CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico

Edital MCT/CNPq N 014/2010 Universal

Projeto de Pesquisa:

Fixao biolgica de nitrognio em leguminosas arbreas da

Mata Atlntica e da Caatinga do estado da Bahia

Coordenador: Prof. Dr. Eduardo Gross

Botnico - Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC)

Ilhus
Julho de 2010

Resumo
Conforme constatado pelas pesquisas anteriores Morfo-anatomia dos ndulos e
diversidade de rizbios em leguminosas da Bahia e Ultra-estrutura dos ndulos e
caracterizao molecular dos rizbios de leguminosas da Bahia (processos CNPq
n

474137/2004-0

n475232/2007-0,

respectivamente)

as

leguminosas

nodulferas coletadas na Caatinga e Mata Atlntica baianas formaram simbiose

tanto

com

betaproteobactrias

do

gnero

Burkholderia

como

com

as

alfaproteobactrias da famlia Rhizobiaceae e Bradyrhizobiaceae. A ampla coleta

dos ndulos permitiu o estabelecimento de um Banco de Rizbios na UESC com
cerca

de

850

isolados

caracterizados

morfologicamente

em

parte

molecularmente. A presente proposta tem como objetivo avaliar o efeito de alguns

desses isolados de rizbios sobre o crescimento inicial de leguminosas arbreas
nativas da Caatinga (Mimosa spp.) e Mata Atlntica (ing e Ormosia),
identificando provveis fatores (substratos, e pH e teor de N destes) que podem
afetar a preferncia das plantas por nodular com alfa ou betarizbios. As espcies
de leguminosas arbreas sero inoculadas com os diferentes rizbios e crescidas
em casa de vegetao por 4 meses, sendo, aps esse perodo, avaliados a
biomassa das plantas, o teor de N folia e a ocupao pelos rizbios dos ndulos
radiculares.). Espera-se contribuir para o entendimento das relaes ecolgicas
entre essas plantas e suas bactrias simbiontes. O presente projeto poder trazer
implicaes para formulao de inculos destinados ao crescimento dessas
leguminosas arbreas que so utilizadas em programas de recuperao de reas
degradadas e de restaurao florestal.

1. Qualificao do principal problema abordado

Conforme constatado pelas pesquisas anteriores Morfo-anatomia dos
ndulos e diversidade de rizbios em leguminosas da Bahia (Processo CNPq n
474137/2004-0) e Ultra-estrutura dos ndulos e caracterizao molecular dos
rizbios de leguminosas da Bahia (Processo CNPq n 475232/2007-0) as
leguminosas nodulferas coletadas no bioma Caatinga e no bioma Mata Atlntica
formaram simbiose tanto com betaproteobactrias do gnero Burkholderia como
com as alfaproteobactrias da famlia Rhizobiaceae e Bradyrhizobiaceae. A ampla
coleta dos ndulos de leguminosas realizada em vrias localidades do estado da
Bahia permitiu o isolamento e o estabelecimento de um Banco de Rizbios na
UESC com cerca de 850 isolados. Todos esses isolados foram catalogados e
caracterizados quanto aos aspectos morfolgicos das colnias bacterianas, sendo
que

uma

parte

destes

(cerca

de

250

isolados)

foram

identificados

molecularmente, via amplificao e seqenciamento do 16S rDNA. O presente

projeto abordar o efeito de alguns desses isolados de rizbios, previamente
selecionados quanto a presena de genes nodC e nifH, sobre o crescimento inicial
de algumas leguminosas arbreas nativas da Caatinga e Mata Atlntica.
A nodulao em leguminosas ocorre no somente na simbiose com
membros da classe Alafaproteobacteria (Azorhizobium, Bradyrhizobium, Devosia,
Mesorhizobium, Rhizobium e Sinorhizobium), mas tambm com membros da
classe Betaproteobacteria (Burkholderia e Cupriavidus) (GRAHAM, 2008;
ELLIOTT

et

al.,

2009).

