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Cual es el objetivo de realizar Biotecnologa animal?

A.

Biotecnolog
Biotecnologa animal

B.
C.
D.

Se pueden generar animales modificados (animales


transgnicos) para muchos propsitos, que sirvan de
modelos a enfermedades humanas o introducir nuevos
caracteres a animales importantes en produccin como vacas
o peces
Mtodos genticos como seleccin asistida por marcadores
(MAS) ayuda a identificar zonas en el cromosoma con
caracteres importantes como crecimiento
Los genes se pueden transferir a travs de especies, familias
e incluso reinos como resultado de tecnologa del DNA
recombinante
Los principales objetivos de la biotecnologa animal son razas
que sean ms nutritivas y animales econmicamente ms
productivos, incrementen el crecimiento y desarrollo, as como
anticuerpos y produccin de vacunas

Mtodos de transferencia de genes


en animales

Mtodos de transferencia de genes


en animales

Para insertar un gen correctamente en un animal, el


gen (denominado el transgen) necesita
expresarse en el momento adecuado y la
cantidad y lugar adecuado del animal
Promoters y secuencias reguladoras son esenciales
El gen se debe incorporar al cromosoma para una
expresin adecuada

Microinyeccin
1. La inyeccin del gen de inters en un huevo
fertilizado de un animal donador
2. El gen debe ser insertado antes que la primera
divisin celular de tal modo que todas las
clulas del animal contienen el gen

3.

Los pasos en el proceso son:


a. Identificaci
Identificacin (y a veces modificaci
modificacin por mutaci
mutacin) de
un gen de inter
inters
b. Inserci
Insercin del gen de inter
inters en el vector apropiado
c. Microinyecci
Microinyeccin del DNA dentro del pronucleo de un
huevo fertilizado
d. Implantaci
Implantacin del huevo microinyectado en una madre de
alquiler
e. Permitir el desarrollo del embri
embrin hasta su nacimiento
f. Demostraci
Demostracin que el gen ha sido incorporado de manera
estable en el genoma huesped y es heredado en la
descendencia
g. Demostrar que el gen se expresa y es correctamente
regulado en el organismo del huesped

Transferencia gnica de clula madre embrionaria

4. Animales fundadores,
fundadores, que son los animales que tienen
el nuevo gen en las c
clulas germinales (reproductivas
(reproductivas))
se cruzan para establecer nuevas l
lneas gen
genticas con
las caracter
caractersticas de inter
inters
5. Se ha desarrollado la Microscop
Microscopa diferencial de
interferencia de manera que el el n
n cleo de los huevos
son visibles para insertar en las madres lo antes posible
6. Problemas potenciales:
potenciales:
a. Sobreviven pocos huevos inyectados
b. El gen se inserta al azar en los cromosomas
c. No todas las c
clulas del animal reciben el gen
d. El gen no se expresa lo suficiente

1.

(ES) Clulas indiferenciadas que se dividen para producir clulas


diferenciadas mientras mantienen sus caractersticas de
indiferenciadas (llamadas clulas pluripotentes)
2. Clulas madre embrionarias Embryonic stem (ES) cells se usan
para promover reemplazamiento gnico dirigido (recombinacin
homloga) de manera que el gen se inserta en el cromosoma
adecuado
3. Los pasos son los siguientes:
a. Clulas ES se extraen del embrin
b. El gen de inters se inserta en las clulas (llamado
transfeccin)
c. El gen es dirigido por recombinacin homloga y marcadores de
seleccin
d. Las clulas ES con el gen adecuado se inyectan en embriones
parcialmente desarrollados denominados blastocitos, que se
implanta en una madre
e. La descendencia es cribada por el caracter de inters
4. Se puede usar para modelos de enfermedades humanas como la
enfermedad de Gehrig, cancer, Alzheimer, fibrosis cistica

Problemas con recombinacin


homloga
Recombinacin no-homloga frecuente

Solucin: vectores de reemplazo


La construccin KO contiene 1) Gen neoR
Flanqueado por 2) 2 segmentos de gen objetivo
y 3) El gen HSVtk

Parte del gen se reemplaza con neoR


Clulas ES se seleccionan por la integracin NeoR y contra
ka integracin de HSVtk* (NeoR+/ HSVtk-) en ganciclovir

2
en

lg

ge
n

Recombinacin
homloga

de
to

5.

