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FISIOLOGIA VEGETAL
Cdigo: 201711
Germn Castellanos
(Director Nacional)
1. IDENTIFICACION DE LA PRCTICA
Nombre de curso
Fisiologa Vegetal
Cdigo de curso
201711
Sede Nacional
Justificacin
prctica
Competencias
desarrollar
de
el
uso
del
agua,
el
Duracin de la prctica.
5 horas
1. METODOLOGIA
A. Actividades a desarrollar:
Visita a anlisis de un sistema de cultivo agrcola o forestal
Descripcin de la ubicacin geogrfica del sitio y descripcin detallada las condiciones
ambientales y relieve.
Observacin de la arquitectura y morfologa de la plantas, estado de desarrollo de las
plantas (principales fases fenolgicas) y sistema de cultivo (arreglo y densidad de
siembra, riego, tutorado, etc).
Observar las condiciones ambientales (Temperatura, precipitacin, viento, radiacin solar,
HR, suelos), especficas en el sitio visitado que pueden impactar fuertemente el
rendimiento del cultivo (negativa o positivamente).
Analizar y discusin de lo observado relacionando las implicaciones sobre la
transpiracin, respiracin y la fotosntesis, nutricin, traslocacin de fotoasimilados, etc.
Proponer recomendaciones para mejorar en las plantas el uso del agua, el
aprovechamiento de la luz y el espacio.
B. Elementos necesarios para la prctica: Sistema de produccin agrcola o
Forestal
C. Productos a entregar al tutor de prcticas. El estudiante entregar: Informe
de las actividades realizadas.
El informe debe contener.
Portada
Introduccin
Resumen de actividades y resultados.
Anlisis y Discusin.
Conclusiones
Bibliografa
OPCIN 2. LABORATORIO
1. IDENTIFICACION DE LA PRCTICA
Nombre de curso
Fisiologa Vegetal
Cdigo de curso
201711
Sede Nacional
German.castellanos@unad.edu.co
Espacio
donde
se
desarrollar la prctica
Objetivos de la prctica
Justificacin de la prctica
Competencias a desarrollar
Duracin de la prctica.
2. METODOLOGIA
Esta es una gua general para realizar el laboratorio de fisiologa vegetal, sin embargo el
tutor de prctica teniendo en cuenta el mdulo del curso podr cambiar, modificar o
proponer las actividades del laboratorio de acuerdo a disponibilidad de recursos y a la
experiencia profesional.
LABORATORIO DE FISIOLOGA VEGETAL
1. DETERMINACION DEL CONTENIDO DE AGUA EN LAS PLANTAS
Introduccin
El contenido de agua es la medida ms comn para estimar el grado de hidratacin de las
plantas. Por lo general, ste se expresa en trminos relativos, en relacin con la mxima
capacidad de agua que los tejidos vegetales pueden almacenar, y se expresa de manera
sencilla as:
= Pf - Ps
Donde:
= Contenido de agua en gramos
Pf = Peso fresco
Ps = Peso seco (a 85C hasta peso constante).
Sin embargo, esta medida es imprctica porque no se pueden hacer comparaciones con
otras medidas de contenido de agua en las mismas plantas o con otras especies.
El contenido de agua se puede expresar con base en peso seco o peso fresco; es decir:
Formula:
100
100
100
100
DSA = 100-CRA
Objetivo
Determinar el contenido relativo de agua en plantas (CRA).
Material
Material vegetal, cajas de Petri, balanza y sacabocados de 17 rnrn de dimetro
aproximadamente.
Procedimiento
Con el sacabocados se cortan discos de hojas y se pesan (peso fresco: PF, despus se
colocan en cajas de Petri con agua destilada y se dejan saturar durante cuatro horas (es
importante que se determine el tiempo que se dejan saturar en agua las diferentes
especies de plantas a las cuales se les determine el CRA, por ejemplo, para el caso de
frijol son cuatro horas. Esto se logra si se pesa en diferentes intervalos hasta que las
muestras no cambian de peso). Despus, se sacan de la caja de Petri y se elimina el
100
Pt (mg)
Ps (mg)
CRA (%)
24.60
28.60
4.45
87
0.51
0.65
0.22
Xs
0.20
0.26
0.09
Pt (mg)
Ps (mg)
CRA (%)
25.45
30.65
3.93
77
1.02
1.10
0.34
SX
0.41
0.45
0.14
la diferencia entre el potencial qumico del agua en el sistema y el potencial qumico del
agua pura a la misma temperatura, y se expresa de la siguiente manera:
Potencial de agua = A =
ln
Donde:
R = Constante de los gases
V = Volumen parcial molar
T = Temperatura absoluta
e = Presin de vapor del agua en el sistema
e = Presin de vapor a saturacin del agua pura.
