CERQUIN BUENO JHON HEINER

Agronoma

MICROBIOLOGIA
Bioseguridad

I.

INTRODUCCIN

En el inicio de la investigacin microbiolgica no se conoca todos los riesgos que

esta ciencia tena para las personas que incursionaban en mundo de bacteria,
virus, hongos, etc. Puesto que son patgenos para el hombre, adems de que se
encontraban expuestos a riesgos no biolgicos (qumicos, fsico, etc.) en la
prctica de conocimiento microbiolgico. Durante todo el transcurso de la historia
de la microbiologa, las infecciones se han contrado en el laboratorio. Los
informes publicados hacia fines del siglo pasado describieron casos de tifoidea,
clera, muermo, brucelosis y ttano adquiridos en los laboratorios.
Los laboratorios de microbiologa constituyen ambientes de trabajo especiales,
que pueden presentar riesgos de enfermedades infecciosas para las personas que
se encuentren en o cerca de ellos. El trabajo en el laboratorio es un trabajo de
grupo, en donde la actitud de cada uno de los integrantes ante las prcticas, as
como el entrenamiento que posean en las tcnicas requeridas para el manejo de
material contaminado, determinan su propia seguridad, as como la de sus
compaeros y la de la colectividad en general.
La bioseguridad es un conjunto de medidas probadamente eficaces para evitar la
adquisicin accidental de infecciones con patgenos contenidos en las muestras,
as como los riesgos relacionados con la exposicin a agentes qumicos, fsicos o
mecnicos a los que est expuesto el personal en los laboratorios.
El presente documento da un enfoque general sobre las normas que se debe
tener en un laboratorio de microbiologa as como el cuidado, limpieza,
esterilizacin, desinfeccin, etc. de la persona como el material y equipos que se
encuentran en el laboratorio. El objetivo principal de este informe, es ofrecerle al
estudiante una gua que contribuya a lograr un ambiente de trabajo adecuado y
seguro, durante la ejecucin de las actividades prcticas en el Laboratorio de
Microbiologa.

II.

MATERIALES

Cuaderno de apuntes
Lapiceros

III.

CONTENIDO

DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
1. Agente biolgico: Todo organismo viviente capaz de causar infeccin,
enfermedad o muerte en el ser humano con inclusin de los genticamente
modificados y endoparsitos humanos susceptibles de originar cualquier
tipo de infeccin, alergia o toxicidad.
2. Antispticos: Se definen como agentes germicidas para ser usados sobre
la piel y los tejidos vivos. Aunque algunos germicidas pueden ser utilizados
como desinfectantes y antispticos (alcohol 70-90%), su efectividad no es
necesariamente la misma en cada caso, un buen antisptico puede no ser
eficaz como desinfectante y viceversa.
3. rea contaminada: rea donde se manipulan microorganismos de riesgo.
Ejemplo: Laboratorios donde se manipulan virus, produccin de antgenos,
etc.
4. rea limpia: rea del laboratorio donde no se manipulan microorganismos
de riesgo. Ejemplo: donde se mantienen los medios de cultivos celulares,
se preparan los medios de cultivo y a la vez se realiza la formulacin de la
vacuna.
5. rea libre: rea de trnsito libre para todo el personal. Ejemplo: pasadizos,
comedor y otras reas de uso comn.
6. Dao: Es la consecuencia producida por un peligro sobre la calidad de vida
individual o colectiva de las personas.
7. Peligro biolgico: Todo agente biolgico y materiales que son
potencialmente peligrosos para los seres humanos, animales o plantas.
8. Desinfeccin: Proceso que mediante el empleo de agentes (sobre todo
qumicos), es capaz de eliminar los microorganismos patgenos de un
material. Generalmente se presentan efectos txicos sobre tejidos vivos,
por lo que se emplea slo sobre materiales inertes.
9. Esterilizacin: Proceso que mediante el empleo de agentes fsicos o
qumicos produce la inactivacin total de todas las formas de vida
microbiana en forma irreversible (estado esporulado y vegetativo).
10. Laboratorio de ensayo: Es el lugar donde se realizan actividades para la
determinacin de una o varias caractersticas o el rendimiento de un
producto, material, equipo, organismo, fenmeno fsico, proceso o servicio
dados de acuerdo con un procedimiento especificado.
11. Ensayo: Operacin tcnica que consiste en la determinacin de una o
varias caractersticas o el rendimiento de un producto, material, equipo,
organismo, fenmeno fsico, proceso o servicio dados de acuerdo con un
procedimiento especificado.
12. Limpieza: Es el proceso fsico por el cual se elimina de los objetos en uso,
las materias orgnicas y otros elementos sucios, mediante el lavado con
agua con o sin detergente. El propsito de la limpieza no es destruir o matar

los microorganismos que contaminan los objetos, sino eliminarlos por

arrastre.
13. Microorganismo: Toda entidad microbiolgica, celular o no, capaz de
reproducirse o de transferir material gentico.