en
gm

NeoR

se

se

gm

en

to
d

el

Vectores de reemplazo

HSVtk

Plsmido de
reemplazo linearizado

Integracin al azar

NeoR

NeoR+/ HSVtk-

Puede inactivar gene para monitorizar el efecto en crecimiento o


para desarrollar tratamientos
6. Mutag
Mutagnesis dirigida en rat
ratn
a. Inserci
Insercin de DNA en un lugar espec
especfico del cromosoma
b. Genes se pueden tambi
tambin inactivar (llamado
(llamado KO)
c. Los pasos en crear ratones KOs son:
1) Un gen se inactiva al eliminar una parte del gen e insertar un
gene de resistencia a antibi
antibitico en su lugar. DNA hom
homlogo
donde la recombinaci
recombinacin va a ocurrir flanquea ambos lados
del marcador.
.
El
DNA
insertado
tambi

n
lleva
un
gen
que
marcador
tambi
produce la piel negra
2) El gen se transfiere a c
clulas madres embrionarias.
embrionarias. La
clulas contendr
contendrn dos copias del gen de inter
inters y dos
copias del de del gen de piel negra (en homozigosis)

NeoR+/ HSVtk+
HSVtk convierte ganciclovir en una
droga txida y mata clulas HSVtk+

3) Las c
clulas se criban con antibi
antibiticos para determinar la
correcta inserci
insercin del DNA
4) Las c
clulas madre embrionarias se transfieren a embriones
de rat
ratn tempranos
5) Los embriones se implantas en madres se permite su
nacimiento
6) La descendencia tendr
tendrn piel blanca y negra,
negra, siendo la piel
negra un marcador para el gen eliminado.
eliminado. Esto se llama una
quimera,
quimera, osea un rat
ratn con c
clulas normales y c
clulas
modificadas
7) La descendencia se cruzan con un rat
ratn blaco y cualquier
rat
ratn completamente negro ser
ser un rat
ratn KO, conteniendo
el gen inactivado en cada c
clula.
lula. Esto muestra que el gen
inactivado est
est presente en todas las c
clulas
d. El ma
maz KO se confirma para el gen diana por PCR

Retrovirus y transferencia g
gnica
1. Puede infectar a un animal de manera muy eficiente e
integrar DNA en genomas
2. Usa RNA como genoma e infecta c
clulas sin matarlas
3. Durante al infecci
infeccin el RNA se convierte en DNA por la
enzima transcriptasa reversa.
reversa. El DNA se integra en el
genoma de la clula huesped expres
expresndose los genes
vricos y formando el virus
4. Puede infectar diferentes tipos celulares con una sola
copia de DNA, pero solo puede llevar pequeas
candidades de DNA
5. Si el virus se usa como vector, el virus es inactivado
eliminando los genes necesarios para el
empaquetamiento y transcripci
transcripci n reversa

Animales transg
transgnicos y sus aplicaciones
A.

Animales transg
transgnicos tiene genes eliminados (Knockout, KO) o
genes a
aadidos (Knockin
(Knockin,, KI) dependiendo de la aplicaci
aplicacin del
animal
B.
Ratones
1. Se usa como modelo para enfermedades humanas bien por KO
del gen or reemplazando el gen normal con un gen mutado
2. Es posible usarlos como factor
factoras vivas:
vivas:
a. Productos transg
transgnicos como factor IX de coagulaci
coagulacin en
leche animal
b. El gen de inter
inters se debe expresar bajo un promotor
espec
especfico de mamas
c. Las prote
protenas que se secretan en la leche son m
ms f
fciles de
aislar porque se pueden unir a la membrana plasm
plasmtica de
clulas de grasa producida en la leche

Se pueden generar vacas con una mayor resistencia a


enfermedades,
enfermedades, reduciendo la cantidad de vacunas,
vacunas, antibi
antibiticos y
visitas de veterinarios
4. Somatotropina bovina recombinante (rBST)
)
ha
sido
aprovada como
rBST
droga animal y permite a las vacas incrementar la producci
produccin de
leche hasta un 25%. La controversia es que aunque se ha probado
que la rBST no es t
txica en humanos y las vacas no tienen mayor
cantidad de prote
protenas en su cuerpo
D. Cerdos,
Cerdos, Ovejas y Cabras
1. Modificadas por ingenier
ingeniera gen
gentica como bioreactores para
producir prote
protenas como factores VIII y IX de coagulaci
coagulacin, hormona
del crecimiento e interleukinas
2. Las prote
protenas se pueden secretar en leche de ovejas y cabras sin
efecto en los animales

C.

