GENTICA BACTERIANA1

DAS DE COORDINACIN DEL SEMINARIO

ALUMNOS
Aguilar
Maldonado
Jean Carlos

CDIGO

VIERNES

SBADO

26/02/15

27/02/15

28/02/15

201112013

Aguirre
Adrianzn
Mara
Altagracia

201111136

Arias Espinoza
Sheyla Yamalyt

201410078

Bustamante
Soto Rosa

200820392

Campos
Cubas Claudia
Elizabeth

JUEVES

201410077

I.- INTRODUCCION:
Las bacterias son microorganismos con una capacidad extraordinaria de
adaptacin a diferentes condiciones ambientales.

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Para comprender la esencia de esta capacidad es importante conocer sus

bases genticas, es decir cmo est organizada la informacin gentica, como
realizan y regulan su expresin y que mecanismos de variacin gnica poseen.
La capacidad infecciosa de las bacterias patgenas radica en que poseen la
informacin gnica necesaria para colonizar los tejidos del husped, invadirlos
y/o producir sustancias txicas que causarn la enfermedad.
Por otro lado, el conocimiento del funcionamiento gentico de las bacterias,
sumado al hecho de que son de fcil manejo en el laboratorio y que tienen
crecimiento rpido, ha permitido usarlas para sintetizar productos tiles a la
medicina, tanto para el diagnstico como para la prevencin y tratamiento de
algunas enfermedades. Estas posibilidades se han visto incrementadas con el
desarrollo de la ingeniera gentica y la disponibilidad de tcnicas de biologa
molecular.
Toda la informacin gentica esencial para la vida de la bacteria est contenida
en una nica molcula de cido desoxirribonucleico (ADN) de doble cadena y
circular, cerrado por enlace covalente. Dicha molcula se denomina
cromosoma bacteriano.
Muchas bacterias poseen adems ADN extra cromosmico, tambin circular y
cerrado, denominado ADN plasmdico por estar contenido en los plsmidos.
stos, portan informacin gnica para muchas funciones que no son esenciales
para la clula en condiciones normales de crecimiento.
Aunque las bacterias se reproducen por un proceso asexual (fisin binaria),
poseen mecanismos para lograr la variabilidad gentica que necesitan para
adaptarse a un entorno cambiante.
En general existen dos formas de cambiar la dotacin gentica de una
bacteria, las mutaciones y la transferencia de fragmentos de ADN de unas
bacterias a otras con posterior recombinacin de los fragmentos adquiridos en
el cromosoma o en los plsmidos de las bacterias receptora.

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II.- OBJETIVOS:
El objetivo principal de nuestro seminario es:
1. Conocer sobre los genes bacterianos y su expresin.
2. Reconocer los diferentes mecanismos de intercambio de informacin
gentica entre bacterias.
3. Comprender sobre la transferencia gentica entre clulas.
4. Y dar a conocer sobre la ingeniera gentica o tecnologia del ADN
recombinante.

III.- MARCO TERICO

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GENETICA BACTERIANA

LOS GENES BACTERIANOS Y SU EXPRESION

EL GENOMA BACTERIANO
Los genes : son secuencias de nucletidos con una funcin biolgica y entre
ellos se encuentran los genes estructurales relacionados con las protenas
(cistrones, que son genes codificadores), los genes del cido ribonucleico (ARN)
y los sitios de reconocimiento y unin de otras molculas (promotores y
operadores). Cada genoma contiene muchos operones, que estn constituidos
por genes.
El genoma bacteriano: es todo el conjunto de genes que tiene la bacteria,
tanto en su cromosoma como en sus elementos genticos extra cromosmicos.
El genoma bacteriano es tambin la estructura en donde se encuentran las
caractersticas biolgicas de la especie. Est formado por ADN de doble
cadena en forma circular, sin extremos, formando un solo cromosoma con peso
molecular de aproximadamente

Las distintas caractersticas biolgicas de cada especie se deben a la

diferencia de la secuencia de las purinas y las pirimidinas en la molcula
del genoma. Esto significa que si una bacteria sufre algn cambio en esta
secuencia, se manifiesta con alguna caracterstica diferente al resto de la
especie. Para que se conserven las caractersticas diferente al resto de la
especie. Para que se conserven las caractersticas biolgicas de las especies
es necesario que las clulas hijas tengan exactamente la misma secuencia que
la clula madre. Esto es as porque la duplicacin del ADN se realiza abrindose
los puentes de hidrgeno que unen las purinas y las pirimidinas, sintetizando la
cadena opuesta en forma de espejo, o sea, la cadena de la clula madre forma
el molde para asegurar que la cadena opuesta sea idntica a s misma.

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En la forma en que se replica el genoma bacteriano, se observa que el

genoma de la clula hija tiene una cadena de ADN de la clula madre y otra de
neoformacin, y lo mismo sucede en cada nueva generacin; este modelo se
llama semiconservador. El punto donde se inicia la rplica del ADN se llama
duplicn, y es el sitio donde la membrana citoplasmtica hace contacto con el
genoma, hasta completar la divisin celular.
CARACTERSTICAS
Los eucariotas suelen tener dos copias distintas de cada cromosoma (es
decir, son diploides). Las bacterias slo suelen tener una copia de sus
cromosomas (es decir, son haploides).
Como las bacterias slo tienen un cromosoma, la alteracin de un gen
(mutacin) tendr un efecto ms evidente sobre la clula. Adems, la
estructura del cromosoma bacteriano se mantiene por las poliaminas,
como espermina y espermidina, ms que por las histonas.
Las bacterias tambin pueden contener elementos genticos
extracromosmicos como plsmidos y bacterifagos (virus bacterianos).
Estos elementos son independientes del cromosoma bacteriano y en la
mayor parte de los casos se pueden transmitir de una clula a otra.
TRANSCRIPCIN
La informacin existente en la memoria gentica del ADN se transcribe en una
molcula de un ARN mensajero (ARNm) para su posterior traduccin en
protenas. La sntesis del ARNm ocurre por medio de una ARN-polimerasa
dependiente de ADN.

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El proceso comienza cuando el factor sigma reconoce una secuencia especfica

de nucletidos en el ADN (el promotor) y se une firmemente a ella.
Las secuencias promotoras se disponen inmediatamente por delante del
comienzo de la secuencia de ADN que realmente codifica una protena. Los
factores sigma se fijan a estos promotores con el objeto de proporcionar un
punto de acoplamiento a la ARN-polimerasa. Asimismo, algunas bacterias
codifican varios factores sigma para permitir la transcripcin de un grupo de
genes en condiciones especiales, como shock trmico, inanicin, metabolismo
especial del nitrgeno o esporulacin.
Tras la unin de la polimerasa a una secuencia adecuada del ADN, se inicia la
sntesis del ARN mediante la adicin secuencial de los ribonucletidos
complementarios a aquella molcula. La ARN-polimerasa se disocia del ADN
(un proceso que est mediado por seales existentes en el interior del ADN)
cuando se ha transcrito la totalidad de un gen o un grupo de ellos (opern).
La ARN-polimerasa dependiente del ADN es inhibida por la rifampicina, un
antibitico utilizado a menudo en el tratamiento de la tuberculosis.
Igualmente, a partir del ADN se transcribe el ARN de transferencia (ARNt), el
cual se utiliza en la sntesis de las protenas, y el ARN ribosmico (ARNr), el
cual forma parte de los ribosomas.

FIG 2: PROCESO DE TRANSCRIPCIN

Los promotores y operadores controlan la expresin de un gen determinando

qu secuencias se transcriben en el ARN mensajero (ARNm).
Los operones son grupos de uno o ms genes estructurales expresados a partir
de un promotor concreto y que terminan en un terminador de la transcripcin.
Por tanto, todos los genes que codifican las enzimas implicadas en una va
concreta se pueden regular de forma coordinada.
Los operones con muchos genes estructurales se llaman policistrnicos. El
opern E. coli lac contiene todos los genes necesarios para el metabolismo de
la lactosa y tambin los mecanismos de control para detener (en presencia de

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glucosa) o poner en marcha (en presencia de inductores o galactosa) estos

genes exclusivamente cuando se necesitan.
El opern lac incluye una secuencia represora, otra promotora y genes
estructurales para la enzima B-galactosidasa, para una permeasa y para una
acetilasa.
TRADUCCIN
La traduccin es el proceso por el cual el cdigo gentico en forma de ARNm se
convierte (traduce) en una secuencia de aminocidos, el producto proteico. El
lenguaje y los signos de puntuacin del cdigo gentico para cada aminocido
vienen condicionados por un conjunto de tres nucletidos, que se denominan
codn. Existen 64 combinaciones de codones distintas, que codifican los 20
aminocidos, adems de los codones de inicio y terminacin.
Algunos de los aminocidos se codifican mediante ms de un codn. Este fenmeno se denomina degeneracin del cdigo gentico y puede actuar para
proteger a la clula de los efectos de mutaciones leves del ADN o el ARNm.
Cada molcula de ARNt contiene una secuencia de tres nucletidos que es
complementaria de una de las secuencias del codn. Esta secuencia de ARNt
se conoce como anticodn, y permite el apareamiento de bases y la unin al
codn presente en el ARNm. En el extremo opuesto del ARNt se encuentra
unido el aminocido que corresponde a cada pareja especfica codnanticodn.
El proceso de sntesis de protenas (v. figura 3) comienza con la fijacin de la
subunidad ribosmica 30S y un ARNt iniciador especial de la formil-metionina
(fmet) al codn de iniciacin metionina (AUG) para formar el llamado complejo
de iniciacin.
A continuacin, la subunidad ribosmica 50S se fija al complejo para iniciar asi
la sntesis del ARNm. El ribosoma contiene dos zonas para la fijacin del ARNt,
el sitio A (aminoacilo) y el sitio P (peptidilo), cada uno de los cuales permite el
emparejamiento de bases del ARNt fijado y la secuencia del codn del ARNm.
El ARNt correspondiente al segundo codn ocupa el sitio A. El grupo amino del
aminocido unido al sitio A forma un puente peptdico con el grupo carboxilo
del aminocido que se encuentra en el sitio P, en una reaccin conocida como
transpeptidacin, y el ARNt vaco en el sitio P (ARNt no cargado) se separa del
ribosoma.
A continuacin, el ribosoma avanza exactamente tres nucletidos en la molcula de ARNm, con lo que se transfiere el ARNt al nuevo pptido unido al sitio P
y coloca el siguiente codn en el sitio A. Un ARNt cargado se acerca al sitio A, y
el proceso comienza de nuevo. La traduccin contina hasta que el codn

