folatos. As necessidades mnimas dirias so de 50g, como as reservas do
organismo so de cerca de 5000g, pode desenvolver-se anemia megaloblstica aps
cerca de 3 a 4 meses de dieta carente.
As principais causas de deficincia de folatos so: ingesto diminuda (dieta pobre falta de vegetais, alcoolismo, idade avanada, 1 a no de vida), absoro prejudicada
(circuitos intestinais curtos, sprue tropical e no tropical, doena celaca, enterite
regional, defeitos congnitos da absoro de folato, drogas - contracetivos orais,
sulfasalazina,
barbitricos,
fenitona,
lcool),
utilizao
prejudicada
(drogas
antagonistas do cido flico - metotrexato, triantereno, trimetoprim, pirimetamina,

lcool - deficincia enzimtica congnita), necessidades aumentadas (gravidez,
primeiro ano de vida, hipertiroidismo, doena hemoltica crnica, neoplasia, dermatite
esfoliativa, hepatopatia) e perdas (dilise).
Os nveis do folato srico e eritrocitrio so usados para avaliar o status do folato. O
nvel de folato srico um indicador de ingesto recente de folato. O nvel de folato
eritrocitrio um melhor indicador dos depsitos de folato e a sua diminuio pode
indicar uma deficincia prolongada em folato.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Folato um imunoensaio competitivo que recorre tecnologia
quimiluminomtrica direta. O folato na amostra do doente compete com o folato
marcado com ster de acridina no Reagente Lite por uma quantidade limitada de
protena de ligao ao folato marcado com biotina. A protena de ligao ao folato com
biotina liga-se avidina, que est ligada por covalncia a partculas paramagnticas
na Fase Slida. No ensaio ADVIA Centaur Folato, a amostra previamente tratada
para libertar o folato das protenas de ligao endgenas na amostra5.
Vitamina B12
A vitamina B12, tambm chamada cianocobalamina (CN-Cbl), uma molcula
complexa formada por 2 pores major, um grupo consistindo em 4 anis pirrlicos
reduzidos - ncleo corrina - ligado em ngulos retos a um nucletido invulgar. Os anis
pirrlicos ligam-se a um tomo central de cobalto. O nucletido consiste numa
base-5,6 dimetilbenziminazol - ligada ribose fosfato.
Diana Delgado
49
Esta vitamina produzida por bactrias que habitam o tubo digestivo de animais, e
existe, primariamente, em alimentos de origem animal. A Cbl produzida no intestino
grosso humano no aproveitada para absoro. As protenas animais so a principal
fonte diettica de Cbl (carne de rgos parenquimatosos, peixe, msculo animal,
produtos do leite e gema de ovo). A Cbl , excecionalmente, bem armazenada nos
tecidos nas suas formas coenzimticas.
A absoro faz-se na forma de coenzimas (5'desoxiadenosilcobalamina - Ado-Cbl - e
metilcobalamina - Me-Cbl), inespecificamente ligados s protenas, sendo o pH
gstrico baixo essencial para a sua libertao. Na segunda poro do duodeno, as
proteases pancreticas degradam as protenas, permitindo a ligao da vitamina B12
ao fator intrnseco (Fl), produzido pelas clulas da mucosa gstrica. A mucosa do leo
terminal responsvel pela absoro do complexo vitamina B12-FI, atravs de
recetores especficos.
As principais causas de carncia de vitamina B12 so: ingesto diminuda
(vegetarianismo estrito), absoro prejudicada (anemia perniciosa, gastretomia total,
deficincia congnita em fator intrnseco, doenas do leo terminal, parasitoses
competitivas, etc.) e transporte/utilizao prejudicada (deficincia de transcobalamina
II, defeito metablicos congnitos do metabolismo da Cbl, drogas-xido nitroso, etc.).
Na ausncia de vitamina B12, o folato vai-se transformando em 5-metiltetrahidrofoiato,
intil para a sntese do DNA, o que compromete a diviso celular em todos os tecidos
do organismo, sendo responsvel por anemia megaloblstica e manifestaes
neurolgicas. A deficincia de vitamina B12 clinicamente indistinguvel da deficincia
de folato.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur VB12 um imunoensaio competitivo que recorre
tecnologia quimiluminescente direta na qual a vitamina B12 nas amostras dos doentes
compete com a vitamina B12 marcada com ster de acridina no Reagente Lite por
uma quantidade limitada de fator intrnseco purificado, o qual est ligado por
covalncia a partculas paramagnticas na Fase Slida. O ensaio utiliza Agente
Libertador (hidrxido de sdio) e DTT para libertar a vitamina B12 das protenas de
ligao endgenas nas amostras e utiliza cobinamida para evitar uma nova ligao
depois de ser adicionada Fase Slida amostra5.
Diana Delgado
50
Insulina
Segregada pelas clulas dos ilhus de Langerhans pancreticos, a insulina a nica
hormona hipoglicemizante. Favorece o armazenamento e utilizao da glicose pelo
fgado, a captao da glicose pelas clulas perifricas e estimula a lipognese.
A secreo da insulina regulada por um mecanismo complexo em que intervm a
glicemia, o glucagon e a hormona do crescimento.
Quando a produo de insulina deficiente, a glicose acumula-se no sangue e na
urina, destruindo as clulas por falta de abastecimento8.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur Insulina um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em
dois locais que recorre tecnologia quimioluminomtrica direta, a qual utiliza
quantidades constantes de dois anticorpos. O primeiro anticorpo, no Reagente Lite,
um anticorpo monoclonal anti-insulina de rato marcado com ster de acridina. O
segundo anticorpo, na Fase Slida, um anticorpo monoclonal anti-insulina de rato
que est ligado por covalncia a partculas paramagnticas5.
Anticorpo Anti HBs
O vrus da hepatite B est presente no sangue dos indivduos infetados sob a forma de
partculas de Dane. Estas partculas so constitudas por um invlucro contendo o
antignio de superfcie HBs.
A cura desta hepatite anunciada pela seroconverso do antignio HBe, o antignio
HBs desparece pouco depois dando lugar a anticorpos anti-HBs de classe IgM,
substitudos pouco depois por anticorpos de glasse IgG que persistem durante muitos
anos aps a cura, por vezes de forma isolada.
Este anticorpo encontra-se tambm presente em indivduos imunizados pela vacina da
hepatite B8.
Princpio do Teste
O ensaio Anti-HBs ADVIA Centaur um imunoensaio em sanduche que utiliza
tecnologia de quimiluminometria direta. Os subtipos do HBsAg esto ligados por
ligaes covalentes a partculas magnticas de ltex na Fase Slida. No Reagente
Lite, os subtipos do HBsAg esto marcados com ster de acridnio. A partir do poo
auxiliar, so adicionadas partculas no magnticas de ltex5.
Diana Delgado
51
Antignio HBs
partculas de Dane. Estas partculas so constitudas por um invlucro que contm
o antignio de superfcie HBs. Este aparece seis semanas aps a contaminao, duas
a quatro semanas antes da ictercia. Em casos de cura desaparece antes do 3 ms. A
sua permanncia para alm de seis meses um sinal de portador assintomtico8.
Princpio do Teste
O ensaio HBsAg ADVIA Centaur um imunoensaio do tipo sanduche que utiliza a
tecnologia direta, quimioluminomtrica. As partculas de ltex no-magnticas so
adicionadas a partir do poo auxiliar. O Reagente Lite, acondicionado numa
embalagem de reagentes auxiliares ReadyPack, contm um anticorpo monoclonal
(rato) anti-HBsde captura biotinilado e um anticorpo monoclonal (rato) anti-HBs
marcado com ster de acridnio. O HBsAg nos complexos da amostra com os
anticorpos e as partculas de latx magnticas revestidas com streptavidina na fase
slida, capturam os complexos do anticorpo HBsAg5.
Estradiol (E2)
O estradiol o principal estrognio segregado durante o ciclo ovrico pelos folculos
de Graaf. responsvel pela manuteno dos tecidos do organismo, garantindo a
elasticidade da pele e dos vasos sanguneos e a reconstituio ssea, entre outras
funes.
Numa escala mais baixa, a produo assegurada pelas glndulas supra renais, os
testculos, e pela converso perifrica dos andrognios.
Os recetores de estrognios encontram-se em numerosos tecidos (ossos, glndulas
mamarias, fgado, endomtrio). A sntese e a libertao do estradiol so
estreitamente controladas pelo complexo hipotlamo-hipofisrio, pelo intermdio da
LHRH, da LH e da FSH.
Nos casos de suspeita de hipofertilidade tanto no homem como na mulher, a avaliao
da taxa de estradiol, associada aos doseamentos de LH, de FSH e de progesterona,
permite apreciar o funcionamento do eixo hipotlamo-hipofisogonadal e determinar o
nvel da sua integridade.
Na altura das estimulaes ovarianas, com vista reproduo medicamente assistida,
o doseamento do estradiol permite seguir e apreciar a maturao folicular. O
doseamento do estradiol, completado com o da LH e da FSH, permite afirmar o
diagnstico de menopausa.
Diana Delgado
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Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur eE2 utiliza um formato de ensaio competitivo. O estradiol
endgeno contido numa amostra libertado das suas protenas de ligao por um
agente libertador. Depois, um anticorpo monoclonal antiestradiol marcado com ster
de acridina adicionado para ligar o estradiol disponvel. Por fim, uma fase slida de
captao do derivado de estradiol adicionada reao para competir com o estradiol
para ligao do anticorpo marcado com acridina. Aps a lavagem, os reagentes cidos
e de base so distribudos para iniciar a reao quimioluminescente5.
Hormona Foliculo-estimulante - FSH
A FSH uma glicoprotena com peso molecular de, aproximadamente, 30 000
Daltons. A estrutura da FSH mostra a existncia de 2 subunidades polipptdicas e
, unidas por ligaes no covalentes.
A FSH produzida de forma pulstil pelas clulas gonadotrficas da hipfise anterior
sob controlo do hipotlamo. assegurado um retrocontrolo negativo principalmente
pela inibina, cuja produo estimulada pela FSH.
No homem, a FSH exerce a sua funo em algumas clulas do tubo seminifero, as
clulas de Sertoli, determinando a produo de ABP (Androgen Binding Protein) e da
inibina.
Na mulher em idade frtil, a FSH em sinergia com a LH, intervm diretamente no
desenvolvimento dos folculos ovarianos, aumentando a sua produo esteroideia e
determina a ovulao. Alm disso, a FSH estimula algumas clulas foliculares (clulas
da granulosa) levando produo de inibina. No incio da menopausa, a produo de
inibina (hormona produzida pelos testculos no homem, e pelos folculos ovarianos na
mulher) diminui e observa-se um aumento importante do nvel srico de FSH.
O doseamento da FSH, associado ou no ao da LH, um parmetro essencial da
explorao
da
funo
de
amenorreica,
taxas
elevadas
demonstraro
um
hipogonadismo primrio e taxas baixas devem levar pesquisa de um hipogonadismo

secundrio.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur FSH um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em dois
locais que recorre tecnologia quimioluminomtrica direta, a qual utiliza quantidades
constantes de dois anticorpos que tm especificidade em relao molcula de FSH
intacta. O primeiro anticorpo, no Reagente Lite, um anticorpo policlonal anti-FSH de
ovelha marcada com ster de acridina. O segundo anticorpo, na Fase Slida, um
Diana Delgado
53
anticorpo monoclonal anti-FSH de rato que est ligado por covalncia a partculas
paramagnticas5.
Hormona Luteinizante - LH
A LH uma glicoprotena com peso molecular de, aproximadamente, 30 000 Daltons.
A estrutura da LH mostra a existncia de 2 subunidades polipptdicas e , unidas
por ligaes no covalentes.
A LH produzida de forma pulstil pelas clulas gonadotrficas da hipfise anterior
sob controlo do hipotlamo. Uma regulao negativa assegurada pelas hormonas
esteroides, cuja produo estimulada pela LH: testosterona no homem e o estradiol
na mulher.
No homem, a LH exerce a sua funo em clulas esteroidognicas (clulas de Leydig)
do testiculo, estimulando assim a produo de testosterona.
Na mulher em idade frtil, a LH em sinergia com a FSH, intervm diretamente no
desenvolvimento dos folculos ovarianos, aumentando a sua produo esteroidiana e
determina a ovulao. Na menopausa, a produo de estradiol diminui provocando o
aumento da taxa srica de LH.
O doseamento da LH, associado ou no ao da FSH, um parmetro essencial da
explorao
da
funo
de
amenorreica,
taxas
elevadas
demonstraro
um
hipogonadismo primrio e taxas baixas devem levar pesquisa de um hipogonadismo

secundrio.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur LH um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em dois
locais que recorre tecnologia quimioluminomtrica direta, a qual utiliza quantidades
constantes de dois anticorpos que tm especificidade em relao subunidade beta
da molcula de LH intacta. O primeiro anticorpo, no Reagente Lite, um anticorpo
monoclonal anti-LH de rato marcado com ster de acridina. O segundo anticorpo, na
Fase Slida, um anticorpo monoclonal anti-LH de rato que est ligado por covalncia
a partculas paramagnticas5.
Progesterona
A progesterona uma das principais hormonas esteroides segregadas pelo ovrio
feminino. Os seus ndices aumentam depois da ovulao para alcanar o seu ponto
mximo durante a fase luteinica.
Diana Delgado
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Em caso de gravidez constitui-se um corpo amarelo secretor de progesterona

