ndice

Tema: Espectroscopa de Luminiscencia.............................................................2

Objetivos...............................................................................................................3
Introduccin..........................................................................................................4
Marco terico........................................................................................................6
Teora de la Fluorescencia y de la Fosforescencia..............................................6
Estados excitados que producen fluorescencia y fosforescencia........................6
Espn del electrn.................................................................................................6
Estados excitados singletes/triplete.....................................................................7
Velocidades de absorcin y de emisin...............................................................7
Procesos de desactivacin...................................................................................8
Fosforescencia......................................................................................................9
Variables que afectan a la fluorescencia y a la fosforescencia............................9
Rendimiento cuntico...........................................................................................9
Tipos de transiciones en fluorescencia..............................................................10
Fluorescencia y estructura..................................................................................10
Efectos de la temperatura y del disolvente.........................................................11
Efecto del oxgeno disuelto.................................................................................11
Efecto de la concentracin en la intensidad de fluorescencia...........................12
Instrumentos para la medida de la fluorescencia y de la fosforescencia...........12
Espectrometra de luminiscencia molecular.......................................................14
Componentes de los fluormetros y de los espectrofluormetros......................14
Fuentes...............................................................................................................14
Lmparas............................................................................................................15
Lseres...............................................................................................................15
Filtros y monocromadores..................................................................................15
Detectores...........................................................................................................16
Cubetas y compartimentos para las cubetas.....................................................16
Diseos de instrumentos....................................................................................16
Fluormetros.......................................................................................................16
Espectrofluormetros...........................................................................................17
Fosformetros......................................................................................................18
Aplicaciones y mtodos fotoluminiscentes.........................................................19
Determinacin fluorimtrica de especies inorgnicas........................................20
Reactivos fluorimtricos......................................................................................20
Determinacin fluorimtrica de especies orgnicas...........................................20
Mtodos fosforimtricos......................................................................................21
Conclusin..........................................................................................................22
Bibliografa..........................................................................................................22

Tema: Espectroscopa de Luminiscencia

Objetivos
Dar a conocer conceptos de espectroscopia de luminiscencia
Dar a conocer los factores que afectan a la espectroscopia de
luminiscencia
Dar a conocer las aplicaciones de la espectroscopia de luminiscencia

Introduccin
Existen tres tipos de mtodos pticos relacionados entre s llamados:
fluorescencia y fosforescencia molecular y quimioluminiscencia. En todos ellos,
las molculas de analito se excitan para dar una especie cuyo espectro de
emisin suministra informacin para el anlisis cualitativo y cuantitativo.
Los mtodos se conocen colectivamente como procedimientos luminiscentes
moleculares. La fluorescencia y la fosforescencia se parecen en que la
excitacin se consigue mediante la absorcin de fotones. Como consecuencia,
con frecuencia se alude a los dos fenmenos con el trmino ms general de
fotoluminiscencia.
La fluorescencia se diferencia de la fosforescencia en que las transiciones
electrnicas responsables de la fluorescencia no conllevan un cambio en el
espn del electrn. Como consecuencia, la fluorescencia presenta una vida
corta cesando la luminiscencia casi inmediatamente (10- 5S).
Por el contrario, las emisiones de fosforescencia estn acompaadas por un
cambio en el espn del electrn, que hace que la radiacin se mantenga
durante un tiempo fcilmente detectable, despus de haber acabado la
irradiacin a menudo varios segundos despus o ms. En la mayora de los
casos, la emisin fotoluminiscente, tanto si es de fluorescencia como de
fosforescencia, es de mayor longitud de onda que la radiacin utilizada para su
excitacin.
Uno de los aspectos ms atractivos de la luminiscencia es su inherente
sensibilidad, con lmites de deteccin que suelen ser de uno a tres rdenes de
magnitud inferiores a los encontrados en la espectroscopia de absorcin. Los
lmites de deteccin caractersticas son del orden de partes por billn. Debido a
su alta sensibilidad, los mtodos luminiscencia cuantitativos suelen sufrir serios
efectos de interferencia procedentes de la matriz de la muestra. Por esta razn
las medidas luminiscentes se suelen combinar con las extraordinarias tcnicas
de cromatografa y electroforesis.

