8.

1 Introduccin
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Las teoras que consideran el dao molecular como origen de procesos degenerativos asociados al envejecimiento (Harman, 1991) parecen explicar, en
gran medida, muchos de los fenmenos relacionados con este. Segn dichas teoras cabe esperar que el deterioro en las estructuras moleculares
aumente con el tiempo, a pesar de que las clulas cuentan con dispositivos muy eficientes para contrarrestarlos a medida que son detectados. Las
manifestaciones fenotpicas de esas alteraciones sern ms o menos acentuadas en funcin de la cantidad y el tipo de molculas afectadas. En este
sentido hay que pensar que los daos en biomolculas (protenas, lpidos, etc.) tendran, en principio, escasa repercusin si se producen a baja
frecuencia, ya que segn el tipo de molcula daada podran ser reparada o sintetizada una nueva copia de la misma. No ocurrira lo mismo si el dao se
produjese en determinadas regiones del genoma de clulas somticas o germinales (se incluyen en esta denominacin genrica tanto clulas de tejidos
reproductivos como las clulas madre de tejidos adultos) que contengan genes o regiones reguladoras de la expresin de los mismos, ya que en este
caso, si el dao permanece sin reparar podra verse afectada fenotpicamente la lnea celular en cuyo genoma se localice la alteracin (Lombard et al.,
2005).

Dada la relativa facilidad con la que hoy se puede amplificar y analizar una determinada regin del genoma, no resulta extrao que en los ltimos aos se
hayan incrementado de manera considerable los trabajos encaminados a la bsqueda de genes implicados en la etiologa molecular de numerosas
enfermedades, y entre estas las que se asocian al envejecimiento. En este sentido los casos ms representativos tal vez sean los tumores y
determinados procesos degenerativos, debido al incremento de la incidencia de los mismos en relacin con la edad y su etiologa mutacional. La relacin
causal entre deterioro genmico y envejecimiento parece evidente (Johnson et al, 1999), y tal vez sea esta la faceta mejor estudiada a nivel molecular en
lo que al envejecimiento se refiere, por ello dedicamos este captulo a exponer las causas del deterioro del ADN celular y los mecanismos de que dispone
la clula para repararlo.

8.1.1 Inestabilidad del material gentico

Cuando a lo largo de la evolucin la naturaleza selecciona una determinada molcula para desempear una funcin concreta, se supone que se trata del
instrumento ptimo para ello, aunque en algunos casos resulta difcil conjugar ciertas propiedades como eficiencia funcional y estabilidad qumica, un
ejemplo claro de esta dificultad la tenemos en el caso de los cidos nucleicos como portadores del mensaje gentico. Las bases nitrogenadas que forman
parte del ADN son especies moleculares relativamente inestables, y en el medio intracelular sufren, de manera espontanea y con relativa frecuencia,
modificaciones qumicas (Figura 1 y Tabla 1) (Watson et al., 1987). La composicin qumica de los nucletidos tambin se puede ver modificada por la
accin de agentes externos (mutgenos) de naturaleza fsica o qumica, aunque este tipo de alteraciones no sern tratadas en este trabajo, hay que decir
que muchas de ellas son detectadas y reparadas por los mismos mecanismos celulares utilizados para el caso de las alteraciones espontneas.

Figura 1. Modificaciones ms frecuentes en la copia del ADN.

Otro posible origen de alteraciones espontaneas en el ADN radica en la gran similitud estructural que presentan las diferentes bases entre s (pricas o
pirimidnicas), esto hace que en algunas ocasiones la maquinaria encargada de duplicar el material gentico, a pesar de su elevada eficiencia en el
proceso, confunda las bases y origine una mutacin. An as la precisin con que la maquinaria replicativa lleva a cabo su funcin es muy alta, ya que
adems dispone de un mecanismo de supervisin y correccin de la copia recin sintetizada. Se calcula que la frecuencia con la que la maquinaria
replicativa coloca en el ADN sintetizado una base incorrecta es de aproximadamente una de cada 10.000, cifra importante si tenemos en cuenta el
nmero total de nucletidos que tiene un cromosoma eucaritico. No obstante el sistema de revisin de copia de la polimerasa rebaja la frecuencia de
errores unas 100.000 veces sobre la anterior, por lo que podemos decir que la frecuencia de errores espontneos cometidos por la polimerasa nuclear
encargada de replicar el ADN es de aproximadamente un nucletido de cada 10 9. Este no sera el caso de la polimerasa del ADN mitocondrial, donde la
eficiencia a la hora de corregir errores es mucho ms baja, lo que se traduce en una tasa mutacional ms elevada que la que se observa en el ADN
nuclear.
De lo anteriormente expuesto se concluye que, segn la fase del ciclo celular que consideremos, hay dos tipos de mutaciones en funcin de su origen:

A) Las que se producen sobre el ADN no replicante producto de alteraciones qumicas (espontneas o inducidas por agentes internos o
externos) en las bases nitrogenadas.

