UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO

DEL PERU
FACULTAD DE EDUCACION
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE EDUCACIN
ESCUELA DE PROFESIONALES DE EDUCACION
SECUNDARIA
CARRERA CIENCIAS NATURALES Y AMBIENTALES
AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE GRAU

Biogentica, enzimas y
metabolismo
1._ALUMNO:

pizarro
cunyas wilder

2._SEMESTRE:

3._DOCENTE:
mg.
Betalleluz
valencia fredy

4._curso:
biologa
celular
y
molecular

2016
HUANCAYO _ PER
CINTICA ENZIMTICA

Los principios generales de las reacciones qumicas se aplican tambin a

las reacciones enzimticas. Por este motivo, antes de empezar con la

cintica qumica, se van a repasar algunos conceptos bsicos de cintica
qumica.
A continuacin, se describirn los siguientes conceptos:

Cintica enzimtica

Modelo cintico de Michaelis-Menten

Clculo de la KM y la Vmax de un enzima

Actividad enzimtica

CONCEPTOS BSICOS DE
CINTICA QUMICA
En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es independiente de la concentracin de sustrato: v = k
En una reaccin de primer orden la velocidad de formacin de los productos es directamente proporcional a la concentracin
del sustrato: v = k [A]. As, en la reaccin:
sacarosa + agua

glucosa + fructosa

La velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a la concentracin de sacarosa. Dicho
matemticamente, donde [A] es la concentracin de sacarosa a cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad. Se dice
que sta es una reaccin de primer orden.
Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del producto depende

de la concentracin de dos sustratos (como en una reaccin de condensacin): v = k [A1] [A2]

del cuadrado de la concentracin de un nico sustrato (reaccin de dimerizacin): v = k [A]2

En la tabla siguiente se resumen los distintos tipos de reaccin, y la forma de calcular sus parmetros cinticos.
ORDEN CERO

PRIMER ORDEN

SEGUNDO ORDEN

[A] = -kt + [A]0

Ln[A] = -kt + Ln[A]0

Representacin que da
lugar a una recta

[A] vs t

Ln[A] vs t

1/[A] vs t

Signo de la pendiente

negativo

negativo

positivo

Significado de la
pendiente

-k

-k

Significado de la
ordenada en el origen

[A]0

Ln[A]0

[A]0 es

eb

Expresin diferencial de
la velocidad
Ecuacin integrada de la
velocidad
Vida media (t1/2)

1/b

CINTICA
ENZIMTICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos
estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de la
especifidad del enzima. La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse con
relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La medida se
realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc, y se
utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin
observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin
de los productos o la desaparicin de los
reactivos.

Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del sustrato) en funcin del tiempo
se obtiene la llamada curva de avance de la reaccin, o simplemente, la cintica de la reaccin. A
medida que la reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo porque
se va consumiendo el sustrato de la reaccin (Figura de la derecha). Para evitar esta complicacin se
procede a medir la velocidad inicial de la reaccin (v0). La velocidad inicial de la reaccin es igual a
la pendiente de la curva de avance a tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la medida de
v0 se realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda considerarse la
[S] como esencialmente constante a lo largo del experimento. Adems, en estas condiciones no es
necesario considerar la reaccin inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan pequea que
la reaccin inversa apenas ocurre. De esta forma se simplifican
enormemente las ecuaciones de velocidad.

Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin inicial de sustrato sobre la
velocidad inicial de la reaccin, manteniendo la cantidad de enzima constante. Si representamos
v0 frente a [S]0 obtenemos una grfica como la de la Figura de la derecha. Cuando [S]0 es pequea, la
velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin
es de primer orden. A altas [S]0, el enzima se encuentra
saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de [S] 0.
En este punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad es
mxima (Vmax).

MODELO CINTICO DE
MICHAELIS-MENTEN

Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inical del sustrato sobre la actividad enzimtica
comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo
enzima-sustrato como intermediario del proceso de catlisis enzimtica.En 1913, Leonor
Michaelis (foto de la izquierda) y Maud Menten (foto de la
derecha)desarrollaron esta teora y propusieron una
ecuacin de velocidad que explica el comportamiento
cintico de los enzimas.

