Revista CENIC Ciencias Qumicas, Vol. 42, No. 2-3, mayo-diciembre, 2011.

Identificacin de aglutinantes proteicos en obras

de arte pictricas cubanas
Ariadna Mendoza, Maurn Correa, Isis Maqueira, David Marrero*, N. Prez Sieres*, Patricia
Comas**
Instituto Superior de Ciencias y Tecnologas Aplicadas. Centro de Productos Naturales, Centro Nacional de Investigaciones
Cientficas. * Taller de Policroma del Gabinete de Conservacin y Restauracin, Oficina del Historiador. ** Laboratorio de
Arqueometra, Colegio Universitario San Gernimo de La Habana - Oficina del Historiador de La Habana, Obispo entre
San Ignacio y Mercaderes, Habana Vieja, La Habana. arqueometria@cr.patrimonio.ohc.cu, ariadna@mail.org

Recibido: 3 de enero de 2011.

Aceptado: 5 de abril de 2012.

Palabras clave: aglutinantes proteicos, obras de arte, anlisis histoqumico, espectroscopia IR, EITF.
Key words: artistic materials, histochemical analysis, IR spectroscopy, EITF.

Resumen. En este trabajo se implementaron metodologas de microanlisis mediante anlisis histoqumico y Espectroscopia Infrarroja con Transformada de Fourier (EITF) para determinar la naturaleza del aglutinante en pinturas y
la Cromatografa de Gases (CG) acoplada a Espectrometra de Masas (EM) para la identificacin de los aglutinantes de
origen proteico de uso comn en la tcnica al temple, con el objetivo de disponer de estos mtodos como parte de la
identificacin de materiales artsticos en bienes patrimoniales cubanos que realiza el Laboratorio de Arqueometra de la
Oficina del Historiador de la ciudad de La Habana. Las metodologas implementadas se evaluaron a travs de muestras
modelo de tcnicas pictricas tradicionales con variacin del aglutinante proteico: yema y clara de huevo, casena, aceite
de nuez y cola envejecidos naturalmente durante cinco aos. Las muestras modelo fueron correctamente identificadas.
En el anlisis histoqumico, se determin la interferencia de pigmentos con presencia de nitrgeno con el colorante
Amido Black. La Espectroscopia IR permiti diferenciar la tcnica oleosa y mixta (aceite ms protena) y el temple con
yema. Se identific la tcnica oleosa en pinturas murales de la iglesia San Francisco Nuevo (siglo xix) y la Casa Obrapa
(siglo xvii) y la tcnica de temple con cola animal en la policroma del siglo xviii que representa al evangelista San Juan
perteneciente a la otrora iglesia San Juan de Letrn.

Abstract. In this paper were implemented microanalysis methodologies by histochemical analysis, and infrared spectroscopy to determine the nature of the binder in paintings and Gas Chromatography (GC) coupled to
Mass Spectrometry (MS) for identification of protein binders of common use in tempera technique with the aim
of having these methods as part of the identification of artistic materials in Cuban cultural heritage carried out by
Archaeometry Laboratory of Havana citys Historian Cabinet. The methodologies implemented were evaluated
using model samples of traditional painting techniques with variable protein binder: yolk, egg white, casein, nut oil
and animal glue; ageing for 5 years. The models samples were correctly identified. It was determined the interference of pigments with the presence of nitrogen by histochemical analysis with Amido Black dye. IR spectroscopy
technique allowed to differentiate between oily and mixed (oil plus protein) techniques and tempera with yolk.
Oily technique was identified in wall paintings of the New San Francisco church (xix century) and the Obrapa
House (xvii century) and the technique of tempera with animal glue in the polychrome of the xviii century which
represents St. John the Evangelist belonging to the San Juan de Letrn church.

Introduccin
Reconocer el vehculo y el aglutinante, sustancia
cohesionadora de los pigmentos empleada en obras
pictricas como fijador de estos y por sus cualidades
dispersivas resulta de gran importancia porque permite
determinar la tcnica artstica (oleosa, temple o mixta).
La caracterizacin qumica del aglutinante es importante
tanto en la reconstruccin de la tcnica pictrica usada
en una pintura en particular, como para el establecimiento del programa de conservacin y restauracin de la
obra en s. Entre los materiales orgnicos naturales que
han sido ampliamente usados como aglutinantes y adhesivos (protenas, ceras, resinas y gomas), las protenas

son una clase importante. Las pinturas son una matriz

compleja, cuya composicin qumica cambia continuamente en el curso del tiempo dependiendo de varios
factores: interacciones especficas entre el pigmento y el
aglutinante, condiciones desconocidas de conservacin
en el tiempo tales como cambios en la temperatura y
humedad, exposicin a contaminantes ambientales y la
prolongada exposicin a la luz natural o artificial. Desde
el punto de vista analtico, los problemas relacionados
con la caracterizacin de la tcnica artstica presentan
varias dificultades: presencia simultnea de diferentes
aglutinantes, degradacin del material original como
resultado del envejecimiento, la contaminacin, la