Vacas
1. Producidas por microinyecci
microinyeccin de huevos siguiendo los pasos
siguientes:
siguientes:
a. Coleccionar vulos de terneras sacrificadas
b. Maduraci
Maduracin del vulo in vitro
c. Fertilizaci
Fertilizacin del vulo in vitro
d. Microinyecci
Microinyeccin de DNA en el pron
proncleo masculino
e. Desarrollar los embriones hasta el estad
estado de bl
blstula
f. Cribar c
clulas de embriones es estadod de bl
blstula por el gen
insertado (transgen
(transgen)) usando PCR
g. Implantar los embriones en vacas reci
recin fertilizada
h. Nacimento de terneros
2. Ingenier
Ingeniera gen
gentica se usa en alterar composici
composicin de la leche para
producir prote
protenas humanas,
humanas, como insulina,
insulina, eritropoietina (EPO), y
anticuerpos monoclonales

3.

d. El mayor obst
obstculo es impedir la respuesta inmune por el
cuerpo humano.
humano. Cerdos alterados gen
genticamente con
ant
antgenos de superficie modificados,
modificados, y la producci
produccin de cerdos
sin una copia del gen implicada en respuesta inmune
e. La primera aplicaci
aplicacin ser
ser m
ms probablemente el transplante
de isletas celulares porcinas productoras de insulina de cersos
KO (que
(que no producen insulina de cerdo)
cerdo) para tratar diabetes.
Coraz
Corazn e h
hgado ser
sern los primeros rganos transplantados
E.
Revoluci
Revolucin biotecnol
biotecnolgica:
gica: Humanizac
Humanizacon de tejidos y rganos de
cerdos
1. PPL Therapeutics ha producido el primer cerdo clonado con un
gen inactivado que codifica la enzima 1,3 galactosil transferasa
(GT), que cataliza el movimiento de galactosa a la superficie de las
clulas del cerdo
2. El sistema inmune humano,
humano, que reconoce la galactosa en c lulas
extra
extraas ataca c
clulas o tejidos con el az
azcar,
car, causando el
rechazo de rganos

3.

Cerdos transg
transgnicos tienen problemas como letargo,
letargo, piel m
ms
gruesa,
gruesa, problemas de hgado,
gado, lceras y artritis
El nico xito con cerdos ha sido con somatotropina de cerdo
producida en E. coli y usado para tratar cerdos
5. Xenotransplante
a. El uso de rganos animales en pacientes humanos
b. Cerdos es el nimal elegido puesto que son f
fcil de crecer y
cruzar,
cruzar, tiene rganos de tama
tamao similar al humano y pueden ser
modificados gen
genticamente.
ticamente.
c. Preocupaciones sobre la tecnolog
tecnologa incluye aspectos ticos,
ticos, uso
de rganos animales en humanos,
humanos, y enfermededes como
retrovirus end
endgenos porcinos (PERV), similar a HIV, que se
puede transmitir a humanos
4.

3.

4.

Cerdos con KO en los dos genes GT se est


estn investigado,
investigado, junto
con cerdos enanos que con tienen PERV y son deseables para
xenotransplantes
Los receptores usados por el PERV para entrar c
clulas se han
caracterizado,
caracterizado, y un m
mtodo de cribado se ha desarrollado para
identificar si el PERV est
est en c
clulas animales,
animales, asegurando la
inocuidad del xenotransplante

Aves
1.
2.

3.

4.

Productos de granja como el pollo se puede mejorar disminuyendo


el contenido de grasa y colesterol de los huevos
Los huevos pueden servir como bioreatores para producir prote
protenas
valiosas a trav
travs de conseguir que secreten prote
protenas valiosas
dentro del huevo
Los retrovirus son candidatos para la transfecci
transfeccin de embriones en
estado de blatodermos.
blatodermos. Los problemas mayores es la inestabilidad
del gen introducido y el peque
pequeo tama
tamao. La estructura del vulo
hace dificil la penetraci
penetracin por microinyecci
microinyeccin
El uso de liposomas en un posible sistema de transformaci
transformacin de
clulas del blastodermo.
blastodermo. Clulas transformadas se insertan en
embriones del huesped debajo del espacio subgerminal para
producir un animal quim
quimricoL

Propagacin animal
A.

Inseminaci
Inseminacin artificial
1. Permite animales de inter
inters gen
gentico ser cruzados m
m
eficientemente,
eficientemente, permitiendo el esperma diluido de un un toro ser
inseminado entre 500 y 1000 vacas
2. Usado en ternero para incrementar la frecuencia de caracteres de
inter
inters
3. Ha incrementado la diversidad gen
gentica de animales en extinci
extincin
entre zool
zoolgicos
B.
Clones animales
1. Clonaci
Clonacin de germoplamas vivos (lifestocks
(lifestocks)) ha sido com
comn
durante los ltimos 20 a
aos
2. Las c
clulas se pueden separar despu
despus de fertilizar (entre
(entre 8 y 19
clulas),
lulas), y los embriones se pueden desarrollar como gemelos.
gemelos.
Esto se ha intentado en humanos pero producen embriones
defectivos y no se implantaron

3.