Para explicar la relacin oservada entre la velocidad inicial (v 0) y la concentracin inicial de sustrato
([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos
etapas: En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el complejo
enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando el enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinticas individuales de cada proceso y tambin reciben
el nombre de constantes microscpicas de velocidad. Segn esto, podemos afirmar que:

v1 = k1 [E] [S]

v2 = k2 [ES]

v3 = k3 [ES]

Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de forma que
laconcentracin total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la reaccin) es:

[ET] = [E] + [ES]

Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]

Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado estacionario, segn la cual la concentracin del
complejo enzima-sustrato es pequea y constante a lo largo de la reaccin (Figura de la derecha). Por
tanto, la velocidad de formacin del complejo enzimasustrato (v1) es igual a la de su disociacin (v2+ v3):
v1 = v 2 + v 3
Adems, como [ES] es constante, la velocidad de
formacin de los productos es constante:
v = v3 = k3 [ES] = constante.

Como v1=v2+v3, podemos decir que:

k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] +
k3 [ES]
Despejando [ES], queda
que:

, siend

o
, en donde la
expresin (k2+k3)/k1 se ha sustitudo
por KM, o constante de MichaelisMenten. Este enlace nos aporta una
explicacin sobre las razones que
hacen de la KM un parmetro cintico

importante.
Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formacin del producto es:
v = v3 = k3 [ES] =
Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos casos
extremos:

A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM) [S]. Como los trminos
entre parntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva constante, k obs, de forma que la
expresin queda reducida a: v = kobs [S], con lo cual la reaccin es un proceso cintico de
primer orden.

A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La velocidad de reaccin es

independiente de la concentracin del sustrato, y por tanto, la reaccin es un proceso cintico de
orden cero. Adems, tanto k3 como [ET] son constantes, y nos permite definir un nuevo
parmetro, la velocidad mxima de la reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que
se alcanzara cuando todo el enzima disponible se encuantra unido al sustrato.

Si introducimos el parmetro Vmax en la ecuacin general de la velocidad, (la frmula recuadrada

anteriormente), obtenemos la expresin ms conocida de la ecuacin de Michaelis-Menten:

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten. Se dice que su cintica no es

Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas alostricos, cuya grfica v frente a [S] no es una hiprbola,
sino una sigmoide (Figura de la derecha). En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en
una zona crtica (cercana a la KM) se traduce en
grandes variaciones en la velocidad de reaccin.

CLCULO DE LA KM Y DE LA V mx. DE
UN ENZIMA
La representacin grfica de
la ecuacin de MichaelisMenten (v0 frente a [S]0) es
una hiprbola (Figura de la
izquierda). La
Vmaxcorresponde al valor

mximo al que tiende la curva experimental,

y la KM corresponde a la concentracin de
sustrato a la cual la velocidad de la reaccin
es la mitad de la Vmax.

Para determinar grficamente los valores de K M y Vmax es ms sencillo utilizar la representacin doble
recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una lnea
recta. Esta representacin doble recproca recibe el
nombre de representacin de LineweaverBurk (Figura de la derecha). Es una recta en la cual:

La pendiente es KM/Vmax

La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM

La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

De esta forma, a partir de los datos experimentales se

puede calcular grficamente, los valores de K M y
Vmax de un enzima para diversos sustratos.

MOTIVOS QUE HACEN DE KM UN

PARMETRO CINTICO
IMPORTANTE

La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parmetro cintico importante pr mltiples razones:

KM es la concentracin de sustrato para la cual la

velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad
mxima. En efecto, si KM = [S], la ecuacin de MichaelisMenten se reduce a: v = Vmax/2.

El valor de KM da idea de la afinidad del enzima

por el sustrato: A menor KM, mayor afinidad del enzima
por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad. Este
hecho tiene fcil explicacin si tenemos en cuenta que K M se
define como (k2+k3/k1), donde las reacciones 2 y 3 destruyen
el complejo ES, mientras que la reaccin 1 lo forma. As, si
KM es grande, el complejo ES es inestable pues predomina
la tendencia a destruirlo (poca afinidad hacia el sustrato), y si K M es pequea, el complejo ES es
estable, ya que predomina la tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el sustrato).

La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos anlogos. Si dos sustratos del
mismo enzima tienen distinta KM, el que presente mayor KM tiene menor afinidad por el enzima, y la
reaccin transcurre siempre a menor velocidad que con el sustrato de menor K M, salvo a
concentraciones saturantes de sustrato, donde la v = Vmax.

Los valores de KM de muchos enzimas son prximos a los de la concentracin fisiolgica de

sus sustratos, de forma que pequeas variaciones en la [S] pueden suponer grandes cambios en la
velocidad de toda una ruta metablica.