NOMBRE Y APELLIDO: Brenda Araceli Acua

DNI: 36.105.274
CATEDRA/CARRERA: Microbiologa General/Licenciatura en Qumica
FECHA DE ENTREGA: 26 de Abril de 2016

N DE ENTREGA: 1

INFORME N 4: MEDIDAS CUANTITATIVAS DE LA POBLACION

BACTERIANA.
INTRODUCCIN:
El recuento de bacterias nos permite establecer el nmero de microorganismos existentes, independientes de
que estn vivos o muertos y de sus caractersticas metablicas. Se pueden llevar a cabo mediante mtodos
biolgicos, en los cuales determinamos la poblacin microbiana viable y cultivable, y lo verificamos por
medio de observaciones de colonias en medios solidos o por el desarrollo bacteriano en medios lquidos.
En medios solidos una colonia puede prevenir de una o ms bacterias por lo tanto los recuentos se expresan
como Unidades Formadoras de Colonias por mililitro o por gramo, dependiendo de donde provenga la
muestra.
METODOS Y MEDIDAS:
1- Recuentos celulares directos (fsicos)
a) Recuento directo en cmaras al microscopio ptico comn
b) Microscopia de Fluorescencia
c) Recuento en contadores electrnicos de partculas.
2- Recuento de Bacterias Viables
a) Recuento de unidades formadoras de colonias
b) Determinacin del nmero ms probable
c) Estimacin del numero por el mtodo de las diluciones por extincin
3- Masa Celular (fsico)
a) Directa: Por pesada
b) Indirecta: Contenido de Nitrgeno
- Por turbidimetria
- Contenido de fosfolpidos
4- Actividad Bioqumica.
OBJETIVOS GENERALES:
Conocer las tcnicas de recuentos de bacterias mesfilas viables en medio slido y lquido.
OBJETIVOS ESPECFICOS:
A partir de una muestra de suelo patagnico realizar:
Recuento en placas por diseminacin en superficie y por volcado.
Recuento en medio lquido: determinacin del nmero ms probables (N.M.P).
MATERIALES:
-

Ansa
Alcohol
Cajas de Petri
Jeringas
Micropipeta (1-100L)
Diluyente: Solucin fisiolgica
Agar fundido y en placa
Caldo nutritivo
Muestra slida: Suelo Patagnico.

NOMBRE Y APELLIDO: Brenda Araceli Acua

DNI: 36.105.274
CATEDRA/CARRERA: Microbiologa General/Licenciatura en Qumica
FECHA DE ENTREGA: 26 de Abril de 2016

N DE ENTREGA: 1

INSTRUMENTOS:
-

Estufa
Balanza

MTODOS:
Los mtodos empleados en el desarrollo del trabajo prctico del laboratorio son detallados en la Gua de
trabajos prcticos de Microbiologa otorgados por la ctedra.
Diluciones utilizadas en la siembra por diseminacin en superficie y por volcado: 10-2,10-3,10-4.
Diluciones utilizadas en la determinacin de nmero ms probable: 10-6,10-7,10-8.
RESULTADOS:
GRUPO
1
2
3
4
5
6
7
8

X
SD

DISEMINACIN EN
SUPERFICIE
(U.F.C/g)
1,50x104
2,09x105
1,76x105
1,67x105
2,02x105
2,35x104
--------1,72x105

1,85x105
1,90x104

SIEMBRA POR
VOLCADO
(U.F.C/g)
----------------1,42x105
1,37x105
1,91x105
--------1,92x104
4,90 x 105

2,40x105
1,68x105

NMERO MS
PROBABLE
(U.F.C/g)
3,00x105
4,00x105
--------1,40x106
2,10x107
3,00x105
7,00x105
9,00x105

