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A.
Biotecnolog
Biotecnologa animal
B.
C.
D.
Microinyeccin
1. La inyeccin del gen de inters en un huevo
fertilizado de un animal donador
2. El gen debe ser insertado antes que la primera
divisin celular de tal modo que todas las
clulas del animal contienen el gen
3.
4. Animales fundadores,
fundadores, que son los animales que tienen
el nuevo gen en las c
clulas germinales (reproductivas
(reproductivas))
se cruzan para establecer nuevas l
lneas gen
genticas con
las caracter
caractersticas de inter
inters
5. Se ha desarrollado la Microscop
Microscopa diferencial de
interferencia de manera que el el n
n cleo de los huevos
son visibles para insertar en las madres lo antes posible
6. Problemas potenciales:
potenciales:
a. Sobreviven pocos huevos inyectados
b. El gen se inserta al azar en los cromosomas
c. No todas las c
clulas del animal reciben el gen
d. El gen no se expresa lo suficiente
1.
2
en
lg
ge
n
Recombinacin
homloga
de
to
5.
en
gm
NeoR
se
se
gm
en
to
d
el
Vectores de reemplazo
HSVtk
Plsmido de
reemplazo linearizado
Integracin al azar
NeoR
NeoR+/ HSVtk-
n
lleva
un
gen
que
marcador
tambi
produce la piel negra
2) El gen se transfiere a c
clulas madres embrionarias.
embrionarias. La
clulas contendr
contendrn dos copias del gen de inter
inters y dos
copias del de del gen de piel negra (en homozigosis)
NeoR+/ HSVtk+
HSVtk convierte ganciclovir en una
droga txida y mata clulas HSVtk+
3) Las c
clulas se criban con antibi
antibiticos para determinar la
correcta inserci
insercin del DNA
4) Las c
clulas madre embrionarias se transfieren a embriones
de rat
ratn tempranos
5) Los embriones se implantas en madres se permite su
nacimiento
6) La descendencia tendr
tendrn piel blanca y negra,
negra, siendo la piel
negra un marcador para el gen eliminado.
eliminado. Esto se llama una
quimera,
quimera, osea un rat
ratn con c
clulas normales y c
clulas
modificadas
7) La descendencia se cruzan con un rat
ratn blaco y cualquier
rat
ratn completamente negro ser
ser un rat
ratn KO, conteniendo
el gen inactivado en cada c
clula.
lula. Esto muestra que el gen
inactivado est
est presente en todas las c
clulas
d. El ma
maz KO se confirma para el gen diana por PCR
Retrovirus y transferencia g
gnica
1. Puede infectar a un animal de manera muy eficiente e
integrar DNA en genomas
2. Usa RNA como genoma e infecta c
clulas sin matarlas
3. Durante al infecci
infeccin el RNA se convierte en DNA por la
enzima transcriptasa reversa.
reversa. El DNA se integra en el
genoma de la clula huesped expres
expresndose los genes
vricos y formando el virus
4. Puede infectar diferentes tipos celulares con una sola
copia de DNA, pero solo puede llevar pequeas
candidades de DNA
5. Si el virus se usa como vector, el virus es inactivado
eliminando los genes necesarios para el
empaquetamiento y transcripci
transcripci n reversa
Animales transg
transgnicos y sus aplicaciones
A.
Animales transg
transgnicos tiene genes eliminados (Knockout, KO) o
genes a
aadidos (Knockin
(Knockin,, KI) dependiendo de la aplicaci
aplicacin del
animal
B.
Ratones
1. Se usa como modelo para enfermedades humanas bien por KO
del gen or reemplazando el gen normal con un gen mutado
2. Es posible usarlos como factor
factoras vivas:
vivas:
a. Productos transg
transgnicos como factor IX de coagulaci
coagulacin en
leche animal
b. El gen de inter
inters se debe expresar bajo un promotor
espec
especfico de mamas
c. Las prote
protenas que se secretan en la leche son m
ms f
fciles de
aislar porque se pueden unir a la membrana plasm
plasmtica de
clulas de grasa producida en la leche
C.
Vacas
1. Producidas por microinyecci
microinyeccin de huevos siguiendo los pasos
siguientes:
siguientes:
a. Coleccionar vulos de terneras sacrificadas
b. Maduraci
Maduracin del vulo in vitro
c. Fertilizaci
Fertilizacin del vulo in vitro
d. Microinyecci
Microinyeccin de DNA en el pron
proncleo masculino
e. Desarrollar los embriones hasta el estad
estado de bl
blstula
f. Cribar c
clulas de embriones es estadod de bl
blstula por el gen
insertado (transgen
(transgen)) usando PCR
g. Implantar los embriones en vacas reci
recin fertilizada
h. Nacimento de terneros
2. Ingenier
Ingeniera gen
gentica se usa en alterar composici
composicin de la leche para
producir prote
protenas humanas,
humanas, como insulina,
insulina, eritropoietina (EPO), y
anticuerpos monoclonales
3.
d. El mayor obst
obstculo es impedir la respuesta inmune por el
cuerpo humano.
humano. Cerdos alterados gen
genticamente con
ant
antgenos de superficie modificados,
modificados, y la producci
produccin de cerdos
sin una copia del gen implicada en respuesta inmune
e. La primera aplicaci
aplicacin ser
ser m
ms probablemente el transplante
de isletas celulares porcinas productoras de insulina de cersos
KO (que
(que no producen insulina de cerdo)
cerdo) para tratar diabetes.