B) Las que se producen en la fase S, originadas por un error de la maquinaria replicativa.

Las mutaciones que ms parecen afectar a la clula son aquellas que, no habiendo sido previamente reparadas, obstruyen el proceso replicativo o la
transcripcin gentica, por ello los mecanismos de reparacin ms activos los encontraremos actuando en las etapas del ciclo celular donde ocurran

dichos fenmenos. Se supone que el ADN presente en la cromatina de alto grado de compactacin (heterocromatina) no sera objeto de supervisin
frecuente fuera de la fase S del ciclo por dos razones:

A) El recubrimiento proteico del ADN en la cromatina disminuira la posibilidad de que aqul se exponga a agentes mutagnicos, reducindose
de esta forma la frecuencia de mutacin (en este caso el ADN mitocondrial, al carecer prcticamente de histonas, estara ms expuesto a la accin
de agentes mutagnicos).

B) La alta compactacin de la cromatina impedira a la maquinaria de supervisin de la copia acceder a la superficie del ADN para poder realizar
su labor. No obstante es mucho lo que queda por conocer a este respecto.

Aunque la mutabilidad de la copia del material gentico podra considerarse una circunstancia adversa para la clula y su descendencia, es esta
naturaleza mutable del material gentico lo que ha permitido evolucionar a los seres vivos por adaptacin progresiva a las condiciones impuestas por un
entorno variable. En algunos casos la forma en la que se manifiesta una mutacin es una alteracin morfolgica o funcional. En otros casos su nivel de
letalidad es tal que nunca dar lugar a un sujeto viable. Aunque, en la mayora de los casos, las mutaciones puntuales no dejan una huella fenotpica
(mutaciones silenciosas), bien sea porque no tienen como consecuencia la modificacin de la secuencia de aminocidos de la protena codificada por el
gen mutado, o porque la sustitucin de un aminocido por otro no altera mucho la funcin de dicho producto. En el mbito de estudio en el que nos
encontramos la senescencia tenemos que hacer adems una clara distincin entre aquellas mutaciones que heredamos de los progenitores y las que
adquirimos a lo largo de la vida, y que mayoritariamente afectan a nuestras clulas somticas. Entre las primeras podra haber algunas que nos
predispusiesen al envejecimiento prematuro (disfuncin acentuada de un tejido especfico an en fases tempranas de la vida), y que daran lugar a una
serie de patologas que se conocen con el nombre genrico de progerias (precisamente en muchas de ellas estn mutados genes que defienden al
organismo frente a las mutaciones). Las segundas se iran adquiriendo de manera aleatoria a lo largo de la vida, en funcin de la presin del ambiente, y
su acumulacin ira reduciendo progresivamente la funcionalidad de los distintos rganos y tejidos hasta alterar la homeostasis orgnica, de tal forma que
a partir de cierto grado de deterioro hara inviable el sistema producindose como consecuencia la muerte. Como vemos en esta ltima definicin va
implcita la de envejecimiento.

8.2 Modificaciones ms frecuentes en la copia del ADN

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8.2.1 Sitios AP
Genricamente se entiende por sitio AP un punto del genoma (ADN) que ha sufrido la prdida espontnea de la base nitrogenada; en este caso la base
se desengancha de la ribosa generndose un sitio (AP) apurnico o apirimidnico (segn la base que se pierda). Se calcula que en una clula
humana se generan al da unos 5.000 sitios AP. La polimerasa encuentra dificultades para replicar una zona donde hay un sitio AP, por lo que la alteracin
debera repararse antes de que la horquilla replicativa o la maquinaria transcripcional alcance esa zona.