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nuevo del sitio A corresponde a uno de los codones de terminacin (para el

cual no existe ningn ARNt correspondiente).
En ese momento, la nueva protena se libera al citoplasma y el complejo de
traduccin se desmonta o el ribosoma se desplaza hasta el siguiente codn de
iniciacin para comenzar la formacin de una nueva protena. La capacidad de
desplazamiento a lo largo de la molcula de ARNm para formar una nueva
protena caracteriza al ribo-soma 70S de las bacterianas, pero no al ribosoma
80S de los eucariotas. Esta diferencia tiene implicaciones en la sntesis de
protenas de algunos virus.
El proceso de sntesis de protenas por el ribosoma 70S constituye un objetivo
importante de la accin de los agentes antimicrobianos. As, tanto los
aminoglucsidos (p. ej., estreptomicina y gentamicina) como las tetraciclinas
se unen a la subunidad menor del ribosoma y provocan una inhibicin de la
funcin normal de este. De manera semejante, los antibiticos del grupo de los
macrlidos (p. ej., eritromicina) y lincosamidas (p. ej., clindamicina) actan
unindose a la subunidad mayor del ribosoma.
CONTROL DE LA EXPRESIN GNICA
Las bacterias han desarrollado mecanismos para adaptarse con rapidez y
eficiencia a los cambios y estmulos ambientales, lo que les permite coordinar y
regular la expresin de los genes para las estructuras con mltiples
componentes o las enzimas de una o ms vas metablicas. Por ejemplo, el
cambio de temperatura podra indicar la entrada al anfitrin humano e indicar
la necesidad de un cambio global del metabolismo y la regulacin al alza de
algunos genes importantes para el parasitismo o la virulencia. Muchos genes
bacterianos se controlan a mltiples niveles y por distintos mtodos.
Se puede conseguir un cambio coordinado en la expresin de muchos genes,
como se necesita para la esporulacin, usando un factor sigma distinto para la
ARN polimerasa. Esto modificara la especificidad de la ARN polimerasa y permitira la sntesis del ARNm para los genes necesarios, al tiempo que evitara
genes innecesarios. Las bacterias pueden producir ms de seis factores sigma
distintos para conseguir una regulacin global de la respuesta al estrs, el
shock, el ayuno o para coordinar la produccin de estructuras complicadas,
como los flagelos.
La coordinacin de un gran nmero de procesos de forma global tambin se
puede conseguir a travs de pequeos activadores moleculares, como la
adenosina monofosfato cclica (cAMP).
El aumento de las concentraciones de cAMP indica una baja concentracin de
glucosa y la necesidad de utilizar vas metablicas alternativas. De modo
similar, el aumento de las concentraciones de algunas molculas pequeas
especficas producidas por las bacterias concretas permite activar algunos

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genes de virulencia cuando existe un nmero suficiente de bacterias. Este

proceso se denomina quorum sensing (seal de grupo).
El estmulo para la produccin de la biopelcula en las especies de
Pseudomonas es una concentracin crtica de N-acil homoserina lactona (AHL)
que se produce cuando existe un nmero suficiente de bacterias (hay qurum).
La activacin de la produccin de toxinas y la conducta ms virulenta de S.
aureus se asocian al aumento de la concentracin de un pptido cclico.Para
coordinar la expresin de un grupo ms limitado de genes, como los implicados
en un proceso metablico especfico, los genes para las enzimas necesarias se
organizan en un opern.
El opern se encuentra bajo control de una secuencia de ADN promotora o
represora, que puede activar o desactivar la expresin de un gen o grupo de
genes para coordinar la produccin de las enzimas necesarias y permitir a las
bacterias reaccionar frente a los cambios en las concentraciones de
nutrientes.Los genes responsables de algunos mecanismos de la virulencia se
organizan en un islote de patogenicidad que est bajo el control de un solo
promotor, lo que permite su expresin exclusivamente en condiciones
apropiadas (para las bacterias). Los muchos componentes de los sistemas de
secrecin de tipo III de E. coli, Salmonella o Yersinia se agrupan dentro de un
islote de patogenicidad.
La transcripcin tambin se puede regular mediante el proceso de traduccin.
A diferencia de lo que sucede en los eucariotas, en los procariotas la ausencia
de una membrana nuclear permite la unin del ribosoma al ARNm conforme se
transcribe a partir del ADN. La posicin y la velocidad de desplazamiento del
ribosoma a lo largo del ARNm pueden modificar la presencia de bucles en el
ARNm y la capacidad de la polimerasa de transcribir el ARNm nuevo.
Esto permite controlar la expresin gnica tanto a nivel de la transcripcin
como de la traduccin.El inicio de la transcripcin puede estar sometido a unos
mecanismos de control positivo o negativo. Los genes sometidos a un control
negativo se expresan a menos que una protena represora los desconecte. Esta
protena impide la expresin del gen al unirse a una secuencia especfica del
ADN, el denominado operador, lo que impide que la polimerasa de ARN inicie la
transcripcin en el promotor. Por el contrario, los genes cuya expresin se
encuentra sometida a un control positivo tan slo se transcriben en presencia
de una protena reguladora activa denominada apoinductor.
El apoinductor se une a una secuencia especfica del ADN y colabora con la
polimerasa de ARN en los pasos iniciales mediante un mecanismo
desconocido.Los operones pueden ser inducibles o represibles. La introduccin

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de un sustrato (inductor) en el medio de crecimiento puede inducir un aumento

de la expresin por parte del opern de las enzimas necesarias para el
metabolismo de dicho compuesto.
La acumulacin de los productos finales (correpresores) de una ruta puede
sealar la necesidad de desconectarla o reprimirla mediante una
disminucin de la sntesis de sus enzimas.El opern de la lactosa (lac),
encargado de la degradacin de este hidrato de carbono, es un opern
inducible que se encuentra sometido a una regulacin tanto positiva como
negativa .

FIG 4

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FIG 3

Normalmente, la bacteria utiliza glucosa y no lactosa. En ausencia de lactosa,

la protena represora se fija a la secuencia del operador y el opern queda
reprimido, con lo que se impide la funcin normal de la polimerasa de ARN.
Sin embargo, la adicin de lactosa invierte esta represin en ausencia de
glucosa. La expresin completa del opern lac tambin exige la presencia de
un mecanismo de control positivo mediado por protenas.
En E. coli, una protena denominada protena activadora de genes por
catabolito (PAC) forma un complejo con el monofosfato cclico de adenosina
(AMPc) y adquiere as la capacidad de fijarse a una secuencia especfica del
ADN presente en el promotor. Cuando se reduce la glucosa en la clula, el
AMPc aumenta para fomentar el uso de otros azcares para el metabolismo. El
complejo PAC-AMPc favorece la unin de la polimerasa de ARN al promotor, con
lo que se traduce en un incremento de la frecuencia de inicio de la
transcripcin.
El opern del triptfano (opern trp) contiene los genes estructurales
necesarios para la biosntesis de este aminocido y se halla sometido a unos
mecanismos de control dobles de la transcripcin (v. figura 5).

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FIG 5:

Aunque el triptfano es esencial para la sntesis de protenas, su presencia en

concentraciones excesivas puede resultar txica para la clula, por lo que su
sntesis debe estar regulada. A nivel de ADN, el aumento de la concentracin
intracelular de triptfano activa la protena represora para inhibir el proceso de
transcripcin.
Respecto a la sntesis de protenas, la traduccin rpida de un pptido de
prueba al comienzo del ARNm en presencia de triptfano favorece la
formacin de un asa bicatenaria en el ARN, lo cual pone fin al proceso de
transcripcin. Esta asa se forma tambin cuando no tiene lugar la sntesis de
protenas, una situacin que tampoco requerira la sntesis de triptfano.
Ambos mecanismos regulan la sntesis de triptfano a nivel del ARNm en un
proceso denominado atenuacin y en el que se registra una interrupcin
prematura de la sntesis del ARNm.
La expresin de los componentes de los mecanismos de virulencia tambin se
regula de forma coordinada a partir de un opern. Algunos estmulos sencillos,
como la temperatura, la osmolaridad, el pH, la disponibilidad de nutrientes o la
concentracin de algunas molculas pequeas especficas, como el hierro o el
oxgeno, puede activar o desactivar la transcripcin de un solo gen o grupo de
genes.