En general los mtodos luminiscentes se aplican menos que los mtodos de

absorcin en los analitos cuantitativos debido a que el nmero de especies que
absorben radiacin ultravioleta / visible es mucho mayor que el de especies
que presentan fotoluminiscencia tras la absorcin de radiacin en esta regin
del espectro.

Marco terico
Teora de la Fluorescencia y de la Fosforescencia
La fluorescencia tiene lugar en sistemas gaseosos, lquidos y slidos, tanto
sencillos como complejos.
El tipo ms sencillo de fluorescencia es el que presentan los vapores atmicos
diluidos. Por ejemplo:
Los electrones 3s de los tomos de sodio vaporizados pueden ser excitados al
estado 3p mediante la absorcin de radiacin de longitudes de onda de 5 896 a
5 890 .
Despus de 10-8 a 10-5 s, los electrones vuelven al estado fundamental
emitiendo radiacin de estas mismas longitudes de onda en todas las
direcciones.
Este tipo de fluorescencia, en la cual la radiacin absorbida es reemitida sin
cambio de frecuencia, se conoce como radiacin de resonancia o fluorescencia
de resonancia.
Estados excitados que producen fluorescencia y fosforescencia
Para diferenciar entre los fenmenos de fotoluminiscencia se requiere una
revisin del spin del electrn y de los estados excitados singletes / triplete.
Espn del electrn
El principio de exclusin de Pauli establece que en un tomo no puede haber
dos electrones con los cuatro nmeros cunticos iguales. Esta restriccin
requiere que no haya ms de dos electrones en un orbital, y adems, los dos
deben tener los estados de espn opuestos. Cuando esto ocurre, se dice que
los espines estn apareados. Debido al apareamiento de espines, la mayora
de las molculas no presentan un campo magntico neto y se dice, por tanto,
que son diamagnticas, es decir, no son atradas ni repelidas por campos
magnticos permanentes.
Por el contrario, los radicales libres, que contienen electrones desapareados,
tienen un momento magntico y, consecuentemente, son atrados cuando se
encuentran en un campo magntico; por ello, se dice que los radicales libres
son paramagnticos.

Estados excitados singletes/triplete

Un estado electrnico molecular en el cual todos los espines de los electrones
estn apareados se llama singletes y cuando la molcula se expone a un
campo magntico no se produce un desdoblamiento de niveles de energa. Por
otro lado, el estado fundamental para un radical libre, es un estado doblete,
porque el electrn impar puede tomar dos orientaciones en un campo
magntico, lo que comunica ligeras diferencias de energa al sistema.
Cuando uno de los electrones de una molcula es excitado a un nivel de
energa superior, se forma un estado singletes o triplete. En el estado singletes
excitado, el espn del electrn promocionado continua apareado con el electrn
del estado fundamental; sin embargo, en el estado triplete las espiones de los
dos electrones se han desapareado y, por tanto, estn paralelos. Estos estados
pueden representarse como sigue, donde las flechas representan la direccin
del espn.

Velocidades de absorcin y de emisin

La velocidad a la cual se absorbe un fotn de radiacin es enorme, el proceso
requiere del orden de 10-15 a 10-14 s. Por otro lado, la emisin fluorescente, tiene
lugar a una velocidad significativamente ms lenta. El tiempo de vida del
estado excitado se relaciona inversamente con la absortividad molar del pico
de absorcin correspondiente al proceso de excitacin. Por tanto, para
absortividades molares comprendidas entre 10 3 y 105, los tiempos de vida del
estado excitado son de 10-9 a 10-7 s. Para sistemas dbilmente absorbentes,
donde la probabilidad del proceso de transicin es ms pequea, los tiempos
de vida pueden ser tan largos como de 10 -6 a 10-5 s. Como se ha sealado, la

velocidad promedio de una transicin triplete a singletes es menor que la

correspondiente transicin singletes a singletes. Por ello, la emisin
fosforescente requiere tiempos comprendidos entre 10 -4 y 10s o superiores.