8.2.2 Desaminaciones

Otro tipo de alteraciones que sufre el ADN es la prdida de grupos amino de sus bases nitrogenadas (las que lo tienen: A, G o C) (Figura 2). Hay que
tener en cuenta que la desaminacin de una citosina produce uracilo, esta base no existe en el ADN pero s en el ARN, y por ello ha de ser sustituida
nuevamente por una citosina.

Figura 2. Cambio de composicin de bases nitrogenadas por desaminacin.

Un caso relevante en las desaminaciones de las bases surge como consecuencia de la desaminacin de la 5-metil-citosina, en este caso la retirada del
grupo amino de la 5-metil-citosina convierte a esta en timina, que es un nucletido normal en el ADN, por lo que si este error no se repara antes de la
replicacin la maquinaria encargada de la misma podra formar una hebra hija con una A en lugar de una G. La importancia de este tipo de
desaminaciones se debe a la frecuencia con la que aparecen en el genoma eucaritico pares GC en los que la citosina est metilada. Se piensa que la
frecuencia de desaminaciones por clula y da es ms baja que la de formacin de sitios AP, pero no por ello dejan de ser una causa importante de
mutaciones.
Tanto los sitios AP como las desaminaciones son consecuencia directa de la naturaleza inestable del nucletido, estas modificaciones estn
desencadenadas por variaciones en el entorno fisico-qumico de la molcula que suponen cambios de pH o de temperatura, cuando estos se apartan de
los valores fisiolgicos normales.

8.2.3 Metilaciones
En algunos casos se producen en el ADN metilaciones, que consisten en la introduccin de grupos metilo (CH 3) en un tomo de la base nitrogenada. La
metilacin de bases nitrogenadas del ADN es un fenmeno habitual tanto en procariotas como en eucariotas, ya que dicha modificacin especfica (como
es el caso de la metilacin de restos de citosina en los pares CG en eucariotas) cumple una funcin en la clula. No obstante se conocen metilaciones
atpicas de las bases, como en el caso de la formacin de un derivado metilado de la guanina (O 6-metil-guanina). Esta base modificada puede generar
una mutacin post-replicativa si no es reparada a tiempo, ya que aparea con la misma probabilidad C y T.

INESTABILIDAD QUMICA PROPIA DEL ADN

Prdida de base, metilaciones, desaminaciones, etc.

SUBPRODUCTOS DEL METABOLISMO CELULAR

Radicales libres y otros oxidantes.

AGENTES EXTERNOS
Radiaciones U.V., radiaciones ionizantes, agentes genotxicos.

ERRORES DE LA MQUINA REPLICATIVA

Colocacin defectuosa de bases en la replicacin del ADN.

Tabla 1. Origen de las alteraciones en el ADN.

8.2.4 Dmeros de pirimidina

Este tipo de alteracin es frecuente encontrarla en clulas de la epidermis, y se caracteriza por la formacin de un enlace covalente entre dos bases
pirimidnicas colocadas en posiciones adyacentes en el ADN. Suelen formarse cuando el ADN se expone a una fuente de radiacin U.V. (Figura 3).

Figura 3. Formacin de dmeros de timina. La formacin de un enlace entre dos restos de timina adyacente distorsiona la estructura de la doble hebra.

La formacin de un enlace entre ambas bases distorsiona la doble hebra de tal forma que compromete la replicacin o la transcripcin, por lo que han de
ser reparados antes de que estas concluyan. El hecho de que solamente se vea afectado tejido epidrmico se debe a que la capacidad de penetracin de
la radiacin U.V. no va ms all de unos milmetros.