GENTICA BACTERIANA13

Los genes que codifican la capacidad invasiva de Salmonella dentro de un

islote de patogenicidad se activan ante una osmolaridad elevada y una
concentracin de oxgeno baja, condiciones ambas que se producen en el tubo
digestivo. E. coli percibe que ha abandonado el intestino del anfitrin por el
descenso de la temperatura e inactiva sus genes de adherencia. Unas
concentraciones bajas de hierro pueden activar la expresin de hemolisina en
E. coli o la toxina diftrica en Corynebacterium diphtheriae, posiblemente para
destruir las clulas y conseguir hierro.
Ya se han comentado los mecanismos de sensado por quorum para los factores
de virulencia de S. aureus y la produccin de la pelcula biolgica en las
especies de Pseudomonas.
REPLICACIN DEL ADN
El cromosoma bacteriano es un almacn de informacin que define las
caractersticas de las clulas y llevan a trmino los distintos procesos celulares.
Por tanto, es fundamental que esta molcula se replique sin errores.La
replicacin del cromosoma bacteriano se desencadena por una cascada de
sucesos relacionados con la velocidad de crecimiento de la clula.
La replicacin del ADN bacteriano se inicia en una secuencia especfica del
cromosoma denominado OriC. Aparte de otras enzimas, el proceso de
replicacin exige la participacin de una enzima (helicasa) capaz de desenrollar
el ADN y exponerlo, otra enzima (primasa) capaz de sintetizar los cebadores
que inician el proceso y una enzima o enzimas (polimerasas de ADN dependientes de ADN) que nicamente sintetizan una copia del ADN en presencia de
una secuencia cebadora a la que aadir nucletidos y tan slo trabajan en
direccin 5' a 3'.
El ADN nuevo se sintetiza de forma semiconservadora y utilizando como
plantillas ambas cadenas del ADN de la clula progenitora. La sntesis del
nuevo ADN tiene lugar en una horquilla de crecimiento y sigue un curso
bidireccional. Mientras una de las cadenas (cadena adelantada o leading
strand) se copia de manera continua en la direccin 5'-3', la otra cadena
(cadena rezagada o lagging strand) ha de sintetizarse en forma de numerosas
piezas de ADN a partir de cebadores de ARN (fragmentos de Okazaki).
A medida que se expone su estructura, el ADN de la cadena rezagada ha de
extenderse en la direccin 5'-3'. A continuacin, la enzima ligasa de ADN se
encarga de unir las piezas (v. figura 6).

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FIG 6:

Para mantener el alto grado de precisin que exige el proceso de replicacin,

las polimerasas de ADN poseen unas funciones de correccin
(proofreadingfunctions) que permiten a la enzima confirmar que se ha
insertado el nucletido correcto y corregir as los posibles errores que pudieran
cometerse. Durante la fase logartmica de crecimiento en un medio rico,
pueden tener lugar numerosos inicios del proceso de replicacin
cromosmica antes de que tenga lugar la divisin celular.
Este proceso genera una serie de nidos de burbujas en los cromosomas hijos,
cada uno de los cuales contiene su propio par de horquillas de crecimiento para
efectuar la sntesis de una nueva molcula de ADN. La polimerasa se desplaza
a lo largo de la cadena de ADN e incorpora en cada posicin el nucletido
(complementario) adecuado.
La replicacin finaliza cuando las dos horquillas de replicacin se encuentran a
180 desde el origen. El proceso de replicacin del ADN impone una enorme
fuerza de torsin sobre la molcula circular de ADN cromosmico, la cual se
contrarresta por la accin de las topoisomerasas (p. ej., girasa) que
superenrollan el ADN. Las topoisomerasas son enzimas clave para las bacterias
y constituyen el objetivo de los antibiticos del grupo de las quinolonas.

GENTICA BACTERIANA15

MUTACIN, REPARACIN Y RECOMBINACIN

Es importante que el ADN se replique de forma precisa para que las bacterias
sobrevivan, pero se producen errores y alteraciones accidentales del ADN.
A pesar de la existencia de sistemas de reparacin del ADN eficientes, se
producen mutaciones y alteraciones en el ADN. La mayor parte de estas
mutaciones tienen escaso efecto sobre las bacterias o resultan negativas, pero
algunas mejoran las opciones de supervivencia de las bacterias cuando se ven
amenazadas por el entorno, el anfitrin o el tratamiento.
MUTACIONES Y SUS CONSECUENCIAS
Una mutacin se define como: una alteracin aparentemente espontnea o
inducida de la secuencia de los nucletidos del genoma que se manifiesta por
alguna caracterstica biolgica y que se transmite a las siguientes
generaciones.
Desde el punto de vista molecular, estas alteraciones se deben a diferentes
cambios, como son:
a) adicin de una base extra que no exista en la clula madre,
b) delecin, cuando se omite una base extra que no exista en la clula
madre,
c) cambio o transicin, cuando se cambia una purina por otra o transversin
cuando se altera una purina o por una pirimidina o viceversa,
d) inversin, la secuencia se invierte en una o ms bases y
e) insercin, cuando se fractura un pequeo fragmento y se inserta otro
diferente. Todos estos fenmenos le van a cambiar la informacin gentica a la
bacteria.
Estas mutaciones pueden ser inducidas por:
*agentes fsicos: radiaciones electromagnticas (ultravioleta, infrarrojos) o
radiaciones corpusculares (energa atmica, tomos inestables), o bien,
*por agentes qumicos de efecto directo sobre las bases como:
compuestos nitrosados, agentes alquilantes, bases anlogas, nitropirenos,
metotrexato, bleomicina, dictonomicina, hidroxiureas, etc., o los agentes que
no tienen su efecto directamente sobre las bases como: los hidrocarburos
aromticos policclicos, el benzopireno y las aflatoxinas. En el metabolismo
natural de las bacterias existen unas enzimas que corrigen algunos errores en
la transcripcin, y esto disminuye la frecuencia de las mutaciones naturales.

GENTICA BACTERIANA16

Estas enzimas son las exonucleasas, y slo cuando stas no se activan

oportunamente se produce la mutacin.

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GENTICA BACTERIANA18

Ntese que la adenina siempre se une a la timina por un doble puente de

hidrgeno y que la guanina siempre se une a la citosina por un triple puente.
No hay enlaces G-A ni T-C. F= fosfato, D=desoxirribosa, A= adenina, G=
guanina, C= citosina, T= timina.
Tambin podemos definir una mutacin como:

Cualquier modificacin de la secuencia de bases del ADN. Un cambio de

una sola base puede ocasionar una transicin, en la que una purina es
sustituida por otra purina o una pirimidina es reemplazada por otra
pirimidina.

Tambin puede aparecer una transversin, en la que una purina es sustituida

por una pirimidina o viceversa. Una mutacin silenciosa es una modificacin
del ADN que no provoca cambios en la secuencia aminoacdica de la protena
codificada. Este tipo de mutacin se debe a que un aminocido puede estar
codificado en ms de un codn.
I.

Aunque una mutacin de sentido errneo (missense) es aquella que

comporta la insercin de un aminocido diferente en la protena; sin
embargo, cuando el nuevo aminocido posee unas propiedades
semejantes (p. ej., una valina que sustituye a una alanina) puede
tratarse de una mutacin conservadora.

GENTICA BACTERIANA19

II.

Una mutacin sin sentido (nonsense) es aquella en la que se

sustituye un codn que codifica a un aminocido por un codn de
interrupcin (p. ej.TAG [timidina-adenina-guanina]), lo que provoca que
el ribosoma pierda el ARNm y finalice prematuramente la produccin de
la protena. Las mutaciones condicionales, como las mutaciones
sensibles a la temperatura, pueden deberse a mutaciones conservadoras
que modifican la estructura o la funcin de una protena importante
cuando la temperatura es elevada.

III.

Se pueden observar modificaciones ms notables cuando la mutacin

afecta a un gran nmero de bases. Una pequea delecin o insercin
que no ocurra en mltiplos de tres produce una mutacin de desfase
de lectura (franieshift mutation) que altera el sistema de lectura y
habitualmente ocasiona la aparicin de un pptido absurdo y la
interrupcin prematura de la protena.

IV.

Las mutaciones nulas, que destruyen completamente la funcin del

gen, aparecen cuando se registra una extensa insercin o delecin o una
acusada reorganizacin de la estructura cromosmica. La insercin de
largas secuencias de ADN (muchos miles de pares de bases) por
recombinacin, transposicin o tcnicas de ingeniera gentica puede
producir mutaciones nulas por separacin de las partes de un gen e
inactivacin del mismo.

V.

En la naturaleza se produce un gran nmero de mutaciones de forma

espontnea (p. ej., debido a errores de la polimerasa); sin embargo, las
mutaciones pueden tambin ser consecuencia de agentes fsicos o
qumicos.

