Microbiologia Tecnicas de Siembra

Trabajo Prctico N 2.
Medios de cultivo Obtencin y preparacin de muestras
2013
TRABAJO PRCTICO N 2
PARTE A: MEDIOS DE CULTIVO.
OBJETIVOS
- Fundamentar la composicin de diferentes medios de cultivo conociendo los
requerimientos
energticos, nutricionales y ambientales de los principales grupos de microorganismos.

- Reconocer la presencia de los grmenes en todos los hbitats naturales y en los seres humanos.
- Conocer los distintos instrumentos,
materiales y medios de cultivo que se utilizan ms
frecuentemente en el Laboratorio de Microbiologa durante
la
siembra y transplante de
microorganismos.
- Adquirir conocimiento y destreza en el manejo de la tcnica asptica.
INTRODUCCIN
Definicin:
un MEDIO DE CULTIVO es una preparacin nutritiva, natural o
artificial, slida,
semislida o lquida, que suministra al microorganismo cada una de las sustancias fundamentales, una
fuente de energa y las condiciones ambientales adecuadas para su crecimiento y multiplicacin,
aproximndose lo ms posible a las condiciones de su hbitat natural o nicho ecolgico.
COMPOSICIN Y FORMA DE PREPARACIN DE DISTINTOS MEDIOS DE CULTIVO
1. Caldo nutritivo
Extracto de carne ...............................................................................0.15 g
Peptona ..................................................................................................0.25 g
NaCl..........................................................................................................0.25 g
Utilizando un erlenmeyer, se disuelve cada uno de los componentes ya pesados, en 50 ml de agua
destilada. Homogeneizar. Ajustar el pH a 7 (6.8-7.2). Envasar todo el volumen en un recipiente
limpio. Tapar con papel. Rotular. Esterilizar en autoclave 15 min a 121C 1 atm.
2. Agar nutritivo
Extracto de carne ...............................................................................0.45 g
Peptona .................................................................................................0.75 g
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NaCl..........................................................................................................0.75 g
Agar ............................................................................................................... 3 g
Agua destilada ...................................................................................150 ml
Esta frmula nutritiva se proveer como un polvo con el peso adecuado que se rehidratar en 150
ml de agua destilada utilizando un erlenmeyer. Tapar con papel. Rotular. Fundir a ebullicin en
una olla. Retirar y dejar enfriar a 55-60C. Homogeneizar bien. Ajustar el pH a 7-7.2 empleando
cinta indicadora de pH de uso externo. Neutralizar con cido o base segn corresponda.
Envasar en tubos en cantidades de 15 ml si se desea obtener agar derecho (para volcar en placa de
Petri en prcticos posteriores), o en cantidades de 7 ml si se desea obtener agar inclinado o en pico
de flauta. Luego de tapar con algodn, tapa a rosca o tapn plstico, esterilizar en autoclave bajo
las condiciones anteriormente descritas. Antes de solidificar, los tubos que contienen 7 ml se
inclinan sobre una tabla para que solidifique en pico de flauta. Los que contienen 15 ml se dejan
solidificar en posicin vertical.
3. Agar sulfuro-indol-movilidad (SIM)

Peptona de casena .................................................................................. 1 g
Peptona de carne ................................................................................0.33 g
Citrato de amonio y hierro (III) ...................................................0.01 g
Tiosulfato de sodio ............................................................................0.01 g
Agar .........................................................................................................0.15 g
Agua destilada ..................................................................................... 50 ml
Esta frmula nutritiva se proveer como un polvo deshidratado con el peso adecuado que se
rehidratar en 50 ml de agua destilada utilizando un erlenmeyer. Tapar con papel. Rotular. Fundir
a ebullicin en una olla. Retirar y dejar enfriar a 55-60C. Homogeneizar bien. Ajustar el pH a 7-7.2.
Envasar en tubos de hemlisis en cantidad de 3 ml por tubo. Luego de tapar con algodn,
esterilizar en autoclave a bajo las condiciones anteriormente descritas. Dejar
solidificar en
posicin vertical.
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4. Agar sangre
Material necesario:
-1 tubo de agar nutritivo derecho
-glbulos rojos de carnero
-1 placa de Petri
Fundir el agar nutritivo en tubo y enfriarlo a 50- 55C. En cmara de bioseguridad desenvolver una
placa de Petri estril y colocar 0.5 ml de sangre por cada 10 ml de medio de cultivo, de manera que se
obtenga una concentracin final de 5%. Volcar el agar fundido sobre la sangre. Homogeneizar
haciendo movimientos circulares suaves. Secar. Sembrar. Incubar en un recipiente con CO2 (tarro con
vela) a 37C durante
24-48 h. Observar la hemlisis.
Ajuste de pH para medios preparados en el laboratorio

