04/10/2012

ESTADOS DE CONDENSACIN DE LA
CROMATINA EN NCLEO INTERFSICO

CROMATINA Y
CROMOSOMAS
Norbel Galanti
Octubre 2012
Bioqumica

CROMATINA EN MITOSIS: CROMOSOMAS

CROMATINA EN EL CICLO
CELULAR

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DIFERENTES TIPOS DE
CONDENSACIN DE LA CROMATINA

En mitosis

En interfase

En apoptosis

Ruptura de ncleo por baja fuerza

inica

CONDENSACIN DE LA
CROMATINA
DNA de humanos tiene aproximadamente 3
mil millones de bases que codifican por
aprox. 30000 genes empacados en ncleos
de aprox. 5 um, que deben estar accesibles a
factores nucleares
Empaquetamiento de DNA implica regulacin
de transcripcin
Replicacin, cohesin de cromtidas,
recombinacin, transcripcin y condensacin
requieren cromatina como sustrato

CROMOSOMA EXPANDIDO

Cromatina expandida
Baja fuerza inica
Bajar fuerza inica

Cromatina en ncleo

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CROMATINA: ESTRUCTURA BSICAM.E.

30 nm

11 nm

Nucleosoma: Unidad estructural de la cromatina

CROMATINA: COLLAR DE PERLAS

1a. Ncleo en transcripcin: hgado de pollo,
clulas en cultivo en crecimiento, otros.
1b. Ncleo en ausencia de transcripcin:
eritrocito de pollo, clula nerviosa, otras.
2. Incubar en solucin salina de baja fuerza
inica
3. Cromatina se observa cono cuentas de
un collar en todas las preparaciones

COMPOSICIN QUMICA DE
LA CROMATINA

DESENSAMBLAJE-ENSAMBLAJE
DE LOS NUCLEOSOMAS

Se aisla cromatina, se analiza y se

encuentra:
- DNA
- Histonas (H2A, H2B, H3, H4 y H1)
- Protenas no histonas (cientos, miles?)
- RNA (rRNA, mRNA, tRNA, snRNA,
snoRNAs, miRNAs, etc)

Quitar histonas de la cromatina (alta conc.

salina) Cuentas en collar desaparecen
(MET)
Bajar conc. salina. Cuentas en
collar reaparecen.
DNA de virus ms histonas se organizan
en cuentas en collar (adenovirus, SV40,
otras)
No existen secuencias especficas en el
DNA para la organizacin de nucleosomas

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COMPOSICIN QUMICA DE
LA CROMATINA
Origen DNA Histonas No Hist.
Arveja(R) 1.0
1.03
0.29
Rata(H)
1.0
1.0
0.67
Rata(Tum) 1.0
1.16
1.0
Timo(Ter) 1.0
1.14
0.33
Erizo mar 1.0
1.04
0.48

RNA
0.26
0.04
0.13
0.007
0.039

PROPORCIN DE HISTONAS EN
CROMATINA RELATIVA A H4
Origen

H4

H1

H2A

H2B

Pollo
Ratn
Rata

1.0 0.45 0.94 0.98 1.01

1.0 0.5 0.93 0.99 1.08
1.0 0.5 0.98 1.02 1.00

PROPIEDADES DE LAS HISTONAS

Histona Masa Na.a
Da

H1
H2A
H2B
H3
H4

22500
13960
13774
15273
11236

%
Lys-Arg

224
129
125
135
102

29.5-1.3
10.9-9.3
16.0-6.4
9.6-13.3
10.8-13.7

Carga
positiva

+58
+15
+19
+20
+16

CROMATINA ANLISIS DE SU
ESTRUCTURA BSICA

H3

Todas la especies estudiadas presentan

la misma proporcin entre las diferentes
histonas

1.

Cromatina + DNAasa (Conc., t, tiempo) Nucleosoma (Unidad)

2.

Cromatina + nucleasa micrococal (Conc.,t, tiempo)Uno, dos, tres

cuatro nucleosomas)

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LONGITUD DE DNA EN PB
ASOCIADO A HISTONAS

NUCLEOSOMA: DNA E HISTONAS

Gel agarosa
800 pb
600 pb
400 pb
200 pb

Centrifugacin en
gradiente

Microscopa electrnica

Tetrmeros

Trmeros

Dmeros

Monmeros

ASOCIACIN DE HISTONAS
ENTRE SI

TETRMERO DE HISTONAS + DNA

Tratamiento de nucleosomas con reactivos bifuncionales de diferente longitud entre las funciones que reaccionan con histonas

