2014 - Manual Prático de Biologia Celular

Manual Prtico de Citologia
Apostila de aulas prticas

PROF. DR. ROSEMEIRE BUENO
CEUNSP - Itu
20/01/2014
REGRAS PARA O BOM APROVEITAMENTO NAS AULAS PRTICAS

Prof.a Dr. Rosemeire Bueno
Os laboratrios apresentam certos perigos inerentes, os quais os estudantes devem

reconhecer e tomar os devidos cuidados. Entretanto, eles podem ser tambm um lugar
excelente para aprender, dependendo das prticas e atitudes do estudante. Algumas
regras so importantes:
1. Chegar no horrio das aulas, pois h necessidade que o trabalho seja executado
com calma e pacincia.
2. No incio de cada aula, observar cuidadosamente as instrues a respeito dos
experimentos a serem executados. Em caso de dvida, perguntar ao professor
antes de comear o experimento. A aula prtica ser de pouco valor, a no ser que
o aluno entenda claramente o objetivo e o mtodo do experimento.
3. O aluno responsvel pelo material que usar durante as aulas prticas, devendo
zelar pela boa manuteno dos materiais e equipamentos. O aluno que danificar o
material permanente ou de consumo, mesmo casualmente, dever indenizar a
Instituio, a critrio do professor.
4. No esquecer que o avental ou guarda-p indispensvel. A falta deste
impossibilitar o aluno de participar da aula, e consequentemente no ter
frequncia na aula.
5. Notificar qualquer acidente, mal estar ou ferimento o mais breve possvel, no
importa o quo trivial possa parecer.
6. Nunca comer ou beber (refrigerantes, cafs, etc.) ou fumar no laboratrio.
7. Manter o laboratrio limpo.
8. No jogue lixo nas pias.
9. No sentar nas bancadas do laboratrio. Os cidos no tm cor distinta.
10. Durante as aulas, o dilogo deve ser em voz baixa.
11. No riscar ou escrever nas bancadas.
12. Ande, no corra no laboratrio.
13. Escolher bem seus colegas de equipe para evitar discusses e incompreenses
que levem a interveno do professor.
Prof. Dr. Rosemeire Bueno
REGRAS PARA O BOM APROVEITAMENTO NAS AULAS PRTICAS
14. Os relatrios devero ser entregues rigorosamente na data combinada pelo

professor. No haver prorrogao para o prazo de entrega, independente de
imprevistos que possam acontecer (problemas em disquetes, falta de tinta ou
papel para impressora, etc.).
15. Antes e aps a aula prtica, o aluno deve limpar o seu microscpio, de acordo
com as instrues do professor. Ao deixar a sala de aula deve apagar a luz do
microscpio e cobri-lo com a respectiva capa.
16. Somente sair da aula aps ter limpado o local de trabalho e executado com
perfeio a prtica proposta.
17. estritamente proibido retirar qualquer material do laboratrio.
PRTICA 1 - APRESENTAO DO MICROSCPIO PTICO