Os

recentes

avanos

nos

estudos

sobre

os

microssimbiontes envolvidos na fixao biolgica de nitrognio das leguminosas

revelam que a diversidade dessas bactrias, bem como das inter-relaes entre
planta e microrganismos, maior do que anteriormente se supunha.
Os ndulos se apresentam como estruturas hipertrficas nas razes e,
excepcionalmente, no caule das plantas (MOREIRA e SIQUEIRA, 2006) e podem
ser considerados como rgo vegetal envolvido na fixao biolgica do nitrognio
atmosfrico (PATRIARCA et al., 2002; PRELL; POOLE, 2006). O processo de
nodulao controlado, em grande parte, pela troca de sinais entre a bactria

simbionte e a planta, bem como pela expresso de genes que se fazem

necessrios para as alteraes fisiolgicas e morfolgicas que possibilitam a
simbiose. Nos estdios iniciais de formao dos ndulos radiculares, a espcie
hospedeira libera sinais na rizosfera, identificados como compostos fenlicos
(flavonides e betanas) que so percebidos pelas bactrias, desencadeando a
expresso coordenada de uma srie de genes de nodulao, os chamados genes
nod que, a depender da espcie, podem estar localizados no DNA cromossomal
ou plasmidial da bactria (GAGE et al., 2004).
Vrios genes esto envolvidos no processo de fixao de nitrognio.
Tais genes parecem estar organizados em clusters dentro da clula, cada um
exercendo uma funo especfica relacionada ao processo de fixao. Todos so
em certa medida necessrios, porm pode-se citar como dois dos principais os
genes nif e nod. Os nif (nitrogen fixation) so genes requeridos para a estrutura,
biossntese e regulao da nitrogenase e, portanto, encontrados em todos os
diazotrficos. Desde sua primeira descrio em Klebsiella pneumoniae (CANNON
et al.,1974), tais genes j foram identificados em vrias espcies de diazotrficos
associativos (MOREIRA; SIQUEIRA, 2006). Os nif so organizados em vrias
unidades transcricionais de regulao. Alm dos genes estruturais da nitrogenase
(nif HDK), essas unidades tambm contm os genes que controlam as protenas
de transporte de eltrons (codificam para produtos envolvidos na biossntese do
co-fator Fe-Mo da nitrogenase), e certos genes reguladores da transcrio
(DIXON e KAHN, 2004).
Os genes nod so requeridos para a nodulao e s so encontrados
em bactrias diazotrficas formadoras de ndulos, como as do gnero Rhizobium
e Bradyrhizobium que formam simbiose com as leguminosas (MOREIRA;
SIQUEIRA, 2006). Citam-se mais de 40 genes bacterianos nod envolvidos na
nodulao em diferentes espcies de rizbios cuja transcrio ativada por sinais
especficos da planta (GAGE et al., 2004, PRELL e POOLE, 2006). Os genes nod
codificam aproximadamente 25 protenas que so necessrias para a sntese e
exportao do fator Nod. O fator Nod um lipo-oligossacardeo sinal constitudo
de um suporte de quitina, quatro a cinco unidades de N-acetilglicosamina com um

lipdeo ligado ao final no reduzido, e modificaes hospedeiro-especfica neste

suporte de quitina. Este lipo-oligossacardeo sinaliza o desenvolvimento de muitas
modificaes na planta no incio do processo de nodulao, incluindo a
deformao de tricoma radicular, a despolarizao da membrana, oscilao do
clcio intracelular e a iniciao da diviso celular no crtex da raiz, estabelecendo
um meristema e o primrdio do ndulo (GAGE et al., 2004).
Estudos recentes sugerem que os genes nod dos betarizbios
(bactrias simbiontes fixadoras de N pertencentes Classe Beta das
proteobacterias), provm de linhagens bastante separadas das dos genes nod
dos alfarizbios, especialmente de Rhizobium e Bradyrhizobium (CHEN et al.,
2003; ANDAM, et al., 2007; ELLIOTT et al., 2009; BONTEMPS et al., 2010).
Apesar dessas diferenas nos genes responsveis pela expresso do
fator Nod, relatado que algumas plantas, principalmente as do gnero Mimosa
(subfamlia

Mimosoideae),

nodulam

com

Burkholderia

spp.,

Cupriavius

taiwanensis (betarizbios) e tambm com Rhizobium spp. (alfarizbios) (CHEN et

al., 2003; BARRETT e PARKER, 2006; ANDAM, et al., 2007; ELLIOTT et al.,
2009; BONTEMPS et al., 2010). Estudos recentes do nosso grupo de pesquisa
sugerem que tambm os gneros Inga (Hellen R. M. dos Santos, comunicao
pessoal)

Ormosia

(Jos

M.