Entre los agentes fsicos utilizados para inducir la aparicin de

mutaciones en las bacterias figuran los siguientes: el calor, que provoca
una desaminacin de los nucletidos; la luz ultravioleta, que origina la
formacin de dmeros de pirimidina y la radiacin ionizante (p. ej., rayos X),
que producen radicales hidroxilo hiperreactivos capaces de abrir la estructura
anular de una base o bien de generar roturas monocatenarias o bicatenarias en
el ADN.
Las sustancias qumicas de tipo mutagnico pueden agruparse en tres
clases. Los anlogos de nucletidos producen apareamientos errneos y
frecuentes errores en la replicacin del ADN. Por ejemplo, la incorporacin de
5-bromouracilo en la molcula de ADN en lugar de timidina permite su apareamiento con guanina en lugar de adenina, de forma que sustituye un par T-A por
un par G-C.

GENTICA BACTERIANA20

Los mutgenos de desfase de lectura, como algunas molculas policclicas

planas (bromuro de etidio, derivados de la acridina) se insertan (o intercalan)
entre las bases a medida que se enfrentan una a otra en la doble hlice del
ADN. Estos agentes intercalantes aumentan el espacio existente entre los
sucesivos pares de bases, de modo que destruyen el esqueleto regular de
carbohidratos-fosfato y disminuyen el grado de inclinacin de la hlice. Estos
cambios comportan la adicin o delecin de una nica base y ocasionan la
aparicin de frecuentes errores durante la replicacin del ADN.
Las sustancias qumicas reactivas frente al ADN actan directamente sobre
ste y modifican la estructura qumica de la base. Entre estas sustancias
qumicas destacan el cido nitroso (HN0 2) y los agentes alquilantes (p. ej.,
nitroso- guanidina y etil- metano-sulfonato), de los que se sabe que aaden
grupos metilo o etilo a los anillos de las bases del ADN. Las bases modificadas
pueden aparearse de forma anormal o bien no aparearse. Esta alteracin
puede provocar la eliminacin de la base del esqueleto del ADN.
MECANISMOS DE REPARACIN DEL ADN
Con el propsito de minimizar los daos al ADN, las clulas bacterianas han
desarrollado diversos mecanismos de reparacin. Estos mecanismos de
reparacin se pueden dividir en cinco grupos:
1. La reparacin directa del ADN consiste en la eliminacin enzimtica del
dao (p. ej., dmeros de pirimidina y bases alquiladas).
2. La reparacin por escisin se basa en la escisin del segmento de ADN
que contiene las lesiones, seguida de la sntesis de una nueva hebra de
ADN. Existen dos tipos de mecanismos de reparacin por escisin:
generalizada y especializada.
3. La reparacin posreplicacin o por recombinacin consiste en la
recuperacin de la informacin que falta mediante procesos de
recombinacin gentica cuando estn daadas ambas dos hebras de
ADN.
4. La llamada respuesta SOS se caracteriza por la induccin de numerosos
genes (aproximadamente 15) tras la aparicin de dao al ADN, o bien en
la interrupcin de su replicacin.
5. La reparacin propensa a error (error-prone repair) es el ltimo recurso
con que cuenta la clula bacteriana antes de morir. Se utiliza para
rellenar los espacios con una secuencia aleatoria cuando no se dispone
de una plantilla de ADN que pueda orientar con precisin el proceso de
reparacin.
INTERCAMBIO GNICO EN LOS PROCARIOTAS
Muchas bacterias, especialmente numerosas especies patgenas, utilizan su
ADN de forma promiscua. El intercambio de ADN entre clulas permite el
intercambio de genes y caractersticas entre ellas, lo que ocasiona la aparicin
de cepas bacterianas nuevas. Este intercambio puede resultar ventajoso para

GENTICA BACTERIANA21

el receptor, especialmente cuando el ADN codifica mecanismos de resistencia a

los antibiticos. El ADN transferido puede integrarse en el cromosoma del
receptor o bien mantenerse de manera estable en forma de elemento
extracromosmico (plsmido) o como un virus bacteriano (bacterifago) y se
transmite a las bacterias hijas como una unidad dotada de capacidad
autnoma de replicacin.
LOS PLSMIDOS son pequeos elementos genticos cuya replicacin es
independiente del cromosoma bacteriano. La mayor parte de los plsmidos son
molculas circulares bicatenarias de ADN con un nmero variable de pares de
bases (de 1.500 a 400.000). Sin embargo, Borrelia burgdorferi, el agente
etiolgico de la enfermedad de Lyme, y la bacteria afin Borrelia hermsii presentan una caracterstica peculiar en el grupo de las eubacterias: la presencia
de plsmidos lineales.
Al igual que el ADN cromosmico bacteriano, estos plsmidos se pueden
replicar de forma autnoma, por lo que reciben el nombre de replicones.
Algunos plsmidos, como el plsmido de E. coli, son episomas, lo que indica
que se pueden integrar en el cromosoma del anfitrin.
Los plsmidos portan informacin gentica, la cual puede proporcionar una
ventaja selectiva a las bacterias aunque no constituya una ventaja selectiva
para la bacteria. Por ejemplo, los plsmidos pueden conferir un nivel alto de
resistencia a antibiticos, codificar la produccin de bacteriocinas, toxinas,
determinantes de virulencia y contener otros genes que otorguen una ventaja
respecto a la metabolizacin de ciertos sustratos en comparacin con otros
microorganismos o en el interior del organismo anfitrin (v. figura 7).

FIG 7:

GENTICA BACTERIANA22

El nmero de copias de plsmido producidas por una clula es especfico de

cada uno de ellos. Este nmero es la relacin existente entre las copias del
plsmido y el nmero de copias del cromosoma. Su valor puede ser bajo (hasta
de 1 en el caso de los plsmidos grandes) o alto (hasta de 50 en los plsmidos
ms pequeos).Los plsmidos de gran tamao (20-120 kb), como el factor F de
fertilidad de E. coli o el factor de transferencia de resistencia (80 kb), pueden a
menudo mediar su propia transferencia de una clula a otra mediante un
proceso denominado conjugacin.Estos plsmidos conjugativos codifican todos
los factores necesarios para su propia transferencia. En cambio, otros
plsmidos pueden ser transferidos a las clulas bacterianas por medio de
mecanismos distintos de la conjugacin (p. ej., por transformacin o por
transduccin).
LOS BACTERIFAGOS son virus bacterianos. Estos elementos genticos
extracromosmicos pueden sobrevivir fuera de la clula del anfitrin ya que su
genoma (que puede estar formado por ARN o ADN) est protegido por una
capa de protenas.
Los bacterifagos infectan a las clulas bacterianas y se pueden replicar hasta
alcanzar un gran nmero y condicionar la lisis celular (infeccin ltica) o en
algunos casos integrarse en el genoma del anfitrin sin destruirlo (estado
lisognico), como sucede en el caso del bacterifago lambda de E. coli. Algunos
bacterifagos lisognicos contienen genes para toxinas (p. ej., el corinfago
beta contiene el gen de la toxina diftrica). El bacterifago lambda sigue
siendo lisognico mientras se siga sintetizando protena represora, y esto evita
que el fago deje de estar integrado para poder replicarse y abandonar la clula.
Esta reaccin se puede activar cuando el ADN de la clula anfitrin est
daado por la radiacin u otro mecanismo o cuando la clula no puede sintetizar ms la protena represora, una seal de que la clula anfitrin ya no est
sana y no es un buen lugar para vivir de gorra.
LOS TRANSPOSONES (genes que saltan) son unos elementos genticos
mviles (v. figura 8) que pueden transferir ADN de una posicin a otra del
genoma o entre distintas molculas de ADN dentro de una misma clula (p. ej.,
de un plsmido a otro o de un plsmido a un cromosoma). Los transposones se
detectan tanto en los procariotas como en los eucariotas. Los transposones
ms simples se conocen como secuencias de insercin y su longitud
comprende de 150 a 1.500 pares de bases con repeticiones invertidas de 15 a
40 pares de bases y la informacin gentica mnima necesaria para su propia
transferencia (es decir, el gen que codifica la transposasa).
Los transposones complejos contienen otros genes, como genes que proporcionan resistencia frente a antibiticos. En ocasiones, los transposones se
introducen en el interior de los genes y los inactivan. Si la insercin e

GENTICA BACTERIANA23

inactivacin tiene lugar en un gen encargado de codificar una protena

esencial, la clula muere.
Algunas bacterias patgenas utilizan un mecanismo semejante para coordinar
la expresin de un sistema de factores de virulencia. Los genes de actividad
pueden agruparse en un islote de virulencia o patogenicidad rodeado por unos
elementos mviles semejantes a los transposones que les permiten moverse
tanto en el interior del cromosoma como hacia otras bacterias.