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EXTRACCIN DE CROMATINA CON

CONCENTRACIONES CRECIENTES DE SALES

HEXMERO Y OCTMERO + DNA

0.5 M NaCl extrae histona H1

1.0 M NaCl extrae dmeros H2A-H2B
1.8 M NaCl extrae histonas H3 y H4

ESTABILIDAD DEL OCTMERO

En soluciones de conc moderada de sales
y en ausencia de DNA, las histonas H3-H4
forman un tetrmero mientras que H2AH2B permanecen como un dmero
En soluciones que contienen ms de 1 M
NaCl o en presencia de DNA, el tetrmero
H3-H4 y dos dmeros H2A-H2B forman un
octmero de histonas

OCTMERO DE HISTONAS
RESOLUCIN 3.1 A.

Tetrmero
Dmero

Dmero

Arents et. al., PNAS 88, pp 10148, 1991

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OCTMERO DE HISTONAS
RESOLUCIN 3.1 A.

Arents et. al., PNAS 88, pp 10148, 1991

CRISTAL DEL OCTMERO A 3.1A

OCTMERO DE HISTONAS
RESOLUCIN 3.1 A.

Arents et. al., PNAS 88, pp 10148, 1991

HISTONE FOLD

Tres lbulos
Tetrmero H3-H4 en el medio
Dmeros H2A-H2B a ambos lados
DNA en forma de herradura
DNA con recorrido hacia la izquierda
Estructura de histonas

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HISTONE FOLD EN LAS

CUATRO HISTONAS

TETRMERO DE HISTONAS

DMERO DE HISTONAS

NUCLEOSOMA 2.8 A

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NUCLEOSOMA 2.8A

Nucleosoma 2.8A

Surco menor

Nucleosoma 2.8A

Histonas en el nucleosoma
En el nucleosoma existe un eje de simetra
organizado a lo largo de la interfase entre las
H3 en el tetrmero 2H3-2H4.
Donde el DNA entra y sale del nucleosoma, hay
contactos con los dominios N-terminal de H3.
Adems de la heterodimerizacin con H4, H3
tambin forma contactos directos con H2A. Los
dmeros H2A-H2B se posicionan de tal manera
que las H2A interactan entre s.
H4 interacta con H3 pero tambin con H2B.

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NUCLEOSOMA 2.8 A

Histonas en el nucleosoma
Adems de las interacciones entre las histone folds
de las histonas en el octmero, los dominios (colas)
N- y C- terminales se proyectan del nucleosoma.
Estas colas son solo parcialmente visibles en los
cristales; no muestran estructuras secundarias.
Las colas de H3 y H2B se proyectan de las vueltas
del DNA a travs de canales en los surcos menores
del DNA.
Estas colas constituyen superficies ideales para
modificaciones covalentes de las histonas.

NUCLEOSOMA 2.8A

Interacciones histone fold/DNA

En general, se observa 5 rasgos
predominantes en la interaccin histonefold/DNA cada vez que el fosfodiester
enfrenta el octmero: 1) Los N-terminales
de las hlices alfa1 de H3, H4 y H2B, as
como las hlices alfa 2 de las 4 histonas,
fijan la posicin de un grupo fosfato
individual a cargas positivas de los
aminocidos que enfrenta;

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Estructura del nucleosoma

Interacciones histone fold/DNA

2)tomos de N de funciones amido de
cadenas principales de aminocidos
forman puentes de H con fosfatos cerca
de, o en los lazos, de las hlices alfa1 y
alfa2; 3)Una cadena lateral de arginina de
un histone-fold entra el surco menor del
DNA 10 de las 14 veces que ste enfrenta
al octmero,

Lisinas y argininas
en azul. Contactos
polares con el DNA

CIZHONG JIANG AND B. FRANKLIN PUGH NATURE REVIEWS | GENETICS VOLUME 10 | MARCH 2009

Nucleosoma 2.8A

NUCLEOSOMA 2.8 A

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Interacciones histone fold/DNA

DNA EN NUCLEOSOMA A 2.8A

4) Se establecen extensos contactos no

polares con los grupos deoxiribosa, y
5) Se establecen frecuentes puentes de H
o interacciones salinas entre el oxgeno de
los grupos fosfato del DNA y las cadenas
laterales bsicas o con hidroxilos, de las
histonas

HISTONA H1

NUCLEOSOMA

Estructura
Posicin en el nucleosoma
Participacin en condensacin de
cromatina

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NUCLEOSOMA-CROMATOSOMANCLEO NUCLEOSOMAL

NUCLEOSOMA

HISTONA H1 Y FIBRA DE 30 nm

FIBRA DE 30 nm

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HISTONA H1. FUNCIONES

Juega un rol en el primero (nucleosomal) y
segundo (fibra de 30 nm) orden de
enrrollamiento del genoma.
Presenta mltiples isoformas,
relacionadas con proliferacin, crecimiento
y diferenciacin celulares, particularmente
durante el desarrollo.
Factor de transcripcin?

