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METROPOLITANA
UNIDAD IZTAPALAPA
PROFESORA:
MARIA DE LOURDES ESCAMILLA HURTADO
CUESTIONARIO DE LA PRCTICA # 4
FERMENTACIN ACTICA.
EQUIPO No. 4
ELABORADO POR:
Barragn Gutirrez Alva Adriana
Barrera Acosta Jacqueline
Fernndez Vela Jos Luis
Meja Lpez Marcelo
Muiz Ramrez Alethia
Rodrguez Duarte Carelia
Fecha de entrega
1 Marzo 2004
por consiguiente, sirve como un substrato para la generacin de energa. Sin embargo,
se confrontan organismos aerbicos con los efectos del lado potencialmente txicos de
O2, Esta amenaza es disminuida por familias de enzimas defensivas que incluyen la
catalasa y peroxidasas, as como por antioxidantes, como ascrbico (Bajo las
condiciones fisiolgicas normales, los efectos txicos de ROS son minimizados por
estas enzimas.
Debido a la solubilidad baja de oxgeno y el traslado de masa limitado en
cultivos viscosos, el oxgeno es a menudo uno de los componentes limitantes en la reaccin. As que los cultivos de oxgeno pueden mostrar a una proporcin de crecimiento
disminuida y a la productividad reducida. Con aire oxgeno-enriquecido podra ayudar
potencialmente a evitar o minimizar estos problemas y llevar a productividad mejorada
en reactores convencionales .
PRODUCTO y MTODO USADO:
Una recombinacin de Nger de Aspergillus (B1-D), diseada para producir la
protena del huevo de gallina con respecto ala susceptibilidad de la oxidacin en un
sistema de cultivo sumergido producido por exgeno y perxido, se examin en
trminos de las actividades de las enzimas: catalasa para tener mxima actividad
especfica. Un cultivo de la fase exponencial temprana, introduciendo O 2 alo largo del
experimento teniendo una correlacin con el oxgeno disuelto en procesos donde indica
que para usar el trmino "oxidativos" para abarcar una contestacin de tensin
producida por suma de un qumico (H2O2) o por oxgeno disuelto elevado porque a cada
uno podra ser bastante diferente.
Las condiciones de la cultivo eran como sigue: P H, 4.0 ; la agitacin, 600 rpm,;
proporcin de aeracin, 1 vvm,; y temperatura, 25 0.5C. Se usaron 2M NaOH y 2M
H3PO4 como pH-titrants. Un inoculo de 1010 esporas por litro del medio.
Para los experimentos se agito con H2O2, inoculando 200 mL de medio del synthetic con esporas (2.109 esporas L -1) y incub a 25C y 220 rpm. Despus de 40 h de
crecimiento, se agreg a los cultivos, y 2 h despus de esto se tomaron muestras para su
determinacin .
Para los cultivos por lote se aumento, la concentracin de la disolucin de
oxgeno mantuviendo a un nivel de 50% saturacin con aire oxgeno-enriquecido (25%
de oxgeno por el volumen y 75% de aire a travs de volumen).
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE OXGENO ELEVADO:
El nivel de O2 enriquecimiento del 25% es escogido porque su enriquecimiento a
las concentraciones ms altas (50%) fue encontrado promover la adhesin de los
elementos llevando a una apariencia del morfolgicamente diferente por otro lado un
25% de O2 enriquecido fue encontrado para ser bastante alto sobre 50% de saturacin
area en lote a lo largo del experimento, dejndose a la fase exponencial para
experimentar con aire normal, as el contraste entre las cultivos aireadas y cultivo con
O2 enriquecido debe estar claro.
Figure 4. Los Efectos de gas con 25% O2 ,-enriquecido con aire a lo largo del
experimento en un cultivo del lote (A). Actividad especfica extracelular de la catalasa
(CAT)(U . mg . protena -1), la actividad extracelular de la catalasa y clula de peso seco
vs. Tiempo, actividad especifica intracelular de la catalasa y sper oxidacin dismutasa
(U . mg . CDW-1) y la tensin disuelta del oxgeno
El O2 empleando como un evento enfatizando en la fase exponencial temprana
(CDW = 4.9 gL"1), no cambi el modelo de crecimiento, y no produca un aumento
significativo inmediato en la catalasa intracelular. Sin embargo, el aumento usual de
estas actividades en la fase estacionaria era ms pronunciado que en ambos as como en
el experimento, donde las clulas eran gases con O2 a lo largo del experimento .