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pequea cantidad de material disponible y las interferencias con otros componentes presentes como los
pigmentos por lo que la identificacin de aglutinantes
de origen natural utilizados en pintura constituye an
en la actualidad un problema.
Los mtodos no destructivos (sin extraccin de
muestra) y de microanlisis (extraccin de una diminuta muestra) son los idneos para las investigaciones de bienes patrimoniales. Tradicionalmente para
la identificacin de los aglutinantes se han usado las
pruebas microqumicas a la gota basadas en tinciones
con colorantes selectivos; luego los mtodos espectromtricos moleculares: Espectroscopia Infrarroja con
Transformada de Fourier (EITF) y Raman,1-4 los mtodos
cromatogrficos y en menor frecuencia, los hbridos con
espectrometra de masas (EM). Entre los mtodos empleados en materiales artsticos orgnicos parece ser la
cromatografa de gases, la ms aplicada.5-12 Los mtodos
cromatogrficos se han utilizado fundamentalmente
en sus variantes: Cromatografa Gaseosa (CG), Cromatografa Gaseosa acoplada a Espectrometra de Masas
(GC-EM 5), Pirolisis-CG-EM12 y Cromatografa Lquida
de Alta Resolucin y acoplada a EM.13,14 Las tcnicas que
se aplican actualmente difieren en sus lmites de deteccin y la cantidad de muestra requerida para el anlisis;
demandan diferentes procedimientos de preparacin de
muestra y varan en el volumen de informacin final
obtenida, tiempo y costo de anlisis.15,16
En este trabajo, como soporte de las investigaciones
de obras de arte pictricas en el Laboratorio de Arqueometra de la Oficina del Historiador de la ciudad de
La Habana, se propuso establecer una estrategia para
la identificacin de los aglutinantes proteicos. Para
ello, se trazaron los objetivos especficos siguientes:
implementar y evaluar el anlisis histoqumico para
la identificacin de la naturaleza del aglutinante, el IR
para una identificacin ms sensible de la naturaleza
del aglutinante y un procedimiento de identificacin del
aglutinante proteico especfico a travs de la determinacin de aminocidos por CGEM; adems de identificar
la tcnica artstica a travs del aglutinante proteico utilizado en obras de arte pictricas por el anlisis combinado
de las metodologas implementadas.
La metodologa general propuesta se aplic al anlisis
de aglutinantes en pinturas murales de la Casa Obrapa
(siglo xvii) y de la Iglesia San Francisco Nuevo (siglo
xx). Se identific la tcnica artstica tambin en las esculturas policromadas del siglo xviii, que representan
a los evangelistas pertenecientes a la otrora iglesia San
Juan de Letrn de la Orden de los Dominicos, donde se
estableciera entre 1728 y 1902, la Universidad de San
Gernimo, actual Colegio Universitario San Gernimo
de La Habana.

en cuenta la variacin en la capa de preparacin y las

tcnicas artsticas ms comunes en la poca de desarrollo
de la obra plstica cubana (F.1a).17,18 A continuacin se
describe su composicin:
Fondo casena (5.1 y 5.3): Preparacin basada en
casena industrial aplicada en un medio acuoso. [yeso
natural, blanco de cinc ZnO, agua, casena en proporcin
1 : 1 : 2 : 1. Se aplican dos capas].
Fondo de aceite (7.1): Encolado previo de la tabla,
preparacin agua de cola, de yeso (CaSO4) y blanco de
cinc ZnO en proporcin 1 : 1 y aglutinados en proporcin
1 : 2 con aceite de nuez (imprimacin oleosa).
Fondo mixto (6.1): Superposicin de preparacin magra: estrato de yeso como sustancia de carga y blanco de
cinc (ZnO) como pigmento cubriente aglutinado con cola
de conejo en un medio acuoso y estrato de imprimacin
oleosa con aceite de linaza (7.1).
Capa pictrica (2.1): Estrato gris basado en blanco de
plomo (PbCO3 Pb(OH)2) y negro marfil (carbono 15-20
%, Ca3(PO4)2 60 %, CaSO4 20 %) aglutinado con clara de
huevo, sobre fondo de creta (CaCO3) aglutinado con cola
de conejo.
Capa pictrica (4.1): Estrato gris basado en blanco
de plomo y negro marfil aglutinado con yema de huevo,
sobre fondo de creta aglutinado con cola de conejo.
Capa pictrica (9.1): Estrato de blanco de plomo
aglutinado con aceite de nuez, sobre fondo de creta
aglutinado con cola de conejo.
Capas pictricas azules: azul cerleo (CO 2SnO 4)
aglutinado con aceite de linaza; azul ftalocianina
(C26H18N6CN) aglutinado con aceite de linaza, azul de
Prusia {Fe4[Fe(CN)6]3} aglutinado con aceite de linaza.
Las muestras azules se utilizaron para evaluar la interferencia de los pigmentos con presencia de nitrgeno en
la identificacin del aglutinante proteico por el mtodo
de fuscina cida.
Muestras de obras de arte
Se analizaron muestras extradas de pinturas murales
del perodo colonial, expuestas en la Casa de la Obrapa
[cinco muestras: azul (R1), siena claro (R2), siena oscuro
(R3), verde (R4) y ocre oscuro (R5)]; de la iglesia San
Francisco Nuevo (una muestra verde olivo (R6)] y de la
escultura policromada que representa al evangelista
bblico San Juan [cinco muestras: carnacin (R7), azul
(R8), siena claro (R9), blanco (R10 y R11)], adems de