1. MICROSCPIO PTICO.
OBJETIVOS: Conhecer o microscpio e as funes de cada componente, assim como os
cuidados a serem tomados para a boa manuteno do mesmo.
Recomendaes
O M.O.C. deve ser transportado cuidadosamente com as duas mos, pelo brao e pela base.
Aps o uso, o microscpio deve ser guardado livre de poeira e/ou leo. Sempre com a menor
objetiva e a platina totalmente levantada.
Micromtrico
Partes principais do microscpio ptico binocular.
O microscpio (palavra de origem grega; micros = pequeno; scopein =observar, olhar com
ateno) um aparelho destinado a ampliar a imagem das microestruturas observadas,
utilizando para isso, a luz e um sistema de lentes. Ele composto pelas seguintes partes:
2. PARTES DO MICROSCPIO.
Todo microscpio composto de partes mecnicas e partes pticas, que juntas nos permitem
a observao detalhada de materiais em estudo.
Mecnicas
a)
Base ou p (suporte do microscpio): feito de ligas de metais pesados para dar mais
estabilidade e impedir que o aparelho tombe. usado para o repouso do aparelho na mesa de
trabalho.
b)
Brao ou coluna: Sustenta a parte ptica (lentes) e serve para o transporte do
aparelho. Pea que liga o p parte superior do microscpio.
c)
Platina ou mesa: forma redonda ou retangular, fixa, mvel ou giratria no plano
horizontal. Funciona como uma mesa que serve de apoio para a lmina que contm o
preparado a ser observado. Possui presilhas para melhor fixar a lmina e dotada de um
orifcio que permite a passagem da luz.
d)
Presilhas ou porta-lmina: local onde a lmina com o material a ser observado se
encaixa. A lmina pode ser deslocada em todas as direes, sempre no mesmo plano.
e)
Tubo ou canho: no microscpio monocular, o tubo representa um cilindro metlico,
tendo na parte superior um encaixe para a ocular e na parte inferior um sistema mecnico que
o adapta ao revlver.
f)
Botes macromtrico e micromtrico: possuem comandos prprios localizados
lateralmente, permitindo uma focalizao precisa, afastando ou aproximando o preparado das
objetivas. Com o boto macromtrico obtm-se a focalizao tica grosseira do material
examinado, enquanto o micromtrico permite o ajuste fino (2 milsimos de milmetro), dando
dessa forma nitidez imagem.
g)
Revlver: uma pea giratria na qual esto inseridas 3 ou 4 objetivas, sempre na
ordem de seu aumento progressivo. Para obter aumentos sucessivos (ampliao da imagem)
ou vice-versa, j focalizados macrometricamente, basta girar o cmbio de objetivas ou revlver
em um s sentido, durante as observaes microscpicas.
h)
"Charriot": pea ligada platina, com a funo de movimentar a lmina no plano
horizontal da esquerda para a direita e vice-versa, e de trs para frente e vice-versa.
ticas
a)
Oculares: so encaixadas na extremidade superior do tubo. So compostas de duas
lentes que ampliam a imagem formada pela objetiva e corrigem possveis aberraes pticas.
No tornam mais ntidas as estruturas do objeto a ser estudado. No aconselhvel o uso
simultneo de objetivas e oculares de forte aumento. O campo visual seria pouco ntido nas
estruturas celulares, quase no haveria luminosidade e o campo tico seria mnimo. As
oculares trazem inscries que indicam a sua capacidade de aumento: 15X significa ocular com
poder de aumento de 15 vezes.
b)
Objetivas: so sistemas ticos, construdos com 4, 5, 6 ou mais lentes superpostas.
Ampliam a imagem do material examinado, corrigindo tambm os defeitos cromticos dos
raios luminosos. As objetivas trazem inscries que especificam sua capacidade de aumento:
10X significa objetiva com poder de aumento de 10 vezes (menor aumento); 40X corresponde
a objetiva com poder de aumento de 40 vezes (aumento superior) e 100X a objetiva com
poder de aumento de 100 vezes (leo de imerso). Denomina-se imerso a tcnica pela qual
se coloca um fluido (leo transparente: leo de cedro ou sucedneo sinttico) entre a objetiva
e a lamnula, o que resulta na melhoria do poder de resoluo do microscpio e da qualidade
da imagem; tornando mais claro o campo do microscpio. As objetivas de imerso geralmente

so marcadas, para identificao, com anis coloridos: as de imerso em leo, por exemplo,
possuem anel preto.
Obs.: Aumento: O aumento de um microscpio (valor da ampliao total fornecida por cada
objetiva) calculado pela multiplicao do valor da ocular pelo valor da objetiva. Ex.: valor da
ocular (10) x valor da objetiva (40) = 400 x (aumento total)
c)
Condensador: conjunto de lentes localizado abaixo da platina. Sua funo fornecer
muita luz. Para tal, provido de um sistema de lentes convergentes, que concentram e jogam
o maior nmero de feixes luminosos pela lente frontal da objetiva. O boto do condensador
que permite a movimentao do mesmo. indispensvel quando se empregam grandes
aumentos. So dotados de um diafragma.
d)
Diafragma: controla a quantidade de luz que entra no condensador e atinge a
preparao. Ao usar objetivas de pouco aumento, o diafragma deve ser fechado, para eliminar
os raios laterais. O diafragma aberto na medida em que as ampliaes aumentam. A
intensidade da luz poder ser diminuda por meio de filtros ou reduzindo a tenso eltrica da
fonte de iluminao.
e)
Iluminador: fonte luminosa. A prpria luz diurna poder servir para observaes
menos acuradas. Microscpios modernos trazem uma fonte de iluminao prpria. A luz ao
incidir no objeto dever ser difusa. A difuso da mesma obtida logo na sada da fonte, por
meio de um vidro fosco, ou mesmo ao nvel do condensador.
PARTES DO MICROSCPIO
2
3
4
5
6
13
2
14
7
8
9
10
11
12
1. Identifique, com base nesta figura, cada uma das partes apontadas:
1-__________________________________
2-__________________________________
3-__________________________________
4-__________________________________
5-__________________________________
6-__________________________________
7-__________________________________
8-__________________________________
9-__________________________________
10-_________________________________
11-_________________________________
12-_________________________________
13-_________________________________
14- ________________________________
3. CUIDADOS BSICOS NO USO DO MICROSCPIO
1) O microscpio um instrumento sensvel, que exige cuidados especiais por parte