Se pueden utilizar cidos tales como chlordrico, actico, lctico o tartrico, y lcalis como hidrxido
de sodio 1 N.
El pH debe medirse antes de la esterilizacin de los medios.
Conservacin de los medios de cultivo
La estabilidad de los medios de cultivo es limitada. De no utilizarlos inmediatamente, se conservarn a
4-10C en refrigerador.
EXCEPCION: Los medios con tioglicolato se conservan mejor a temperatura ambiente.
Control de esterilidad
Se realizar para todos los medios recin esterilizados. A tal fin, se colocar un parte de los tubos
conteniendo los medios en estufa de 37C durante 24 h, y se observar desarrollo o ausencia de
desarrollo de microorganismos sobrevivientes al proceso de esterilizacin en autoclave.
BIBLIOGRAFA
- Escudero M.E. Medios de cultivo (parte 1). 2012. Explicacin de Trabajo Prctico. Microbiologa General, FQBF,
Universidad Nacional de San Luis.
- Madigan, Martincko. 2009. Brock, Biologa de los microorganismos. 10. Edicin. Pearson-Prentice Hall.
- Manuales de medios de cultivo, ver:
- www.merck.com.ar
- www.britanialab.com.ar
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PARTE B: SIEMBRAS Y REPIQUES

INTRODUCCIN
Siembra: se entiende por siembra al acto de transferir o colocar un microorganismo en un medio de
cultivo adecuado. La transferencia se efecta desde el hbitat natural (nicho ecolgico) al medio de
cultivo.
Por ejemplo, se efectan siembras desde distintos materiales biolgicos (esputo, orina, materia fecal,
etc.) cuando existe sospecha de infeccin y se quiere aislar el agente causal. Tambin se pueden
efectuar siembras desde los ms diversos materiales, por ej. agua, tierra, aire, etc. Con esto se
demuestra la universalidad de los grmenes.
Transplante o repique: es la transferencia de grmenes desde un medio de cultivo a otro.
Se efectan repiques cuando se desea obtener un cultivo puro a partir de uno mixto, mantener cepas,
o efectuar estudios qumicos, bioqumicos o culturales.
A. Con qu se siembra?
Ansa
Recta
En anillo
Pipetas
Comunes (de 1, 2, 5, 10 y 25 ml)

Pasteur rectas
Pasteur a bolas
Micropipetas
Esptula de Drigalski y palo de hockey
de diferentes volmenes: 2, 10, 20, 100, 200 y 1000 l

para sembrar en superficies grandes (caja de
Petri, botellas de Roux, etc.)
Hisopo
dem anterior.
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B. En qu se siembra?
Medios lquidos
Medios slidos
1,5 2 % de solidificante
Agar inclinado o en pico de flauta
Agar en caja de Petri o botella de Roux
Medios semislidos
agar blando, 0.2-0.3% de solidificante
C. Cmo se siembra?
Medios slidos
En placa de Petri
Extensin
Estras
esptula de Drigalski
ansa en anillo
ansa recta
Placa vertida inculo ms agar fundido y enfriado a 45-50C

En superficie inclinada
En estras
Por contacto
En medio semislido (agar derecho)
En medios lquidos
por puncin
con ansa recta (preferentemente)
MATERIALES Y MTODOS
-
Elementos de siembra: un ansa recta y un ansa en anillo, hisopos estriles.
Material de vidrio preparado y esterilizado: placas de Petri, hisopos, pipetas estriles, ansas.
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Frascos de descarte con lavandina al 10%
Medios de cultivo: agar nutritivo derecho, agar nutritivo inclinado, agar sangre, agar Mueller
Hintlton.
Agua destilada
Probetas, pipetas
Alcohol 70% y algodn. Repasador.
Elementos de proteccin personal: guaradapolvo, guantes, barbijo.
Algunos elementos de siembra utilizados en Microbiologa