Mtodos experimentales
Muestras de aglutinantes puros
Casena industrial Pelican, de Mxico, clara y yema
de huevo, estas ltimas extradas directamente de un
huevo de gallina cubana.
Muestras modelo
No existen muestras de referencia certificadas de
pintura para evaluar los mtodos de anlisis, por ello
para este estudio, se prepararon muestras modelo (denominadas segn un cdigo de matriz por la ubicacin
en la tabla de modelos preparados de pintura siguiendo
recetas tradicionales empleadas por los artistas, teniendo

(a)
Fig. 1. (a) Tabla de las muestras modelo utilizadas: con diferentes
tcnicas artsticas (aglutinantes), (ej.: cdigo dado, 2.6.).

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(b)
Fig. 1. (b) Foto de policroma que representa al evangelista
San Juan.

dos fragmentos de seccin transversal [(R12 y R13),

(F. 1b)] que se expondrn en el Colegio Universitario
San Jernimo del centro histrico de la ciudad, por haber formado parte de la otrora iglesia del Convento San
Juan de Letrn situada en el mismo sitio que ocupa hoy
la recin inaugurada universidad.
Muestreo:
Se tomaron las muestras con bistur y escalpelo, para
las pruebas microqumicas procurando seleccionar todos
los estratos presentes en las tablas de pinturas modelo y
en las obras de arte y para los anlisis por EITF y CG-EM,
se tomaron las muestras con bistur de la superficie de
las muestras modelo y de objetos de arte.
Mtodo de anlisis histoqumico:
Se prepararon estratigrafas, para el anlisis de las
muestras incluyendo las de secciones transversales de
pintura en una resina sinttica (Technovit 4004). Los
bloques as obtenidos, se lijaron hasta dejar la muestra
en la superficie.
El anlisis histoqumico se realiz mediante las pruebas de tincin sobre la estratigrafa con disoluciones de
fuscina cida (FA) y Amido Black (AB2) y la observacin
al microscopio ptico.
Se emple un microscopio ptico con fibras pticas
para la iluminacin de las muestras y cmara EverFocus
acoplada conectada a computadora para obtencin de
las microfotografas de antes y despus de la tincin.
Los programas de captura de imagen de la cmara utilizados fueron AMCap y Power Director Program. Para
ajustar el brillo y el contraste de las imgenes se utiliz
el programa Adobe Photoshop 7.
Mtodo de anlisis por Espectroscopia Infrarroja:
Las muestras en polvo, para los anlisis por EITF, fueron preparadas en pastillas de KBr19 (1 mg de muestra en
60 mg de KBr) y las lquidasobtenidas por extraccin
de las primeras muestrasfueron depositadas entre
lminas finas de NaCl. Se realiz extraccin de lquido
respecto al aceite a las muestras 6.1 (fondo mixto) y 9.1
(capa pictrica con aceite de nuez), para lo cual se disolvi 0,1 g de muestra slida con 1 mL de diclorometano
(CH2Cl2), se decant, se trasvas el lquido y se evapor el
diclorometano, con lo que se obtuvo la muestra lquida.
Las muestras se analizaron en un espectrmetro in-