indispensvel manuteno da gravidez, que substitudo cerca da 10 semana pela
secreo placentria.
A prova da progesterona constitui uma ajuda no diagnstico de disfunes ovricas.
No caso de suspeita de uma gravidez extrauterina, a associao da prova da
progesterona e da HCG permite acrescentar sensibilidade ao diagnstico.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur Progesterona um imunoensaio competitivo que recorre
tecnologia quimiluminescente direta. A progesterona na amostra do doente liga-se a
um anticorpo monoclonal antiprogesterona de rato marcado com ster de acridina no
Reagente Lite. O anticorpo no ligado liga-se a um derivado da progesterona, ligado
por covalncia a partculas paramagnticas na Fase Slida5.
Prolactina
A prolactina uma hormona polipeptdica de massa molecular de cerca de 23 000
daltons e composta por 198 aminocidos. Sintetizada pelo lbulo anterior da hipfise,
a prolactina segregada de forma pulstil (todos os 20 minutos) e segue um ritmo
circadiano, sendo os nveis mais elevados atingidos durante o sono. Pode apresentarse sob diferentes formas: forma de monmero ou de dmero.
Vrios fatores controlam a secreo de prolactina. Fisiologicamente, a secreo de
prolactina controlada pelo hipotlamo. A Dopamina e o GABA so os principais
inibidores. A TRH (thyrotropin releasing hormone) e a VIP (vasoactive intestinal
peptide) estimulam a secreo de prolactina. Fatores exgenos como o exerccio
fsico, o stress, o jejum, a hipoglicmia, podem ser responsveis por um aumento da
taxa desta hormona.
O principal papel fisiolgico da prolactina na mulher d-se no inicio e durante o
aleitamento. Est tambm implicada na maturao folicular e no desenvolvimento dos
ovcitos.
No homem, tem ao ao nvel das gnadas.
A hiperprolactinmia foi reconhecida como uma causa de infertilidade no homem e na
mulher. As trs formas de hiperprolactinmia so a iatrognica, associada
administrao de alguns medicamentos (antidepressivos, tranquilizantes), a
hiperprolactinmia primria associada a tumores hipofisrios e a hiperprolactinmia
secundria (hipertiride, insuficincia renal).
Diana Delgado
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Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur Prolactina um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em
dois locais que recorre tecnologia quimioluminomtrica direta, a qual utiliza
quantidades constantes de dois anticorpos. O primeiro anticorpo, no Reagente Lite,
um anticorpo policlonal antiprolactina de cabra marcado com ster de acridina. O
segundo anticorpo, na Fase Slida, um anticorpo monoclonal antiprolactina de rato
que est ligado por covalncia a partculas paramagnticas5.
Testosterona
No homem, a testosterona o principal andrognio segregado pelas clulas
testiculares de Leydig. A sua secreo regulada pelas hormonas gonadotrficas
hipofisrias sobre as quais a testosterona exerce um retrocontrolo negativo.
Na mulher, dois teros da testosterona resultam da transformao perifrica da
delta-4-androstenediona, a qual segregada metade pelos ovrios e metade pelas
suprarrenais.
A testosterona circula no plasma ligada a uma protena especfica: a TEBG
(Testosterone Estradiol Binding Globulin).
Doseia-se em caso de hipogonadismo (termo mdico para um defeito no sistema
reprodutor que resulta na diminuio da funo das gnadas) no homem e de
hirsutismo (definido como o crescimento excessivo de pelos em reas anatmicas
caractersticas de distribuio masculina) na mulher.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur Testosterona um imunoensaio competitivo que recorre
tecnologia quimiluminescente direta. A testosterona na amostra do doente compete
com a testosterona marcado com ster de acridina no Reagente Lite por uma
quantidade limitada de anticorpo policlonal antitestosterona de coelho ligado ao
anticorpo monoclonal anticoelho de rato, que est ligado a partculas paramagnticas
na Fase Slida. O ensaio utiliza Agente Libertador de Testosterona para libertar a
testosterona ligada das protenas de ligao endgenas na amostra5.
TSH
A hormona tirotrfica ou hormona estimulante da tiroide (TSH) uma glicoprotena
com um peso molecular de 28 000 a 30 000 daltons. constituda por duas
sub-unidades peptdicas e ligadas de forma no covalente. A subunidade que
contm 92 cidos aminados, similar s da FSH, da LH e da hCG. A subunidade ,
Diana Delgado
56
que contm 112 cidos aminados, determina a especificidade biolgica e imunolgica

da hormona. A estas subunidades peptdicas esto ligados resduos glicolisados.
A produo de TSH assegurada pelas clulas tirotrficas da hipfise anterior. A sua
secreo na circulao sangunea segue um ritmo circadiano que atinge o mximo
entre a uma e as duas horas da manh.
A TSH constitui o principal fator de estimulao da glndula da tiroide que determina a
produo das hormonas T3 e T4. Em contrapartida, estas hormonas exercem um
retrocontrolo da hipfise anterior que trava a secreo de TSH. A secreo desta
hormona est, alm disso, sob o controlo do sistema nervoso central pelo intermdio
de um neuropptido hipotalmico, a TRH, e de neuromediadores como a
somatostatina ou a dopamina.
No caso de hipertiroidismo, a concentrao de TSH diminui fortemente, podendo
mesmo ser indetetvel. Em raras formas de hipertiroidismo de origem alta, o
retrocontrolo negativo das hormonas tiroideias no produz efeitos e a taxa de TSH no
diminui.
Nos casos de hipotiroidismo primitivo franco, a concentrao da TSH sempre
nitidamente superior ao normal, acompanhada de uma diminuio das taxas das
hormonas da tiroide.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur TSH3-Ultra um ensaio da terceira gerao que emprega
anticorpo monoclonal anti-FITC ligado por covalncia a partculas paramagnticas, um
anticorpo monoclonal de captura anti-TSH marcado com FITC e um traador composto
por um ster de acridina prprio e um anticorpo mAb anti-TSH conjugado com
albumina de soro bivino (BSA) para deteo quimioluminescente5.
Triiodotironina - T3
A triiodotironina (T3) uma hormona proveniente em parte da secreo tiroidiana
(20%) e em maioria da desiodao perifrica da T4 em T3 (80%). Sendo a T3
fisiologicamente muito mais ativa que a T4, contribui de forma importante para a
manuteno da eutiroidia (estado em que h um nvel normal de hormonas tiroideias).
A T3 circula de forma livre (0.3%) ou ligada a protenas portadoras (>99,7%) tais como
a TBG (thyroxine binding globulin), a albumina ou a pr-albumina. A forma livre a
frao fisiologicamente ativa e parece ter mais influncia sobre o controlo metablico.
O doseamento da T3 deve ser utilizado conjuntamente com outros testes, tais como o
doseamento da TSH e da T4 assim como o exame clnico do paciente.
Diana Delgado
57
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur T3 um imunoensaio competitivo que recorre tecnologia
de quimiluminescncia direta. A T3 na amostra do doente compete com a T3 anloga,
que est ligada por covalncia a partculas paramagnticas na Fase Slida, por uma
quantidade limitada de anticorpo monoclonal anti-T3 de rato marcado com ster de
acridina no Reagente Lite5.
T3 Livre
A T3 livre (FT3) no contribui para o diagnstico do hipotiroidismo. Esta hormona tem
um papel diagnstico especialmente importante nos seguintes casos: Hipertiroidismo,
seguimento de pacientes Hipotiroideus tratados com Tiroxina e com antitiroideus e no
Sindroma de diminuio da T3.
O doseamento da T3 Livre deve ser utilizado conjuntamente com outros testes, tais
como o doseamento da TSH e da T4 Livre assim como o exame clnico do paciente.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur FT3 um imunoensaio competitivo que recorre tecnologia
quimiluminescente direta. A FT3 na amostra compete com uma T3 anloga, que est
ligada por covalncia a partculas paramagnticas na Fase Slida, por uma quantidade
limitada de uma combinao de anticorpos monoclonais anti-T3 de rato marcados com
ster de acridina no Reagente Lite5.
Tiroxina - T4
A tiroxina (T4) uma hormona proveniente da secreo tiroidiana e cuja maior parte
est ligada a protenas portadoras (99,9%), principalmente a TBG (thyroxine binding
globulin). A frao livre considerada como a parte ativa da hormona.
A determinao da T4 uma ajuda explorao da funo tiroidiana, caracterizado
por uma diminuio da concentrao em caso de hipotiroidismo e de um aumento da
concentrao durante um hipertiroidismo.
Este doseamento deve estar igualmente associado aos doseamentos de TSH e da T3
assim como o exame clnico do paciente.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur T4 um imunoensaio competitivo que recorre tecnologia
de quimioluminescente direta. A T4 na amostra do doente compete com a T4, que est
ligada por covalncia a partculas paramagnticas na Fase Slida, por uma quantidade
Diana Delgado
58
limitada de anticorpo monoclonal anti-T4 de rato marcado com ster de acridina no

Reagente Lite5.
T4 Livre
A frao da T4 que permanece livre (FT4) considerada como a parte ativa da
hormona. Os mecanismos da regulao da funo tiroideia agem diretamente na
concentrao desta frao livre, o que explica a sua independncia relativa em relao
concentrao em protenas portadoras.
No hipertiroidismo, a concentrao em T4 livre aumenta, enquanto no hipotiroidismo a
concentrao est geralmente mais baixa.
Os pacientes sob hormonoterapia substitutiva (LT4) podem apresentar um aumento da
T4 livre mesmo se clinicamente eutiroideus.
Este doseamento deve estar igualmente associado aos doseamentos de TSH e o
exame clnico do paciente.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur FT4 um imunoensaio competitivo que recorre tecnologia
quimiluminescente direta. A FT4 na amostra do doente compete com a T4 marcada
com ster de acridina no Reagente Lite por uma quantidade limitada de anticorpo
policlonal anti-T4 biotinilado de coelho. A anti-T4 marcada com biotina est ligada
avidina, que est ligada por covalncia a partculas paramagnticas na Fase Slida5.
Anticorpo Anti-Tiroglobulina
A tiroglobulina uma glicoprotena e a principal constituinte do coloide da tiroide
(carcinoma diferenciado), com um peso de 660 kD. A tiroglobulina o suporte da
sntese, do armazenamento e da libertao das hormonas tiroideias.
A presena de anticorpos antitiroglobulina constituem a prova de vrias afees na
tiroide8.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur Anti-Tg um imunoensaio competitivo que recorre
tecnologia de quimiluminescente direta. O autoanticorpo da tiroglobulina na amostra
do doente compete com o anticorpo policlonal anti-Tg humano ligado a um anticorpo
policlonal anti-humano de cabra ligado por covalncia a partculas paramagnticas na
Fase Slida por uma quantidade limitada de tiroglobulina humana marcada com ster
de acridina no Reagente Lite5.
Diana Delgado
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Anticorpo Anti-Tiroperoxidase
A tireoperoxidase (TPO) a principal enzima envolvida no procedimento de sntese
das hormonas da tiroide, uma glicoprotena, expressa apenas em clulas foliculares
da tiroide. E o principal antignio na partcula microssomal da tiroide.
Os anticorpos antitireoperoxidase esto presentes em 4 a 9% dos adultos normais, em
57-74% dos pacientes com doena de Graves, em 99-100% dos pacientes com
doena de Hashimoto ou mixedema idioptico, em 19% dos casos de tumores
diferenciados de tiroide e, raramente, em pacientes com tiroidite subaguda. A
prevalncia de positividade em pacientes idosos (80 anos) mais alta nas mulheres
(10%) em comparao com os homens (2%)8.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur Anti-TPO um imunoensaio competitivo que recorre
tecnologia quimiluminescente. O autoanticorpo da peroxidase da tiroide na amostra do
doente compete com o anticorpo monoclonal anti-TPO de rato ligado por covalncia a
partculas paramagnticas na Fase Slida por uma quantidade limitada de TPO
humana em complexo com um anticorpo anti-TPO de rato marcado com ster de
acridina no Reagente Lite5.
Alfafetoprotena - AFP
A alfa-fetoprotena uma glicoprotena (alfa-1-globulina), com um peso molecular de
cerca de 67 kD, sintetizada pelo fgado, a principal protena do soro fetal, da o seu
nome. Possui muitos eptopos. reconhecida por numerosos anticorpos, tanto
policlonais como monoclonais e tem um tempo de semivida de 5 a 6 dias.
O seu reaparecimento na criana ou no adulto observa-se nos cancros do fgado e do
testculo, sem dvida devido ausncia de represso do gene que codifica para essa
protena.
Constitui a 1 escolha como marcador nos hepatomas, tumores germinais do ovrio e
tumores germinais do testculo (no seminomas). Pode tambm estar aumentado
devido a causas no oncolgicas, como hepatopatia crnica e gravidez.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur AFP um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em dois
locais que recorre tecnologia quimiluminomtrica direta, a qual utiliza quantidades
constantes de dois anticorpos. O primeiro anticorpo, no Reagente Lite, um anticorpo
policlonal de afinidade purificado anti-AFP de coelho marcado com ster de acridina. O
Diana Delgado
60
segundo anticorpo, na Fase Slida, um anticorpo monoclonal anti-AFP de rato ligado

