Resumen: T-046

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E

Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas 2004

Prolina
en miel regional
Montenegro, S. - Avallone, C. - Aztarbe, M. - Osuna, M. - Ambrosini, S.
Facultad de Agroindustrias, UNNE.
Comandante Fernandez 755, (3700), Presidencia Roque Saenz Pea, Chaco, Argentina,
Te/Fax: 03732420137 e-mail:smonte@fai.unne.edu.ar

Antecedentes:
La prolina, el aminocido libre ms importante de la miel, se encuentra en un porcentaje medio del 50-85% con
respecto a los dems aminocidos. Su contenido es un criterio de calidad referido a su maduracin y en algunos casos
permite detectar adulteraciones. Las mieles genuinas deben contener un mnimo de 180 mg prolina/Kg miel; sin
embargo, es necesario considerar que existen grandes variaciones segn el tipo de miel y la zona de produccin.
La prolina ( pirrolidin 5-carboxilo o alfa aminocido) constituye la excepcin del grupo de los 20 aminocidos ya
que es un iminocido por poseer un amino secundario que proviene de la ciclizacin de su amino primario. Este
aminocido no esencial se forma directamente a partir de la cadena pentacarbonada del glutamato. Este componente de
la miel est involucrado en la produccin del colgeno, tambin esta relacionado con la reparacin y mantenimiento de
los msculos y huesos.
El objetivo del presente trabajo fue determinar la concentracin de prolina en mieles regionales a fin de contribuir al
conocimiento de uno de los parmetros que conjuntamente con los dems ndices de calidad (humedad, H.M.F.,
adulteraciones) favorecen la valoracin a nivel nacional e internacional de la miel que se consume y/o exporta.
Materiales y mtodos.
Mtodo A.O.A.C. Norma Iram N 15940-2:1995.
La prolina forma con la ninhidrina una combinacin compleja coloreada. La ninhidrina es un poderoso agente oxidante
que descarboxila y desamina el aminocido liberando amonaco a partir del grupo amino, dixido de carbono, el
correspondiente aldehdo y ninhidrina en forma reducida.
Luego de agregar propanol-2 se determina la absorbancia mxima de la solucin de la muestra y de una solucin tipo
de prolina en base a la cual se calcula el contenido de prolina de la miel. La interferencia de otros aminocidos es
despreciable ( 5 %).
Materiales.
1- Espectrofotmetro.
2- Cubetas de 10 mm.
3- Tubos de ensayo de 20 ml con tapa de rosca o tapn esmerilado.
4- Material de vidrio general.
Reactivos.
1- Acido frmico al 85 %.
2- Monometilter del etilenglicol (CH3OCH2CH2OH) libre de perxidos, almacenado en frascos color mbar,
sobre cinc metlico.
3- Solucin de ninhidrina en monometilter de etilenglicol (CH3OCH2CH2OH) de 3g/100 ml. Esta solucin
debe prepararse en el momento de usarse.
4- Solucin tipo de prolina (0,5 mg/ml). Se pesan, asegurando el 1,0 mg; 0,1g de prolina, previamente
secada en estufa de vaco a 70C 1C y a una presin no mayor que 60 mm de Hg, durante 8 horas y
colocada en un desecador hasta el momento de su uso, se disuelven con agua y se llevan a 200 ml. Se
conserva en el refrigerador a 4C.
5- Diluciones de trabajo para la curva de calibrado: Tomar alcuotas de 5, 7, 10, 14 y 20 ml de la solucin
tipo de prolina y llevar a 100 ml con agua destilada en matraces aforadas. Se tienen as diluciones de: 25
g/ml, 35 g/ml, 50 g/ml, 70 g/ml y 100 g/ml de prolina respectivamente. Estas diluciones se
preparan diariamente.
6- Solucin de propanol-2 : agua (1 + 1).
Procedimiento:
Preparacin de la recta de calibrado.
Colocar en tubos de ensayo, 0,5 ml de cada una de las diluciones de trabajo, recientemente preparadas, y aadir
0,25 ml de cido frmico y 1,0 ml de solucin de ninhidrina. Preparar un blanco tratando de igual manera 0,5 ml de
agua destilada. Tapar los tubos, agitar y mantener 15 minutos en bao de agua a ebullicin. Dejar a temperatura
ambiente durante 5 minutos, aadir 5 ml de isopropanol-agua y agitar fuertemente. Medir la absorbancia a 520 nm,
contra un blanco preparado reemplazando la solucin de prolina por 0,5 ml de agua y procediendo como se explica para
la muestra.

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Preparacin de la muestra de ensayo: Se pesan 5 g de miel en un vaso de precipitacin de 100 ml. y se transfieren
cuantitativamente por medio de un embudo a un matraz aforado de 50 ml con ayuda de agua. Luego se lleva a volumen
con agua, se tapa y se agita.