Ansas en anillo y un ansa recta
Micropipeta con tip estril
Esptula de Drigalski
Pipeta Pasteur
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Tcnica asptica para siembras y repiques

Las operaciones que se describen a continuacin estn dirigidas a personas diestras. Proceder de
modo similar pero con las manos opuestas en caso de personas zurdas. Observar Figura 5.3 para
entender la tcnica.
1. Siembras en agar semislido o blando por puncin o picadura:

Esterilizar a la llama (al rojo) el alambre del ansa. Dejarlo enfriar 5 seg. Tomar el tubo del cual se
va a extraer el inculo con la mano izquierda, con el meique de la mano derecha quitar el tapn
del tubo, flamear la boca y mantenerlo oblicuo, casi horizontal, para reducir al mnimo el peligro
de contaminacin. Retirar con el ansa esterilizado una pequea cantidad de cultivo (inculo),
flamear nuevamente la boca del tubo, taparlo y dejarlo en la gradilla. Tomar el tubo que se va a
sembrar con la mano izquierda, quitarle el tapn con el meique de la derecha, flamear la boca del
tubo y con el ansa cargado de inculo picar el medio hasta aproximarse al fondo del tubo. Retirar
con cuidado el ansa, flamear la boca del tubo, taparlo y esterilizar el ansa antes de dejarla sobre la
mesa. El tubo sembrado se marca para identificarlo colocando en el rtulo el medio, lo que se
sembr y la fecha. Luego se lleva a incubar a temperatura adecuada durante el tiempo necesario.
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http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/guia.pdf
2. Siembras sobre medios inclinados (en pico de flauta)

Esterilizar a la llama el alambre del ansa. Dejarlo enfriar 5 seg. Tomar el tubo del cual se va a
extraer el inculo con la mano izquierda, con el meique de la mano derecha quitar el tapn del
tubo, flamear la boca y mantenerlo oblicuo, introducir el ansa estril, retirar una pequea cantidad
de cultivo, flamear la boca del tubo, taparlo y dejarlo en la gradilla. Tomar el tubo que se va a
sembrar con la mano izquierda, quitarle el tapn con el meique de la derecha, flamear la boca del
tubo, mantenerlo inclinado, introducir el ansa cargada al tubo y extender el inculo sobre la
superficie del medio trazando estras a intervalos de pocos mm empezando por abajo, retirar el
ansa, flamear la boca del tubo y taparlo. Tambin esterilizar el ansa antes de dejarla sobre la mesa.
Como en la siembra anterior, rotular el tubo y luego llevarlo a incubar.
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3. Siembra en placa de Petri

Preparacin de placa de Petri. Fundir en bao de Mara hirviente un tubo de agar derecho.
Enfriarlo a 45-50C en un bao. Secarlo. Destaparlo. Flamear la boca del tubo y volcar el contenido
en una caja de Petri estril, rotar la caja sobre la mesa de manera que se forme una capa uniforme.
Dejar solidificar. Secar en estufa a 37C 5 min y luego sembrar.
Siembra por estras. En estos casos las clulas son separadas por agotamiento, al realizar estras
sobre la superficie del agar. El inculo inicial tiende a diluirse progresivamente con cada estra
sucesiva.
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Procedimiento:
1.
Tomar una caja de Petri con el medio de cultivo adecuado ya solidificado y dividir la base de la
caja (con marcador indeleble del lado externo) en 3-4 sectores
2. Sembrar por orden en cada cuadrante en zigzag.