por covalncia a partculas paramagnticas5.
CA 15.3
O CA 15.3 uma glicoprotena circulante associada aos cancros da mama, com um
peso molecular de 300-450 kD. reconhecido por dois anticorpos monoclonais (DF3 e
115D8), um dirigido contra a frao rica em antignios membranares do cancro da
mama, o outro contra as lipoprotenas do leite humano. Constitui uma segunda
escolha como marcador para o rim. Pode apresentar-se aumentado devido a causas
no oncolgicas, como as hepatopatias.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur CA 15-3 um imunoensaio totalmente automatizado do tipo
sanduche, efetuado em duas etapas, que recorre tecnologia quimiluminomtrica
direta. O Reagente Lite composto por um anticorpo monoclonal de rato, o DF3,
especfico para o CA 15-3, marcado com ster de acridina. O Reagente Conjugado
composto por um anticorpo monoclonal de rato, o 115D8, especfico para o CA 15-3,
marcado com fluorescena.
A Fase Slida composta pelo anticorpo monoclonal de captura de rato purificado,
que est ligado por covalncia a partculas paramagnticas. A amostra fica a incubar
com Reagente Conjugado e Fase Slida simultaneamente durante 20 minutos. Aps a
incubao, o imunocomplexo lavado e o Reagente Life adicionado, fica a incubar
durante outros 20 minutos e depois novamente lavado. Este protocolo de duas
etapas elimina o efeito de gancho de dose elevada neste ensaio5.
CA 125
O CA 125 uma glicoprotena circulante associada aos cancros do ovrio
(adenocarcinoma seroso), tem um peso molecular de cerca de 500 kD e possui um
tempo de semivida de cerca de 5 dias.
Pode estar aumentado em causas no oncolgicas, como a menstruao, cirroses
ascitognicas, derrames pleurais, peritoneais e pericrdicos, insuficincia cardaca
congnita, sndroma de Meigs e pneumonite.
Princpio do Teste
O ADVIA Centaur CA 125 II um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em dois
locais que recorre tecnologia quimiluminomtrica direta e que utiliza dois anticorpos
monoclonais de rato especficos para CA 125. O primeiro anticorpo visa o domnio
Diana Delgado
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antignico do M11 e est marcado com ster de acridina. O segundo anticorpo visa o
domnio antignico do OC 125 e est marcado com fluorescena. O imunocomplexo
formado com a CA 125 capturado pelo anticorpo antifluorescena monoclonal de rato
ligado a partculas paramagnticas na Fase Slida5.
CA 19.9
O CA 19.9 ou GICA (gastro-intestinal carbohydrate antigen) uma glicoprotena
circulante com um peso molecular de cerca de 360 kD, associada aos cancros do
pncreas, estmago, vias biliares e bexiga. Pode ser utilizado como segunda escolha
nos cancros do clon, reto e rim. Encontra-se tambm aumentado em certas situaes
no oncolgicas, como, ictercia, patologia benigna do tubo digestivo, do pncreas, do
fgado e das vias biliares, patologia benigna do pulmo, nefropatia diabtica, diabetes
mal controlada e doenas reumticas.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur CA 19-9 um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em
duas etapas que recorre tecnologia quimiluminomtrica direta e que utiliza um nico
anticorpo monoclonal, o 1116-NS19-9, tanto para a Fase Slida como para o
Reagente Lite. O anticorpo ligado por covalncia a partculas paramagnticas na
Fase Slida e o mesmo clone de anticorpo marcado com ster de acridina no
Reagente Lite. A amostra e a Fase Slida ficam a incubar a uma temperatura de 37C
durante 7,5 minutos, seguindo-se uma etapa de lavagem para remover o excesso de
antignios no ligados. O Reagente Lite reage ento com os antignios CA 19-9
ligados na Fase Slida durante uma incubao adicional de 20 minutos. Por isso, o
efeito de gancho de dose elevada eliminado neste ensaio5.
Antignio Carcioembrionrio - CEA
O antignio carcinoembrionrio (CEA) um antignio circulante com um peso
molecular de cerca 200Kd, possui um tempo de semivida de 6-8 dias associado aos
cancros tiroide (indiferenciado), pulmo (adenocarcinoma), clon e reto, ovrio
(adenocarcinoma mucinoso) e endomtrio (adenocarcinoma). Pode ser utilizado como
segunda escolha nos cancros do esfago (adenocarcinoma), do estmago, do
pncreas, das vias biliares e da mama.
Encontra-se tambm aumentado em certas situaes no oncolgicas, como patologia
benigna do tubo digestivo e do fgado, patologia benigna do pulmo, insuficincia renal
crnica.
Diana Delgado
62
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur CEA um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em dois
policlonal purificado anti-CEA de coelho marcado com ster de acridina. O segundo
anticorpo, na Fase Slida, um anticorpo monoclonal anti-CEA de rato ligado por
covalncia a partculas paramagnticas5.
Antignio especfico da prstata - PSA
Este antignio uma glicoprotena segregada pelas clulas glandulares da prstata e
no se encontra em qualquer outro tecido.
Como marcador da prstata eleva-se em todas as infees prostticas em evoluo
(adenoma, prostatite e cancro) mas o seu aumento muito mais importante e mais
rpido em caso de cancro.
Assim, o doseamento do PSA o melhor meio de despistagem do cancro da prstata.
PSA frao livre
Este antignio uma glicoprotena (7-12% resduos de carbohidratos), com um peso
molecular de 29kD, usa-se exclusivamente em relao ao PSA total: relao mais alta
na hipertrofia benigna (HBP), mais baixa no cancro; utiliza-se apenas quando o PSA
total se situa entre 4 e 20 g/l (ng/ml).
reconhecida por anticorpos monoclonais.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur PSA um imunoensaio do tipo sanduche efetuado em dois
policlonal anti-PSA de cabra marcado com ster de acridina. O segundo anticorpo, na
Fase Slida, um anticorpo monoclonal anti-PSA de rato que est ligado por
covalncia a partculas paramagnticas5.
Paratormona - PTH
A paratormona contribui para manter a calcemia normal. Ao nvel dos ossos, aumenta
a absoro ssea estimulando os osteoclastos e deprimindo a atividade dos
osteoblastos; ai nvel dos rins, estimula a reabsoro do clcio e aumenta a fosfatria.
A sua secreo regulada pela calcemia8.
Diana Delgado
63
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur PTH Intacta um imunoensaio do tipo sanduche efetuado
em dois locais que recorre tecnologia quimiluminomtrica direta, a qual utiliza
quantidades constantes de dois anticorpos anti-PTH humana no Reagente Lite. O
primeiro anticorpo um anticorpo policlonal anti-PTH humana de cabra (N-terminal 134) marcado com ster de acridina. O segundo anticorpo um anticorpo policlonal
anti-PTH humana de cabra biotinilado (regio 39-84). A estreptavidina na Fase Slida
ligada por covalncia a partculas paramagnticas de ltex5.
Anticorpo Anti Vrus da Hepatite C (VHC)
A hepatite C transmite-se habitualmente pelo sangue e excecionalmente por via
sexual. Foi durante muito tempo a hepatite ps-transfusional mais frequente.
Atualmente o risco de contgio ps-transfusional fraco, devido obrigatoriedade de
despiste para todos os dadores de sangue.
O diagnstico desta hepatite assenta essencialmente na deteo de anticorpos antiVHC, o qual se encontra presente apenas em pessoas que contactaram com o vrus8.
Princpio do Teste
O ensaio ADVIA Centaur VHC um imunoensaio indireto do tipo sanduche de duas
lavagens utilizado para a deteo do anticorpo IgG do vrus da hepatite C (VHC) no
soro ou plasma humano.
O ensaio ADVIA Centaur VHC utiliza dois antgenos do VHC recombinantes
codificados (c200 e NS5) e um pptido (c22) de ncleo codificado de VHC sinttico. A
protena c200 deriva de ambas as sequncias NS3 e NS4. H pelo menos dois
eptopos principais localizados nas regies NS3 e NS4. Estes dois importantes
eptopos especficos foram extensivamente estudados e revelaram ser importantes
para a deteo de anticorpos em indivduos infetados pelo VHC. O antgeno NS5
derivado de uma parte suposta de polimerase de ARN do genoma do VHC. Um
nmero significativo de indivduos infetados com VHC desenvolve uma resposta
imunolgica ao NS5. O pptido c22 uma sequncia de aminocidos derivada da
regio nuclear do genoma. Este pptido contm o principal eptopo nuclear do VHC.
Uma resposta imunolgica protena nuclear muitas vezes um indicador precoce de
infeo por VHC5.
Diana Delgado
64
VIDAS BIOMERIEUX
O VIDAS um sistema
multiparamtrico
de
imunoensaio com 5 seces

diferentes, tendo cada uma
seis posies de teste, o que
permite
que
diversos
parmetros sejam efetuados

em simultneo. As anlises
podem ser realizadas teste a
teste ou em srie.
Este equipamento utiliza o
mtodo imunoenzimtico por
Figura 8 - VIDAS
sanduche com deteo final por fluorescncia (ELFA). A reao decorre em fase
slida (cone), os determinantes antignicos/anticorpos da amostra so capturados
pelas imunoglobulinas monoclonais/antignios fixados no cone, aps a lavagem dos
componentes no fixados, o anticorpo marcado com fosfatase alcalina liga-se aos
determinantes antignicos. Uma segunda lavagem elimina o conjugado no fixado.
Durante a etapa final de revelao, o substrato (4-metil-umbeliferil fosfato)
hidrolisado a 4-metil-umbeliferona, sendo a reao catalisada pela enzima do
conjugado. O produto final emite fluorescncia proporcional concentrao dos
determinantes antignicos11.
TESTES REALIZADOS
Anticorpos Anti-HVA (IgM e IgG)

A Hepatite A uma doena aguda do fgado, causada pelo vrus da hepatite A (HVA),
geralmente de curso benigno.
A transmisso feita pela ingesto de alimentos mal cozinhados e guas
contaminadas por fezes que contenham o vrus (transmisso fecal-oral), sendo
tambm transmitido por via sexual.
O diagnstico da hepatite A assenta na deteo de anticorpos anti-HVA da classe IgM
pois esses anticorpos so detetveis desde os primeiros sinais clnicos, persistindo
Diana Delgado
65
dois ou trs meses. Os anticorpos da classe IgG aparecem no soro pouco depois ds
IgM e persistem toda a vida.
A pesquisa sistemtica de IgG anti-HVA na populao adulta em geral tem mostrado
uma elevada frequncia das formas assintomticas8.
Cortisol
O Cortisol uma hormona corticosteroide da famlia dos esteroides, produzida pela
parte superior da glndula suprarrenal, diretamente envolvida na resposta ao stress.
A sua forma sinttica, chamada de hidrocortisona, um anti-inflamatrio usado
principalmente no combate s alergias, a artrite reumatoide e alguns tipos de cancro.
O nome cortisol, deriva de crtex.
Tem trs aes primrias: estimula a quebra de protenas, gorduras e responsvel
pela metabolizao da glicose no fgado. Considerada a hormona do stress, ativa
respostas do corpo perante situaes de emergncia para ajudar a resposta fsica aos
problemas, aumentando a presso arterial e o acar no sangue, de forma a aumentar
a energia muscular. Ao mesmo tempo todas as funes anablicas de recuperao,
renovao e criao de tecidos so paralisadas e o organismo concentra-se na sua
funo catablica para a obteno de energia. Uma vez que o stress pontual,
ultrapassado o problema, os nveis hormonais e o processo fisiolgico volta
normalidade, mas quando este se prolonga, os nveis de cortisol no organismo
aumentam.
Anticorpos Anti Epstein Barr VCA (IgM e IgG)
O
Epstein Barr um vrus pertencente famlia Herpesviridae, que apresenta
tropismo para os linfcitos B. A primoinfeo pode ser assintomtica, mas pode

tambm manifestar-se atravs da mononucleose infeciosa e em casos muito
especficos pode conduzir a sndromas linfoproliferativos do tipo linfoma.
um vrus ubiquitrio e com distribuio mundial e a infeo por este vrus
transmite-se pela saliva e objetos contaminados.
Entende-se por VCA - Antignio da Cpside Viral, que uma protena estrutural.
As IgM anti-VCA so sintetizadas nas infees assintomticas e na Mononucleose
Infeciosa, enquanto as IgG anti-VCA so sintetizadas em todo o tipo de patologias
associadas ao EBV5.
Diana Delgado
66
Antignio e Anticorpo HBe

Este antignio indica-nos em geral uma replicao viral ativa do vrus da hepatite B, os
hepatcitos cujo DNA integrou o DNA do vrus produzem uma grande quantidade de
antignios HBs e HBe que se encontram no sangue com o DNA viral. As leses
hepticas so discretas porque nesta fase a resposta imunitria permanece fraca.
Aps alguns anos de evoluo a presena do anticorpo HBe indica o fim da replicao
viral e o aumento da resposta imunitria.
O antignio Hbe aparece ao mesmo tempo que o antignio HBs e desaparece antes
dele, sendo a sua persistncia para alm de trs meses, sinal de doena crnica8.
Anticorpos Anti Citomegalovrus (IgM e IgG)

O Citomegalovrus faz parte da famlia dos herpesvrus, pode causar patologias graves
tanto na criana como no adulto. O CMV pode persistir no organismo de uma pessoa
infetada durante anos e causar infees recorrentes ou ser transmitido a outra pessoa.
O CMV um vrus que se encontra frequentemente (60 a 85% da populao est
infetada), no entanto a maioria dos casos so assintomticos.
A deteo das IgM anti-CMA til no diagnstico das infees primrias recentes,
especialmente na mulher grvida. As IgM anti-CMV presentes em cerca de 70% das
primo-infees, persistem, em geral, 16 a 20 semanas aps a infeo e podem surgir
novamente, de forma inconstante, durante as reativaes.
A deteo das IgG anti-CMV uma ajuda ao diagnstico da infeo pelo CMV e na
avaliao do estatuto imunitrio dos doentes5.
Anticorpos Anti HIV I e II
O HIV (vrus da imunodeficincia humana) o agente da SIDA, um retrovrus com
tropismo para os linfcitos T CD4.
O mtodo mais simples para o diagnstico do HIV a determinao da presena de
anticorpos, no entanto como no so detetados os antignios virais, no permite
reconhecer a infeo na sua fase mais precoce, isto antes da formao de
anticorpos. Esta fase pr serolgica dura em mdia trs semanas e no excede
normalmente as seis semanas8.
Diana Delgado
67
Anticorpos Anti HBc (Total e IgM)

partculas de Dane. Estas partculas so constitudas por um invlucro contendo o
antignio de superfcie HBs e um centro que contm o antignio HBc.
O antignio HBc s pode ser detetado no sangue quando a partcula de Dane se
desenbaraou do seu invlucro pelos detergentes, o que no se realiza na prtica
corrente. Pelo contrrio, a presena do anticorpo anti-HBc fcil de evidenciar no
soro.
O anticorpo anti-HBc do tipo IgM, aparece pouco tempo depois do antignio HBs e
raramente persiste mais de trs meses. O anticorpo IgG anti-HBc aparece ao mesmo
tempo e presiste no soro qualquer que seja a evoluo, para a cura ou para a
cronicidade. Os anticorpos anti-HBc no so protetores; so simplesmente
testemunhas da doena8.
Anticorpos Anti Toxoplasmose (IgM e IgG)
O Toxoplasma gondii, protozorio, parasita intracelular obrigatrio, um protozorio
muito frequente no homem. O parasita, cujo hospedeiro definitivo o gato, encontrase disseminado na natureza e infeta inmeros outros mamferos.
A toxoplasmose geralmente muito discreta no individuo imunocompetente, mas os
danos fetais, como nos imunodeprimidos, porm podem ser severos. A toxoplasmose
congnita devida a uma contaminao maternal pr-concecional excecional e ocorre
frequentemente nas mulheres imunodeprimidas. As que so seronegativas so
suscetveis de serem infetadas durante a gravidez. A transmisso que pode ocorrer ao
feto, resulta da passagem transplacentria de toxoplasma durante a fase aguda da
doena. A frequncia e a gravidade dos danos fetais dependem de vrios fatores,
entre os quais, a data do aparecimento da infeo maternal, a violncia da estirpe
infetante, a importncia do incuo e a qualidade da resposta imunitria da me.
O diagnstico de uma infeo por Toxoplasma gondii baseia-se essencialmente na
explorao laboratorial: deteo das imunoglobolinas especficas (IgM e IgG).
O diagnstico de uma infeo aguda adquirida durante a gravidez far-se- pela
deteo de uma seroconverso, ou por um aumento significativo do ttulo de
anticorpos detetados em duas colheitas sequenciais analisadas em paralelo5.
Diana Delgado
68
Anticorpos Anti Rubola (IgM e IgG)