Determinacin:
Se pipetean 0,5 ml de la solucin de la muestra en cada uno de tres tubos de ensayo, se aaden 0,25 ml de
cido frmico y 1,00 ml de solucin de ninhidrina. Se tapan ajustadamente y se agita bien.
Se colocan 15 minutos en un bao mara hirviente, de modo que el nivel del agua del bao est por encima del
nivel del lquido en los tubos de ensayo.
Se enfran, se retira el tapn y se aaden a cada tubo 5,00 ml de solucin de isopropanol (1 + 1) a intervalos
regulares de tiempo de aproximadamente 1 minuto. Se agitan los tubos y se determina la absorbancia a 520 nm, contra
un blanco (blanco de reactivos) preparado reemplazando la muestra por 0,5 ml de agua y procediendo segn como se
explic para la muestra. Se leen los tubos a los 35 minutos de agregado el isopropanol.
Se corrige el aporte de color de la miel determinando la absorbancia de una solucin que contiene 0,5 ml de
solucin de miel , 1,25 ml de agua y 5,00 ml de isopropanol (1 + 1) (blanco de muestra). Se sustrae del valor de
absorbancia de la muestra obtenido.
Clculo y expresin de los resultados.
Se construye la curva de calibrado graficando absorbancia Vs concentracin de prolina de las diluciones
preparadas. Se determina la ecuacin de la recta y se calcula la concentracin de prolina de la muestra de miel. Luego se
calculan los mg de prolina por Kilogramo de miel.
Curva de calibrado
Absorbancia
0.339
0.46
0.559
0.686
0,934

g Prolina/ml
25
35
50
70
100

Absorbancia

Curva de calibracin de Prolina

1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0

y = 0,0076x + 0,1693
2
R = 0,9934

20

40

60

80

concentracin (ug/ml)

Absorbancia de la muestra: 0,333

Absorbancia del blanco de reactivos: 0,011
Absorbancia del blanco de muestra: 0,24
Absorbancia corregida de la muestra: 0,082
C : 0.076x 0.082 + 0.1693= 11,023 microgramos/ Kg miel

100

120

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Concentracin de prolina en la miel:

Cp =

CxVx1000
1000 xm

C p = Cx10
Siendo:
Cp = el contenido de prolina de la miel, en miligramos por Kilogramo.
C= la masa de prolina calculada por extrapolacin, en g/ml, (11,023g/ml)
V= volumen de muestra ledo (0,5 ml).
m = la masa de la muestra en gramos en el volumen de muestra ledo (0,05 g).
1000= factor de correccin para expresar en Kg.
1000= factor de conversin para expresar en mg.
Discusin de Resultados
En la siguiente tabla se expresan los resultados obtenidos.
Absorvancia blco Abs. muestra Abs. Blco Abs.
muestra
corregida
0,011
0,333
0,24
0,082
0,657
0,18
0,466
0,446
0,23
0,205
0,486
0,27
0,205
0,78
0,22
0,549
0,48
0,39
0,179
0,642
0,27
0,361
0,558
0,23
0,317
0,503
0,18
0,312

Conc.
microgramos
11,023
39,089
5,028
5,028
49,920
11,414
25,386
19,644
18,992

Conc.
gramos
110,23
390,89
50,28
50,28
499,20
114,14
253,86
196,44
189,92

Conclusiones
Se han analizado diez muestras de mieles de la presente cosecha de miel, del corriente ao, a pesar de ser
insuficientes la cantidad de muestras para definir un resultado contundente, nos permite evaluar las variaciones en el
contenido de prolina de las mieles de nuestra zona ( zona apcola provincial N 3 ). Se debe indicar que hasta el
presente no se cuenta con datos de este parmetro dentro de los numerosos trabajos de miel en la zona, como para
comparar la informacin obtenida. Se prevee continuar la investigacin para verificar la trazabilidad de las variaciones
en prolina de las mieles regionales.
Bibliografa
- Qumica de los alimentos. Baudi Jergal Salvador. Pearson Educacin. 3 Edicin.
- La miel.Alimento y medicina natural. janetBord. Edad, 1972.
- La miel. G.Piana, G. Ricciardelli Dalborde, A. Isola. Agroguas Mundi-prensa. 1989.
- Curso de Post grado. Miel: Aspectos bromatolgicos y Control de Calidad. Manual de Tcnicas de anlisis.
Laboratorio de Investigaciones y Servicios de Productos Avcolas. Facultad de Bromatologa. Gualeguaych.
Universidad nacional de Entre Ros.
- Cdigo Alimentario Argentino. 1994.
- Jardinera. 2(1). Ed. Acme, Buenos Aires, Argentina.