3. Una vez sembradas, las cajas se incuban invertidas
4. Siembra en medios lquidos en general: (caldo, leche, agua peptonada, medio mineral de fosfato,
etc.)
Los medios transparentes se deben sembrar con ansa recta, tratando de transportar poco inculo. Los
dems se pueden sembrar con ansa, o bien con pipetas estriles.
Siembra en medios lquidos con ansa:
Una vez que el ansa esterilizada fue cargada con el inculo, tomar con la mano izquierda el tubo con
medio lquido a sembrar, con el meique de la mano destaparlo, flamear la boca del tubo y
mantenerlo inclinado, introducir el ansa y descargar el inculo. Retirar el ansa, flamear la boca del
tubo, taparlo, esterilizar el ansa antes de dejarla sobre la mesa, rotular el tubo y llevarlo a incubar.
Siembras de medios lquidos con pipetas:
Tomar la pipeta estril (puede estar en tambores de aluminio o bien envuelta en papel), pasarla
ligeramente por la llama. En la mano izquierda tenemos el tubo del cual vamos a extraer el inculo,
con el meique de la derecha lo destapamos, flameamos y mantenemos inclinado, introducimos la
pipeta, aspiramos el volumen deseado, flameamos el tubo, tapamos y dejamos en la gradilla con la
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mano izquierda. Tomamos el tubo con el medio de cultivo que vamos a sembrar, con el meique
derecho lo destapamos, flameamos e introduciendo la pipeta sin llegar hasta el lquido sembramos
el volumen deseado (gotas, ml, etc.). Flamear la boca del tubo, taparlo y colocar la pipeta en
recipientes que contengan mezcla sulfocrmica o solucin desinfectante. Una vez hecho esto, el
tubo se rotula y se incuba.
Siembras de medios lquidos o slidos con micropipeta
Colocar el volumen deseado en el visor de la micropipeta (siempre dentro del rango de microlitros
permitidos en cada una de ellas), y colocar un tip estril en el extremo de la micropipeta. Ante un
roce o toque con elemento extrao, descartar el tip y reemplazarlo por uno estril. Tomar el tubo
con la muestra lquida en la mano izquierda y sostener la micropipeta con la mano derecha. Acercar
el tubo a la mano que sostiene la micropipeta y con el dedo meique quitar y sostener el tapn del
tubo y flamear. Con el pulgar de la derecha bajar el pistn de la micropipeta hasta el primer tope e
introducir el tip en el lquido donde est la muestra o inculo. Soltar suavemente el pistn para que
el lquido ascienda, retirar la micropipeta, y tapar el tubo acercando al dedo que sostiene el tapn.
Llevar la muestra a otro tubo con medio de cultivo, para lo cual, se destapa el tubo con la mano
izquierda y se introduce el tip; con el pulgar de la derecha se baja el pistn suavemente hasta el
2do. tope para descargar la muestra. Soltar el pistn suavemente y tapar tubo.
ACTIVIDADES A REALIZAR
1. Encender un mechero sin limpiar previamente la mesada con desinfectante.
2. Proveerse con un frasco de descarte conteniendo lavandina al 10%.
3. Pasar un hisopo sobre la mesada y sembrar una placa de agar nutritivo.
4. Descontaminar rea de trabajo utilizando algodn embebido en alcohol iodado o alcohol al
70%.
5. Pasar nuevamente un hisopo sobre la mesada y sembrar otra placa de agar nutritivo.
6. Sembrar desde las siguientes muestras, 3 placas de Petri con 15 ml de agar nutritivo derecho
cada una.
aire del medio ambiente, en:
placa de Petri (siembra espontnea): se deja abierta durante el TP.
manos
tierra de jardn, en:
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agar nutritivo inclinado con ansa en anillo,

agar en placa de Petri, dividida en cuadrantes en la base, con ansa en anillo. Realizar
aislamiento.
fauces, en:
agar sangre, con hisopo en 1er. cuadrante, descartar hisopo en contenedor con
lavandina, y continuar con ansa en anillo hasta 4to.cuadrante. Incubar en microaerofilia.
6. Incubar todos los medios de cultivo en estufa a 37C durante 24 h.
7. Al concluir el trabajo, repetir descontaminacin de mesada y de manos.
8. Clasificar residuos
para desechar (recipiente negro: papel, recipiente rojo: algodn
contaminado, guantes descartables).