A infeo pelo vrus da rubola, tanto nas crianas como nos adultos, benigna e de
curta durao. Pode, no entanto, ter consequncias muito graves para o feto (infeo
congnita) se for contrada por uma mulher grvida, sobretudo se a infeo surgir
durante os trs primeiros meses de gravidez.
O diagnstico de uma infeo rubelica baseia-se essencialmente na serologia e,
particularmente, na pesquisa das IgM especficas: na maioria dos casos a presena de
IgM antirrubola est correlacionada com uma primoinfeo recente.
A deteo das IgG antirrubola uma ajuda ao diagnstico da infeo pelo vrus da
rubola e na avaliao do estatuto imunitrio dos doentes no que diz respeito a este
vrus5.
HCG
A hormona coriogonadotrfica (hCG) uma glicoprotena com um peso molecular de
cerca de 40 kD (19 a subunidade beta), segregada pelo sinciciotrofoblasto que
mantm durante o 1. trimestre da gestao a secreo do corpo amarelo, at que a
placenta o substitua. Esta hormona surge 48 horas aps a implantao do ovo.
O seu doseamento no sangue permite assim realizar o diagnstico precoce da
gravidez. A -hCG serve tambm de marcador tumoral porque segregada por certos
tumores trofoblsticos ou testiculares, est associada aos tumores do ovrio
(coriocarcinoma, tumor de clulas germinais), trofoblasto (mola hidatiforme) e testculo
(no seminomas, 25% dos seminomas).
reconhecido por numerosos anticorpos tanto policlonais como monoclonais tanto
para a molcula inteira como para a subunidade beta.
Diana Delgado
69
MINICAP
O MINICAP um aparelho completamente

automtico, com leitura de cdigos de
barras, que faz a separao das fraes
das protenas usando um sistema de dois
capilares (eletroforese capilar) 11.
Figura 9 - MINICAP
ELETROFORESE CAPILAR
A eletroforese definida como o transporte, em soluo eletroltica, de compostos

carregados eletricamente sob a influncia de um campo eltrico, no qual a separao
entre dois solutos ocorre de acordo com diferenas entre suas mobilidades
eletroforticas. O uso de capilares com dimetros internos extremamente pequenos
(na faixa de 15-100m) permite uma melhor dissipao do calor e, assim, possvel
obter uma alta eficincia de separao com tempo reduzido de anlise.
A eletroforese capilar permite separar as protenas sricas totais em 6 fraes
distintas: Albumina, Alfa 1, Alfa 2, Beta 1, Beta 2 e Gama globulinas.
A banda da albumina relativamente homognea, porm as demais so compostas
por uma mistura de diferentes protenas.
Albumina
a protena mais abundante no plasma, correspondendo a cerca de 60% da
concentrao total de protenas. sintetizada exclusivamente pelo fgado, aparecendo
primeiro no citoplasma dos hepatcitos como um precursor chamado pr-albumina.
Possui um papel muito importante em diversas funes do organismo, como o
transporte de diferentes substncias e em especial a manuteno da presso
onctica.
Foram descritas mais de 20 variantes genticas de albumina. O tipo mais comum
chamado albumina A. Essas albuminas variantes podem resultar numa faixa de
albumina larga na eletroforese de protenas sricas ou podem dar origem a duas
faixas distintas (bisalbuminmia). Nenhuma dessas variantes foi ainda associada a
manifestaes patolgicas. Na rara sndrome de ausncia congnita de albumina, os
Diana Delgado
70
pacientes podem apresentar edema moderado, mas podem evitar as consequncias

hemodinmicas com a utilizao de mecanismos compensatrios, como o aumento
das globulinas do plasma, que assumem algumas das funes da albumina. O
problema bioqumico principal nesses pacientes uma alterao no metabolismo
lipdico, com aumento de colesterol, fosfolipdios e outras lipoprotenas.
Uma
hiperalbuminmia
pode
corresponder
desidratao,
enquanto
uma
hipoalbuminmia pode dever-se a uma redistribuio do fluido intracelular para o

compartimento
extracelular,
reteno
de
gua,
sntese
diminuda
(resposta
inflamatria aguda e crnica, insuficincias cardaca e renal, perdas intestinais ou

outras perdas, cirrose heptica avanada e neoplasias).
Alfa-1-Globulinas
A alfa-1-antitripsina corresponde a cerca de 90% das protenas que se encontram na
faixa das alfa-1-globulinas. A deficincia da alfa-1-antitripsina est associada ao
enfisema pulmonar e cirrose heptica. S detetvel pela eletroforese quando
homozigtica; os estados heterozigticos s podem ser identificados por tcnicas
imuno-enzimticas que tambm so utilizadas para confirmao das deficincias
homozigticas.
uma das protenas de fase aguda e pode ser encontrada noutros fluidos orgnicos,
como lgrimas, smen e lquido amnitico. Nos 10% restantes, esto a alfa-1glicoprotena cida, a alfa-fetoprotena e outras protenas. Os nveis elevam-se nas
doenas inflamatrias agudas e crnicas, neoplasias, aps traumas ou cirurgias e
durante a gravidez ou estrogenioterapia. Nos hepatocarcinomas, a elevao pode
acontecer pelo aumento da alfa-fetoprotena.
Alfa-2-Globulinas
Inclui a haptoglobina, a alfa-2-macroglobulina e a ceruloplasmina. Raramente se
encontram alteraes nesta banda eletrofortica, j que a diminuio de um
componente compensada pelos demais mesmo dentro da banda de referncia.
Nveis elevados de alfa-2-macroglobulina associados diminuio da albumina
acontecem na sndrome nefrtica.
Os nveis de haptoglobina e de ceruloplasmina podem apresentar-se elevados em
numerosas situaes que levam reao de fase aguda. Os nveis de haptoglobina
apresentam-se diminudos nas hepatopatias graves, na anemia megaloblstica, em
situaes de aumento da hemoglobina livre, como na hemlise de eritrcitos ou na
reabsoro de grandes hematomas e na terapia com estrognios e corticoides. Os
Diana Delgado
71
nveis de ceruloplasmina aumentam na estrogenioterapia e encontram-se diminudos

na doena de Wilson, na desnutrio, no sndrome nefrtico e nas enteropatias com
perda de protena.
A intensidade da banda 2 pode estar aumentada e estender-se para o ctodo quando
se formam os complexos hemoglobina-haptoglobina. Neste caso a amostra est
normalmente hemolisada.
Betaglobulinas
Composta pelas beta-lipoprotenas (LDL), transferrina, C3 e outros componentes do
complemento, beta-2-microglobulina e antitrombina III. A reduo desta banda no
frequente e a sua variao proporcional concentrao de transferrina. A anemia
por deficincia de ferro leva ao aumento da transferrina. O hipotiroidismo, a cirrose
biliar, as nefroses e alguns casos de diabetes mellitus podem evidenciar-se pelo
aumento do colesterol e consequente aumento das beta-lipoprotenas (LDL). A betaglobulina est frequentemente elevada nos casos de ictercia obstrutiva e menos
frequentemente em alguns casos de hepatite. Quase sempre, est elevada nos casos
de cirrose heptica. Nesses casos, pode aparecer junto com sobreposio ou fuso
das bandas beta e gama pelo aumento de IgA, que ocorre nas cirroses hepticas,
infees da pele ou trato respiratrio e na artrite reumatoide. Elevaes causadas
provavelmente pelo aumento dos componentes do complemento podem ocorrer na
hipertenso maligna, doena de Cushing, poliartrite nodosa e carcinomas.
Gamaglobulinas
As gamaglobulinas so compostas pelas imunoglobulinas, predominantemente pela
IgG. As imunoglobulinas A,M,D,E e a protena C reativa encontram-se na rea de
juno
beta-gama.
ausncia
ou
diminuio
da
banda
gama
indica
imunodeficincias congnitas ou adquiridas. O aumento desta banda sugere o

aumento policlonal das gamaglobulinas associadas a doenas inflamatrias crnicas,
reaes imunes, doenas hepticas ou neoplasias disseminadas.
Bandas oligoclonais podem eventualmente ser observadas em infees virais
crnicas, em algumas infees bacterianas como as pneumonias por pneumococos e
as hepatites crnicas ativas.
Tuberculose, sarcoidose, linfogranuloma venreo e sfilis terciria so doenas
crnicas que levam ao aumento desta banda. Artrite reumatoide, lpus eritematoso
sistmico e outras colagenoses podem apresentar nveis normais a acentuadamente
aumentados, dependendo da fase de atividade da doena. Nveis aumentados
Diana Delgado
72
tambm so encontrados em linfomas malignos, doena de Hodgkin e leucemia

linfoctica crnica. Tipicamente, a macroglobulinemia de Waldenstrm e o mieloma
mltiplo exibem um pico homogneo, que pode ou no resultar do aumento total da
rea gama.
As hepatopatias cursam frequentemente com aumento da banda das gamaglobulinas.
Na hepatite, verifica-se um aumento da beta e gamaglobulinas com reduo da
albumina. Nas cirroses, o padro mais sugestivo consiste na elevao da
gamaglobulina de base ampla, juntamente com a fuso da beta e da gamaglobulina,
sem a individualizao dos picos da chamada ponte beta-gama. Apenas cerca de 20%
dos cirrticos apresentam a fuso completa e cerca de 3% apresentam a fuso parcial.
Os perfis das protenas na urina so semelhantes aos do soro. No entanto, as
intensidades relativas das fraes ou a sua presena podem variar de acordo com a
capacidade de filtrao do rim3.
Figura 10 - Representao em bandas e grfico de uma eletroforese normal das protenas
TESTE PARA DETEO DA BRUCELOSE BRUCELLOSLIDE TEST

A Brucelose humana uma antropozoonose, provocada pela Brucella. O homem
apenas um hospedeiro acidental para a Brucella, porm esta zoonose pode atingir
todos os animais, domsticos e selvagens, da a razo da sua disperso mundial. Os
animais doentes excretam as bactrias pelo leite, urina e placenta; isto explica a
contaminao inter-animal e humana, assim como a disseminao do microrganismo.
Neste teste se o soro a testar apresentar aglutininas especficas da Brucelose, o
antignio cido tamponado, corado de Rosa Bengala, aglutinado5.
Diana Delgado
73
TESTE PARA DETEO DE TREPONEMA PALLIDUM VDRL RPR NOSTICON II

Treponema pallidum uma espcie de bactria gram-negativa do grupo das
espiroquetas e o agente causador da Sfilis.
O RPR-nosticon II um teste de floculao no treponema macroscpico e utilizado
para detetar a reagina (anticorpo presente no sangue de doentes de sfilis responsvel
pela reao positiva a certos testes serolgicos). Quando se mistura uma gota de soro
positivo e de reagente numa lmina de teste, formam-se flculos pretos que so
visveis macroscopicamente devido presena de partculas de carbono. Quando o
anticorpo reagina no est presente, a floculao no ocorre e aparece uma cor
cinzenta uniforme5.
TESTE
PARA
DETEO
DE
FATOR
REUMATOIDE
WALLER
ROSE
POLYARTEST FUMOUZE
O Polyartest Fomouze um kit de teste de hemaglutinao rpido, para detetar o fator
reumatoide (RF) no soro humano. O fator reumatoide (FR) encontra-se no soro de
doentes com artrite reumatoide.
O Fator reumatoide tambm tem atividade contra a IgG animal. Devido variedade de
fatores reumatoides no h um nico teste que os consiga detetar todos.
O reagente do teste Polyartest Fomouze uma suspenso de clulas sanguneas de
ovelha estabilizadas com IgG de coelho antiovelha.
Quando o fator reumatoide est presente na amostra visvel uma aglutinao5.
Diana Delgado
74
HEMATOLOGIA
SYSMEX XT 180i
Este
analisador
automtico
utilizado para a realizao de

Hemogramas e utiliza a citometria
de fluxo fluorescente e tecnologias
orientadas
Utiliza
de
um
laser
conseguindo
necessria
hidrodinmica.
de
dodo
sensibilidade
para
medir
diferenciar os tipos de clulas no

sangue
amostras
total
tambm
de fluidos
de
corporais.
Figura 11 SYSMEX XT 180i
Sendo assim permite fazer: contagem de glbulos vermelhos, hemoglobina, ndices

hematimtricos, hematcrito, plaquetas (distinguindo formas anormais), contagem de
glbulos brancos e frmula leucocitria. As amostras de sangue total para este
analisador so colhidas em tubos com anticoagulante EDTA K3. O analisador tem a
capacidade de analisar 80 amostras/hora11.
HEMOGRAMAS
O hemograma d-nos uma anlise quantitativa (contagem dos elementos celulares por
unidade de volume de sangue glbulos vermelhos, glbulos brancos e plaquetas) e
uma anlise qualitativa (contagem diferencial das subpopulaes leucocitrias).
HEMATOPOIESE
A Hematopoiese o conjunto de mecanismos que asseguram a substituio contnua

e regulada das diferentes clulas sanguneas. Constitui o sistema celular que conduz
formao de todas as clulas do sangue.
O pool mais primitivo constitudo por Clulas tronco pluripotenciais, com a
capacidade de autorrenovao contnua. O pool mais maduro constitudo por
Clulas progenitoras diferenciais unipotenciais, com maturao restrita a uma nica
linhagem celular e sem capacidade de autorrenovao.
As clulas estaminais (stem cells) so as mais primitivas e podem originar qualquer
uma das linhagens celulares ou mais stem cells.
Diana Delgado
75
O 1. local de hematopoiese embrionria o saco vitelino, contendo clulas com

capacidade de se diferenciar em multilinhagens no 8. dia de gestao. O 2. local o
fgado fetal.
As cavidades sseas aparecem por volta do 5. ms de gestao e tornam-se no local
exclusivo para a proliferao de granulcitos e megacaricitos. Nesta altura, a
atividade eritropoitica ocorre exclusivamente no fgado (at final do ltimo trimestre).
Ao nascer, as cavidades sseas so o nico local de significativa atividade
hematopoitica. Por volta dos 4 anos, aparecem clulas goradas nas difises dos
ossos longos, que respondem lentamente aos elementos hematopoiticos. A partir dos
18 anos, a medula hematopoitica s pode encontrar-se nas vrtebras, costelas,
crneo, plvis e epfises proximais do fmur e mero
Diferentes etapas da evoluo das clulas hemopluripotenciais:
Diferenciao = alterao nas clulas multipotenciais at aos progenitores
unipotenciais.
Determinao = momento impossvel de fixar exatamente, em que duas clulas
tomam um caminho definido que no se traduz em fentipo caracterstico.
irreversvel.
Maturao = conjunto de fenmenos que levam a clula do momento da
determinao, quele em que ela assume as suas caractersticas.
Amplificao = uma clula determinada, no pode evoluir seno numa direo. Ao
dividir-se origina clulas-filhas semelhantes a si.
Modulao = as clulas determinadas podem tomar diferentes aspetos morfolgicos,
se o seu ambiente se alterar.
Todas as clulas sanguneas tm origem em clulas indiferenciadas blastos.
As clulas primitivas mudam para as formas de clulas mais maduras; elas sofrem
alteraes nas caractersticas citoplasmticas e nucleares, diminuem de tamanho, o
tamanho absoluto e relativo do ncleo diminui (na srie eritrocitria, o ncleo
desaparece) e a intensidade do corante absorvido pelo citoplasma diminui4.
Diana Delgado
76
LEGENDA:
CFU-S
Unidade
formadora
de
colnias do bao
CFU-B
Unidade
formadora
de
formadora
de
colnias de blastos
CFU-E
Unidade
colnias de eritrocitos
CFU-GM
Unidade
formadora
de
formadora
de
granulocitos/ monocitos
CFU-M
Unidade
colnias de megacariocitos
LSC Clula-tronco linfoide
Figura 12 Processo de formao das clulas sanguneas
GLBULOS VERMELHOS (GV) OU ERITRCITOS
Os glbulos vermelhos tm uma forma de disco bicncavo,