FIG 8:

Cualquier unidad gentica puede reaccionar ante la presencia de un estmulo

ambiental (p. ej., pH, calor o contacto con la superficie de la clula del
anfitrin) como mecanismo de coordinacin de la expresin de un proceso
complejo. Por ejemplo, el islote SPI-1 de Salmonella codifica 25 genes que permiten la entrada de esta bacteria en clulas no fagocticas.
MECANISMOS DE TRANSFERENCIA GENTICA ENTRE CLULAS
El intercambio de material gentico entre las clulas bacterianas puede tener
lugar a travs de uno de los tres mecanismos siguientes (v. figura 9):

GENTICA BACTERIANA24

1. Conjugacin, que consiste en un apareamiento o intercambio cuasi

sexual de informacin gentica entre una bacteria (donante) y otra
bacteria (receptora).
2. Transformacin, la cual provoca la adquisicin de nuevos marcadores
FIG 9:
genticos mediante la incorporacin de ADN exgeno.
3. Transduccin, la cual se caracteriza por la transferencia de informacin
gentica de una bacteria a otra por medio de un bacterifago. En el
interior de la clula, el transposn puede saltar entre distintas
molculas de ADN (p. ej., plsmido a plsmido o plsmido a
cromosoma).
TRANSFORMACIN
a) Transformacin: en 1928, en Ingleterra, Griffith observ este fenmeno por
primera vez en unas cepas de neumococos; posteriormente, en 1944, Avery,
McLeod y McCarty estudiaron el hecho a profundidad, descubriendo que las
bacterias podan tomar del medio mediante pequeos fragmentos de ADN
que por desintegracin de otras bacterias, se encontraban en el medio de
cultivo, y de esta forma adquiran caractersticas nuevas. Este fenmeno se
ha observado en otras especies bacterianas. Las clulas receptoras deben
ser hereditariamente componentes y el proceso es afectado por: el
estado fisiolgico de las clulas, el medio en el que se encuentran y la etapa
de su ciclo de crecimiento (fase exponencial y fase estacionaria temprana).
Para ser componentes, se requiere de la presencia de los factores de
competencia, que son pptidos pequeos que son producidos durante el
ciclo de crecimiento. El factor de competencia se enlaza con receptores
especficos sobre la superficie celular, induce la expresin de nuevas
protenas y confiere competencias a la bacteria para consumir ADN. La

GENTICA BACTERIANA25

superficie celular (de la receptora) modifica el ADN y se enlaza dbilmente

con la clula receptora, pero despus es ms fuerte el enlace. La fijacin
puede ser rpida, de cinco a 20 minutos. La interaccin del ADN con una
protena produce desnaturalizacin y luego fragmentacin. Luego, penetra
un fragmento de ADN (fragmento transformante) bacteriano libre o
desnudo de tamao bastante grande, de una sola cadena.
Cuando se tiene la suficiente homologa, se integra en el genoma del
receptor, produciendo la recombinacin.
El ADN procedente de los plsmidos, y el de los fagos, puede penetrar de
esta misma manera, pero el proceso se denomina transfeccin. En sta es
innecesaria la recombinacin, puesto que el plsmido es un replicn. La
captacin directa del ADN donador puede ser natural o forzada. Son pocas
las cepas bacterianas que tienen competencia para la transformacin de
manera natural, mientras que el mecanismo forzado de competencia es
inducido en el laboratorio. La transformacin natural es un proceso activo
que requiere de enzimas que son producidas por la clula receptora. Slo en
el caso de los organismos gramnegativos los pilis proporcionan la
competencia. Aunque no haya mayor factor de competencias, la
transformacin es ms selectiva, solamente se recombina el ADN con gran
homologa, y el ADN penetra como fragmentos de doble cadena, y despus
de desenrollarse, solo se incorpora una de ellas.
El mecanismo de transformacin se presenta ms en gneros bacterianos
grampositivos y menos en gramnegativos, como el Haemophilus,
Bacillus, Neisseria y Pseudomonas. Se transfieren marcadores genticos
ligados de dos o ms caracteres.

FIG 10

La transformacin es el proceso mediante el cual las bacterias captan

fragmentos de ADN desnudo y los incorporan a sus genomas. (v. fig. 10)
La transformacin fue el primer mecanismo de transferencia gentica que se
descubri en las bacterias. En 1928, Griffith, observ que la virulencia del
neumococo
se
relacionaba con la
presencia de una
cpsula
de
polisacrido que le
rodeaba y que los
extractos
de
bacterias
encapsuladas
productoras
de

GENTICA BACTERIANA26

colonias lisas podan transmitir este rasgo a las bacterias no encapsuladas, las
cuales presentan generalmente una morfologa rugosa.
Alrededor de 15 aos despus, los estudios de Griffith permitieron que Avery,
McLeod y McCarty identificaran el ADN como el principio clave del mecanismo
de transformacin.
Las bacterias grampositivas y gramnegativas son capaces de captar y
conservar de forma estable ADN exgeno. Ciertas especies presentan una
capacidad natural de captacin de ADN exgena (por lo que se definen como
competentes), como Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y
los gneros Bacillus y Neisseria.
La competencia aparece al final de la fase logartmica de crecimiento, un cierto
tiempo antes de que la poblacin bacteriana entre en la fase estacionaria. La
mayor parte de las bacterias no muestra una capacidad natural de captacin
del ADN. Asimismo, para introducir plsmidos y otras molculas de ADN en el
interior de E. coli y otras bacterias se utilizan mtodos qumicos o de
electroporacin (empleo de pulsos de alto voltaje).
CONJUGACIN
Conjugacin: en este fenmeno de recombinacin se aparean dos bacterias,
se establece un puente entre ellas y se hace el paso de material gentico de
una clula a la otra. A la clula donadora se le llama macho o F+, y a la clula
receptora se le llama F- o hembra. Se sabe que los pilis sexuales existen en
nmero muy limitado (tres o cuatro en E. coli K 12) y stos hacen el puente. Sin
embargo, algunos autores sealan que estos pilis se retraen en el momento
del contacto, y que se produce una protena que se adhiere a la pared y que
genera el canal por el cual pasa el material gentico. De alguna forma los pilis
sexuales tienen una actividad an no clara en este fenmeno.
En las bacterias grampositivas el fenmeno de la conjugacin se
realiza por el contacto entre dos bacterias y la produccin de una protena
que acta como anclaje entre las dos, y luego, se forma el puente para el paso
del material gentico.
Generalmente el transporte se hace a base de los genes cometidos en los
plsmidos y que la clula receptora puede incorporar al genoma, o formar otros
plsmidos extracromosmicos. Se encuentran tres variantes de la
conjugacin:
I.

Transferencia de genes de plsmidos: los elementos genticos que

ms frecuentemente se transfieren mediante la conjugacin son los
plsmidos. Al encontrarse bacterias de dos tipos que se aparean, se
concectan mediante un puente conjugado, como el pelo sexual. Por

GENTICA BACTERIANA27

medio de la punta del pelo, se adhiere la clula donadora a las paredes

celulares de la receptora y quedan unidas las dos clulas. Posiblemente
se retrae el pelo sexual y ambas clulas quedan unidas. El factor de
fertilidad o factor F es una estructura que se encuentra contenida en
un plsmido denominado como F. Las clulas donadoras que poseen
este factor se designan F+ (frtil) y la clula receptora, que carece de l,
como F-(no frtil). Cada bacteria frtil lleva slo una copia de plsmido
F. La clula F+ tiene la propiedad de codificar la produccin del pelo
sexual.
Cada clula F+ tiene un promedio 23 pelos sexuales. Los plsmidos que
tienen la capacidad de transferirse, portan los genes tra. As, los
plsmidos que tienen estos genes son denominados plsmidos
autotransferibles. La formacin de un puente entre ambas clulas
permite que se transfiera una cadena sintetizada o copia del plsmido
F+ (por la donadora) a la clula receptora de manera unilateral, con
velocidad uniforme y en otra secuencial. Una copia permanece en la
clula donadora. Las cadenas complementarias se sintetizan dentro de
cada una de las bacterias. El resultado final del apareamiento entre F+ y
F- es la obtencin de dos clulas F+. En diez minutos se transfiere todo
el plsmido. El plsmido F tiene su propio origen de replicacin y loa
hace en forma coordinada con el cromosoma. No es posible el
apareamiento entre dos clulas F+.
II.

Transferencia de genes de cromosomas: se denominan clulas Hfr

(recombinacin de alta frecuencia) a aquellas que son capaces de
transferir genes cromosmicos con una alta frecuencia, y se forman
cuando el plsmido F se inserta de manera especfica en el cromosoma
de la clula donadora (el factor F proviene por supuesto, de una clula
F+), las cuales son capaces de transferir el ADN cromosmico con una
direccin determinada, orientada en forma lineal y con una velocidad
constante. Los plsmidos que son integrados al genoma se denominan
episomas. La conjugacin se inicia con la adherencia mediante el pelo
sexual de la donadora (Hfr) con un receptor especfico sobre la
superficie de la bacteria receptora (F-) para formar el puente conjugado.
Cuando una bacteria Hfr se aparea con una receptora F-, generalmente
se transfiere solamente un fragmento del cromosoma, debido a que el
tiempo que tardara en pasar todo el cromosoma sera superior a una
hora, y la fragilidad del puente impide que esto suceda. En la clula Hfr
las endonucleasas desenrollan el ADN y una tira del cromosoma pasa a
travs del puente hacia el receptor. Tanto el fragmento que entra como
el que permanece en la donadora se copian de manera asimtrica. El
fragmento transferido se convierte en diploide parcial (merodiploide o
merocigtico). Si se encuentra la suficiente homologa entre el
fragmento nuevo y la regin del cromosoma receptor, se lleva a cabo

GENTICA BACTERIANA28

una sinapsis con el cromosoma y se realiza la recombinacin, donde los

nuevos genes forman parte del genoma del receptor, y su progenie
expresar las caractersticas transmitidas por el fragmento. Pero si no se
efecta la recombinacin, entonces el fragmento recin transferido se
pierde, porque no es un replicn. Normalmente las clulas receptoras de
Hfr continan siendo F-.
III.