F.

dos

Santos,

comunicao

pessoal)

aparentemente nodulam com alfa e betarizbios. Tais evidncias permitem

realizar nessas espcies de leguminosas experimentos de competio para
formao do ndulo e de eficincia na fixao de nitrognio comparando
alfarizbios com betarizbios.
Experimentos de competio na formao de ndulos e de eficincia
na fixao de N tm sido amplamente realizados entre linhagens de alfarizbios
que nodulam leguminosas de interesse agronmico como a soja e a alfafa,
permitindo a identificao de cepas melhor adaptadas ao hospedeiro e de genes
envolvidos na competio (GRAHAM, 2008). Experimentos similares entre alfa e
betarizbios so escassos na literatura, uma vez que, os betarizbios eram at
recentemente desconhecidos e porque no havia planta hospedeira adequada
que fosse compatvel com ambos os tipos de rizbios. O nico trabalho, de nosso

conhecimento, que abordou experimentos de competio entre alfa e betarizbios

foi o realizado por Elliott e colaboradores (2009) com trs espcies de Mimosa
herbceas (M. pigra, M. pudica e M diplotricha).
A simbiose dos rizbios com leguminosas , geralmente, considerada
como sendo mutualstica. Entretanto, em alguns casos pode se tornar parastica
(quando h formao de ndulos no efetivos, i.e. que no fixam o N atmosfrico)
ou ainda, dependendo da espcie vegetal, bacteriana e condies ambientais,
no ocorrer a formao da simbiose. Assim, o genoma da planta, do rizbio e as
condies biticas e abiticas do local tm, em maior ou menor grau, influncia
sobre o estabelecimento de uma associao simbitica eficiente. Disso decorre a
importncia de testar em condies experimentais rigorosas e posteriormente em
campo as linhagens e espcies de rizbios em diferentes leguminosas
hospedeiras sob diferentes substratos e adubaes para o estabelecimento das
condies adequadas para o bom desenvolvimento de mudas de leguminosas
nodulantes.
Soma-se a isso o fato de que as leguminosas arbreas nativas
representam um potencial inexplorado, devido ao desconhecimento de suas
caractersticas silviculturais, sua produtividade e, especialmente, sua habilidade
em associar-se a bactrias fixadoras de nitrognio. O relevante interesse na
utilizao das espcies de ing e de Ormosia na regio do Bioma Mata Atlntica
sul baiano e das espcies arbreas de Mimosa (como por exemplo, M. tenuiflora,
M ophtalmocentra, M acutistipula) na Caatinga baiana decorre das aes para
recuperao

de

reas

degradadas,

da

recomposio de matas ciliares desses locais.

restaurao florestal e,

ou

da

2. Objetivos
O presente projeto visa determinar se espcies arbreas de ing,
Ormosia e Mimosa apresentam preferncia por nodular com alfa ou betarizbios,
identificando provveis fatores que podem afetar tal preferncia.
A hiptese a ser testada no presente projeto a de que variando as
condies de crescimento das plantas (substrato utilizado, e o pH e teor de N
deste) ocorre maior ocupao dos ndulos por beta (Burkholderia) ou alfarizbios
(Rhizobium e Bradyrhizobium).