14. Sustancia infecciosa: Es aquella que contiene microorganismos viables

(bacterias, virus, rickettsias, parsitos, hongos o recombinantes hbridos
mutantes) que pueden causar enfermedades tanto en el hombre como en
los animales. No incluye toxina que no contiene ninguna sustancia
infecciosa.
15. Bioseguridad: Conjunto de medidas preventivas reconocidas
internacionalmente orientadas a proteger la salud y la seguridad del
personal y su entorno. Complementariamente se incluye normas contra
riesgos producidos por agentes fsicos, qumicos y mecnicos.
Modernamente se incorporan tambin las acciones o medidas de seguridad
requeridas para minimizar los riesgos derivados del manejo de un
organismo modificado genticamente (OMG), sus derivados o productos
que los contengan, y uso de la tecnologa del ADN recombinante (ingeniera
gentica) y otras tcnicas moleculares.
Principios de Bioseguridad
El trmino contencin se utiliza para describir mtodos seguros para manejar
materiales infecciosos en el medio ambiente del laboratorio donde son
manipulados o conservados. El objetivo de la contencin es reducir o eliminar la
exposicin de quienes trabajan en laboratorios u otras personas, y del medio
ambiente externo a agentes potencialmente peligrosos.
La contencin primaria, la proteccin del personal y del medio ambiente inmediato
del laboratorio de la exposicin a agentes infecciosos, es provista tanto mediante
buenas tcnicas microbiolgicas como a travs del uso de equipos de seguridad
adecuados. El uso de vacunas puede brindar un mayor nivel de proteccin del
personal.
La contencin secundaria, la proteccin del medio ambiente externo al laboratorio
de la exposicin a materiales infecciosos, se logra a travs de una combinacin
del diseo de la instalacin y prcticas operativas. Por lo tanto, los tres elementos
de contencin incluyen prcticas y tcnicas de laboratorio, equipos de seguridad y
el diseo de la instalacin. La evaluacin del riesgo del trabajo a realizar con un
agente especfico determinar la combinacin apropiada de estos elementos.
Agentes Biopeligrosos
Son todos aquellos agentes biolgicos y materiales que son potencialmente
peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas. Entre ellos

podemos citar: bacterias, virus, hongos, parsitos, productos recombinantes,

alergenos, priones, etc.
Riesgo Microbiolgico
El Riesgo Microbiolgico se encuentra presente cada vez que se realiza una
actividad prctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulacin de cultivos
de microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy elevadas y
pueden llegar a provocar una infeccin si no son manipulados adecuadamente.
Para que se produzca un accidente por un agente biolgico deben estar presente
bsicamente 4 elementos: un husped susceptible, un agente infeccioso, una
concentracin suficiente de ste y una ruta de transmisin adecuada; siendo este
ltimo punto el que mejor se puede controlar en el laboratorio.
1. Vas de Infeccin
Los microorganismos pueden ingresar al organismo a travs de: La boca, los
pulmones, la piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. Las vas de
contaminacin ms frecuentes en el laboratorio se dan a travs de:
La boca Comer, beber y fumar en el laboratorio. Realizar transferencias con
pipetas sin utilizar ningn tipo de proteccin. Transferencia indirecta de
microorganismos a travs de los dedos o utensilios contaminados (lpices,
bolgrafos, etc.).
La piel Inoculacin accidental con una aguja hipodrmica u otros
instrumentos punzantes o de vidrio. Cortaduras o rasguos.
Los ojos Salpicaduras de materiales infecciosos. Transferencia indirecta de
microorganismos a travs de los dedos contaminados.
Los pulmones Inhalacin de microorganismos transportados por el aire
(aerosoles).
En los Laboratorios de Microbiologa de la Facultad de Farmacia estamos seguros
que comprendiendo y teniendo conocimiento de todos estos posibles riesgos,
aprendiendo y ejecutando las tcnicas adecuadas, contribuiremos con una parte
importante e integral del proceso de educacin, as como tambin a reducir el
nmero de accidentes en el laboratorio y en futuras actividades fuera de l.
Medidas en caso de emergencia
A continuacin mencionaremos los pasos que se deben seguir en caso de que
ocurran los siguientes accidentes:
Derrame de material biolgico sobre el cuerpo: Remover la ropa
inmediatamente. Lavar vigorosamente el rea expuesta con agua y jabn
por un minuto. Reportar el incidente al profesor. Buscar atencin mdica si
es necesario. La ropa contaminada debe ser colocada en una solucin
desinfectante antes de ser lavada.

 Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos: Lavar

inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del prpado con
abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para
asegurar efectivamente el lavado, comenzando por los prpados. Reportar
el incidente al profesor. Buscar atencin mdica inmediatamente.
Cortadas menores y heridas por pinchazo: Lavar vigorosamente la herida
con agua y jabn por varios minutos. Aplicar un antisptico adecuado
Reportar el incidente al profesor. Buscar atencin mdica inmediatamente.
En el caso de derrames: Reportar el incidente al profesor. Colocarse
guantes y cubrir con papel absorbente el rea del derrame. Verter un
desinfectante adecuado y dejar actuar por el tiempo necesario. Retirar el
material absorbente junto al material roto y colocarlos en un recipiente para
residuos contaminados o bolsa de desechos, la cual debe esterilizarse junto
con los guantes utilizados. Limpiar y desinfectar nuevamente el rea
empleando nuevas toallas de papel y desinfectante. Lavarse las manos con
abundante agua y jabn.
Principios bsicos de la seguridad biolgica
Clasificacin de los agentes biolgicos por grupos de riesgo en cuatro grupos en
funcin de riesgo de infeccin:
Agente biolgico del grupo 1:
Aquel que resulta poco probable que cause una enfermedad en el hombre.
Agente biolgico del grupo 2:
Aqul que puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un
peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la
colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
Agente biolgico del grupo 3:
Aqul que puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un serio
peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y
existiendo frente a l generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
Agente biolgico del grupo 4:
Aqul que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro
para los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la
colectividad y sin que exista generalmente frente a l profilaxis o tratamiento
eficaz.
Tcnicas de laboratorio

El elemento ms importante para contener los riesgos biolgicos es el seguimiento

estricto de las prcticas y tcnicas estndar microbiolgicas.
Equipo de seguridad (barreras primarias).
Son los dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad (por ejemplo, las
cabinas de seguridad biolgica), como las prendas de proteccin personal
(guantes, mascarillas, batas, calzado...).
Diseo y construccin de la instalacin (barreras secundarias).
Se incluyen la separacin de las zonas donde tiene acceso el pblico, la
disponibilidad de sistemas de descontaminacin (autoclaves), etc.
Caractersticas del nivel de contencin 3:
Debe utilizarse cuando se manipulan agentes biolgicos del grupo 3,
microorganismos que cursan con patologa grave, de difcil y largo tratamiento,
que pueden curar con secuelas y ocasionalmente producir la muerte.
El mayor y ms frecuente peligro que entraan stos es la infeccin adquirida a
travs de aerosoles y por fluidos biolgicos. Por ello, las principales medidas a
tomar en este caso son la correcta manipulacin y la utilizacin de cabinas de
seguridad.
En los Laboratorios de Microbiologa Clnica los ejemplos ms tpicos de este tipo
de microorganismos son M. tuberculosis, Brucella, Coxiella burneti, Francisella
tularensis, etc. Slo pueden ser procesados por personal cualificado y en una
zona con la infraestructura apropiada.
NORMAS GENERALES
Las siguientes normas sern observadas dentro de los laboratorios de
microbiologa
No se permite:

Comer o ingerir bebidas, manipular lentes de contacto.

Uso de beepers, celulares y walkman.
Presencia de personas ajenas al laboratorio.
Juegos de mano ni el uso de vocabulario indebido.
Salir del laboratorio sin autorizacin una vez haya comenzado el trabajo.
Presencia de bolsones o mochilas sobre la mesa de trabajo.