Transferencia de plsmidos y genes de cromosomas: las clulas

que poseen la capacidad de transferir a alta frecuencia ambos
elementos genticos a un receptor se llaman F. Las clulas F se
forman a partir de una clula con cromosoma Hfr en la que la bacteria,
al cortar o escribir el segmento que contiene el factor de fertilidad para
transferirlo, lo hace incorrectamente, pues corta adems porciones
adyacentes del cromosoma. Este segmento escindido contiene el factor
de fertilidad ms las porciones de cromosoma, y se conforma como un
plsmido F+. De esta manera, las bacterias F contienen el plsmido
F, que se ha separado de un cromosoma Hfr. Cuando el factor F es
transmitido a los receptores, adquieren el factor de fertilidad y se
consideran diploides de manera estable para algunos genes
cromosmicos. El mecanismo de conjugacin es muy importante porque
se pueden adquirir factores de virulencia (genes de toxina) y plsmidos
que portan genes de resistencia.
Los plsmidos de resistencia portan los factores R, y como algunos de
ellos son transmitidos por conjugacin, se denominan factores R de
conjugacin.
Estos factores tan importantes en medicina se forman cuando uno o ms
de los genes que codifican la resistencia a los antibiticos se unen un
plsmido de fertilidad. De esa unin se forma el factor de
transferencia de resistencia (RTF), mientras que la porcin del
plsmido que codifica esta resistencia se denomina segmento
determinante de la resistencia, o determinante r, que comnmente se
agrega como transposn. Esto significa que el factor de fertilidad se le
insertan transposones o bien genes que no son transposones donde
ambos pueden aportar resistencia a los antibiticos. As, cualquier
bacteria que reciba el plsmido conjugado ser frtil y tambin tendr
resistencia mltiple a los antibiticos. Cuando un factor R se transmite a
otras clulas con alta frecuencia durante varias generaciones, la
conjugacin se detiene, debido a que el factor RTF codifica aparte del
pelo sexual, aun represor que se acumula en la bacteria frtil. Cuando el
represor se acumula, se reprime la sntesis de pilina, lo que le es til a la
bacteria porque algunos fagos lticos se adhieren especficamente a la
pilina de las clulas macho y la limitacin de la expresin de la pilina
las protege.

GENTICA BACTERIANA29

La conjugacin predomina entre las bacterias gramnegativas, como las

enterobacterias, E. coli, Shigela, Salmonella, Serratia y en otros
organismos, como Pseudomonas y Vibrio. En las bacterias
grampositivas, la transmisin de los genes mediante la conjugacin es
infrecuente y se efecta sin la participacin de los pelos sexuales, sino
mediante un fenmeno de agregacin.
Ejemplos de esto son los gneros:
Clostriudium y Streptomyces.

Streptococcus,

Bacillus,

El trasposn es un fragmento que contiene una secuencia nucleotdica

repetida que acta a nivel del gene codificador, haciendo que cambie el
centro de codificacin, prococando una codificacin diferente en la
rplica de los nucletidos, y por lo tanto, cambiando la informacin.
Estos cambios son controlados tanto por los transposones como los
plsmidos, cuya funcin se encuentra actualmente en estudio.

FIG 11

La conjugacin se produce en la
mayora, si no en todas, las
eubacterias. Suele darse entre
bacterias pertenecientes a una
misma especie o de especies
relacionadas, aunque tambin
tiene lugar entre procariotas y
clulas vegetales, animales y
micticas. (v. fig. 11)
La conjugacin se ha descrito
en
E.
coli,
bacteroides,
enterococos, estreptococos, estreptomicetos y clostridios. Un gran nmero de

GENTICA BACTERIANA30

plsmidos conjugativos de mayor tamao codifica colicinas o resistencia a

antibiticos.
La transferencia gentica en E. coli fue descrita por vez primera en 1946 por
Lederberg y Tatum al observar un intercambio semejante al sexual entre dos
cepas mutantes de E. coli K12. La conjugacin produce una transferencia
unidireccional de ADN desde un clula donante (o macho) hasta una clula
receptora (o hembra) a travs del llamado pilus sexual.
Las bacterias grampositivas que llevan a cabo una conjugacin R
(resistencia antibitica), como los estreptococos, los estreptomicetos y los
clostridios, se acercan por medio de una molcula de adhesina presente en la
superficie de la clula donante en lugar de a travs de un pilus.
El tipo de acoplamiento (sexo) de la clula depende de la presencia (clula
macho) o ausencia (clula hembra) de un plsmido conjugativo, como el
plsmido F de E. coli. El plsmido F se define como conjugativo porque
contiene todos los genes necesarios para su propia transferencia, como la
capacidad de fabricar pili sexuales e iniciar la sntesis de ADN en el llamado
origen de transferencia (OriT).
El plsmido F se transfiere a s mismo, convirtiendo a las clulas receptoras en
clulas macho F+. Cuando un fragmento de ADN cromosmico se ha
incorporado a la secuencia del plsmido, se designa como plsmido F prima
(F'). Cuando este plsmido se transfiere al interior de la clula receptora,
transporta el fragmento y lo convierte en un F' macho. Cuando la secuencia del
plsmido se integra en el interior del cromosoma bacteriano, la clula se
designa como clula Hfr (alta frecuencia de recombinacin).
El ADN transferido por conjugacin, no es una molcula bicatenaria
helicoidal, sino una molcula monocatenaria. La movilizacin comienza cuando
una protena codificada por un plsmido introduce una rotura monocatenaria
en un punto especfico del OriT. La muesca as formada inicia un replicacin por
crculo rodante y la cadena lineal desplazada se dirige hacia la clula
receptora. A continuacin, el ADN monocatenario adopta nuevamente una
conformacin circular y sintetiza su cadena complementaria. La integracin de
un plsmido F en el cromosoma bacteriano crea una clula Hfr. La conjugacin
comporta la transferencia parcial de la secuencia plasmdica y de un fragmento
del ADN cromosmico bacteriano.
Como consecuencia de la fragilidad de la conexin formada entre las dos
clulas acopladas, la transferencia se suele interrumpir antes de finalizar el
proceso, de modo que nicamente se transfieren las secuencias cromosmicas
cercanas al plsmido F integrado. La interrupcin artificial de un acoplamiento
entre un Hfr y una pareja F- ha resultado til para cartografiar el ADN cromo-

GENTICA BACTERIANA31

smico de E. coli. Este tipo de mapas muestra la posicin de cada gen en

minutos (en relacin con los 100 minutos que requiere la transferencia
completa a 37 C) segn su momento de entrada a una clula receptora
respecto a un origen fijo.
TRANSDUCCIN
La
transferencia
gentica
por
transduccin est mediada por virus
bacterianos (bacterifagos) que captan
fragmentos de ADN y los almacenan en
el interior de partculas de bacterifago. El ADN suministrado a las clulas
infectadas es luego incorporado al
genoma bacteriano. (v. fig. 12)

FIG 12

Transduccin: en ese fenmeno de recombinacin es un bacterifago el que

transporta el material gentico de una bacteria a otra, bien sea que lo haya
adquirido al parasitar a la bacteria o que lo haya captado del medio para
despus introducirlo en la nueva clula hospedera. En este caso es necesario
que nos e produzca lisis de la bacteria parasitada por el virus (se debe
equilibrar la relacin husped-parsito), situacin conocida como estado
lisognico, y los virus se llaman temperados. La bacteria que sobrevive en
esta situacin y ha incorporado los genes de la otra bacteria manifiesta las
caractersticas del fragmento recombinante. El ADN es transferido de la
bacteria a bacteria por medio de bacterifagos. Puede presentarse en bacterias
grampositivas o negativas. El ADN contenido en los fagos puede proceder del
virus, pero incluye uno o maas genes bacterianos. Los fagos ms frecuentes
implicados en la transferencia del ADN son los temperados, pues son los
relacionados con los ciclos de replicacin lisognicos que no eliminan a las
bacterias recombinantes, y adems, las bacterias receptoras que portan los
profagos son capaces de inducir la formacin de un represor que convierte a la
clula en inmune ante la infeccin ltica y mantinen la capacidad de captacin
del ADN bacteriano de las partculas transductoras. El tamao del ADN (porcin
del cromosoma) en las partculas transductoras en pequeo, y la
transferencia de mltiples genes (contransduccin) est restringida slo a
los genes bacterianos en lazados. Hay dos procesos de transduccin: la
generalizada y la restringida o especializada.
I.

En la generalizada, el fago puede ser lisognico o ltico. Introduce el

ADN a la bacteria, y al penetrar la partcula transductora, se recombina
genticamente de forma aleatoria, es decir, no cuenta con un sitio
especfico de insercin con el ADN del husped, y queda la clula
transducida. En el caso de los fagos lisogenicos, una vez que el ADN
introducido se ha recombinado en el cromosoma bacteriano, ante la seal

GENTICA BACTERIANA32

de escisin del ADN para replicarse el fago, el proceso se puede realizar

de manera incorrecta, conduciendo a que el ADN conste de genes del
virus mezclados con genes bacterianos, lo que a su vez resulta en la
produccin de fagos defectuosos. Los fagos defectuosos tienen como
caracterstica que se absorben sobre las bacterias, pero debido a que el
ADN carece de un genoma completo, no da lugar a la produccin de ms
fagos. En cambio, la bacteria receptora se transforma en recombinante
para los genes bacterianos que adquiri. En el otro caso, el de los fagos
lticos, durante el ciclo de infeccin del ADN del husped se rompe en
pequeos fragmentos, quedando incorporados por error algunos de los
genes bacterianos dentro de las partculas virales. Nuevamente, la
produccin de fagos defectuosos conduce solamente a la recombinacin
cuando encuentra la suficiente homologa. Al lisarse la bacteria, libera
fagos atenuados y partculas transductoras.
II.