do microscopista, pois caso contrrio pode-se avari-lo para sempre.
2) Ao transportar o microscpio use as duas mos, uma segurando o brao do
aparelho e a outra o sustentando pela base. Nunca carregue o aparelho, usando
apenas uma das mos. Coloque-o cuidadosamente sobre a mesa e longe da
borda.
3) Se houver alguma lmpada ligada ao aparelho, cuidado com os fios. sempre
aconselhvel manter a mesa do laboratrio livre de tudo o que no seja
absolutamente necessrio.
4) No deixe a lmpada do microscpio acesa quando voc no estiver observando:
habitue-se a deslig-la pois ela tem um tempo de vida curto.
5) No passe os dedos nas lentes para limp-las. O vidro das lentes facilmente
arranhvel (mais que o vidro comum), por isso s devemos usar um papel bem
macio (leno de papel), para limp-las. Voc pode proceder da mesma forma com
as lminas permanentes, retirando impresses digitais e o p que fica sobre elas.
6) As objetivas de imerso devem ser limpas utilizando-se cotonetes ou papel
absorvente, se possvel embebidos em xilol.
7) Evite molhar o microscpio quando estiver trabalhando; se isso ocorrer seque-o
imediatamente com um pano macio.
8) No gire o parafuso micromtrico indefinidamente, pois poder estragar o seu
delicado mecanismo. Use-o somente para ajustar o foco e para as observaes de
profundidade. No force o parafuso macromtrico.
9) No tente desmontar qualquer parte do microscpio. um instrumento caro e todo
cuidado pouco.
10) Quando terminar o trabalho com o aparelho, retire a lmina da platina, coloque a
objetiva de menor aumento e abaixe o canho. Desligar o sistema de iluminao,
recobrir o aparelho com a respectiva capa de proteo, evitando-se o acmulo de
poeira.
4. PROCEDIMENTOS PARA O USO ADEQUADO DO MICROSCPIO

1) Usando o parafuso macromtrico abaixe a platina do microscpio de maneira que
as objetivas no a toquem quando girar o revlver.
2) Gire o revlver de modo que a objetiva do menor aumento fique em linha com a
abertura da platina.
3) Ligue o interruptor localizado na base do microscpio sem fornecer luz
demasiadamente.
4) Coloque a lmina preparada na platina fixando-a com as presilhas.
5) Movimentar o "charriot" de maneira que o material a ser observado fique no centro
da platina, ou seja, sobre o orifcio da platina. Se o microscpio no possuir
"charriot", movimentar a lmina cuidadosamente com os dedos.
6) Iniciar sempre a focalizao pela objetiva de menor aumento. Para isso, utilize o
boto macromtrico.
7) Acertar a iluminao do microscpio de acordo com a objetiva a ser usada.
Lembre-se que quanto maior for a incidncia de luz sobre o material analisado,
melhor ser a sua visualizao.
8) Olhando a lmina diretamente (por fora da ocular) e movendo o parafuso
macromtrico, eleve vagarosamente a platina, at que a objetiva fique a 1 mm de
distncia da lamnula. Esta no deve ser tocada pela objetiva.
9) Olhando agora pela ocular e movendo o parafuso macromtrico, abaixe a platina
vagarosamente, at que o material da lmina se torne visvel e ntido (focalizado).
Ajuste a intensidade de luz, girando o boto da base do microscpio para a direita
ou para a esquerda.
ATENO: no eleve a platina ou abaixe o canho enquanto estiver olhando pela
ocular, porque poder quebrar a lmina e inutilizar a preparao.
10) Aps focalizar, gire lentamente o parafuso micromtrico localizado sob a platina,
para a direita e para a esquerda, a fim de obter a melhor focalizao possvel.
11) Olhando pela ocular, desloque toda a lmina vagarosamente para poder explorar
todo o campo da preparao.
12) Passe para a objetiva de 40X. Nessa situao somente o boto micromtrico
utilizado para ajustar a focalizao. Caso voc no consiga focalizar volte para a
objetiva menor e repita toda a operao. Nunca force a objetiva sobre a lmina,
voc poder quebrar a lmina.
13) Se voc no dispe de leo de imerso no utilize a objetiva de 100X.
14) Evite acidentes e preserve o material didtico. Em caso de dvida, chame o

professor.
5. ATIVIDADE
Responder as seguintes questes:
1. Onde se coloca a lmina com o objeto a ser focalizado no microscpio?
Resposta:_____________________________________________________________
2. Como se reconhece a objetiva de imerso?
Resposta:_____________________________________________________________
_____________________________________________________________________
3. Como se focaliza em imerso?
Resposta:_____________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
4. Qual a finalidade do uso do leo de imerso na focalizao em imerso?
Resposta:_____________________________________________________________
5. Como se calcula o aumento final do objeto aps a focalizao?
Resposta:_____________________________________________________________
6. Qual o aumento final obtido quando se usa uma objetiva de 100x e ocular de
10x?
Resposta:_____________________________________________________________
7. Qual a finalidade do condensador?
Resposta:_____________________________________________________________
8. Qual a finalidade do diafragma?
Resposta:_____________________________________________________________
9. Cite 5 cuidados bsicos que voc deve ter com o microscpio aps o uso.
Resposta:_____________________________________________________________
_____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
10
PRTICA 2 - USO DO MICROSCPIO: Observao das letras A, F e L