REGLAS DE SEGURIDAD EN LOS LABORATORIOS

Las siguientes reglas de seguridad se observan en todos los laboratorios:

 Es obligatorio el uso de una bata de laboratorio para prevenir

contaminacin y para protegerlo de algn tipo de accidente como:
salpicaduras de tintes o reactivos qumicos. Mantenerla abotonada. Ningn
estudiante sin bata ser admitido en el laboratorio. Se usaran gafas de
seguridad y guantes cuando sern requeridos.
Por razones de seguridad se prohbe el uso de pantalones cortos y/o faldas
cortas. Tampoco se permitir el uso de camisitas o blusas de manguillos o
blusas que muestren en abdomen. Los zapatos se usaran cerrados, no se
permiten sandalias.
El pelo largo debe mantenerlo recogido siempre. No se permite el uso de
gorras.
Cuando se utilicen bacterias, hongos o virus deben observarse las
siguientes reglas:
Todos los cultivos sern manejados como patgenos potenciales,
entindase organismos causantes de enfermedades.
Los cultivos deben cargarse y mantenerse en gradillas.
Si se derrama algn cultivo en la mesa, piso o encima de su ropa, deber
notificarlo inmediatamente a su instructor, profesor o tcnico de laboratorio.
Nunca deber pipetear con la boca.
Debern conocer la ubicacin y uso de los equipos de seguridad tales
como: manta, extinguidores, botiqun de primeros auxilios, etc. De igual
forma, debern conocer la ubicacin de las salidas de emergencia y
escaleras.
Deber rotular e identificar debidamente todos los materiales o cultivos que
utilice en los laboratorios.
No deber manipular ninguna cristalera mojada, excepto cuando se est
ayudando a lavar.
Si tuviese que colocar algn tapn, ya sea de goma, corcho o cristal en un
envase de cristal, se recomienda lubricarlo previamente.
Al colocar pipetas en los pipeteadores, recuerde no forzarlas para evitar
que se rompan.
No se debe abrir las llaves de gas, vaco o de agua si no las va a utilizar.
Ser responsabilidad del estudiante, el leer con anterioridad los laboratorios
para que se informe sobre el manejo del equipo, substancias y
procedimientos que se utilizara. Una vez comenzado el laboratorio,
mantenerse atento a los procedimientos y seguir instrucciones.
Tome todas las precauciones necesarias para evitar accidentes. En caso de
que estos ocurran, infrmelo inmediatamente al instructor.
De surgir alguna emergencia (fuego, escape de gas, etc.) deber
abandonar el laboratorio a la mayor brevedad posible en estricto orden.

 Todo desperdicio slido o lquido (materiales insolubles, trozos de vidrio,

etc.), debern desecharse en los envases apropiados. El instructor le
indicara que se considera material y como se desechara.
Mantener despejadas las mesas de trabajo y pasillos entre las mesas. El
laboratorio tendr un rea designada para dejar los bultos o mochilas.
Al terminar el laboratorio deber limpiar su rea de trabajo (con
desinfectante si ha trabajado con algn microorganismo).
Deben lavarse las manos con agua y jabn antes de comenzar el
laboratorio y despus de terminar el mismo.
Si posee alguna condicin de salud, impedimento y/o embarazo, favor
notificarlo al profesor o instructor desde el primer da.
Los instructores no deben abandonar el laboratorio mientras permanezcan
estudiantes de su seccin en el mismo.
Se prohbe la manipulacin de equipo (autoclave, gabinetes bacteriolgicos,
etc.) sin la debida autorizacin.
No se permite la permanencia de ningn estudiante trabajando sin la
supervisin en el laboratorio y fuera de horas laborales. Si tuviese que
hacerlo, asegrese de que un instructor, profesor o personal tcnico lo
acompae.
Todos los laboratorios debern tener en un lugar visible y accesible las
hojas de seguridad.
NORMAS DE UTILIZACIN DE EQUIPOS
Normas generales
Los equipos y aparatos nunca deben colocarse en zonas de paso, en
particular en los pasillos del laboratorio.
Todos los aparatos con toma elctrica debern cumplir las normativas de
seguridad correspondientes. Nunca deben utilizarse en zonas mal aisladas
y expuestas a la humedad.
Las fuentes de calor (calentadores, termobloques, etc.), sobre todo si se
alcanzan temperaturas elevadas, debern estar debidamente sealizadas
para evitar quemaduras accidentales.
Neveras y habitaciones frigorficas
No deben almacenarse cultivos de microorganismos patgenos por
inhalacin en recipientes que no estn convenientemente cerrados.
Congeladores
El material potencialmente infeccioso debe colocarse en tubos, recipientes,
etc. Bien cerrado.
No se llenarn completamente, para evitar que rebosen por efecto del
aumento de volumen tras la congelacin.