6,67x106
4,32x106

*Los datos resaltados en lila son los utilizados para calcular la media (X) y la desviacin estndar
(SD).
DISCUSIN:
Luego de realizar la siembra por las diferentes tcnicas utilizadas, se efectu el recuento de bacterias aerobias
mesfilas.
En el caso de la determinacin del nmero ms probable en medio lquido, se pudo observar un solo tubo con
crecimiento bacteriano (con turbidez) y para calcular nos ayudamos con la tabla calculada a partir de los
datos de MAN (1975).
Con respecto a los resultados obtenidos con otros grupos pudimos coincidir con el valor de un grupo y si bien
se encuentra en el rango de 105 de todas maneras presenta mucha variabilidad con el resto.
En la tcnica de volcado pudimos observar que en las placas de las tres diluciones utilizadas exista un
nmero extremadamente grande de colonias (>300), la cual impidi que podamos realizar el conteo de las
mismas.
Y por ltimo en diseminacin en superficie obtuvimos un valor alto de U.F.C con respecto a los dems
valores obtenidos.
Todos estos errores tal vez surgieron debido a:

NOMBRE Y APELLIDO: Brenda Araceli Acua

DNI: 36.105.274
CATEDRA/CARRERA: Microbiologa General/Licenciatura en Qumica
FECHA DE ENTREGA: 26 de Abril de 2016

N DE ENTREGA: 1

Mala homogeneizacin de la muestra de microorganismos.

Poco tiempo de incubacin.
No se agreg el volumen correcto tanto por el uso de la micropipeta o el uso de jeringas.
Contaminacin por la transferencia de un tubo al otro sin seguir la regla de dilucin desde el ms
diluido al ms concentrado.
No se respetaron las condiciones de esterilidad durante el trabajo.

Para obtener valores ms precisos se decidi eliminar algunos datos, utilizando como criterio de rechazo
valores de referencia y el teste de Q. En el caso de recuento por Diseminacin en superficie y por volcado se
rechazaron los valores elevados a la cuarta potencia, debido a que la mayora de los datos obtenidos por los
diferentes grupos estn elevados a la quinta potencia y los de referencia indican recuentos de 2,0x10 6
2,5x106 U.F.C/g de suelo patagnico (Comunicacin Oral) 3,8x10 6 U.F.C/g de suelo patagnico (Acua et
al.,2008) y 4,1 x 106 U.F.C/g de suelo patagnico.
En NMP la mayora de los valores se encontraban elevados a la quinta potencia y al realizar el test de Q se
consider eliminar el valor 2,2x10 7 con una confianza del 99% obteniendo una desviacin estndar apropiada
pero comparado con el valor de referencia de 1x10 7 (Comunicacin Oral) el promedio obtenido es mucho
menor.
De acuerdo a los datos citados podemos observar que los obtenidos durante la prctica difieren de los mismos
aunque no sabemos si la muestra de suelo analizada es la misma que se utiliz en la investigacin de los
trabajos mencionados, pero nos sirven como referencia.
CONCLUSIN:
Los datos obtenidos fueron:
Diseminacin en superficie (1,85 0,19) x105 U.F.C/g de suelo patagnico.
Siembra por volcado (2,40 1,68) x105 U.F.C/g de suelo patagnico.
Nmero ms probable (6,67 4,32) x 105 NMP/g de suelo patagnico.
BIBLIOGRAFA
I.
II.

III.

IV.

Gua de Trabajos Prcticos de Microbiologa general otorgado por la ctedra.

Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiologa. Adrian Acua, Gabriela Pucci, Maria Jose
Morales, Oscar Pucci. Biodegradacin de petrleo y sus derivados por la comunidad bacteriana en
un suelo de la Patagonia Argentina. junio 2010, vol. 30, p. 29-36.
(http://190.169.94.12/ojs/index.php/rev_vm/article/view/612/0)
- Acua, A. J., Pucci, O. H., Pucci, G. N. Caracterizacin de un proceso de Biorremediacin de
hidrocarburos en deficiencia de nitrgeno en un suelo de Patagonia Argentina. Ecosistemas, mayo
2008, vol. 17, n 2, p. 85-93.
(http://www.revistaecosistemas.net/artculo.asp?Id=548)
Comunicacin oral: Bioqumica Muoz, Valeria (Jefa de Trabajos Prcticos de Microbiologa
general), 25 de Abril de 2016.