3. Metodologia a ser empregada

3.1. Coleta de sementes, ndulos e material botnico
Sementes das arbreas Inga vera Willd., Inga edulis Mart. e Ormosia
fastigiata Tul. sero coletadas na regio sul baiana (regio de Ilhus, Itabuna e
Camac). Sementes de Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir, M. ophtalmocentra Mart.
ex Benth sero coletadas na regio da caatinga baiana nas localidades de
Remanso e Sobradinho. Ramos florais e vegetativos dessas plantas sero
depositados no Herbrio do CEPEC CEPLAC (Comisso para Implantao da
Lavoura Cacaueira) e da UEFS (Universidade Estadual de Feira de Santana).
Eventualmente, ndulos encontrados nessas plantas tambm sero coletados e
trazidos para o Laboratrio de Monitoramento Ambiental da UESC para
isolamento e posterior caracterizao dos rizbios.

3.2. Experimentos de inoculao dos isolados selecionados

Para os experimentos que objetivam testar a capacidade de nodular
(competitividade) e a eficincia na fixao de N dos isolados de Burkholderia,
Rhizobium e Bradyrhizobium do Banco de Rizbios da UESC, as sementes de
Inga vera, Inga edulis, Ormosia fastigiata, Mimosa tenuiflora e M. ophtalmocentra
tero a sua superfcie desinfestada e ento sero germinadas e transplantadas
assepticamente para vasos plsticos sem furos contendo (a) mistura de areia e
vermiculita e (b) de areia e solo previamente esterelizados. Quatro dias aps a
semeadura, as plantas sero inoculadas (1 x 106 clulas bacterianas por mL) com
isolados de rizbios selecionados. Os seguintes tratamentos sero estabelecidos:
(i) inoculao com alfarizbio; (ii) inoculao com betarizbio; (iii) inoculao com
a mistura desses dois isolados; (iv) plantas no inoculadas (controle negativo); e
(v) plantas no inoculadas e adubadas com N mineral (controle positivo). Alm
disso, dois nveis de adubao nitrogenada (0,5 e 2,5 mM de KNO3) e dois nveis
de acidez do substrato (pH 6,0 e pH 4,0) sero estabelecidos atravs da adio

de HCl 1 M. Todos esses experimentos sero realizados com no mnimo seis

plantas individualmente separadas em vasos que sero as repeties.
As plantas sero suplementadas semanalmente com soluo de
Hoagland modificada (Quadro 1) e crescero sob iluminao natural e
temperatura ambiente em casa de vegetao na UESC, sendo avaliadas
quinzenalmente em sua altura e dimetro do coleto durante um perodo de quatro
meses. A higiene cuidadosa durante a preparao dos materiais bem como
durante o experimento ser observada a fim de prevenir a contaminao por
outros rizbios. Aps o perodo de crescimento das plantas, a ocupao pelos
rizbios dos ndulos, a biomassa das plantas, alm do teor de N foliar sero
avaliados. As associaes simbiticas sero consideradas efetivas quando
apresentarem % de nitrognio superior a 75% em comparao ao controle
positivo (HOWIESON e BALLARD, 2004). As amostras sero analisadas para
concentrao de N atravs de micro Kjeldahl. Os teores mdios de nitrognio e de
massa seca das plantas sero comparados por ANOVA. A identificao das
bactrias presentes nos ndulos ser confirmada atravs do reisolamento em
placas de Petri com meio de cultura 79 slido (Fred & Waskman, 1928), avaliao
das caractersticas morfolgicas da colnia e observao microscpica, e, quando
necessrio, empregado o seqenciamento do gene 16s rRNA.

Quadro 1. Soluo nutritiva para crescimento das plantas em casa de vegetao.

COMPOSIO QUMICA DA
SOLUO NUTRITIVA
-1
Elemento
Concentrao (mg.L )
K
234,00
S
208,00
Ca
80,00
Mg
48,00
P
14,00
Zn
0,01
B
0,11
Cu
0,005
Mn
0,11
Mo
0,09
Fe
0,25
N (somente para o
84,00
tratamento + N)
Fonte: Hoagland e Arnon (1950) modificado.