En la transduccin restringida o especializada, si los fagos en cuestin

transfieren genes especficos (habitualmente los adyacentes a sus lugares
de integracin en el genoma) o generalizada si la seleccin de las
secuencias es aleatoria debido al almacenamiento accidental del ADN de
la clula anfitriona en el interior de la cpside del fago.
Las partculas de la transduccin generalizada deben contener sobre todo
ADN bacteriano y una cantidad pequea o nula de ADN del fago. Por
ejemplo, el fago P1 de E coli codifica una nucleasa que degrada el ADN
cromosmico de las clulas anfitrionas de E. coli.

Un pequeo porcentaje de las partculas resultantes de fago almacenan los

fragmentos de ADN en el interior de sus cpsides. En lugar del ADN del fago, se
inyecta ADN encapsulado en el interior de una nueva clula anfitriona, en la
que puede recombinarse con el ADN homlogo de aquella. Las partculas
implicadas en la transduccin generalizada son muy valiosas para realizar el
cartografiado gentico de los cromosomas bacterianos. Cuanto ms prximos
se dispongan dos genes en el cromosoma bacteriano, mayor ser la
probabilidad de un proceso de cotransduccin en el mismo fragmento de ADN.
Es decir que en la transduccin restringida o especializada, slo un pequeo
grupo de genes del huespd queda integrado directamente en el genoma del
virus y es transferido al receptor, con un sitio restringido de insercin en el
cromosoma bacteriano. Las bacterias lisognicas son productoras espontneas
de fagos atenuados, no existen dentro de la clula bacteriana en su estado
maduro, sino en forma latente de profago. La informacin de la clula
lisognica permanece inactiva y generalmente no se manifiesta. Si lo hace, se
replica el profago.

GENTICA BACTERIANA33

Pero la escisin del profago del cromosoma bacteriano (que con frecuencia es
correcta) puede efectuarse de manera incorrecta, llevando a que se genere
una progenie defectuosa, con genes del husped y slo parte del profago. Los
genes defectuosos quedan incluidos en los fagos (irregulares), que tienen la
posibilidad de inyectar su ADN a otra clula. Simla escisin es correcta, se
activa el ciclo ltico y la bacteria se lisa. Mediante la transduccin se pueden
transferir mltiples factores R, principalmente entre bacterias grampositivas,
en las que la resistencia est codificada sobre plsmidos que son diseminados
a travs de fagos lisognicos. Adems, los genes de toxinas pueden formar
parte del genoma del fago cuando se ha insertado un transposn con esta
informacin, proceso denominado transposicin, y el evento conduce a una
transformacin del fago. Los fagos poseen una gran velocidad para hacer
rplicas de su ADN, lo que los convierte en muy valiosos para los estudios de
ingeniera gentica.
Los fagos recombinantes se pueden manipular para que contengan porciones
de ADN de otras fuentes biolgicas.

RECOMBINACIN
La Recombinacin gentica: es la incorporacin de genes al genoma de una
bacteria, provenientes de otra bacteria, de la cual adquiere caracteres que
antes no tena. La recombinacin gentica es proceso mediante el cual los

GENTICA BACTERIANA34

elementos genticos contenidos en dos genomas separados llegan a estar

dentro de una unidad. As, los genes que son adquiridos se recombinan con los
existentes en la clula receptora. La bacteria receptora con frecuencia
manifiesta caractersticas nuevas, que tienen un efecto en el manejo clnico.
Es un mecanismo efectivo para adaptarse a ambiente desfavorables, para
producir exotoxinas o para resistencia a las drogas. La mayora de los cambios
hereditarios que aparecen en las bacterias durante su cultivo posee un valor
adaptativo (capacidad de supervivencia en ambientes nuevos).
Los grmenes patgenos crecen lentamente al sembrarlos en el laboratorio
pues estaban adaptados al husped, pero los subcultivos repetidos van
disminuyendo su patogenicidad, pues se acostumbran a vivir fuera del
husped, lo que se conoce como atenuacin. En la recombinacin gentica
se transfieren porciones pequeas de ADN desde un genoma donador hacia
una clula receptora. Para que exista recombinacin gentica es necesario que
el ADN donado se replique en el organismo recombinante, lo que se puede
lograr mediante su integracin en replicacin del receptor o en uno
independiente. Si el ADN donado no lleva informacin para autoreplicarse,
entonces es necesario que se recombine con el ADN receptor para conseguir su
establecimiento.
Se reconocen dos tipos de recombinacin:
La incorporacin del ADN extracromosmico (extrao) en el cromosoma tiene
lugar mediante un proceso de recombinacin. Existen dos tipos de
recombinacin: homloga y no homloga
a) Recombinacin homloga o legtima:
Es la que tiene lugar entre secuencias de ADN estrechamente relacionadas y
habitualmente sustituye una secuencia por otra. El proceso requiere la
presencia de un conjunto de enzimas producidas por los llamados genes
rec (en E. coli).
Se lleva a cabo cuando hay gran similitud entre ambos ADN, el donado y el
receptor, por lo que se modifica solamente la posicin de los genes
existentes en el replicn; por lo tanto, es infrecuente que las bacterias
modifiquen sus caractersticas por este reordenamiento. Las similitudes se
consiguen entre cepas que comparten ancestros comunes. Los genes
responsables de la recombinacin homloga se designan como genes
rec. La recombinacin homloga se efecta por dos mecanimos: por
inversin especfica de sitios y por conversin gentica. La inversin
especfica de sitios se produce cuando el segmento de ADN que contiene
a los genes presenta secuencias invertidas, repetitivas y cortas. Una
protena controla los sitios que tendrn inversin. Un ejemplo caracterstico

GENTICA BACTERIANA35

de este mecanismo es la gran valoracin antgena que se representa con los

flagelos del gnero Salmonella. La conversin gentica se presenta
cuando la bacteria posee mltiples genes en su cromosoma que controlan
una caracterstica especfica, como los que tienen los gonococos para la
expresin de sus pilis, estructuras muy importantes para su virulencia, y
que gracias a esta propiedad, son capaces de variar los antgenos de los pilis
para que no sean reconocidos por el sistema inmunolgico, a travs de
reordenamientos peridicos. Durante la fase de crecimiento, el intercambio
de esta propiedad conduce a nuevos gonococos con caractersticas distintas.
Otro ejemplo, se representa en al gnero Borrelia.
b) Recombinacin heterloga o ilegtima:

Es la que tiene lugar entre secuencias distintas de ADN y, por regla

general, produce inserciones, deleciones o ambas. Habitualmente
este proceso precisa de la intervencin de enzimas de recombinacin
especializadas (algunas veces, incluso especficas para un sitio
determinado), como las producidas por muchos transposones y
bacterifagos lisognicos.
Generacin de cepas de Staphylococcus aureus resistentes a
vancomicina mediante diversas manipulaciones genticas Hasta hace
poco tiempo, vancomicina ha constituido el ltimo recurso frente a las
cepas de S. aureus resistentes a los betalactmicos (antibiticos
relacionados con la penicilina), es decir, S. aureus resistente a meticilina
[SARM]).
S. aureus adquiri el gen de resistencia a vancomicina en el transcurso
de una infeccin mixta por Entcrococcus faecalis (v. figura 13). El gen de
resistencia a este antibitico se hallaba en un transposn (TN1546)
localizado en un plsmido conjugativo de multirresistencia. Es probable
que la transferencia del plsmido tuviera lugar mediante conjugacin
entre E. faecalis y S. aureus.
Otra posibilidad sera que este ltimo adquiriera el ADN por transduccin
tras la lisis de E. faecalis y sufriese una transformacin como
consecuencia de la introduccin de este nuevo ADN. A continuacin, el
transposn habra saltado desde el plsmido de E. faecalis para
recombinarse e integrarse en el plsmido de multirresistencia de S.
aureus, y se habra degradado el ADN de E. faecalis.
El plsmido de S. aureus as creado contiene genes de resistencia a
betalactmicos,
vancomicina,
trimetoprim
y
gentamicina/kanamicina/tobramicina y a desinfectantes de amonio

GENTICA BACTERIANA36

cuaternario y es capaz de transferirse a otras cepas de esta especie

mediante procesos de conjugacin.

Otra definicin
Recombinacin heterloga o ilegtima: Es resultado de la
introduccin de genes nuevos en un replicn, entre secuencias
diferentes de ADN. Los mecanismos por los cuales los genes nuevos
pueden efectuar la recombinacin son: generalizada, especfica en un
sitio y por la transposicin. En la recombinacin generalizada el
segmento del donador es muy parecido al del receptor, y al mezclarse se
obtiene un ADN hbrido; se requiere de una protena RecA. La
recombinacin en un sitio es cuando se introduce un segmento de
ADN que se inserta en un sitio especfico y es mediado por un fago. En la
recombinacin por transposicin, los transposones se movilizan a
otro, ya sea de un replicn a otro, como en la de un cromosoma a un
plsmido, o en un mismo genoma.