1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Introduzir o aluno nas atividades de laboratrio. Conhecer o funcionamento do
microscpio ptico, aprender a manipul-lo, conhecer as unidades de medida
utilizadas em microscopia e relacionar as imagens formadas e os aumentos obtidos
com o seu funcionamento.
3. MATERIAIS:
-
Microscpio.
Lminas e lamnulas.
Papel absorvente ou papel filtro.
Letras recortadas.
Recipiente dom gua de torneira.
Tesoura.
Conta-gotas ou pipeta Pasteur.
Rgua de plstico.
4. PROCEDIMENTO.
Obs.: Os materiais a serem observados so colocados sobre uma lmina de vidro e
cobertos por outra, muito delgada, que a lamnula.
Lminas e lamnulas devem estar bem limpas para serem usadas. Evite toc-las nas
superfcies com os dedos: segure-as pelos bordos usando o polegar e o indicador.
Para limp-las use leno de papel. As lamnulas so muito frgeis e quebram-se
facilmente.
a) Recortar as letras A, F ou L do jornal e/ou revistas (as menores letras possveis) ou
utilizar letras recortadas.
b) Com o auxlio de uma pina e um pincel, colocar a letra no centro de uma lmina
limpa, com a letra voltada para cima, e acrescentar uma gota de gua sobre a
mesma.
c) Colocar uma lamnula sobre a gota da seguinte maneira: encostar uma das bordas
da lamnula sobre a lmina, de maneira que forme um ngulo de 45. Baixar a
lamnula vagarosamente at que a mesma cubra a amostra.
11
d) Remover o excesso de gua, encostando um papel absorvente nas bordas da

lamnula. no elimine toda a gua, o preparado deve ficar sempre submerso. Se
necessrio, bater ligeiramente sobre a lamnula, com o cabo do pincel, para a
remoo de possveis bolhas de ar.
e) Coloque esta lmina sobre a platina do microscpio, de modo a manter a letra na
posio em que lida por voc.
f)
Proceder de acordo com as instrues "Procedimentos para o uso adequado do

microscpio", observar as letras ao microscpio em todos os aumentos (exceto o
de imerso) esquematizar e anotar a posio das letras focalizadas.
g) Colocar uma rgua sobre a platina, focalizar suas divises utilizando todas as
objetivas do microscpio (proceder de modo idntico ao das lminas) e medir o
dimetro do campo em milmetros e em micrometros.
h) Terminado o trabalho, retire a lmina da platina, coloque a objetiva de menor
aumento, desligue o fio da tomada. Verifique se o microscpio no tem respingos
de gua. Enxugue-o se for o caso. Coloque a capa de proteo.
12
PREPARANDO LETRAS PARA SEREM

OBSERVADAS AO MICROSCPIO
Centro de Estudos do Genoma Humano. Diagramao: Regina de Siqueira Bueno
13
5. RESULTADOS E DISCUSSO (incluir as respostas das questes, quando

solicitado).
a)
Compare a posio e o tamanho da imagem da letra quando visualizada pela

ocular e quando vista diretamente por fora (a olho nu). O que voc observa?
b)
Desenhar as letras visualizadas, nos crculos correspondentes as objetivas,

obedecendo a proporo existente entre a objetiva utilizada e o tamanho da letra
observado. O desenho deve se aproximar o mximo do real. No desenhe o que
voc no v.
c)
Nas objetivas de diferentes aumentos, o que voc notou quanto ao tamanho da

imagem e quanto rea do campo de observao (campo visual)? tornou-se
maior ou menor? Justifique. Houve alterao na posio da imagem?
d)
Olhando pela ocular mova lentamente a lmina para a esquerda, para a direita,
para frente e para trs. Descreva o que voc nota.
e)
Esquematize as objetivas, especificando as inscries das lentes do seu

microscpio. Explique o significado destas inscries.
f)
Como se distingue a objetiva utilizada para a imerso em leo das demais

objetivas? Por que se deve utilizar leo de imerso na objetiva de 100X?
g)
Questo: Em um microscpio ptico dotado de lente ocular 10X e de lente

objetiva 15X, um citologista obteve uma imagem de 0,3 mm de dimetro de uma
estrutura circular. Qual o tamanho real, em nm, da estrutura observada?
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
14
DESENHO ESQUEMTICO DAS LETRAS OBSERVADAS AO