frarrojo con transformada de Fourier modelo Vector 22 de

la Bruker, con detector DTGS y Beamsplitter de ZnSe, en
el intervalo de 4000-650 cm-1. El programa utilizado en el
procesamiento de las muestras es el OMNIC V 5.2, 2000.
La interpretacin de los resultados se realiz teniendo
en cuenta las bandas de los grupos funcionales, cuadros
de correlacin y comparacin con los espectros EITF
obtenidos de las muestras de aglutinantes puros frescos
y envejecidos, en las muestras modelo de pintura y a
partir de una base de datos de pigmentos por EITF.20,21
Anlisis por Cromatografa Gaseosa con Espectrometra de Masas acoplada:
Se emplearon patrones de cidos grasos (AG) y aminocidos (AA) y se prepar una disolucin de referencia
que contena 100 ng/L de cada aminocido. La preparacin de las muestras se realiz mediante una variante
de la metodologa descrita por Colombini y cols.8-12,22 A
la muestra, se le adicionaron 400 L de disolucin de
amonio 2,5 N y 0,5 mL de n-hexano, se coloc en bao
ultrasnico a 60 C por 4 h para separar las fases. La
disolucin de amonio extrada (protenas disueltas),
se evapor a sequedad bajo una corriente suave de
nitrgeno a 90 C, luego, fue sometida a hidrlisis cida
directa con 0,5 mL de HCl 6 mol/L a 110 0C por 24 h se
dej enfriar y se llev a sequedad en las condiciones
anteriores y se derivatiz con 80 L de MSTFA (N-metilN-trimetilsililtrifluoroacetamida) Luego, se adicionaron
80 L de piridina, 20 L de hexano y se dej reaccionar
a 85 C por 45 min para tomar una alcuota para el anlisis por CG-EM. La fase hexnica (extracto lipdico) se
someti a una hidrlisis cida con 0,5 mL de la DME a
85 C por 2 h y se agit ocasionalmente, se enfri y se
aadieron 0,5 mL de la disolucin de NaOH 2 mol/L y se
dej reposar por 3 min para tomar la alcuota de anlisis.
Se analiz 1 L de muestra.
Se utiliz un cromatgrafo de gases 6890N con detector selectivo de masas cuadrupolar 5975B, para el
anlisis de las muestras acoplado en lnea con un sistema
computadorizado para la adquisicin y procesamiento de
datos (Agilent Technologies, CA, USA). Las separaciones
se llevaron a cabo en una columna cromatogrfica capilar
de slice fundida (30 m x 0,25 mm d.i.), con dimetro de
pelcula 0,25 m de fase enlazada tipo HP-5MS (J&W
Scientific, Agilent Technologies, CA, USA). Flujo de gas
portador (He): 1,0 mL/min. Inyeccin en modo splitless.
Temperaturas: inyector a 300 C, fuente inica a 230 C,
interface a 280 C y cuadrupolo a 150 C. La energa de
ionizacin (IE) fue de 70 eV. Barrido de masas de 40-800
dalton en modo de corriente inica total. El programa
de temperaturas utilizado para el anlisis de los AG fue
desde 70 C (1 min) hasta 180 C a 20 C/min), entonces
se increment hasta 210 C a 2 C/min, finalmente, hasta
320 C a 20C/min y 10 min a la temperatura final. El
programa de temperaturas para la determinacin de
los AA fue desde 100 C (2 min) hasta 280 C a 4 C/min,
entonces se mantuvo por 15 min a la temperatura final.
La identificacin de los componentes dentro del perfil cromatogrfico se llev a cabo por CG-EM, mediante la comparacin de los espectros obtenidos por impacto electrnico con los
de la base de espectros Wiley275, as como con los de patrones
comerciales y con los de otros trabajos publicados. Se utilizaron

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los derivados TMS para los AA y para los AG los steres metlicos. La determinacin del porcentaje relativo de cada compuesto (Ci) en las muestras, se bas en el mtodo semi-cuantitativo de normalizacin interna segn la ecuacin siguiente:

Ci =

rea del compuesto (i )