GENTICA BACTERIANA37

Algunas cepas bacterianas poseen sistemas de restriccin, que consisten

en enzimas o endonucleasas de restriccin que hidrolizan al ADN en sitios
determinados por consecuencias especficas de aproximadamente cuatro a
trece bases de longitud. Proporcionan a las bacterias en un mecanismo para
distinguir su propio ADN del de otras fuentes biolgicas y les favorece para
enmascarar los sitios de reconocimiento de su propio ADN del de otras fuentes
biolgicas y les favorece para enmascarar los sitios de reconocimiento de su
propio ADN, mediante metilaciones, ya sea en la adenina o en la citosina, es
decir una modificacin. Una consecuencia de la restriccin es que el ADN
donado pueda ser hidrolizado antes de que se pueda establecer como parte de
un replicn. Gracias a la presencia de las endonucleasas de restriccin, es
posible seleccionar a los fragmentos de ADN para su estudio y aplicacin en la
ingeniera gentica.
La recombinacin gentica se puede realizar de tres formas diferentes: a)
transformacin, b) transduccin y c) conjugacin.

GENTICA BACTERIANA38

INGENIERA GENTICA
La ingeniera gentica, conocida tambin como tecnologa del ADN
recombinante, emplea tcnicas y mtodos desarrollados por especialistas en
gentica bacteriana con el objeto de purificar, amplificar, modificar y expresar
secuencias genticas especficas. La utilizacin de la ingeniera gentica y la
clonacin ha revolucionado tanto la biologa como la medicina. Los com ponentes bsicos con que cuenta la ingeniera gentica son los siguientes:
1. Los vectores de clonacin y expresin, que pue- , den utilizarse para
introducir secuencias de ADN en el interior de bacterias receptivas y
amplificar la secuencia deseada;
2. La secuencia de ADN que se desea amplificar y expresar;
3. Diversas enzimas, como las enzimas de restriccin, que se usan para
degradar de forma reproducible la molcula del ADN en unas secuencias
determinadas
(v. tabla 1) y la ligasa de ADN, la enzima que une los
FIG 13
fragmentos al vector de clonacin.
TAB 1

Los vectores de clonacin y expresin deben permitir que el ADN exgeno se

inserte en su interior, pero conservando su capacidad de replicacin normal en
la clula anfitriona bacteriana o eucariota. En la actualidad se utilizan muchos
tipos de vectores. Los vectores de tipo plasmdico, como pUC, pBR322 y pGEM
(v. figura 3-16) se ocupan de fragmentos de ADN de hasta 20 kb.Los
bacterifagos, como, se emplean para fragmentos mayores de ADN (de hasta
25 kb). Ms recientemente, los vectores basados en csmidos han combinado

GENTICA BACTERIANA39

algunas de las ventajas de los plsmidos y los fagos para transportar

fragmentos de ADN de hasta 45 kb.
La mayora de los vectores de clonacin se ha sometido a tcnicas de
ingeniera gentica para: creacin de un sitio de insercin del ADN exgeno; un
medio de seleccin de las bacterias que han incorporado plsmidos (p. ej.,
resistencia a los antibiticos) y un medio de seleccin de las que han
incorporado esos plsmidos con ADN insertado. Los vectores de expresin
poseen secuencias de ADN que facilitan su replicacin en las clulas
bacterianas y eucariotas, as como la transcripcin del gen en ARNm.
El ADN que se desea clonar se obtiene mediante la purificacin del ADN
cromosmico de clulas, virus u otros plsmidos o bien por amplificacin
selectiva de secuencias de ADN a travs de una tcnica conocida como
reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
Tanto el vector como el ADN exgeno son atacados por enzimas de restriccin
(v. figuraFIG14).
14

Las enzimas de restriccin reconocen

una secuencia paindrmica especfica
y realizan un corte significativo (que
produce la aparicin de extremos
adherentes) o un corte romo (que
produce unas terminaciones romas) (v.
tabla 1).
La mayora de los vectores de
clonacin presentan una secuencia que
reconoce numerosas enzimas de
restriccin, el denominado lugar de
clonacin mltiple. La unin del vector
a los fragmentos de ADN genera una
molcula
capaz
de
replicar
la
secuencia insertada y que recibe el
nombre de ADN recombinante.
El
nmero
total
de
vectores
recombinantes obtenidos durante la
clonacin de todos los fragmentos
obtenidos en la restriccin del ADN
cromosmico
se
conoce
como
biblioteca genmica, puesto que debe
contener al menos un representante de cada gen. Un mtodo alternativo de

GENTICA BACTERIANA40

clonacin del gen de una protena consiste en convertir en ADN el ARNm

destinado a ella; se lleva a cabo mediante una enzima retroviral denominada
transcriptasa inversa (polimerasa de ADN dependiente de ARN) y el proceso
genera un ADN complementario (ADNc). Una biblioteca de ADNc engloba todos
los genes expresados en una clula determinada.
A continuacin, el ADN recombinante se introduce en una clula anfitriona
bacteriana, habitualmente E. coli, y se seleccionan las bacterias que contienen
el plsmido por su resistencia antibitica (p. ej., resistencia a ampicilina).
Despus se puede realizar un cribado de la biblioteca con el fin de identificar
un clon de E. coli que posea el fragmento de ADN deseado. Para identificar las
bacterias que contienen el ADN recombinante apropiado pueden utilizarse
diversas tcnicas.
El lugar de clonacin mltiple utilizado para insertar el ADN exgeno con
frecuencia forma parte del gen lacZ del opern lac. La insercin del ADN
exgeno en el gen lacZ conlleva su inactivacin y evita que la clula receptora
lleve a cabo la sntesis de B-galactosidasa dirigida por un plsmido, lo que
resulta en la formacin de colonias bacterianas blancas en lugar de las azules
que aparecen cuando esta enzima degrada un cromforo adecuado.
La ingeniera gentica se ha utilizado tambin para aislar y expresar distintos
genes con el propsito de obtener protenas tiles en bacterias, levaduras o,
incluso, en clulas de insecto (p. ej., insulina, interfern, hormonas del
crecimiento e interleucina). Igualmente se pueden preparar grandes cantidades
de un inmungeno puro destinado a una vacuna sin necesidad de emplear los
microorganismos patgenos intactos.El desarrollo de una vacuna contra el
virus de la hepatitis B constituye el primer xito de las vacunas de ADN
rccombi-nante cuyo uso en el ser humano ha autorizado la Food and
DnigAdtninistration de EE. UU.
El antgeno de superficie de la hepatitis B es producido por la levadura
Saccharomyces cerevisiae. En el futuro, puede que baste con inyectar un ADN
plasmdico capaz de expresar el inmungeno deseado (vacuna de ADN) a un
individuo para conseguir que las clulas del anfitrin expresen este
inmungeno y desencadenen la respuesta inmunitaria.
IV.- CONCLUSIONES
1. Llegamos a la conclusin, de que los genes bacterianos son secuencias
de nucletidos y entre ellos se encuentran los genes relacionados con
las protenas (cistrones, que son genes codificadores), adems de los
genes del cido ribonucleico (ARN) y los sitios de reconocimiento y unin
de otras molculas como promotores y operadores.

GENTICA BACTERIANA41

2. Las bacterias tienen muchos mecanismos para controlar la expresin de

sus miles de genes, con cual logran que el producto de un gen
determinado, solo se sintetice cuando es necesario y, en lo posible en la
cantidad ptima. Esto les confiere una importante capacidad de
transcripcin, traduccin y replicacin.
3. En el caso de la transferencia gentica, tenemos: Conjugacin, que nos
indica el apareamiento o intercambio cuasi sexual de informacin
gentica entre una bacteria (donante) y otra bacteria (receptora). La
transformacin, la cual provoca la adquisicin de nuevos marcadores
genticos mediante la incorporacin de ADN exgeno. Y transduccin, la
cual se caracteriza por la transferencia de informacin gentica de una
bacteria a otra por medio de un bacterifago.
4. Y una de las contribuciones ms importantes de la ingeniera gentica
de bacterias en la medicina, es su uso para desarrollar vectores o
vehculos que permitan el clonado de cualquier secuencia de ADN.
V.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. MURRAY R. PATRICK, ROSENTHAL S. KEN, PFALLER A. MICHAEL. Metabolismo y
gentica de las bacterias. En: Microbiologa mdica; 6 Edicin; Editorial
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3. VOET, DONALD Bioqumica. 3era ed. Edit. Medica panamericana .S.A

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Mdica. 7 ed. (en espaol). Edit. Elsevier Sciencie S.A. Espaa ;

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agosto del 2014].Disponible en :
http://www.fca.uner.edu.ar/academicas/deptos/catedras/microbiologia/unidad_6_
genetica_microbiana.pdf

FACULTAD DE MEDICINA
HUMANA
SEMINARIO 1: Gentica Bacteriana
Docentes:
Dra. Celinda Usquiano Mrquez
Dra. Sonia Fiestas Purizaca

Integrantes:
Aguilar Maldonado Jean Carlos

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Aguirre Adrianzn Mara Altagracia

Arias Espinoza Sheyla Yamalyt
Bustamante Soto Rosa
Campos Cubas Claudia Elizabeth

Fecha:
03 de Marzo del 2015