com a zona central mais corada que a perifrica, perdem o
ncleo durante a maturao, pelo que, quando em
circulao, so anucleadas. O facto de possurem uma
considervel rea interna oca, funcionam como um
reservatrio de hemoglobina. A forma bicncava assegura
uma rea maior para fenmenos de difuso.
Figura 13 - Eritrcito
A membrana celular composta por uma dupla camada de fosfolpidos, colesterol,

protenas, mucopolissacridos no exterior e espectina, na face interior.
As caractersticas da membrana e do interior da clula, permitem que esta sofra
alteraes (compactamentos e distenses) de forma a adaptar-se aos diferentes locais
em que circula, em regies de circulao esttica ou muito lenta, os GV circulam em
agregados de 2 a 12 clulas rouleaux.
Duram cerca de 120 dias, devido sua membrana que funciona como tanque
circulante, que gira em torno dos componentes que transporta no seu interior.
Os glbulos vermelhos podem apresentar variaes na forma (poiquilocitose), no
tamanho (anisocitose), na cor, e podem ter incluses4.
GLBULOS BRANCOS OU LEUCCITOS
Os leuccitos tm origem numa clula comum a Clula Tronco Pluripotente e em

duas unidades formadoras de colnias diferentes: de uma delas (CFU-S Unidade
formadora de colnias do bao) so originadas clulas que podem ser moncitos ou
Diana Delgado
77
qualquer um dos granulcitos, e da outra (LSC Clula Tronco Linfoide) origina os

linfcitos que sero do tipo T, caso sofram maturao no timo, ou do tipo B, caso a sua
maturao se faa no Bao.
A granulopoiese faz-se pela seguinte ordem cronolgica:
Figura 14 Processo de Formao dos Leuccitos e dos Eritrcitos
Os leuccitos do sangue perifrico normal podem ser classificados em leuccitos

polimorfonucleares, granulcitos polimorfonucleares ou granulcitos (este termo inclui
as clulas maduras e imaturas) e clulas mononucleadas.
Os leuccitos polimorfonucleares tm um ncleo lobulado, muito varivel na forma e
grnulos citoplasmticos proeminentes, os quais diferem nas caractersticas tintoriais
entre as trs classes:
Neutrfilos
Eoinfilos
Basfilos
As clulas mononucleadas so:
Linfcitos
Moncitos
As clulas mononucleadas podem ter grnulos, que nos moncitos so inconspcuos,
nos linfcitos podem ser proeminentes mas so pouco numerosos4.
Neutrfilos
Aps total maturao, os neutrfilos passam do pool marginal para a circulao
sangunea, deslocando-se, aleatoriamente, para os tecidos e cavidades orgnicas,
onde levam a cabo as suas principais funes.
Diana Delgado
78
Normalmente, os neutrfilos entram nos tecidos com a mesma taxa com que outros
neutrfilos saem do pool marginal e entram na circulao perifrica, onde tm um
tempo de semivida de cerca de 5 dias.
Uma vez nos tecidos, os neutrfilos participam no combate a infees ou so
excretados pelo trato intestinal, pelo trato urinrio, pulmes e glndulas salivares.
Tambm podem ser eliminados pelo sistema mononuclear fagoctico.
Os neutrfilos so metabolicamente ativos e so capazes de efetuar gliclise aerbica
e anaerbica para obter energia.
A sua principal funo parar ou retardar a ao de antignios (material estranho) ou
de agentes infeciosos por intermdio de:
Movimentao at rea de inflamao ou de infeo diapedese;
Fagocitose do material estranho fagocitose;
Digesto do material fagocitado.
Os neutrfilos so capazes de se movimentar, quer de forma aleatria- quimioquinese
- quer de forma direcionada quimiotaxis. Esta locomoo s possvel quando o
neutrfilo est agarrado a uma superfcie (veias). Por emisso de pseudpodes, a
clula consegue a tpica movimentao.
So capazes de distinguir partculas estranhas de clulas danificadas esta ser a
mais importante das suas funes fagocticas.
Na presena de um processo inflamatrio, os neutrfilos continuadamente, movem-se
para a rea infetada, fagocitam o agente estranho, morrem e so, por sua vez,
fagocitados pelos macrfagos.
So as 1s clulas fagocticas a chegar ao local da infeo, seguidos
pelos moncitos.
Os ciclos de migrao continuem at extino total dos antignios.
Sob condies normais, os neutrfilos permanecem 4 a 5 dias nos
tecidos antes da senescncia (assincronismo nuclear) e destruio.
O neutrfilo maduro mede entre 12-15m.
Figura 15 - Neutrfilo
O citoplasma tem muitos grnulos finos distribudos homogeneamente: os grnulos

azurofilos (formados no promielocito) e em maior quantidade os grnulos especficos
(formados no mielcito).
O ncleo tende a seguir uma forma, aproximadamente circular, tem a cromatina em
clumps e este dividido entre 2 a 5 lobos distintos. A contagem mdia do nmero varia
entre observadores com valores de 2,5 3,3 consoante os estudos.
Diana Delgado
79
A hipersegmentao dos neutrfilos mais de 5% de neutrfilos com 5 ou mais lobos

observada caracteristicamente na anemia megaloblstica e mais raramente em
casos de anemia ferropnica, infeo, uremia ou nas sndromas mielodisplsicos.
A
hiposegmentao
dos
neutrfilos
pode
ser
observada
nas
sndromas
mielodisplsicos (anomalia pseudo Pelger-Huet).

O bastonete uma clula semelhante ao neutrfilo maduro mas sem lobos nucleares.
Um aumento do nmero de bastonetes ocorre na gravidez e em situaes patolgicas
como nas infees4.
Eosinfilos
Os eosinfilos so, primariamente, clulas tecidulares.
Uma vez libertados para o sangue perifrico, a partir da medula ssea, so
rapidamente removidos, independentemente da sua idade, pelo que o seu tempo de
semivida no sangue perifrico de apenas 8 horas.
Do sangue perifrico so sequestrados para os tecidos onde se localizam,
primariamente, em reas expostas ao meio ambiente (pele, mucosa nasal, pulmes e
trato gastro-intestinal).
So mveis e aptos para processos de locomoo celular semelhante ao dos
neutrfilos, alm de que so metabolicamente mais ativos do que estes ltimos.
As suas funes no esto completamente compreendidas:

Fagocitam material estranho;
Fagocitam complexos Antignio-Anticorpo;
So descritos como clulas anti-inflamatrias;
Parecem ter capital importncia na defesa contra infees parasitrias por
helmintas (movem-se de imediato para o local de infeo);
Aderem s clulas infetadas e injetam-lhes enzimas hidrolticas (contidas nos seus
grnulos) que destroem o agente invasor.
O eosinfilo ligeiramente superior em relao ao neutrfilo com um dimetro de 1217m.
O ncleo em geral bilobado, ocasionalmente trilobado.
O citoplasma fracamente basfilo.
Os grnulos dos eosinfilos so esfricos e consideravelmente maiores que os
grnulos dos neutrfilos; preenchem o citoplasma e coram de laranja avermelhado4.
Diana Delgado
80
Basfilos
Uma vez libertados da medula ssea, os basfilos permanecem na circulao,
aproximadamente, o mesmo tempo que os neutrfilos, antes de migrarem para os
tecidos.
Esto distribudos por todo o organismo, incluindo, pele, parnquima pulmonar, timo,
bao e medula ssea.
Possuem atividade fagoctica e quimiotxica.
Os grnulos dos basfilos contm serotonina, peroxidase, um componente histamnico
vasoconstritor e heparina. Sintetizam um fator quimiotxico dos eosinfilos, um fator
ativador das plaquetas que promove a agregao plaquetria.
As suas funes so:
Intervm no processo inflamatrio;
Participam em respostas de hipersensibilidade tardias;
As suas membranas fixam imunoglobulinas do tipo IgE. Quando estes, por sua
vez, se ligam a antignios especficos, os basfilos libertam o contedo dos seus
grnulos na rea circundante, produzindo uma reao de choque anafiltico.
O basfilo tem um tamanho semelhante ao do neutrfilo, 10-14 m de dimetro.
O ncleo, geralmente obscurecido por grnulos pretos/prpura os quais tm um
tamanho intermdio entre os grnulos dos neutrfilos e dos eosinfilos4.
Linfcitos
A gnese dos linfcitos ocorre, por ordem de importncia, nos seguintes locais:
1. Gnglios linfticos;
2. Bao;
3. Timo (produo de linfcitos T desde a 8 semana, at ao nascimento);
4. Amgdalas;
5. Placas de Peyer do intestino;
6. Diversos locais das mucosas do organismo;
7. Medula ssea (de forma excecional).
LINFOBLASTO
PROLINFOCITO
LINFCITO
MADURO
Figura 16 - Formao do Linfcito maduro
Diana Delgado
81
As clulas jovens da srie linfoide (linfoblasto) distinguem-se das da srie mieloide

(mieloblasto) essencialmente por:
Mieloblasto > linfoblasto
Mieloblasto apresenta granulaes caractersticas.
Citoplasma do linfoblasto mais basfilo e menos evidente.
No linfoblasto, tanto a clula, como o respetivo ncleo so mais redondos do que o
mieloblasto.
O linfcito varia entre 10-16 m de dimetro.
Os pequenos linfcitos, 10 a 12 m, so predominantes, apresentam citoplasma
escasso e um ncleo redondo ou ligeiramente indentado, com cromatina densa.
Os linfcitos maiores, 12 a 16 m, constituem 10% dos linfcitos circulantes, tm
citoplasma mais abundante e a cromatina nuclear menos condensada.
O citoplasma, fracamente basfilo, cora de azul plido. Os linfcitos podem ter
grnulos azurfilos em pequeno nmero.
Por vezes existem clulas maiores com citoplasma mais abundante e com grnulos
grandes linfcitos granulares (em indivduos normais podem ocorrer at 10 a 15% mas
em geral so menos frequentes).
Os linfcitos respondem a infees virais e outros estmulos imunolgicos atravs de
um aumento do seu nmero e de alteraes morfolgicas evidentes4.
Moncitos
Originalmente, os moncitos e os macrfagos eram classificados como clulas do
sistema reticuloendotelial. Atualmente pertencem ao sistema mononuclear fagoctico;
O seu desenvolvimento faz-se na medula ssea:
Clula-Tronco Pluripotente;
Clula Unipotencial;
Monoblasto;
Promonocito;
Moncito (medula ssea);
Moncito (sangue perifrico);
Macrfago.
A diferenciao dos moncitos na medula ssea processa-se rapidamente (1.5 a 3
dias).
Diana Delgado
82
Processo controlado por um grupo de 11 fatores, 3 dos quais iniciam a diferenciao

dos macrfagos a partir das clulas progenitoras uni e bi-pluripotenciais na medula
ssea.
Os moncitos do sangue perifrico so clulas jovens que possuem atividades:
Migratrias;
Quimiotxicas;
Pinocticas;
Fagocticas.
Possuem ainda recetores para IgG e alguns fatores do
complemento.
Ao migrarem para os tecidos, os moncitos sofrem uma ltima
diferenciao (que dura cerca de 1 dia) tornando-se
macrfagos tissulares funcionantes.
Figura 17 - Macrfago
Os macrfagos podem dividir-se em macrfagos normais e macrfagos inflamatrios.
Os macrfagos normais incluem:

Macrfagos dos tecidos conjuntivos (histicitos);
Hepticos (clulas de Kupffers);
Pulmonares (macrfagos alveolares);
Dos ndulos linfticos;
Esplnicos;
Da medula ssea;
De lquidos serosos (macrfagos pleurais e peritoneais);
Da pele (histicitos e clulas de Langerhans);
Outros tecidos.
A populao de macrfagos num tecido em particular mantida custa de 3
mecanismos: recrutamento de moncitos do sangue perifrico; proliferao local;
reciclagem biolgica.
Sob condies normais, a renovao da populao de macrfagos tissulares ocorre
atravs de proliferao local de clulas progenitoras e no por intermdio de
recrutamento de moncitos do sangue perifrico. Antes, pensava-se que os
Diana Delgado
83
macrfagos eram clulas de grande longevidade. Mais recentemente demonstrou-se

que dependendo do tipo de tecido, a sua viabilidade varia entre os 6 e os 16 dias.
Os macrfagos inflamatrios
Os macrfagos inflamatrios esto presentes em vrios exsudados e podem ser
caracterizados atravs de vrios marcadores especficos, e.g., atividade de
peroxidases.
Em suma, os macrfagos so, genericamente, uma populao de clulas
mononucleares fagocticas de distribuio ubqua responsveis por inmeros
processos homeostticos, imunolgicos e inflamatrios. A sua vasta distribuio
tissular torna estas clulas adequadas para uma resposta de defesa imediata contra
agentes estranhos, prvia migrao dos outros leuccitos.
MONOBLASTO
PROMONCITO
MONCITO
Figura 18 - Formao dos moncitos
Os moncitos que saem da circulao para os tecidos e se tornam

macrfagos no voltam ao sangue perifrico.
O moncito a maior clula normal do sangue perifrico com um
dimetro de 12 20 m. Tem um ncleo irregular, frequentemente
lobulado e o citoplasma azul acinzentado com grnulos azurfilos
muito finos.
Figura 19 - Moncitos
O contorno da clula frequentemente irregular e o citoplasma pode apresentar

vacolos4.
PLAQUETAS
A plaqueta sangunea ou trombcito um fragmento anucleado dos megacaricitos.