Introduccin
Este mtodo para determinar el potencial de agua (A) es uno de los ms antiguos. Se
basa en el hecho de que los tejidos vegetales ganan o pierden agua, cuando se les coloca
en soluciones que tienen un potencial osmtico (o) conocido como sacarosa, manitol o
polietiln glicol. Las soluciones con una concentracin conocida se utilizan para ceder o
absorber agua del tejido vegetal que se coloca en ellas. La finalidad de este mtodo es
encontrar una solucin en la cual el tejido no modifique su peso. Esto indica que no hubo
ni prdida ni ganancia de agua y que el tejido y la solucin estn en balance, por lo tanto,
el A del tejido es igual al A de la solucin.
Este mtodo, basado en el cambio de peso, puede ser muy til cuando no se tiene otros
instrumentos que ayuden a precisar el A.
Objetivo
Determinar el potencia' de agua (A) en plantas utilizando esta tcnica.
Material
Material vegetal (de preferencia papa). cajas de Petri sacabocados con un di~metro de 10
mm, balanza analtica, pinzas, papel secante y soluciones de sacarosa: 0,05 0,1 0,2 0,5
0,8 molal.
Procedimiento
Prepare las cajas de Petri con 50 ml de las soluciones de sacarosa. Tome muestras de la
papa con el sacabocados, aproximadamente cilindros de 1 cm de longitud y pese estos
tejidos en la balanza (peso inicial). Coloque cada cilindro en cada caja de Petri con la
solucin de sacarosa; mantngalo as y pese cada cilindro a intervalos de un .hora
(elimine el exceso de agua con papel secante), hasta que los cilindros de papa ya no
indiquen aumento de peso. Saque los cilindros de papa, elimine el exceso de agua con
papel secante y pselo. (Peso final).
% de cambio de peso =
Las diferentes especies de plantas tienen distinta velocidad de absorcin de agua, por eso
es importante pesar en diferentes intervalos y determinar el tiempo que tarda en alcanzar
el equilibrio cada una de las especies que se desea estudiar.
Ejemplo:
A continuacin, se indican los resultados de A obtenidos en esta prctica. El A es el
punto en que el tejido ni aumento ni perdi peso (igual al o de la solucin), este valor se
busca en tablas de presiones osmticas de la siguiente ecuacin:
o = -miRT
En donde:
o = potencial osmtico de la solucin
m = molalidad de la solucin (moles de soluto/1000 g H2O)
I = una constante que estima la ionizacin del soluto u otras desviaciones de soluciones
perfectas.
R = Constante general de los gases (0.0831 litros baria/mol grado).
o = - RTCs
Donde:
R = constante de los gases (8,32 Lmolv.k': 0,00831Kg.MPa.moll.okl)
T = temperatura absoluta en grados Kelvin
Cs = concentracin de solutos de la solucin expresada como osmolalidad (moles de
solutos totales disueltos por litro de agua [mol.L:']).
Objetivos
Determinar con esta tcnica el potencial de agua del tejido vegetal.
Materiales
Tubos de ensayo (10)
Material vegetal (hojas o trozos de papa de igual tamao)
Pipetas de 10 mL
Azul de metileno al 1 %
Gradilla
Pinzas y cuchillas
Pipetas Pasteur o cuentagotas
Soluciones de sacarosa con concentraciones de 0,05 0,1 0,2 0,5 0,8 molal
Metodologa
Preparar 2 series de 5 tubos de ensayo con las soluciones de sacarosa. Se debe
etiquetar dos tubos de ensayo por cada una de las concentraciones de sacarosa.
Realice cortes con un sacabocados crculos de tejido de las hojas (o papa para que el
proceso sea ms rpido) o con un bistur cortes de un cm2.