FONTE DE NUTRIENTE
KH2PO4; K2SO4
CaSO4 ; MgSO4 ; K2SO4
CaSO4
MgSO4
KH2PO4
ZnSO4
H3B04
CuSO4
MnSO4
Na2MoO4
FeEDTA
(NH4) NO3

4. Referncias
ANDAM, C. P.; MONDO, S. J.; PARKER, M. A. Monophyly of nodA and nifH genes across
Texan and Costa Rican populations of Cupriavidus nodule symbionts. Applied and
Environmental Microbiology, v. 73, p. 4686 4690, 2007.
BARRETT C. F.; PARKER M. A. Coexistence of Burkholderia, Cupriavidus, and
Rhizobium sp. nodule bacteria on two Mimosa spp. in Costa Rica. Applied and
Environmental Microbiology, v. 72, p. 11981206, 2006.
BONTEMPS, C.; ELLIOTT, G. N.; SIMON, M. F.; REIS JUNIOR, F. B.; GROSS E.;
LAWTON, R. C.; ELIAS NETO, N.; LOUREIRO, M. F.; FARIA, S. M.; SPRENT, J. I.;
JAMES, E. K.; YOUNG, J. P. W. Burkholderia species are ancient symbionts of
legumes. Molecular Ecology, v. 19, p. 4452, 2010.
CANNON, F. C.; DIXON, R. A.; POSTGATEJ, R.; PRIMROSSE. B. Chromossomal
integration of Klebsiella nitrogen fixation genes in Escherichia coli. Journal of General
Microbiology, v. 80, p. 227-239, 1974.
CHEN, W. M., JAMES E. K., PRESCOTT, A. R., KIERANS, M.; SPRENT, J. I. Nodulation
of Mimosa spp. by the -Proteobacterium Ralstonia taiwanensis. Molecular PlantMicrobe Interactions, v.16, p.1051-1061, 2003.
DIXON, R.; KAHN, D. Genetic regulation of biological nitrogen fixation. Nature Reviews,
v.2, p. 621-631, 2004.
ELLIOTT, G.N.; CHOU,J.H.; CHEN, W.M.; BLOEMBERG, G.V.; BONTEMPS,C.;
MARTNEZ-ROMERO,E.; VELAZQUEZ,E.; YOUNG, J.P.W.; SPRENT, J.I.; JAMES,
E.K. Burkholderia spp. are the most competitive symbionts of mimosa, particularly
under N-limited conditions. Environmental Microbiology, v. 11, p. 762778, 2009.
FRED, E. B.; WAKSMAN, S. A.. Yeast extract-manitol agar. Laboratory Manual of General
Microbiology. New York: McGraw-Hill, 1928.145p.
GAGE, D. J. Infection and invasion of roots by simbiotc, nitrogen-fixing rhizobia during
nodulation of temperate legumes. Microbiology and Molecular Biology Reviews. v. 68,
p. 280-300, 2004.
GRAHAM, P.H. Ecology of the root-nodule bacteria of legumes. In Nitrogen-Fixing
Legume Symbioses. Dilworth, M.J., James, E.K., Sprent, J.I., and Newton, W.E. (eds).
Dordrecht, the Netherlands: Springer, pp. 2358. 2008

HOAGLAND, D.R.; ARNON, D.L. The water culture methods for growing plants without
soil. Berkeley: California Agriculture Experiment Station. 1950. 32 p.
HOWIESON, J.G.; BALLARD, R.A. Optimising the legume symbiosis in stressful and
competitive environments within southern Australia some contemporary thoughts.
Soil Biology and Biochemistry, v. 36, p. 12611273, 2004.
MOREIRA, F. M. S.; SIQUEIRA, J. O. Microbiologia e Bioqumica do Solo. Lavras: Editora
UFLA, 2 ed, 2006. 729p.
PATRIARCA E. J.; TAT, R.; IACCARINO, M. Key role of bacterial metabolism in
Rhizobium-plant symbiosis. Microbiology and Molecular Biology Reviews, v. 66, p. 203222, 2002.
PRELL, J.; POOLE, P. Metabolic changes of rhizobia in legume nodules.Trends in
Microbiology. v. 14, p. 161-168, 2006.