BIBLIOGRAFA
-
Madigan, Martincko. 2009. Brock, Biologa de los microorganismos. 10. Edicin. Pearson-Prentice Hall.
www.google.com (imgenes)
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PARTE C: OBTENCIN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS CLNICAS DESTINADAS AL ANLISIS

MICROBIOLGICO.
INTRODUCCIN:
La actividad que desarrolla el laboratorio de microbiologa est orientada esencialmente al
diagnstico microbiolgico de las enfermedades infecciosas. Una parte importante de esa actividad
consiste en el aislamiento, la identificacin y la determinacin de la sensibilidad a los antimicrobianos
de los microorganismos causales de estas enfermedades. Otra parte importante de la actividad de un
laboratorio de microbiologa consiste en la deteccin de anticuerpos, antgenos y cidos nucleicos en
diversas muestras (sangre, lquidos estriles, orina, etc.).
El organismo est constituido por reas colonizables por diferentes tipos de microorganismos que
constituyen la flora normal, y por reas normalmente estriles. Dentro de las primeras encontramos:
cavidad oral, piel, mucosas, uretra, vagina e intestino. Los sitios normalmente estriles son: sangre,
vejiga, lquido cefalorraqudeo y lquidos de puncin (pleural).
Toma de muestra
La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso que se pretende diagnosticar.
Es necesario que la toma se efecte en el sitio exacto de la lesin y lo ms pronto posible.
La recogida de la muestra deber realizarse en condiciones de mxima asepsia, evitando

