ANALISIS COLIFORMES EN ALIMENTOS

PRUEBA PRESUNTIVA:
Preparacin del material.
2. Realizar diluciones seridas de la muestra de agua hasta 10-3 en agua
peptonada.
3. Realiazar 5 pases de 1 ml. de cada una de las diluciones (10-1 , 10-2 , 103 ) a tubos con 9 ml. de caldo Lauril sulfato y campanas Durham.
4. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35C.
PRUEBA CONFIRMATORIA:
Realizar pases con alquotas de 1ml. de cada los 5 tubos por dilucin a tubos
con medio EC y campanas Durham.
2. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35C.
METODO BIOQUIMICO
1. PRUEBA DE INDOL:
El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminacin reductiva
del triptfano y esta reaccin es llevada a cabo por algunas bacterias que
poseen las enzimas denominadas en su conjunto triptofanasas. Para detectar
la produccin de indol se utiliza el medio Caldo triptfano y la lectura de la
prueba

se

realiza con

el

reactivo

de

Kovacs (alcohol

isoamilo, p-

dimetilaminobenzaldehdo y cido clorhdrico concentrado) con el que el

indol producido reacciona generando una coloracin rosa intensa.

Activar las cepas

Tener ya listo el caldo triptona con

las cepas ya incubadas
previamente a 35 37 durante
24 horas

Hechar de 0.2 a 0.3 de reactivo

de indol y dejar reposar por 10
minutos.

Aparece un color rojo oscuro en la

superficie de la capa de alcohol
amlico; entonces la prueba es
positiva para e.coli.

2. Prueba de voges-proskavuer:
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo de
fermentar la glucosa con produccin de cido por la va cido mixta o con
produccin de un producto final neutro (acetona) por la va butanodilica.

Activar las cepas

Tener ya listo el caldo glucosa

tamponada con las cepas ya
incubadas previamente a 35 37
durante 48 horas.

Agregar 0.2 ml de hidroxido de

potasio y 0.6 de alfa naftol y dejar
reposar por 2 horas.

Aparece un color rosa carmes.

La prueba es positiva para
E.aerogenes y E.amnigenes.

La prueba es negativa para E.coli

3. Prueba de citrato de simmons:

Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de
crecer con citrato como nica fuente de carbono y sales amnicas inorgnicas
como nica fuente de nitrgeno, provocando la alcalinizacin del medio.
El medio a utilizar es agar Citrato de Simmons, que contiene citrato de sodio,
fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador de pH.
Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn multiplicarse en
este medio y liberarn iones amonio lo que, junto con el metabolismo del

citrato, generar una fuerte alcalinidad del medio que ser aparente por un
cambio de color del mismo de verde a azul

Se incuba el tubo con agar citrato

de simmons e inculos por 48
horas en 37C.

Para E.coli la prueba es negativa

con mantenimiento del color
verde.

Para E. aerogenes la prueba es

positiva con cambio de color a
azul.

Para E. amnigenes la prueba es

positiva con cambio de color a
azul.