I.

INTRODUCCIN
La mayora de los microorganismos tienen tamaos muy pequeos los cuales
no son perceptibles para la vista humana, por lo que se necesita el uso de un
microscopio ptimo convencional de campo claro para poder hacer una
descripcin morfolgica de estos.
Las bacterias tienen una caracterstica muy importante el cual es su morfologa
definida no solo por su tamao, sino tambin por su estructura, forma y el
arreglo; clasificndose as por su forma redondeada con el nombre de cocos;
por su forma cilndrica llamados bacilos y una tercera forma en espiral llamados
espirilos.
Debido a que las bacterias son prcticamente transparentes, incoloros, no
llegan a presentar un contraste con el medio al cual se presentan suspendidas
y por lo tanto no pueden ser observados sin algn tratamiento. Teir supone
una reaccin de intercambio de iones del colorante a lugares activos de la
superficie o interior de las estructuras de la clula. Esta tcnica permitir
contrastar mucho ms el microorganismo con respecto al medio que le rodea.
Toda tcnica de tincin requerir de los siguientes pasos: realizacin de un
frotis y fijacin posterior, coloracin, decoloracin, lavado, coloracin de
contraste, observacin al microscopio.
Existen diversos tipos de tinciones bacterianas: tincin simple, tincin negativa,
tincin diferencial y tincin estructural. Las tinciones aumentan artificialmente el
contraste entre las clulas bacterianas y el medio circundante. En esta prctica
se hizo uso de la tcnica de tincin simple empleando colorantes bsicos
(fucsina, cristal violeta y azul de metileno). En la tcnica de tincin simple la
muestra se tie del mismo color y se utiliza un solo colorante, la cual permite
observar la morfologa de la bacteria, as como tambin la agregacin o tipo de
distribucin que presente. Las tinciones ms usadas en bacteriologa requieren
previamente que la muestra en estudio se someta al proceso de fijacin
(Carlos, G.; 2005).

II. OBJETIVOS

 Observar las diferentes formas, tamaos y agrupaciones que presentan los

microorganismos aplicando un mtodo simple de tincin.
Fijar correctamente la muestra en el microscopio y observarlo haciendo uso
adecuadamente del instrumento.
Identificar las diferencias y semejanzas de los colorantes bsicos; azul de
metileno, cristal violeta y carbolfucsina

III. MATERIALES Y MTODOS

MATERIALES

Fijacin de bacterias
-

Muestra conteniendo bacterias ( staphylococcus aureus )

Asa de kolle.
Lamina porta objeto
Mechero de alcohol
Agua destilada

Tincin simple
-

Lminas fijadas de microorganismo.

Aceite de inmersin.
Colorantes bsicos (azul de metileno, cristal violeta, fucsina).
Papel secante.
Soporte para tincin.

METODOS

Fijacin de bacterias

Crear una barrera colocando el mechero encendido entre la persona y el rea

de trabajo, esto para cuidarnos de algunas bacterias que puedan ser riesgosas

para la salud.
Colocar una gota de agua sobre una lmina porta objeto limpia, con la ayuda

del asa de kolle colocar una porcin pequea de la muestra con bacterias.
Secar la lmina con la muestra, deshidratando as a la bacteria y quedando
fijada a la lmina.
*resultado: muestra fija de bacteria (staphylococcus aureus)

Tincin simple por cada colorante

-

Colocar suficiente colorante sobre la muestra fija de bacterias, dejar actuar el

tiempo necesario para cada colorante (azul de metileno 2min., cristal violeta

30 seg., fucsina 10 seg.).

Lavar con agua destilada hasta que la muestra quede libre de colorante

(macroscpicamente) y secar.
Colocar 2 a 3 gotas de aceite de inmersin sobre la muestra seca y observar
con ayuda del microscopio.

IV.RESULTADOS

IV. DISCUSIN
En esta prctica, como la mayora de los microorganismos carecen de una
coloracin natural, hay que teirlos previamente para hacer que resalten de
manera artificial del fondo de la imagen. Una forma sencilla de conseguir este
contraste consiste en realizar tinciones simples con un colorante. Para poner
de manifiesto o realizar de manera especfica determinadas caractersticas

morfolgicas o estructurales de las clulas microbianas

La tincin es el proceso por el cual, las molculas de los componentes de
tincin quedan adsorbidos a las paredes de los organismos, permitiendo su
visibilidad, dado que estas generalmente tienden a ser incoloras y no presentan
contraste para ser observadas. Es as que la tincin acta dando color y de
esta manera el contraste con el medio, para ser observadas a travs del
microscopio. (Santambrosio E. 2009)

 Tincin simple: Esta tincin es bsicamente de absorcin, para generar el

contraste necesario para observar la morfologa celular.Los componentes
generalmente usados:

Fucsina Colorante artificial bsico de frecuente utilizacin en bacteriologa,

debido a la gran basofilia de los componentes nucleares ricos en cidos
desoxirribonucleico

componentes

citoplasmticos

ricos

en

cidos

ribonucleicos. (Jorge G.; 2006) El elemento bsico de la fucsina es el triaminotrifenil-metano. El color rojo de las sustancias se debe a las sales del cido
clorhdrico. La fucsina cida se obtiene del cido sulfrico y tie las estructuras
bsicas como glucoprotenas. En algunas bacterias como la Escherichia colli.
La fucsina llega a cristalizar a las colonias y conferir un brillo metlico estable,
de reflejo verde.(Richard; 2000) La carbolfucsina es una mezcla de fucsina con
fenol(cido carblico), ste colorante en la tincin acta unindose a a cidos
miclicos en la pared celular de las micobacterias y los frotis teidos con este
colorante debe observarse con objetivo de inmersin en aceite. La carbolfucsina en
comparacin con otros tintes tiene menos sensibilidad ( debido a su estructura) y
rastrea un rea menor por unidad de tiempo, el tiempo de accin de la carbolfucsina
es de 2 minutos. Finalizando la tincin la micobacteria se tie de rojo y el fondo de azul
claro. (Lippincott; 2006)

Cristal violeta es tambin conocida como una tincin diferencial, por lo que
muchas veces es conocido como tincin Gram, dado que el bacterilogo dans
Christian Gram (1844) (Kremer B.; 2012);desarrollo esta tincin complementa el
cual ayuda en la diferenciacin de bacterias Gram positiva y Gram negativa, las
cual muy aparte de las cargas que presenten, se debe a la naturaleza de la
pared celular la diferencia de tincin. Esta es una tincin bsica, o de carga
catinica debido a que la porcin de color posee carga positiva y posee gran
afinidad por los compuestos celulares negativos; razn por lo cual es
abundantemente utilizado en la tincin de bacterias debido a que estas cuentan

con una superficie de carga negativa.

Azul de metileno Este colorante est constituido qumicamente por la sal
cloruro de azul de metilo, que tiene una base tiacnica donde los anillos
bencnicos estn unidos a un tomo de azufre. Este compuesto es
hidrosoluble, por lo tanto se decolora en agua o con cido actico.El color azul
de metileno reside en el ion cargado positivamente a diferencia de las bacterias

que, por lo general, se encuentran cargadas negativamente cuando el pH del

medio circundante es cercano a la neutralidad, hecho que es lo ms frecuente.
(Mara, V.; 2014).

Al igual que los colorantes bsicos fucsina y cristal violeta, en los cuales el
color teido en las clulas de la muestra staphylococcus aureus se observa la
morfologa de esta bacteria, con el azul de metileno se puede identificar la
forma de esta clula bacteriana la cual se encuentra teida de azul. Esta
diferencia en las cargas produce una afinidad entre este colorante bsico y la
clula bacteriana logrando as que esta quede teida. Este colorante a
diferencia de los dems usados en la prctica, tiene menos velocidad de
reaccin por lo que demora dos minutos para teir. El azul de metileno se
adhiere a la pared celular bacteriana o a sus clulas, por lo tanto las bacterias
gram positivas absorben este colorante mostrando el color azul al microscopio.

Staphylococcus aureus Estos microorganismos se caracterizan por presentar

disposicin en forma de racimo, la especie ms importante es staphylococcus
aureus, denominado as por sus colonias amarillas. Los miembros de esta
especie son anaerobios facultativos, estas bacterias son Gram positivas,
fermentadores de glucosa y catalasa negativa (Gerard T.;2007). Crecen
relativamente en condiciones de presin osmtica elevada y humedad
reducida, lo que explica que puedan encontrarse como parte de la flora normal
en piel y mucosas; es probable que el pigmento amarillo les confiere cierta
proteccin ante los efectos antimicrobianos de la luz solar; sin embargo, son las
de mayor importancia mdica ya que produce varias toxinas que contribuyen a
su patogenicidad porque aumentan su capacidad de invadir el cuerpo o daar
los tejidos. La infeccin de las heridas quirrgicas por S. aureus es un
problema frecuente en los hospitales y la capacidad de este microorganismo de
desarrollar una rpida resistencia a antibiticos tales como la penicilina
aumenta el riesgo de los pacientes internados (Richard T.; 2000).

Las clulas teidas que se observan con un microscopio deben parecerse lo

ms posible a las clulas vivas. La fijacin es el proceso por el cual se
conservan y fijan en su posicin las estructuras internas y externas. Inactiva
enzimas que podran alterar la morfologa celular y endurece las estructuras
celulares, de manera que no cambian durante la tincin ni la observacin.
(Begoa, 2005).

V. CONCLUSIN
El uso de un color bsico, sea uno de los tres usados en este experimento, no
diferencia organismos ni estructuras que tengan reacciones diferentes ante los
colores teidos. Tal y como se muestran en los resultados obtenidos luego de
la prctica, slo se logra observar las agrupaciones que hace la bacteria
adems de sus formas y tamaos..
Aunque los diferentes colorantes se unen de forma especfica a las distintas
partes de las clulas. Se logr el propsito principal de esta prctica que era
destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y las
estructuras celulares bsicas
Brindar un buen uso de los materiales y de los cultivos de bacterias se logra

una mejor visin en el microscopio de acuerdo a su orden, tamao, textura;

otorgndose una mayor nitidez y por ende mejor entendimiento de la bacteria
en estudio.

VI. BIBLIOGRAFA

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