contaminaciones ambientales del personal y del propio enfermo a la muestra y viceversa.
Se debe recoger una cantidad de muestra adecuada para un anlisis completo. En ocasiones
una escasa cantidad de muestra puede ser la causa de falsos negativos.
La muestra se debe recoger, siempre que sea posible, antes de iniciar cualquier terapia
antimicrobiana. Cuando esto no es posible, se obtendrn justo antes de la administracin de la
dosis del antimicrobiano, o tras 48 horas de la retirada del mismo.
La muestra debe transportarse en envases adecuados, con cierres a prueba de fugas.
El envo al laboratorio de microbiologa debe ser lo ms rpido posible con objeto de asegurar
la supervivencia de microorganismos de difcil crecimiento y de evitar el sobrecrecimiento de
la flora normal.
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MUESTRAS
Como reglas generales cabe indicar las siguientes:
1. Antes de recoger la muestra, considerar el riesgo/beneficio de la recogida de la muestra para el
paciente.
2. La muestra debe transportarse en envases adecuados con cierres a prueba de fugas. La recogida
de la muestra deber realizarse en condiciones de mxima asepsia, evitando contaminaciones
ambientales del personal y del propio enfermo a la muestra y viceversa.
3. La muestra debe etiquetarse con el nombre del paciente, el servicio solicitante, el tipo de
muestra y la fecha de recogida. En determinados casos ser importante precisar la hora de
recogida.
4. Se recomienda que cada muestra se introduzca en una bolsa de plstico que a su vez se
introducir en otra donde se incluya el volante. As se evita que los posibles derrames de la
muestra invaliden el volante de peticin.
5. Se debe recoger una cantidad de muestra adecuada a la peticin. En ocasiones una escasa
cantidad de muestra puede ser la causa de falsos negativos.
6. El material destinado a cultivo no debe estar en contacto con sustancias desinfectantes o
anestsicas, siempre que sea posible.
7. La muestra se debe recoger, siempre que sea posible, antes de iniciar cualquier terapia
antimicrobiana.
8. Se debe evitar, siempre que sea posible, el contacto de la muestra con microbiota normal del
paciente, con el objeto de asegurar que la muestra refleje lo mejor posible el lugar de la infeccin.
9. El envo al laboratorio de microbiologa debe ser lo ms rpido posible con objeto de asegurar la
supervivencia de microorganismos de difcil crecimiento y de evitar el sobrecrecimiento de la
microbiota normal, acortar el tiempo de contacto con anestsicos locales o con otras sustancias
con accin antimicrobiana utilizadas en la recogida de la muestra.
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HEMOCULTIVO
Obtencin de la muestra
Retirar los tapones externos de las botellas.
Desinfectar los tapones de goma con la solucin yodada, dejndolos secar al menos un
minuto.
Localizar por palpacin la vena que se va a puncionar. Debe utilizarse una vena distinta para
cada extraccin.
Desinfectar con alcohol una zona de piel de unos 5 cm de dimetro. Se comenzar por el
centro y se irn haciendo crculos concntricos hacia el exterior.
Repetir el paso anterior pero con la solucin yodada, dejndola secar durante un minuto.
Extraer la sangre sin tocar en ningn momento el campo desinfectado. Si fuera necesario
palpar nuevamente la vena se utilizarn guantes de goma estriles.
Introducir la sangre en las botellas, en primer lugar la anaerobia, evitando que entre aire en
la botella, con la jeringa en posicin vertical. Mover las botellas para que la sangre y el medio
de cultivo se mezclen.
Rotular cada botella con el nombre del enfermo, da, hora de la toma y nmero de muestra
enviada (1 2). No tapar el cdigo de barras de la botella.
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Volumen de la muestra
En adultos, introducir en cada botella no menos de 10 ml de sangre ni ms de 20 ml.
En caso de neonatos y nios pequeos, es suficiente una cantidad de 01 a 5 ml, por cultivo.
Relacin sangre caldo de cultivo: 1/5 a 1/10.
Nmero de muestras
Dos extracciones (dos botellas de hemocultivos por extraccin: aerobia y anaerobia) por
paciente, previas al tratamiento antimicrobiano, utilizando lugares de venopuncin diferentes.
Cuando comienzan los escalofros y est subiendo la fiebre, antes del pico febril.
El intervalo entre las extracciones debe ser de 15 minutos, pero si la fiebre es continua, este
intervalo puede acortarse hasta 5 minutos.
ORINA
Muestras aceptadas:
Chorro medio
Al acecho
Puncin proximal de sonda
Puncin suprapbica
Muestras rechazadas:
Bolsa colectora
Punta de sonda vesical
Chorro medio:
Adultos ambulatorios hospitalizados sin sonda y nios que controlan esfnteres
Instrucciones a seguir:
1. En caso de ser mujer colocarse tampn vaginal
2. Higienizarse con jabn nuevo no antisptico ni desinfectante
3. Enjuagarse con agua recin hervida y enfriada
4. No secarse
5. Eliminar el primer chorro de orina para arrastrar la flora uretral
6. Recolectar el chorro medio en frasco estril de boca ancha y tapa a rosca
7. Una vez obtenida la muestra si no se procesa inmediatamente debe ser conservada en la
heladera no ms de 4 hs
8. El paciente debe tener un tiempo de retencin mnima de 3 hs
Se deben conocer datos del paciente tales como:
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Edad
Sexo
Enfermedad de base
Uso previo de antibiticos
Instrumentacin urolgica y/o ciruga previa
Antecedentes de infeccin urinaria
Al acecho: poblacin peditrica que no controla esfnteres.
Higienizar al nio como se describi anteriormente y recoger la muestra en frasco estril de boca
ancha y tapa a rosca
Puncin proximal de sonda: pacientes sondados se debe punzar a 10 cm. de la unin sondameato urinario con jeringa estril y previa limpieza de la sonda con iodo povidona. Recordar el
clampeo (compresin) de la misma durante 1 a 3 hs.
Puncin suprapbica
COPROCULTIVO
Obtencin de la muestra
Nios menores de un ao:
HISOPADO RECTAL: Se introduce el hisopo estril en el ano y se rota presionando la ampolla
rectal para favorecer la excrecin fecal. El mismo se coloca en un medio de transporte para su
posterior procesamiento.
Muestras rechazadas: paales.
Nios mayores de un ao y adultos: Se recolecta la muestra recin emitida en un recipiente estril de
boca ancha.
LQUIDO CEFALORRAQUDEO
El lquido cefalorraqudeo (LCR) rodea completamente al encfalo y mdula espinal. El mismo se
recoge insertando ascpticamente una aguja a nive3l de las vrtebras lumbares. La muestra obtenida
se coloca en 3 o 4 tubos estriles y se rotula con el nombre del paciente.
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ESPUTO
La muestra se obtiene por expectoracin espontnea o inducida con vapores de cloruro de sodio. El
paciente debe efectuar un cepillado de dientes y gargarismos con solucin de bicarbonato de sodio,
para disminuir la contaminacin con flora normal de la boca. Son de eleccin los primeros esputos de
la maana, los cuales deben recogerse en un frasco estril.
LAVADO BRONQUIAL
Se realiza con el broncoscopio y su principal utilidad reside en la bsqueda de microbacterias
responsables de la tuberculosis.
EXUDADO DE FAUCES
Se debe ejercer presin con un baja lenguas e hisopar enrgicamente la zona afectada (placas
purulentas, ulceraciones, zonas de enrojecimiento) evitando tocar con el hisopo la lengua, paredes de
la boca y saliva que contienen flora habitual de la boca. Introducir luego el hisopo en un medio de
transporte y remitirlo al laboratorio dentro de las 10 hs. de realizado.
EXUDADO URETRAL
Uretritis aguda: Debe haber una retencin urinaria de aproximadamente 3 hs. Se toma el material con
ansa o hisopo estril que se introduce unos 2 cm dentro de la uretra y se hacer girar suavemente.
Uretritis crnica: Si no hay exudacin, se recoge la orina de forma estril sin eliminar el primer chorro
de la miccin. Si hay exudacin, se recolecta el material antes de la primera miccin.
EXUDADO VAGINAL
No practicar higiene vaginal durante 12 hs. o ms antes del examen. Siempre que sea posible es
conveniente colocar el espculo. Se toma la muestra a partir del fondo del saco vaginal y cuello de
tero con hisopo estril.
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OBSERVACIN IMPORTANTE
Todas las muestras obtenidas para diagnstico microbiolgico debern remitirse en forma inmediata al
laboratorio para su procesamiento.
Universalidad de microorganismos: Los microorganismos estn ampliamente distribuidos en la
naturaleza, pues se hallan en casi todas partes. Los encontramos en charcos, arroyos, aguas de mar,
residuos cloacales, en el suelo, aire, alimentos, materia orgnica en descomposicin, en la superficie y
cavidades de nuestro cuerpo, etc. Esto refleja la diversidad de hbitats dentro de los cuales los
microorganismos pueden desarrollarse y evolucionar afectando de varios modos los ambientes en
que viven, algunos de ellos causando enfermedades y otros desempeando papeles beneficiosos.
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Medios de cultivo Obtencin y preparacin de muestras

