CONTROL BACTERIANO POR MEDIO DE AGENTES

FSICOS Y QUMICOS
OBJETIVO: Observar el efecto de algunos agentes fsicos y qumicos
utilizados como germicidas para el control de los microorganismos.
GENERALIDADES
Muchas prcticas de la vida cotidiana como la potabilizacin del agua, la
pasteurizacin de la leche o la refrigeracin de los alimentos, tienen por
objeto controlar a las poblaciones microbianas. Este cntrol tiene varias
razones como prevenir la transmisin de enfermedades, evitar la
contaminacin de algunos productos y evitar la contaminacin
(alimentaria, ambiental, etc.)
Una variedad de agentes fsicos y qumicos son tiles para provocar la
muerte bacteriana o para prevenir su multiplicacin. Entre estos
encontramos las radiaciones ultravioleta, la temperatura, los agentes
desinfectantes y otros.
RADIACIN ULTRAVIOLETA
La mayora de los microorganismos mueren bajo grandes dosis de
radiacin electromagntica, especialmente en la zona ultravioleta (UV),
ondas ultrasnicas de muy alta frecuencia y con pequeas dosis de
radiacin ionizante, como los rayos gamma y rayos catdicos. La muerte
se presenta por los daos causados al DNA y la variacin en la
resistencia, normalmente reflejada en las diferentes facultades de las
clulas para reparar el DNA daado por la radiacin.
TEMPERATURA
Muchas clulas son sensibles al calor hmedo, despus de la exposicin
por algunos minutos a una temperatura ms elevada que su mxima de
crecimiento. La proporcin de clulas muertas depende del tiempo de
exposicin y la temperatura.
El
calor
mata
causando
la
desnaturalizacin
de
las
macromolculas como las protenas, la muerte bacteriana es
proporcional al grado de coagulacin provocado por el calor hmedo.
La destruccin efectiva por temperaturas bajas rara vez ocurre. La
causa del dao celular durante el congelamiento no es muy conocida,
pero se sabe que la concentracin de solutos durante el congelamiento
rompe las membranas y causa la lisis durante el deshielo.
DESINFECTANTES
Los desinfectantes son generalmente agentes qumicos que matan a las
bacterias y otros microorganismos. Dentro de estos tenemos:
1. cidos y lcalis> Tanto los cidos y lcalis son muy bactericidas dado
su grado de disociacin. Entre estos se puede mencionar KOH, NaOH,
HNO3 y H2SO4.

2. Agentes oxidantes. Entre stos tenemos el cloro, el perxido de

hidrgeno, perborato de Sodio, Permanganato de Potasio y Cloruro de
Calcio. Los cuales actan oxidando las molculas esenciales de la clula.
3. Compuestos orgnicos. Como los derivados del alquitrn de hulla, el
cresol, tricresol, alcanfor, creosota, cido fnico y el fenol que es el de
uso ms comn. Actan precipitando las protenas. Esta accin guarda
relacin con la destruccin de la estructura de la membrana y sus
funciones.
4. Detergentes. stos se dividen en tres grupos
a) compuestos aninicos como las sales sdicas y potsicas de cidos
grasos de peso molecular elevado sulfatos de alquilo y los jabones.
b) compuestos catinicos como los compuestos de amonio cuaternario y
el cloruro de benzalconio.
c) compuestos no inicos que incluyen polisteres y steres de
poliglicerol.
Los jabones no pueden considerarse antispticos o desinfectantes
efectivos puesto que solo son agentes que eliminan las bacterias
mecnicamente de la piel por emulsin de secreciones lipoides en las
cuales estn incluidos los microorganismos.
Los otros grupos de desinfectantes se consideran bactericidas
porque destruyen la integridad de la membrana por alteracin de la
interaccin entre las protenas y lpidos. Los detergentes catinicos son
los ms eficaces debido a la interaccin de la molcula del detergente
( carga positiva) con la superficie de la membrana bacteriana (carga
neta negativa)
ACCIN OLIGODINMICA
Accin oligodinmica es la propiedad antibacteriana que presentan
ciertos metales pesados en cantidades de partes por milln (ppm), lo
cual se debe a la formacin de sales pobremente disociables con los
grupos sulfhidrilos de las protenas.
EFECTO DE LA TEMPERATURA
El efecto de la temperatura en la eliminacin de bacterias se ilustrar
con un ejercicio en el cual se calentarn los tubos con una suspensin de
la bacteria a estudiar por diferentes tiempos, evaluando despus el
efecto por conteo de clulas vivas.
MATERIAL Y EQUIPO
Asa bacteriolgica
2 mecheros Bunsen
1 vaso de precipitado de 250 ml
Tela de asbesto
15 tubos de 13 x 100 con tapn de rosca, estriles
3 tubos de con10 ml solucin salina estril

3 pipetas de 5 ml estriles
1 asa calibrada de 0.001 ml
15 placas de agar de soya y tripticasena
Cepas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli ( 24 hrs incubacin),
Bacillis subtilis (48 hrs de incubacin).
TCNICA
1. Prepare una suspensin ligera de cada bacteria ( con la misma
turbidez todas).
2. Deposite 1 ml de cada suspensin en 5 tubos para cada bacteria,
los cuales irn marcados con el tiempo de calentamiento ( sin
calentamiento, 5, 10, 15 y 20 minutos respectivamente).
3. Caliente los tubos en un bao de agua de ebullicin constante por
los tiempos indicados 5, 10, 15 y 20 minutos y deje un tubo de
cada bacteria sin calentar.
4. Despus del calentamiento siembre con el asa calibrada una
asada de cada suspensin en las cajas marcadas para cada
bacteria con el tiempo de exposicin (5 cajas para cada bacteria).
5. Incube por 24 horas y cuente cuantas colonias crecen en cada
placa para poder estimar el efecto del tiempo de exposicin en
cada caso.
PRESENTACIN DE RESULTADOS
1. Elabore una curva con el nmero de bacterias por ml (y) vs el
tiempo de exposicin (x).
2. Concluya cual es el tiempo mnimo de exposicin para eliminar al
50% de cada una de las bacterias estudiadas.

ACCIN DE LOS METALES, CLORO, LCALIS Y CIDOS

Para demostrar el efecto de los metales sobre los microorganismos se
utilizarn soluciones de los compuestos en cuestin que se aplicaran
sobre el medio para que se difundan. Midiendo posteriormente el halo
de inhibicin producido por cada una.
MATERIAL Y EQUIPO
asa bacteriolgica
Mechero Bunsen
2 cajas de Petri estriles
2 tubos con 20 ml de agar nutritivo fundido
Cepas de Sarcina lutea, Pseudomonas aeruginosa
cajas Petri con discos de papel filtro impregnados con las sig. soluciones:
- Solucin de Cloruro de Plata 0.4%
- Cloruro mercrico 0.4%

Acido sulfurico 10%

Hidrxido de Sodio al 10%
Cloro 6%
Fenol al 5%
Benzal

Pinzas para sensidiscos

TCNICA
1. Inocular con cada cepa un tubo de agar nutritivo fundido y enfriado
alrededor de 45 por separado.
2. Verter en una caja Petri estril y dejar solidificar sobre una superficie
nivelada.
3. Colocar un disco impregnado con cada solucin en forma equidistante
sobre las placas.
4. Dejar reposar 5 minutos para que se absorban las soluciones.
5. Incubar a 35 C por 24 hrs y observar la formacin de halos de
inhibicin de crecimiento.
PRESENTACION DE RESULTADOS
1. Mide los halos de inhibicin de crecimiento.
2. Menciona qu solucin es ms eficaz.