En la primera serie se agrega a cada tubo 15 mL de una solucin de sacarosa y 4
cortes o discos de hojas, del cual se desea conocer su potencial hdrico. En la
segunda serie se colocan 15 mL de solucin de sacarosa ms cuatro gotas de azul de
metileno. Se deben tapar los tubos con papel parafilm para evitar la evaporacin.
Al cabo de dos horas, se retira con unas pinzas el tejido vegetal de cada uno de los
tubos. Con el cuentagotas o una pipeta Pasteur se toman unas gotas de la solucin
coloreada de sacarosa 0,05 molal y se libera a unos 3 cm bajo la superficie de de la
solucin del el tubo donde estaba el tejido a la concentracin 0,05 molal, observando
qu sucede con la gota coloreada, y as con cada uno de los dems tubos de forma
respectiva. Se toma como parmetro si la gota sube, baja o se diluye. Escriba los
resultados en una tabla.
El potencial hdrico ser igual al potencial osmtico de la solucin coloreada en la cual
la gota de la solucin coloreada permaneci suspendida.
Discuta los resultados.
TCNICA DE
Introduccin
La prdida de agua que sufren las plantas es un fenmeno totalmente fsico; el agua se
evapora de la hoja como lo hara de un recipiente cualquiera. La hoja necesita estar
saturada de agua para su vida normal, y aunque tiene la epidermis impermeable, siempre
hay difusin a travs de ella; igualmente, la hoja tiene estomas y, si bien puede cerrarlos,
el cierre no es hermtico. Adems, los estomas se abren conforme a las leyes
fisicoqumicas. Es claro que una planta no podra vivir sin intercambio de O2 y CO2 con el
ambiente; y por donde entra CO2 escapa H2O gaseoso, lo cual se da con la apertura de
los estomas que depende de las circunstancias del medio ambiente.
La mayor parte de la transpiracin se hace por los estomas; aun cuando el ostolo est
cerrado, deja un orificio de aproximadamente 0,211 y, dado el tamao de la molcula de
agua (0,3nm), se calcula que pueden pasar por el estoma cerrado unas 5.000 molculas.
Los estomas son poros formados por un par de clulas especializadas llamadas clulas
guarda. Se encuentran en la epidermis de las partes areas de la mayor a de las plantas
terrestres.
Convencionalmente, un estoma se acepta como el poro y las dos clulas que lo rodean
(clulas guarda). Un complejo estomtico se refiere a las clulas guarda y a las clulas
vecinas (clulas subsidiarias).
La apertura y cierre del estoma es posible por la morfologa especial de las clulas
oclusivas o guardas, que al llenarse de agua, se alargan y se despegan las paredes que
forman el borde del ostolo, el cual queda abierto; cuando sale agua de ellas, quedan
flcidas y por elasticidad toman su forma primitiva.
El estudio de los estomas es uno de los campos ms activos en la fisiologa vegetal y una
de las razones de este gran inters se debe a que los estomas intervienen en el control de
dos de los ms importantes procesos fisiolgicos en las plantas: fotosntesis y
transpiracin.
Usualmente, los estomas estn distribuidos al azar en la epidermis de las plantas. Sin
embargo, en la mayora de las monocotiledneas y en gimnospermas los estomas estn
distribuidos en hileras.
Factores genticos y ambientales como disponibilidad de agua, intensidad de luz,
temperatura, y concentracin de CO2 influyen en la distribucin, frecuencia y morfologa
de los estomas. Debido a que todos estos factores influyen en la frecuencia. Salisburv
introdujo, en 1928, el trmino ndice estomtico, que relaciona el nmero de estomas por
unidad de rea con el nmero de clulas epidrmicas por unidad de rea:
Indice estomtico =
Al parecer este ndice permanece constante dentro de las hojas de una misma planta.
El estudio de los estomas se puede realizar mediante dos mtodos: los directos y los
indirectos. Los directos incluyen las observaciones directas en las hojas en el microscopio
o mediante rplicas de la superficie de las hojas. Los mtodos indirectos incluyen las
estimaciones de la apertura de los estomas mediante pormetros de flujo de masas,
pormetros de resistencia a la difusin.
Objetivo
Dominar la tcnica de impresin de estomas y determinar el ndice estomtico en
diferentes especies de plantas.
Material
Objetivos
Determinar la cantidad de clorofila total, y de clorofilas a y b presentes en una muestra de
hoja.