100 (%)
reas
d
e
todos
los
compuestos

Donde:
Ai representa el rea de cada pico.
Se debe considerar que los aminocidos reactivos (con
grupos funcionales cidos, bases, sulfuros e hidroxilos)
son ms afectados por la interaccin con los pigmentos,
los cuales interfieren en las reacciones de derivatizacin
reduciendo las concentraciones de estos aminocidos, lo
que depende del tipo de pigmento y del proceso de derivatizacin.6 Por ello, para la identificacin de aglutinantes
en bienes culturales analizados con este mtodo es an
ms necesario seleccionar muestras con presencia de los
pigmentos blanco de cinc o de plomo constituyentes de
las pinturas modelo de referencia. Los espectros caractersticos de los cidos grasos saturados en forma de steres
metlicos y de los aminocidos en forma trimetilsilil se
identifican por su ion molecular determinado a travs
del espectrmetro de masas acoplado. Las protenas se
identifican teniendo en cuenta la abundancia relativa de
sus aminocidos ms importantes: alanina, cido asprtico, cido glutmico, glicina, hidroxiprolina, isoleucina,
leucina, lisina, prolina, serina y valina.8
Resultados y Discusin
Muestras modelo
Fondos de preparacin:
Las muestras de fondo analizadas (5.1, 6.1 y 7.1)
fueron teidas con AB2 y FA. La primera al ser teida
con AB2 tom una coloracin azul oscuro y al reaccionar
con la FA adquiri una coloracin rosada intensa. En el
caso de la segunda, al reaccionar con el primer colorante
tom una coloracin azul ligera y con la fucsina cida
una coloracin rosada. Se determin que la naturaleza
del aglutinante era proteica por medio de los colorantes.
En el tercer fondo (7.1) no se colore la estratigrafa con
las tinciones empleadas, lo que revel la ausencia de
protenas.
Capas pictricas:
Se analizaron las muestras 2.1 y 4.1 En la primera,
la capa de preparacin se ti de un azul claro con la
tincin AB2, debido a la presencia de cola animal en el
soporte de la pintura mientras que la capa pictrica, se
colore de un azul oscuro lo que confirm la naturaleza
proteica del material aglutinante. En la segunda, se
observ una coloracin azul intensa. Al ser teidas con
FA la capa pictrica de ambas muestras fue coloreada
de un color rosado intenso.
Estudio de la interferencia de pigmentos en la
tincin con AB2:
La muestra de azul cerleo no interaccion con el
reactivo colorante, con lo que qued del mismo color la
seccin estratigrfica; esto se debi a la ausencia en su
composicin qumica de un grupo nitrogenado. Sin embargo, las muestras de azul ftalocianina y azul de Prusia
teidas adquirieron una coloracin azul intensa. El grupo
CN, se halla en pigmentos azules como la ftalocianina
y el azul de Prusia, con el que reacciona el colorante,

tiendo ambas muestras de color azul aunque fueron

aglutinados con aceite de linaza. La interferencia de
estos pigmentos con el AB2 puede producir resultados
falsos positivos en los anlisis de aglutinantes proteicos
que contengan estos pigmentos en la composicin de
sus capas pictricas.
Anlisis por EITF
Los espectros de los aglutinantes permitieron diferenciar la clara de la yema del huevo por la presencia
de la banda intensa y estrecha en 1740-1750 cm-1 de vibracin stretching del grupo C=O, caracterstica de los
aceites a causa de la parte oleosa del huevo y tres bandas estrechas en la regin huella dactilar alrededor
de 1 165 cm -1. Los espectros de la casena y la clara
del huevo no fueron diferenciables por estar constituidos fundamentalmente por la protena casena
y ovoalbmina respectivamente. Se observaron las
bandas de absorcin correspondientes a las vibraciones de streching de amida I en el intervalo de 1630
a 1680 cm-1 y amida II en el intervalo de 1520 a 1560
cm -1, que identifican en general los aglutinantes de
naturaleza proteica. La cola animal (cola de conejo)
present estas bandas caractersticas, pero con mayor
intensidad en las bandas 1232 y 1078 cm-1. Mientras
que la cola de pescado se diferenci del resto de los
aglutinantes proteicos analizados por una banda
intensa y alrededor de 1104 cm -1 en la regin de los
sulfatos. Los espectros de todos los aceites analizados,
presentaron las bandas caractersticas alrededor de
1745, 1458, 1162 y 721 cm-1. La banda en 1745 cm -1
permiti identificar la presencia de aceite en pinturas
por ser el nico aglutinante que tiene banda en esta
regin de las cinco clases posibles, donde adems no
existe interferencia por las bandas de los grupos SO42y CO 32-, siempre presentes en los materiales inertes
que se emplean en las preparaciones de los soportes
de obras pictricas.
En todas las muestras, se evalu la presencia de las
bandas de resinas, ceras, gomas y aceites. En el fondo
de casena (5.1) se identific la banda de aceite en 1740
cm-1 debido a la presencia de aceites en la casena y como
aglutinante del pigmento blanco de cinc usado por el restaurador para dar consistencia a la disolucin de casena
y bandas de SO42- en 1622, 1144 y 1093 cm-1 que se explican por el uso de una casena industrial cida (material

(a)
Fig. 2. Espectros por Espectroscopia Infrarroja con Transformada de Fourier a) De la muestra 5.1.

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(b)
Fig. 2. Espectros por Espectroscopia Infrarroja con Transformada de Fourier b) De la muestra 7.1.

ms corriente), que en su proceso de fabricacin emplea

cido sulfrico que reacciona con el Ca presente y las
bandas de protenas se encuentran dbiles y solapadas
(F.2a). En la muestra modelo de fondo de aceite (7.1) se