Figure 4-72 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

CROMOSOMA M.E.

CROMOSOMAS
Grandes complejos nucleoproteicos
que portan informacin gentica.
Participan en dos etapas crticas de la
divisin celular: Duplicacin de la
informacin
(como
cromatina)
y
segregacin de la informacin (como
cromtidas).

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RASGOS TPICOS DE UN
CROMOSOMA

CROMATINA Y CICLO CELULAR

Tres
etapas
en
los
cambios
estructurales
profundos
de
la
cromatina durante la divisin celular:
a. Cohesin (fase S)
b. Condensacin (Prometafase)
c. Separacin (Metafase-Anafase)

COHESIN Y CONDENSACIN DE
CROMATINA

PROTENAS SMC: ESTRUCTURA

Cohesin y Condensacin de la cromatina

estn mecansticamente asociados con la
recombinacin y reparacin del DNA, as
como con el reparto simtrico de la
informacin gnica y la regulacin global de
la expresin gnica.
Cohesin y Condensacin estn basados en
protenas estructuralmente similares (SMC),
asociadas a otras protenas que le confieren
la propiedad de cohesinas o condensinas.

Dos dominios extendidos en espiral (coiled-coil), cada

uno de 300 400 aminocidos, unidos por una bisagra
de 150 aminocidos.
Terminales NH2 y COO conservados.
Terminal NH2 con motivo de unin a ATP
--COO con motivo de unin a dsDNA, DNA unidos a
andamiaje
(scaffold)
de
cromosomas,
DNA
centromrico
Similares a protenas motoras (kinesinas, miosina)
Forman homodmeros antiparalelos, que se doblan en
motivo bisagra central, como letra V.

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ARQUITECTURA DE PROTENAS SMC

Conserved MW 110- 170 kDa

ACCIONES DINMICAS DE ATPASAS SMC

PROTENAS SMC SON ABC

APTasas

ACCIONES DINMICAS DE ATPASAS SMC

Figure 4-73 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

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CONDENSACION DE CROMOSOMAS

Implica
El complejo condensina
Accin de topoisomerasa II
Modificaciones de histonas
Estructura y topologa del DNA
Dinmica de nucleosomas
Interacciones larga distancias DNAprotenas

COMPLEJO COHESINA

CONDENSACION DE
CROMOSOMAS
Proceso activo y ordenado, que
produce una estructura invariante, el
cromosoma, con una longitud y patrn
de bandas nico.

COMPLEJO COHESINA

Se une a hebras de DNA durante inicio

de S ( o poco antes), en sitios ricos en
AT.
Participa adems en:
Reparacin del DNA
Regulacin expresin gnica
Meiosis

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ACCIONES DINMICAS DE ATPASAS SMC

OTRAS FORMAS DE LA
CROMATINA
Kinetoplstidos: Los Trypanosomtidos.
Histonas del ncleo nucleosomal no
conservadas. Histona H1 de 9 kDa. No
condensan su cromatina durante la divisin
celular.
Dinoflagelados. Cromatina sin histonas,
siempre condensada (cristal)
Arqueas: Heminucleosomas

CROMOSOMA M.E.

BIBLIOGRAFA
1.- Molecular Biology of the Cell, fifth
edition, Alberts et. al.
2.- Cualquier texto moderno de Biologa
Celular

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Estructura del nucleosoma

Lisinas y argininas
en azul. Contactos
polares con el DNA

CIZHONG JIANG AND B. FRANKLIN PUGH NATURE REVIEWS | GENETICS VOLUME 10 | MARCH 2009

Modelos jerrquicos de organizacin

del cromosoma mittico

SAR: scaffold attachment

region. Secuencia de DNA,
rica en AT, sitio de unin
de Topo II. Andamiaje
axial se observa solo en
metafase.

PROTENAS SMC (STRUCTURAL

MAINTENANCE PROTEINS)
Roles de SMC:
a)Condensacin
de
cromatina
a
cromosomas
b)Cohesin de cromtidas hermanas
c) Recombinacin del DNA
d) Reparacin del DNA
e)Compensacin (dosaje) de cromosomas
sexuales en nemtodos
f)Regulacin global de la Expresin
Gnica

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DIFERENTES TIPOS DE
CONDENSACIN CROMOSMICA

Mitosis

Interfase

Apoptosis

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