Mede entre 1,5 e 3,0 micrmeros de dimetro e circulam no sangue com o formato de
disco achatado quando no esto estimuladas. Quando estimuladas, as plaquetas
podem atuar na coagulao sangunea das formas fsica (quando a sua estrutura
celular interage fisicamente com algumas fibras para fim de diminuio da hemorragia)
Diana Delgado
84
e qumica (quando h liberao de fatores de coagulao, por exemplo). Ela

responsvel pela coagulao do sangue.
As plaquetas contm RNA, mitocndria, um sistema canicular, e vrios tipos de
grnulos; lisossomas (contendo cido hidrlico), corpos densos (contendo ADP, ATP,
serotonina, histamina, e clcio) e alfa grnulos (contendo fibrinognio, fator V,
vitronectina, trombospondina e fator de von Willebrand) 4.
CITOMETRIA DE FLUXO
A citometria de fluxo um mtodo rpido, objetivo, quantitativo e reprodutvel que

permite a determinao de mltiplas propriedades fsicas, simultaneamente de
partculas isoladas em suspenso, como as clulas.
Este mtodo consiste em: Irradiao por luz laser, fluxo de clulas e deteo de luz
dispersa e fluorescente.
A citometria de fluxo mede as propriedades de clulas em suspenso num meio fluido
em movimento, orientadas num fluxo laminar e intercetadas uma a uma por um feixe
de luz laser. As clulas passam pelo laser a uma velocidade de mais de 5.000 clulas
por segundo. As modificaes ocasionadas nesse feixe de luz devidas presena da
clula sero ento detetadas e medidas por sensores. A luz dispersa coletada por
um sistema tico que permite identificar as clulas pelo seu tamanho e granulosidade
interna.
Um raio laser focado atravs de uma lente cilndrica para formar um raio elptico que
irradia um fluxo de clulas num feixe. A
tcnica
do
fluxo
de
clulas
est
concebida para que elas fluam para o

centro
do
feixe,
eliminando
necessidade de voltar a focar cada uma

das clulas. medida que as clulas
passam pelo feixe de laser, a luz
difunde-se e as clulas fluorescem.
Esta
luz
difusa
fluorescente
detetada por um foto dodo e por um

Figura 20 Esquema da Citometria de Fluxo
foto multiplicador, respetivamente. Atravs
deste procedimento, a citometria de fluxo mede a luz difusa e a luz fluorescente para
cada clula que flui no feixe. A informao fornecida pela luz difusa e fluorescente
varia, dependendo das condies analticas e das caractersticas dos fluorocromos e
por isso este processo requer um alinhamento e estabilidade tica precisos.
Diana Delgado
85
Os diferentes fluorocromos que marcam cada antignio absorvem a luz e emitem-na

num comprimento de onda maior e especfico. Os fotes de luz gerados atingem
detetores especficos e so convertidos em impulsos eltricos proporcionais ao
nmero de fotes recebidos. Estes impulsos so convertidos em sinais digitais,
podendo oferecer os resultados em diferentes formas de anlise tais como
histogramas, dot-plot, tabelas, entre outros10.
CONTAGEM E DIFERENCIAO DAS POPULAES DE GLBULOS BRANCOS
feita uma medio fluorescente que mostra a relao nucleoplasma de cada clula
individualmente. A combinao da complexidade interna da clula, do volume e da
fluorescncia do material cido nucleico determina a classificao de cada populao.
Esta medio tridimensional permite um diferencial exato e preciso, mesmo em
amostras altamente patolgicas. Os leuccitos analisados compreendem os Basfilos,
os Eosinfilos, os Linfcitos, os Moncitos e os Neutrfilos11.
CONTAGEM DE GLBULOS VERMELHOS E PLAQUETAS
So contados num canal prprio pelo mtodo de deteo de corrente contnua e

focagem hidrodinmica para minimizar coincidncias ou recirculao. Contm
discriminadores que separam as duas populaes com base em logaritmos
complexos11.
NDICES HEMATIMTRICOS
So usados para definir o tamanho e o contedo de hemoglobina existente no glbulo

vermelho. Estes ndices so muito teis para diferenciar anemias.
No analisador so efetuados os clculos necessrios para obteno dos resultados.
O analisador executa o clculo direto dos parmetros, RBC, WBC, PLT e HGB.
A Hemoglobina medida diretamente pelo mtodo lauril sulfato de sdio. A
hemoglobina determinada num canal separado, minimizando a interferncia de
grandes concentraes de leuccitos. Este mtodo demonstra uma excelente
correlao com o mtodo de referncia.
O Volume Globular Mdio (MCV) e o Volume Plaquetrio Mdio (MPV) so dados
por clculo semidireto (direto atravs do histograma).
H ainda clculos que se obtm automaticamente, como sendo:
Hematcrito (HCT) calculado a partir do VGM que o aparelho mede diretamente,
com base na contagem e deteo do volume de cada glbulo vermelho.
Diana Delgado
86
Hemoglobina Globular Mdia (MCH) obtida pela diviso do resultado da dosagem

de hemoglobina pelo nmero de GV e indica o peso mdio da hemoglobina por
glbulo. Depende ao mesmo tempo do contedo de hemoglobina por unidade de
volume e volume globular, sendo que:
Hb (g/dL)
MCH (pg/GV) =
x 10
GV (milhes/ L)
Concentrao mdia de hemoglobina celular (MCHC) obtido pela diviso do

resultado da dosagem da hemoglobina pelo hematcrito. Dessa forma considera-se a
quantidade de hemoglobina por unidade de volume de GV.
Hb (d/dl)
MCHC (g/dl) =
x 100
Hematcrito (%)
Os scattergramas permitem ainda saber:

Coeficiente de Variao do Tamanho dos GV (RDW)
Coeficiente de Variao do Tamanho das Plaquetas (PDW)4.
A Diferenciao de populaes celulares feita por citometria de fluxo fluorescente,
usando corantes fluorescentes altamente especficos11.
SYSMEX CA 500
O equipamento SISMEX CA 500 um

aparelho automatizado, utilizado na
avaliao da coagulao sangunea,
onde so determinados, a Taxa de
Protrombina
(TP),
Razo
Normalizada Internacional (INR), o

Tempo de Tromboplastina Parcial
Ativado (APTT) e o Fibrinognio.
Os mtodos utilizados so: mtodo de
deteo de luz difusa e mtodo
Figura 21 - SISMEX CA 500
colorimtrico. Para esta determinao necessrio sangue colhido em citrato de sdio

na proporo 1/1011.
Diana Delgado
87
COAGULAO
A coagulao plasmtica designada, mais simplesmente, por coagulao, conduz

transformao do fibrinognio insolvel, em fibrina solvel.
Na realidade, a hemstase primria e a coagulao comeam, praticamente, ao
mesmo tempo e esto interligadas.
A ativao da coagulao desencadeada in vivo pelas leses que expem o
subendotlio ao sangue e tambm, pelas feridas dos tecidos, as quais introduzem na
circulao uma substncia procoagulante, o fator tecidular (tromboplastina).
Na coagulao intervm vasos, plaquetas e fatores plasmticos da coagulao. Neste
mecanismo, os proenzimas do origem a enzimas e todo o processo de ativao
desenvolve-se atravs de interaes moleculares, de modo a que o fenmeno se
potencialize (tais reaes so moduladas por inibidores fisiolgicos). Esta sequncia
de acontecimentos, levou a que fossem comparados com uma cascata, da que os
diagramas que os representam sejam designados por cascata da coagulao.
A ativao da coagulao pode ser feita pela via intrnseca por contacto do sangue
com uma superfcie carregada negativamente (subendotlio, in vivo, vidro ou caolina,
in vitro) ou pela via extrnseca, devido introduo de fator tecidular no sangue.
As duas vias conduzem converso do fator X em Xa (incio da via comum), que
provoca a formao de trombina que, por sua vez, transforma o fibrinognio em fibrina.
A via intrnseca (ou fase de contacto) desencadeada pela fixao dos fatores XI e
XII, pr-calicrena e Quininognio de Alto Peso Molecular (HMWK) sobre toda a
superfcie eletronegativa. In vivo, esta superfcie pode ser constituda por plaquetas
agregadas. O fator XIIa transforma, por ciso proteoltica, o XI em XIa, e a
precalicrena em calicrena. H ativao recproca entre estes dois fatores.
O fator XIa, em presena do clcio (Ca2+) ativa o IX por protelise.
O IXa vai ativar o X, graas a um complexo formado pelo IXa, o VIIIa, o Ca2+ e uma
superfcie fosfolipdica (da membrana da clula endotelial).
Na via extrnseca primeiro d-se a interao entre o VII e o fator tecidular em presena
do Ca2+, seguido de protelise do VII. O fator VIIa ativa o X, e o contrrio.
Na via comum ocorre a ativao do fator II (protrombina), a qual se faz graas a um
complexo chamado protrombinase (que inclui o Xa, o V, o Ca2+ e fosfolpidos, sejam
plaquetares ou endoteliais).
Os fatores II, Xa e V fixam-se sobre os fosfolpidos.
O fator Xa transforma o II em IIa (trombina). Esta ataca as regies terminais aminadas
do fibrinognio, libertando 2 molculas de fibrinopptido A e 2 de fibrinopptido B. O
Diana Delgado
88
fibrinognio
transforma-se
em
monmeros
de
fibrina,
que
se
agregam
espontaneamente entre eles, resultando num polmero de fibrina solvel que

estabilizado pelo XIII, previamente ativado pela trombina.
Os fatores XIIa e o IXa podem ativar o VII, que por sua vez ativa o IX4.
Figura 22 Cascata da Coagulao
Fibrinlise
A Fibrinlise o processo de destruio do cogulo atravs de um sistema de
enzimas que lisam a fibrina, dissolvendo o cogulo.
A Fibrinlise mediada pela formao de um enzima proteoltico Plasmina, atravs
da ativao do plasminognio.
Durante a coagulao, o plasminognio e a trombina ficam enredados no trombo
formado. O Plasminognio ativado pelo Ativador Tecidular do Plasminognio (TPA) e
forma-se a plasmina.
Diana Delgado
89
A lise qumica da fibrina pela plasmina resulta na produo de fragmentos chamados

Produtos de Degradao da Fibrina (PDF). A Plasmina atua sobre estes fragmentos
para formar PDF cada vez menores. Os produtos finais so eliminados pelo sistema
retculo-endotelial4.
Ativador Tecidular do Plasminognio (TPA)
Plasmina
Plasminognio
Produtos de Degradao da Fibrina (PDF)
Fibrina
Figura 23 Fibrinlise
TEMPO DE TROMBOPLASTINA (TP)
O TP o tempo de coagulao de um plasma citratado em presena de um excesso

de tromboplastina tecidual e de Ca2+. Determina-se o tempo desde a juno do
reagente (tromboplastina tecidual e Ca2+) at formao do cogulo.
Este teste avalia a via extrnseca da cascata da coagulao e utilizado na
monitorizao da anticoagulao oral;
Permite avaliar a funo heptica pois muito sensvel ao fator VII que sintetizado
no fgado, sendo o primeiro a desaparecer e o primeiro a reaparecer4.
O TP mede o tempo que o cogulo de fibrina demorou a formar, atravs de um
processo de incubao do plasma com um excesso de tromboplastina tecidular e
clcio. Os valores normais podem ser dados em segundos (10,3 13,0 seg.),
percentagem (70 140%) ou em INR, a razo normalizada internacional (0,9 1,0).
O aparelho que realiza os testes, faz os clculos e d o resultado.
A apresentao dos resultados para o TP pode ser dada em percentagem ou em
Razo Normalizada Internacional (INR).
Os resultados em percentagem so obtidos por comparao do resultado obtido em
segundos com uma curva de calibrao previamente executada e inserida no
coagulmetro. Para fazer a curva de calibrao utilizado um plasma padro obtido
atravs de um pool de plasmas de indivduos sem patologias e que no estejam a
tomar anticoagulantes orais.
Diana Delgado
90
Uma vez que antigamente havia discrepncias entre laboratrios na apresentao dos
resultados do TP para os doentes com teraputica anticoagulante, a Organizao
Mundial de Sade (OMS) props que as tromboplastinas fossem padronizadas
segundo uma preparao de referncia internacional e criou o ndice de Sensibilidade
Internacional (ISI) que caracterstico da tromboplastina usada e indicado pela casa
comercial (resulta da comparao da sua sensibilidade com a de uma tromboplastina
padro internacional). Assim, os resultados podem ser referenciados como Razo
Normalizada Internacional (INR), que na prtica a razo entre o TP da amostra (Ta)
e o TP de um plasma normal (Tc) elevada a um fator ISI.
TROMBOPLASTINA PARCIAL ATIVADA (APTT)
O APTT o tempo de coagulao de um plasma citratado em presena de Ca2+, um

timo de fosfolpidos (Cefalia) e um ativador dos fatores de contacto (caulina, slica e
cido elgico). Determina-se o tempo desde a juno Ca2+ at formao do
cogulo.
O APTT determinado fundamentalmente pelos seguintes componentes: FXII, FXI,
FVIII, FIX, FX, FV, protrombina e fibrinognio.
O APTT um teste geral de rastreio que avalia a via intrnseca da cascata da
coagulao (fatores VIII, IX, X, XI, XII, I e II) exceto as plaquetas. A sua principal
aplicao a deteo de deficincias congnitas e adquiridas destes fatores, assim
como a monitorizao da heparinoterapia4.
Este sistema de coagulao iniciado pela adio de cloreto de clcio11.
FIBRINOGNIO
O fibrinognio uma glicoprotena presente no plasma numa concentrao de 2 a 4

g/L. sintetizado no fgado (1,7 a 5 g/dia) e nos megacaricitos e tem um tempo de
semivida de cerca de 3 -5 dias.
O doseamento do fibrinognio um teste para determinao quantitativa in vitro dos
nveis de fibrinognio em plasma citratado.
A transformao do fibrinognio em fibrina induzida por adio de uma soluo de
trombina clcica em excesso. A concentrao de fibrinognio diretamente
proporcional ao tempo de coagulao4.
Este equipamento d o valor de fibrinognio atravs de um clculo interno do
equipamento11.
Diana Delgado
91
ADAMS A1C HA8160
O equipamento ADAMS A1C HA8160

um
analisador
glico-hemoglobina.
automtico
Este
de
aparelho
efetua a medio da hemoglobina A1c e

fornece as informaes necessrias
para o controlo do acar no sangue
das pessoas diabticas, ou seja, til
para monitorizar a longo prazo as os
diabticos11.
A hemoglobina glicosilada formada
Figura 24 - ADAMS A1C HA8160
por reaes no enzimticas entre a

hemoglobina e a glicose. A formao desta hemoglobina irreversvel, e a sua
concentrao sangunea depende da vida mdia dos glbulos vermelhos (120 dias) e
da concentrao srica de glicose. Este equipamento pode tambm medir a HbA1, a
HbF estveis e padres fracionados.
O doseamento destas hemoglobinas feito por Cromatografia Lquida de Alta
Presso, que usa uma coluna composta por resina de troca inica de carter catinico
de fase reversa. A leitura das fraes obtidas realizada a 415 nm e 500 nm.
Podendo assim obter-se as seguintes fraes: HbA1c, HbA1, HbF, HbA2 e
hemoglobinas variantes. Este aparelho capaz de diluir, hemolisar e remover a base
de Schiff (resultado da reao responsvel pela formao da hemoglobina glicosilada)
automaticamente. Esta remoo feita com tetrapolifosfato (pH 6,0) durante 2 minutos
a 48c. Aps 4,2 minutos obtm-se o cromatograma.
Os valores normais da hemoglobina glicosilada so entre 4% A 6%. Quando est
acima de 7% existe a associao a um risco maior de complicaes crnicas11.
CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESSO
O uso de presses elevadas permite uma reduo no dimetro das partculas da fase
estacionria, localizada no interior da coluna cromatogrfica, o que promove uma
separao mais eficiente dos componentes da amostra. Essa "miniaturizao" das
partculas da coluna permite o uso de colunas menores, volumes menores de
Diana Delgado
92
amostras e um gasto menor de fase mvel. Assim sendo, em cromatografia lquida de