MICROSCPIO
Objetiva
Olho nu
4X
Objetiva
Objetiva
10X
40X
15
PRTICA 3 - APRESENTAO DA CLULA ANIMAL

Exame de material vivo: Anlise das clulas da mucosa bucal (clulas epiteliais).
1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Conhecer alguns mtodos de observao das clulas, identificando os efeitos
produzidos por corantes em um mesmo material. Observar um tipo de clula de
origem animal, as clulas epiteliais que revestem a cavidade bucal, diferenciando-a da
clula vegetal e bacteriana.
3. MATERIAIS:
- Microscpio.
- Azul de metileno a 1% ou 0,5% ou lugol.
- Lmina e lamnula.
- Conta-gotas ou pipeta Pasteur.
- Palito de sorvete ou esptula.
- Clulas descamadas da mucosa bucal
- Papel filtro.
O azul de metileno um
composto aromtico
heterocclico solvel em
gua, com a frmula
molecular C16H18CIN3S.
Usado como corante e
indicador, um remdio de
cor azul, em farmcias
comuns.
- gua destilada ou soluo salina.

- Recipiente para o descarte das lminas e lamnulas utilizadas.
4. PROCEDIMENTO.
a) Com o auxlio de um palito de sorvete ou esptula, raspar suavemente a mucosa
bucal da face interna da bochecha para a obteno de clulas da mucosa bucal.
b) Preparao a fresco sem colorao: Colocar o material no centro de uma lmina
limpa com uma gota de gua destilada ou soluo salina.
c) Descarte o objeto que serviu para coletar o material da boca.
d) Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar).
e) Enxugue o excesso de soluo encostando um pedao de papel filtro na borda
externa da lamnula, na linha de contato entre esta e a lmina.
f)
Observar ao microscpio nas lentes objetivas de menor, mdio e maior aumento.

Na objetiva de 4X feche um pouco o diafragma e abaixe o condensador para obter
melhor contraste.
g) Examine, desenhe e anote o que observou.

16
h) Preparao a fresco corada com azul de metileno: Retirar a lmina do

microscpio e substituir a gua ou a soluo salina do mesmo material pelo
corante azul de metileno, utilizando papel filtro.
i)
Sem tirar a lamnula apoie a lmina e coloque uma gota de azul de metileno na
linha de contato entre a lamnula e a lmina.
j)
No lado oposto da lamnula (sem retir-la), encoste um pedao de papel filtro. Este
papel absorver a soluo salina ou gua, permitindo que o corante penetre, por
capilaridade, por baixo da lamnula, pelo outro lado.
k) Observar a lmina novamente ao microscpio.
5.
RESULTADOS
E DISCUSSO. (incluir as respostas das questes, quando
solicitado).
A. Faa um esquema representando o que voc observou, antes e aps a colorao.
B. Questes:
1. As clulas epiteliais apresentam forma e contorno definidos? Qual a disposio
das mesmas?
2. Ao raspar a parte interna da bochecha, que tipo de tecido foi coletado?
3. O azul de metileno, sendo um corante bsico, cora principalmente o ncleo ou o
citoplasma? Por qu?
4. Quais as estruturas bsicas de uma clula animal?
5. O que voc observa no interior das clulas? Com e sem corante.
6. Voc notou parede celular, vacolos e plastos no citoplasma desta clula? Por
qu?
17
OBSERVAO DE CLULAS HUMANAS EM ESFREGAO DE

MUCOSA BUCAL (Mtodo alternativo)
http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wpcontent/uploads/2011/04/Observacao_Celulas_Humanas_web1.pdf
18
DESENHO ESQUEMTICO DAS CLULAS HUMANAS DA

MUCOSA BUCAL
Aumento: 4X
Sem corante
Com corante
Aumento: 10X
Sem corante
Com corante
Aumento: 40X
Sem corante
Com corante
19
PRTICA 4 - APRESENTAO DA CLULA VEGETAL

Exame de material vivo: Anlise das clulas da epiderme da cebola e do tomate.
1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Conhecer alguns mtodos de observao das clulas e observar a estrutura da
clula vegetal, diferenciando-a da clula animal.
3. MATERIAIS:
-
Microscpio.
Azul de metileno 0,1% ou lugol.
Lmina e lamnula.
Lmina de barbear e pina.
Papel filtro.
gua destilada.
Cebola e tomate.
4. PROCEDIMENTO.
4.1. Cebola
a. Cortar uma cebola em quatro e, da parte
interna de uma escama (catfilo) retirar
uma pelcula correspondente a epiderme
da clula vegetal, com o auxlio de uma
pina.
b. Colocar a pelcula sobre uma lmina limpa
com
uma
gota
de
gua
destilada,
distendendo-a muito bem.

c. Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar).
d. Remover o excesso de gua com papel filtro e observar ao microscpio.
e. Preparar outra lmina, corar o material com azul de metileno 0,1% (de forma
idntica a preparao para clula animal) e observar ao microscpio.
20
OBSERVAO DE CLULAS DA EPIDERME DA CEBOLA
http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wpcontent/uploads/2011/04/Observacao_Celulas_Vegetais_web1.pdf
21
DESENHO ESQUEMTICO DAS CLULAS DA EPIDERME DE

CEBOLA
Aumento: 4X
Sem corante
Com corante
Aumento: 10X
Sem corante
Com corante
Aumento: 40X
Sem corante
Com corante
22
23
4.2. Tomate
a. Com o auxlio de uma lmina de barbear, recortar um tringulo com cerca de 1
cm de lado na superfcie de um tomate maduro.
b. Com uma pina, retirar a epiderme do pedao recortado (primeira camada
externa).
c. Colocar a pelcula sobre uma lmina limpa com uma gota de gua destilada,
distendendo-a muito bem.
d. Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar).
e. Remover o excesso de gua com papel filtro e observar ao microscpio.
f.
Preparar outra lmina, corar o material com azul de metileno 0,1% e observar
ao microscpio.
5. RESULTADOS E DISCUSSO. (incluir as respostas das questes, quando

solicitado).
A. Faa um esquema representando o que voc observou, delineando-as
corretamente, antes e aps a colorao.
B. Questes:
1. Em qual das preparaes foi possvel observar as clulas com seus ncleos? Comente.
2. Qual a disposio das clulas da epiderme da cebola?
3. Quais estruturas observadas nestas clulas que no ocorrem nas clulas animais?
4. Faa uma comparao (semelhanas e diferenas) entre a clula da mucosa bucal
(animal) e a da cebola ou tomate (vegetal).
OBSERVAO DE CLULAS DA EPIDERME DO TOMATE
http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wpcontent/uploads/2011/04/Observacao_Celulas_Vegetais_web1.pdf
24
DESENHO ESQUEMTICO DAS CLULAS DA EPIDERME DO

TOMATE
Aumento: 4X
Sem corante
Com corante
Aumento: 10X
Sem corante
Com corante
Aumento: 40X
Sem corante
Com corante
25
PRTICA 5 - APRESENTAO DA CLULA BACTERIANA

Anlise microscpica de bactrias.
1.
INTRODUO.
2.
OBJETIVOS.
Identificar as bactrias e suas diferenas em relao s clulas eucariticas.
Aprender o procedimento para utilizao de leo de imerso.
3.
MATERIAIS:
-
Microscpio.
Azul de metileno 0,1% ou lugol.
Fucsina bsica.
Lmina e lamnula.
Esptula.
Papel filtro.
leo de imerso.
4. PROCEDIMENTO.
a)
Retire um pouco da placa bacteriana dos seus dentes com o auxlio da esptula e
espalhe esse material em uma lmina.
b)
Adicione uma gota de fucsina bsica e cubra com a lamnula.
c)
Observe ao microscpio na objetiva de 1.00X, utilizando o leo de imerso.
d)
Examine, desenhe e anote o que observou.
e)
Repita o procedimento adicionando agora uma gota de azul de metileno. 0,1% (de
forma idntica a preparao para clula animal) e observar ao microscpio.

solicitado).
Faa um esquema representando o que voc observou, delineando-as corretamente,
antes e aps a colorao.
26
DESENHO ESQUEMTICO DAS CLULAS BACTERIANAS
Aumento: 100X
Corante: Fucsina bsica
Corante: Azul de metileno 0,1%.
Questes:
1. O que so bactrias?
2. Por que adicionou azul de metileno?
3. Quais as diferenas entre uma bactria (clula procaritica) e uma clula
animal (eucaritica)?
6.REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.
27
PRTICA 6 MEMBRANA PLASMTICA E SUA PERMEABILIDADE