Procesos de desactivacin

Una molcula excitada puede volver a su estado fundamental mediante una

combinacin de varias etapas mecansticas. Como muestran las flechas
verticales rectas de la Figura, dos de estas etapas, fluorescencia y
fosforescencia, conllevan la emisin de un fotn de radiacin. Las otras etapas
de desactivacin, indicadas por flechas onduladas, son procesos no radiantes.
El camino ms propicio hacia el estado fundamental es aquel que minimiza el
tiempo de vida del estado excitado. Por ello, si la desactivacin por
fluorescencia es ms rpida que los procesos no radiantes, se observa tal
emisin.
Por otro lado, si la desactivacin no radiante tiene una constante de velocidad
ms favorable, la fluorescencia desaparece o es menos intensa
La fotoluminiscencia est limitada a un nmero relativamente pequeo de
sistemas que incorporan caractersticas estructurales y ambientales que hacen
que la velocidad de los procesos de relajacin desactivacin no radiantes se

ralenticen hasta el punto en el que la reaccin de emisin puede competir

cinticamente con ellos. La informacin referente a los procesos de emisin es
suficientemente completa para permitir un clculo cuantitativo de estas
velocidades. Sin embargo, la comprensin de los otros caminos de
desactivacin es, en el mejor de los casos, rudimentaria; para estos procesos,
slo se pueden realizar afirmaciones o especulaciones cualitativas sobre las
velocidades y los mecanismos.
Fosforescencia
La desactivacin del estado electrnico excitado tambin puede incluir la
fosforescencia. Despus del cruce entre sistemas a un estado triplete excitado,
la desactivacin posterior puede tener lugar por conversin interna o externa o
por fosforescencia.
Una transicin triplete singletes es mucho menos probable que una
conversin singletes/singletes; como se ha dicho, el tiempo de vida medio de
un estado triplete excitado respecto a la emisin oscila entre 10 -4 y 10 s o ms.
Por tanto, la emisin causada por una transicin de este tipo puede persistir
durante algn tiempo despus que la irradiacin se haya interrumpido.
Las conversiones externas e internas compiten con tanto xito con la
fosforescencia que este tipo de emisin se observa normalmente slo a bajas
temperaturas, en medios altamente viscosos o por molculas que estn
adsorbidas sobre superficies slidas.
Variables que afectan a la fluorescencia y a la fosforescencia
Tanto la estructura molecular como el entorno qumico van a influir en que una
sustancia sea o no luminiscente; estos factores tambin determinan la
intensidad de emisin cuando tiene lugar la fotoluminiscencia.
En este apartado se consideran brevemente los efectos de algunas de estas
variables.
Rendimiento cuntico
El rendimiento cuntico, o la eficacia cuntica, de fluorescencia de
fosforescencia es simplemente la relacin entre el nmero de molculas que
emiten luminiscencia respecto al nmero total de molculas excitadas. Para

molculas altamente fluorescentes como la fluorescena, la eficacia cuntica,

bajo determinadas condiciones, se aproxima a la unidad. Las especies
qumicas que no presentan una fluorescencia apreciable tienen eficacias que
se aproximan a cero.
Tipos de transiciones en fluorescencia
Es importante resaltar que la fluorescencia rara vez es consecuencia de la
absorcin de radiacin ultravioleta de longitud de onda menor de 250 nm, ya
que tal radiacin es suficientemente energtica como para producir la
desactivacin de los estados excitados por predisociacin o disociacin. Por
ejemplo, una radiacin de 200 nm corresponde a aproximadamente 140
kcal/mol; la mayora de las molculas tienen al menos algn enlace que se
puede romper con energas de esta magnitud.
Como consecuencia, rara vez se observa fluorescencia debida a transiciones
* , en cambio, este tipo de emisin est asociada a los procesos menos
energticos * y * n.
Fluorescencia y estructura
La fluorescencia ms intensa y la ms tiles la que presentan los compuestos
que contienen grupos funcionales aromticos con transiciones * de baja
energa. Los compuestos que contienen grupos carbonilo en estructuras
alifticas y alicclicas o estructuras con dobles enlaces altamente conjugados
tambin pueden presentar fluorescencia, pero el nmero de estos compuestos
es pequeo comparado con el nmero de sistemas aromticos.
La mayora de los hidrocarburos aromticos no sustituidos son fluorescentes en
disolucin, la eficacia cuntica normalmente aumenta con el nmero de anillos
y con su grado de condensacin. Los heterociclos sencillos, como la piridina, el
furano, el tiofeno y el pirrol,

No presentan fluorescencia; por otro lado, las estructuras condensadas con

stas normalmente s la presentan. En los heterociclos con nitrgeno, se cree

que la transicin electrnica de ms baja energa implica a un sistema n *

que rpidamente se transforma en un estado triplete e impide la fluorescencia.
Sin embargo, la condensacin de anillos bencnicos para dar ncleos
heterocclicos, da lugar a un aumento en la absortividad molar del pico de
absorcin. En estas estructuras, el tiempo de vida del estado excitado es ms
corto, as, se observa fluorescencia en compuestos como la quinolina, la
isoquinolina y el indo!