Principais contribuies cientficas ou tecnolgicas da proposta

A presente proposta se caracteriza como pesquisa cientfica e busca esclarecer

aspectos ecolgicos da interao leguminosa rizbio e avanos biotecnolgicos
para inoculantes de leguminosas arbreas nativas.

Contribuies Cientficas: os resultados desta pesquisa pretendem esclarecer

aspectos ecolgicos da interao entre leguminosas e os alfa e betarizbios, que
tero implicaes para o emprego biotecnolgico dessas bactrias como
inoculantes de leguminosas arbreas nativas.
Outra contribuio ser a gerao de conhecimento cientfico sobre o uso desses
microssimbiontes sob determinadas condies a fim de propiciar melhor
desenvolvimento das mudas de leguminosas arbreas com a publicao de um
artigo cientfico em revista indexada na rea, tendo os pesquisadores e alunos
como autores.
As contribuies cientficas deste projeto esto tambm relacionadas formao
de recursos, ao aprimoramento tcnico e cientfico de um aluno de Mestrado e um
de Doutorado.

Contribuies Tecnolgicas: as informaes geradas por este trabalho sobre a

podero apontar para o desenvolvimento de um produto biotecnolgico a ser
utilizado como inoculante para melhor desenvolvimento e produo de mudas de
leguminosas arbreas

Oramento detalhado
Item
Consumo
Meios de cultura e reagentes
Vidraria em geral (placas de
Petri, erlenmeyers, frascos
tipo Schott e outros)
Material plstico em geral
(frascos de polietileno,
placas e ponteiras)
Micropipetas de diversos
volumes
Material para montagem dos
experimentos
Dirias
Coletas de material

Justificativa da utilizao

Valor
unitrio (R$)

Quantidade

Valor
total (R$)

Para cultivo e anlises do N na

planta
Para cultivo e manuteno dos
rizbios; preparo e
armazenamento de solues e
meios de cultivos
Para cultivo e manuteno dos
rizbios; preparo e
armazenamento de solues e
meios de cultivos
Aliquotar volumes precisos de
lquidos
Substratos, fertilizantes, vasos
plsticos

5.800,00

5.800,00

2.600,00

2.600,00

2.300,00

2.300,00

600,00

2.400,00

2.200,00

2.200,00

Parcial

15.300,00

25
Parcial

4.695,75
4.695,75

TOTAL

19.995,75

Coleta de sementes e ndulos

187,83

Cronograma fsico-financeiro
ATIVIDADE

ANO I

TRIMESTRES 1 2
Reativao e verificao da pureza das culturas de rizbios
X
Coleta de sementes e ndulos de leguminosas
X
Acompanhamento dos experimentos em casa de vegetao
X
Coleta dos dados de crescimento das plantas
Coleta dos ndulos e verificao dos rizbios
Anlise estatstica
Participao em eventos cientficos
Redao e submisso de artigo em revista indexada

ANO II

3 4 1 2 3
X
X
X
X
X X X X
X X X X X
X
X
X X
X
X
X X

X
X
X

Utilizao dos recursos: R$ 14.056,60 R$5.939,15

Identificao dos demais participantes do projeto

O aluno Jos Miguel Ferreira dos Santos (PPGBBM - UESC)
[huntter15@hotmail.com] desenvolve o Mestrado no Programa de Ps-Graduao
em Biologia e Biotecnologia de Microrganismos sob orientao do Prof. Eduardo
Gross

desde

maro

de

2009.

Este

aluno

participar

ativamente

no

desenvolvimento dos experimentos com leguminosas da Mata Atlntica em casa

de vegetao, anlise dos resultados e discusso do projeto.
O aluno Sizenando Jos de Andrade Jnior (PPGBiotec - UEFS)
[szjunior@msn.com] desenvolve o Doutorado no Programa de Ps-Graduao em
Biotecnologia sob orientao do Prof. Eduardo Gross desde maro deste ano.
Este aluno participar ativamente no desenvolvimento dos experimentos com
leguminosas da Caatinga em casa de vegetao, anlise dos resultados e
discusso do projeto.
O

Dr.