1. Permeabilidade da membrana plasmtica efeito da acetona.
1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Demonstrar a presena da membrana em clulas vegetais e animais. Verificar a
permeabilidade da membrana celular. Observar o comportamento da membrana
quanto a sua permeabilidade seletiva a diferentes substncias e tratamentos.
3. MATERIAIS:
- Beterraba (Beta vulgaris).
- Solues de acetona: (25%, 50%, 75% e 100%).
- Tubos de ensaio e estante para tubos.
- gua destilada e provetas.
4. PROCEDIMENTO.
a)
Numere os tubos de ensaio e coloque em cada um deles 5 ml da soluo de

acetona, nas seguintes concentraes:
Tubo A: gua destilada (concentrao zero de acetona)
Tubo B: acetona 25%
Tubo C: acetona 50%
Tubo D: acetona 75%
Tubo E: acetona 100%
b)
Cortar cubos de beterraba (1 cm3) e adicionar a cada um dos 5 tubos de ensaio

distintos.
c) Esperar uma hora e anotar os resultados.
28

solicitado).
Descreva o resultado obtido em cada tubo, comparando-os.
Se possvel, registre o resultado com fotografias ou desenhos.
Questes:
1. Explique as diferentes coloraes observadas nos 5 tubos analisados.
2. Como a membrana plasmtica sendo uma membrana semi-permevel tornou-se
permevel?
3. Por que no tubo 5 ocorreu nova alterao de colorao?
4. Que nome se d ao movimento de gua atravs da membrana plasmtica?
5. Qual a diferena entre os fenmenos de difuso e osmose?
29
PRTICA 7 MEMBRANA PLASMTICA

2. Osmose em clulas vegetais - Efeito da diferena de concentrao.
1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Demonstrar a presena da membrana plasmtica em clulas vegetais. Visualizar o
processo de osmose em clulas vegetais e determinar quais os meios isotnicos
hipertnicos e hipotnicos clula vegetal, baseando-se na sua alterao estrutural.
Observar os fenmenos de plasmlise e deplasmlise.
3. MATERIAIS:
-
Lminas e lamnulas.
Lmina de babear e pina.
Solues de NaCl (0,9% e 1,5%).
gua destilada e papel filtro.
Epiderme de cebola (Allium cepa) ou folhas de Tradescantia.
Microscpio.
4. PROCEDIMENTO.
a) Retirar cuidadosamente uma pelcula fina correspondente a epiderme inferior da
folha de Tradescantia ou da cebola, com o auxlio de uma lmina de barbear.
b) Colocar o pelcula sobre uma lmina limpa com uma gota da soluo de NaCl
0,9%, distendendo-a muito bem.
c) Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar) e observar ao
microscpio.
d) Retirar a soluo de NaCl 0,9% utilizando papel filtro e adicionar uma gota de NaCl
1,5%.
e) Observar ao microscpio o fenmeno da plasmlise e o contorno da membrana
plasmtica.
f)
No lado oposto da lamnula, encoste um pedao de papel filtro delicadamente para

tirar a soluo de NaCl 1,5% e adicionar uma gota de gua destilada. Observar ao
microscpio o que acontece com esta clula.
30

solicitado).
Esquematizar e discutir o que acontece com a clula vegetal nas trs condies
distintas, classificando as clulas quanto a sua tonicidade.
Questes
1. Explique por que as saladas temperadas murcham aps determinado tempo.
2. Diferenciar os processos de plasmlise e deplasmlise em clulas vegetais.
3. Certas conservas so feitas com salmoura. Voc capaz de explicar por que
no ocorre ataque dos micro-organismos nesses alimentos?
31
DESENHO ESQUEMTICO DAS CLULAS VEGETAIS SOB

DIFERENTES CONCENTRAES DE SAL (OSMOSE)
Soluo: NaCl 0,9%
Cebola
Tradescantia
Cebola
Tradescantia
Soluo: NaCl 1,5%
Soluo: gua destilada
Cebola
Tradescantia
32

3. Osmose em clulas animais (hemcias)
1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Visualizar o processo de osmose em clulas animais. determinar quais os meios
isotnicos hipertnicos e hipotnicos hemcea, baseando-se na sua alterao
estrutural. Observar o fenmeno da hemlise.
3. MATERIAIS:
- Lanceta descartvel.
- Lminas e lamnulas.
- Solues de NaCl (0,9% e 1,5%).
- gua destilada e papel filtro.
- Microscpio.
- Luvas cirrgicas.
4. PROCEDIMENTO.
a) Retirar cuidadosamente uma gota de sangue do dedo (puno digital) e colocar
sobre uma lmina limpa com uma gota da soluo de NaCl 0,9%.
b) Cobrir com lamnula (ngulo de 45 para no formar bolhas de ar) e observar ao
microscpio.
c) Repetir o experimento utilizando uma gota da soluo de NaCl 1,5% e observar ao
microscpio.
d) Repetir o experimento utilizando uma gota de gua destilada e observar ao
microscpio o fenmeno da hemlise.