identificaron tres bandas de SO4;2- una banda en 1622

cm-1 y dos bandas intensas alrededor de 1093 cm-1, por
la presencia del yeso utilizado como material de carga
en la preparacin magra y la banda intensa de aceite
en 1735 cm-1 (F.2b).
En la muestra de fondo mixto (6.1) se identificaron las bandas: de protena en 1638 cm -1, de CO 32- en
1416 y 872 cm -1 y el doblete del SO 42- en 1098 y 1150
cm -1 y la banda caracterstica del aceite muy dbil
que luego fue confirmada en el espectro de la muestra extrada (respecto al aceite) donde se definieron
todas las bandas caractersticas ms intensas del aceite
en 1746, 1 454 y 1153 cm-1 (F. 3).
En la muestra de capa pictrica (2.1) se identific la
presencia de las bandas caractersticas de protenas en
1658 y 1535 cm-1 en idntica posicin respecto al espectro
de la clara de huevo y bandas estrechas e intensas de
CO32- en 1407 y 878 cm-1 (F.4a), como resultado del empleo
de blanco de plomo como pigmento. En la muestra de
capa pictrica (4.1), se identific la presencia de aceite
por la banda intensa y estrecha en 1745 cm-1 debido a la
parte lipdica de la yema del huevo presente (F.4b). Se observan adems bandas en 1653 y 1545 cm-1 de las amidas
debido al aglutinante de naturaleza proteica y la banda
en 1401 cm-1 debido al CO32- aportado por el blanco de

Fig. 3. Espectro por Espectroscopia Infrarroja con Transformada de Fourier de la muestra 6.1.

(a)

(b)

Fig. 4. Espectros por Espectroscopia Infrarroja con Transformada de Fourier a) De la muestra 2.1. b) De la muestra 4.1.

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plomo y el fondo de creta de la preparacin del soporte.
Se identific tambin un doblete dbil alrededor de 1093
cm-1por la presencia minoritaria de SO42-. En la muestra
de capa pictrica (9.1) se identific la presencia de aceite
en 1735 cm-1 y una banda ancha e intensa CO32- en 1386
cm-1, debido al blanco de plomo.
Fondo de casena (5.1 y 5.3):
El aglutinante derivado de la leche, se determin por
sus porcentajes de leucina (Tabla 1, F.5a). Los porcentajes elevados de este aminocido respecto a las dems
muestras modelo analizadas es indicativo del proceso de
degradacin de esta protena.6-8,22 No se identificaron los
elevados de cido glutmico, cido asprtico y prolina,
correspondientes a la casena natural (derivado de la
leche),23 lo que se explica por el uso de la casena cida
industrial.
Fondo mixto (6.1):
La presencia proteica pudo comprobarse mediante los
porcentajes elevados de glicina, prolina e hidroxiprolina
(Tabla 1), lo que identific la cola animal como aglutinante
de la preparacin magra que forma el fondo mixto (Tabla 1;
F. 5b). En el fondo mixto, se confirm la presencia de aceite a
travs de la deteccin de los cidos grasos: cprico, larico,
mirstico palmtico y esterico (Tabla 1). En esta muestra,
se descart la presencia del aglutinante yema de huevo
debido a la ausencia de colesterol en la fraccin lipdica.24
El conjunto de cidos grasos hallados es caracterstico de un
aceite secante, lo que se confirm porque la relacin entre el
cido palmtico y el esterico es mayor que la unidad.8,25

Capa pictrica con clara de huevo (2.1):

La clara de huevo se identific por sus elevados contenidos de cido glutmico y por los bajos porcentajes
de treonina con respecto a la yema (Tabla 1, F. 5c).62125
Otras contribuciones importantes fueron las de alanina,
leucina, valina e isoleucina. A su vez, la glicina y la hidroxiprolina, se encontraron en cantidades elevadas, lo
que puede ser explicado por la presencia de cola animal
como aglutinante en el fondo de creta de la preparacin.
Capa pictrica con yema de huevo (4.1):
El aglutinante yema de huevo estaba compuesto por
dos fracciones importantes, donde estaban incluidas
protenas y cidos grasos. La identificacin proteica
de la yema de huevo se verific por las cantidades elevadas de cido asprtico, serina y prolina respecto a la
clara (Tabla 1, Fig. 5d).8 Otros aminocidos detectados
en proporciones elevadas fueron isoleucina, prolina, fenilalanina, lisina y tirosina con respecto a los restantes
aglutinantes de origen proteico. La parte lipdica de la
yema aport cidos grasos dentro de los cuales el cido
result predominante. Se detectaron trazas de colesterol,
el cual es un marcador de este aglutinante. Sin embargo,
las bajas cantidades de este compuesto, se atribuyeron
a los procesos de degradacin.24
Muestras reales
Anlisis histoqumico
Pintura mural San Francisco Nuevo. El estudio de la
muestra R6 se realiz con el objetivo de comprobar en

Anlisis por CG-EM

Tabla 1. Aminocidos (%) presentes en las muestras modelos y cidos grasos (%)
presentes en la fraccin oleosa del medio mixto.
Aminocido
Alanina
Valina
Leucina
Isoleucina
Prolina
Glicina
Serina
Treonina
cido
piroglutmico
cido asprtico
Hidroxiprolina
Fenilalanina
Lisina
Tirosina

5.1
5,1
2,73
3,37
1,80
3,07
28,20
1,80
0,70

6.1
5,00
1,43
1,74
1,11
6,57
52,65
1,51
0,62

2.1
4,51
1,37
1,92
1,37
3,25
53,77
0,58
0,44

4.1
4,37
2,48
2,84
1, 84
3,72
41,04
2,92
1,21

3,11

5,70

8,47

7,02

1,62
1,66
0,96
0,13
0,03

3,68
5,66
0,74
1,13
0,06

3,58
2,34
1,12
1,69
0,21

5,72
2,96
1,58
1,90
0,25

un objeto de arte real la interferencia de los pigmentos.