Mtodos de transferencia nuclear incrementa el n


nmero de
descendientes de una hembra a cientos o miles
a. La primera clonaci
clonacin animal con xito fu
fu el de una oveja en
1986, pero los estudios se iniciaron en los 1950s, donde
ncleos de c

lulas
en
diferentes
estados
de desarrollo se
c
transfirieron a vulos enucleados (sin n
ncleo)
cleo) para estudiar el
desarrollo de una rana leopardo
b. La comercializaci
comercializacin permite caracteres de inter
inters ser
propagados y mantenidos en organismos vivos,
vivos, para
aplicaciones en agricultura y medicina

4.

Electrofusin

La clonaci
clonacin de Dolly
a. Se realiz
realiz en 1996 en el instituto Roslyn en Escocia y fue la primera
vez que un animal fue clonado usando cc
lulas som
somticas
b. El m
m
todo usado fue:
fue:
1) A cc
lulas de ovulo en metafase se les elimin
elimin el n
n
cleo
2) Una cc
lula mamaria de oveja en cultivo se le elimin
elimin los nutrientes
para que entre en el ciclo estacionario G0
3) Las dos cc
lulas se fusionaron por choque el
el
ctrico ((electrofusi
electrofusi
n)
4) Las c
clulas que se desarrollaron en cultivo para formar un embri
embri
n
se introdujeron en una madre preparada hormonalmente para
implantaci
implantaci
n
5) El embri
embri
n se desarroll
desarroll totalmente y el genotipado de DNA
confirm
confirm
que Dolly era un clon
c. Dolly muri
muri
en 2003 de un c
cncer de pulm
pulmn normalmente encontrado
en ovejas de m
m
s edad;
edad; an
anlisis de DNA demostr
demostr que los tel
tel
meros
eran m
m
s cortos de lo normal
d. La controversia permanece,
permanece, no est
est claro si Dolly fue clonada de una
clula mamaria o de una cc
lula madre embrionaria. Se necesitaron
277 para clonar Dolly, lo que lo hace muy ineficiente

http://www.brinkmann.com/pdf/cell_fusion.pdf

Pulso de fusin

Clulas se ponen juntas

Fase de Heterokaryon: Producto de fusin


ncleos distintos

Fusin inducida por un pulso elctrico

5. por que arm


arm tanto revuelo?
revuelo? Porque clonar puede
producir desarrollos importantes:
importantes:
a. Se puede estudiar los efectos ambientales en
animales id
id nticos
b. La gen
gentica de las enfermedades puede estudiarse
en m
m s detalle
c. Se puede estudiar la gen
gen tica del desarrollo en m
ms
detalle
d. Animales modificados gen
gen ticamente y clonados
posteriormente pueden producir grandes cantidades
de prote
protenas terap
terap uticas humanas en la leche
6. Ratones se clonaron en 1998 usando una inyecci
inyecci n de
n cleo en vulos enucleados,
enucleados, y se han clonado cabras,
cabras,
conejos y gatos

Regulaci
Regulacin de animales transg
transgnicos
A.

B.

Mucho m
ms preocupaci
preocupaci n p
pblica de animales que de
plantas transg
transg ncias,
ncias, debido a su efecto potencial en el
medio ambiente,
ambiente, el riesgo a la salud de consumir
alimientos modificados gen
genticamente
La cr
crtica tiene preocupaci
preocupaci n porque la FDA quiere regular
animales modificados gen
gen ticamente de la misma manera
que drogas animales,
animales, animales transg
transgnicos pueden ser
aprovados demasiado r
rpido y sin la revisi
revisi n del gobierno

Patente de animales modificados


gen
genticamente
A.

B.

C.

D.

E.

En 1930 el congreso de los EEUU aprob


aprob el Acto de patentes,
patentes, pero
plantas no se patentaron hasta 1970. En 1987, la oficina de patentes
de EEUU declar
declar que organismos multicelulares no humanos que no
ocurren normalmente,
normalmente, incluyendo animales se pueden patentar
Patentes,
Patentes, trademarks, copyrights, y andtrade secrets se consideran
propiedad intelectual y hay un gran debate por desarrollos en
biotecnolog
biotecnologa en los ltimos 15 a
aos.
os. Mucho debate se ha generado
en patentes animales
Se incluye interrogantes sobre posibles consecuencias de los usos
comerciales de organismos patentados,
patentados, incluyendo implicaciones
medioambientales,
medioambientales, la salud del animal modificado y efectos
potenciales del proceso evolutivo
Agricultores est
estn preocupados de patentes animales,
animales, puesto que
animales patentados pueden generar un menor n
nmero de granjas y
ms potentes y peque
pequeos granjeros no pueden tener la nueva
tecnolog

a
o
animales
tecnolog
Discusi
Discusines abiertas sobre aspectos ticos,
ticos, sociales,
sociales, y legales osn
importatnes para asegura el progreso adecuado de la biotecnolog
biotecnologa