Andr

Mrcio

Arajo

Amorim

(DCB

UESC)

[aamorimm@terra.com.br] taxonomista vegetal, com larga experincia em

arbreas do Bioma Mata Atlntica no sul da Bahia, sendo ainda o curador do
Herbrio do CEPEC-CEPLAC. Contribuir na identificao e coleta das
leguminosas arbreas da Mata Atlntica.
O

Dr.

Luciano

Paganucci

de

Queiroz

(DCBio

UEFS)

[luciano.paganucci@gmail.com] taxonomista vegetal, com grande experincia

na famlia Leguminosae, especialmente as encontradas no Bioma Caatinga,
sendo tambm o curador do Herbrio da Universidade Estadual de Feira de
Santana (HUEFS). Contribuir na identificao e coleta das leguminosas arbreas
da Caatinga.
O Dr. Joo Carlos Teixeira Dias (DCB-UESC) [jctdias@uesc.br] atua na
rea Microbiologia Ambiental e o atual responsvel pelo Laboratrio de
Monitoramento Ambiental da UESC, e auxiliar na parte microbiolgica e tambm
na anlise dos resultados.
O Dr. Jos Olmpio de Souza Jnior (DCAA-UESC) [olimpio@uesc.br]
tem experincia na rea de fertilidade do solo e nutrio de arbreas e colaborar

nas anlises do solo e planta bem como na recomendao de adubao para as

leguminosas arbreas.
O Dr. Srgio Miana de Faria (Embrapa-Agrobiologia)
[sdefaria@cnpab.embrapa.br] apresenta renomada experincia na rea de
leguminosas arbreas nodulferas e trabalhos na rea de recuperao de reas
degradadas e colaborar nas anlises dos resultados obtidos pela pesquisa.

Indicao de colaboraes ou parcerias j estabelecidas com outros centros

de pesquisa na rea

Projeto em colaborao e sob a coordenao do Prof. Euan K. James da

Universidade de Dundee (Esccia) e no Brasil, junto EMBRAPA, do Dr. Srgio
Miana de Faria In search of beta-rhizobia: exploring the symbionts of Mimosa in
Brazil financiado pelo Natural Environment Research Council (NERC-UK),
tambm em colaborao com as seguintes instituies brasileiras: EMBRAPAAgrobiologia (Rio de Janeiro) e EMBRAPA-Cerrados (Brasilia). As publicaes
(artigos) at o momento geradas desta colaborao esto abaixo citadas:

BONTEMPS, C.; ELLIOTT, G. N.; SIMON, M. F.; REIS JUNIOR, F. B.; GROSS E.;
LAWTON, R. C.; ELIAS NETO, N.; LOUREIRO, M. F.; FARIA, S. M.; SPRENT,
J. I.; JAMES, E. K.; YOUNG, J. P. W. Burkholderia species are ancient
symbionts of legumes. Molecular Ecology, v. 19, p. 4452, 2010.
dos REIS-JNIOR, F.B.; SIMON, M. F.; GROSS, E.; BODDEY, R.M. ; ELLIOTT,
G.N.; NETO, N.E.; LOUREIRO, M. F.; de QUEIROZ, L.P.; SCOTTI, M.R.;
CHEN, W.M.; NORN, A.; RUBIO, M.C. ; DE FARIA, S.M. ; BONTEMPS, C.;
GOI, S.R.; YOUNG, J.P.W.; SPRENT, J.I. ; JAMES, E.K. Nodulation and
nitrogen fixation by Burkholderia spp. in the Cerrado and Caatinga biomes of
Brazil. New Phytologist (Print), v. 186, p. 934-946, 2010.