alta presso trabalha na faixa dos microlitros (L).
VESMATIC 30/30 PLUS
Este
equipamento
automtico
utilizado na determinao da velocidade

de sedimentao globular.
Este analisador foi concebido para a
determinao simultnea da Velocidade
de Sedimentao Globlar (VSG) em 30
amostras
de
sangue
(humano
ou
anima). A determinao da VSG

automtica mas os resultados so
comparveis aos obtidos pelo mtodo
Figura 25 - VESMATIC 30/30 PLUS
de Westergren (mtodo referncia). Permite obter resultados em 25 minutos incluindo

a homogeneizao da amostra. Com a utilizao de ciclos rpidos, o tempo de anlise
pode ser reduzido para 10 minutos e 15 minutos para a primeira e segunda hora
respetivamente11.
VELOCIDADE DE SEDIMENTAO GLOBULAR
a velocidade a que sedimentam os eritrcitos, num sangue anticoagulado, num

determinado espao de tempo, quando introduzida a amostra em tubos ou pipetas
com caractersticas especiais.
Quando uma amostra de sangue anticoagulado fica em repouso, os eritrcitos vo-se
aproximando uns dos outros e agregam-se, formando estruturas cilndricas
semelhantes a pilhas de moedas. A este fenmeno d-se o nome de Fenmeno de
Rouleaux.
Se, durante o tempo estabelecido para a sedimentao, realizarmos leituras em curtos
intervalos de tempo, consegue-se verificar que o fenmeno de sedimentao ocorre
atravs de uma curva: numa primeira fase a VS muito lenta (formao dos
agregados), na fase intermdia verifica-se uma sedimentao rpida ("descida" dos
empilhamentos) e a fase final , novamente, mais lenta (compresso das formaes
de Rouleaux) .
Diana Delgado
93
Figura 26 Fenmeno de Rouleux
Assim quanto mais comprido for o tubo, mais tempo o segundo perodo pode durar e
maior a VS pode ser, o que acontece no mtodo de Westergren. Com o tubo mais
pequeno, como no mtodo de Wintrobe, quando os rouleaux sedimentam rapidamente
a formao do pack pode comear antes da hora o que torna o mtodo pouco
sensvel para velocidades de sedimentao elevadas, o contrrio acontece com o
mtodo de Westergren. Por isso, e por ser de relativa fcil execuo, o mtodo
adotado internacionalmente.
A amostra primordial para este teste sangue total anticoagulado com citrato de sdio
1/5. O teste deve ser efetuado nas 2 horas aps a colheita do sangue, ou 6 horas se o
sangue for mantido a 4C 4.
IMPORTNCIA CLNICA:
A VS representa a fase de resposta aguda a um estado inflamatrio. Este valor
medido num perodo de tempo especfico e bastante influenciado pela concentrao
de algumas protenas, cuja concentrao plasmtica varia na presena de processos
inflamatrios ou outras patologias. O valor tambm afetado por algumas
propriedades dos eritrcitos e por anemia.
Valores elevados so tambm encontrados em situaes como: mieloma mltiplo,
leucemia, linfomas, cancro da mama e pulmo, artrite reumatoide, falha pulmonar. Os
valores so tambm bastante elevados na presena de metstases no fgado, e
doenas inflamatrias agudas e crnicas4.
Diana Delgado
94
HB GOLD
O HbGold um equipamento automtico
destinado
ao
ensaio
de
fraes
de
hemoglobina (HbA1c, HbA2, HbF, HbE,
HbD,
HbS
HbC),
atravs
de
cromatografia de troca de caties em

baixa presso, em conjunto com um
gradiente de fora inica, para eluir os
Figura 27 HB GOLD
subtipos e variantes da hemoglobina humana de sangue total hemolisado. As fraes

de hemoglobina separadas so monitorizadas atravs da absoro de luz a 415nm.
O cromatograma obtido gravado e armazenado pelo computador interno. Um
programa de software analisa o cromatograma e gera um relatrio de resultados no
cran e na impressora.
Este aparelho vai permitir o doseamento das hemoglobinas F, A2, e de hemoglobinas
variantes como hemoglobina S, C11.
A tcnica HB-Gold utilizada em doentes em que tenha sido detetada uma anemia
microctica e hipocrmica, atravs de uma determinao do hemograma, de forma a
comprovar a presena ou ausncia de hemoglobinopatias, isto , para verificar a
existncia de uma possvel afeo que se traduz numa alterao da hemoglobina.
Num paciente com HbA2 aumentada ( - talassmia) e/ou que apresenta HbS faz-se
um estudo pormenorizado.
As manifestaes clnicas das hemoglobinopatias variam muito de acordo com o tipo
de problema apresentado. As crianas com anemia falciforme (assim denominada
devido aos glbulos vermelhos apresentam uma forma de foice) produzem
hemoglobina S em vez da hemoglobina A normal, sendo altamente suscetveis
anemia hemoltica, por rutura dos glbulos vermelhos e a infees que podem levar
spsis (infeo generalizada do sangue). As obstrues em pequenos vasos causam
dor e comprometem progressivamente a funo de alguns rgos e tecidos. As
alteraes nas hemcias afetam tambm o bao, que aumenta muito de tamanho e
contribui ainda mais para a anemia. As talassmias, caracterizadas por deficiente
produo de hemoglobina, so marcadas clinicamente pela presena de anemia.
A anemia falciforme bastante comum em negros, estima-se que o gene esteja
presente em 6 a 10% dos negros americanos, o que leva a doena a ocorrer em 1
para cada 400 a 1000 nascimentos nesse grupo populacional. As talassmias so
Diana Delgado
95
mais frequentes em populaes descendentes de grupos originrios do Mediterrneo.

Em seu conjunto, estima-se que 5% de toda populao mundial seja portadora de
algum distrbio de hemoglobina.
Em 95% dos casos as hemoglobinas anormais diferem nas normais num aminocido
que foi substitudo por outro. Isto leva a que as hemoglobinas possuam propriedades
distintas de solubilidade, de afinidade para o O2, carga eltrica, entre outras coisas4.
Resultados
Figura 28 Exemplo de um grfico normal
Este grfico tpico de um paciente normal, cada pico do grfico corresponde

quantidade de hemoglobina na amostra. Quanto maior for o pico mais concentrao
da respetiva hemoglobina existe na amostra.
CONTAGEM DE RETICULCITOS
O reticulcito corresponde ao estdio de maturao do glbulo vermelho que acaba
logo que a clula est madura, ou seja, quando o glbulo vermelho adquire a forma
bicncava e no contm nenhum organelo. So glbulos vermelhos policromatfilos,
que apresentam uma estrutura reticular de RNA quando corados por um corante vital
(denomina-se colorao supravital, uma vez que cora a clula viva). A contagem de
reticulcitos no sangue perifrico reflete a atividade eritropoitica.
Os reticulcitos encontram-se aumentados nas anemias hemolticas, anemia por
hemorragia aguda, boa resposta teraputica na anemia megaloblstica e anemia
ferropnica.
os
reticulcitos
encontram-se
diminudos
na
anemia
aplstica,
ferropnica, megaloblstica, sideroblstica, anemia da doena crnica, anemia da

insuficincia renal, anemia da doena heptica.
Diana Delgado
96
A tcnica da colorao supravital utiliza o corante Azul Cresil Brilhante. A contagem

feita posteriormente no microscpio tico13.
CONTAGEM DE PLAQUETAS (CMARA DE PLAQUETAS)

As plaquetas, tambm chamadas Trombcitos, tm uma funo essencial nos
processos de hemstase e coagulao do sangue. Na realidade no so clulas; so
corpsculos ou fragmentos de uma clula maior chamada megacaricito (clula de um
tamanho considervel residente na medula ssea, e a sua fragmentao origina ento
as plaquetas que so lanadas na circulao). Estas tm a forma de minsculos
discos arredondados, sem ncleo. A superfcie externa das plaquetas carregada
com cargas eltricas negativas semelhantes s do endotlio vascular.
Quando necessrio a confirmao do valor de plaquetas dado pelo aparelho
automtico, realiza-se a contagem das mesmas em cmara de Neubauer, aps a
mistura de 10 l de sangue total com 190 l de soluo de oxalato de amnio 1%. A
contagem feita posteriormente no microscpio tico13.
CRIOAGLUTININAS
As crioaglutininas so anticorpos IgM dirigidos contra o antignio I da membrana
eritrocitria, e assim so capazes de aglutinar hemcias humanas a baixas
temperaturas. Parte-se do princpio que estas podem ser formadas aps exposio a
microrganismos que apresentam grupos antignicos semelhantes aos encontrados
nas hemcias. Em condies normais necessitam de refrigerao para que ocorra a
reao com as hemcias. Apresentam-se elevadas em diferentes situaes, como nas
infees por Mycoplasma peumoniae, vrus influenza, mononucleose infeciosa,
doena do colagnio, artrite reumatoide e linfomas. Esta tcnica mais utilizada para
o diagnstico de infees por Mycoplasma peumoniae. Ttulos altos podem raramente
aglutinar as hemcias. Em temperaturas prximas da temperatura normal do corpo
humano podem levar anemia hemoltica. Pode tambm interferir na determinao do
grupo sanguneo e nas transfuses sanguneas.
Mtodo das crioaglutininas:
1- Num tubo de vidro grande coloca-se o sangue com anticoagulante citrato de sdio
1/5, e centrifuga-se 2 minutos a 3000 rpm. Depois de centrifugado, retira-se o plasma
e coloca-se mais ou menos a mesma quantidade de soro de forma a lavar os glbulos,
realizam-se pelo menos 3 lavagens dos glbulos;
2- Depois utilizam-se 5 tubos pequenos, 1 tubo controlo (no se coloca soro do
doente) e 4 tubos para as diluies (em todos os tubos se coloca 500l do soro
Diana Delgado
97
fisiolgico). No primeiro tubo coloca-se 500l do soro do doente. Homogeniza-se com

a pipeta e fazem-se diluies seriadas, em que no ltimo tubo os restantes 500l so
rejeitados;
3- Da lavagem dos glbulos prepara-se a soluo das hemcias: 10 mL soro
fisiolgico + 50l das hemcias. Depois coloca-se 500l desta soluo das hemcias
em cada tubo, incluindo o tubo controlo;
4- Por fim colocam-se todos os tubos tapados no frigorfico, e no dia seguinte verificase se h aglutinao ou no13.
CRIOGLOBULINAS
As crioglobulinas so protenas sricas precipitam a baixas temperaturas (4C) e se
redissolvem aps serem aquecidas. A sua presena no sangue (crioglobulinmia)
usualmente associada com doena imunolgica, mas pode tambm ocorrer sem que
haja imunopatologia conhecida. Se os pacientes com crioglobulinmia forem
submetidos ao frio, eles podem sentir sintomas semelhantes ao da doena de
Raynaud (dor, cianose e frieza de dedos), que tipicamente resultam de precipitao de
crioglobulinas em partes mais frias do corpo.
A tcnica utilizada consiste apenas em colocar em simultneo um tubo do soro do
doente na estufa e outro no frigorifico e avaliar a presena ou ausncia de
aglutinaes no tubo que se encontra no frigorifico, durante 7 dias13.
TIPAGEM SANGUNEA SISTEMA AB0 e Rh

O sistema AB0 foi o primeiro a ser descoberto e tambm o mais importante para a
prtica transfusional. Os antignios que pertencem ao sistema AB0, esto presentes
nas membranas dos eritrcitos, clulas epiteliais e endoteliais, esto tambm
presentes na forma solvel no plasma e noutros lquidos orgnicos. Existem quatro
grupos sanguneos: A, B, AB e 0 (ausncia de antignios A e B).
Quando se refere que um indivduo Rh Positivo, significa que tem o antignio D.
Aps os antgenos A e B (do sistema AB0), o antgeno D o mais importante na
prtica transfusional.
A tipagem AB0 e Rh feita no laboratrio consiste na utilizao de antissoros
especficos, Anti-A, Anti-B, Anti-A+B MONOCLONAL e Anti-D MONOCLONAL.
A presena de aglutinao direta determina a presena do respetivo antignio
presente e assim determina o grupo sanguneo.
Diana Delgado
98
Quando no h aglutinao com o soro anti-D o sangue em causa enviado para o

