PRACTICA DE LABORATORIO N0 2

TEMA: Preparacin de diluciones, siembra y

recuento bacterias Aerobias Mesfitas viables

I.OBJETIVO
Identificar y realizar la tcnica de cuentas en placa para las distintos
tipos de bacterias Aerobias Mesfitas viables
Determinar la concentracin de bacterias viables en un recuento
bacteriano (placa) o simplemente del alimento

II. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Materiales:

3 tubos de ensayo
8 pipetas
4 placas petri
Mechero bunsen
Gradilla
Asa bacteriolgica
Pizeta
Probeta
Matraz Erlenmeyer
Algodn
Refresco ambulatorio
Marcador indeleble

III. METODOLOGIA

Equipos:
Incubadora
Autoclave
Balanza analtica
Refrigeradora
Estufa de secado
PH metro
Reactivos:
90 ml de solucin salina
Medio de cultivo:
15 ml de Plate Count Agar

Procedimiento No 1:
Se enciende el mechero de bunsen para crear un ambiente asptico, se
debe tener la botella tapada y rotulada conteniendo la muestra a analizar
(refresco de chicha morada) .Se extraer con una pipeta 10 ml de muestra
depositndolo dentro de un matraz Erlenmeyer rotulado con dilucin de 10 -1
conteniendo 90 ml de solucin salina fisiolgica. Se mezclara bien, de tal
manera q sea una mezcla homognea. Despus, se har uso de tres tubos
de ensayo, el cual debern de estar debidamente rotulados con diluciones
10-2, 10-3 y 10-4 conteniendo 9 ml de solucin salina fisiolgica.
Procedimiento No 2:
Luego, del matraz Erlenmeyer se extraer 1 ml de mezcla y se colocara
dentro del primer tubo de ensayo (10-2), mezclando hasta tener una dilucin
homognea. Se repetir esta operacin con el segundo (10- 3) y tercer (10-4)
tubo de ensayo. Preparadas las cuatro diluciones, se rotulan las cuatro
placas petri con las que se trabajara cada grupo. Se contara con un matraz
conteniendo Plate Count Agar, pues se utiliza como medio de cultivo
estando correctamente esterilizado.
Procedimiento No3:
Luego, de cada dilucin inicial se extraer 1 ml con la ayuda de una pipeta,
cambiando de pipeta cada vez que se cambie de dilucin, y se colocara
dentro de la placa petri , agregando inmediatamente unos 15 ml
aproximadamente de Agar PCA previamente fundido y mantenido a
47oc.Cada placa se agitara, consiguiendo mezclar los microorganismos con
el agar. Se deja solidificar el agar a temperatura ambiente y luego se llevan
las placas a incubar en forma invertida a 37 oc por 24 a 48 horas.
Procedimiento No4:
Finalmente, pasado el tiempo de incubacin, se contara con colonias
desarrolladas en cada placa y se eligiera de entre toda aquella que presenta
un nmero de entre 30 y 300 colonias por placa. Para realizar el contaje se
utiliz una lupa, colocando la placa con la base hacia arriba.

IV. OBSERVACION Y RESULTADOS

Los integrantes del grupo II del laboratorio de
microbiologa general realizamos la prctica
de aislamiento de hongos. De los cuales
trabajamos en la identificacin de los hongos
sembrados con anticipacin y tambin la
identificacin de su crecimiento a una
temperatura ambiente. De una forma segura
en relacin con la bioseguridad de cada uno
de nosotros para poder as lograr una buena y
exitosa
prctica
de
laboratorio
(experimentacin).
Asimilamos los procedimientos de la prctica que el docente nos daba a
conocer todo esto en relacin al aislamiento de hongos, ante toda mucha
limpieza en la mesa de trabajo para poder desarrollar una buena prctica.
Se dio el siguiente reporte de resultados:

TIPO DE HONGOS

FORMA

ELEVACION

MARGEN

DESARROLLO

Ascomycetes
Levaduriformes

Circular (esporangiosporas)

Pulvinada

Entero

Abundante

Zigomycetes
Acuticos

Filamentosa

Convexa

Lobulada

Abundante

Zigomycetes
Terrestre

Irregular

Umbonada

Ondulado

Abundante

Basidiomycetes

Filamentosa

Umbonada

Lobulada

Abundante

Deuteromycetes

Rizoide

Elevada

Lobulada

Abundante

V.
DE

DISCUSIN
RESULTADOS

Primero se
medios
para sembrar los
cajas petri o para
despus de que
listos se procediera

prepararon los
correspondientes
hongos ya fuera en
micro cultivos para
estos ya estuvieran
a sembrar.

Se observaron las caractersticas de los mohos que haban contaminado

tanto a cultivos como a frutas, pan, queso, etc. Estas se describen en la
primera tabla donde se observan las caractersticas visuales que permiten
saber que se encuentran contaminados. As mismo, se realizaron
preparaciones en fresco para observar sus caractersticas microscpicas,
que no se lograron observar muy claramente debido a que los mohos que se
intentaban observar se juntaban con restos de la comida y se difundan
entre si sin permitir observar claramente las caractersticas de los mohos
como se muestra en los dibujos.
Se realiz la siguiente sesin y se cultivaron los hongos para despus
observar sus caractersticas tanto macroscpicas como microscpicas, que
se pueden apreciar en la segunda tabla donde se describen las
caractersticas macroscpicas de las colonias formadas de mohos y despus
se muestran los dibujos de las observaciones microscpicas; en estas ya se
logra apreciar ms claramente algunas de las estructuras delos mohos y se
lograron reconocer algunas de las partes de los mohos e incluso a algunas
especies

VI. CONCLUSIONES
Por medio de esta prctica se lograron apreciar distintos tipos de mohos y
hongo, se manejaron las tcnicas de cultivo e identificacin de hongos para
su posterior estudio y de esta forma reconocer las caractersticas
estructurales y morfolgicas de los hongos y mohos; as mismo se puede
concluir que los micro cultivos son la mejor tcnica de siembra si se desea
observar las estructuras de los hongos de una forma ms clara y precisa ya
que esta tcnica nos permiti tener una mayor claridad de las formas que
poseen los hongos y mohos. Por lo tanto es muy importante conocer todas
estas tcnicas si se desea realizar un estudio adecuado de este tipo de
microorganismos

VII. BIBLIOGRAFA:
Anlisis de microorganismos mesfilos aerobios (2003) en
http://www.analizacalidad.com/arm2004-4.pdf
JEFE DE LABORATORIO (1998) Instructivo de anlisis: Recuento
AerobiosMesfilos.
http://www.geocities.com/seguridad_alimentaria/meofilos.rtf
L. ORTIZ, M. (2003) Material didactico de Microbiologia de
Alimentos: Recuentode microorganismos aerobios mesfilos.
http://www2.uah.es/farmacia/programas/microbiologia/material_
didactico_de _microlimentos.htm
THATCHER, F. S. y D. S., CLARK (1993) Anlisis Microbiolgico de
losAlimentos. Edit. Acribia. Zaragoza

VIII. ANEXOS