Disponibilidade efetiva de infra-estrutura e de apoio tcnico para o

desenvolvimento do projeto
Atravs dos projetos anteriormente financiados pelo CNPq Morfoanatomia dos ndulos e diversidade de rizbios em leguminosas da Bahia
(Processo n 474137/2004-0) e Ultra-estrutura dos ndulos e caracterizao
molecular dos rizbios de leguminosas da Bahia (Processo n 475232/2007-0) foi
possvel a obteno de diversos isolados de rizbios, incluindo das espcies de
leguminosas arbreas objeto da presente proposta. Esses isolados j esto
caracterizados morfologica e molecularmente e testes sobre sua eficincia da
fixao de N se fazem agora necessrios. Um aluno de mestrado e um aluno de
doutorado estaro parcialmente realizando os experimentos aqui propostos para
as diferentes espcies de leguminosas. A equipe de pesquisadores envolvida na
proposta apresenta experincia prvia sobre o tema.
A UESC possui em seus laboratrios os equipamentos necessrios para
realizar todas as anlises propostas e conta ainda com casas de vegetao
apropriadas ao desenvolvimento da etapa de estudo do crescimento inicial das
leguminosas arbreas.
Alm do aspecto de infra-estrutura para a realizao, este projeto conta
com a interao multidisciplinar de pesquisadores com experincia em diversas
reas (fisiologia de micro-organismos, nutio vegetal, taxonomia vegetal, fixao
biolgica de nitrognio em leguminosas) e que, por isso, muito contribuiro com
as discusses dos resultados obtidos.

Laboratrio de Monitoramento Ambiental (UESC)

O Laboratrio de Monitoramento ambiental coordenado pelo professor Joo
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Carlos Teixeira Dias. Com 56 m subsidia atividades de pesquisa desenvolvidas

por docentes e discentes do PPGBBM. Desenvolve estudos da diversidade
microbiana em ambientes terrestres e aquticos, o impacto causado por
contaminantes ou poluentes sobre a microbiota do solo, visa o estudo da
explorao

racional

dos

microrganismos

para

bioprospeco.

Recursos

disponveis: 1 centrfuga de bancada para Ependorf, 3 agitadores de Erlenmeyers,

fonte para eletroforese, 1 cuba de eletro transmisso, 1 cuba horizontal para

eletroforese de produtos de PCR e DNA, 2 mquinas de PCR, 3 estufas
bacteriolgicas (2 BOD), 3 Frezeres -20, 4 Geladeiras, pHmetro, 1 balana digital
semi analtica, 1 agitador magntico com controle de temperatura, 1 microondas,
1 agitador de tubos, 2 Cubas para DGGE, 1 misturador de gradiente para DGGE,
1 capela de fluxo laminar vertical classe A2, 1 computador ligado rede de
Internet, 1 digestor para DQO, destilador de gua, armrio para vidraria, armrio
para reagentes, armrio para reagentes liquido, chuveiro e lava olhos, bancada
central, instalao de gs GLP, 1 autoclave. Nele sero realizados os
procedimentos microbiolgicos do projeto.

Laboratrio de Qumica e Fertilidade do Solo (UESC)

Este laboratrio realiza as anlises qumicas de solo e plantas. Apresenta uma
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rea de aproximadamente 60 m , e os principais equipamentos deste laboratrio

so: espectrofotmetro de absoro atmica, espectrofotmetro ultravisvel,
fotmetro de chama, agitadores de tubos, agitadores magnticos com e sem
aquecimento, balanas eletrnicas, bloco digestos, banho-maria metablico,
chapa aquecedora, capela para exausto de gases, condutivmetro de bancada,
compressor de ar, deionizador e destilador de gua, destilador de nitrognio, forno
mufla, estufa para secagem e esterilizao, mesa agitadora horizontal, medidor de
pH, moinhos para moagem de solos e materiais vegetais e pipetadores semiautomtico. Nele sero realizadas as anlises qumicas dos substratos e a anlise
do teor de n nas plantas dos experimentos.

Estimativa dos recursos financeiros de outras fontes que sero aportados

pelos eventuais agentes pblicos e privados parceiros
Tanto o aluno de Mestrado, Jos Miguel, como o de Doutorado, Sizenando
Jnior esto atualmente com bolsas concedidas pela FAPESB.
Este projeto ser submetido aos Editais de financiamento de projeto de
pesquisa e desenvolvimento tecnolgico da FAP da Bahia.