Efectos de la temperatura y del disolvente

La eficacia cuntica de fluorescencia disminuye en la mayora de las molculas
al aumentar la temperatura, ya que al aumentar la frecuencia de las colisiones
cuando la temperatura es elevada aumenta la probabilidad de desactivacin
por conversin externa. Una disminucin en la viscosidad del disolvente
tambin aumenta la probabilidad de la conversin externa y conduce al mismo
resultado.
La fluorescencia de una molcula se reduce en presencia de disolventes que
contienen tomos pesados o de solutos con dichos tomos en su estructura;
como por ejemplo, el tetrabromuro de carbono y el yoduro de etilo. El efecto es
similar al observado cuando se introducen, por sustitucin, tomos pesados en
compuestos fluorescentes; las interacciones espn-orbital desembocan en un
aumento en la velocidad de formacin del triplete y en la correspondiente
disminucin de la fluorescencia.
Cuando se desea exaltar la fosforescencia se incorporan con frecuencia a los
disolventes compuestos que contienen tomos pesados
Efecto del oxgeno disuelto
La presencia de oxgeno disuelto suele reducirla intensidad de fluorescencia de
una disolucin. Este efecto puede ser el resultado de una oxidacin de las
especies fluorescentes inducida foto qumicamente.

Sin embargo, con ms frecuencia la amortiguacin (quenehing) tiene lugar

como consecuencia de las propiedades paramagnticas del oxgeno molecular,
que favorecen el cruce entre sistemas y la conversin de las molculas
excitadas al estado triplete. Otras especies paramagnticas tambin tienden a
amortiguar la fluorescencia.
Efecto de la concentracin en la intensidad de fluorescencia
La potencia de la emisin fluorescente F es proporcional a la potencia radiante
del haz de excitacin absorbido por el sistema. Esto es,
F = K'(Po- P)
Donde Po es la potencia del haz que incide sobre la disolucin y P es su
potencia despus de atravesar una longitud b del medio. La constante K'
depende de la eficacia cuntica del proceso de fluorescencia.
Con el objeto de relacionar F con la concentracin de la especie fluorescente,
se escribe la ley de Beer de la forma
Instrumentos para la medida de la fluorescencia y de la fosforescencia
Los distintos componentes de los instrumentos para la medida de la
fotoluminiscencia son similares a los que se encuentran en los fotmetros o
espectrofotmetros ultravioleta/visible. La siguiente grfica muestra una
configuracin caracterstica de estos componentes en los fluormetros y los
espectrofluormetros. Casi todos los instrumentos de fluorescencia utilizan
pticas de doble haz tal como se muestra, para compensar las fluctuaciones en
la potencia de la fuente.

Filtro o
Monocromador

Radiacin dispersada

de excitacin
Muestra

Fuente

Filtro o

Atenuador
Del haz

Monocromador

Fotomultiplicador
de referencia

Fotomultiplicador
de la muestra

de emisin

Amplificador
diferencial

Dispositivo de lectura

El haz de la muestra pasa primero a travs de un filtro o un monocromador de

excitacin, que transmite la radiacin que provocar la fluorescencia pero
excluye o limita la radiacin de la longitud de onda de la emisin fluorescente.
La fluorescencia se propaga desde la muestra en todas las direcciones pero lo
ms conveniente es observar la que forma un ngulo recto con el haz de
excitacin; a otros ngulos, la dispersin producida en la disolucin y en las
paredes de las cubetas aumenta y se pueden cometer grandes errores en la
medida de la intensidad. La radiacin emitida llega a un fotodetector despus
de haber pasado por un segundo filtro o monocromador que asla la
fluorescencia para su medida.
El haz de referencia pasa a travs de un atenuador que reduce su potencia a
aproximadamente la de la radiacin fluorescente (normalmente la potencia se
reduce en un factor de 100 o ms. Las seales procedentes del
fotomultiplicador de la muestra y del de referencia se dirigen a un amplificador

diferencial cuya salida se visualiza en un medidor o en un registro. Algunos

instrumentos de fluorescencia son de tipo nulo; esta condicin se consigue con
atenuadores pticos o elctricos. Los instrumentos ms modernos utilizan un
circuito divisor analgico o un sistema de adquisicin de datos digital seguido
de tratamiento de los datos para obtener la relacin entre la intensidad de la
emisin fluorescente y la intensidad de la fuente de radiacin.