energticos, nutricionales y ambientales de los principales grupos de microorganismos.

materiales y medios de cultivo que se utilizan ms

frecuentemente en el Laboratorio de Microbiologa durante

un MEDIO DE CULTIVO es una preparacin nutritiva, natural o

3. Agar sulfuro-indol-movilidad (SIM)

24-48 h. Observar la hemlisis.

Ajuste de pH para medios preparados en el laboratorio

PARTE B: SIEMBRAS Y REPIQUES

Comunes (de 1, 2, 5, 10 y 25 ml)

Esptula de Drigalski y palo de hockey

de diferentes volmenes: 2, 10, 20, 100, 200 y 1000 l

Petri, botellas de Roux, etc.)

agar blando, 0.2-0.3% de solidificante

Placa vertida inculo ms agar fundido y enfriado a 45-50C

En medio semislido (agar derecho)

con ansa recta (preferentemente)

Elementos de siembra: un ansa recta y un ansa en anillo, hisopos estriles.

Frascos de descarte con lavandina al 10%

Alcohol 70% y algodn. Repasador.

Elementos de proteccin personal: guaradapolvo, guantes, barbijo.

Algunos elementos de siembra utilizados en Microbiologa

Micropipeta con tip estril

Tcnica asptica para siembras y repiques

1. Siembras en agar semislido o blando por puncin o picadura:

2. Siembras sobre medios inclinados (en pico de flauta)

3. Siembra en placa de Petri

2. Sembrar por orden en cada cuadrante en zigzag.

agar nutritivo inclinado con ansa en anillo,

para desechar (recipiente negro: papel, recipiente rojo: algodn

contaminado, guantes descartables).

PARTE C: OBTENCIN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS CLNICAS DESTINADAS AL ANLISIS

Es necesario que la toma se efecte en el sitio exacto de la lesin y lo ms pronto posible.

La recogida de la muestra deber realizarse en condiciones de mxima asepsia, evitando

La muestra debe transportarse en envases adecuados, con cierres a prueba de fugas.

Adultos ambulatorios hospitalizados sin sonda y nios que controlan esfnteres

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