INTRODUCCION:
mezcla las burbujas del gas por todo el lquido y mezcla los organismos por todo el
lquido, asegurando de este modo el acceso uniforme de todas las clulas microbianas a
los nutrientes. Uno de los agitadores ms corrientes es una lmina plana o un disco
plano unido a un eje central, que gira a gran velocidad al girar el eje unido a un motor.
Con el fin de asegurar el mximo de mezclado gracias al impulsor, suelen instalarse
deflectores verticalmente a lo largo del dimetro interior del fermentador. Al ser
revuelto por el impulsor, el lquido pasa al lado de las placas dispersadoras y de este
modo se rompe en fragmentos ms pequeos. La dinmica de los fluidos en los
fermentadores es extremadamente compleja, pero es importante para el microbilogo
industrial conocerla a fondo porque la eficacia en el diseo y en el modo de operar el
fermentador dependen de un mezclado adecuado.
El vstago que hace girar el impulsor est unido al motor a travs de otro eje que debe
penetrar en el fermentador desde fuera. Debido a la necesidad de mantener la
esterilidad, es vital que el cierre hermtico que conecta el eje con el motor est
dispuesto de tal manera que los contaminantes no puedan pasar a travs de l.
Control y vigilancia del proceso. Cualquier proceso microbiano debe ser
monitorizado para asegurar que transcurre adecuadamente, pero es especialmente
importante que los fermentadores industriales estn cuidadosamente monitorizados,
dado el gran gasto econmico implicado en ellos. En la mayora de los casos es
necesario medir no solo el crecimiento y la formacin del producto, sino tambin
controlar parmetros ambientales que se van alterando a medida que el proceso
transcurre. Los factores ambientales frecuentemente monitorizados son la temperatura,
la concentracin de oxgeno, el pH, la masa celular y la concentracin del producto.
Los ordenadores juegan un importante papel en el control de los procesos dentro del
fermentador. Durante el proceso de crecimiento y formacin del producto en una
fermentacin a gran escala, si la fermentacin ha de realizarse adecuadamente, es
esencial que los datos sobre el proceso se obtengan mientras el mismo est
transcurriendo. Por ejemplo, puede ser necesario cambiar uno de los parmetros
ambientales a medida que progresa la fermentacin, o bien aadir un nutriente a un
ritmo que equilibre exactamente el crecimiento. El ordenador puede utilizarse para
procesar los datos recin recogidos y luego responder segn las indicaciones de un
programa respecto a cundo y cunto nutriente hay que aadir. De esta manera, el
nutriente se aade cuando se necesita y no antes, evitando as una potencial desviacin
del nutriente desde el producto deseado a otros productos no deseados.
Los ordenadores pueden utilizarse tambin para modelar los procesos de
fermentacin. Utilizando un modelo matemtico, se puede ensayar el efecto de varios
parmetros sobre el crecimiento y el rendimiento del producto, de forma rpida e
interactiva y luego hacer modificaciones en los parmetros para ver cmo afectan al
proceso. De esta manera, se pueden controlar los factores que afectan a los procesos de
fermentacin y realizar estudios ms baratos en el ordenador, en lugar de realizarlos en
las plantas piloto o en las plantas industriales, lo que originara unos gastos muy
considerables.
http://es.geocities.com/joakinicu/apartado12c.htm
INTRODUCCIN
Muchos grupos de investigacin en biotecnologa alimentaria,
tanto del CSIC como de otras universidades y centros, obtienen,
en el curso de sus investigaciones, nuevos iniciadores, enzimas o
herramientas de diagnstico con potencial aplicacin en la
industria agroalimentaria. Desgraciadamente carecen de la
capacidad de produccin necesaria para proporcionar a las
empresas o clientes potenciales, muestras en los volmenes de
fermentacin requeridos para que stas puedan hacer pruebas
industriales. Por ello, en ocasiones no se puede garantizar la
reproducibilidad de los resultados de laboratorio a escala
industrial, lo que puede dificultar algunas transferencias de
tecnologa.
En pases de nuestro entorno, como Holanda o Finlandia, este
problema se ha resuelto creando Unidades de Fermentacin
asociadas a centros pblicos de investigacin. En esta misma
lnea se inscribe la puesta en marcha de la Planta Piloto de
Biotecnologa Agroalimentaria, adscrita al Departamento de
Biotecnologa del IATA que, para su construccin, ha contado con
financiacin otorgada por la CICYT y la Unin Europea (FEDER).