Espectrometra de luminiscencia molecular

Componentes de los fluormetros y de los espectrofluormetros

Los componentes de los fluormetros y de los espectrofluormetros difieren
slo en detalles de los que componen los fotmetros y los espectrofotmetros;
slo es necesario considerar estas diferencias.
Fuentes
En la mayora de las aplicaciones se necesitan fuentes ms intensa que las
lmparas de wolframio o hidrgeno utilizadas en las medidas de absorcin.
De hecho, la magnitud de la seal de salida y, por tanto, la sensibilidad, es
directamente proporcional a la potencia de la fuente Po

Lmparas.
La lmpara ms comn para los fluormetros de filtro es la lmpara de arco de
mercurio a baja presin equipada con una ventana de slice fundida. Esta
fuente emite lneas tiles para producir la excitacin previa a la fluorescencia a
254, 302, 313, 546, 578, 691 y 773 nm. Las lneas individuales se pueden aislar
con filtros de interferencia o absorcin adecuados. Ya que, en la mayora de los
compuestos fluorescentes, la fluorescencia se puede inducir con distintas
longitudes de onda, al menos una de las lneas del mercurio suele resultar
adecuada.
Lseres.
Desde los comienzos de los aos setenta, se utilizan tambin diversos tipos de
lseres como fuentes de excitacin para medidas de fotoluminiscencia.
Un particular inters tienen los lseres sintonizables de colorante que utilizan,
como sistema de bombeo, un lser de nitrgeno pulsante o un lser de Nd:
YAG.
La mayora de los espectrofluormetros comerciales utilizan lmparas (ya
descritas) como fuentes, por ser menos caras y menos complicadas de uso.
Sin embargo, las fuentes de lser ofrecen importantes ventajas en
determinados casos: por ejemplo, (1) cuando las muestras son muy pequeas
como en cromatografa con microcolumnas y en electroforesis capilar donde la
cantidad de

muestra es de un microlitro o menor; (2) en los sensores de

control remoto, como en la deteccin fluorimtrica de radicales hidroxilo en la

atmsfera de clorofila en seres vivos acuticos, donde la naturaleza colimada
de los haces de lseres vital: o (3) cuando se requiere una radiacin de
excitacin altamente monocromtica para minimizar los efecto de las
interferencias fluorescentes.
Filtros y monocromadores
Tanto los filtros de interferencia como los de absorcin se han utilizado en los
fluormetros para la seleccin de la longitud de onda del haz de excitacin y de
la radiacin fluorescente resultante, mayora de los espectrofluormetros estn
equipados con al menos uno y a veces dos monocromadores de red.

Detectores
La seal de fluorescencia tpica es de baja intensidad, por ello, para su medida
se necesitan ganancias de amplificador elevadas. Los tubos fotomultiplicadores
son los detectores ms utilizados en instrumentos de fluorescencia sensibles.
Suelen trabajar en la modalidad de recuento de fotones para mejorar la relacin
seal/ruido. Tambin se utiliza, a veces, la refrigeracin de los detectores para
mejorar la relacin seal/ruido. Tambin se han propuesto, para los
espectrofluormetros, los detectores de diodos en serie y de transferencia de
carga. Este tipo de detectores permite el registro rpido de los espectros de
excitacin y de emisin y particularmente son tiles en cromatografa y en
electroforesis
Cubetas y compartimentos para las cubetas
Para medidas de fluorescencia se utilizan tanto cubetas cilndricas como
rectangulares, fabricadas con vidrio o con slice. Se debe tener cuidado en el
diseo del compartimento de la cubeta para reducir la cantidad de radiacin
dispersada que llega hasta el detector. Con este propsito, a menudo se
introducen deflectores en el compartimento incluso ms importante que en las
medidas de absorbancia, es evitar dejar las huellas dactilares en las cubetas y,
a que la grasa de la piel con frecuencia flurese.