Esta pintura mural contiene verde cinabrio formado por
la mezcla de los pigmentos azul de Prusia Fe4[Fe(CN)6]2
y amarillo de cromo (PbCrO2). La coloracin tomada
en este caso por la capa pictrica (2) de la muestra fue
indicativo de la reaccin que ha tenido lugar entre el
CN y el AB2.
Pintura mural Casa de la Obrapa. Se analizaron las
muestras de colores representativos R1, R2, R3, R4 y R5
de la pintura mural de la Casa de la Obrapa, y luego de
la tincin, no se apreciaron cambios en la coloracin de las capas
lo que demostr el empleo de un aglutinante de naturaleza no
proteica. Estos pigmentos no eran nitrogenados segn anlisis

cidos grasos

C10:0 cprico
C12:0 lurico
C14:0 mirstico
C16:0 palmtico
C18:0 esterico
C16:0/18:0

0,64
33,39
18,99
33,72
3,87
8,71

de Fluorescencia de Rayos X (FRX).

Policroma Evangelista San Juan. Las muestras para diferentes puntos de la policroma R12 y R13 del evangelista San Juan
(Siglo xviii), reaccionaron con el colorante AB2 adquiriendo una
tonalidad azul tanto en la capa de preparacin 1 como en la capa
pictrica 2, lo que revel la naturaleza proteica del aglutinante. Se
analizaron las muestras de naturaleza proteica por EITF y CG-EM.
Anlisis por EITF
En todas las muestras de la policroma del evangelista
San Juan, se analizaron las bandas caractersticas de resinas, ceras, y gomas, excluyendo estos aglutinantes. En
la muestra R11 (estrato de preparacin) se identific un
doblete intenso de SO42- alrededor de 1114 cm-1 correspon-

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Fig. 5. Cromatogramas por CG-EM de los aminocidos. a) Presentes en la casena. b) Del medio mixto. c) Presentes en la clara
de huevo. d) Presentes en la yema de huevo.

diente al yeso utilizado en esta preparacin y una banda

dbil de CO32- en 1411 cm-1 por la presencia minoritaria de
carbonato aportada por la toma no deseada de parte de la
capa pictrica basada en blanco de plomo identificadas
en estudios anteriores de la distribucin de elementos
qumicos en la seccin transversal por micro-FRX. No
hubo/se observ la presencia de las bandas caractersticas de aceites y se identific una banda estrecha en
1620 cm-1 de SO42- superpuesta sobre las bandas amida I
y una dbil banda amida II. En la comparacin con los
espectros de aglutinantes y particularmente con los de
naturaleza proteica, las bandas indicadoras de protena
se desplazaron respecto a su posicin en los espectros
de casena, clara y yema del huevo y coincidieron con
el espectro de referencia de la cola animal (cola de conejo), lo cual deber ser confirmado mediante tcnicas
cromatogrficas. En la muestra R7 (estrato de carnacin)
se observ el doblete correspondiente al SO42- en 1080 y
1172 cm-1, debido en gran medida a la contaminacin en
la toma de muestra con la capa de preparacin. Adems,
se observ la banda correspondiente al CO32- en 1408 cm-1,
debida al blanco de plomo. Asimismo se identific una
banda ancha alrededor de 1624 cm-1 debido a la superposicin de amida I y amida II desplazada respecto a la
posicin de estas bandas en los espectros de los aglutinantes casena, clara y yema del huevo. No se observ la
banda caracterstica del aceite en los 1740-1750 cm -1. En
la muestra R8 (estrato de azul), se conoca/o que la capa
original de azul claro estaba compuesta por blanco de
plomo y azul ultramar por anlisis de FRX. En el espectro
no se observaron bandas caractersticas de aceites y se
identific igualmente el doblete del SO42- en 1075 y 1172