solicitado).
Esquematizar e discutir o que acontece com a clula animal nas trs condies
distintas, classificando as clulas quanto a sua tonicidade.
33
DESENHO ESQUEMTICO DAS CLULAS ANIMAIS SOB

DIFERENTES CONCENTRAES DE SAL (OSMOSE)
Soluo: NaCl 0,9%
Soluo: NaCl 1,5%
Soluo: gua destilada
34
Questes:
1. O que hemlise? Onde e como ela ocorreu?
2. Determine as solues hipotnicas, hipertnicas e isotnicas.
3. Diferenciar os processos de osmose vegetal e animal.
35
PRTICA 9 REPRODUO ASSEXUADA - BROTAMENTO EM Saccharomyces cerevisae.
PRTICA 9 REPRODUO ASSEXUADA - BROTAMENTO EM

Saccharomyces cerevisae.
1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Observar as clulas de levedura devido a facilidade de reproduo deste microorganismo em pequeno espao de tempo.
3. MATERIAIS:
-
Microscpio.
Fermento.
conta-gotas.
lmina e lamnula.
Pincel.
placa de Petri.
Bquer.
acar e gua.
guardanapo de papel.
4. PROCEDIMENTO.
a) Dissolver uma pequena poro de fermento em 2 mL de gua. Adicionar 1/4 colher
(caf) de acar. Misturar.
b) Fazer um esfregao do material sobre uma lmina de vidro, cobrir com lamnula e
observar ao microscpio.
c) Desenhe a sua observao.

solicitado).
Esquematizar e relacionar a reproduo assexuada com os processos de diviso
celular.
36
PRTICA 9 REPRODUO ASSEXUADA - BROTAMENTO EM Saccharomyces cerevisae.
DESENHO ESQUEMTICO DA LEVEDURA EM BROTAMENTO
Aumento: 4X
Aumento: 40X
Aumento: 10X
Aumento: 100X
37
PRTICA 10 - MITOSE.
PRTICA 10 - MITOSE.
Observao de mitose em clulas vegetais (tcnica do esmagamento).
1. INTRODUO.
2. OBJETIVOS.
Aprender a tcnica de preparao de lmina para o estudo microscpico da diviso
celular e observar as diferentes fases da mitose em razes de cebola comum (Alium
cepa).
3. MATERIAIS:
- Microscpio.
- Bquer.
- Lminas e lamnulas.
- Estilete, pina e pincel.
- Lamparina ou bico de Bunsen ou vela.
- Papel filtro.
- Tubo de ensaio.
- Cebola (raiz em crescimento).
- Papel mata-borro.
- Placa de Petri ou vidro de relgio.
- Tesoura.
- gua.
- Orcena actica 70% (corante preparado em cido actico) ou soluo a 1,5%
4. PROCEDIMENTO.
a) Raspar levemente com uma faca as razes secas das cebolas novas, eliminandoas sem ferir o bulbo. Colocar somente a parte inferior da cebola em um bquer
contendo gua, mantendo-o em local sombreado. Aproximadamente em uma
semana aparecero diversas razes.
b) Cortar com a tesoura ou estilete as extremidade das razes (3 ou 4 mm) e
imediatamente colocar no tubo de ensaio contendo 0,5 mL a 1,0 mL de orcena
actica 70% ou 2,0 mL de orcena 1,5%.
c) Ferver com cuidado durante 3 ou 4 vezes e transferir o material para uma placa de
Petri ou vidro de relgio.
38
PRTICA 10 - MITOSE.
d) Com uma pina ou pincel, transfira uma ou duas pontas de raiz para uma lmina
limpa. Adicionar 1 a 2 gotas de orcena actica fria sobre as razes e pic-las com
o estilete.
e) Aguardar 5 minutos, colocar a lamnula sobre o material, evitando a formao de
bolhas de ar. Envolver a lamnula com um papel mata-borro e com o polegar,
esmagar levemente o tecido da raiz.
f)
Examinar a preparao ao microscpio e identificar as diferentes fases da mitose

das clulas em diviso: prfase, metfase, anfase e telfase..

solicitado).
a. Esquematizar as fases observadas na objetiva de melhor resoluo e descrever
as principais caractersticas de cada fase.
39
PRTICA 10 - MITOSE.
DESENHO ESQUEMTICO DA MITOSE EM RAIZ DE CEBOLA
Prfase
Metfase
Anfase
Telfase
Intrfase
40

2014 - Manual Prático de Biologia Celular

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- gua destilada ou soluo salina.

Observar ao microscpio nas lentes objetivas de menor, mdio e maior aumento.

g) Examine, desenhe e anote o que observou.

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h) Preparao a fresco corada com azul de metileno: Retirar a lmina do

k) Observar a lmina novamente ao microscpio.

E DISCUSSO. (incluir as respostas das questes, quando

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