Diseos de instrumentos
Fluormetros
Los fluormetros de filtro proporcionan una forma relativamente simple y barata
de llevar a cabo anlisis cuantitativos por fluorescencia. Como ya se ha
sealado para seleccionar las longitudes de onda de la radiacin de excitacin
y de emisin se utilizan filtros de interferencia y de absorcin. Generalmente,
los fluormetros son compactos, robustos y fciles de usar.
La Figura muestra un esquema de un fluormetro de filtros caracterstico que
consta de una lmpara de mercurio para la excitacin de la fluorescencia y un
par de tubos fotomultiplicadores como detectores. El haz que sale de la fuente
se divide cerca de ella en un haz de referencia y en un haz de muestra. El haz
de referencia se atena mediante el disco de apertura hasta que su intensidad
sea aproximadamente la misma que la intensidad de fluorescencia. Ambos

haces pasan a travs del filtro primario y a continuacin el haz de referencia se

refleja hacia el tubo fotomultiplicador de referencia.
El haz de muestra se enfoca sobre la muestra mediante un par de lentes y
provoca la emisin de fluorescencia. La radiacin emitida pasa a travs de un
segundo filtro que posteriormente se enfoca sobre un segundo tubo
fotomultiplicador. Las seales de salidas elctricas de los dos detectores se
dirigen hacia un divisor analgico, para obtener la relacin entre las
intensidades de la muestra y de referencia, que sirve como parmetro analtico.

Espectrofluormetros
Algunos fabricantes de instrumentos ofertan espectrofluormetros capaces de
obtener los espectros de excitacin y los de emisin. En la Figura se muestra el
diseo ptico de uno de ellos, que utiliza dos monocromadores de red. La
radiacin que procede del primer monocromador se divide en dos, una parte se
dirige hacia el fotomultiplicador de referencia y la otra hacia la muestra. La
radiacin fluorescente resultante, despus de ser dispersada en el segundo
monocromador, se detecta en un segundo fotomultiplicador.
Un instrumento como el que se muestra en la Figura suministra perfectamente
espectros satisfactorios para el anlisis cuantitativo. Sin embargo, los espectros
de emisin obtenidos no son necesariamente comparables con los de otros

instrumentos, ya que la seal de salida depende no slo de la intensidad de

fluorescencia sino tambin de las caractersticas de la lmpara, del detector y
de los monocromadores. Todas estas caractersticas instrumentales varan con
la longitud de onda y difieren de un instrumento a otro. Se han desarrollado
varios mtodos para obtener el espectro corregido, que es el verdadero
espectro de fluorescencia, libre de efectos instrumentales; muchos de los
instrumentos comerciales modernos y ms sofisticados estn preparados para
obtener directamente los espectros corregidos.

Fosformetros
Los instrumentos que se utilizan para estudios de fosforescencia tienen diseos
similares a los fluormetros y a los espectrofluormetros antes considerados,
slo difieren en que requieren dos componentes adicionales. El primero es un
dispositivo que irradia alternativamente la muestra y, despus de un retraso en
el tiempo adecuado, mide la intensidad de fosforescencia. El retraso en el
tiempo es necesario para diferenciar la emisin fosforescente de larga vida de
la emisin fluorescente de corta vida que podran originarse en la misma
muestra. Se utilizan dispositivos mecnicos y electrnicos y muchos
instrumentos de fluorescencia comerciales tienen accesorios para medidas de

fosforescencia. Un ejemplo de un tipo de dispositivo mecnico se muestra en la

Figura.