cm-1. El espectro present adems, una banda en 1408

cm-1 caracterstica del CO32- por la presencia de blanco
de plomo y una banda ancha en 1591 cm-1 que indic
aglutinante de naturaleza proteica. En la muestra R11
(estrato blanco de la nube) ocurri una contaminacin
por yeso de la preparacin. Se identificaron bandas caractersticas de SO42- en 1075 y 1172 cm-1, adems de la
banda identificativa del CO32- en 1408 cm-1 por el blanco
de plomo y una banda en 1586 cm-1 que incluy las dos
amidas que identificaron la naturaleza proteica. En la
muestra R9 (estrato siena claro) se identific una contaminacin con yeso de la preparacin por la presencia
del doblete de SO42- alrededor de 1085 cm-1 y la banda de
1634 cm-1 superpuesta sobre otra ensanchada de amida.
En la muestra R10 (estrato blanco del libro) se identific
la banda intensa del CO32- por el blanco de plomo en 1408
cm-1. Las bandas amidas estuvieron solapadas como en
la muestra 4 y ocurri contaminacin con yeso por la
presencia del doblete del SO42-. (F.6)
Anlisis por CG-EM
Al analizar una muestra real (R11, blanco de la nube)
perteneciente a la policroma del evangelista San Juan
(siglo xviii), se encontr la presencia de un aglutinante
proteico y uno oleoso (Tabla 2). En la fraccin proteica,
se detect una mayor proporcin de glicina e hidroxiprolina respecto al resto de los aminocidos, lo que result
indicativo de la presencia de cola animal utilizada como
aglutinante. Adems, esto fue confirmado por los elevados valores de las relaciones ala/phe, gly/ile, hyp/leu y
pro/leu y de las menores proporciones entre leu/ala, val/
ala y ala/gly y con respecto a los aglutinantes de yema
y de clara.6 La deteccin de cidos grasos pudiera ser

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Fig. 6. Espectro por Espectroscopia Infrarroja con Transformada de Fourier de la muestra (R15).

Tabla 2. Contenido y razn de aminocidos en la muestra correspondiente

al Evangelista San Juan.
Aminocidos
Ala
cido. 2-aminobutrico
Val
Leu
Ile
Prol
Gly
Ser
Thr
cido piroglutmico
Asp
Hyp
Phe
Lys

%
7,3
0,27
2,18
2,18
2,2
4,0
45,32
1,71
0,76
2,38
3,04
4,34
0,95
0,56

atribuida a la presencia de aceites secantes utilizados en

el repinte oleoso realizado en la primera restauracin de
la obra. Un ejemplo de la confirmacin sobre la identificacin de estos AG lo constituy el espectro de masas del
cido palmtico, el cual fue confirmado con la biblioteca
Wiley275. La formacin de dicidos result indicativo de
la degradacin de este tipo de aceite. Las fuertes condiciones cidas requeridas en el paso de hidrlisis implican
que los cidos grasos son solo parcialmente liberados de
los lpidos a causa de la ocurrencia de un equilibrio de
reaccin y de su baja solubilidad (26), adems de la formacin de cidos grasos cortos y dicidos voltiles que se
han oxidado. Estos cidos se forman durante el proceso
de secado de las capas de pintura, ya que en este momento los aceites presentan gran cantidad de cidos grasos
insaturados. La hidrlisis del enlace ster inicial puede
contribuir tambin a la formacin de cidos grasos libres.
CONCLUSIONES
Se identific la naturaleza del aglutinante en las
muestras modelo de tcnicas pictricas tradicionales de
estudio y la interferencia de pigmentos con presencia de
nitrgeno por medio del anlisis histoqumico con el uso
de tinciones especficas.
La implementacin de la tcnica de Espectroscopia
Infrarroja con Transformada de Fourier permiti iden-

Razn de
aminocidos
Ala/Phe
Gly/Ile
Hyp/Leu
Pro/Leu
Glu/Asp
Leu/Ala
Val/Ala
Ser/Ile
Ala/Gly

Muestra
7,72
7,34
1,99
1,83
0,78
0,30
0,29
0,28
0,16

tificar el aglutinante proteico en las muestras modelo

(excluyendo resinas, gomas, aceites y ceras), a excepcin
del fondo de casena, debido a la presencia mayoritaria
de sulfatos incorporados en el proceso de preparacin
industrial de la casena cida.
La CG-EM permiti identificar el aglutinante especfico en las muestras modelo, a partir del porcentaje de
aminocidos marcadores, en adicin de cidos grasos y
el colesterol en el caso de la yema de huevo.
El anlisis combinado de los mtodos implementados
permiti demostrar que en las obras pictricas: murales
en la Casa de Obrapa y la iglesia San Francisco Nuevo,
la tcnica empleada fue de naturaleza no proteica, mientras en la Policroma San Juan, del siglo xviii, se pudo
identificar presencia proteica (anlisis histoqumico), as
como determinar que la tcnica artstica empleada no es
oleosa ni mixta sino una tcnica al temple por emplear un
aglutinante de naturaleza proteica (EITF), identificado
como cola animal (CG-EM).
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