laboratrio externo, para confirmao, atendendo probabilidade de existncia de
antignios D de fraca expresso13.
ESFREGAOS SANGUNEOS E COLORAO DE MAY-GRNWALD-GIEMSA
Para ser considerado um bom esfregao este deve ter
entre 3 a 4 cm de
comprimento, ter bordos visveis e retilneos, deve ser regular (sem travagens),
relativamente fino, sem buracos (originados pelo facto da lmina estar engordurada) e
por fim deve terminar arredondado apresentando cabea, corpo e cauda. Quanto mais
rpido for o movimento para espalhar a gota de sangue, mais liso e espesso ser o
esfregao.
Sempre que se verifica a necessidade de confirmar alguma informao dada pelo
equipamento automtico sobre os glbulos brancos, vermelhos e seus percursores
realiza-se a colorao do esfragao do sangue respetivo e visualiza-se ao microscpio
tico.
A colorao utilizada a de May-Grnwald-Giemsa: Esta colorao uma
combinao das coloraes de Grunwald e de Giemsa. uma combinao de dois
corantes que contm eosina e derivados do azul-de-metileno.
O resultado final desta clorao : os ncleos dos leuccitos aparecem de cor
azul-plido, o citoplasma a azul muito claro ou incolor, as granulaes neutrfilas a
vermelho-claro, os basfilos a azul-escuro e os eosinfilos a vermelho alaranjado13.
PESQUISA DE CLULAS FALCIFORMES
A pesquisa de clulas falciformes til no despiste da drepanocitose, uma deficincia
na estrutura da hemoglobina que leva a formao de clulas falciformes. Esta doena
caracterstica da populao Africana, mas pode ser tambm encontrada noutras
populaes. A forma homozigtica da drepanicitose (HbSS) causa anemia hemoltica
moderada a severa. Est associada a episdios de ocluso vascular resultando em
crises agudas e eventualmente em danos graves nos rgos. O estado heterozigtico
(HbAS) muito comum em todo o mundo no estando associado a anomalias
hemolticas graves. Para a deteo da presena de HbS faz-se uma eletroforese das
hemoglobinas, e se estiver presente hemoglobina S segue-se para o passo seguinte
que consiste na diminuio da solubilidade da hemoglobina e baixas tenses de
oxignio, que se executa da seguinte forma: numa lmina coloca-se uma gota de
sangue e uma gota de soro fisiolgico, mistura-se e cobre-se com uma lamela. De
seguida comprimir a lamela para que saia um pouco de sangue pelos lados da mesma
Diana Delgado
99
e recolhe-se esse excesso com papel de filtro. Depois cobrem-se os bordos da lamela
com parafina lquida ou cera e deixa-se solidificar. Esperar 6 a 24 horas e observar ao
microscpio tico13.
TEMPO DE HEMORRAGIA- MTODO DE DUKE
O tempo de hemorragia o teste mais bsico para o estudo da coagulao sangunea,
usado no diagnstico das doenas hemorrgicas e como exame pr-operatrio.
Baseia-se no mtodo de Duke, em que feita uma pequena inciso no lbulo da
orelha com uma lanceta, e depois com um papel de filtro vai se limpando o sangue de
30 em 30 segundos at a hemorragia parar, e medido o tempo de hemorragia. A
cessao da hemorragia deve ser antes dos 2 3 minutos, e indica a formao do
cogulo que dependente do nmero de plaquetas e da sua capacidade de adeso
ao endotlio e formao de agregados13.
TEMPO DE COAGULAO
o tempo que decorre desde que o sangue colhido at formao do cogulo.
Mede-se com o sangue colocado num tubo de vidro com 9 mm de dimetro
aproximadamente. O tubo colocado em banho-maria a 37C alguns minutos, e
durante esses minutos o tubo vai sendo retirado do banho-maria a cada 30 segundos,
at que se veja que o sangue coagulou e j no se move nas paredes do tubo. O
tempo de coagulao normal de 5 a 10 minutos, podendo considerar-se 7 minutos o
tempo mdio13.
Diana Delgado
100
CONTROLO DE QUALIDADE
Entende-se por controlo de qualidade interno, o conjunto de procedimentos postos em
prtica num laboratrio com vista a permitir um controlo da qualidade dos resultados
das anlises medida que as mesmas so executadas, usando dados obtidos pela
anlise de produtos de controlo de qualidade. O controlo de qualidade permite
trabalhar com fiabilidade, permite saber se os resultados obtidos so de facto reais.
Os Objetivos do Controle de Qualidade so fornecer um contnuo registo da preciso
dos resultados laboratoriais, fornecer aviso precoce quanto s tendncias e desvios
nos resultados do controlo, de modo que se possa tomar uma ao corretiva antes
que os resultados deixem de ser precisos, permitir avaliar a fidelidade dos resultados,
pela monitorizao da preciso, atravs da comparao dos resultados da amostra
controle com os valores pr-estabelecidos, permitir comparaes entre diferentes
tcnicas e a monitorizao do desempenho dos analisadores automticos
Um produto de CQ um material semelhante ao do paciente, preparado a partir de
soro humano ou de urina. Pode ser liofilizado ou lquido e composto por um ou mais
constituintes (analitos) de concentrao conhecida. Geralmente utilizam-se dois ou
trs nveis de controlo, sendo um deles com valores semelhantes aos valores normais
e os outros dois para valores patolgicos.
Para a avaliao dos resultados do controlo de qualidade importante a aplicao e
conhecimento das Cartas de Controlo de Levey-Jennings.
A calibrao fundamental no laboratrio de anlises clnicas, consiste num ajuste
aos valores reais do que estamos a analisar e obtida uma reta de calibrao para
leitura dos resultados.
fundamental calibrar sempre que se muda o lote de reagente, ou quando os valores
de controlo de qualidade no esto adequados aos valores que esperamos.
Cartas de Controlo de Levey-Jennings
O Desvio Padro (DP) utilizado para elaborar as cartas de Levey-Jennings (LJ),
estas cartas so utilizadas para monitorizar os valores do CQ sucessivos. A carta
elaborada para cada teste e para cada nvel de controlo.
O primeiro passo consiste em calcular os limites de aceitao, esses limites so +/1DP, +/- 2DP, +/- 3DP da Mdia. O laboratrio precisa de documentar que os testes
de Controlo de Qualidade foram realizados. Assim, necessrio guard-los em
suporte informtico ou em papel. Estes resultados devem acompanhar a carta de
Diana Delgado
101
controlo. A observao desta carta permite detetar erros sistemticos e erros

aleatrios.
Erros Sistemticos:
Os erros sistemticos so evidenciados pela alterao da mdia dos valores de
controlo. A alterao pode ser gradual (tendncias) ou abrupta (desvios).
A tendncia indica uma perda gradual de fiabilidade no processo analtico,
normalmente subtil e tem como causas mais frequentes a deteriorao da fonte
luminosa do instrumento de medida, a acumulao gradual de detritos nos tubos de
reagentes ou amostras, a acumulao gradual de detritos na superfcie dos
eltrodos, a idade dos reagentes, a deteriorao gradual de materiais, deteriorao
gradual da cmara de temperatura e a deteriorao gradual da integridade do filtro de
luz
Os desvios so mudanas abruptas nos valores mdios do controlo e so causados
por falhas repentinas ou mudanas da fonte luminosa, modificaes na preparao do
reagente, mudana no lote de reagentes, manuteno do equipamento, falhas
repentinas na temperatura e falha no sistema de pipetagem.
Para avaliar as cartas de controlo podemos utilizar como base as regras de Westgard,
as quais podem ser usadas individualmente ou combinadas:
A violao de qualquer uma das seguintes regras no requer necessariamente uma
rejeio do processo analtico, apenas identifica pequenos erros sistemticos que no
tm relevncia ou significado clnico.
Regra 12DP - Uma observao de controlo que exceda a mdia +/- 2 DP, mas no
ultrapasse +/-3DP considerada apenas como um alarme. Aconselha-se a estar
atento aos resultados posteriores. Os resultados dos doentes podem ser validados.
Regra 31DP - Trs resultados consecutivos maiores que 1s mas menores que +/- 2DP,
do mesmo lado da mdia. Erro sistemtico.
Regra 41DP Quatro resultados consecutivos maior que 1DP mas menor que +/- 2DP,
do mesmo lado da mdia: Erro sistemtico O uso de Regra 31DP
deteta mais
precocemente estes erros.

Regra 10X - Regra combinada de 10 observaes consecutivas maior que 1DP mas
menor que +/- 2DP, do mesmo lado da mdia: Erro sistemtico. Pode ser tambm
aplicada para 7, 8, 9 ou 12 resultados consecutivos do mesmo lado da Mdia.
Diana Delgado
102
A violao de qualquer uma das regras seguintes pe em causa todo processo

analtico em curso e obriga a executar novas determinaes do controlo e das
amostras depois de selecionado o erro.
Regra 13DP - Uma observao de controlo que exceda a mdia +/- 3DP
Sensvel ao erro fortuito. Comeo de um erro sistemtico
Regra 22DP - Este erro identifica unicamente um erro sistemtico
O critrio de violao : Dois resultados consecutivos de CQ que excedam os limites
da mdia +/- 2DP, mas no o limite +/- 3DP do mesmo lado da mdia
Regra R4DP Esta regra deteta um erro fortuito e aplicada apenas quando na
mesma corrida se utilizam dois nveis de controle diferentes e quando a diferena
entre eles de 4DP, por exemplo o nvel de controlo normal posiciona-se no 2DP e o
nvel de controlo anormal no +2DP1.
OLYMPUS AU 400
O controlo de qualidade deste aparelho feito diariamente. Faz-se um controlo geral,
com dois nveis (baixo, alto), um controlo de qualidade especfico para HDL/LDL
tambm com dois nveis, e um controlo de nvel mdio, de nome ITA ( Olumpus
Integrated Technologies Amrica, Inc. Organizao especializada nos produtos
Olympus), que serve para monitorizar o desempenho analtico de determinados
reagentes do aparelho. Faz-se tambm diariamente a calibrao do ionograma, mas
tambm existe um calibrador geral (soro humano com aditivos qumicos de origem
animal e vegetal) e calibradores especficos para determinadas determinaes, como:
APO A1 e APO B, ASO, PCR, HDL, LDL, microalbuminria e RF, que se usam caso o
controlo de qualidade d fora do intervalo + 1 desvio padro /- 1 desvio padro, ou
ento quando se muda o lote de reagentes dos testes.
AUTION MAX AX 4280

O controlo de qualidade deste aparelho tem dois nveis, o 1 e 2 (alto e baixo ) e os
nveis so feitos alternadamente. A calibrao realizada de 15 em 15 dias.
ADVIA CENTAUR
Este equipamento apresenta trs nveis de controlo que so utilizados para a maioria
das tcnicas de forma alternada. Existem tambm controlos especficos para os
marcadores tumorais (3 nveis, usados alternadamente), para a Paratormona (3 nveis,
Diana Delgado
103
usados alternadamente), para os anticorpos antitiroideus (2 nveis, usados

alternadamente) e para os marcadores infeciosos da hepatite B e C (2 nveis, usados
alternadamente).
A calibrao das tcnicas efetuada aquando a mudana do lote de reagentes e
sempre que o controlo de qualidade esteja fora dos limites considerados aceitveis.
VIDAS
O controlo de qualidade deste aparelho vem includo na embalagem Vidas de cada
teste. Controlo esse que realizado na abertura de cada nova embalagem para
verificar a ausncia de alteraes dos reagentes e cada calibrao deve ser tambm
verificada utilizando este controlo.
A calibrao realizada na receo de cada novo lote e todos os 14 dias.
MINICAP
Neste aparelho feito um controlo de qualidade todos os dias, este controlo tem
apenas um nvel, o nvel mdio.
SYSMEX XT 180i
O controlo de qualidade neste aparelho feito diariamente, alternando os dias com
trs nveis de controlo: um baixo, um mdio e um alto. O controlo de qualidade externo
feito 3 vezes por ano.
SYSMEX CA 500
Neste equipamento o controlo feito todos os dias, com amostras do dia anterior,
exceto segunda-feira, em que efetuado um controlo de qualidade comprado ao
fornecedor, consiste em dois nveis, um alto e um baixo e feito alternadamente a
cada semana. O controlo de qualidade externo feito uma vez por ano.
ADAMS A1C HA8160

O controlo de qualidade interno feito todos os dias com controlo de qualidade
comprado ao fornecedor, estes controlos tm dois nveis, um alto e um baixo, e so
feitos alternadamente. O controlo de qualidade externo feito uma vez por ano.
VESMATIC 30/30 PLUS

Neste aparelho utiliza-se um controlo interno do fornecedor, que realizado todos os
dias, apresenta dois nveis, um normal e outro patolgico, esses dois nveis so
efetuados em simultneo todos os dias. O controlo de qualidade externo feito uma
vez por ano.
HB GOLD
No aparelho da eletroforese de hemoglobinas no se realiza controlo de qualidade
interno, apenas feito um controlo de qualidade externo uma vez por ano.
Diana Delgado
104
A Avaliao Externa da Qualidade constituda por um organismo exterior que

procede avaliao da qualidade dos resultados fornecidos pelo laboratrio. Neste
laboratrio usa-se o AEFA (Associao Espanhola de Farmacuticos Analistas), que
realizado mensalmente na maioria das determinaes.
CRITRIOS DE VALIDAO TCNICA

A validao tcnica consiste em validar a execuo tcnica, os reagentes, os
equipamentos e as amostras. Os resultados, aps a calibrao, a verificao da
calibrao e a validao do controlo de qualidade so validados um a um. Se algum
resultado levantar dvidas ou se se incluir em critrios de excluso pr-definidos,
como por exemplo, uma discrepncia com valores anteriores ou fora de limites
definidos pelo laboratrio, este sujeito a confirmao.
Diana Delgado
105
CONCLUSO
A realizao deste estgio foi uma experincia enriquecedora, pois permitiu-me
aprofundar os conhecimentos adquiridos nas reas de Bioqumica, Imunologia e
Hematologia e posso afirmar que atingi os objetivos.
As principais atividades profissionais consistiram em:
- Realizao de colheitas e restantes atividades da fase pr-analtica;
- Testar e controlar os mtodos usados na execuo das anlises;
- Colaborar na qualidade tcnica e instrumental;
- Providenciar a boa manuteno dos equipamentos;
- Executar as anlises Bioqumicas, Imunolgicas e Hematolgicas;
- Efetuar a validao tcnica dos resultados.
Assim, estou convicta de que este estgio me trar bons frutos ao longo do meu
percurso profissional.
Diana Delgado
106
BIBLIOGRAFIA
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Clnicas e Sade Pblica;
2. Apontamentos das aulas de Bioqumica Mestrado em Anlises Clnicas e
Licenciatura em Anlises Clnicas e Sade Pblica;
3. Apontamentos das aulas de Imunologia - Mestrado em Anlises Clnicas e
4. Apontamentos das aulas de Hematologia - Mestrado em Anlises Clnicas e
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Imunologia e Hematologia;
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Diana Delgado
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19. http://www.mdsaude.com/2009/08/exame-de-urina.html#ixzz1hv9yHxre;
20. http://www2.dbd.puc-rio.br/pergamum/tesesabertas/0212144_06_cap_02.pdf;
21. http://www.sergiofranco.com.br/bioinforme/index.asp?cs=Bioquimica&ps=eletro
foreseProteinasSericas;
22. http://www.gendiag.com.br/nossos_produtos/pesquisa/RVR-CO100;
23. http://pt.wikipedia.org/wiki/Hematologia;
Diana Delgado
108

Relatorio de Estagio

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UNIVERSIDADE DE LISBOA

RELATRIO DE ESTGIO E MONOGRAFIA

MESTRADO EM ANLISES CLNICAS

Diana Isabel Heitor Delgado

ORIENTAO: DRA. MARGARIDA MENDES

MESTRADO EM ANLISES CLNICAS

Diana Isabel Heitor Delgado

No mbito do Mestrado em Anlises Clnicas da Faculdade de Farmcia, foi solicitado

Mestrado em Anlises Clnica

Mestrado em Anlises Clnica

Mestrado em Anlises Clnica

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MONOGRAFIA DIAGNSTICO LABORATORIAL DO EBV ............................................... 109

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Faculdade de Farmcia por ter concebido e posto em prtica este mestrado.

A Todos, os meus sinceros agradecimentos

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Figura 1- Quadro de Pessoal

A Clnica Nova Era, mais detalhadamente o Laboratrio de Anlises Clnicas,

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Diretor Geral: Dr. Paulo Freire

No decorrer do estgio, realizaram-se as atividades indicadas no cronograma:

Figura 3 - Cronograma de Estgio

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