Tincin de Ziehl-Neelsen

TECNICA
Esta tcnica puede realizarse tanto en muestras histolgicas como citolgicas.

Variante histolgica
Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina.Los reactivos
necesarios para su realizacin son los siguientes:
1. cido perydico 58%
2. carbol fucsina de Ziehl culina(fucsina fenicada). Preparar mezclando en el
orden dado:
1. 0,5 g fucsina bsica
2. 50 ml agua destilada
3. 5 ml etanol absoluto
4. 28,5 g cristales de fenol derretidos
3. hematoxilina
4. alcohol cido 1%:
1. alcohol de 35
2. cido clorhdrico

El procedimiento es el siguiente:
1. desparafinar e hidratar los cortes
2. cido peridico 5%, 10 min
3. lavar con agua destilada
4. fucsina fenicada, 15 min
5. decolorar en alcohol cido al 50%
6. lavar con agua destilada
7. hematoxilina, 10 min
8. azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio

9. deshidratar, aclarar y montar preparaciones

Resultados
BAAR: rojo.
Ncleos: azul semiamarillo.
Variante clsica o "en caliente"=
1. Hacer un frotis de la muestra.
1. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido
al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados
falsamente negativos y un frotis muy grueso puede
desprenderse del portaobjetos durante la tincin.
2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de
tincin con los extendidos hacia arriba.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos
durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este perodo,
4. Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).
1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada
penetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que
hierva o se seque el colorante.
2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua
corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada.
Lave suavemente de manera que el extendido no se barra
del portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5. Decolorar con alcohol-cido.
1. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal
como alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetos
durante 7 minutos. Si no se decolora suficientemente, el
contenido del esputo que no son bacilos TBC puede
permanecer teido. Enjuague con agua una vez ms los
portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos
an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la solucin
decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
1. Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1
minuto.

7. Enjuagar con agua

1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada
portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente,
coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al
aire.
8. Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga
la observacin al microscopio con 100 x 100

O en "fro" (Tincin de Kinyoun)

1. Hacer un frotis.
2. Dejarlo en el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada (solucin con fenol y mayor concentracin
de fucsina).
4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
5. Decolorar con alcohol cido.
6. Lavar con agua del grifo.
7. Contrastar con azul de metileno

Algunos microorganismos cido-alcohol resistentes

Mycobacterium: fuertemente cido-alcohol resistentes.1

Nocardia y Actinomices: dbilmente cido-alcohol resistentes.2

Parsitos coccdeos (Cryptosporidium) de muestras [fecales]. 3