MANUAL PRCTICO DE MICROBIOLOGA - Tomo II: Microbiologa Ambiental II

Manacorda A. M., Cuadros D. P y lvarez A. S.

Ao 2007

Captulo 2
RECUENTO EN PLACA DE BACTERIAS HETERTROFAS AEROBIAS
MESFILAS TOTALES EN AGUAS*
Objetivos
Calcular el nmero de bacterias vivas hetertrofas en muestras de agua de diferentes
sitios.
Comparar los resultados obtenidos entre las muestras y sacar conclusiones.
Introduccin
Los estudios microbiolgicos sobre muestras de agua se realizan con el fin de determinar su
calidad sanitaria. Estas tcnicas van encaminadas a establecer el grado de contaminacin con
residuos.
Muchas veces el agua puede ser completamente transparente, incolora e inodora, pero estar
an contaminada, por lo que es importante determinar su calidad sanitaria.
La potabilidad o no del agua slo puede determinarse mediante anlisis qumicos y
bacteriolgicos.
Los procedimientos bacteriolgicos de rutina son: recuento de bacterias hetertrofas mesfilas
aerobias totales, coliformes totales, coliformes fecales, estreptococos fecales y clostridios
sulfito reductores.
Se utilizan ms pruebas para la deteccin y recuento de microorganismos indicadores que para
patgenos. El grupo de bacterias coliformes es el principal indicador de la adecuacin del agua
para usos domsticos, industriales o de otro tipo. El recuento de bacterias hetertrofas
proporciona un recuento aproximado del nmero total de bacterias viables, lo que suministra
valiosa informacin sobre la calidad del agua y puede aportar datos que respalden el
significado atribuido a los resultados de los anlisis de coliformes.
El recuento hetertrofo en placa es til para valorar la eficacia de los distintos procesos de
tratamiento y puede tener una importante aplicacin como anlisis del control dentro de la
propia planta depuradora. Tambin es til para controlar la calidad final del agua de un sistema
de distribucin, como indicador del recrecimiento de microorganismos y de la acumulacin de
sedimento en secciones de circulacin lenta y en extremos muertos.
Frecuentemente las muestras que hay que estudiar tienen un nmero muy elevado de
microorganismos, por lo que se requiere diluirlas para poder contarlos. Para ello se realizan
diluciones seriadas, que posteriormente se siembran en placas con medios de cultivo.
El mtodo estandarizado y aprobado por APHA-AWWA es el recuento de placa. Existen varios
mtodos, con medios de cultivos diferentes, segn las caractersticas de los microorganismos y
del medio a examinar.
Materiales

Muestras de agua potable de diferente origen, de un volumen mnimo de 100 ml

10 tubos con 9 ml de agua destilada estril.
Tubos de ensayo con 15-20 ml de agar nutritivo, a temperatura de 45-47C en bao de
temperatura constante.
Cajas de Petri con agar nutritivo a temperatura ambiente
Gradilla
Pipetas estriles

Aprobado por el Standard Methods Comit, 1988

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Manacorda A. M., Cuadros D. P y lvarez A. S.

Ao 2007

Micropipeta y tips
Cajas de Petri estriles
Mechero Bunsen
Estufa de cultivo

Procedimiento
Tcnica de Recuento en placa de de bacterias hetertrofas aerobias mesfilas totales en
aguas
1.
2.
3.
4.

5.
6.
7.
8.

Realizar las diluciones seriadas de la muestra hasta el nivel de dilucin de necesario,

segn la carga microbiana que sospechemos que exista en la muestra problema.
Siguiendo con la metodologa propuesta de siembra por extensin, sembrar al menos dos
placas de agar nutritivo con 0,1 ml de cada una de las diluciones realizadas.
Extender este inculo con esptula de Drigalsky previamente esterilizada (impregnndola
en alcohol y pasndola por la llama del mechero).
Si se desea realizar la tcnica de recuento estndar en placa, verter 1 ml de cada dilucin
en placas de Petri estriles y luego volcar el agar nutritivo fundido y atemperado;
homogeneizar mediante movimientos de translacin y rotacin y dejar luego que
solidifique el agar.
Incubar las placas a 37C durante 24 horas. Ms si se desea conocer la flora bacteriana
total de la muestra, la temperatura de incubacin ser a 22C (2), durante 72 horas (4).
Contar las colonias de las placas que presentan un nmero entre 30 y 300 colonias
Calcular con estos datos el nmero de UFC iniciales
Una vez efectuado el recuento, si la cantidad de agua sembrada ha sido de 1 ml, entonces
la expresin de los resultados es directa y si la cantidad de agua sembrada ha sido de 0,1
ml, el nmero de colonias contadas deber dividirse por el volumen de muestra sembrada,
para obtener el nmero de UFC/ml.

Nota:
Inciese el estudio lo antes posible, una vez tomada la muestra, para reducir al mnimo las
alteraciones de la poblacin bacteriana. El tiempo mximo recomendado que debe
transcurrir entre la recogida de la muestra y su estudio es de 8 horas (mximo tiempo de
intervalo, 6 horas; mximo tiempo de procesamiento, 2 horas). Si el anlisis no puede ser
realizado en ese tiempo, mantngase la muestra en una temperatura inferior a 4C, pero sin
congelarla, siempre y cuando no se superen las 24 hs transcurridas entre la toma de la
muestra y el anlisis.

Bibliografa:
American Public Health Association (APHA), American Water Works Association & Water
Pollution Control Federation. 1989. Standard Methods for the examination of Water and
Wastewater. 17th ed. APHA, Washington, D.C.USA. Part 9000.
Daz, R.,Gamazo C., Lpez-Goi, I.. 1999. Manual Prctico de Microbiologa. Cap. 16:
Tcnicas de recuento de bacterias. 2 Ed. Editorial Masson S.A. Barcelona, Espaa. 55 pp.