Escuela superior politcnica del

litoral
Facultad de ciencias de la vida
Microbiologa General
LABORATORIO PRCTICO

Fc
v
Facultad de
ciencias de la vida

CDIGO
201500039

MATERIA

Microbiologa General

LABORATORIO
NOMBRE
TEMA
EXPERIENCIA

Protal CIBE
Jordy Nicols Chiquito Indacochea
PARALELO
Diluciones seriadas
Disoluciones seriadas, siembra de microorganismos

Objetivos
Objetivo general
-Realizar diluciones seriadas a partir de una muestra madre para el conteo
respectivo de colonias bacterianas presentes en una muestra (fresa)
Objetivos especficos
-Realizar el conteo aproximado de bacterias en una muestra.
-Establecer la importancia que tienen las diluciones seriadas cuando no se
tiene una muestra lo suficientemente concentrada.
-Realizar el conteo a travs de clculos UFC.

Introduccin
Disoluciones seriadas
En qumica una dilucin es un proceso que reduce la concentracin de una
sustancia en una solucin. Una solucin seriada es la dilucin repetida de
una solucin para conseguir una dilucin geomtrica de la solucin original.
Frecuentemente se realiza en experimentos que requieran soluciones
altamente diluidas con gran exactitud, tales como aquellas que impliquen
curvas de concentracin en una escala logartmica. Las diluciones seriadas
son altamente usadas en las ciencias experimentales como la bioqumica,
microbiologa, farmacologa y fsica.
(Wikihow-Como hacer dilusiones seriadas , 2011)
En general se parte de una solucin concentrada y se preparan series de
diluciones al dcimo (1:10) o al medio (1:2). De esta manera se obtiene una

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serie de soluciones relacionadas por ejemplo por un factor de dilucin 10 es

decir 1/10; 1/100; 1/1000 y as sucesivamente. O la otra serie es 1/2; 1/4;
1/8; 1/16; 1/32 etc. (E.Coto, 2009)
Por ejemplo: si partimos de una solucin de 50mg/ml de una sustancia
(Solucin A)
a. Dilucin 1/10: 1ml de la solucin A + 9 ml de agua= una solucin de 5
mg/ml

(dilucin

1:10)

b. Dilucin 1/2: 5 ml de la solucin A + 5 ml de agua= una solucin de 25

mg /ml (dilucin 1:2)
El CALDO LURIA BERTARI (LB)
El CALDO LURIA (Luria Bertani LB) o caldo LB contiene peptona de casena y
extracto de levadura que proporcionan al medio los nutrientes necesarios
para el desarrollo ptimo de la mayora de los microorganismos. El cloruro
de sodio ayuda a mantener el equilibrio osmtico. (Dibico- Caldo Luria )

Equipos y materiales
Materiales
-Tubos de ensayos
-Cajas Petri
-Mecheros de alcohol
-Solucin bacteriana
-Agar LB
-Micro pipeta
Equipos
-Incubadora
PROCEDIMIENTO:
1. Colocar 9ml del caldo nutritivo LB en cuatro tubos de ensayos, usando la pipeta.

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Figura 1 Absorcin de 9 ml
de caldo mediante la pipeta

2. Coger la muestra de fresa y pesar 1gr.

Figura 2: Calculando el peso de la muestra en la balanza analtica.

2. Meter la muestra en una funda plstica y agregar 9ml del caldo nutritivo LB.

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Figura 3: Introduccin de 9ml del caldo en la muestra

3. A masar la muestra y esperar a que esta repose por unos 10 minutos, esta
muestra corresponder a la muestra madre

Figura 4: Muestra dejado al reposo.

4. Se procede a realizar la dilucin:

*En la Primera dilucin se procede a transferir 1 ml de la muestra madre con la
micro pipeta al primer tubo de ensayo, agitar por un minuto y rotularlo como 10 -1.
*En la Segunda dilucin se transfiere 1 ml de la dilucin de 10 -1 con la micro
pipeta al segundo tubo de ensayo, agitar por un minuto y se rotula como 10-2.
*En la Tercera dilucin se prosigue a transferir 1 ml ms de la dilucin de 10-2 con
la micro pipeta al tercer tubo de ensayo, agitar por un minuto y se la marca 10 -3.

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*Durante la Cuarta dilucin as mismo se Transfiere 1 ml de la dilucin de 10 -3 con

la micro pipeta al cuarto tubo de ensayo, agitar por un minuto y se la rotula como
10-4.
*Finalmente en la Quinta dilucin Transferir 1 ml de la dilucin de 10-4 con la
micro pipeta al quinto tubo de ensayo, agitar por un minuto y se la etiqueta como
10-5.

Ilustracin 5: Procedimiento de una dilucin seriada

Fuente: Microbiologa por Quistin Garca Hylary

Ilustracin 6: Tomando 1ml de la muestra madre para proceder a la dilucin

seriada

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Ilustracin 7: Realizando las diluciones en cada uno de los 5 respectivos tubos de

ensayo
5.- Realizar el sembrado por superficie en el agar para cada muestra de tubo de
ensayo procurando hacerlo cerca del calor del mechero de bunsen.

Ilustracin 8: Sembrado por superficie para cada una de las muestras.

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Resultados

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Ilustracin 9: Cultivo bacteriano correspondiente a las muestras de disolucin de

de 10-3 y 10-4 con su respectiva replica.

Observaciones
*Como se observa en las ilustraciones no fue posible el crecimiento
bacteriano debido a que las muestras fueron contaminadas, adems el
autoclave se encontraba averiado por lo que no llego a la temperatura
ptima de 120C para su ptimo desarrollo y crecimiento.

Conclusiones
*En muchos casos se necesita preparar disoluciones con concentraciones
extremadamente bajas de un soluto, hasta un punto que es difcil o
imposible en la prctica medir la cantidad necesaria de producto slido o el
volumen de solucin madre. En esas situaciones es importante la dilucin
seriada ya que es necesario preparar una solucin de mayor concentracin
(solucin de stock o solucin madre) y hacer diluciones sucesivas a partir de
sta hasta alcanzar la concentracin deseada.
* El banco de diluciones seriadas son un tipo de dilucin consecutiva en
el cual se mantiene constante el factor de dilucin en cada paso.
*Las diluciones seriadas tiene muchas ventajas prcticas, desde los clculos
previos, pasando por la manipulacin de volmenes y hasta en la
representacin grfica de resultados.

Bibliografa
-(s.f.). Obtenido de DILUCIONES SERIADAS:
http://www3.uah.es/cuadernolab/p/index.php/diluciones-seriadas/
-Wikihow-Como hacer dilusiones seriadas . (2011). Obtenido de
http://es.wikihow.com/hacer-diluciones-seriadas
-Dibico- Caldo Luria . (s.f.). Obtenido de http://www.probiotek.com/wpcontent/uploads/2014/01/1236-E_CALDO-LURIA.pdf
-E.Coto, C. (2009). Captulo 2. Las diluciones seriadas. Obtenido de
http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/contratapa/dilucion/dilucion.htm