PROCESO DE PRODUCCIN
pH
temperatura
presin parcial de oxgeno
produccin de espumas
Aplicaciones
Los productos y procesos desarrollados en la planta de
biotecnologa agroalimentaria pueden aplicarse a los siguientes
sectores:
ttp://www.csic.es/mostrar/instalaciones/area7/iata1/piloto3.htm
III. Describa con detalle el funcionamiento y la aplicacin de un sensor de oxgeno
en cultivos microbianos, y su sistema de registro y control (consulte libros o
artculos, no pginas de Internet).
TIPOS DE SENSORES:
Sensores del Ambiente Fsico
Los parmetros mayores del proceso fsico que influyen en funcin celular y en
procesos econmicos y qu puede supervisarse continuamente es la temperatura,
presin, velocidad del impulsor, viscosidad del caldo, gas y proporciones de flujo
lquido, y volumen del reactor o masa. En reactores de laboratorio pequeo, la
temperatura y aire que la alimenta en su flujo son normalmente moderadas.La
regulacin es comn en fermentadores ms grandes.
El sensor de temperatura es un dispositivo que exhibe la resistencia como una
funcin de temperatura. Aunque la relacin de temperatura-resistencia es no-lineal, sta
no es una dificultad ya que esta por encima del rango de la temperatura de inters para
la mayora de las fermentaciones (25~45C).
Otros posibles Sensores de temperatura son el sensor de resistencia de platino,
bulbos de termmetros (Hg. en acero limpio).
Estos instrumentos tienen exactitudes en el orden de 1% de mximo y son muy
tiles para las proporciones de flujo menos de 500 L/min. Tambin disponible es los
laminares que fluyen dispositivos que determinan el flujo basados en la diferencia de
gota de presin por un dispositivo de la matriz que divide el flujo total en el mltiple
los flujos del capilar paralelos. El flujo del gas proporciona medidas importantes
FUNCIONAMIENTO Y APLICACIONES:
Medicin qumica de los Sensores
Electrodos de vapor-pueden esterilizarse repetidamente. Los que se usan
ampliamente y son de forma confiable son el electrodo del pH que generalmente es una
sola unidad vidrio-referencia electrodo plan. Un diagrama esquemtico de un electrodo
del pH diseado para la esterilizacin del autoclave los Electrodos para la esterilizacin
debe proporcionar equilibrio de presin durante la esterilizacin o debe apresurar el
funcionamiento del bioreactor. La medida de potencial de redox es posible usando un
platino combinado y electrodo de la referencia. La Combinacin del pH-redox sondas
estn disponibles. Mientras la influencia de pH en cintica bioqumicas se establece
claramente y la importancia fsica de una medida del pH , la interpretacin de redox las
medidas potenciales y bajo la relacin entre el redox potencial y la actividad de la clula
puede ser dificultoso. Una aplicacin prometedora de medidas del redox est
supervisando bajo volmenes de oxgeno disuelto (<1 ppm) en procesos anaerobios (450 mV <Eh <-150 mV) donde los producto de la formacin puede ser bastante sensible
a Eh
Los potencimetros miden la presin parcial (o actividad) del oxgeno disuelto .
En ambos planes, una membrana oxgeno-permeable normalmente al separarles el
electrodo interno del fluido del medio (Fig. 10.1). Tambin proporciona el rasgo comn
de reduccin de oxgeno al ctodo
Ctodo
02 + H20 + 2e
20H
Pb
Pb2+ + 2e
AgCL + e
En estado firme, el flujo del oxgeno al ctodo depende en una serie de pasos de
transporte en que los movimientos de oxgenos del lquido de volumen a la superficie de
la membrana exterior, difunde a travs de la membrana, y finalmente a travs de la
solucin del electrolito a la superficie del ctodo donde la reaccin ocurre eficazmente
A la magnitud que los primeros lmites del paso en la proporcin de transporte global, y
as el flujo del oxgeno al ctodo, el rendimiento del electrodo depender de propiedades
fluidas (Ej., viscosidad) y condiciones hidrodinmicas locales cerca del electrodo. Por
esta razn se ha recomendado, por ejemplo, que la velocidad fluida a la punta de un
electrodo del polarografico debe ser por lo menos 0.55 m/del rendimiento sensitivo del
electrodo a transporte de capa de lmite externo tambin puede ser reducido usando una
membrana menos permeable. (Por qu?) Este acercamiento tiene la desventaja de
introducir retraso de tiempo adicional en la contestacin del electrodo instantnea a las
presiones parciales de oxgenos disueltos. El tiempo caracterstico de los Sensores de
oxgenos disueltos es bastante largo (10-100 s). Sin embargo, como mostrado en el
ejemplo siguiente, todava pueden aplicarse para caracterizar la transferencia de masa de
las propiedades del reactor proporcionadas a travs de la influencia de difusin de la
membrana en el anlisis.