8.2.5 Dao oxidativo en el ADN y rotura de hebras

Otro tipo de daos, no poco frecuentes en el material gentico, son las reacciones qumicas que se producen entre componentes del ADN y agentes
qumicos muy activos producidos por la propia actividad celular (Halliwell y Gutteridge, 1999; Hasty y Vijg, 2002). En este sentido las especies reactivas
del oxigeno (RLO) que hemos descrito en el captulo anterior seran los ejemplos ms representativos de dichas sustancias. La interaccin de los
OH. con el ADN deja toda una serie de huellas qumicas donde la ms caraterstica es la 8-oxo-2 deoxiguanina (Zglinicki et al., 2001), por lo que resulta
relativamente fcil cuantificar el dao evaluando la presencia de ese compuesto. Adems de esto, los radicales OH . actan como fuertes oxidantes
capaces de reaccionar no slo con las bases nitrogenadas, sino que pueden hacerlo, aunque en menor grado, con otros elementos moleculares del
dplex, pudiendo provocar con ello la rotura de una o ambas hebras del ADN (Barnes, 2002), lo que supone un dao considerable en el genoma. Se
estima que el nmero de ataques de especies reactivas del oxgeno sobre el ADN por clula y da es de aproximadamente 100.000 en el ratn y de unos
10.000 en humanos. Llegado este punto hay que hacer una matizacin de inters, y esta se refiere al hecho de que la nica especie reactiva del oxgeno
que parece que es capaz de atacar diferentes componentes moleculares del ADN (azcar o base nitrogenada) es el radical OH .. Como ya se coment
anteriormente, la presencia de este radical en el entorno del ADN en elevadas concentraciones, puede provocar la rotura de la doble hebra. Esto es lo
que ocurre en el caso de que radiaciones ionizantes incidan sobre el ADN, ya que estas generan radical hidroxilo a partir del agua presente en el
organismo. Se descarta, al menos en condiciones normales, que tanto el radical O 2.- como H2O2 y NO. daen directamente al ADN, sino que lo haran

previa generacin de radical hidroxilo (muy probablemente por reaccin de Fenton en el caso del H 2O2). Teniendo en cuenta que la mayora de derivados
oxidantes del oxgeno se producen en la mitocondria, y dada la alta susceptibilidad de su ADN a la mutacin por diferentes razones (falta de histonas,
falta de mecanismos reparadores eficientes, etc.), no es extrao que la tasa de mutaciones en el genoma mitocondrial sea considerable.
Los experimentos in vitro realizados con clulas eucariticas tratadas con H 2O2 han demostrado que las mutaciones producidas por este agente qumico
se tratan de deleciones y sustituciones de bases. Adems, la distribucin de estas mutaciones no parece que sea aleatoria, ya que hay zonas del genoma
que parecen ser ms susceptibles que otras. En principio no hay una explicacin razonable a este comportamiento, pero podra estar relacionado con el
grado de compactacin de la cromatina en la zona mutada o la interaccin de dichas regiones con metales de transicin implicados en la reaccin de
Fenton y que generaran radicales OH. a partir de H2O2.

Cartografa molecular: Las modificaciones qumicas del ADN

Barcelona. Un equipo de investigadores del Instituto de Investigaciones Biomdicas de Bellvitge (IDIBELL) y del Instituto Cataln de
Oncologa (ICO) han publicado en la revista Cell uno de los primeros mapas de las modificaciones qumicas que experimenta el
material gentico de las clulas.
Los cientficos han analizado la metilacin, un tipo de modificacin qumica que, si acta de forma anormal, puede bloquear la
expresin de genes que protege contra el cncer y otras patologas. Segn informaron hoy fuentes del ICO, la investigacin ha sido
liderada por el cientfico Manel Esteller y ha obtenido el primer esbozo del epigenoma humano en lo que se refiere a la metilacin del
ADN.

Se trata de una especie de cartografa molecular, como un mapamundi elaborado justo despus del descubrimiento de Amrica, por lo
tanto, an falta mucha investigacin para determinar los perfiles precisos de los continentes que forman el epigenoma humano y
posteriormente utilizarlos para un mejor tratamiento de las enfermedades humanas, explic el ICO.
Se trata de una especie de cartografa molecular, como un mapamundi elaborado justo despus del descubrimiento de Amrica
La metilacin es una modificacin qumica que altera ligeramente la secuencia de ADN. Segn el estudio, todos los cromosomas de la
clula pueden sufrir alteraciones de la metilacin. Este fenmeno puede comportar el bloqueo de la expresin de genes que deberan
protegernos contra el cncer o hacer que los cromosomas se vuelvan frgiles y aparezcan patologas. Adems, las alteraciones
qumicas pueden encontrarse en enfermedades distintas a los tumores como el Alzheimer, la arteriosclerosis o patologas autoinmunes.
El estudio de los investigadores catalanes es una primera aportacin al objetivo de obtener el mapa completo del epigenoma humano,
es decir, de las modificaciones qumicas que experimenta el ADN y las protenas que lo regulan. La determinacin de este mapa es ms
costoso que la secuenciacin del genoma puesto que cada persona dispone de un solo genoma pero tiene como mnimo 150 tipos
diferentes de epigenoma.