Aplicaciones y mtodos fotoluminiscentes

Es inherente a los mtodos fluorescentes y fosforescentes el ser aplicables a
intervalos de concentracin ms bajos que las medidas espectrofotomtricas
de absorcin y se encuentran entre las tcnicas analticas ms sensibles de las
que puedan disponer los cientficos. El aumento de sensibilidad surge del
hecho de que el parmetro relacionado con la concentracin en fluorimetra y
en fosforimetra F se puede medir independientemente de la potencia de la
fuente Po. Por el contrario, una medida de absorbancia requiere la evaluacin
de Po y de P, ya que la absorbancia, que es proporcional a la concentracin,
depende de la relacin entre estas dos cantidades. La sensibilidad de un
mtodo fluorimtrico puede mejorarse aumentando Po o mediante la
amplificacin adicional de la seal de fluorescencia. Por el contrario, en
espectrofotometra, un aumento en Po da lugar a un cambio proporcional en P
y, por ello, no afecta a la A. Por tanto, los mtodos fluorimtricos tienen,
generalmente, sensibilidades que son de uno a tres rdenes de magnitud
superiores a los correspondientes de absorcin. Por otro lado, la precisin y la
exactitud de los mtodos fotoluminiscentes son habitualmente ms pobres que
las de los procedimientos espectrofotomtricos en un factor entre, quizs, dos y
cinco. Generalmente, los mtodos fosforescentes son menos precisos que sus
correspondientes mtodos fluorescentes.

Determinacin fluorimtrica de especies inorgnicas

Los mtodos inorgnicos fluorimtricos son de dos tipos. Los mtodos directos
que conllevan la formacin de un quelato fluorescente y la medida de su
emisin. Un segundo grupo, que se basa en el descenso de la fluorescencia
que resulta de la accin amortiguadora de la sustancia que va a ser
determinada.
La ltima tcnica se ha utilizado ms en la determinacin de aniones.
Reactivos fluorimtricos
Los reactivos fluorimtricos de ms xito en el anlisis de cationes son los que
presentan estructuras aromticas con dos o ms grupos funcionales dadores
que permitan la formacin de quelatos con el ion metlico. A continuacin se
muestran
Determinacin fluorimtrica de especies orgnicas
El nmero de aplicaciones del anlisis fluorimtrico a especies orgnicas y
bioqumicas es impresionante.
Por ejemplo, Weissler y White han recopilado los mtodos para la
determinacin de ms de 200 sustancias, incluyendo una amplia variedad de
compuestos orgnicos, enzimas y coenzimas, agentes medicinales, productos
naturales, esteroides y vitaminas. Es incuestionable que las aplicaciones ms
importantes de la fluorimetra se encuentran en el campo del anlisis de
productos alimentarios, farmacuticos, muestras clnicas y productos naturales.
La sensibilidad y la selectividad del mtodo hacen que sea una herramienta
particularmente valiosa en estos campos.

Mtodos fosforimtricos
Los mtodos fosforescentes y fluorescentes tienden a ser complementarios, ya
que

los

compuestos

fuertemente

fluorescentes

presentan

una

dbil

fosforescencia y viceversa. Por ejemplo, entre los hidrocarburos aromticos

con anillos condensados, aquellos que contienen tomos pesados como
halgeno s o azufre, con frecuencia presentan una fuerte fosforescencia; por
otro lado, los mismos compuestos sin la presencia del tomo pesado tienden a
presentar fluorescencia en lugar de fosforescencia.
La fosforimetra se ha utilizado para determinar una gran variedad de especies
orgnicas y bioqumicas que incluyen sustancias como cidos nucleicos,
aminocidos, pirina y pirimidina, enzimas, hidrocarburos del petrleo y
pesticidas. Sin embargo, el mtodo no ha alcanzado el uso tan difundido de la
fluorimetra, quizs debido a la necesidad de bajas temperaturas y a la,
generalmente, peor precisin de las medidas fosforescentes. Por otro lado, es
atractiva

la

mayor

selectividad

potencial

de

los

procedimientos

de

fosforescencia. La razn de estas diferencias de comportamiento se debe a

que la fosforescencia eficaz necesita el cruce entre sistemas rpido para poblar
el estado triplete excitado, que, vuelve a reducir la concentracin de molculas
en el singletes excitado y, por tanto, aumenta la intensidad de fosforescencia.

Conclusin
Concluimos que en el presente trabajo se dio a conocer los conceptos de
espectroscopia de luminiscencia, al igual que los factores que la afectan y las
aplicaciones de la espectroscopia de luminiscencia con el fin de dar una
explicacin breve para la mejor comprensin del tema.

Bibliografa
Kenneth a. Rubinson y Judith f. Rubinson. Anlisis Instrumental. Prentice Hall.
Madrid 2001.
Skoog, Holler y Nieman. Principio de Anlisis Instrumental. Quinta Edicin. Mc
Graw Hill. 2002