 Descongelar peridicamente, limpiar y desinfectar si fuese procedente

Utilizar guantes para manipular el contenido. Si la temperatura es baja (por
ejemplo 70C o inferior), los guantes representan una proteccin adicional.
Estufas e incubadores
La limpieza y la desinfeccin, peridicas y sistemticas, son el mtodo
recomendable para reducir los riesgos derivados de la contaminacin
accidental delpersonal del laboratorio.
Microondas
Los microondas cada vez son ms populares en el Laboratorio de
Microbiologa y constituyen una nueva fuente de accidentes, entre los ms
frecuentes las explosiones cuando se usan para calentar medios con agar,
ya que la diferencia de velocidad de calentamiento produce burbujas que
pueden estallar.
Las botellas o matraces deben tener el tapn aflojado, ya que si est
cerrado estallan fcilmente. Estar siempre presente, con la ropa y pantalla
facial adecuadas, y controlar la intensidad del aparato, que slo puede ser
la mxima con agua y la mnima si se usa con agar.
Los microondas interfieren con los marcapasos. No deben ser colocados a
una distancia inferior a 2 m de las personas que sean portadoras de uno de
estos dispositivos.
Autoclaves
Las autoclaves deben poseer manmetro y termostato, as como vlvula de
seguridad, sistema de desconexin rpido y la purga del vapor ha de
realizarse a un recipiente estanco y con agua, jams directamente al
exterior.
No deben usarse si no se conocen perfectamente todos los mandos y su
fundamento.
Usar guantes especiales para protegerse del calor.
No abrir jams si el aparato no lo indica.
Controlar una vez al mes su capacidad de desinfeccin mediante esporas,
no siendo suficiente el mtodo qumico. El uso de registros de presin y
temperatura de cada proceso y la instauracin de un programa de
mantenimiento tambin puede ser una alternativa vlida al control mediante
esporas.
Centrfugas
Los mayores riesgos derivan, sobre todo, de la contaminacin por los aerosoles
generados durante la centrifugacin de materiales biolgicos y, en menor medida,
de los traumatismos accidentales.

Se recomienda:
Cuando se centrifugue material biolgico potencialmente infeccioso deben
utilizarse tubos cerrados
La centrfuga debe disponer de rotores o cestillos de seguridad que protejan
al operador de los posibles aerosoles.
La rotura accidental de un tubo y su vertido en la cubeta representa una
incidencia importante que debe ser comunicada inmediatamente y proceder
a la desinfeccin segura del aparato.
No se deben utilizar centrfugas que no posean sistema de cierre de
seguridad
Si el laboratorio dispone de ultracentrfugas, el equilibrado cuidadoso del
rotor es fundamental.
Miscelnea
Los baos de agua (baos mara) debern contener un desinfectante
adecuado, ser limpiados una vez a la semana y desinfectados con
periodicidad mensual.
En la zona de trabajo no debe colocarse directamente material de escritorio
ni libros, ya que el papel contaminado es de difcil esterilizacin o
desinfeccin.
Buenas prcticas de laboratorio
Acceso a los materiales y equipos de laboratorio, limitado.
Manejo seguro de objetos punzo cortantes y muestras a examinar.
Procedimiento realizado con precaucin, para minimizar la creacin de
salpicaduras o aerosoles.
La superficie de trabajo se descontamina como mnimo dos veces. (al inicio
y al final de la jornada de trabajo).
Practique la ejecucin de buenas prcticas de laboratorio, con los
materiales proporcionados para los buenos resultados.
Anote en su cuaderno detalladamente cada una de las buenas prcticas

IV.

CONCLUSIONES

Gracias al contenido de este informe el estudiante conocer el adecuado

ambiente de trabajo en un laboratorio.
Se expuso las normas necesarias para tener un buen ambiente de trabajo
en el laboratorio.
Se conoci las medidas necesarias para hacer prcticas seguras en el
laboratorio.

REFERENCIA BIBLIOGRFICAS
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