Coraz
Corazn e h
hgado ser
sern los primeros rganos transplantados
E.
Revoluci
Revolucin biotecnol
biotecnolgica:
gica: Humanizac
Humanizacon de tejidos y rganos de
cerdos
1. PPL Therapeutics ha producido el primer cerdo clonado con un
gen inactivado que codifica la enzima 1,3 galactosil transferasa
(GT), que cataliza el movimiento de galactosa a la superficie de las
clulas del cerdo
2. El sistema inmune humano,
humano, que reconoce la galactosa en c lulas
extra
extraas ataca c
clulas o tejidos con el az
azcar,
car, causando el
rechazo de rganos
3.
Cerdos transg
transgnicos tienen problemas como letargo,
letargo, piel m
ms
gruesa,
gruesa, problemas de hgado,
gado, lceras y artritis
El nico xito con cerdos ha sido con somatotropina de cerdo
producida en E. coli y usado para tratar cerdos
5. Xenotransplante
a. El uso de rganos animales en pacientes humanos
b. Cerdos es el nimal elegido puesto que son f
fcil de crecer y
cruzar,
cruzar, tiene rganos de tama
tamao similar al humano y pueden ser
modificados gen
genticamente.
ticamente.
c. Preocupaciones sobre la tecnolog
tecnologa incluye aspectos ticos,
ticos, uso
de rganos animales en humanos,
humanos, y enfermededes como
retrovirus end
endgenos porcinos (PERV), similar a HIV, que se
puede transmitir a humanos
4.
3.
4.
Aves
1.
2.
3.
4.
Propagacin animal
A.
Inseminaci
Inseminacin artificial
1. Permite animales de inter
inters gen
gentico ser cruzados m
m
eficientemente,
eficientemente, permitiendo el esperma diluido de un un toro ser
inseminado entre 500 y 1000 vacas
2. Usado en ternero para incrementar la frecuencia de caracteres de
inter
inters
3. Ha incrementado la diversidad gen
gentica de animales en extinci
extincin
entre zool
zoolgicos
B.
Clones animales
1. Clonaci
Clonacin de germoplamas vivos (lifestocks
(lifestocks)) ha sido com
comn
durante los ltimos 20 a
aos
2. Las c
clulas se pueden separar despu
despus de fertilizar (entre
(entre 8 y 19
clulas),
lulas), y los embriones se pueden desarrollar como gemelos.
gemelos.
Esto se ha intentado en humanos pero producen embriones
defectivos y no se implantaron
3.
lulas
en
diferentes
estados
de desarrollo se
c
transfirieron a vulos enucleados (sin n
ncleo)
cleo) para estudiar el
desarrollo de una rana leopardo
b. La comercializaci
comercializacin permite caracteres de inter
inters ser
propagados y mantenidos en organismos vivos,
vivos, para
aplicaciones en agricultura y medicina
4.
Electrofusin
La clonaci
clonacin de Dolly
a. Se realiz
realiz en 1996 en el instituto Roslyn en Escocia y fue la primera
vez que un animal fue clonado usando cc
lulas som
somticas
b. El m
m
todo usado fue:
fue:
1) A cc
lulas de ovulo en metafase se les elimin
elimin el n
n
cleo
2) Una cc
lula mamaria de oveja en cultivo se le elimin
elimin los nutrientes
para que entre en el ciclo estacionario G0
3) Las dos cc
lulas se fusionaron por choque el
el
ctrico ((electrofusi
electrofusi
n)
4) Las c
clulas que se desarrollaron en cultivo para formar un embri
embri
n
se introdujeron en una madre preparada hormonalmente para
implantaci
implantaci
n
5) El embri
embri
n se desarroll
desarroll totalmente y el genotipado de DNA
confirm
confirm
que Dolly era un clon
c. Dolly muri
muri
en 2003 de un c
cncer de pulm
pulmn normalmente encontrado
en ovejas de m
m
s edad;
edad; an
anlisis de DNA demostr
demostr que los tel
tel
meros
eran m
m
s cortos de lo normal
d. La controversia permanece,
permanece, no est
est claro si Dolly fue clonada de una
clula mamaria o de una cc
lula madre embrionaria. Se necesitaron
277 para clonar Dolly, lo que lo hace muy ineficiente
http://www.brinkmann.com/pdf/cell_fusion.pdf
Pulso de fusin
Regulaci
Regulacin de animales transg
transgnicos
A.
B.
Mucho m
ms preocupaci
preocupaci n p
pblica de animales que de
plantas transg
transg ncias,
ncias, debido a su efecto potencial en el
medio ambiente,
ambiente, el riesgo a la salud de consumir
alimientos modificados gen
genticamente
La cr
crtica tiene preocupaci
preocupaci n porque la FDA quiere regular
animales modificados gen
gen ticamente de la misma manera
que drogas animales,
animales, animales transg
transgnicos pueden ser
aprovados demasiado r
rpido y sin la revisi
revisi n del gobierno
B.
C.
D.
E.
a
o
animales
tecnolog
Discusi
Discusines abiertas sobre aspectos ticos,
ticos, sociales,
sociales, y legales osn
importatnes para asegura el progreso adecuado de la biotecnolog
biotecnologa