Vapor-esterilizable electro qumicamente para disolucin de CO2 la presin
parcial se ha introducido recientemente. El CO 2 producido , por ejemplo, determina
Pco2 midiendo el pH de una solucin de bicarbonato normal qu est separado del
fluido del proceso por una membrana permeable de gas. La calibracin se cumple
midiendo pH despus de la substitucin de una solucin de referencia para la solucin
de bicarbonato.
Otra clase de mtodos para el ensayo en lnea de componentes voltiles y los
gases disueltos es basado en la inmersin de una longitud de tubera, permeable al
componente de inters, en el fluido para ser analizado. El flujo continuo de un gas del
portador a travs de la tubera barre los compuestos que penetran en la tubera a un
dispositivo de anlisis de gas donde la medida se dirige. Este acercamiento padece
retrasos de la medida sustanciales (2-10min) y, por consiguiente, no es ptimo para
supervisar a los transentes rpidos en concentraciones.
Se han desarrollado varios biosensores para el ensayo de componentes
especficos en la fase lquida. stos son basados en acoplar la accin de enzimas
inmovilizadas o clulas con un dispositivo analtico que descubre un producto particular
de la reaccin del biocatalizador. Ejemplos combinar enzima-catalizador estudiando
extensivamente la enzima en que el calor solt por una enzima-catalizada y la reaccin
es descubierta por un calormetro cercano. Resumiendo algunos de los compuestos que
han sido ensayados por este mtodo y las enzimas correspondientes empleadas. Otras
posibilidades para desarrollo del biosensor que usa enzimas inmovilizadas (transistores)
de la enzima en que los productos de la reaccin (por ejemplo, hidrgeno)a los cambios
de la causa en las propiedades electrnicas de los dispositivos transistorizados
conteniendo clulas enteras inmovilizadas. Tabla 1 resume las propiedades de varios
Sensores de la clula.
Sustancia analizada
Enzima Inmovilizadora
Ac. Ascorbico
Albumina (antigeno)
ATP
Colesterol
Etanol
colesterol oxidasa
Alcohol oxidasa
Galactosa
Glucosa
Galactosa oxidasa
Glucosa oxidasa / catalasa
Insulina (antgeno)
Antgeno inmovilizado +
enzima-uni antgeno
Lactosa
Triglicridos
Lipasa
Concentracin
rango o lmite
mmole/L
0.05-0.6
10 -10
1-8
0.03 0.15
0.1 1
0.1 1
0.002 0.8
0.1 1.0 unit/ml
0.05 - 10
0.1 - 5
.
Los requisitos para este mtodo son un agente especfico para el componente a
ser ensayado, disponiendo de un componente adecuadamente etiquetado que compite
para el mismo agente especfico, y un medios de agente de encuadernacin de
separacin de la solucin . Por ejemplo, una fibra de fluorescencia ptico se ha
construido para el anlisis de glucosa por conconavalina A (Con-A)del inmobilizador ,
una protena de frjol de la soya que selectivamente liga azcares, en las superficies
interiores de una cmara. La cmara de separacin de la solucin ensayada por una
membrana de la dilisis permeable a glucosa, La membrana usada es impermeable al
FITC-dextran que compite con glucosa por ligar a Contra-un:
Glucosa + Con-A
Con-A-glucosa
FITC-Dextran + Con-A
Con-A-FITC-dextran
As, la cantidad de dextran, y la intensidad de emisin de fluorescencia moderada, es
una funcin de la concentracin de glucosa de solucin. En interferencia por otro soluto
que tambin liga al agente de especfico (maltosa, sacarosa, y fructosa a Con-A) Con un
sensor que emplea enzimas, clulas, o otro bioquimico es la desactivacin del sensor
durante la esterilizacin del reactor.
Anlisis de gas
BIBLIOGRAFIA
CUESTIONARIO DE LA PRCTICA # 4
FERMENTACIN ACTICA
1. Bailey. 1986. Biochemical Engineering Fundamentals. Edit. McGrawHill, Inc. New York pag. 658- 670.
2. Owen 1989. Biotecnologia de la fermentacin, Ed, Acribia ,Zaragoza
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