Materiales e Instrumentos
- Material vegetal (Hojas de la planta seleccionada)
- Mortero y pistilo
- Probeta
- Acetona
- ter de petrleo
- Tubos de ensayo
- Pinzas
- Espectrofotometeo
Extraccin de clorofila
- Embudo de decantacin
- Pipetas
- Carbonato de calcio
- Cloruro de sodio (10%)
- Sulfato de sodio anhidro
Procedimiento
1) Tome 3 g de tejido foliar sin nervadura.
2) Macere.
3) Aada 0,1 g de CaC03 y contine macerando.
4) Aada 10 ml, de acetona al 80% y contine macerando.
5) Tome el sobrenadante del macerado y llvelo al embudo de separacin. Tpelo
para evitar que se volatilice la acetona.
6) lave nuevamente el macerado con 10 ml, de acetona, lleve el sobrenadante al
embudo de separacin y tpelo.
7) Agregue 15 ml, de ter de petrleo al mortero y termine de macerar el tejido
vegetal.
8) Vierta el sobrenadante en el embudo de separacin y tpelo.
9) Agite el embudo de separacin en forma rotatoria, teniendo cuidado de que el
tapn no salga expulsado del embudo.
10) Prepare una solucin de NaCl al 10%.
11) Tome 60 ml, de solucin de NaCl y adala al embudo de separacin. Tape y
agite en forma rotatoria.
12) En el embudo de separacin se forman dos capas. Retire el tapn y elimine la
capa inferior abriendo la llave de paso.
13) Repita los pasos 11 y 12 .:
14) Recoja la capa superior en un tubo de ensayo, tpelo y llvelo a la oscuridad para
evitar la incidencia de la luz.
Cantidad de clorofila
Calibre el fotocolormetro utilizando acetona al 80% como blanco de calibracin. Tome
la densidad ptica del extracto de clorofila con el fotocolormetro, ajustando el aparato
a longitudes de onda entre 663 y 645 nm para cada medida.
Si el extracto est muy concentrado, haga una dilucin 1: 10 con acetona al 80%.
Cantidad de clorofila (a, b o total) en mg de clorofila por g de tejido (mg!g):
Clorofila a =
Clorofila b =
Clorofila total =
Donde:
D = densidad ptica o absorbancia.
V = volumen de extracto utilizado en la determinacin de la densidad ptica.
W = masa del material inicial (3 g de tejido foliar).
Resultados y preguntas
Nota: El tutor de prctica debe enviar un informe de prcticas al director del curso
con las actividades realizadas, fecha de realizacin de la prctica, la lista de
estudiantes con nombres completos, cdigos de estudiantes y las calificaciones
respectivas (teniendo en cuenta la rbrica de evaluacin). La calificacin final del
componente prctico de los estudiantes debe ser de 0 a 100 puntos (ver rbrica de
evaluacin).
Participacin en
La actividad
practica
Valoracin Baja
Valoracin Media
Valoracin Alta
Mximo
El estudiante
El estudiante no particip en El estudiante tuvo una deficiente
particip
el actividad prctica
participacin en las actividades prcticas. activamente en las
prcticas
(Puntos 0)
40
(Puntos=20 )
(Puntos =40)
Estructura del
Documento
El estudiante no tuvo en
cuenta las normas bsicas de
El documento tiene la
presentacin de trabajos
El archivo le falta algunos elementos de la
estructura y nombre
escritos ni las orientaciones estructura solicitada
de archivo adecuado.
de la gua para la
construccin del documento.
(Puntos = 8)
(Puntos= 15)
15
(Puntos = 0)
(Puntos = 0)
Referencias
bibliogrficas
(Puntos =10)
Se maneja de manera
inadecuada el uso de citas y
Aunque presenta referencias en la
referencias (no hace las citas
bibliografa, estas no tienen errores de
en el texto), o las
forma.
referencias no son acordes a
la temtica de trabajo.
(Puntos = 5)
(Puntos = 20)
El manejo de citas y
referencias es
satisfactorio.
10
(Puntos =10)
(Puntos = 0)
Ortografa
25
El documento presenta ms
de 3 errores de ortografa.
El documento no
El documento presenta hasta 3 errores de
presenta errores de
ortografa.
ortografa.
(Puntos=0)
(Puntos=5)
10
(Puntos =10)
TOTAL DE
PUNTOS
POSIBLES
100